CN117882816A - 一种天然复配防腐剂及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种天然复配防腐剂，所述天然复配防腐剂包括抗菌肽和复合保鲜剂，所述抗菌肽和复合保鲜剂的质量份配比为9～5：1～5，所述复合保鲜剂包括层出镰刀菌发酵粉末、葡萄糖氧化酶、β‑淀粉酶、乳酸链球菌素和糊精。该防腐剂将复合保鲜剂与抗菌肽搭配使用，可以达到更好的抑菌效果，并可以显著降低成本。本发明还提供了上述天然复配防腐剂在调味品抑菌防腐中的应用。

Description

一种天然复配防腐剂及其应用
技术领域
本发明属于食品添加剂技术领域，具体涉及一种天然复配防腐剂及其应用。
背景技术
在酱油生产加工过程中，常用的几类食品添加剂有：着色剂、防腐剂和抗氧化剂。其中防腐剂是比较关键的一类，天然晒制发酵酱油原油中有细菌、霉菌、酵母菌等微生物，在室温下放置几天就会出现胀气、冒泡、变酸等现象，一些耐盐、耐高温细菌在后期加工中也不能被除去。长时间的贮存，且每天开封使用的情况下，需要对产品进行防腐技术处理，添加防腐剂是最有效保持调味品品质的手段。为了延长其保藏期限，目前普遍使用的是化学合成防腐剂，市面上绝大多数酱油常采用添加山梨酸钾或苯甲酸钠作为防腐剂来保证产品质量，一般酱油的保质期在一年左右。
目前我国市面上的零添加调味品是酱油和食醋，主要是用天然防腐剂代替了山梨酸钾，且不添加色素及其他化学添加剂。其中天然产物替代食品中化学防腐剂已成为研究热点，抗菌肽是一类天然来源的具有抗菌活性的多肽类物质，热稳定性强、水溶性好、无免疫原性，且可以被人体内的酶系统降解；但抗菌肽存在以下缺点：1)成本比较高，2)单独使用对酱油中的腐败菌枯草芽孢杆菌的抑菌效果较差。
目前人们对食品添加剂的使用要求越来越苛刻，食品行业也正处在向健康、绿色方向发展，因此现在需要一种天然高效防腐剂，同时具有抗菌性强、安全性高、作用范围广等特点，将其应用于零化学添加剂酱油的生产，丰富酱油产品类型，赢得消费者的青睐。
发明内容
本发明的目的在于提供一种天然复配防腐剂，该防腐剂将复合保鲜剂与抗菌肽搭配使用，可以达到更好的抑菌效果，并可以显著降低成本。
本发明的目的还在于提供上述天然复配防腐剂在调味品抑菌防腐中的应用。
本发明的上述第一个目的可以通过以下技术实施例来实现：一种天然复配防腐剂，所述天然复配防腐剂包括抗菌肽和复合保鲜剂，所述抗菌肽和复合保鲜剂的质量份配比为9～5：1～5，所述复合保鲜剂包括层出镰刀菌发酵粉末、葡萄糖氧化酶、β-淀粉酶、乳酸链球菌素和糊精。
更佳地，所述抗菌肽和复合保鲜剂的质量份配比为5：5。
可选地，所述抗菌肽是由市售开菲尔粒混合菌株通过常规豆粕发酵而来的抗菌肽，其分子量大小为2113.428Da，含有18个氨基酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
具体地，所述抗菌肽的氨基酸序列如下：
Thr-DAP-Asn-Thr-PEA-His-Pro-Asn-Thr-His-Leu-Ile-PEA-CySH-Val-Asn-PEA-Tau。
本发明中采用的抗菌肽可通过破坏细菌表面结构，影响相关酶指标，破坏细胞膜完整性，导致细菌内容物流失，引起细胞膜功能紊乱，从而影响细菌的正常生理活动，达到抑制细菌生长的效果。
可选地，所述复合保鲜剂通过以下方法制备获得：
(1)将层出镰刀菌的悬液加入至PDA培养基中，28±1℃、140～160rpm/min条件下进行培养，培养55～65h；
(2)将菌株活化培养后，将活化后菌株在PDB培养液中进行种子液培养，于28±1℃、140～160rpm/min条件下培养一周；
(3)将步骤(2)发酵培养液低温离心处理，收集上清液，将上清液在40～45℃下进行真空浓缩，得到发酵浓缩液；
(4)将步骤(3)所得发酵浓缩液上固相柱，用去离子水淋洗，再用乙醇淋洗，收集洗脱液，将洗脱液在40～45℃下进行真空浓缩干燥，得到层出镰刀菌发酵粉末；
(5)将葡萄糖氧化酶、β-淀粉酶、乳酸链球菌素和糊精混合，再加入步骤(4)所得层出镰刀菌发酵粉末混合均匀，得到复合保鲜剂。
在上述复合保鲜剂的制备方法中：
可选地，步骤(1)中所述的层出镰刀菌来源于西北农林科技大学动物医学院，保藏号为Bio-62449。
可选地，步骤(2)中种子液的接种量为占PDB培养液总体积的1.0～2.0％。
可选地，步骤(3)中低温离心处理时，在4℃、9000rpm/min条件下离心14～16min。
可选地，步骤(4)中所述固相柱为C18固相萃取柱，所述固相柱在使用前需进行平衡处理，平衡处理包括采用体积百分含量为35～45％的乙醇水溶液进行平衡处理。
可选地，步骤(5)中所述复合保鲜剂中各成分的质量份配比为：层出镰刀菌发酵粉末18～22、葡萄糖氧化酶18～22、β-淀粉酶22～26、乳酸链球菌素4～6、糊精28～32。
更佳地，步骤(5)中所述复合保鲜剂中各成分的质量份配比为：层出镰刀菌发酵粉末20、葡萄糖氧化酶20、β-淀粉酶25、乳酸链球菌素5、糊精30。
按照质量份配比，将葡萄糖氧化酶、β-淀粉酶、乳酸链球菌素和糊精混合，再加入层出镰刀菌发酵液粉末混合均匀，即得复合保鲜剂。
在本发明复合保鲜剂的各原料中：
采用本发明方法制备的层出镰刀菌发酵粉末对常见病原菌具有显著抑制活性作用。
葡萄糖氧化酶在分子氧存在下能氧化葡萄糖生成D-葡萄糖酸内酯，同时消耗氧生成过氧化氢，催化反应生成的过氧化氢，直接杀灭并抑制大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌的增殖速度。
β-淀粉酶可以作用于淀粉，能有效延缓淀粉的老化从而提升食品口感。
乳酸链球菌素可以改变细胞膜通透性，引起膜电位下降，主要作用于细菌细胞膜，抑制细菌生长。且在pH＝7.3条件下易水解成氨基酸，无残留，不产生抗药性，安全性高。
因此，本发明中的复合保鲜剂是一种由层出镰刀菌发酵粉末与葡萄糖氧化酶、β-淀粉酶、乳酸链球菌素、糊精等组成的天然安全的抑菌物质，在食品保鲜防腐领域具有广阔的前景；同时，将其与抑菌谱互补的天然产物抗菌肽进行复配，以达到更好抑菌效果也是实现酱油零添加化的新趋势。
本发明的上述第二个目的可以通过以下技术实施例来实现：上述的天然复配防腐剂在调味品抑菌防腐中的应用。
可选地，所述调味品为酱油。
可选地，所述天然复配防腐剂的添加量为占酱油总质量的0.06～0.08％。
更佳地，所述天然复配防腐剂的添加量为占酱油总质量的0.07％。
可选地，所述抑菌包括抑制大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌。
可选地，所述枯草芽孢杆菌是从腐败原油中经常规方法分离纯化鉴定得到，其余大肠杆菌和金黄色葡萄球菌来源于暨南大学理工学院食品科学与工程系微生物重点实验室。
本发明通过对上述天然复配防腐剂进行复配比例探究和抑菌活性评价，结果表明：复合保鲜剂和抗菌肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌均有抑制作用，其中复合保鲜剂对枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度仅为625μg/mL。将二者进行复配，探究出抗菌肽、复合保鲜剂质量份配比为5：5的天然复配防腐剂。
本发明还进一步对酱油进行贮存实验分析，跟踪包括菌落总数、pH、氨基酸态氮等指标变化情况，结果表明：复配防腐剂组在24天贮藏实验中体现出比单一使用抗菌肽和复合保鲜剂更低的菌落数变化，菌落总数变化低于一个数量级。氨基酸态氮、pH相关理化指标相较于空白和单一组变化均更小，复配防腐剂组在贮藏过程中保持更好的理化指标。
与现有技术对比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明中的天然复配防腐剂，与单独使用复合保鲜剂或抗菌肽相比，对枯草芽孢杆菌有更好的抑菌效果，同时能够降低原料成本，在酱油贮藏过程中，复配防腐剂组能明显降低菌落总数的增长速度，对酱油品质主要指标氨基酸态氮和pH值影响最小；
(2)本发明中的天然复配防腐剂，利用抗菌肽和复合保鲜剂复配，再优化其工艺参数和辅料配方，在保证酱油各项指标的同时，达到减少防腐剂用量，生产高品质酱油的效果；
(3)本发明中的天然复配防腐剂，为食品中提取的天然产物，能够保证酱调味品尤其是酱油配料的食品安全问题，其不仅比化学防腐剂更安全，而且抑菌效果显著。
附图说明
图1为金黄色葡萄球菌大肠杆菌(a)、枯草芽孢杆菌(b)、大肠杆菌(c)的生长曲线；
图2为实施例1中三种防腐剂对枯草芽孢杆菌生长曲线的影响；
图3为实施例1中三种防腐剂对金黄色葡萄球菌生长曲线的影响；
图4为实施例1中三种防腐剂对大肠杆菌生长曲线的影响。
具体实施方式
以下将结合具体实施例对本发明提供的技术方案进行详细说明，应理解下述具体实施方式仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
以下实施例，复合保鲜剂中层出镰刀菌来源于西北农林科技大学动物医学院，保藏号为Bio-62449；葡萄糖氧化酶、β-淀粉酶、乳酸链球菌素、糊精优选但不限于购于上海麦克林生化科技有限公司。
实施例1
本实施例提供的天然复配防腐剂，由抗菌肽和复合保鲜剂组成，将复合保鲜剂和抗菌肽在最小抑菌浓度下按照0：10、1：9、2：8、3：7、4：6、5：5、6：4、7：3、8：2、9：1、10：0的比例两两复配，复合保鲜剂包括层出镰刀菌发酵粉末、葡萄糖氧化酶、β-淀粉酶、乳酸链球菌素和糊精。
抗菌肽是由市售开菲尔粒混合菌株通过常规豆粕发酵而来的抗菌肽，其分子量大小为2113.428Da，含有18个氨基酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
复合保鲜剂通过以下方法制备获得：
(1)将200μL层出镰刀菌悬液加入至PDA培养基中，28±1℃、150rpm/min条件下进行培养，培养60h；
(2)将菌株活化培养后，在PDB培养液中进行种子液培养，种子液接种量体积百分比为1.5％，于28±1℃、150rpm/min条件下培养一周；
(3)将步骤(2)发酵培养液低温离心(4℃、9000rpm/min)处理15min，收集上清液，上清液在40～45℃下进行真空浓缩，得到发酵浓缩液；
(4)C18固相萃取柱采用40％(v/v)的乙醇溶液进行平衡处理，平衡后将发酵浓缩液上固相柱，用1倍体积的去离子水淋洗，再用1倍体积的乙醇淋洗，并收集洗脱液，将洗脱液在40～45℃下进行真空浓缩干燥，得层出镰刀菌发酵粉末；
(5)将葡萄糖氧化酶、β-淀粉酶、乳酸链球菌素和糊精混合，再加入步骤(4)所得层出镰刀菌发酵粉末混合均匀，得到复合保鲜剂。
步骤(1)中层出镰刀菌来源于西北农林科技大学动物医学院，保藏号为Bio-62449。
步骤(5)中复合保鲜剂中各成分的质量份配比为：层出镰刀菌发酵粉末20、葡萄糖氧化酶20、β-淀粉酶25、乳酸链球菌素5、糊精30。
以下通过试验来说明本发明中的天然复配防腐剂及其应用情况：
1、抗菌肽、复合保鲜剂单一抑菌活性探究
对抗菌肽、复合保鲜剂两种具有抗菌活性的天然抑菌剂先进行单一抑菌性实验，再进行复配比例和复配物抑菌活性探究。
试验菌株为：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌，其中枯草芽孢杆菌从酱油变质样品中通过常规方法分离获得，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌来自暨南大学食品科学与工程系微生物重点实验室。
1.1菌株活化生长曲线
将三种细菌培养至对数生长期，用营养肉汤培养基调整菌体浓度为106CFU/mL，37℃、150rpm下连续震荡培养，酶标仪设置程序每隔2h测定600nm波长处的吸光值，连续测定24h，得到细菌生长曲线。
从图1可知，金黄色葡萄球菌的对数生长期在5-15h(图1中a图)，大肠杆菌(图1中c图)的对数生长期在6-13h，枯草芽孢杆菌(图1中b图)的对数生长期在6-15h，了解细菌的对数生长期对后续三种细菌的培养和研究具有重要意义。
1.2最小抑菌浓度测定
采用微量稀释法，所述的具体方法如下：在96孔板每孔中先加入含NA肉汤培养基100μL。在第一排加配好的样品，然后进行二倍稀释，第一排加入的样品用移液枪充分吹打3次以上，使之与肉汤充分混匀，吸取100μL加入第2排，再充分吹打使之与肉汤充分混匀，照此重复直至最后一排，吸取100μL弃去。再在每一孔中加入稀释好的菌液100μL，另外在同一块板上做一排阴性对照(仅加空白肉汤不加菌液)和一排阳性对照(加菌液肉汤不加样品)。将96孔培养板放入37℃恒温培养箱培养24h后，观察结果。
发现两种天然物质均有抑菌效果，结果如表1和表2所示，抗菌肽对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌三种细菌的最小抑菌浓度分别为2500μg/mL，1250μg/mL和1250μg/mL。复合保鲜剂对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌三种细菌的最小抑菌浓度分别为5000μg/mL，625μg/mL和2500μg/mL。
表1抗菌肽对细菌的抑菌率
表2复合保鲜剂对细菌的抑菌率
2、复配防腐剂比例探究
将复合保鲜剂和抗菌肽在最小抑菌浓度下按照0：10、1：9、2：8、3：7、4：6、5：5、6：4、7：3、8：2、9：1、10：0的比例两两复配，根据上文1.2中所述方法，测定不同比例的最小抑菌浓度。
二者不同比例复配抑菌结果见表3，试验表明，本发明所述天然复合保鲜剂对多种微生物具有显著的抑菌效果，添加1份复合保鲜剂即具有明显的抑菌效果，特别是对枯草芽孢杆菌效果最好，考虑到抑菌效果和抗菌肽的成本，确定抗菌肽和复合保鲜剂最佳复配比例为5：5，即本申请中复合保鲜剂可以代替5份的抗菌肽用于抑菌中，不仅可以达到最佳的抑菌效果，且可以显著降低抗菌肽的成本。
表3复配防腐剂对细菌的抑菌率
(注：+：抑菌率＜50％，++：50％≤抑菌率＜95％，+++：95％≤抑菌率)
3、复配防腐剂抑菌活性评价
3.1抑菌圈测定
将细菌在培养至对数生长期，用营养肉汤培养基调整菌体浓度OD＝0.6。将菌液预混至培养基中，倒平板。将已灭菌的牛津杯置于试验平板中，往杯中注入100μL浓度为10.0mg/mL的抗菌肽、复合保鲜剂及抗菌肽、复合保鲜剂质量份配比为5：5的天然复配防腐剂(即复配物)，以蒸馏水为空白对照，硫酸庆大霉素溶液为阳性对照。4℃预扩散2h，37℃培养24h，测定抑菌圈大小。取出培养好的试验平板，用游标卡尺，采用十字交叉法测量抑菌圈直径，以直径表示抑菌圈的大小，结果取平均值，见表4。
由表4可看出，本发明的复配防腐剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌均有较好的抑制作用，复配物的抑菌圈大小比单一使用抗菌肽和复合保鲜剂大，特别是对于枯草芽孢杆菌，复配后对其产生的抑菌圈有显著增大的效果。
表4三种防腐剂的抑菌圈大小
4.2剂量反应曲线
检测在相同最小抑菌浓度下抗菌肽、复合保鲜剂、天然复配防腐剂分别对三种细菌生长的影响随时间变化趋势，将三种细菌培养至对数生长期，用营养肉汤培养基调整菌体浓度为106CFU/mL。在每孔96孔板中每孔加入100μL，采用二倍稀释法梯度稀释，再加入100μL营养肉汤培养基。37℃下150rpm下连续震荡培养。酶标仪设置程序每隔2h测定600nm波长处的吸光值，连续测定24h。以不添加防腐剂的菌液作为空白组，培养时间为横坐标，OD600 nm为纵坐标，绘制三种细菌在不同条件下的微生物生长曲线。
结果如图2至图4所示，发现相较于阳性组均有抑制微生物生长作用，天然复配防腐剂加入细菌中对其生长曲线均有一定程度的影响，能够抑制细菌进入对数生长期，将OD值保持在较低的增长范围内。相比于单一组，推迟进入对数生长期的时间更长，单一组在后12h内细菌有显著生长的趋势。说明天然复配防腐剂更有效地延长细菌进入对数生长期的时间，保持更长久的抑制生长效果。
实施例2
天然复配防腐剂用在调味品抑菌防腐中：
以食盐、大豆、小麦、淀粉为原料，经过蒸煮、制曲、发酵、过滤等工艺，制得一种零添加化学防腐剂酱油产品，具体包括以下步骤：
浸泡：将原料称好后添加其质量1.5倍的80℃温开水，浸泡15min～35min；
蒸煮：将混合原料于121℃进行15min～20min的灭菌操作，从而制得成曲培养基；
制曲：冷却后的成曲培养基与种曲按接种量0.30％～0.55％(质量百分含量)比例混合充分，制成混合曲料；
发酵：将上述步骤的混合曲料和所需要的盐分比例的食盐水置于发酵罐中进行混合，制得初步的酱油体系，发酵周期为35天；
过滤：待发酵结束后，将发酵结束后的发酵酱醪进行过滤处理收集原油；
调配：将酱油原油经灭菌后加入配料以及本发明提供的天然复配防腐剂(见表5)；
灌装灭菌：将通过上述步骤得到的调配酱油进行灌装灭菌处理，即得一种零添加化学防腐剂酱油。
调配步骤中，将三种防腐剂添加至酱油中进行贮存实验，分组情况如表5。
所述酱油样品为生产工艺中的原油，将其进行30min煮沸处理，分装成四组，每组按照表5进行样品处理，将样品瓶敞开用保鲜膜简单封口后，贮存至室温条件下。分别于0d、3d、6d、9d、12d、15d、18d、21d、24d对酱油样品按照国标方法进行菌落总数、氨基酸态氮、pH值指标检测。
表5贮存实验分组情况
2.1酱油微生物学检验
按照国标GB4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》进行测定，将样品以无菌吸管吸取25mL酱油试样置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品稀释液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中，振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。
根据对样品污染状况的估计，选2～3个适宜稀释度的样品匀液，在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。及时将15mL～20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1培养48h±2h。
菌落总数变化情况如表6，对照组在第21天已超过国标限量，而复配防腐剂组保持在102CFU/mL左右，其余两组单一实验组保持在103CFU/mL范围，实验组均未超过国标限量，复配组体现出更低的菌落数变化，说明复配防腐剂可以有效抑制酱油中微生物的生长。
表6菌落总数变化情况(CFU/mL)
时间 0d 3d 6d 9d 12d 15d 18d 21d 24d
对照组 5.5×101 9.2×102 6.1×103 8.4×103 9.8×103 1.8×104 2.9×104 4.1×104 5.8×104
第一组 5.5×101 6.0×101 9.8×101 3.9×102 5.1×102 7.8×102 1.0×103 1.7×103 1.7×103
第二组 5.5×101 5.9×101 2.1×102 4.8×102 8.9×102 1.1×103 1.9×103 2.7×103 2.8×103
第三组 5.5×101 5.4×101 6.7×101 8.1×101 9.3×101 1.8×102 3.3×102 3.9×102 4.5×102
2.2氨基酸态氮测定
根据国标GB5009.235-2016酸度计法，操作步骤描述如下：准确吸取酱油试样5mL，置于250mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀。准确吸取此稀释液5mL于250mL烧杯中，加水100mL，插入电极，用0.05％氢氧化钠标准溶液滴定至酸度计指示pH为8.2，向上述溶液中准确加入甲醛5mL，混匀，静置30s，用0.05％氢氧化钠标准溶液滴定至pH为9.2，记录此次消耗氢氧化钠的体积。重复测定3次，取平均值。
氨基酸态氮是衡量酱油品质的关键指标，其变化情况如表7，在贮存过程中，氨基酸态氮数值呈下降趋势，其中对照组由0.82g/100mL下降至0.39g/100mL变化超过原始含量的一半多。实验组的变化较小，第三组由0.82g/100mL下降至0.68g/100mL，仅减少0.14g/100mL。
表7氨基酸态氮变化情况(g/100mL)
时间 0d 3d 6d 9d 12d 15d 18d 21d 24d
对照组 0.82 0.81 0.77 0.75 0.63 0.58 0.42 0.38 0.39
第一组 0.82 0.83 0.80 0.79 0.73 0.69 0.62 0.60 0.59
第二组 0.82 0.79 0.72 0.68 0.62 0.66 0.60 0.59 0.56
第三组 0.82 0.81 0.78 0.71 0.77 0.70 0.74 0.61 0.68
2.3pH值测定
根据国标GB5009.237-2016，操作步骤描述如下：取10mL酱油于50mL烧杯中，用pH计在常温下测定，待示数稳定后读取并记录。结果如表8，pH值可以直观反应酱油样品变酸情况，对照组pH值降低较多，三组实验组pH变化情况不大，尤其是第三组，第24天与第1天pH值相差较小。
表8pH值变化情况
时间 0d 3d 6d 9d 12d 15d 18d 21d 24d
对照组 4.54 4.58 4.43 4.33 4.03 3.91 3.82 3.54 3.46
第一组 4.55 4.51 4.53 4.56 4.43 4.25 4.24 3.98 3.99
第二组 4.51 4.66 4.64 4.54 4.22 4.35 4.12 4.01 3.91
第三组 4.54 4.67 4.56 4.51 4.44 4.45 4.33 4.22 4.29
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种天然复配防腐剂，其特征在于：所述天然复配防腐剂包括抗菌肽和复合保鲜剂，所述抗菌肽和复合保鲜剂的质量份配比为9～5：1～5，所述复合保鲜剂包括层出镰刀菌发酵粉末、葡萄糖氧化酶、β-淀粉酶、乳酸链球菌素和糊精。
2.根据权利要求1所述的天然复配防腐剂，其特征在于：所述抗菌肽和复合保鲜剂的质量份配比为5：5。
3.根据权利要求1所述的天然复配防腐剂，其特征在于：所述抗菌肽是由市售开菲尔粒混合菌株通过常规豆粕发酵而来的抗菌肽，其分子量大小为2113.428Da，含有18个氨基酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
4.根据权利要求1所述的天然复配防腐剂，其特征在于所述复合保鲜剂通过以下方法制备获得：
(1)将层出镰刀菌的悬液加入至PDA培养基中，28±1℃、140～160rpm/min条件下进行培养，培养55～65h；
(2)将菌株活化培养后，将活化后菌株在PDB培养液中进行种子液培养，于28±1℃、140～160rpm/min条件下培养一周；
(3)将步骤(2)发酵培养液低温离心处理，收集上清液，将上清液在40～45℃下进行真空浓缩，得到发酵浓缩液；
(4)将步骤(3)所得发酵浓缩液上固相柱，用去离子水淋洗，再用乙醇淋洗，收集洗脱液，将洗脱液在40～45℃下进行真空浓缩干燥，得到层出镰刀菌发酵粉末；
(5)将葡萄糖氧化酶、β-淀粉酶、乳酸链球菌素和糊精混合，再加入步骤(4)所得层出镰刀菌发酵粉末混合均匀，得到复合保鲜剂。
5.根据权利要求4所述的用于酱油的天然复配防腐剂，其特征在于：步骤(1)中所述的层出镰刀菌来源于西北农林科技大学动物医学院，保藏号为Bio-62449。
6.根据权利要求4所述的天然复配防腐剂，其特征在于：步骤(2)中种子液的接种量为占PDB培养液总体积的1.0～2.0％。
7.根据权利要求4所述的天然复配防腐剂，其特征在于：步骤(3)中低温离心处理时，在4℃、9000rpm/min条件下离心14～16min；步骤(4)中所述固相柱是C18固相萃取柱，所述固相柱在使用前需进行平衡处理，平衡处理包括采用体积百分含量为35～45％的乙醇水溶液进行平衡处理。
8.根据权利要求4所述的天然复配防腐剂，其特征在于：步骤(5)中所述复合保鲜剂中各成分的质量份配比为：层出镰刀菌发酵粉末18～22、葡萄糖氧化酶18～22、β-淀粉酶22～26、乳酸链球菌素4～6、糊精28～32。
9.权利要求1-8任一项所述的天然复配防腐剂在调味品抑菌防腐中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述的调味品为酱油，所述天然复配防腐剂的添加量为占酱油总质量的0.06～0.08％。
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