CN117881678A - 具有shp2蛋白降解活性的化合物及其医学用途 - Google Patents

具有shp2蛋白降解活性的化合物及其医学用途 Download PDF

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柳济虎
李智慧
安侹玟
裵宇宙
韩贞华
林艺瑟
金志荣
李受炫
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Abstract

本公开内容提供了：在SHP2降解方面具有优异活性的有特定化学结构的化合物或其可药用盐。本公开内容还提供了包含所述化合物或其可药用盐的组合物。根据本公开内容，提供了根据本公开内容的化合物、其盐以及包含根据本公开内容的化合物、其盐的组合物用于治疗或预防SHP2相关疾病(例如，癌症)的药物用途。本公开内容还提供了用于治疗或预防SHP2相关疾病(例如，癌症)的方法，所述方法包括向需要治疗的对象施用有效量的根据本公开内容的化合物、其盐或包含根据本公开内容的化合物、其盐的组合物。

Description

具有SHP2蛋白降解活性的化合物及其医学用途
技术领域
本公开内容涉及具有SHP2蛋白水解活性的化合物的组。特别地，本公开内容涉及具有特定结构并且具有非常优异的降解SHP2蛋白的活性的化合物的组。本公开内容还涉及使用这样的化合物治疗与SHP2蛋白相关的疾病的有用方法。换言之，本公开内容涉及根据本公开内容的化合物用于治疗或预防SHP2蛋白相关疾病的医学用途。
背景技术
含Src同源2结构域的磷酸酶(Src homology 2domain-containing phosphatase，SHP2)是蛋白酪氨酸磷酸酶。SHP2中的突变在努南(Noonan)综合征和LEOPARD综合征中是普遍的。在儿童髓单核细胞白血病、骨髓增生异常综合征、B细胞急性淋巴细胞白血病和急性髓性白血病中也鉴定出了SHP2中的激活突变。SHP2中的体细胞激活突变与数种类型的实体瘤相关，所述实体瘤包括肺腺癌、结肠癌、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤、黑素瘤、肝细胞癌、前列腺癌和乳腺癌(Bentires-Alj et al.,Cancer.Res.2004,64,8816-8820)。
已表明，SHP2参与癌细胞内的多个信号传导过程，例如RAS-ERK、JAK-STAT、PI3K-AKT、NF-κB和mTOR途径。在RAS-ERK途径中，SHP2在上游充当正调节子以促进RAS-RAF-MEK-ERK激酶级联信号传导。因此，SHP2抑制抑制了ERK的去磷酸化和RAS-RAF-MEK-ERK途径的致癌功能，导致癌细胞的细胞生长抑制和凋亡。SHP2还参与程序性细胞死亡途径(PD-1/PD-L1)，并通过抑制T细胞活化而促进免疫逃避。总之，SHP2是非常有吸引力的癌症治疗靶标。例如，已表明SHP2抑制剂SHP099选择性阻断SHP2磷酸酶活性并抑制体外癌细胞生长和异种移植小鼠模型中的肿瘤生长(Chenet al.,Nature 2016,535,148-152；Garcia Fortanetet al.,J.Med.Chem.2016,59,7773-7782)。
已表明变构的SHP2抑制剂在Kirsten大鼠肉瘤(KRAS)-突变体人癌症的临床前模型中是有效的。SHP2蛋白的消融也可以提供用于抑制SHP2活性的替代并且可能甚至更有效的策略。例如，已表明在KRAS突变体肿瘤的异种移植模型中，通过CRISPR-Cas9使SHP2失活诱导了衰老并抑制了肿瘤生长。这些发现提供了这样的证据：从肿瘤细胞中去除SHP2蛋白可以是用于人癌症，特别是具有KRAS突变的癌症的有效治疗策略。
发明内容
技术问题
因此，本发明待解决的一个问题是提供具有含Src同源2结构域的磷酸酶(SHP2)降解活性的化合物、包含所述化合物作为活性成分的药物组合物、以及用于治疗或预防SHP2相关疾病(优选地，癌症或肿瘤)的医学用途。
本发明待解决的另一个问题是提供用于治疗或减轻SHP2相关疾病(优选地，癌症或肿瘤)的方法，其特征在于所述方法降解SHP2并因此降低SHP2活性，并且所述方法包括向需要治疗、改善或预防SHP2相关疾病的患者施用根据本发明的化合物。
技术方案
本发明的化合物
为了解决上述问题，本发明的一个实施方案提供了由以下化学式1表示的化合物或其可药用盐。
[化学式1]
在化学式1中，
R1a、R1b、R1c和R1d各自独立地是H或C1-6烷基(优选甲基)，
R2是H、C1-6烷基或-NH2，
R3是H、C1-6烷基或C1-6羟烷基，
R4是H、C1-6烷基、卤素(优选Cl)或C1-6卤代烷基，
R5是H、C1-6烷基、C1-6炔基、卤素、-CN或杂芳基(优选噻唑)，其中杂芳基中的一个或更多个氢任选地被C1-6烷基(优选甲基)、卤素或C1-3卤代烷基取代，
R6是-NHC(O)R7或杂芳基，其中杂芳基中的一个或更多个氢任选地被C1-6烷基、卤素或C1-3卤代烷基取代，
R7是C1-6烷基(优选甲基)、C1-6卤代烷基、C3-10环烷基(优选环丙基)或杂环，其中环烷基和杂环中的一个或更多个氢各自独立且任选地被C1-6烷基、卤素(优选F)或-CN取代，
X是CH或N，
n1和n2各自独立地是0、1或2，
m是0或1，
L是以下化学式2，
[化学式2]
在化学式2中，
A1、A2和A3各自独立地是直接键、-O-、-N(R9)--C(O)-、-C(O)N(R9)-或-N(R9)C(O)-，
B1和B2各自独立地是直接键、C3-10环烷基、杂环(优选氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、哌嗪、氮杂螺[3.5]壬烷、二氮杂双环[3.2.1]辛烷)、芳基或杂芳基(优选吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪)，其中环烷基、杂环、芳基或杂芳基中的一个或更多个氢任选地被C1-6烷基(优选甲基)、卤素、C1-6卤代烷基、-OH、＝O或-CO2R9取代，
R8和R8’各自独立地是H或C1-6烷基，或者R8和R8’彼此连接以形成C3-10环烷基(优选环丙基)，
R9是H或C1-6烷基(优选甲基)，
q1、q2、q3、q4和q5各自独立地是0至10的整数。
根据本发明的化合物是‘SHP2结合配体-接头-E3连接酶配体’(‘化学式1中位于L左侧的部分-接头(L)-位于L’右侧的部分’)的PROTAC(蛋白水解靶向嵌合体)化合物。本发明人已将多种E3连接酶配体(例如CRBN配体、VHL配体和IAP配体)引入至本发明化学式1的SHP2结合部分。出乎意料的是，在这些配体中，只有由本发明的化学式1表示的VHL配体具有优异的作用。另外，甚至在使用VHL配体的情况下，当接头(化学式1中的L)与VHL配体中的苯基连接时，作用特别优异。尽管本发明是基于该特有且出乎意料的发现，但本发明不限于这些理论机制。
本发明人评价了多种取代基。在本公开内容的结构例如化学式1的情况下，特别地，在待之后描述的优选结构的情况下，可以获得在多个方面包括SHP2降解活性方面优异的化合物。换言之，本发明提供了具有优异的SHP2降解活性、(代谢)稳定性等，以及优异的物理化学特性(cLogP值、水溶性、细胞膜渗透性)的新的化合物作为活性成分。
本文中使用的术语“取代基”、“自由基”、“基团”、“部分”和“片段”可以互换使用。
如果取代基被描述为“任选经取代的”，则该取代基可以是(1)未经取代的或(2)被限定的取代基中的一个或更多个取代。如果可取代的位置是未经取代的，则默认的取代基是氢。
除非上下文另有明确说明，否则本文中使用的术语“烷基”意指具有1至10个碳原子的饱和直链或支链非环烃。“低级烷基”意指具有1至4个碳原子的烷基。一些代表性的饱和直链烷基包括-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基、-正己基、-正庚基、-正辛基、-正壬基和-正癸基，而饱和支链烷基包括-异丙基、-仲丁基、-异丁基、-叔丁基、-异戊基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基丁基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基戊基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基戊基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、2-甲基-4-乙基戊基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2-甲基-4-乙基己基、2，2-二乙基戊基、3，3-二乙基己基、2，2-二乙基己基、3，3-二乙基己基等。在本发明的一个优选实施方案中，烷基是甲基。
除非上下文另有明确说明，否则本文中使用的术语“炔基”意指具有2至10个碳原子并包含至少一个碳-碳三键的直链或支链非环烃。一些代表性的直链或支链(C2-C10)炔基是-乙炔基，-丙炔基，-1-丁炔基，-2-丁炔基，-1-戊炔基，-2-戊炔基，-3-甲基-1-丁炔基，-4-戊炔基，-1-己炔基，-2-己炔基，-5-己炔基，-1-庚炔基，-2-庚炔基，-6-庚炔基，-1-辛炔基，-2-辛炔基，-7-辛炔基，-1-壬炔基，-2-壬炔基，-8-壬炔基、-1-癸炔基、-2-癸炔基和-9-癸炔基。这些炔基可以是任选经取代的。
如本文所使用的，如果使用术语“C1-6”、“C1-6”或“C1-C6”，其意指碳原子数为1至6。例如，C1-6烷基意指碳数目为1至6的任何整数的烷基。
本文中使用的术语“卤素”和“卤代”意指氟、氯、溴或碘。在本发明的一个优选实施方案中，卤素是氯或氟。
本文中使用的术语“卤代烷基”意指烷基，其中一个或更多个氢原子被卤素原子取代。例如，卤代烷基包括：
-CF3，-CHF2，-CH2F，-CBr3，-CHBr2，-CH2Br，-CCl3，-CHCl2，-CH2CI，-CI3，-CHI2，-CH2I，-CH2-CF3，-CH2-CHF2，-CH2-CH2F，-CH2-CBr3，-CH2-CHBr2，-CH2-CH2Br，-CH2-CCl3，-CH2-CHCl2，-CH2-CH2CI，-CH2-CI3，-CH2-CHI2，-CH2-CH2I，等，
其中烷基和卤素如上所述。在本发明的一个优选实施方案中，卤代烷基是-CF3。
本文中使用的术语“羟烷基”意指被一个或更多个羟基取代的直链或支链C1-10烷基。羟烷基的一些实例包括羟甲基、羟乙基、羟丙基和羟丁基，但不限于此。
本文中使用的术语“环烷基”意指具有碳和氢原子并且不具有碳-碳多键的单环或多环饱和环。单环环的一些实例包括但不限于(C3-C7)环烷基，包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。多环环的一些实例包括但不限于：稠合双环环，例如八氢并环戊二烯和十氢化萘；螺环，例如螺[3.3]庚烷、螺[3.4]辛烷、螺[3.5]壬烷、螺[4.4]壬烷、螺[4.5]癸烷和螺[5.5]十一烷；以及桥接双环环，例如双环[2.1.1]己烷、双环[2.2.1]庚烷和双环[2.2.2]辛烷。环烷基可以是未经取代的或任选经取代的。在本发明的一个优选实施方案中，环烷基是环丙基。
术语“杂环”或“杂环烷基”意指包含1至4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5至7元单环或7至12元双环、饱和杂环环，并且其中氮和硫杂原子可以任选地被氧化，并且氮杂原子可以任选地被季铵化。杂环包括如上限定的杂芳基。一些代表性的杂环包括环氧乙烷、氧杂环丁烷、四氢呋喃、四氢吡喃、1,4-二氧六环、氮丙啶、氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、哌嗪、吡咯烷酮、乙内酰脲、戊内酰胺、硫杂环丙烷、硫杂环丁烷、四氢噻吩、四氢噻喃、吗啉、四氢吡啶和四氢嘧啶。杂环包括双环环，其中杂环的一部分与苯或环戊-1,3-二烯环稠合。杂环可以通过任何杂原子或碳原子连接。另外，杂环包括稠合双环环、螺环和桥接双环环，其中上述多环环的一个或更多个碳原子被氮、氧或硫原子取代。例如，当杂原子是氮时，这些包括但不限于：稠合杂双环环，例如八氢环戊[c]吡咯、八氢吡咯并[3,4-c]吡咯、十氢异喹啉和十氢-2,6-萘啶；螺环，例如2-氮杂螺[3.3]庚烷、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷、2-氮杂螺环[3.4]辛烷、2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷、2-氮杂螺[3.5]壬烷、2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷、2-氮杂螺[4.4]壬烷、2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷、8-氮杂螺[4.5]癸烷、2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷、3-氮杂螺[5.5]十一烷和3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷；以及桥接杂双环环，例如2-氮杂双环[2.1.1]己烷、2-氮杂双环[2.2.1]庚烷、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷、2-氮杂双环[2.2.2]辛烷和2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷。在本发明的一个优选实施方案中，杂环是选自氮杂环丁烷、二氮杂环丁烷、哌啶、哌嗪、氮杂螺[3.5]壬烷和二氮杂双环[3.2.1]辛烷中的任何一者。
本文中使用的术语“芳基”意指包含5至10个环原子的碳环芳族基团。一些代表性实例包括但不限于苯基、甲苯基、二甲苯基、萘基、四氢萘基、蒽基、芴基、茚基和薁基。碳环芳族基团可以是未经取代的或任选经取代的。
本文中使用的术语“杂芳基”意指具有5至10元并且具有至少一个选自氮、氧和硫的杂原子并且包含至少1个碳原子的芳族杂环环，包括单环和双环环体系二者。一些代表性的杂芳基是呋喃、4H-吡喃、吡咯、咪唑、吡唑、三唑、四唑、吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪、三嗪、噻吩、唑、异/>唑、噻唑、异噻唑、/>二唑、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚、苯并/>唑、苯并咪唑、苯并噻唑、噌啉、酞嗪、喹唑啉、1H-吖庚因等。在本发明的一个优选实施方案中，杂芳基是噻唑、吡啶或吡嗪。
在本说明书中，*或意指与另一部分连接。
优选地，在多个方面例如SHP2降解活性、(代谢)稳定性、物理化学特性等方面，本发明的一个优选实施方案提供了由化学式1表示的化合物或其可药用盐，其中
R1a、R1b、R1c和R1d各自独立地是H或C1-6烷基(优选甲基)，
R2是H、C1-6烷基或-NH2，
R3是H、C1-6烷基或C1-6羟烷基，
R4是H、C1-6烷基或卤素(优选Cl)，
R5是杂芳基(优选噻唑)，其中杂芳基中的一个或更多个氢任选地被C1-6烷基(优选甲基)或卤素取代，
R6是-NHC(O)R7，
R7是C1-6烷基(优选甲基)或C3-10环烷基(优选环丙基)，其中环烷基中的一个或更多个氢任选地被C1-6烷基、卤素(优选F)或-CN取代，
X是CH或N，
n1和n2各自独立地是0或1，
m是0或1，
L是以下化学式2，
[化学式2]
在化学式2中，
A1、A2和A3各自独立地是直接键、-O-、-N(R9)--C(O)-、-C(O)N(R9)-或-N(R9)C(O)-，
B1和B2各自独立地是直接键、杂环(优选氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、哌嗪、氮杂螺[3.5]壬烷、二氮杂双环[3.2.1]辛烷)或杂芳基(优选吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪)，其中杂环或杂芳基中的一个或更多个氢任选地被C1-6烷基(优选甲基)、卤素、-OH、＝O或-CO2R9取代，
R8和R8’各自独立地是H或C1-6烷基，或R8和R8’彼此连接以形成C3-10环烷基(优选环丙基)，
R9是H或C1-6烷基(优选甲基)，
q1、q2、q3、q4和q5各自独立地是0至10的整数。
更优选地，在多个方面例如SHP2降解活性、(代谢)稳定性、物理化学特性等方面，特别是在SHP2降解活性方面，本发明的一个更优选实施方案提供了由化学式1表示的化合物或其可药用盐，其中
R1a、R1b、R1c和R1d各自独立地是H或C1-6烷基(优选甲基)，
R2是H或-NH2，
R3是H，
R4是H或卤素(优选Cl)，
R5是噻唑，其中噻唑中的一个或更多个氢任选地被C1-6烷基(优选甲基)取代，
R6是-NHC(O)R7，
R7是C1-6烷基(优选甲基)或环丙基，其中环丙基中的一个或更多个氢任选地被卤素(优选F)或-CN取代，
X是CH，
n1和n2各自独立地是0或1，
m是0或1，
L是以下化学式2，
[化学式2]
在化学式2中，
A1、A2和A3各自独立地是直接键、-O-、-N(R9)--C(O)-、-C(O)N(R9)-或-N(R9)C(O)-，
B1和B2各自独立地是直接键、氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、哌嗪、氮杂螺[3.5]壬烷、二氮杂双环[3.2.1]辛烷、吡啶、嘧啶、哒嗪或吡嗪，其中氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、哌嗪、氮杂螺[3.5]壬烷、二氮杂双环[3.2.1]辛烷、吡啶、嘧啶、哒嗪或吡嗪中的一个或更多个氢任选地被C1-6烷基(优选甲基)、-OH、＝O或-CO2R9取代，
B1和B2中的至少一者是氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、哌嗪、氮杂螺[3.5]壬烷、二氮杂双环[3.2.1]辛烷、吡啶、嘧啶、哒嗪或吡嗪，
R8和R8’各自独立地是H或C1-6烷基，或者R8和R8’彼此连接以形成C3-10环烷基(优选环丙基)，
R9是H或C1-6烷基(优选甲基)，
q1、q2、q3、q4和q5各自独立地是0至10的整数。
优选地，在根据本发明的SHP2 PROTAC化合物中，接头(L)是以下接头中的任一种。当所述SHP2 PROTAC化合物具有以下接头时，SHP2降解活性是优异的，并且其更适合于本发明的多种目的。
根据本公开内容的化学式1化合物的一些非限制性实例是在下述实施例中制备的化合物。各实施例编号对应于各化合物编号。例如，在实施例10中制备的最终化合物的编号为化合物10。
在化合物中，在多个方面例如SHP2降解活性、癌细胞系细胞毒性、(代谢)稳定性、物理化学特性等方面，特别地，在SHP2降解活性方面，下表1的化合物是特别优选的。
[表1]
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本文中使用的术语“可药用盐”是指由根据本公开内容的活性化合物与相对无毒的酸或碱(取决于那些化合物的特定取代基)制备的盐。当所述化合物具有相对酸性的基团时，可以通过使中性化合物与足够量的所期望的碱和纯的或惰性溶剂接触来获得碱加成盐。合适的可药用碱加成盐包括但不限于钠、钾、钙、铝、有机氨基、镁盐等。当化合物具有相对碱性的基团时，可以通过使中性化合物与足够量的所期望的酸和纯的或惰性溶剂接触来获得酸加成盐。合适的可药用酸加成盐包括来源于无毒有机酸和无毒无机酸的盐，所述无毒有机酸包括但不限于乙酸、丙酸、异丁基酸、草酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等，并且所述无毒无机酸包括但不限于盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸、亚磷酸等。可药用盐还包括氨基酸的盐，例如精氨酸盐或其类似物，并且还包括有机酸例如葡糖醛酸或半乳糖醛酸的类似物。本公开内容的一些特定化合物具有碱性和酸性官能团二者，以用于具有碱性或酸性部分(加成)盐的化合物的转化。盐的另一些实例通过本发明所属领域已知的文献是公知的。
本文中使用的短语“本发明的化合物”包括化学式1的任何化合物及其包合物、水合物、溶剂合物或多晶型。并且，即使术语“本发明的化合物”没有提及其可药用盐，该术语也包括其盐。在一个实施方案中，本公开内容的化合物包括立体化学纯的化合物，例如基本上不含(例如，大于85％ee、大于90％ee、大于95％ee、大于97％ee或大于99％ee)其他立体异构体的那些。换言之，如果根据本公开内容的化学式1的化合物或其盐是互变异构体和/或立体异构体(例如，几何异构体和构象异构体)，则这样的单独的异构体及其混合物也包括在本公开内容的范围内。如果本公开内容的化合物或其盐在其结构中具有不对称碳，则它们的活性光学异构体和它们的外消旋混合物也包括在本公开内容的范围内。
本文中使用的术语“多晶型”是指本公开内容的化合物或其复合物的固体结晶形式。同一化合物的不同多晶型可以表现出不同的物理、化学和/或光谱特性。不同的物理特性包括但不限于稳定性(例如，对热或光的稳定性)、可压缩性和密度(在制剂和产品制造中重要)以及溶出率(其可影响生物利用度)。稳定性的差异可以由以下的变化引起：化学反应性(例如，差异性氧化，使得剂型在包含一种多晶型时比包含另一种多晶型时变色更快)或机械特征(例如，片剂在储存时碎裂，因为动力学上有利的多晶型转化为热力学上更稳定的多晶型)或二者(例如，一种多晶型的片剂在高湿度下更易于破裂)。多晶型的不同物理特性可以影响其加工。例如，由于例如其颗粒的形状或尺寸分布，一种多晶型可以比另一种更有可能形成溶剂合物或者可以比另一种更难以过滤或洗涤而不含杂质。
本文中使用的术语“溶剂合物”意指这样的根据本公开内容的化合物或其盐，所述化合物或其盐还包含通过非共价分子间力结合的化学计量或非化学计量的量的溶剂。优选的溶剂是挥发性的、无毒的并且可接受的，以用于以痕量向人施用。
本文中使用的术语“水合物”意指这样的根据本公开内容的化合物或其盐，所述化合物或其盐还包含通过非共价分子间力结合的化学计量或非化学计量的量的水。
本文中使用的术语“包合物”意指包含其中截留有客体分子(例如，溶剂或水)的空间(例如，通道)的晶格形式的化合物或其盐。
本文中使用的术语“纯化的”意指当分离时，分离物纯度大于90％，在一个实施方案中纯度大于95％，在另一个实施方案中纯度大于99％，并且在另一个实施方案中纯度大于99.9％。
根据本发明的化合物的医学用途和治疗方法
本发明还提供了用于在患有或易患疾病或病症的对象中通过向该对象施用治疗有效量的一种或更多种如上所述的化合物来治疗这样的疾病或病症的方法。在一个实施方案中，治疗是预防性治疗。在另一个实施方案中，治疗是姑息性治疗。在另一个实施方案中，治疗是恢复性治疗。
1.疾病或病症
用于降解SHP2的本发明化合物可用于多种治疗性或预防性用途(例如，癌症)。这些化合物可用于降解SHP2以降低SHP2活性，并且也可用于治疗SHP2相关疾病或阻止这些疾病的恶化。因此，本发明提供了用于在细胞中降解SHP2的方法。在该方法中，使细胞与有效量的本发明的化合物接触。在一个实施方案中，所述细胞存在于对象中。本发明的方法包括向需要治疗或预防的对象施用包含治疗或预防有效量的根据本发明化合物的药物组合物。
在一个实施方案中，本发明提供了在SHP2相关疾病的细胞中降解SHP2的方法。例如，本发明可用于在患有SHP2相关疾病的对象的细胞中降解SHP2，并因此降低SHP2活性，所述对象将在之后描述。在本发明的另一个实施方案中，本发明可用于在癌症细胞中降解SHP2，所述癌症特别是白血病、淋巴瘤、肺癌、头颈癌、食管癌、胃癌、结直肠癌、胰腺癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、膀胱癌、黑素瘤、神经母细胞瘤、胶质瘤、肉瘤等。
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗SHP2相关疾病的方法，其包括向对象施用治疗有效量的化学式1化合物或其可药用盐。这样的方法包括向需要治疗的对象施用足以降解SHP2的本发明化合物的量，即治疗有效量。在这样的方法中，本发明的化合物可以以本文中所述的药物组合物的形式施用于对象。
在本发明中，SHP2相关疾病是癌症。例如，其可以是国际专利申请公开No.WO2021/236775的表2中描述的癌症中的任一种，但不限于此。WO 2021/236775的表2的公开内容通过引用全部并入本文。在另一个实施方案中，癌症是实体瘤。在另一个实施方案中，癌症是血液学癌症。示例性血液学癌症包括但不限于WO 2021/236775的表3中所列的癌症。WO2021/236775的表3的公开内容通过引用全部并入本文。在另一个实施方案中，血液学癌症是急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病(包括B细胞慢性淋巴细胞白血病)或急性髓性白血病。在另一个实施方案中，癌症是白血病，例如选自急性单核细胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病和混合谱系白血病(MLL)的白血病。在另一个实施方案中，癌症是NUT-中线癌。在另一个实施方案中，癌症是多发性骨髓瘤。在另一个实施方案中，癌症是肺癌，例如小细胞肺癌(SCLC)。在另一个实施方案中，癌症是神经母细胞瘤。在另一个实施方案中，癌症是伯基特淋巴瘤。在另一个实施方案中，癌症是宫颈癌。在另一个实施方案中，癌症是头颈癌。在另一个实施方案中，癌症是食管癌。在另一个实施方案中，癌症是胃癌。在另一个实施方案中，癌症是胰腺癌。在另一个实施方案中，癌症是肝癌。在另一个实施方案中，癌症是黑素瘤。在另一个实施方案中，癌症是卵巢癌。在另一个实施方案中，癌症是结直肠癌。在另一个实施方案中，癌症是前列腺癌。在另一个实施方案中，癌症是乳腺癌。
在另一个实施方案中，根据本发明的癌症选自急性单核细胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、混合谱系白血病、淋巴瘤、NUT-中线癌、多发性骨髓瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、神经母细胞瘤、伯基特淋巴瘤、宫颈癌、头颈癌、食管癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、黑素瘤、卵巢癌、结直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胶质瘤、肉瘤、食管鳞状细胞癌和乳头状甲状腺癌。
换言之，本发明提供了化学式1化合物或其可药用盐用于治疗或预防上述疾病的医学用途。
2.对象
根据本发明合适的待治疗对象包括哺乳动物对象。根据本公开内容的哺乳动物包括但不限于人、犬、猫、牛、山羊、马、绵羊、猪、啮齿动物、兔类动物、灵长类等，并且涵盖子宫内的哺乳动物。
在一个实施方案中，根据本发明合适的待治疗对象是人。
3.施用和给药
本发明的化合物通常以治疗有效量施用。
本文中使用的“有效量”是指本发明化合物的足以减缓SHP2相关疾病的进展或使其最小化或者在SHP2相关疾病的治疗或管理中提供治疗益处的量。“有效量”还指足以在体外或体内抑制或降低SHP2活性的量。
本发明的化合物可以通过任何合适的途径、以适于这样的途径的药物组合物的形式，并以对预期治疗有效的剂量来施用。在单剂量或分剂量中，有效剂量通常在约0.001至约100mg/kg体重/天的范围内，优选约0.01至约50mg/kg/天。根据年龄、物种以及所治疗的疾病或病症，低于该范围下限的剂量水平可以是合适的。在其他情况下，可以使用还要更大的剂量而没有有害副作用。更大的剂量也可以分成数个更小剂量，以用于全天施用。
本发明化合物的药物组合物
在另一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含化学式1化合物或其可药用盐、以及可药用载体或赋形剂。在本发明的一个实施方案中，所述药物组合物用于治疗或预防上述SHP2相关疾病，优选癌症。
术语“可药用”意指适合于用作药物制剂，并且通常认为这样的用途是安全的。该术语还意指其经国家管理机构正式批准用于此用途，或已被列入韩国药典或美国药典。
药物组合物、剂型和施用途径
为了治疗上述疾病或病症，本文中所述的化合物或其可药用盐可以如下施用：
经口施用
本发明的化合物可以经口施用(包括通过吞咽)使得化合物进入胃肠道，或直接从口(例如，经颊或舌下施用)吸收到血流中。
用于经口施用的合适的组合物包括固体、液体、凝胶或粉末制剂，并且具有剂型例如片剂、锭剂、胶囊剂、颗粒剂或散剂。
用于经口施用的组合物可任选地是经肠溶包衣的，并可通过肠溶包衣表现出延迟或持续释放。换言之，根据本发明的用于经口施用的组合物可以是具有立即释放或调节释放模式的制剂。
液体制剂可以包括溶液剂、糖浆剂和混悬剂，其可用于软胶囊或硬胶囊。这样的制剂可以包含可药用载体，例如，水、乙醇、聚乙二醇、纤维素或油。制剂还可以包含一种或更多种乳化剂和/或助悬剂。
在片剂剂型中，存在的药物、活性成分的量可以为剂型的按重量计约0.05％至约95％，更通常地按重量计约2％至约50％。另外，片剂可以包含崩解剂，其占剂型的按重量计约0.5％至约35％，更通常地约2％至约25％。崩解剂的一些实例包括但不限于乳糖、淀粉、羟基乙酸淀粉钠、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、麦芽糖糊精或其混合物。
用于片剂的合适的润滑剂可以以按重量计约0.1％至约5％的量存在，并且包括但不限于滑石、二氧化硅、硬脂酸、硬脂酸钙、硬脂酸锌或硬脂酸镁、硬脂富马酸钠等。
用于片剂的合适的黏合剂包括但不限于明胶、聚乙二醇、糖、树胶、淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素等。用于片剂的合适的稀释剂包括但不限于甘露醇、木糖醇、乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、微晶纤维素和淀粉。
用于片剂的合适增的溶剂可以以按重量计约0.1％至约3％的量存在，并且包括但不限于聚山梨醇酯、月桂基硫酸钠、十二烷基硫酸钠、碳酸丙烯酯、二甘醇单乙醚、二甲基异山梨醇、聚乙二醇(天然的或氢化的)蓖麻油、HCORTM(Nikkol)、油酯、GelucireTM、辛酸/辛酸单/二甘油酯、脱水山梨醇脂肪酸酯和Solutol HSTM。
肠胃外施用
本公开内容的化合物可以直接施用到血流、肌肉或内部器官中。用于肠胃外施用的合适手段包括静脉内、肌内、皮下动脉内、腹膜内、鞘内、颅内等。用于肠胃外施用的合适装置包括注射器(包括针和无针注射器)和输注方法。
用于肠胃外施用的组合物可以配制成立即释放或调节释放，包括延迟释放或持续释放。
大多数肠胃外制剂是液体组合物，并且液体组合物是包含根据本发明活性成分、盐、缓冲剂、等张剂等的水溶液。
肠胃外制剂也可以以脱水形式(例如，通过冻干)或作为无菌非水溶液制备。这些制剂可以与合适的载剂例如无菌水一起使用。溶解增强剂也可以用于制备肠胃外溶液。
表面施用
本发明的化合物可以表面施用于皮肤或经皮施用。用于这种表面施用的制剂可以包括洗剂、溶液剂、霜剂、凝胶剂、水凝胶剂、软膏剂、泡沫剂、植入物、贴剂等。用于表面施用制剂的可药用载体可以包括水、醇、矿物油、甘油、聚乙二醇等。表面施用也可以通过电穿孔、离子透入(iontophoresis)、超声透入(phonophoresis)等进行。
用于表面施用的组合物可以配制成立即释放或调节释放，包括延迟释放或持续释放。
有益效果
本公开内容提供了由于非常好的SHP2降解活性而能够表现出多种药理学活性的化合物、包含所述化合物作为活性成分的药物组合物、其医学用途(尤其是癌症或肿瘤)、以及治疗或预防方法，所述治疗或预防方法包括将所述化合物施用于需要这样的治疗或预防的对象。根据本发明的化合物或其可药用盐在多个方面例如SHP2降解活性、(代谢)稳定性、物理化学特性等方面是优异的，并且特别是SHP2降解活性相对于具有类似结构的化合物的SHP2降解活性要优异得多。
具体实施方式
在下文中，借助实施例对本发明进行了相当详细的描述，以帮助本领域技术人员理解本发明。然而，以下实施例是以举例说明的方式提供的，并不旨在限制本发明的范围。明显的是，在不脱离本发明的精神和范围或牺牲其所有实质性优点的情况下，可以进行多种改变。
本发明化合物的制备
在下文中，将描述本发明的一些化合物的合成方法，并且以下未提及的其他化合物可以通过替换起始材料、中间体和/或反应物以类似的方式来制备。
中间体1.(1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
步骤1：3-(叔丁基硫基)-2-氯苯胺的合成
将2-氯-3-氟苯胺(3g，20.60mmol)、2-甲基丙烷-2-硫醇(7ml，61.81mmol)和碳酸铯(13g，41.20mmol)混悬在DMF(40ml)中，并随后在120℃下搅拌16小时。将反应溶液用EtOAc(400ml)稀释，并用蒸馏水(150ml×3)和盐水(150ml×3)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以获得4.44g(定量)的棕色油状物。
步骤2：3-氨基-2-氯苯硫醇的合成
将3-(叔丁基硫基)-2-氯苯胺(4.44g，20.58mmol)混悬在浓HCl(38ml)中，并随后在90℃下搅拌6小时。在将反应溶液冷却之后，将所得固体过滤并干燥以获得2.39g(73％)的象牙色固体。
步骤3：2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)苯胺的合成
将3-氨基-2-氯苯硫醇(1.34g，8.39mmol)、2-溴-5-氯吡嗪(1.6g，8.39mmol)、Pd2(dba)3(77mg，0.08mmol)、Xantphos(97mg，0.17mmol)和DIPEA(2.9mg，16.79mmol)混悬在1,4-二氧六环(15ml)中，并随后在95℃下搅拌1小时。在将反应溶液过滤之后，将滤液在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(3％至15％ EtOAc/己烷)以得到1.24g(54％)的象牙色固体。
步骤4：(1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)苯胺(120mg，0.44mmol)、(4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(113mg，0.53mmol)和DIPEA(0.35ml，1.99mmol)混悬在NMP(0.48ml)中，并随后在130℃下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(15ml)，随后用EtOAc(15ml)萃取，并将有机层用盐水(15ml)洗涤。然后，将其经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至33％ EtOAc/己烷)以得到175mg(88％)的象牙色固体。
中间体2.(1-(6-氨基-5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
使用3-溴-6-氯吡嗪-2-胺代替2-溴-5-氯吡嗪，以与中间体1中相同的方式合成中间体2。
中间体3.((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
使用((4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯代替(4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯，以与中间体1中相同的方式合成中间体3。
中间体4.((1-(6-氨基-5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
分别使用3-溴-6-氯吡嗪-2-胺和((4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯代替2-溴-5-氯吡嗪和(4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯，以与中间体1中相同的方式合成中间体4。
中间体5.((1-(5-((2-氯-3-(甲基氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3，100mg，0.22mmol)和37％甲醛(87μl，1.08mmol)混悬在DCM(2ml)中。然后，添加乙酸(66μl，0.86mmol)和氰基硼氢化钠(27mg，0.43mmol)，并在室温下搅拌1小时。向反应溶液添加饱和NaHCO3水溶液(10ml)，随后用DCM(10ml×2)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(1％至30％EtOAc/己烷)以得到65.9mg(64％)的象牙色固体。
中间体6.(R)-((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
使用(S)-(吡咯烷-3-基甲基)氨基甲酸叔丁酯代替(4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯，以与中间体1中相同的方式合成中间体6。
中间体7.(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺
步骤1：(2S,4R)-甲基1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸酯的合成
将(2S,4R)-甲基4-羟基吡咯烷-2-羧酸酯盐酸盐(7.85g，43.23mmol)、(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酸(10g，43.23mmol)、EDCI(16.57g，86.46mmol)、HOBt(7g，86.46mmol)和DIPEA(45ml，259.38mmol)混悬在DMF(216ml)中，并随后在室温下搅拌16小时。将反应溶液用饱和NH4Cl水溶液(300ml)和饱和NaHCO3水溶液(300ml)洗涤，并随后用EtOAc(150ml×2)萃取。将有机层用盐水(150ml×2)洗涤，并经无水硫酸钠干燥。然后，使通过过滤和在减压下浓缩获得的剩余物经受MPLC(0％至5％ MeOH/DCM)以获得11g(71％)的象牙色固体。
步骤2：(2S,4R)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸的合成
将(2S,4R)-甲基1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸酯(781mg，2.18mmol)和氢氧化锂(366mg，8.72mmol)混悬在水:THF＝1:1(10ml)中，并随后在室温下搅拌3小时。使用1N HCl水溶液将反应溶液调节至pH 1至2，并随后用EtOAc(15ml×2)萃取。然后，将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以获得680mg(91％)的白色固体。
步骤3：2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄腈的合成
将4-溴-2-羟基苄腈(2g，10.15mmol)和4-甲基噻唑(1.83ml，20.20mmol)混悬在DMAC(40ml)中，并向其中添加乙酸钾(1.98g，20.20mmol)和Pd(OAc)2(45mg，0.20mmol)并加热回流16小时。向反应溶液添加蒸馏水(100ml)，随后用EtOAc(50ml×2)萃取。将有机层用盐水(50ml×2)洗涤，并经无水硫酸镁干燥。在过滤并在减压下浓缩之后，使获得的剩余物经受MPLC(0％至50％ EtOAc/己烷)以获得980mg(45％)的象牙色固体。
步骤4：2-(氨基甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯酚的合成
将2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄腈(864mg，3.99mmol)混悬在THF(22ml)中。然后，在0℃下缓慢添加LiAlH4(THF中的2.0M，8ml，15.98mmol)，并加热回流3小时。在将反应溶液的温度降至0℃之后，向其中缓慢添加蒸馏水(0.5ml)，随后用Rochelle溶液(20ml)中和。然后，将其通过硅藻土过滤器过滤。使滤液经受MPLC(DCM:MeOH:NH4OH＝15:1:0.1)以得到416mg(47％)的黄色固体。
步骤5：((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将2-(氨基甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯酚(416mg，1.89mmol)、(2S,4R)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(650mg，1.89mmol)、HATU(789mg，2.08mmol)和DIPEA(0.98ml，5.66mmol)混悬在DMF(6ml)中，并随后在室温下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(25ml)，随后用EtOAc(15ml×2)萃取。将有机层用盐水(15ml×2)洗涤，并经无水硫酸钠干燥。在过滤并在减压下浓缩之后，使获得的剩余物经受MPLC(0％至20％ MeOH/DCM)以获得898mg(87％)的浅黄色固体。
步骤6：(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(885mg，1.62mmol)混悬在DCM(30ml)中。向其中添加在二氧六环中的4M HCl(8ml)，并随后在室温下搅拌2小时。通过添加饱和NaHCO3水溶液(20ml)将反应溶液中和，随后用DCM(10ml×2)萃取。将有机层用盐水(10ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩。使所得剩余物经受MPLC(胺-二氧化硅，0％至10％ MeOH/DCM)以获得522mg(72％)的黄色固体。
步骤7：(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(399mg，0.89mmol)、1-氟环丙烷-1-羧酸(92.6mg，0.89mmol)、HATU(381mg，0.89mmol)和DIPEA(0.8ml，4.47mmol)混悬在DMF(4ml)中，并随后在室温下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(10ml)，随后用EtOAc(11ml×2)萃取。将有机层用盐水(10ml×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至10％ MeOH/DCM)以得到377mg(79％)的白色固体。
中间体8.(2S,4R)-1-((S)-2-(环丙烷甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺
使用环丙烷羧酸代替1-氟环丙烷-1-羧酸，以与中间体7中相同的方式合成中间体8。
中间体9.(2S,4R)-1-((S)-2-乙酰氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺
使用乙酸代替1-氟环丙烷-1-羧酸，以与中间体7中相同的方式合成中间体9。
中间体10.(2S,4R)-N-(2-(2-氯乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
将(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(中间体7，350mg，0.657mmol)和1-溴-2-氯乙烷(0.2ml，2.628mmol)混悬在DMF(2ml)中。然后，向其中添加碳酸钾(272mg，1.971mmol)和碘化钾(218mg，1.314mmol)，并随后在70℃下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(20ml)，随后用EtOAc(20ml×2)萃取。将有机层用盐水(20ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至5％ MeOH/DCM)以得到234mg(60％)的象牙色固体。
以与合成中间体10相同的方式合成下表2中的中间体11至18。
[表2]
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实施例1.N-(3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-1-(3-(2-(((2S，4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)丙基)哌啶-4-甲酰胺
步骤1：1-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)哌啶-4-羧酸的合成
将4-哌啶羧酸(1g，7.74mmol)和Na2CO3(2.5g，23.22mmol)混悬在水:1,4-二氧六环＝1:1(64ml)中，并随后在0℃下搅拌10分钟。在添加Fmoc-Cl(2g，7.74mmol)之后，将混合物在室温下搅拌16小时。使用1N HCl水溶液将反应溶液调节至pH＝6，并随后用EtOAc(30ml×2)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至10％ MeOH/DCM)以得到1.91g(70％)的白色固体。
步骤2：(9H-芴-9-基)甲基4-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸酯的合成
将1-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)哌啶-4-羧酸(758mg，2.16mmol)混悬在DCM(40ml)中。然后，向其中添加草酰氯(0.24ml，2.80mmol)和DMF(3滴)，并随后在室温下搅拌2.5小时。将反应溶液浓缩以获得黄色油状物。在将获得的黄色油状物溶解在DCM(15ml)中之后，添加((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3，500mg，1.08mmol)和DIPEA(0.75ml，4.31mmol)，并在室温下搅拌1小时。向其中添加蒸馏水(20ml)，随后用DCM(15ml×2)萃取。将获得的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至5％ MeOH/DCM)以得到908mg(定量)的象牙色固体。
步骤3：((1-(5-((2-氯-3-(哌啶-4-甲酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将(9H-芴-9-基)甲基4-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸酯(908mg，1.14mmol)溶解在DMF(7.2ml)中。然后，缓慢添加哌啶(1.9ml，19.36mmol)，并在室温下搅拌1小时。向反应溶液添加蒸馏水(20ml)，随后用EtOAc(20ml×2)萃取，并将有机层经无水硫酸钠干燥。然后，将其过滤并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(胺-二氧化硅，0％至100％ EtOAc/己烷，0％至5％ MeOH/DCM)以获得462mg(71％)的象牙色固体。
步骤4：((1-(5-((2-氯-3-(1-(3-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)丙基)哌啶-4-甲酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将((1-(5-((2-氯-3-(哌啶-4-甲酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(16mg，0.03mmol)和(2S,4R)-N-(2-(3-氯丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体11，18.6mg，0.03mol)混悬在DMF(0.04ml)中。然后，添加碳酸钾(12mg，0.08mmol)和碘化钾(9mg，0.06mmol)，并随后在70℃下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(1ml)，随后用EtOAc(2ml×2)萃取。将有机层用盐水(1ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至10％ MeOH/DCM)以得到20.8mg(65％)的象牙色固体。
步骤5：N-(3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-1-(3-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)丙基)哌啶-4-甲酰胺的合成
将((1-(5-((2-氯-3-(1-(3-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)丙基)哌啶-4-甲酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(20.8mg，0.02mmol)混悬在DCM(0.9ml)中。然后，添加在二氧六环中的4M HCl(0.04ml)，并随后在室温下搅拌1小时。通过添加饱和NaHCO3水溶液(10ml)将反应溶液中和，随后用DCM(5ml×2)萃取。将有机层用盐水(5ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(胺-二氧化硅，0％至5％ MeOH/DCM)以获得15.4mg(81％)的象牙色固体。
实施例2.N-(3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-1-(4-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)丁基)哌啶-4-甲酰胺
使用(2S,4R)-N-(2-(4-氯丁氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体12)代替(2S,4R)-N-(2-(3-氯丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体11)，以与实施例1中相同的方式合成实施例2。
实施例3.N-(3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-1-(6-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)己基)哌啶-4-甲酰胺
使用(2S,4R)-N-(2-((6-氯己基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体13)代替(2S,4R)-N-(2-(3-氯丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体11)，以与实施例1中相同的方式合成实施例3。
实施例4.N-(3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-1-(8-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)辛基)哌啶-4-甲酰胺
使用(2S,4R)-N-(2-((8-氯辛基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体14)代替(2S,4R)-N-(2-(3-氯丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体11)，以与实施例1中相同的方式合成实施例4。
实施例5.(2S,4R)-N-(2-(2-(4-(2-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用2-(哌啶-4-基)乙酸和(2S,4R)-N-(2-(2-氯乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体10)代替哌啶-4-羧酸和(2S,4R)-N-(2-(3-氯丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体11)，以与实施例1中相同的方式合成实施例5。
实施例6.(2S,4R)-N-(2-(3-(4-(2-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用2-(哌啶-4-基)乙酸代替哌啶-4-羧酸，以与实施例1中相同的方式合成实施例6。
实施例7.(2S,4R)-N-(2-(4-(4-(2-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)丁氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用2-(哌啶-4-基)乙酸和(2S,4R)-N-(2-(4-氯丁氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体12)代替哌啶-4-羧酸和(2S,4R)-N-(2-(3-氯丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体11)，以与实施例1中相同的方式合成实施例7。
实施例8.(2S,4R)-N-(2-(3-(4-(2-((3-((5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用2-(哌啶-4-基)乙酸和((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体1)代替哌啶-4-羧酸和((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3)，以与实施例1中相同的方式合成实施例8。
实施例9.(2S,4R)-N-(2-(3-(4-(2-((3-((3-氨基-5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用2-(哌啶-4-基)乙酸和(1-(6-氨基-5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体2)代替哌啶-4-羧酸和((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3)，以与实施例1中相同的方式合成实施例9。
实施例10.(2S,4R)-N-(2-(3-(4-(2-((3-((3-氨基-5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用2-(哌啶-4-基)乙酸和((1-(6-氨基-5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体4)代替哌啶-4-羧酸和((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3)，以与实施例1中相同的方式合成实施例10。
实施例11.(2S,4R)-N-(2-(3-(4-(2-((3-((5-((R)-3-(氨基甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用2-(哌啶-4-基)乙酸和(R)-((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体6)代替哌啶-4-羧酸和((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3)，以与实施例1中相同的方式合成实施例11。
实施例12.(2S,4R)-1-((S)-2-乙酰氨基-3,3-二甲基丁酰基)-N-(2-(3-(4-(2-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用2-(哌啶-4-基)乙酸和(2S,4R)-1-((S)-2-乙酰氨基-3,3-二甲基丁酰基)-N-(2-(3-氯丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体18)代替哌啶-4-羧酸和(2S,4R)-N-(2-(3-氯丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体11)，以与实施例1中相同的方式合成实施例12。
实施例13.(2S,4R)-N-(2-(2-(4-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙基)哌啶-1-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用3-(哌啶-4-基)丙酸和(2S,4R)-N-(2-(2-氯乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体10)代替哌啶-4-羧酸和(2S,4R)-N-(2-(3-氯丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体11)，以与实施例1中相同的方式合成实施例13。
实施例14.(2S,4R)-N-(2-(3-(4-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙基)哌啶-1-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用3-(哌啶-4-基)丙酸代替哌啶-4-羧酸，以与实施例1中相同的方式合成实施例14。
实施例15.(2S,4R)-N-(2-(4-(4-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙基)哌啶-1-基)丁氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用3-(哌啶-4-基)丙酸和(2S,4R)-N-(2-(4-氯丁氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体12)代替哌啶-4-羧酸和(2S,4R)-N-(2-(3-氯丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体11)，以与实施例1中相同的方式合成实施例15。
实施例16.(2S,4R)-N-(2-(2-(4-(4-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁基)哌啶-1-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用4-(哌啶-4-基)丁酸和(2S,4R)-N-(2-(2-氯乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体10)代替哌啶-4-羧酸和(2S,4R)-N-(2-(3-氯丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体11)，以与实施例1中相同的方式合成实施例16。
实施例17.(2S,4R)-N-(2-(4-(4-(4-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁基)哌啶-1-基)丁氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用4-(哌啶-4-基)丁酸和(2S,4R)-N-(2-(4-氯丁氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体12)代替哌啶-4-羧酸和(2S,4R)-N-(2-(3-氯丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体11)，以与实施例1中相同的方式合成实施例17。
实施例18.(2S,4R)-N-(2-((6-(4-(4-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁基)哌啶-1-基)己基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用4-(哌啶-4-基)丁酸和(2S,4R)-N-(2-((6-氯己基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体13)代替哌啶-4-羧酸和(2S,4R)-N-(2-(3-氯丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体11)，以与实施例1中相同的方式合成实施例18。
实施例19.(2S,4R)-N-(2-((6-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基甲酰基)氮杂环丁烷-1-基)己基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用氮杂环丁烷-3-羧酸和(2S,4R)-N-(2-((6-氯己基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体13)代替哌啶-4-羧酸和(2S,4R)-N-(2-(3-氯丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体11)，以与实施例1中相同的方式合成实施例19。
实施例20.((2S,4R)-N-(2-(3-(4-(2-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)-4-羟基哌啶-1-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
步骤1：2-(1-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸的合成
将2-(4-羟基哌啶-4-基)乙酸(38mg，0.19mmol)、Na2CO3(61mg，0.58mmol)混悬在水:1,4-二氧六环＝1:1(1.6ml)中，并随后在0℃下搅拌10分钟。在添加Fmoc-Cl(50mg，0.19mmol)之后，将混合物在室温下搅拌16小时。使用1N HCl水溶液将反应溶液调节至pH＝3，并随后用EtOAc(10ml)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至3％ MeOH/DCM)以得到48.6mg(66％)的白色固体。
步骤2：(9H-芴-9-基)甲基4-(2-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)-4-羟基哌啶-1-羧酸酯的合成
将2-(1-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸(25mg，0.06mmol)、((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3，30mg，0.06mmol)、TCFH(108mg，0.38mmol)和NMI(0.051ml，0.65mmol)混悬在ACN:THF＝1:1(0.5ml)中，并随后在室温下搅拌5小时。向反应溶液添加蒸馏水(7ml)，随后用EtOAc(10ml)萃取。将有机层用盐水(7ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(3％至50％ EtOAc/己烷)以得到11.7mg(23％)象牙色固体。
步骤3：((1-(5-((2-氯-3-(2-(4-羟基哌啶-4-基)乙酰氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将(9H-芴-9-基)甲基4-(2-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)-4-羟基哌啶-1-羧酸酯(40mg，0.04mmol)溶解在DMF(0.2ml)中。然后，缓慢添加哌啶(0.01ml，0.97mmol)并在室温下搅拌2小时。向反应溶液添加蒸馏水(7ml)，随后用EtOAc(10ml)萃取。将有机层用盐水(7ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(胺二氧化硅，0％至4％ MeOH/DCM)以获得9.7mg(37％)的象牙色固体。
步骤4：((1-(5-((2-氯-3-(2-(1-(3-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)丙基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酰氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将((1-(5-((2-氯-3-(2-(4-羟基哌啶-4-基)乙酰氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(9.7mg，0.02mmol)、和(2S,4R)-N-(2-(3-氯丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体11，12mg，0.02mmol)混悬在DMF(0.05ml)中。然后，添加碳酸钾(6.6mg，0.05mmol)，并随后在70℃下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(3ml)，随后用EtOAc(5ml)萃取。将有机层用盐水(3ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至10％ MeOH/DCM)以得到8.1mg(43％)的象牙色固体。
步骤5：((2S,4R)-N-(2-(3-(4-(2-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)-4-羟基哌啶-1-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将((1-(5-((2-氯-3-(2-(1-(3-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)丙基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酰氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(8.1mg，0.007mmol)混悬在DCM(0.7ml)中。然后，添加在二氧六环中的4MHCl(0.017ml)，并随后在室温下搅拌1小时。通过添加饱和NaHCO3水溶液(5ml)将反应溶液中和，随后用DCM(10ml×2)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(胺-二氧化硅，0％至3％ MeOH/DCM)以获得5.8mg(78％)的象牙色固体。
实施例21.N-(3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-1-(4-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)丁酰基)哌啶-4-甲酰胺
步骤1：4-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)丁酸乙酯的合成
将(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(中间体7，97mg，0.18mmol)和4-溴丁酸乙酯(0.05ml，0.36mmol)混悬在DMF(0.3ml)中。然后，添加碳酸钾(75mg，0.55mmol)，并随后在70℃下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(10ml)，随后用EtOAc(10ml×2)萃取。将有机层用盐水(10ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至10％MeOH/DCM)以得到104mg(88％)的象牙色固体。
步骤2：4-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)丁酸的合成
将4-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)丁酸乙酯(102mg，0.16mmol)和氢氧化锂(16mg，0.37mmol)混悬在水:THF＝2:1(1.8ml)中，并随后在室温下搅拌4小时。使用1N HCl水溶液将反应溶液调节至pH＝2，并随后用EtOAc(10ml×2)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得60mg(61％)的象牙色固体。
步骤3：((1-(5-((2-氯-3-(1-(4-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)丁酰基)哌啶-4-甲酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将4-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)丁酸(19mg，0.03mmol)、((1-(5-((2-氯-3-(哌啶-4-甲酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(18mg，0.03mmol)、EDCI(7.2mg，0.04mmol)、HOBt(5mg，0.04mmol)和DIPEA(0.02mL，0.13mmol)混悬在DMF(0.5ml)中，并随后在室温下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(2ml)，随后用EtOAc(2ml×2)萃取。将有机层用盐水(2ml×2)洗涤，将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(10％ MeOH/DCM)以得到12.2mg(33％)的象牙色固体。
步骤4：N-(3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-1-(4-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)丁酰基)哌啶-4-甲酰胺的合成
将((1-(5-((2-氯-3-(1-(4-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)丁酰基)哌啶-4-甲酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(12.2mg，0.01mmol)混悬在DCM(0.5ml)中。然后，添加在二氧六环中的4M HCl(0.03ml)，并随后在室温下搅拌1小时。向反应溶液添加饱和NaHCO3水溶液(2ml)，随后用10％MeOH/DCM(5ml×2)萃取。将有机层用盐水(5ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使剩余物经受MPLC(胺-二氧化硅，0％至5％ MeOH/DCM)以得到7.8mg(70％)的象牙色固体。
实施例22.(2S,4R)-N-(2-(2-(4-(2-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)-2-氧代乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用2-溴乙酸乙酯和((1-(5-((2-氯-3-(2-哌啶-4-基)乙酰氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯代替4-溴丁酸乙酯和((1-(5-((2-氯-3-(哌啶-4-甲酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯，以与实施例21中相同的方式合成实施例22。
实施例23.(2S,4R)-N-(2-(4-(4-(2-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)-4-氧代丁氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用((1-(5-((2-氯-3-(2-(哌啶-4-基)乙酰氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯代替((1-(5-((2-氯-3-(哌啶-4-甲酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯，以与实施例21中相同的方式合成实施例23。
实施例24.(2S,4R)-N-(2-(4-(4-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙基)哌啶-1-基)-4-氧代丁氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用((1-(5-((2-氯-3-(3-(哌啶-4-基)丙酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯代替((1-(5-((2-氯-3-(哌啶-4-甲酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯，以与实施例21中相同的方式合成实施例24。
实施例25.(2S,4R)-N-(2-(4-(4-(4-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁基)哌啶-1-基)-4-氧代丁氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用((1-(5-((2-氯-3-(4-(哌啶-4-基)丁酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯代替((1-(5-((2-氯-3-(哌啶-4-甲酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯，以与实施例21中相同的方式合成实施例25。
实施例26.(2S,4R)-N-(2-((6-(4-(4-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁基)哌啶-1-基)-6-氧代己基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用6-溴己酸甲酯和((1-(5-((2-氯-3-(4-(哌啶-4-基)丁酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯代替4-溴丁酸乙酯和((1-(5-((2-氯-3-(哌啶-4-甲酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯，以与实施例21中相同的方式合成实施例26。
实施例27.(2S,4R)-N-(2-(2-(1-(2-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙酰基)哌啶-4-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
步骤1：2-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯的合成
将((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3，100mg，0.22mmol)混悬在DCM(2ml)中。然后，在0℃下缓慢添加溶解在DCM(1ml)中的氯乙醛酸乙酯(27.9mg，0.20mmol)，并搅拌30分钟。向反应溶液添加饱和NaHCO3水溶液(2ml)，随后用10％ MeOH/DCM(20ml×2)萃取。将有机层用盐水(5ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使剩余物经受MPLC(胺-二氧化硅，30％至40％ EtOAc/己烷)以得到116mg(95％)的象牙色固体。
步骤2：2-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙酸的合成
将2-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(116mg，0.21mmol)、氢氧化锂(17mg，0.41mmol)混悬在THF:MeOH:H2O＝3:2:1(0.74ml)中，并随后在室温下搅拌2小时。使用1N HCl水溶液将反应溶液调节至pH＝3，并随后用EtOAc(10ml×2)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得100mg(91％)的象牙色固体。
步骤3：4-(2-羟乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将2-(哌啶-4-基)乙烷-1-醇(1g，7.74mmol)和三乙胺(3.2ml，23.22mmol)混悬在氯仿(16ml)中。然后，在0℃下缓慢添加二碳酸二叔丁酯(1.9ml，8.05mmol)，并搅拌1小时。向反应溶液添加饱和NH4Cl水溶液(45ml)，然后用DCM(20ml×2)萃取。将有机层用盐水(20ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得2.12g(定量)的无色油状物。
步骤4：4-(2-(甲苯磺酰氧基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(2-羟乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.1g，9.11mmol)和三乙胺(1.4ml，10.02mmol)混悬在DCM(13ml)中。然后，添加4-甲苯磺酰氯(1.74g，9.11mmol)，并随后在室温下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(10ml)，随后用DCM(10ml×2)萃取。将有机层用盐水(10ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使剩余物经受MPLC(0％至50％ EtOAc/己烷)以得到2.41g(69％)的无色油状物。
步骤5：4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(中间体7，261mg，0.49mmol)和4-(2-(甲苯磺酰氧基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(376mg，0.98mmol)混悬在DMF(3.2ml)中。然后，添加碳酸钾(203mg，1.47mmol)和碘化钾(163mg，0.98mmol)，并随后在70℃下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(10ml)，随后用EtOAc(10ml×2)萃取。将有机层用盐水(10ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至10％ MeOH/DCM)以得到246mg(68％)的浅黄色固体。
步骤6：(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-(2-(哌啶-4-基)乙氧基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(245mg，0.33mmol)混悬在DCM(3.3ml)中。然后，添加在二氧六环中的4M HCl(1.65ml)，并随后在室温下搅拌1小时。向反应溶液添加饱和NaHCO3水溶液(10ml)，随后用DCM(5ml×2)萃取。将有机层用盐水(5ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩以获得129mg(61％)的黄色固体。
步骤7：((1-(5-((2-氯-3-(2-(4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌啶-1-基)-2-氧代乙酰氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将2-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙酸(25mg，0.05mmol)、(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-(2-(哌啶-4-基)乙氧基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(30mg，0.05mmol)、EDCI(11mg，0.06mmol)、HOBt(8mg，0.06mmol)和DIPEA(0.03ml，0.18mmol)混悬在DMF(0.75ml)中，并随后在室温下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(3ml)，随后用EtOAc(3ml×2)萃取。将有机层用盐水(3ml×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。使所得剩余物经受MPLC(0％至7％ MeOH/DCM)以获得6.9mg(13％)的象牙色固体。
步骤8：(2S,4R)-N-(2-(2-(1-(2-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙酰基)哌啶-4-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将((1-(5-((2-氯-3-(2-(4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌啶-1-基)-2-氧代乙酰氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(6.9mg，0.005mmol)混悬在DCM(0.6ml)中。然后，添加在二氧六环中的4MHCl(0.014ml)，并随后在室温下搅拌2小时。向反应溶液添加饱和NaHCO3水溶液(1ml)，随后用10％MeOH/DCM(5ml×2)萃取。将有机层用盐水(1ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(胺-二氧化硅，0％至4％ MeOH/DCM)以获得4.2mg(67％)的象牙色固体。
实施例28.(2S,4R)-N-(2-(3-(1-(2-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙酰基)哌啶-4-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用3-(哌啶-4-基)丙烷-1-醇代替2-(哌啶-4-基)乙烷-1-醇，以与实施例27中相同的方式合成实施例28。
实施例29.(2S,4R)-N-(2-((1-(3-((3-((5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌啶-4-基)甲氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体1)和哌啶-4-基甲醇代替((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3)和氯乙醛酸乙酯，以与实施例27中相同的方式合成实施例29。
实施例30.(2S,4R)-N-(2-((1-(3-((3-((3-氨基-5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌啶-4-基)甲氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用(1-(6-氨基-5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体2)、3-氯-3-氧代丙酸乙酯和哌啶-4-基甲醇代替((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3)、氯乙醛酸乙酯和2-(哌啶-4-基)乙烷-1-醇，以与实施例27中相同的方式合成实施例30。
实施例31.(2S,4R)-N-(2-((1-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌啶-4-基)甲氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
/>
分别使用3-氯-3-氧代丙酸乙酯和哌啶-4-基甲醇代替氯乙醛酸乙酯和2-(哌啶-4-基)乙烷-1-醇，以与实施例27中相同的方式合成实施例31。
实施例32.(2S,4R)-N-(2-((1-(3-((3-((3-氨基-5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌啶-4-基)甲氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用((1-(6-氨基-5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体4)、3-氯-3-氧代丙酸乙酯和哌啶-4-基甲醇代替((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3)、氯乙醛酸乙酯和2-(哌啶-4-基)乙烷-1-醇，以与实施例27中相同的方式合成实施例32。
实施例33.(2S,4R)-1-((S)-2-乙酰氨基-3,3-二甲基丁酰基)-N-(2-((1-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌啶-4-基)甲氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用3-氯-3-氧代丙酸乙酯、哌啶-4-基甲醇和(2S,4R)-1-((S)-2-乙酰氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(中间体9)代替氯乙醛酸乙酯、2-(哌啶-4-基)乙烷-1-醇和(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(中间体7)，以与实施例27中相同的方式合成实施例33。
实施例34.(2S,4R)-N-(2-(2-(1-(3-((3-((5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌啶-4-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体1)和3-氯-3-氧代丙酸乙酯代替((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3)和氯乙醛酸乙酯，以与实施例27中相同的方式合成实施例34。
实施例35.(2S,4R)-N-(2-(2-(1-(3-((3-((3-氨基-5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌啶-4-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用(1-(6-氨基-5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体2)和3-氯-3-氧代丙酸乙酯代替((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3)和氯乙醛酸乙酯，以与实施例27中相同的方式合成实施例35。
实施例36.(2S,4R)-N-(2-(2-(1-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌啶-4-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用3-氯-3-氧代丙酸乙酯代替氯乙醛酸乙酯，以与实施例27中相同的方式合成实施例36。
实施例37.(2S,4R)-N-(2-(2-(1-(3-((3-((3-氨基-5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌啶-4-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用((1-(6-氨基-5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体4)和3-氯-3-氧代丙酸乙酯代替((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3)和氯乙醛酸乙酯，以与实施例27中相同的方式合成实施例37。
实施例38.(2S,4R)-1-((S)-2-乙酰氨基-3,3-二甲基丁酰基)-N-(2-(2-(1-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌啶-4-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用3-氯-3-氧代丙酸乙酯和(2S,4R)-1-((S)-2-乙酰氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(中间体9)代替氯乙醛酸乙酯和(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(中间体7)，以与实施例27中相同的方式合成实施例38。
实施例39.(2S,4R)-N-(2-((1-(3-((3-((5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌啶-4-基)甲氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体1)、3-氯-3-氧代丙酸乙酯和3-(哌啶-4-基)丙烷-1-醇代替((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3)、氯乙醛酸乙酯和2-(哌啶-4-基)乙烷-1-醇，以与实施例27中相同的方式合成实施例39。
实施例40.(2S,4R)-N-(2-(3-(1-(3-((3-((3-氨基-5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌啶-4-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用(1-(6-氨基-5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体2)、3-氯-3-氧代丙酸乙酯和3-(哌啶-4-基)丙烷-1-醇代替((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3)、氯乙醛酸乙酯和2-(哌啶-4-基)乙烷-1-醇，以与实施例27中相同的方式合成实施例40。
实施例41.(2S,4R)-N-(2-(3-(1-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌啶-4-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用3-氯-3-氧代丙酸乙酯和3-(哌啶-4-基)丙烷-1-醇代替氯乙醛酸乙酯和2-(哌啶-4-基)乙烷-1-醇，以与实施例27中相同的方式合成实施例41。
实施例42.(2S,4R)-N-(2-(3-(1-(3-((3-((3-氨基-5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌啶-4-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用((1-(6-氨基-5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体4)、3-氯-3-氧代丙酸乙酯和3-(哌啶-4-基)丙烷-1-醇代替((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3)、氯乙醛酸乙酯和2-(哌啶-4-基)乙烷-1-醇，以与实施例27中相同的方式合成实施例42。
实施例43.(2S,4R)-1-((S)-2-乙酰氨基-3,3-二甲基丁酰基)-N-(2-(3-(1-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌啶-4-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用3-氯-3-氧代丙酸乙酯、3-(哌啶-4-基)丙烷-1-醇和(2S,4R)-1-((S)-2-乙酰氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(中间体9)代替氯乙醛酸乙酯、2-(哌啶-4-基)乙烷-1-醇和(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(中间体7)，以与实施例27中相同的方式合成实施例43。
实施例44.(2S,4R)-N-(2-((1-(4-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-基)甲氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用4-氯-4-氧代丁酸甲酯和哌啶-4-基甲醇代替氯乙醛酸乙酯和2-(哌啶-4-基)乙烷-1-醇，以与实施例27中相同的方式合成实施例44。
实施例45.(2S,4R)-N-(2-(2-(1-(4-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用4-氯-4-氧代丁酸甲酯代替氯乙醛酸乙酯，以与实施例27中相同的方式合成实施例45。
实施例46.(2S,4R)-N-(2-((1-(1-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羰基)哌啶-4-基)甲氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用1-(氯羰基)环丙烷-1-羧酸甲酯和哌啶-4-基甲醇代替氯乙醛酸乙酯和2-(哌啶-4-基)乙烷-1-醇，以与实施例27中相同的方式合成实施例46。
实施例47.(2S,4R)-N-(2-(2-(1-(1-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羰基)哌啶-4-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用1-(氯羰基)环丙烷-1-羧酸甲酯代替氯乙醛酸乙酯，以与实施例27中相同的方式合成实施例47。
实施例48.(2S,4R)-N-(2-(3-(1-(1-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羰基)哌啶-4-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用1-(氯羰基)环丙烷-1-羧酸甲酯和3-(哌啶-4-基)丙烷-1-醇代替氯乙醛酸乙酯和2-(哌啶-4-基)乙烷-1-醇，以与实施例27中相同的方式合成实施例48。
实施例49.(2S,4R)-N-(2-(2-(1-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2,2-二甲基-3-氧代丙酰基)哌啶-4-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用3-氯-2,2-二甲基-3-氧代丙酸甲酯，以与实施例27中相同的方式合成实施例49。
实施例50.(2S,4R)-N-(2-((7-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
步骤1：3-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酸乙酯的合成
将((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3，240mg，0.52mmol)混悬在DCM(3.2ml)中。然后，在0℃下缓慢添加乙基丙二酰氯(0.08ml，0.62mmol)，并搅拌30分钟。向反应溶液添加饱和NaHCO3水溶液(10ml)，随后用DCM(10ml×2)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。使所得剩余物经受MPLC(3％至35％ EtOAc/己烷)以获得206mg(69％)的象牙色固体。
步骤2：3-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酸的合成
将3-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酸乙酯(50mg，0.09mmol)和氢氧化锂(11mg，0.26mmol)混悬在THF:MeOH:H2O＝3:2:1(0.34ml)中，并随后在室温下搅拌2小时。使用1N HCl水溶液将反应溶液调节至pH＝2，并随后用EtOAc(10ml×2)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得46mg(97％)的象牙色固体。
步骤3：2-(((2-硝基苯基)磺酰基)氧基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的合成
将2-羟基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2g，8.29mmol)和三乙胺(2.3ml，16.58mmol)混悬在DCM(16ml)中。然后，添加2-硝基苯磺酰氯(1.84g，8.29mmol)，并随后在室温下搅拌2小时。向反应溶液添加蒸馏水(30ml)，随后用DCM(50ml)萃取。将有机层用盐水(30ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。使所得剩余物经受MPLC(1％至40％ EtOAc/己烷)以获得3.3g(93％)的无色油状物。
步骤4：2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的合成
将(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(中间体7，500mg，0.494mmol)和2-(((2-硝基苯基)磺酰基)氧基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(1.2g，2.82mmol)混悬在DMF(1.5ml)中。然后，添加碳酸铯(612mg，1.88mmol)，并随后在50℃下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(20ml)，随后用EtOAc(30ml)萃取。将有机层用盐水(20ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。使所得剩余物经受MPLC(0％至4％ MeOH/DCM)以获得675mg(95％)的象牙色固体。
步骤5：(2S,4R)-N-(2-((7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(675mg，0.89mmol)混悬在DCM(18ml)中。然后，添加在二氧六环中的4M HCl(4.4ml)，并随后在室温下搅拌1小时。向反应溶液添加饱和NaHCO3水溶液(10ml)，随后用DCM(15ml×2)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得483mg(82％)的象牙色固体。
步骤6：((1-(5-((2-氯-3-(3-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-3-氧代丙酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将3-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酸(16.5mg，0.03mmol)、(2S,4R)-N-(2-((7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(19.4mg，0.03mmol)、EDCI(6.8mg，0.04mmol)、HOBt(4.8mg，0.04mmol)和DIPEA(0.02ml，0.12mmol)混悬在DMF(0.1ml)中，并随后在室温下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(7ml)，随后用EtOAc(10ml)萃取。将有机层用盐水(7ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。使所得剩余物经受MPLC(0％至5％MeOH/DCM)以获得20mg(42％)的象牙色固体。
步骤7：(2S,4R)-N-(2-((7-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将((1-(5-((2-氯-3-(3-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-3-氧代丙酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(20mg，0.017mmol)混悬在DCM(1.7ml)中。然后，添加在二氧六环中的4M HCl(0.04ml)，并随后在室温下搅拌2小时。向反应溶液添加饱和NaHCO3水溶液(7ml)，随后用DCM(10ml×3)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。使所得剩余物经受MPLC(胺-二氧化硅，0％至3％MeOH/DCM)以获得16mg(87％)的象牙色固体。
实施例51.(2S,4R)-N-(2-((7-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)(甲基)氨基)-3-氧代丙酰基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用((1-(5-((2-氯-3-(甲基氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体5)代替((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3)，以与实施例50中相同的方式合成实施例51。
实施例52.(2S,4R)-N-(2-(2-(4-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌嗪-1-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
步骤1：3-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酸乙酯的合成
将((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3，240mg，0.52mmol)混悬在DCM(3.2ml)中。然后，在0℃下缓慢添加乙基丙二酰氯(0.08ml，0.62mmol)，并搅拌30分钟。向反应溶液添加饱和NaHCO3水溶液(10ml)，随后用DCM(10ml×2)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(3％至35％ EtOAc/己烷)以得到206mg(69％)的象牙色固体。
步骤2：3-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酸的合成
将3-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酸乙酯(50mg，0.09mmol)和氢氧化锂(11mg，0.26mmol)混悬在THF:MeOH:H2O＝3:2:1(0.34ml)中，并随后在室温下搅拌2小时。使用1N HCl水溶液将反应溶液调节至pH＝2，并随后用EtOAc(10ml×2)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得46mg(97％)的象牙色固体。
步骤3.4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将(2S,4R)-N-(2-(2-氯乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体10，100mg，0.16mmol)、哌嗪-1-羧酸叔丁酯(38mg，0.2mmol)、碳酸钾(70mg，0.5mmol)和碘化钠(26mg，0.16mmol)混悬在乙腈(1ml)中，并随后在60℃下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(10ml)，随后用EtOAc(10ml×2)萃取。将有机层用盐水(10ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至10％ MeOH/DCM)以得到89mg(72％)的白色固体。
步骤4：(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-(2-(哌嗪-1-基)乙氧基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(86mg，0.12mmol)混悬在DCM(1.15ml)中。然后，添加在二氧六环中的4M HCl(0.58ml)，并随后在室温下搅拌1小时。向反应溶液添加饱和NaHCO3水溶液(15ml)，随后用10％ MeOH/DCM(15ml×2)萃取。将有机层用盐水(15ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩以获得69mg(93％)的象牙色固体。
步骤5：((1-(5-((2-氯-3-(3-(4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将3-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酸(25mg，0.05mmol)、(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-(2-(哌嗪-1-基)乙氧基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(29mg，0.05mmol)、EDCI(10mg，0.05mmol)、HOBt(7mg，0.05mmol)和DIPEA(0.02ml，0.02mmol)混悬在DMF(0.15ml)中，并随后在室温下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(10ml)，随后用EtOAc(5ml×2)萃取。将有机层用盐水(5ml×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(10％ MeOH/DCM)以得到19.3mg(36％)的象牙色固体。
步骤6：(2S,4R)-N-(2-(2-(4-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌嗪-1-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将((1-(5-((2-氯-3-(3-(4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(17.1mg，0.01mmol)混悬在DCM(0.3ml)中。然后，添加在二氧六环中的4MHCl(0.07ml)，并在室温下搅拌1小时。向反应溶液添加饱和NaHCO3水溶液(10ml)，随后用10％MeOH/DCM(5ml×2)萃取。将有机层用盐水(5ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(胺-二氧化硅，0％至5％ MeOH/DCM)以获得13.5mg(86％)的白色固体。
实施例53.(2S,4R)-N-(2-(2-(4-(3-((3-((5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌嗪-1-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体1)代替((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3)，以与实施例52中相同的方式合成实施例53。
实施例54.(2S,4R)-N-(2-(2-(4-(3-((3-((3-氨基-5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌嗪-1-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用(1-(6-氨基-5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体2)代替((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3)，以与实施例52中相同的方式合成实施例54。
实施例55.(2S,4R)-N-(2-(2-(4-(3-((3-((3-氨基-5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌嗪-1-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用((1-(6-氨基-5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体4)代替((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3)，以与实施例52中相同的方式合成实施例55。
实施例56.(2S,4R)-N-(2-(2-(4-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌嗪-1-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(环丙烷甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用(2S,4R)-N-(2-(2-氯乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(环丙烷甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体15)代替(2S,4R)-N-(2-(2-氯乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体10)，以与实施例52中相同的方式合成实施例56。
实施例57.(2S,4R)-1-((S)-2-乙酰氨基-3,3-二甲基丁酰基)-N-(2-(2-(4-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌嗪-1-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用((2S,4R)-1-((S)-2-乙酰氨基-3,3-二甲基丁酰基)-N-(2-(2-氯乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体17)代替(2S,4R)-N-(2-(2-氯乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体10)，以与实施例52中相同的方式合成实施例57。
实施例58.(2S,4R)-N-(2-(2-(4-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-甲基-3-氧代丙酰基)哌嗪-1-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用3-氯-2-甲基-3-氧代丙酸乙酯代替乙基丙二酰氯，以与实施例52中相同的方式合成实施例58。
实施例59.(2S,4R)-N-(2-(2-(4-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2,2-二甲基-3-氧代丙酰基)哌嗪-1-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用3-氯-2,2-二甲基-3-氧代丙酸甲酯代替乙基丙二酰氯，以与实施例52中相同的方式合成实施例59。
实施例60.(2S,4R)-N-(2-(3-(4-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌嗪-1-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用(2S,4R)-N-(2-(3-氯丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体11)代替(2S,4R)-N-(2-(2-氯乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体10)，以与实施例52中相同的方式合成实施例60。
实施例61.(2S,4R)-1-((S)-2-乙酰氨基-3,3-二甲基丁酰基)-N-(2-(3-(4-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)哌嗪-1-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用(2S,4R)-1-((S)-2-乙酰氨基-3,3-二甲基丁酰基)-N-(2-(3-氯丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体18)代替(2S,4R)-N-(2-(2-氯乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体10)，以与实施例52中相同的方式合成实施例61。
实施例62.(2S,4R)-N-(2-(2-((R)-4-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)-3-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
/>
使用(R)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯代替哌嗪-1-羧酸叔丁酯，以与实施例52中相同的方式合成实施例62。
实施例63.(2S,4R)-N-(2-(2-((S)-4-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)-3-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用(S)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯代替哌嗪-1-羧酸叔丁酯，以与实施例52中相同的方式合成实施例63。
实施例64.(2S,4R)-N-(2-(3-((S)-4-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)-3-甲基哌嗪-1-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用(2S,4R)-N-(2-(3-氯丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体11)和(S)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯代替(2S,4R)-N-(2-(2-氯乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体10)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯，以与实施例52中相同的方式合成实施例64。
实施例65.((2S,4R)-N-(2-(3-((R)-4-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)-3-甲基哌嗪-1-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
分别使用(2S,4R)-N-(2-(3-氯丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体11)和(R)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯代替(2S,4R)-N-(2-(2-氯乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体10)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯，以与实施例52中相同的方式合成实施例65。
实施例66.(S)-甲基4-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)-1-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-2-羧酸酯
使用(S)-1-叔丁基3-甲基哌嗪-1,3-二羧酸酯代替哌嗪-1-羧酸叔丁酯，以与实施例52中相同的方式合成实施例66。
实施例67.(R)-4-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)-1-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-2-羧酸甲酯
/>
使用(R)-1-(叔丁基)3-甲基哌嗪-1,3-二羧酸酯代替哌嗪-1-羧酸叔丁酯，以与实施例52中相同的方式合成实施例67。
实施例68.(2S,4R)-N-(2-(2-(8-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯代替哌嗪-1-羧酸叔丁酯，以与实施例52中相同的方式合成实施例68。
实施例69.(S)-4-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)-1-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-2-羧酸
步骤1：1-(叔丁基)3-甲基(S)-4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1,3-二羧酸酯的合成
将(2S,4R)-N-(2-(2-氯乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体10，100mg，0.16mmol)、1-(叔丁基)3-甲基(S)-哌嗪-1,3-二羧酸酯(82mg，0.34mmol)、碳酸钾(70mg，0.50mmol)和碘化钠(56mg，0.34mmol)混悬在DMF(0.6ml)中，并随后在70℃下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(10ml)，随后用EtOAc(15ml)萃取。将有机层用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至4％ MeOH/DCM)以得到91mg(67％)的白色固体。
步骤2：(S)-1-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-2-羧酸甲酯的合成
将1-(叔丁基)3-甲基(S)-4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1,3-二羧酸酯(90.7mg，0.11mmol)混悬在DCM(1.1ml)中。然后，添加在二氧六环中的4M HCl(0.28ml)，并在室温下搅拌1小时。向反应溶液添加饱和NaHCO3水溶液(10ml)，随后用DCM(20ml×2)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(胺-二氧化硅，0％至3％MeOH/DCM)以获得64mg(80％)的象牙色固体。
步骤3：(S)-1-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-2-羧酸的合成
将(S)-1-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-2-羧酸甲酯(64mg，0.05mmol)和氢氧化锂(8mg，0.18mmol)混悬在THF:MeOH:H2O＝3:2:1(0.65ml)中，并随后在室温下搅拌16小时。使用1N HCl水溶液将反应溶液调节至pH＝2，并随后在减压下浓缩以获得82mg(定量)的象牙色固体。
步骤4：(S)-4-(3-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)-1-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-2-羧酸的合成
将3-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酸(20mg，0.04mmol)、NHS(4.3mg，0.04mmol)和DCC(8mg，0.04mmol)混悬在THF(0.4ml)中，并随后在室温下搅拌30分钟。向反应溶液添加(S)-1-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-2-羧酸(33.6mg，0.04mmol)、DIPEA(0.03ml，0.15mmol)和DMF(0.4ml)，并随后在室温下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(5ml)，随后用DCM(10ml×2)萃取。将有机层用盐水(5ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至15％ MeOH/DCM->C18反相二氧化硅，10％至50％ ACN/水)以获得16.2mg(36％)的白色固体。
步骤5：(S)-4-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)-1-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-2-羧酸的合成
将(S)-4-(3-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)-1-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-2-羧酸(14mg，0.01mmol)混悬在DCM(1.1ml)中。添加在二氧六环中的4M HCl(0.03ml)，并随后在室温下搅拌2小时。将反应溶液在减压下浓缩并在真空中干燥以获得7.5mg(55％)的象牙色固体。
实施例70.(R)-4-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙酰基)-1-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-2-羧酸
使用1-(叔丁基)3-甲基(R)-哌嗪-1,3-二羧酸酯代替1-(叔丁基)3-甲基(S)-哌嗪-1,3-二羧酸酯，以与实施例69中相同的方式合成实施例70。
实施例71.(2S,4R)-N-(2-(3-(1-(2-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
步骤1：((1-(5-((3-(2-溴代乙酰氨基)-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3，20mg，0.04mmol)和三乙胺(0.018ml，0.13mmol)混悬在DCM(0.2ml)中。然后，在0℃下缓慢添加溴乙酰氯(7.5mg，0.05mmol)，并搅拌30分钟。向反应溶液添加饱和NaHCO3水溶液(2ml)，随后用DCM(5ml×2)萃取。将有机层用盐水(5ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(5％至40％EtOAc/己烷)以得到10mg(40％)的象牙色固体。
步骤2：((1-(5-((2-氯-3-(2-(4-(3-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)丙基)哌啶-1-基)乙酰氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将((1-(5-((3-(2-溴代乙酰氨基)-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(35mg，0.06mmol)、(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-(3-(哌啶-4-基)丙氧基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(20mg，0.03mmol)、碳酸钾(13mg，0.09mmol)和碘化钾(10mg，0.06mmol)混悬在DMF(0.2ml)中，并随后在70℃下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(10ml)，随后用EtOAc(5ml×2)萃取。将有机层用盐水(5ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至10％ MeOH/DCM)以得到22.3mg(63％)的白色固体。
步骤3：(2S,4R)-N-(2-(3-(1-(2-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将((1-(5-((2-氯-3-(2-(4-(3-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)丙基)哌啶-1-基)乙酰氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(22.3mg，0.02mmol)混悬在DCM(1.9ml)中。添加在二氧六环中的4M HCl(0.05ml)，并随后在室温下搅拌1小时。添加饱和NaHCO3水溶液(1ml)，随后用10％ MeOH/DCM(2ml×2)萃取。将有机层用盐水(1ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(胺-二氧化硅，0％至5％ MeOH/DCM)以获得16.2mg(79％)的白色固体。
实施例72.(2S,4R)-N-(2-(2-(4-(2-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-(2-(哌嗪-1-基)乙氧基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺代替(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-(3-(哌啶-4-基)丙氧基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺，以与实施例71中相同的方式合成实施例72。
实施例73.(2S,4R)-N-(2-(3-(4-(2-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-(3-(哌嗪-1-基)丙氧基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺代替(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-(3-(哌啶-4-基)丙氧基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺，以与实施例71中相同的方式合成实施例73。
实施例74.(2S,4R)-N-(2-(2-(1-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙基)哌啶-4-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
步骤1：((1-(5-((3-丙烯酰胺基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3，50mg，0.11mmol)和三乙胺(0.090ml，0.65mmol)混悬在DCM(2ml)中。然后，在0℃下缓慢添加3-溴丙酰氯(65mg，0.38mmol)，并搅拌1小时。向反应溶液添加饱和NaHCO3水溶液(10ml)，随后用DCM(20ml)萃取。将有机层用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(5％至40％ EtOAc/己烷)以得到36mg(64％)的象牙色固体。
步骤2：((1-(5-((2-氯-3-(3-(4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌啶-1-基)丙酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将((1-(5-((3-丙烯酰胺基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(18mg，0.03mmol)、(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-(2-(哌啶-4-基)乙氧基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(25mg，0.04mmol)和三乙胺(0.01ml，0.07mmol)混悬在DCM:MeOH＝1:1(0.2ml)中，并随后在60℃下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(3ml)，随后用DCM(5ml)萃取，并且将有机层经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至10％ MeOH/DCM)以得到21.3mg(53％)的象牙色固体。
步骤3：(2S,4R)-N-(2-(2-(1-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙基)哌啶-4-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将((1-(5-((2-氯-3-(3-(4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌啶-1-基)丙酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(21.3mg，0.02mmol)混悬在DCM(1.8ml)中。然后，添加在二氧六环中的4M HCl(0.05ml)，并随后在室温下搅拌1小时。向反应溶液添加饱和NaHCO3水溶液(1ml)，随后用DCM(5ml×3)萃取。将有机层用盐水(1ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(胺-二氧化硅，0％至4％ MeOH/DCM)以获得16.3mg(84％)的白色固体。
实施例75.(2S,4R)-N-(2-(3-(1-(3-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-3-氧代丙基)哌啶-4-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-(3-(哌啶-4-基)丙氧基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺代替(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-(2-(哌啶-4-基)乙氧基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺，以与实施例74中相同的方式合成实施例75。
实施例76.(2S,4R)-N-(2-(2-(4-(2-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)-3-氧代哌嗪-1-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
步骤1：4-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯(200mg，1.00mmol)混悬在DMF(1ml)中。然后，在0℃下缓慢添加氢化钠(48mg，1.20mmol)，并搅拌10分钟。向反应溶液添加溴乙酸叔丁酯(0.16ml，1.10mmol)，并搅拌1小时。向反应溶液添加蒸馏水(10ml)，随后用EtOAc(15ml)萃取。将有机层用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(3％至50％ EtOAc/己烷)以得到286mg(91％)的无色油状物。
步骤2：2-(2-氧代哌嗪-1-基)乙酸的合成
将4-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯(286mg，0.91mmol)混悬在DCM(3ml)中。添加在二氧六环中的4M HCl(4.5ml)，并随后在室温下搅拌4小时。将反应溶液在减压下浓缩以获得173mg(98％)的白色固体。
步骤3：2-(4-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-2-氧代哌嗪-1-基)乙酸的合成将2-(2-氧代哌嗪-1-基)乙酸(173mg，0.89mmol)和Na2CO3(282mg，2.67mmol)混悬在水:1,4-二氧六环＝1:1(7.4ml)中，并随后在0℃下搅拌10分钟。在添加Fmoc-Cl(230mg，0.89mmol)之后，将混合物在室温下搅拌16小时。使用1N HCl水溶液将反应溶液调节至pH＝3，并随后用EtOAc(15ml)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至5％MeOH/DCM)以得到278mg(82％)的白色固体。
步骤4：(9H-芴-9-基)甲基4-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸酯的合成
将2-(4-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-2-氧代哌嗪-1-基)乙酸(80mg，0.22mmol)、((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3，85mg，0.17mmol)、TCFH(145mg，0.52mmol)和NMI(0.068ml，0.86mmol)混悬在ACN:THF＝1:1(1.2ml)中，并随后在室温下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(10ml)，随后用EtOAc(15ml)萃取。将有机层用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(3％至70％EtOAc/己烷)以得到156mg(定量)的象牙色固体。
步骤5：((1-(5-((2-氯-3-(2-(2-氧代哌嗪-1-基)乙酰氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将((9H-芴-9-基)甲基4-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸酯(156mg，0.17mmol)溶解在DMF(0.8ml)中。然后，缓慢添加哌啶(0.34ml，3.45mmol)，并随后在室温下搅拌2小时。向反应溶液添加蒸馏水(10ml)，随后用EtOAc(20ml)萃取。将有机层用盐水(10ml×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(胺-二氧化硅，0％至4％MeOH/DCM)以获得64.5mg(57％)的象牙色固体。
步骤6：((1-(5-((2-氯-3-(2-(4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)-2-氧代哌嗪-1-基)乙酰氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将((1-(5-((2-氯-3-(2-(2-氧代哌嗪-1-基)乙酰氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(20mg，0.03mmol)和(2S,4R)-N-(2-(2-氯乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体10，25mg，0.04mmol)混悬在DMF(0.01ml)中。然后，添加碳酸钾(14mg，0.10mmol)和碘化钾(11mg，0.07mmol)，并在70℃下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(7ml)，随后用EtOAc(10ml)萃取。将有机层用盐水(7ml×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至5％ MeOH/DCM)以得到27mg(70％)的象牙色固体。
步骤7：(2S,4R)-N-(2-(2-(4-(2-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)-3-氧代哌嗪-1-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将((1-(5-((2-氯-3-(2-(4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)-2-氧代哌嗪-1-基)乙酰氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(27mg，0.02mmol)混悬在DCM(2.3ml)中。添加在二氧六环中4M HCl(0.06ml)，并在室温下搅拌1小时。通过添加饱和NaHCO3水溶液(5ml)将反应溶液中和，随后用DCM(10ml×2)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(胺-二氧化硅，0％至3％ MeOH/DCM)以获得15mg(61％)的象牙色固体。
实施例77.(2S,4R)-N-(2-(3-(4-(2-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)-3-氧代哌嗪-1-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用(2S,4R)-N-(2-(3-氯丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体11)代替(2S,4R)-N-(2-(2-氯乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体10)，以与实施例76中相同的方式合成实施例77。
实施例78.(2S,4R)-N-(2-(4-(4-(2-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)-3-氧代哌嗪-1-基)丁氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用(2S,4R)-N-(2-(4-氯丁氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体12)代替(2S,4R)-N-(2-(2-氯乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体10)，以与实施例76中相同的方式合成实施例78。
实施例79.(2S,4R)-N-(2-(2-(4-(2-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)-3-氧代哌嗪-1-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(环丙烷甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用(2S,4R)-N-(2-(2-氯乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(环丙烷甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体15)代替(2S,4R)-N-(2-(2-氯乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体10)，以与实施例76中相同的方式合成实施例79。
实施例80.(2S,4R)-N-(2-(3-(4-(2-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-2-氧代乙基)-3-氧代哌嗪-1-基)丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(环丙烷甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
使用(2S,4R)-N-(2-(3-氯丙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(环丙烷甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体16)代替(2S,4R)-N-(2-(2-氯乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体10)，以与实施例76中相同的方式合成实施例80。
实施例81.N-(3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-5-(4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-基)吡啶酰胺
步骤1：5-氟吡啶甲酸的合成
将5-氟吡啶甲酸甲酯(500mg，3.22mmol)混悬在THF(5ml)中。然后，添加2N NaOH水溶液(4.8ml，9.67mmol)，并在室温下搅拌1小时。使用1N HCl水溶液将反应溶液调节至pH＝2，并随后用EtOAc(20ml×2)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得320mg(70％)的白色固体。
步骤2：((1-(5-((2-氯-3-(5-氟吡啶酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将5-氟吡啶甲酸(30mg，0.214mmol)混悬在DCM(3ml)中。向其中添加草酰氯(0.05ml，0.56mmol)和DMF(3滴)，随后在室温下搅拌1小时。将通过浓缩反应溶液获得的黄色油状物溶解在DCM(1ml)中，并随后添加((1-(5-((3-氨基-2-氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3，50mg，0.11mmol)和DIPEA(0.9ml，0.53mmol)，并在室温下搅拌1小时。向反应溶液添加蒸馏水(10ml)，用DCM(10ml×2)萃取，将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。通过进行MPLC(0％至100％ EtOAc/己烷)获得的剩余物作为33mg(53％)的黄色固体来获得。
步骤3：((1-(5-((2-氯-3-(5-(4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-基)吡啶酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将((1-(5-((2-氯-3-(5-氟吡啶酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(32mg，0.06mmol)和(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-(2-(哌嗪-1-基)乙氧基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(39mg，0.06mmol)混悬在DMSO(0.2ml)中。添加DIPEA(0.03ml，0.17mmol)，并在75℃下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(10ml)，随后用EtOAc(10ml×2)萃取。将有机层用盐水(10ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至5％MeOH/DCM)以得到36mg(54％)的象牙色固体。
步骤4：N-(3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-5-(4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-基)吡啶酰胺的合成
将((1-(5-((2-氯-3-(5-(4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-基)吡啶酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(33mg，0.03mmol)混悬在DCM(2ml)中。然后，添加在二氧六环中的4M HCl(0.3ml)，并在室温下搅拌1小时。向反应溶液添加饱和NaHCO3水溶液(10ml)，随后用10％ MeOH/DCM(10ml×2)萃取。将有机层用盐水(10ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(胺-二氧化硅，0％至5％ MeOH/DCM)以获得23mg(77％)的象牙色固体。
实施例82.N-(3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-6-(4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-基)烟酰胺
使用6-氟吡啶甲酸甲酯代替5-氟吡啶甲酸甲酯，以与实施例81中相同的方式合成实施例82。
实施例83.N-(3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-5-(4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-基)嘧啶-2-甲酰胺
使用5-氯嘧啶-2-羧酸代替5-氟吡啶甲酸，以与实施例81中相同的方式合成实施例84。
实施例84.N-(3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-2-(4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲酰胺
使用2-氯嘧啶-5-羧酸代替5-氟吡啶甲酸，以与实施例81中相同的方式合成实施例84。
实施例85.N-(3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-6-(4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-基)哒嗪-3-甲酰胺
/>
使用6-氯哒嗪-3-羧酸甲酯代替5-氟吡啶甲酸甲酯，以与实施例81中相同的方式合成实施例85。
实施例86.N-(3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-2-(4-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-基)嘧啶-4-甲酰胺
使用2-氯嘧啶-4-羧酸代替5-氟吡啶甲酸，以与实施例81中相同的方式合成实施例86。
实施例87.N-(3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-5-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)嘧啶-2-甲酰胺
分别使用5-氯嘧啶-2-羧酸和(2S,4R)-N-(2-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺代替5-氟吡啶甲酸和(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-(2-(哌嗪-1-基)乙氧基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺，以与实施例81中相同的方式合成实施例87。
实施例88.N-(3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-6-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)哒嗪-3-甲酰胺
分别使用6-氯哒嗪-3-羧酸甲酯和(2S,4R)-N-(2-((7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺代替5-氟吡啶甲酸甲酯和(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-(2-(哌嗪-1-基)乙氧基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺，以与实施例81中相同的方式合成实施例88。
实施例89.2-(4-(4-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁基)哌啶-1-基)-N-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤1：(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(中间体7，50mg，0.09mmol)和(2-溴乙基)氨基甲酸叔丁酯(122mg，0.56mmol)混悬在DMF(0.2ml)中。添加碳酸钾(39mg，0.28mmol)，并随后在70℃下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(10ml)，随后用EtOAc(5ml×2)萃取。将有机层用盐水(5ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至20％MeOH/DCM)以得到73mg(定量)的象牙色固体。
步骤2：(2S,4R)-N-(2-(2-氨基乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(73mg，0.11mmol)混悬在DCM(3ml)中。然后，添加在二氧六环中的4M HCl(1ml)，并随后在室温下搅拌4小时。向反应溶液添加饱和NaHCO3水溶液(5ml)，随后用10％ MeOH/DCM(5ml×2)萃取。将有机层用盐水(5ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(胺-二氧化硅，0％至5％ MeOH/DCM)以获得22mg(35％)的白色固体。
步骤3：2-(4-(4-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁基)哌啶-1-基)嘧啶-5-羧酸甲酯的合成
将((1-(5-((2-氯-3-(3-(哌啶-4-基)丁酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.16mmol)、2-氯嘧啶-5-羧酸甲酯(28mg，0.16mmol)和DIPEA(0.08ml，0.48mmol)混悬在DCM(0.6ml)中，并随后在室温下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(10ml)，随后用EtOAc(5ml×2)萃取。将有机层用盐水(5ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至100％ EtOAc/己烷)以得到111mg(91％)的象牙色固体。
步骤4：2-(4-(4-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁基)哌啶-1-基)嘧啶-5-羧酸的合成
将2-(4-(4-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁基)哌啶-1-基)嘧啶-5-羧酸甲酯(110mg，0.13mmol)和氢氧化锂(20mg，0.53mmol)混悬在水:THF＝1:1(0.8ml)中，并随后在60℃下搅拌5小时。使用1N HCl水溶液将反应溶液调节至pH＝2，并用EtOAc(10ml×2)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得92mg(85％)的象牙色固体。
步骤5：((1-(5-((2-氯-3-(4-(1-(5-((2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)氨基甲酰基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)丁酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将2-(4-(4-((3-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁基)哌啶-1-基)嘧啶-5-羧酸(31mg，0.04mmol)、(2S,4R)-N-(2-(2-氨基乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(20mg，0.03mmol)、EDCI(8mg，0.04mmol)、HOBt(6mg，0.04mmol)和DIPEA(0.03ml，0.17mmol)混悬在DMF(0.1ml)中，并随后在室温下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(10ml)，随后用EtOAc(5ml×2)萃取。将有机层用盐水(5ml×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(10％ MeOH/DCM)以得到36mg(68％)的象牙色固体。
步骤6：2-(4-(4-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁基)哌啶-1-基)-N-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)嘧啶-5-甲酰胺的合成
将((1-(5-((2-氯-3-(4-(1-(5-((2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙基)氨基甲酰基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)丁酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(34.4mg，0.03mmol)混悬在DCM(1ml)中。然后，添加在二氧六环中的4M HCl(0.3ml)，并在室温下搅拌4小时。向反应溶液添加饱和NaHCO3水溶液(5ml)，随后用10％ MeOH/DCM(5ml×2)萃取。将有机层用盐水(5ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(胺-二氧化硅，0％至5％ MeOH/DCM)以获得12mg(39％)的象牙色固体。
实施例90.(2S,4R)-N-(2-(2-((2-(4-(4-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺
步骤1：((1-(5-((2-氯-3-(4-(1-(5-羟基嘧啶-2-基)哌啶-4-基)丁酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将((1-(5-((2-氯-3-(3-(哌啶-4-基)丁酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(65mg，0.11mmol)和2-氯-5-羟基嘧啶(21mg，0.16mmol)混悬在DMF(0.3ml)中。添加碳酸钾(34mg，0.24mmol)，并在180℃下在微波中搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(10ml)，随后用EtOAc(5ml×2)萃取。将有机层用盐水(5ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至100％ EtOAc/己烷)以得到20mg(27％)的象牙色固体。
步骤2：((1-(5-((2-氯-3-(4-(1-(5-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)丁酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将((1-(5-((2-氯-3-(4-(1-(5-羟基嘧啶-2-基)哌啶-4-基)丁酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(20mg，0.03mmol)和(2S,4R)-N-(2-(2-氯乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(中间体10，20mg，0.03mmol)混悬在DMF(0.05ml)中。添加碳酸钾(12mg，0.08mmol)和碘化钾(9mg，0.06mmol)，并随后在70℃下搅拌16小时。向反应溶液添加蒸馏水(10ml)，随后用EtOAc(5ml×2)萃取。将有机层用盐水(5ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受MPLC(0％至100％ EtOAc/己烷)以得到35mg(98％)的象牙色固体。
步骤3：(2S,4R)-N-(2-(2-((2-(4-(4-((3-((5-(4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将((1-(5-((2-氯-3-(4-(1-(5-(2-(2-(((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)丁酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(33mg，0.03mmol)混悬在DCM(1ml)中。然后，添加在二氧六环中的4M HCl(0.3ml)，并在室温下搅拌4小时。向反应溶液添加饱和NaHCO3水溶液(5ml)，随后用10％MeOH/DCM(5ml×2)萃取。将有机层用盐水(5ml×2)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以获得剩余物。使获得的剩余物经受PTLC(DCM:MeOH:NH4OH＝15:1:0.1)以获得7.3mg(24％)的象牙色固体。
实施例1至90中获得的化合物的NMR和质谱结果汇总在下表3中。
[表3]
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本发明的化合物的评价
实验例1：KYSE-520细胞中SHP2蛋白降解的测量
用合成的实施例化合物处理KYSE-520细胞，并使用western印迹检测来测量细胞中存在的SHP2蛋白的量。使用KYSE-520细胞进行的实验的方案如下：
[培养]将重悬在含有5％ FBS(Hyclone，SV30207.02)和1％青霉素-链霉素(Welgene，LS202-02)的RPMI1640培养基(Hyclone，SH30027.01)中的KYSE-520细胞以2.5×105个/孔的密度以各2ml的量接种在6孔板中，并孵育2天。
[化合物处理]用最终浓度为0.1、1、10mM或0.001、0.01、0.1mM的化合物对细胞进行处理，所述最终浓度通过用DMSO以1/10的增量(3mL+27mL DMSO)连续稀释10mM储备液来制备。在24小时之后，收获细胞。对于阴性对照组，添加以1/10稀释至培养基的DMSO(3mLDMSO+27mL培养基)。
[细胞裂解和蛋白质定量]如下制备裂解缓冲液：每孔添加60mL的RIPA缓冲液(Biosesang，RC2038-050-00)+0.5mM PMSF(SIGMA，P7626)+1×蛋白酶/磷酸酶抑制剂(Cellsignaling，5872S)，并在冰上放置30分钟(分别在0分钟和30分钟涡旋)。在声处理过程(10秒脉冲，30秒静置，5个循环，70％扩增)之后，进行离心(15000g，15分钟，4℃)，并随后仅将上清液取出并转移至新的微管。将样品在96孔板中用RIPA缓冲液1/4稀释，并与BCA蛋白测定试剂盒(iNtRON，21071)中的A:B＝50:1混合。将各200ml的混合物在37℃下放置30分钟，并冷却10分钟。然后，用来自BioTek的SYNERGY H1微板阅读仪在562nm处测量吸光度。在通过用测量值定量蛋白质来制备样品之后，在70℃下进行煮沸10分钟。此时，根据待使用的凝胶，所使用的样品缓冲液是NuPAGE或Bolt 4×样品缓冲液(Invitrogen)与各10×样品还原剂的混合物，并且使用RIPA缓冲液用于蛋白质稀释。
[Western印迹检测方法]将相同量的样品加载到NuPAGE或Bolt Bis-tris 4％至12％梯度凝胶上并运行(200V，35分钟)。用Trans-blot Turbo(BIO-RAD)(1.3A恒定，25V限制，15分钟)将其转移至0.2mm NC膜。在室温下用脱脂乳或Intercept封闭缓冲液(LI-COR，927-60001):0.1％ TBST＝1:1进行封闭1小时。将抗SHPTP2小鼠(5％脱脂乳/TBST中1:500，尺寸：70kDa，Santacruz sc-7384)在4℃下孵育过夜，并将抗GAPDH兔(5％ BSA/0.2％ TBST中1:2,000，尺寸：37kDa，CST#2118)在室温下孵育1小时30分钟或3小时。将其用0.2％ TBST洗涤缓冲液洗涤3次，每次5分钟。将二抗抗兔IgG(5％脱脂乳/0.2％ TBST中1:5,000，CST)和680RD山羊抗兔IgG二抗(5％ BSA/0.2％ TBST中1:10,000，LI-COR 926-68071)在摇杆(rocker)上在室温下孵育45分钟。将其用0.2％ TBST洗涤缓冲液洗涤5次，每次5分钟，并用LI-COR’sOdyssey检测。此时，使用SuperSignal West Pico PLUS化学发光底物检测SHPTP2，并且还检测管家基因。
实验例2：MV-4-11细胞中SHP2蛋白降解的测量
用合成的实施例化合物处理MV-4-11细胞，并使用western印迹检测来测量细胞中存在的SHP2蛋白的量。使用MV-4-11细胞进行的实验的方案如下：
[培养]将重悬在含有5％ FBS(Hyclone，SV30207.02)和1％青霉素-链霉素(Welgene，LS202-02)的IMDM培养基(Hyclone，SH30228.01)中的MV-4-11细胞以1×106个/mL/孔的密度以各1ml的量接种在12孔板中。
[化合物处理]如下处理12孔板：用最终浓度为0.01、0.1、1mM或0.001、0.01、0.1mM的化合物对细胞进行处理，所述最终浓度通过用DMSO以1/100的增量(3mL+297mL DMSO)连续稀释10mM储备液来制备。在24小时之后，收获细胞。对于阴性对照组，添加以1/100稀释至培养基的DMSO(3mL DMSO+297mL培养基)。
[收获]通过用1mL移液管移液来将每个孔收集在1.5mL微管中，并离心(500g，5分钟，4℃)。将上清液除去。将其用PBS洗涤，并随后再次离心(500g，5分钟，4℃)。此后，将上清液除去以制备沉淀。
[细胞裂解和样品制备]如下制备裂解缓冲液：每孔添加50mL的RIPA缓冲液(Biosesang，RC2038-050-00)+0.5mM PMSF(SIGMA，P7626)+1×蛋白酶/磷酸酶抑制剂(Cellsignaling，5872S)，并在冰上放置30分钟(分别在0分钟和30分钟涡旋)。在声处理过程(10秒脉冲，30秒静置，5个循环，70％扩增)之后，进行离心(15000g，15分钟，4℃)，并随后仅将上清液取出并转移至微管。将样品在96孔板中用RIPA缓冲液1/4稀释，并与BCA蛋白测定试剂盒(iNtRON，21071)中的A:B＝50:1混合。将各200ml混合物在37℃下放置30分钟，并冷却10分钟。然后，用来自BioTek的SYNERGY H1微板阅读仪在562nm处测量吸光度。在通过用测量值定量蛋白质来制备样品之后，在70℃下进行煮沸10分钟。此时，根据待使用的凝胶，所使用的样品缓冲液是NuPAGE或Bolt 4×样品缓冲液(Invitrogen)与各10×样品还原剂的混合物，并且使用RIPA缓冲液用于蛋白质稀释。
[Western印迹检测方法]将相同量的样品加载到NuPAGE或Bolt Bis-tris 4％至12％梯度凝胶上并运行(200V，35分钟)。用Trans-blot Turbo(BIO-RAD)(1.3A恒定，25V限制，15分钟)将其转移至0.2mm NC膜。在室温下用脱脂乳或Intercept封闭缓冲液(LI-COR，927-60001):0.1％ TBST＝1:1进行封闭1小时。将抗SHPTP2小鼠(2％ BSA/0.2％TBST中1:500，尺寸：70kDa，Santacruz sc-7384)在4℃下孵育过夜，并将抗GAPDH兔(2％ BSA/0.2％TBST中1:2,000，尺寸：37kDa，CST#2118)在室温下孵育1小时30分钟或3小时。将其用0.2％TBST洗涤缓冲液洗涤3次，每次5分钟。添加二抗抗兔IgG(2％ BSA/0.2％ TBST中1:5,000，CST)、680RD山羊抗兔IgG二抗(2％ BSA/0.2％ TBST中1:10,000，LI-COR 926-68071)并在摇杆上在室温下孵育45分钟。将其用0.2％ TBST洗涤缓冲液洗涤5次，每次5分钟，并用LI-COR’s Odyssey检测。此时，使用SuperSignal West Pico PLUS化学发光底物检测SHPTP2，并且还检测管家基因。/>
通过本发明的化合物降解SHP2蛋白的结果汇总在下表4中。在下表4的结果中，化合物1至7、13至19和21至26是在KYSE-520细胞中的结果，并且其他化合物是在MV-4-11细胞中的结果。
[表4]
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如表4中所示，根据本发明的化合物表现出在SHP2蛋白降解方面的优异活性。
特别地，本发明的化合物20、29至45、50、52至58、60至64、66至68、76至80、和83至85表现出优于具有类似结构的其他化合物的SHP2蛋白降解活性。本发明的化合物29、31、33、36至38、43、50、52至58、61至63、66、68、76至80、和83显示出比其他化合物显著更优的SHP2蛋白降解活性。
另一方面，当在本发明化学式1中的部分中包含的丙二酰胺的两个羰基之间存在的碳上有两个取代基或环丙基取代时(例如，化合物46、47、48、49、59)，降解活性略有降低。因此，在本发明的一个甚至更优选的实施方案中，排除了在本发明化学式1中的/>部分中包含的丙二酰胺结构的两个羰基之间存在的碳上具有两个取代基或环丙基取代的化合物。/>

Claims (13)

1.化学式1化合物或其可药用盐：
[化学式1]
在所述化学式1中
R1a、R1b、R1c和R1d各自独立地是H或C1-6烷基，
R2是H、C1-6烷基或-NH2，
R3是H、C1-6烷基或C1-6羟烷基，
R4是H、C1-6烷基、卤素或C1-6卤代烷基，
R5是H、C1-6烷基、C1-6炔基、卤素、-CN或杂芳基，其中所述杂芳基中的一个或更多个氢任选地被C1-6烷基、卤素或C1-3卤代烷基取代，
R6是-NHC(O)R7或杂芳基，其中所述杂芳基中的一个或更多个氢任选地被C1-6烷基、卤素或C1-3卤代烷基取代，
R7是C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-10环烷基或杂环，其中所述环烷基和杂环中的一个或更多个氢各自独立且任选地被C1-6烷基、卤素或-CN取代，
X是CH或N，
n1和n2各自独立地是0、1或2，
m是0或1，
L是以下化学式2，
[化学式2]
在所述化学式2中，
A1、A2和A3各自独立地是直接键、-O-、-N(R9)--C(O)-、-C(O)N(R9)-或-N(R9)C(O)-，
B1和B2各自独立地是直接键、C3-10环烷基、杂环、芳基或杂芳基，其中所述环烷基、杂环、芳基或杂芳基中的一个或更多个氢任选地被C1-6烷基、卤素、C1-6卤代烷基、-OH、＝O或-CO2R9取代，
R8和R8’各自独立地是H或C1-6烷基，或者R8和R8’彼此连接以形成C3-10环烷基，
R9是H或C1-6烷基，
q1、q2、q3、q4和q5各自独立地是0至10的整数。
2.权利要求1所述的化合物或其可药用盐，在所述化学式1中，
R1a、R1b、R1c和R1d各自独立地是H或C1-6烷基，
R2是H、C1-6烷基或-NH2，
R3是H、C1-6烷基或C1-6羟烷基，
R4是H、C1-6烷基或卤素，
R5是杂芳基，其中所述杂芳基中的一个或更多个氢任选地被C1-6烷基或卤素取代，
R6是-NHC(O)R7，
R7是C1-6烷基或C3-10环烷基，其中所述环烷基中的一个或更多个氢任选地被C1-6烷基、卤素或-CN取代，
X是CH或N，
n1和n2各自独立地是0或1，
m是0或1，
L是以下化学式2，
[化学式2]
在所述化学式2中，
A1、A2和A3各自独立地是直接键、-O-、-N(R9)--C(O)-、-C(O)N(R9)-或-N(R9)C(O)-，
B1和B2各自独立地是直接键、杂环或杂芳基，其中所述杂环或杂芳基中的一个或更多个氢任选地被C1-6烷基、卤素、-OH、＝O或-CO2R9取代，
R8和R8’各自独立地是H或C1-6烷基，或者R8和R8’彼此连接以形成C3-10环烷基，
R9是H或C1-6烷基，
q1、q2、q3、q4和q5各自独立地是0至10的整数。
3.权利要求1所述的化合物或其可药用盐，在所述化学式1中，
R1a、R1b、R1c和R1d各自独立地是H或C1-6烷基，
R2是H或-NH2，
R3是H，
R4是H或卤素，
R5是噻唑，其中所述噻唑中的一个或更多个氢任选地被C1-6烷基取代，
R6是-NHC(O)R7，
R7是C1-6烷基或环丙基，其中所述环丙基中的一个或更多个氢任选地被卤素或-CN取代，
X是CH，
n1和n2各自独立地是0或1，
m是0或1，
L是以下化学式2，
[化学式2]
在所述化学式2中，
A1、A2和A3各自独立地是直接键、-O-、-N(R9)--C(O)-、-C(O)N(R9)-或-N(R9)C(O)-，
B1和B2各自独立地是直接键、氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、哌嗪、氮杂螺[3.5]壬烷、二氮杂双环[3.2.1]辛烷、吡啶、嘧啶、哒嗪或吡嗪，其中所述氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、哌嗪、氮杂螺[3.5]壬烷、二氮杂双环[3.2.1]辛烷、吡啶、嘧啶、哒嗪或吡嗪中的一个或更多个氢任选地被C1-6烷基、-OH、＝O或-CO2R9取代，
B1和B2中的至少一者是氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、哌嗪、氮杂螺[3.5]壬烷、二氮杂双环[3.2.1]辛烷、吡啶、嘧啶、哒嗪或吡嗪，
R8和R8’各自独立地是H或C1-6烷基，或者R8和R8’彼此连接以形成C3-10环烷基，
R9是H或C1-6烷基，
q1、q2、q3、q4和q5各自独立地是0至10的整数。
4.权利要求1所述的化合物或其可药用盐，其中L是以下中的任一者：
5.权利要求1所述的化合物或其可药用盐，其中所述化合物是以下化合物中的任一种：
/>
/>
/>
/>
/>
6.权利要求5所述的化合物或其可药用盐，其中所述化合物是以下化合物中的任一种：
/>
/>
/>
/>
/>
7.组合物，其包含权利要求1至6中任一项所述的化合物或其可药用盐、以及可药用载体。
8.药物组合物，其用于降解或抑制含Src同源2结构域的磷酸酶(SHP2)，所述药物组合物包含权利要求1至6中任一项所述的化合物或其可药用盐作为有效药剂。
9.权利要求8所述的药物组合物，其中所述药物组合物用于治疗或预防癌症。
10.权利要求9所述的药物组合物，其中所述癌症是白血病、淋巴瘤、肺癌、头颈癌、食管癌、胃癌、结直肠癌、胰腺癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、膀胱癌、黑素瘤、神经母细胞瘤、胶质瘤或肉瘤。
11.用于治疗或预防含Src同源2结构域的磷酸酶相关疾病的方法，其包括向有此需要的对象施用治疗有效量的权利要求1至6中任一项所述的化合物或其可药用盐。
12.权利要求11所述的方法，其中所述含Src同源2结构域的磷酸酶相关疾病是癌症。
13.权利要求12所述的方法，其中所述癌症是白血病、淋巴瘤、肺癌、头颈癌、食管癌、胃癌、结直肠癌、胰腺癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、膀胱癌、黑素瘤、神经母细胞瘤、胶质瘤或肉瘤。
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