CN117860607A - 一种协同抗衰的多肽组合物及其应用 - Google Patents
一种协同抗衰的多肽组合物及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于化妆品技术领域，公开了一种协同抗衰的多肽组合物及其应用，该多肽组合物包括：组合肽A、肌肽和五肽‑34三氟乙酸盐，其中，所述组合肽A包括β‑丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酸苄胺、三肽‑1和乙酰基四肽‑9。本发明提供的多肽组合物通过合理的比例将五种多肽进行组合，使得彼此之间产生了协同增效的效果，能显著地增加胶原蛋白含量，促进细胞ATP合成，提高皮肤代谢，从而实现优异的抗衰效果。
Description
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种协同抗衰的多肽组合物及其应用。
背景技术
面部特征是人类辨认他人所依据的重要特征，因此面部变化对人容貌有着举足轻重的影响，人类与面部衰老的抗争几乎与人类的历史一样源远流长。促使皮肤衰老的因素有很多，如随着年龄的增长，人体皮肤自身逐渐老化，皮下脂肪逐渐萎缩与增生，骨性结构改变，面部皮肤在重力作用下出现静态性改变，如下垂、皱纹等。
皮肤老化一方面跟支撑皮肤组织的胶原蛋白息息相关。在人体皮肤中胶原蛋白约占总氮含量的75％，其中I型胶原蛋白是主要的原纤维胶原蛋白，因为它可以形成具有高抗拉强度和高稳定性的不溶性纤维。I型胶原蛋白的含量与皮肤老化具有紧密联系，相比于正常的成纤维细胞，在老化的成纤维细胞中能观察到I型胶原蛋白的含量大幅减少。皮肤老化另一方面与ATP合成量相关。ATP含量会影响细胞代谢。皮肤细胞代谢障碍也会引起皮肤老化。皮肤的表皮细胞由基底层代谢到角质层约需要28天，如细胞的代谢周期延长，角质层在表面停留时间过久，将造成皮肤老化、粗糙、干燥，缺少水分和光泽。ATP合成量的增加代表着细胞代谢能力的提升，而细胞代谢能力的提升证明了细胞具有良好的增殖与分化活力，皮肤细胞的代谢能力提升能促进皮肤角质层更新，从而表现出较好的抗衰老能力。头皮衰老的机理与面部或身体皮肤类似，同样受胶原蛋白含量等因素的影响。
目前具有抗衰功效的原料种类繁多，其中多肽类的活性原料表现较为亮眼。活性多肽能够控制或调节皮肤老化进程，保护受损皮肤，延缓皮肤老化，保持正常皮肤的结构和功能，维持机体的正常生理活动和代谢。
但是，活性多肽通常都具有较高的特异性，其作用的靶点较为固定，而皮肤衰老涉及多种因素，针对不同因素可能需要联合使用多种作用靶点不同的活性多肽。然而不同活性多肽之间可能存在多种相互作用关系，联合使用多肽并不一定能具有协同增效的作用。目前如何联合使用活性多肽提高抗衰效果仍是本领域的热点研究问题之一。
发明内容
为了实现联合多肽协同增效共同抗衰，本发明提供一种协同抗衰的多肽组合物及其应用。
第一方面，本发明提供一种协同抗衰的多肽组合物，所述多肽组合物包含组合肽A、肌肽和五肽-34三氟乙酸盐。
可选地，所述组合肽A包括以下组分：β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酸苄胺、三肽-1和乙酰基四肽-9。
优选地，在所述组合肽A中，所述β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酸苄胺、所述三肽-1和所述乙酰基四肽-9的质量比为4∶1∶0.1。
可选地，所述组合肽A、所述肌肽和所述五肽-34三氟乙酸盐的质量比为(3～4)∶1∶(2～3)。
可选地，所述组合肽A、所述肌肽和所述五肽-34三氟乙酸盐的质量比分别为：3∶1∶2、3∶1∶3、4∶1∶2、4∶1∶3。
可选地，所述组合肽A、所述肌肽和所述五肽-34三氟乙酸盐的质量比为4∶1∶3或3∶1∶2。
可选地，所述组合肽A、所述肌肽和所述五肽-34三氟乙酸盐的质量比为4∶1∶3。
第二方面，本发明提供一种用于抗衰老的化妆品，所述化妆品中包含第一个方面所述的多肽组合物。
可选地，所述多肽组合物在化妆品中的添加量为0.0001-30wt%。
可选地，所述化妆品的剂型包括水剂、乳液剂、膏霜剂、凝胶剂、油剂、粉剂、片剂、泥剂、气雾剂、贴剂、膜剂或纳米制剂。
第三方面，本发明提供第一个方面所述的多肽组合物在抗衰老领域的应用，所述抗衰老包括增加胶原蛋白含量、提高细胞ATP含量或提高皮肤代谢。
本发明相对于现有技术所取得的有益效果包括：
本发明提供的多肽组合物通过联用五种特定多肽，使得彼此之间产生了协同增效的效果，能显著地增加胶原蛋白含量，促进细胞ATP合成，提高皮肤代谢，从而实现优异的抗衰效果。
附图说明
图1是胶原蛋白I含量测试1的结果图。
图2是胶原蛋白I含量测试2的结果图。
图3是ATP含量测试1的结果图。
图4是ATP含量测试2的结果图。
图5是胶原蛋白III含量测试结果图。
图6是MMP-1表达抑制测试结果图。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面结合实施例及附图对发明作详细的说明，然而，应当理解的是，这些实施例及附图仅用作说明目的，并且不旨在限制本发明的范围。
β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酸苄胺能提高细胞活性，促进胶原蛋白合成，修护老化细胞，增加细胞黏附能力，降低弹性蛋白酶活性，从而提高皮肤弹性和紧致度。
乙酰基四肽-9具有促进I型胶原蛋白表达，增加基膜聚糖生成的效果，能补充胶原蛋白、紧致皮肤、增加皮肤弹性。
肌肽能促进细胞活性，修复光老化，降低晚期糖基化终末产物(AGEs)含量，清除氧自由基，保护胶原，实现肌肤重塑效果。
三肽-1能促进真皮修护，保护胶原，促进I型胶原蛋白产生。
五肽-34三氟乙酸盐(Pentapeptide-34Trifluoroacetate)，也被称为PeptideQ10，能修护光老化细胞，降低AGEs含量，促进SOD(超氧化物歧化酶)表达，抗氧化，并提高细胞ATP含量。
保持总浓度不变，配制了组合物1～15，不同组合物中各多肽的测试浓度如下(单位均为ppm)：
注：″/″表示该组合物中不合该原料。
胶原蛋白I含量测试1
以组合物1-7作为实验组测试样品，进行胶原蛋白I含量测试，测试方法如下：
1)取处于对数生长期的人皮肤成纤维细胞(HSF)，加入0.25％胰蛋白酶消化液，消化使贴壁细胞脱落，计数1～4×105个/mL，制成细胞悬液；
2)细胞接种于6孔板，分组加样。正常对照组加200μL PBS，补充DMEM培养基至800μL，不进行UV照射；模型组和实验组，加入适量PBS反复洗至无色后，加入200μL PBS，暴露于UVB灯下照射15min；照射15min后，弃去PBS，模型组加入PBS溶液和培养基至800μL，实验组加入培养基和测试样品至800μL。正常对照组、模型组、实验组继续于37℃、5％CO2培养箱中孵育48h。
3)培养结束后，离心取上清，加入RIPA裂解液，用涡旋仪震匀3次，30s/次，间隔3min，12000rpm离心10min，吸取上清液，并按照胶原蛋白I ELISA操作说明书进行操作。15min内用酶标仪在450nm处测量各孔的OD值，计算胶原蛋白I的含量，结果见图1。
图1表明，与模型组相比，组合物1-组合物7在100ppm浓度下均能明显提高胶原蛋白I的表达。在相同浓度条件下，促胶原蛋白I表达的效果由强到弱依次是：组合物7、组合物1、组合物6、组合物5、组合物3、组合物4、组合物2。
上述结果证明了肌肽和五肽-34三氟乙酸盐之间存在协同作用，两者联用相比于施用任一单独的多肽能取得更优的促胶原蛋白I表达的效果。然而，组合肽A与肌肽联用、组合肽A与五肽-34三氟乙酸盐联用均存在一定的拮抗作用。组合肽A与肌肽联用时，或组合肽A与五肽-34三氟乙酸盐联用时，其所具有的促胶原蛋白I表达的效果弱于单独施用组合肽A的效果。组合肽A、肌肽和五肽-34三氟乙酸盐三者联用时，又产生了协同增效的作用，三者联用获得了最优的促胶原蛋白I表达的效果。
应当理解，并非任何多肽的联用均会产生积极的协同增效的效果。由于多肽分子的性质各异，机制复杂，多种多肽联用时往往难以预料其将产生拮抗作用或是协同作用。本发明已通过实验证实这一点。
胶原蛋白I含量测试2
以组合物7-11作为实验组测试样品，进行胶原蛋白I含量测试，测试方法如下：
1)取处于对数生长期的人皮肤成纤维细胞(HSF)，加入0.25％胰蛋白酶消化液，消化使贴壁细胞脱落，计数1～4×105个/mL，制成细胞悬液；
2)细胞接种于6孔板，分组加样。空白对照组加200μL PBS，补充DMEM培养基至800μL，不进行UV照射；模型组和实验组，加入适量PBS反复洗至无色后，加入200μL PBS，暴露于UVB灯下照射15min(辐照强度：80-90uW/cm3，辐照剂量：40mJ/cm2)；照射15min后，弃去PBS，模型组加入PBS溶液和培养基至800μL，实验组加入培养基和测试样品至800μL。空白对照组、模型组、实验组继续于37℃、5％CO2培养箱中孵育48h。
3)培养结束后，离心取上清，加入RIPA裂解液，用涡旋仪震匀3次，30s/次，间隔3min，12000rpm离心10min，吸取上清液，并按照胶原蛋白I ELISA操作说明书进行操作。15min内用酶标仪在450nm处测量各孔的OD值，计算胶原蛋白I的含量，结果见图2。
图2结果显示，与模型组相比，组合物7、组合物8在100ppm浓度下均能明显提高胶原蛋白I的表达，而组合物10和组合物11在100ppm浓度下未表现出提高胶原蛋白I表达的效果。
上述结果证明了在联用多种多肽时，多肽之间的用量比将影响组合多肽的活性，当组合肽A、肌肽和五肽-34三氟乙酸盐的质量比为(3～4)∶1∶(2～3)时，组合多肽具有显著的促进胶原蛋白I合成的作用。
ATP含量测试1
以组合物1-7作为实验组测试样品，进行ATP含量测试，测试方法如下：
1)取处于指数生长期状态良好的人皮肤成纤维细胞(HSF)一瓶，加入0.25％胰蛋白酶消化液，消化使贴壁细胞脱落，计数1～4×105个/mL，制成细胞悬液。
2)将孔内的完全培养基吸出，control组加入完全培养基，实验组加入完全培养基和测试样品。
3)培养结束，收集细胞，按照ATP试剂盒检测说明书进行操作。结果见图3。
图3的结果显示，与control组相比，组合物1-7均能明显提高ATP的含量，促进细胞ATP的合成。在相同浓度条件下，促进细胞ATP合成的效果由强到弱依次是：组合物7、组合物4或组合物2、组合物6、组合物1、组合物3、组合物5。
上述结果证明，对于促ATP合成的效果，肌肽和五肽-34三氟乙酸盐之间存在拮抗作用，相对于单独施用肌肽，两者联用后，其促ATP合成的量出现了明显的下降。同样，组合肽A与五肽-34三氟乙酸盐之间同样存在拮抗作用，组合肽A与五肽-34三氟乙酸盐联用时，其所具有的促ATP合成的效果弱于单独施用组合肽A的效果或单独施用五肽-34三氟乙酸盐的效果。当组合肽A、肌肽和五肽-34三氟乙酸盐三者联用时，又产生了协同增效的作用，三者联用获得了最优的促ATP合成的效果。
ATP含量测试2
以组合物7-8和组合物15作为实验组测试样品，进行ATP含量测试，测试方法如下：
1)取处于指数生长期状态良好的人皮肤成纤维细胞(HSF)一瓶，加入0.25％胰蛋白酶消化液，消化使贴壁细胞脱落，计数1～4×105个/mL，制成细胞悬液。
2)将孔内的完全培养基吸出，空白对照组加入完全培养基，实验组加入完全培养基和测试样品。
3)培养结束，收集细胞，按照ATP试剂盒检测说明书进行操作。结果见图4。
图4的结果显示，与空白对照组相比，组合物7、组合物8均能明显提高ATP的含量，促进细胞ATP的合成。在相同浓度条件下，促进细胞ATP合成的效果由强到弱依次是：组合物7、组合物8。组合物15并未表现出提高ATP含量、促进细胞ATP合成的效果。
胶原蛋白III含量测试
以组合物7-9、组合物12作为实验组测试样品进行胶原蛋白III含量测试，测试方法如下：
1)取处于对数生长期的人皮肤成纤维细胞(HSF)，加入0.25％胰蛋白酶消化液，消化使贴壁细胞脱落，计数1～4×105个/mL，制成细胞悬液；
2)细胞接种于6孔板，分组加样。正常对照组加200μL PBS，补充DMEM培养基至800μL，不进行UV照射；模型组和实验组，加入适量PBS反复洗至无色后，加入200μLPBS，暴露于UVB灯下照射15min(辐照强度：80-90uW/cm3，辐照剂量：40mJ/cm2)；照射15min后，弃去PBS，模型组加入PBS溶液和培养基至800μL，实验组加入培养基和测试样品至800μL。正常对照组、模型组、实验组继续于37℃、5％CO2培养箱中孵育48h。
3)培养结束后，离心取上清，加入RIPA裂解液，用涡旋仪震匀3次，30s/次，间隔3min，12000rpm离心10min，吸取上清液，并按照胶原蛋白III ELISA操作说明书进行操作。15min内用酶标仪在450nm处测量各孔的OD值，计算胶原蛋白III的含量，结果见图5。
图5的结果显示，与其他各组相比，组合物7、组合物8在100ppm浓度下均能显著提高胶原蛋白III的含量。上述结果证明了在联用多种多肽时，多肽之间的用量比将影响组合多肽的活性，当组合肽A、肌肽和五肽-34三氟乙酸盐的质量比为(3～4)∶1∶(2～3)时，组合多肽具有显著的促进胶原蛋白III合成的作用。
MMP-1表达抑制测试
以组合物7、组合物8、组合物13和组合物14作为实验组测试样品进行MMP-1表达抑制测试，测试方法如下：
1)取处于对数生长期的人皮肤成纤维细胞(HSF)，加入0.25％胰蛋白酶消化液，消化使贴壁细胞脱落，计数1～4×105个/mL，制成细胞悬液；
2)细胞接种于6孔板，分组加样。正常对照组加200μL PBS，补充DMEM培养基至800μL，不进行UV照射；模型组和实验组，加入适量PBS反复洗至无色后，加入200μL PBS，暴露于UVB灯下照射15min(辐照强度：80-90uW/cm3，辐照剂量：40mJ/cm2)；照射15min后，弃去PBS，模型组加入PBS溶液和培养基至800μL，实验组加入培养基和测试样品至800μL。正常对照组、模型组、实验组继续于37℃、5％CO2培养箱中孵育48h。
3)培养结束后，离心取上清，加入RIPA裂解液，用涡旋仪震匀3次，30s/次，间隔3min，12000rpm离心10min，吸取上清液，并按照MMP-1 ELISA操作说明书进行操作。15min内用酶标仪在450nm处测量各孔的OD值，计算MMP-1的含量，结果见图6。
图6的结果显示，与模型组相比，组合物7和组合物8在100ppm浓度下能显著抑制MMP-1的表达；组合物13和组合物14在100ppm浓度下对MMP-1的表达均不具有抑制作用。
上述结果证明了在联用多种多肽时，多肽之间的用量比将影响组合多肽的活性，当组合肽A、肌肽和五肽-34三氟乙酸盐的质量比为(3～4)∶1∶(2～3)时，组合多肽具有显著的抑制MMP-1表达的作用，从而有利于提高胶原蛋白含量，具有优异的抗衰效果。
上面结合具体实施例对本发明的实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式。即使对本发明做出各种变化，倘若这些变化属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则仍落入在本发明的保护范围之中。
Claims (10)
1.一种协同抗衰的多肽组合物，其特征在于，所述多肽组合物包含组合肽A、肌肽和五肽-34三氟乙酸盐。
2.根据权利要求1所述的多肽组合物，其特征在于，所述组合肽A包括以下组分：β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酸苄胺、三肽-1和乙酰基四肽-9。
3.根据权利要求2所述的多肽组合物，其特征在于，所述组合肽A中β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酸苄胺、三肽-1和乙酰基四肽-9的质量比为4∶1∶0.1。
4.根据权利要求1所述的多肽组合物，其特征在于，所述组合肽A、肌肽和五肽-34三氟乙酸盐的质量比为(3～4)∶1∶(2～3)。
5.根据权利要求4所述的多肽组合物，其特征在于，所述组合肽A、肌肽和五肽-34三氟乙酸盐的质量比为4∶1∶3或3∶1∶2。
6.根据权利要求4所述的多肽组合物，其特征在于，所述组合肽A、肌肽和五肽-34三氟乙酸盐的质量比为4∶1∶3。
7.一种用于抗衰老的化妆品，其特征在于，所述化妆品中包含如权利要求1～6任一项所述的多肽组合物。
8.根据权利要求7所述的化妆品，其特征在于，所述多肽组合物在化妆品中的添加量为0.0001-30wt％。
9.根据权利要求7所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品的剂型包括水剂、乳液剂、膏霜剂、凝胶剂、油剂、粉剂、片剂、泥剂、气雾剂、贴剂、膜剂或纳米制剂。
10.权利要求1～6任一项所述的多肽组合物在抗衰老领域的应用，其特征在于，所述抗衰老包括增加胶原蛋白含量、提高细胞ATP含量或提高皮肤代谢。
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| CN202311834959.0A CN117860607A (zh) | 2023-12-28 | 2023-12-28 | 一种协同抗衰的多肽组合物及其应用 |
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