CN110833516B

CN110833516B - 一种具有补水保湿作用的多肽组合物

Info

Publication number: CN110833516B
Application number: CN201911320615.1A
Authority: CN
Inventors: 丁文锋; 彭晏; 陈言荣
Original assignee: SHENZHEN WINKEY MEDICAL RESEARCH DEVELOPMENT CO LTD
Current assignee: Shenzhen Weiqi Technology Co ltd
Priority date: 2019-12-19
Filing date: 2019-12-19
Publication date: 2022-01-18
Anticipated expiration: 2039-12-19
Also published as: CN110833516A

Abstract

本发明公开一种具有补水保湿作用的多肽组合物，属于美容多肽技术领域，该组合物包含可以增加水通道蛋白3含量的多肽、具有促进透明质酸生成或/和胶原蛋白生成作用的多肽。所述多肽组合物可以添加天然保湿因子。所述多肽组合物还可以进一步添加海藻糖或/和多糖类保湿剂。本发明的多肽组合物通过不同活性成分的复配，作用于不同靶点，全方位发挥协同增效作用，可以实现优异的补水保湿效果。

Description

一种具有补水保湿作用的多肽组合物

技术领域

本发明属于美容多肽技术领域，提供了一种具有补水保湿作用的多肽组合物。

背景技术

影响皮肤老化的因素主要有两大类：内源性因素和外源性因素。内源性因素包括遗传因素、氧自由基、糖基化反应等，而外源性因素包括日晒、环境污染、不良习惯等，内源性因素是影响皮肤衰老的根本因素，外源性因素则在内源性衰老的基础上起加速或延缓作用。

皮肤衰老表现为表皮更新减慢、屏障功能减弱、角质形成细胞活力下降、角质层水合能力减弱、皮脂分泌减少、水分散失增加，导致皮肤脱屑、干燥；细胞皱缩、老化，真皮层中成纤维细胞数量减少，合成胶原蛋白和弹性蛋白的能力下降，导致皮肤松弛和皱纹出现。目前市场上抗衰老的产品很多，如抗氧化、抗糖基化、补充胶原蛋白等，而所有的抗衰老产品必须在肌肤拥有充足的水分的前提下才能向皮肤深层渗透，以充分发挥其抗衰功效。随着年龄增长，肌肤含水量逐渐减少，这直接导致了肌肤干燥、发黄暗沉、肌肤松弛、皱纹早生等现象。因此，想要祛皱抗衰首当其冲应先补水保湿。

目前市场上皮肤补水产品众多，按照主要保湿功能成分主要有以下三种：1、封闭性保湿剂，如白矿油、橄榄油等油脂成分通过在皮肤上形成一层薄膜，从而降低水分在皮肤表层的流失；2、吸湿剂，如甘油、透明质酸等通过吸引水分子逗留在皮肤表层，从而达到保湿的目的；3、深层修复剂，如神经酰胺、磷脂等通过修复皮肤屏障，从而减少水分散失。相比之下，通过深层修复进行保湿，这类产品的抗衰效果更优。其中，封闭性保湿剂在皮肤表面形成的封闭性油膜会导致毛孔堵塞，对于油性皮肤的消费者影响更甚，大大增加了粉刺痤疮发生的风险；仅仅通过吸湿剂补水保湿，难以达到持久滋养的效果，此外一般保湿剂在高湿度环境下，从空气中吸收水分从而达到良好的保湿效果，但在干燥的条件下反而从深层肌肤吸收水分使得皮肤更加干燥；而使用深层修复剂进行保湿，由于作用靶点单一，其保湿效果也有待进一步提高。

水的跨膜转运对于维持细胞正常的生理功能是至关重要的。水通道是水分子在溶液渗透压梯度的作用下跨膜转运的主要途径。目前从哺乳动物组织中获得了13种水通道蛋白，其中人类皮肤表达量最丰富的是水通道蛋白-3(AQP3)。AQP3是一个完整的跨膜蛋白，主要位于表皮基底层和棘层，可以转运水、甘油、尿素，它可从循环中将水分、甘油、皮脂腺中的甘油三脂带入表皮，从而保证表皮持续的水分，促进角质层的水合作用。一个AQP3分子每秒钟可以允许30亿个水分子通过，由此可见AQP3对于表皮的屏障修复作用、保湿具有重要的意义。如果皮肤屏障受到破坏，机体水通道蛋白功能下降，会出现皮肤干燥、角质层水合作用下降、皮肤弹性下降、皮肤屏障修复延迟、生物合成功能受损、伤口愈合延迟等现象。

因此，开发一种可以增加体内水通道蛋白3(AQP3)的含量，从多靶点发挥作用，全方位补水保湿，具有持久滋养效果的产品显得尤为必要。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明人通过大量实验研究，结果发现，通过可以增加水通道蛋白3含量的多肽与具有促进透明质酸生成或/和胶原蛋白生成作用的多肽结合使用，多靶点发挥作用，可以达到即时保湿及高效持久保湿的效果，在此基础上，进一步添加天然保湿因子或/和糖类保湿剂，可以达到更优异的补水保湿效果，由此完成了本发明。

因此，本发明的目的是提供一种具有补水保湿作用的多肽组合物，所述组合物能够发挥协同作用，多靶点、全方位地改善皮肤干燥状态，补水保湿，持久滋养肌肤，使肌肤保持水嫩光泽，有弹性，从而有效抵御衰老。

为实现上述目的，根据皮肤生理生化特性，本发明提供了一种具有补水保湿作用的多肽组合物，包含可以增加水通道蛋白3含量的多肽以及具有促进透明质酸生成或/和胶原蛋白生成作用的多肽。

其中，可以增加水通道蛋白3含量的多肽，选自一种或几种以下多肽，包括但不限于乙酰基六肽-37、聚三肽-6；

具有促进透明质酸生成或/和胶原蛋白生成作用的多肽，选自一种或几种以下多肽，包括但不限于棕榈酰五肽-4、三肽-1、棕榈酰三肽-1、四肽-21、棕榈酰六肽-6、棕榈酰三肽-5、乙酰基四肽-9、豆蔻酰五肽-11、豆蔻酰六肽-4、豆蔻酰八肽-1、六肽-3、三肽-1铜、十四烷基氨基丁酰缬氨酰胺基丁酸脲三氟乙酸盐；

以上各成分质量百分浓度为0.0001％-5％。

本发明所述的具有补水保湿作用的多肽组合物还可以添加天然保湿因子，所述天然保湿因子选自一种或几种以下物质：吡咯烷酮羧酸钠、尿素、乳酸钠，各成分的质量百分浓度为5％-20％。

本发明所述的具有补水保湿作用的多肽组合物还可以进一步添加海藻糖或/和多糖类保湿剂，所述多糖类保湿剂选自一种或几种以下物质：银耳多糖、石斛多糖、芦荟多糖、桃胶多糖、山药多糖、玉竹多糖、羊栖菜多糖、乙酰壳糖胺，各成分质量百分浓度为5％-20％。

本发明所述的具有补水保湿作用的多肽组合物可以是乙酰基六肽-37和棕榈酰五肽-4的组合。

本发明所述的具有补水保湿作用的多肽组合物可以是乙酰基六肽-37、棕榈酰五肽-4和吡咯烷酮羧酸钠的组合。

本发明所述的具有补水保湿作用的多肽组合物可以是乙酰基六肽-37、棕榈酰五肽-4和海藻糖的组合。

本发明所述的具有补水保湿作用的多肽组合物可以是乙酰基六肽-37、棕榈酰五肽-4、吡咯烷酮羧酸钠和海藻糖的组合。

本发明所述的具有补水保湿作用的多肽组合物主要是制备皮肤外用的护肤产品或者医用产品。

本发明所述的具有补水保湿作用的多肽组合物可以制备成精华液、粉剂(胶囊、冻干粉)、乳剂、霜剂、凝胶、面膜、敷料等剂型。

为了更有利于理解本发明，将本发明的原理及上述组合物中各活性成分的作用机制说明如下：

1、导致皮肤水分缺失的因素

皮脂膜受损，不能在皮肤表面形成封闭薄膜，导致皮肤水分流失过快。天然保湿因子是皮肤角质层中存在的一种具有保水作用的吸附性水溶性物质，能在角质层中与水结合，并通过调节、贮存水分，以保持角质细胞间含水量，使皮肤自然呈现水润状态。若天然保湿因子减少，便会导致皮肤缺水。若皮肤受到各种外来刺激、环境损伤，使得皮肤屏障受损，透明质酸减少，粘多糖变性，胶原蛋白流失、变性和老化，自我修复能力下降，则会导致经表皮水分散失量增加，皮肤出现皱纹和干燥缺水粗糙等症状。皮肤缺水的根本原因在于真皮层结构损伤，透明质酸和胶原蛋白含量减少，无法储存水分形成“小水库”。

随着年龄的增长，皮肤表皮更新变慢，出现萎缩。老化皮肤的角质层在结构完整性和水合作用上都有所降低。皮肤中的天然保湿因子水平、透明质酸和胶原蛋白含量也随着年龄的增加而逐渐下降。此时皮肤缺水问题发生的概率更大，也更加严重。这就更加需要借助于保湿护肤品改善皮肤质量。

2、皮肤缺水的危害

皮肤间歇性缺水或长期处于缺水状态，会导致皮肤紧绷干痒。缺水时，毛孔周围的细胞干瘪，导致毛孔变得松弛粗大，影响毛孔排除代谢废物，毒素累积在皮下容易引起皮肤过敏。皮肤缺水会引起皮肤细胞老化，新陈代谢变得缓慢，导致黑色素不能及时排除，皮肤出现暗黄现象。皮肤严重缺水时，角质层干燥脱落，会引起死皮、脱屑。此外，护肤产品当中的活性成分必须在皮肤拥有充足的水分的前提下才能向皮肤深层渗透，以充分发挥其功效。如果在皮肤缺水时使用护肤品，皮肤不能完全吸收护肤品内的营养成分，则使用效果不但会大打折扣，而且护肤品累积在皮肤的表层，还会导致脂肪粒的形成。因此，补水保湿对于改善皮肤质量是必不可少的。

3、补水保湿的机理

角质层是表皮细胞的最外层，其完整的“砖墙结构”和皮脂膜组成了皮肤的屏障作用，能够保留充足的水分，有助于皮肤抵御干燥的环境以及其他外部刺激，维持内部器官的正常功能。角质层的水合与以下几个方面有关：(1)来自于体内水的供应，水通道蛋白3可以将水、甘油等小分子跨膜运输至表皮，参与角质层的水合作用；(2)真皮内水的滞留，透明质酸能够与水形成氢键而结合大量的水分，形成凝胶状基质，与胶原蛋白共同构成整个皮肤的水分储存库；(3)角质细胞内丰富的天然保湿因子，可以帮助细胞从外界捕捉水分，有助于角质层的水合作用；(4)皮肤表面具有封闭薄膜，赋予角质层锁水能力，可以减少经表皮水分散失量。

通过调节水分运输，增加真皮储水量，在此基础上进一步加强角质层吸湿性和锁水能力，可以实现皮肤良好的补水保湿状态。

4、活性成分的作用机制

乙酰基六肽-37(Acetyl Hexapeptide-37)是一种小分子多肽类物质，能够有效地提高人体内水通道蛋白3(Aquaporin 3,AQP3)在mRNA水平上的表达量，从而提高皮肤中AQP3的含量，具有加强保湿的特性，能够提高皮肤的含水量。此外，乙酰基六肽-37还能促进人体真皮成纤维细胞中I型胶原蛋白的合成及角化细胞的增殖，改善皮肤屏障功能，是一款新型全方面的保湿抗衰老活性成分。聚三肽-6(Polytripeptide-6)作用机制与乙酰基六肽-37类似。

棕榈酰五肽-4(Palmitoyl Pentapeptide-4)，可以激发胶原蛋白、糖胺聚糖(GAGs)及透明质酸的合成。胶原蛋白构筑的细密弹力网，将水分包裹其中；透明质酸能够结合大量的水分，形成凝胶状基质，与胶原蛋白共同构成整个皮肤的水分储存库，使皮肤饱满光滑，柔软细嫩。此外，通过深层修复皮肤屏障，使得保湿效果更加持久。

三肽-1(GHK)，是一种内源性生长因子，作为铜离子的转运体，刺激胶原合成、血管生成和成纤维细胞生长。合适剂量的GHK作用于皮肤有抗炎和修复作用。此外，Marc Heidl等人发现，三肽-1可以促进皮肤透明质酸的合成。因此，三肽-1可以用于皮肤修复及补水保湿，改善皮肤质量。

棕榈酰三肽-1(Palmitoyl Tripeptide-1，Pal-GHK，CAS号：147732-56-7)，在GHK的肽链N端经棕榈酸修饰而得，具有更好的透皮性能，可以促进皮肤大量合成胶原蛋白、多聚糖，能紧致皮肤，锁水保湿，淡化皱纹，深层修复肌肤。

四肽-21(Tetrapeptide-21，GEKG)，可以促进细胞外基质(ECM)中胶原蛋白的生成，同时可以诱导胶原蛋白基因的表达升高，从而增厚皮肤，防止水分丢失。

棕榈酰六肽-6(Palmitoyl Hexapeptide-6)是以遗传性免疫肽为模板研制的一种肽，可以有效刺激成纤维细胞增殖和链接，促进胶原蛋白合成，从而修复真皮，改善皮肤质量，减少经皮水分丢失。

棕榈酰三肽-5(Palmitoyl Tripeptide-5)，通过激活转化生长因子-β(TGF-β)，刺激成纤维细胞分裂增殖，强力促进胶原蛋白的生成，补充细胞外基质蛋白，强化结缔组织，还能抑制基质金属蛋白酶的活性，防止胶原蛋白分解，从而让皮肤富有弹性，深层修复皮肤屏障，长效保湿。

乙酰基四肽-9(Acetyl Tetrapeptide-9)，可以促进I型胶原蛋白合成，也能促进光蛋白聚糖的合成。胶原蛋白构筑的细密弹力网，将水分包裹其中，形成“小水库”，可防止水分流失。光蛋白聚糖是小分子蛋白聚糖家族的一员，是细胞外基质(ECM)重要的组成部分，可以调节胶原纤维使之高效连接，从而形成功能化的胶原纤维，保持皮肤厚度和紧致度。乙酰基四肽-9通过同时刺激I型胶原蛋白和光蛋白聚糖的合成，从而促进有效增加皮肤储水，深层修复皮肤屏障，达到长效保湿的效果。

豆蔻酰五肽-11(Myristoyl Pentapeptide-11)，能够帮助重新恢复肌肤弹性，修复受损肌肤，刺激胶原蛋白合成，从而增加皮肤储水量，达到补水保湿的效果。作用机理相似的还有豆蔻酰六肽-4(Myristoyl Hexapeptide-4)、豆蔻酰八肽-1(MyristoylOctapeptide-1)。

六肽-3(Hexapeptide-3)是类似纤维连接蛋白分子Ⅲ型单元中的6-氨基酸片段序列的小分子肽，促进β1整联蛋白的表达、胶原蛋白的粘连，加强细胞与细胞外基质(ECM)的粘合作用，从而促进组织的重塑和皮肤修复，防止水分丢失。

三肽-1铜(铜肽，Copper Peptide)，可以促进胶原蛋白、弹力蛋白、蛋白聚糖和糖胺聚糖(GAGs)大量生成，增加皮肤弹性，紧致皮肤，从而抚平皱纹；抗氧化，清除自由基，延缓皮肤老化；促进表皮细胞增生，修复皮肤屏障，从而增加皮肤含水量，有利于补水保湿。

十四烷基氨基丁酰缬氨酰胺基丁酸脲三氟乙酸盐(TetradecylAminobutyroylvalylaminobutyric Urea Trifluoroacetate,CAS号：934368-60-2)，是一种新型三肽，可以促进透明质酸的合成，增加核心蛋白聚糖和光蛋白聚糖的表达，能够刺激更强质量胶原蛋白的生成，而且它促进透明质酸合成的效果也会对结缔组织的水分保持量发挥协同增效作用。

天然保湿因子(Natural Moisturizing Factor,NMF)是由氨基酸混合物、氨基酸衍生物及聚丝蛋白水解产物、乳酸盐、尿素和电解质等共同构成的一种具有保水作用的水溶性物质。NMF在角质细胞中约占干重的10％。NMF从外界环境和皮肤内部中吸收水分保持在角质层中，起到细胞内增塑剂的作用，确保角质细胞的结构和连接，防止异常的皮肤皲裂和脱屑。吡咯烷酮羧酸钠(PCA-Na)、尿素、乳酸钠均是NMF的主要成分。吡咯烷酮羧酸钠是一种无色、无臭、透明略带咸味的液体，具有很强的保湿作用。虽然它最大携水能力仅为自身重量的3倍左右，但实际应用时效能与透明质酸接近，远比甘油、丙二醇、山梨醇的保湿效果好，而且没有甘油的黏腻感，安全性还很高。吡咯烷酮羧酸钠可以增加皮肤的柔软度和弹性。动物实验及人体实验表明，该成分的刺激性极低，且无过敏现象。尿素存在于肌肤的角质层当中，具有良好的保湿以及柔软角质的功效。乳酸钠作为皮肤中存在的主要NMF成分之一，也具有极好的保湿性能。

海藻糖(Trehalose，CAS号：99-20-7)，含有多个羟基和极性基团，与水分子形成氢键，可牢牢锁住水分，具有良好的低吸湿性和保水能力。海藻糖与银耳多糖、石斛多糖、芦荟多糖、桃胶多糖、山药多糖、玉竹多糖、羊栖菜多糖、乙酰壳糖胺等多糖在皮肤表面形成一层保护膜，可有效降低皮肤表面水分蒸发。

本发明相对于现有技术所取得的有益效果包括：针对导致皮肤水分缺失的因素、保湿机理及各活性成分的作用机制，本发明采用不同活性成分复配，通过可以增加水通道蛋白3含量的多肽，增加基底层水通道蛋白含量，增加水分的运输(“活水”)；通过具有促进透明质酸生成或/和胶原蛋白生成作用的多肽深入真皮层，修复强健真皮结构(“储水”)；在此基础上，进一步添加天然保湿因子，补充角质细胞内的天然保湿因子，吸收水分保持在角质层中(“捕水”)；还可以进一步添加海藻糖或/和多糖类保湿剂，在皮肤表面形成薄膜，有效降低水分流失速度(“锁水”)，由此作用于不同靶点，全方位发挥协同增效作用，实现优异的补水保湿效果。

附图说明

图1各时间段的皮肤水分含量增长百分比

图2各时间段的皮肤水分经表皮散失降低百分比

具体实施方式

为了更好地理解本发明，下面结合实施例和附图对发明作详细的说明，但并不只限于以下的实施例。

实施例制备实施例1-4和对比例1-5的组合物

实施例1-4和对比例1-5组合物的处方配比(百分含量)如下：

实施例1-4和对比例1-5组合物的制备方法：

1、准确称量原料2、7、8，溶解于纯化水中，得溶液A；

2、准确称量原料3、5、6，加入纯化水中超声溶解完全，得溶液B；

3、将上述所得溶液A与B混合均匀，用原料4调节pH至5.0-6.0，即得。

测试例1水通道蛋白3(AQP3)的mRNA水平定量

1.1测试原理

采用RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)技术定量mRNA，该技术通过RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合，以细胞中的mRNA作为模板，采用引物，利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板，在DNA聚合酶作用下进行PCR扩增，从而检测基因表达，评价转录活性。

1.2测试目的

通过测定实施例1促进人体角化细胞中AQP3基因的mRNA水平表达来评价其转录活性，考察实施例1组合物对皮肤中AQP3含量的影响，以对比例1作为空白对照。

1.3测试方法及数据处理

经实施例1、对比例1处理的人体角化细胞温育16-24小时。采用RT-PCR技术，根据试剂盒的使用方法，先溶解细胞，提取mRNA，然后通过RT-PCR反转录得到cDNA。

实施例1的试验数据与空白对照组数据归一化处理，得到AQP3的mRNA相对含量。

1.4测试结果

结果表明，相对于对比例1，实施例1诱导AQP3基因mRNA的表达量提高了91.73％，说明实施例1能够有效地诱导提高AQP3基因的转录，从而提高皮肤中AQP3的含量，具有加强保湿的特性，能够提高皮肤的含水量。

测试例2评价透明质酸含量

2.1测试目的

通过测定实施例1处理后的人皮肤成纤维细胞(HSF细胞)中的透明质酸含量，考察实施例1组合物对HSF细胞合成透明质酸的影响，以对比例1作为空白对照。

2.2测试方法

取对数生长期HSF细胞，以3×10³/孔细胞量接种于96孔培养板，待细胞生长汇合率达到80％，换入无添加培养基，培养24h后，改用加入含实施例1、对比例1的DMEM培养基100μL作用24h。

收集上述方法预处理的HSF细胞培养基上清液，用于ELISA测定，操作流程按说明书进行，最终利用酶标仪，在460nm波长下检测各孔的OD值。本测试应用竞争法，因此OD值越小，表示透明质酸含量越高。每组设置5个复孔，试验重复3次。

2.3测试结果

测得实施例1的OD值为0.427±0.051，对比例1的OD值为0.685±0.043，两者具有统计学差异(p<0.05)。上述结果表明，实施例1组合物可以促进HSF细胞合成透明质酸。透明质酸可与水形成氢键而具有很强的保水能力，可固定及阻止真皮中水的流动，占据有形基质及细胞成分外的大量空间，使真皮基质含有大量水分，赋予皮肤抗压性及黏弹性。

测试例3皮肤弹性测试

3.1受试者

120名30-50岁的健康女性，随机分为4组，平均每组30人。

3.2测试样品

实施例1、对比例1、对比例2、对比例3的组合物。

3.3测试仪器

德国Courage+Khazaka公司(德国CK公司)制造的皮肤弹性Cotometer MPA580主机，所使用的探头是Reviscometer RV600弹性纤维组织测试探头。

3.4试验操作

先测量脸部区域清洁后30min的空白R2、R5、R7值，

其中R2＝Ua/Uf，R5＝Ur/Ue，R7＝Ur/Uf，

Ua：从取消负压到下一次连续测试皮肤表面再加压时皮肤的恢复值；

Uf：有负压时皮肤最大的拉伸量；

Ur：取消负压0.1s后，皮肤的恢复值和粘弹性部分值，或称塑性部分值；

Ue：恒定负压加到皮肤上后，0.1s时皮肤的拉伸量，定位弹性部分拉伸量；

然后将试样均匀涂布于面部，一天两次，早晚坚持使用，不得使用其他化妆品，连续使用4周，分别测试记录试验区域在给药前后的皮肤R2、R5、R7值。同一个受试者的测试由同一个测量人员完成。

3.5测试结果

通过比较给药前后的皮肤R2、R5、R7值变化来评估产品改善皮肤的弹性功效，R2、R5、R7值变化如下表1所示：

表1各组给药前后皮肤R2、R5、R7值的变化情况

注：R2、R5、R7值越接近1，皮肤弹性越好。

由表中数据可知，相对于空白对照(对比例1)，含有多肽的给药组(实施例1、对比例2、对比例3)在使用4周后，能够增加皮肤弹性，而且在活性成分浓度相同的情况下使用4周后，实施例1给药组测得的皮肤R2、R5、R7值比使用单一多肽的对比例2和对比例3测得的值更高，在测试前后R2、R5、R7值的变化率最大，表明通过不同作用靶点的多肽组合复配，增加皮肤水通道蛋白3含量，同时促进透明质酸、胶原蛋白生成，比使用单一多肽更能使皮肤水分增加，持久滋润，保持充盈，从而在更大程度上增加了皮肤弹性，不同多肽表现出显著的协同作用。

测试例4皮肤含水量测试

4.1测试原理

采用电容法测试人体皮肤角质层的水分含量。由于水的介电常数高于皮肤中其他物质，当皮肤含水量发生改变时，电容随之发生改变。测试电容器会显示出与皮肤水分含量相对应的电容量，其结果可用湿度测量值MMV(moisture measurement value)表示，可以此评价皮肤含水量。

4.2测试设备

德国CK公司多功能皮肤测试仪，型号CUTOMETER DUAL MPA 580，本测试采用皮肤水分含量测试探头。

4.3测试环境条件和志愿者要求

测试环境条件：测试环境温度为22±1℃，湿度为50±5％，并且进行实时动态检测；

志愿者要求：有效志愿者至少30人，年龄在20-65岁之间(妊娠或哺乳期妇女除外)；前臂测试区域的电容法皮肤水分测定意义的基础值在15-100之间；无免疫缺陷或自身免疫性疾病者；无活动性过敏疾病者；既往对护肤类化妆品无严重过敏史者；近一个月内未曾使用激素类药物及免疫抑制剂者；未参加其他临床试验者；按规定使用受试药物且资料齐全；测试前所有志愿者应填写知情同意书。

4.4测试前准备

受试部位在测试前2-3天不能使用任何化妆品或外用药品。测试前，清洁双手前臂内侧，用干的面巾纸擦拭干净。清洁后，在受试者双手前臂内侧做好测量区域标记。正式测试前应在符合标准房间内静坐至少30min，不能喝水，前臂暴露，呈测试状态放置，保持放松。

4.5测试步骤

实验中左右手臂内侧标记3×3cm²试验区域，同一手臂可以标记多个区域，区域间隔lcm。通过多功能皮肤测试仪，使用电容法对各区域进行测量。先测量各测试区域的空白值，然后按2.0±0.l mg样品/cm²的用量，使用乳胶指套将实施例1-4和对比例1-5的样品均匀涂布于测试区域内。分别在1h、2h、4h测量各区域的皮肤含水量，每个样品平行测定三次。同一个志愿者的测试由同一个测量人员完成。

4.6测试结果

分别测得各时间段的皮肤含水量，计算皮肤水分含量增长百分比，计算公式如下：

W％＝(W_l–W₀)/W₀×100％

其中，W％为皮肤水分含量增长百分比；W₀为皮肤使用试验样品前的水分含量；W₁为皮肤使用试验样品后的水分含量。

结果如表2和图1所示：

表2各时间段的皮肤水分含量增长百分比

由图表结果可知，在相同活性成分浓度条件下，与使用单一多肽成分的对比例2、对比例3相比，实施例1给药组的皮肤水分含量增长百分比更高，表明通过不同作用靶点的多肽组合复配，增加皮肤水通道蛋白3含量，同时促进透明质酸、胶原蛋白生成，比使用单一多肽更能使皮肤水分增加，不同多肽之间具有协同增效作用。同理，通过实施例2与对比例4，实施例3与对比例5之间的结果比较可知，采用可以增加水通道蛋白3含量的多肽以及具有促进透明质酸、胶原蛋白生成作用的多肽和天然保湿因子组合复配，或增加水通道蛋白3含量的多肽以及具有促进透明质酸、胶原蛋白生成作用的多肽和海藻糖等糖类保湿剂复配，比使用单一的天然保湿因子或者海藻糖的补水保湿效果更好，不同活性成分之间具有显著的协同增效作用。在各实施例中，实施例4给药组的皮肤水分含量增长百分比最高，具有优异的补水保湿效果，而且4h之后皮肤水分含量增长百分比仍然达到84.37％，可以发挥持久滋润的作用，表明采用可以增加水通道蛋白3含量的多肽，增加基底层水通道蛋白含量，将水、甘油等小分子跨膜运输至表皮，参与表皮水合作用；采用具有促进透明质酸、胶原蛋白生成作用的多肽深入真皮层，激活透明质酸、胶原蛋白生成，修复强健真皮结构，形成水分储库；采用天然保湿因子，增强角质细胞内天然保湿因子的作用，帮助细胞从外界捕捉水分；采用海藻糖等糖类保湿剂，在皮肤表面形成薄膜，有效降低水分流失速度，通过上述不同作用靶点的活性成分复配，从“活水”、“储水”、“捕水”、“锁水”四个维度，全方位发挥协同增效作用，可以实现优异的补水保湿效果。

测试例5经表皮水分散失量(TEWL)测试

5.1测试原理

该测试的测量原理来源于Fick菲克扩散定律。测量探头为两端开放的圆柱形腔体，可以在皮肤表面形成相对稳定的测试小环境。通过两组温度、湿度传感器检测在两个不同位置的近表皮水分散失形成的水蒸气压梯度，进而换算出经表皮水分散失量(TEWL)。通过比较TEWL，可以评价皮肤屏障功能以及化妆品的“锁水”功效。皮肤的TEWL值越低，说明皮肤的屏障功能越好，使用的化妆品的“锁水”效果越好，反之则越差。

5.2测试设备

德国CK公司多功能皮肤测试仪，型号CUTOMETER DUAL MPA 580，本测试采用经表皮水分散失TEWL测试探头。

5.3测试环境条件和志愿者要求

志愿者要求：有效志愿者至少30人，年龄在20-65岁之间(妊娠或哺乳期妇女除外)；无免疫缺陷或自身免疫性疾病者；无活动性过敏疾病者；既往对护肤类化妆品无严重过敏史者；近一个月内未曾使用激素类药物及免疫抑制剂者；未参加其他临床试验者；按规定使用受试药物且资料齐全；测试前所有志愿者应填写知情同意书。

5.4测试前准备

5.5测试步骤

实验中左右手臂内侧标记3×3cm²试验区域，同一手臂可以标记多个区域，区域间隔lcm。通过多功能皮肤测试仪，先测量各测试区域的空白值，然后按2.0±0.lmg样品/cm²的用量，使用乳胶指套将实施例1-4和对比例1-5的样品均匀涂布于测试区域内。分别在1h、2h、4h测量各区域的经表皮水分散失量，每个样品平行测定三次。同一个志愿者的测试由同一个测量人员完成。

5.6测试结果

分别测得不同测试时间的经表皮水分散失量，按照公式计算皮肤水分经表皮散失降低百分比，计算公式如下：

T％＝(T₀-T₁)/T₀×100％

其中，T％为皮肤水分经表皮散失降低百分比；T₀为皮肤使用试验样品前经表皮水分散失量；T₁为皮肤使用试验样品后经表皮水分散失量。

结果如表3和图2所示：

表3各时间段的皮肤水分经表皮散失降低百分比

由图表结果可知，在相同活性成分浓度条件下，与使用单一多肽成分的对比例2、对比例3相比，实施例1给药组的皮肤水分经表皮散失降低百分比更高，表明通过不同作用靶点的多肽组合复配，不同多肽之间发挥协同增效作用，可以更加有效地减少经表皮水分散失量，从而具有更好的保湿效果。同理，通过实施例2与对比例4，实施例3与对比例5之间的结果比较可知，采用可以增加水通道蛋白3含量的多肽以及具有促进透明质酸、胶原蛋白生成作用的多肽和天然保湿因子组合复配，或增加水通道蛋白3含量的多肽以及具有促进透明质酸、胶原蛋白生成作用的多肽和海藻糖等糖类保湿剂复配，比使用单一的天然保湿因子或者海藻糖更能减少经表皮水分散失量，从而达到更好的保湿效果，不同活性成分之间具有显著的协同增效作用。在各实施例中，实施例4给药组的皮肤水分经表皮散失降低百分比最高，表明通过不同作用靶点的活性成分复配，全方位发挥协同增效作用，可以最大程度上减少经表皮水分散失量，从而实现优异的补水保湿效果。

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所做的进一步详细的说明，但是不表示本发明的具体实施是局限于这些说明。对于本发明所属领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或是替换，都应视为属于本发明的保护范围。

Claims

1.一种具有补水保湿作用的多肽组合物，其特征在于，包含以下多肽：

（1）可以增加水通道蛋白3含量的多肽，选自：乙酰基六肽-37；

（2）具有促进透明质酸生成或/和胶原蛋白生成作用的多肽，选自：棕榈酰五肽-4；

其中，各多肽质量百分浓度为0.0001%-5%。

2.根据权利要求1所述的具有补水保湿作用的多肽组合物，其特征在于，所述多肽组合物还包含天然保湿因子，所述天然保湿因子选自一种或几种以下物质：吡咯烷酮羧酸钠、尿素、乳酸钠，各成分的质量百分浓度为5%-20%。

3.根据权利要求1所述的具有补水保湿作用的多肽组合物，其特征在于，所述多肽组合物还包含海藻糖，其质量百分浓度为5%-20%。

4.根据权利要求1或2所述的具有补水保湿作用的多肽组合物，其特征在于，所述多肽组合物为乙酰基六肽-37、棕榈酰五肽-4和吡咯烷酮羧酸钠的组合。

5.根据权利要求1-3任一权利要求所述的具有补水保湿作用的多肽组合物，其特征在于，所述多肽组合物为乙酰基六肽-37、棕榈酰五肽-4、吡咯烷酮羧酸钠和海藻糖的组合。

6.根据权利要求1-3任一权利要求所述的具有补水保湿作用的多肽组合物，其特征在于，所述多肽组合物主要是制备皮肤外用的护肤产品或者医用产品。

7.根据权利要求1-3任一权利要求所述的具有补水保湿作用的多肽组合物，其特征在于，所述多肽组合物可以制备成精华液、粉剂、胶囊、乳剂、霜剂、凝胶、面膜、敷料剂型。