CN117836297A - (s)-1-(5-((吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'h,6'h-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺衍生物和类似化合物作为shp2抑制剂用于例如癌症的治疗 - Google Patents

(s)-1-(5-((吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'h,6'h-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺衍生物和类似化合物作为shp2抑制剂用于例如癌症的治疗 Download PDF

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Abstract

本发明涉及式(I)的化合物。式(I)的化合物是例如(S)‑1‑(5‑((吡啶‑3‑基)硫代)吡嗪‑2‑基)‑4lH,6'H‑螺[哌啶‑4,5'‑吡咯并[1,2‑b]吡唑]‑4l‑胺衍生物和类似化合物。本发明还涉及式(I)的化合物在治疗例如癌症、心血管疾病、免疫性病症、自体免疫病症、纤维化、眼部病症、系统性红斑狼疮、糖尿病、中性粒细胞减少症及其组合的方法中用作Src同源性磷酸酪氨酸磷酸酶2(SHP2)抑制剂。本发明还涉及含有所述化合物的药物组合物及其合成方法。

Description

(S)-1-(5-((吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌 啶-4,5′-吡咯并[1,2-B]吡唑]-4′-胺衍生物和类似化合物作 为SHP2抑制剂用于例如癌症的治疗
技术领域
本发明涉及能够抑制SHP2磷酸酶活性的新化合物。本发明的化合物可用于与SHP2失调相关病症的治疗。本发明还涉及含有所述化合物的药物组合物及其合成方法。
背景技术
PTPN11编码的Src同源性磷酸酪氨酸磷酸酶2(SHP2)是一种包含C末端结构域、PTP结构域和两个N末端Src同源性(N-SH2)结构域的非受体蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)，其有助于包括增殖、分化、细胞周期维持和迁移的多种细胞功能。SHP2是通过Ras丝裂原激活蛋白激酶、JAK-STAT或磷脂酰肌醇-3-激酶-AKT通路调节多种受体酪氨酸激酶下游信号转导的正向调节物。该蛋白质以非活性、自我抑制的构象存在，由涉及N-SH2结构域和催化性PTP结构域的残基的结合网络所稳定。将SHP2募集到活化的受体会释放该自我抑制的构象并导致其磷酸酶结构域的催化活化。除了作为磷酸酶的功能外，SHP2还充当对接蛋白以通过其两个氨基末端N-SH2结构域募集其他信号转导中间体。由于SHP2是导致增殖、分化和存活的细胞信号转导的正向调节物，因此其组成型活化与肿瘤发生相关。
SHP2成为治疗各种疾病(诸如努南综合征、豹纹综合征、幼年粒细胞白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、急性髓系白血病以及乳腺癌、肺癌和结肠癌)的有吸引力的靶标。
学术机构和制药公司均公开了采用基于不同杂环支架的SHP2抑制剂的药物开发项目。
来自诺华(Novartis)的WO2015/107493、WO2015/107494和WO2015/107495公开了如下所示的通式(A)的化合物：
仍来自诺华的具有如下所示的通式结构(B)、(C)、(D)和(E)的化合物分别公开于WO2016/203404、WO2016/203405和WO2017/216706：
WO2017/216706中公开的通式结构E和其中确认的化合物是2-氨基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶5-或6-硫醇衍生物。
加科思药业(Jacobio Pharmaceuticals)在WO2017/211303和WO2018/172984中公开了如下所示的结构(F)和(G)的吡嗪衍生物：
近期，锐新医药公司(Revolution Medicines)在WO2018/013597、WO2018/136264和WO2019/075265中公开了作为变构SHP2抑制剂的其它吡啶、吡嗪和三嗪化合物。
WO2018/136265和WO2019/118909均涉及包含有通式结构(H)的咪唑并吡嗪、三唑并吡嗪、吡唑并吡啶、咪唑并嘧啶的双环杂芳族支架：
吡唑并吡嗪和环稠合嘧啶-4-酮已由德克萨斯大学系统董事会(Board ofRegents,University of Texas System)分别在WO2017/210134和WO2017/156397中公开。
瑞雷制药公司(Relay Therapeutics)在WO2018/081091、WO2018/218133、WO2018/057884和WO2019/067843中进一步公开了吡唑并吡嗪。
吉利德(Gilead)在WO2020/072656中公开了如下所示的咪唑并嘧啶：
因此，SHP2是极具吸引力的靶标，可用于开发新型疗法以治疗与其相关的各种疾病。因此，需要开发能作为SHP2抑制剂的新型治疗剂。本发明的化合物满足了这种需要，因为它们是能够抑制SHP2活性的小分子。
引用的专利和专利申请中公开的许多化合物均有被三环胺取代的杂环核心，其具有如下所示的通式结构，其中C环是芳族或杂芳族环：
出乎意料的是，引入合适的唑环(诸如吡唑或咪唑或三唑)，其中一个氮位于分子左侧的桥头，并联合特定选择的中心杂环核心和取代基，能够鉴定有力且选择性的SHP2抑制剂，其在临床前动物物种中具有优异的药代动力学，经口给予后在血浆中表现出显著的暴露(无论是C最大还是AUC)。此外，取代或未取代的吡唑部分的存在会影响配体-生物靶标动力学，通过减少k解离而大幅延长SHP2抑制剂的停留时间(配体与其生物靶标接触的时间)。
发明内容
本发明涉及用作SHP2抑制剂并用于治疗由SHP2介导的病况的杂环化合物。
发明人发现，具有包括以下结构的通式的化合物：在分子左侧具有特定氮模式的五元稠合杂芳族环，是尤其有效的SHP2抑制剂，如低纳摩尔或微摩尔范围内SHP2抑制的酶促和细胞IC50值所证明的。更具体地，本发明化合物的特征在于合适的唑环(诸如吡唑或咪唑或三唑)，其中一个氮位于分子左侧的桥头，并联合特定选择的中心杂环核心和取代基。
因此，本发明的目的之一是通式(I)的化合物：
其中：
X1是CR1或N；X2是CR2或N；X3是CR3或N；其中所述X1、X2和X3的至少一个是N；
R1、R2和R3各自任选地选自H、卤素、OC1-3烷基或C1-3烷基，其任选地被NH2、OH或卤素取代；或
R1和R2与它们相连的碳原子一起连接形成稠合的五元、六元或七元饱和或部分不饱和环，该环任选地含有选自O、S和N的一个或两个杂原子并且任选地在各次出现时被选自卤素、OH、NH2、OCH3、C1-3烷基的一个或多个取代基取代；或
R2和R3与它们相连的碳原子一起连接形成稠合的五元、六元或七元饱和或部分不饱和环，该环任选地含有选自O、S和N的一个或两个杂原子并且任选地在各次出现时被选自卤素、OH、NH2、OCH3、C1-3烷基的一个或多个取代基取代；或
X4是CR5R6、O、S，或X4为键；
R4是芳基、杂芳基、部分不饱和芳基、部分不饱和杂芳基环，所述芳基、杂芳基、部分不饱和芳基、部分不饱和杂芳基环各自任选地被独立选自以下的一个或多个取代基取代：C(＝O)CH3、C(＝O)OCH3、OH、卤素、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)2、C1-6烷基、C3-5环烷基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C(＝O)NR’R”、CN、卤代C1-6烷氧基、C1-6烷氧基、饱和5-或6-元杂环、芳基或杂芳基，其中所述饱和5元或6元杂环、芳基或杂芳基各自任选地被一个或多个CH3、NH2、卤素或OH取代，并且其中R’和R”各自独立地为H或C1-6烷基，优选H或CH3；
R5和R6各自独立地选自H、C1-6烷基、OH、卤素；
Cy-X4-R4对应于如下所示的通式(A)-(M)中的任一个：
其中：
-R7选自H、C1-3烷基和NH2；优选H、CH3和NH2；
-R8是H、卤素、C1-3烷基，其中所述C1-3烷基任选地被一个或多个卤素或OH取代；
-R9、R10、R11、R13、R14、R15、R16、R18、R21和R26在各次出现时各自独立地选自H、卤素、C1-6烷基或卤代C1-6烷基；
-R12、R17、R19和R20选自H和CH3；
-R23和R27各自独立地选自H、C1-6烷基和羟基C1-6烷基；
-R24是H、C1-6烷基、卤代C1-6烷基或卤素；
-R25是H、卤素、C1-6烷基、卤代C1-6烷基或羟基C1-6烷基；
-Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7和Y8各自独立地选自N和C；
或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体。
因此，本发明的另一目的是通式(I)的化合物，其中：
X1为CR1；X2为CR2；X3为CR3；
R1、R2、R3、R4和X4如上所定义；
Cy-X4-R4对应于如下所示的通式(A’)-(M)中的任一个：
其中：
-R7选自H、C1-3烷基和NH2；优选H、CH3和NH2；
-R8是H、卤素、C1-3烷基，其中所述C1-3烷基任选地被一个或多个卤素或OH取代；
-R9、R10、R11、R13、R14、R15、R16、R18、R21和R26在各次出现时各自独立地选自H、卤素、C1-6烷基或卤代C1-6烷基；
-R12、R17、R19和R20选自H和CH3；
-R23和R27各自独立地选自H、C1-6烷基和羟基C1-6烷基；
-R24是H、C1-6烷基、卤代C1-6烷基或卤素；
-R25是H、卤素、C1-6烷基、卤代C1-6烷基或羟基C1-6烷基；
-R28是H、卤素或C1-3烷基并且R29是杂芳基；
-Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7和Y8各自独立地选自N和C；
或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体。
在一个优选的实施方式中，根据权利要求1所述式(I)的化合物为通式(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物：
优选地，在通式(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物中，R1、R2和R3各自独立地选自H、Br、Cl、F、CH3、OCH3和CH2OH，或者R2和R3连接在一起形成选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、四氢呋喃、四氢吡咯的稠合环。
优选地，式(IA)的化合物具有如下所示的通式结构之一：
优选地，式(IB)的化合物具有如下所示的通式结构之一：
优选地，式(IC)的化合物具有如下所示的通式结构之一：
优选地，式(ID)的化合物具有如下所示的通式结构：
本发明进一步提供如上所定义的式(I)的化合物，其中Cy-X4-R4选自：
优选地X4是S；还优选地X4是键；还优选地X4是O。
优选地，R4选自：苯基、吡啶、嘧啶、吡嗪、咪唑并[1,2-a]吡啶、吲哚、2H-吲唑、2,3-吲哚啉、2,3,3a,4-四氢-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并噁嗪、6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪、2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶、1,8-萘啶、三唑并[4,3-a]吡啶、咪唑并[1,2-a]吡啶-2(3H)-酮，所述环各自任选地被独立选自以下的一个或多个取代基取代：C(＝O)CH3、C(＝O)OCH3、OH、卤素、NH2、CF3、C(＝O)CH3、C1-3烷基、C(＝O)NH2、C(＝O)NHC1-3烷基、C(＝O)N(C1-3烷基)2、CN、C3-5环烷基、芳基或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基各自任选地被以下的一个或多个取代：卤素、C(＝O)NH2、C(＝O)NHCH3、C(＝O)N(CH3)2、C1-3烷基和NHC(＝O)CF3。
优选地，R4选自下组：2-(三氟甲基)吡啶-3-基、2-氨基-3-氯吡啶-4-基、(S)-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪-4-基、4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基、(R)-6a′,7′-二氢-6′H,9′H-螺[环丙烷-1,8′-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪]-4′-基、3,3-二氟吲哚啉-1-基-乙-1-酮、8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基、3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基、3-氯-2-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基、2,3-二氯苯基、8-氯-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基、8-氯-2-氰基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基、5-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、6-氨基-2-氯吡啶-3-基、3-氯-2-(1H-吡咯-1-基)吡啶-4-基、3-氯-2-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基、3-氯-2-(1H-咪唑)-1-基)吡啶-4-基、5-氨基-3-氯吡嗪-2-基、3,8-二氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基、8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-7-基、8-氯-3-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基、8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2,2,2-三氟乙酰胺、8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺、8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-腈、8-氯咪唑[1,2-a]吡啶-2(3H)-酮、3-氯吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺、3-氯吡啶-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺、3-氯吡啶-2-基)-N-甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺、8-氯-N,N-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺、3-氯吡啶-2-基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺和8-氟喹啉-4-基。
甚至更优选地，R4是以下之一：
本发明的另一目的是如上所定义的式(I)的化合物，其选自以下组：
-(S)-1-(5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-3′-氯-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-3′-氯-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-3′-溴-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-3′-氟-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-3′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2′-甲氧基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-(((S)-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-3′-氯-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(8-((4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(8-(((S)-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-S)-1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-3′-氯-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1′-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-胺；
-(S)-1′-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-胺；
-1′-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-醇；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-(((R)-6a′,7′-二氢-6′H,9′H-螺[环丙烷-1,8′-吡啶并[3,2-b]吡咯[1,2-d][1,4]噁嗪]-4′-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-(((S)-6a′,7′-二氢-6′H,9′H-螺[环丙烷-1,8′-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪]-4′-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(4-((3-氨基-5-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-3,3-二氟吲哚啉-1-基)乙-1-酮；
-(S)-1′-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,8-二氢-3H,6H-螺[呋喃[3,4-d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-胺；
-(S)-(4′-氨基-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-2′,3′-二基)二甲醇；
-(S)-1′-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-1,8-二氢-3H,6H-螺[呋喃[3,4-d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-胺；
-(S)-1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((3-氯-2-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)哒嗪-3-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-胺；
-(S)-1-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-胺；
-(S)-1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-胺；
-(S)-1-(3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-5′H,7′H-螺[哌啶-4,6′-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑]-7′-胺；
-S)-1-(5-((8-氯-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(6-氨基-5-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇；
-(S)-3-(2-氨基-3-氯吡啶-4-基)-6-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-5-甲基-1,5-二氢-4H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮；
-(S)-1-(5-((5-氨基-3-氯吡嗪-2-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((3,8-二氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-3′-氟-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((3,8-二氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-3′-氟-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((8-氯-3-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-N-(7-((5-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2,2,2-三氟乙酰胺；
-(S)-7-((5-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺；
-(S)-1-(5-((6-氨基-2-氯吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((5-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-7-((5-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-腈；
-(S)-7-((5-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2(3H)-酮；
-(S)-1-(5-((3-氯-2-(1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(6-氨基-5-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((3-氯-2-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((3-氯-2-(1H-吡咯-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(6-氨基-5-((3-氯-2-(1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(6-氨基-5-((8-氯-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(4-((5-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-3-氯吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
-(S)-1-(4-((5-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-3-氯吡啶-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺；
-(S)-1-(4-((5-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-3-氯吡啶-2-基)-N-甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；
-(S)-7-((5-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-8-氯-N,N-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺；
-(S)-1-(4-((5-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-3-氯吡啶-2-基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺；
-(S)-1-(3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(3-(3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(6-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡啶并[2,3-b]吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡啶并[2,3-b]吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-1-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(8-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
-(S)-6-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-2-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
-(S)-6-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-5-氯-3-(2,3-二氯苯基)-2-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
-(S)-1-(5-((8-氟喹啉-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((3-氟-2-甲基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(5-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-胺；
-(S)-1-(5-((2,3-二氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(6-((2,3-二氯苯基)硫代)吡啶-3-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(3-(2,3-二氯苯基)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-6-(1′-氨基-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-2-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
-(S)-6-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-2,5-二甲基嘧啶-4(3H)-酮；
-(S)-1-(3-(3-氟-2-甲基吡啶-4-基)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
-(S)-1-(6-(2,3-二氯苯氧基)吡啶-3-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺；
或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体。
化合物(S)-1-(5-((3-氟-2-甲基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-胺或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体也在本发明的范围内。
式(I*)的化合物也在本发明的范围内：
其中X1、X2、X3、X4、Cy和R4如上所定义。
更优选地，该化合物具有以下立体化学：
本发明的化合物可以前药的形式使用。该前药可以是生物活性物质的药理学惰性衍生物(“母体药物”或“母体分子”，即本发明的化合物)，其需要在体内转化以释放活性药物，并且与母体药物分子相比具有改善的递送性质。体内转化可以是例如某些代谢过程的结果，例如羧酸、磷酸或硫酸酯的化学或酶促水解，或易感官能团的还原或氧化。
本发明还包括本发明化合物的所有合适的同位素变体。可以掺入本公开的化合物中的同位素的实例包括分别诸如2H，3H，13C，14C，15N，17O，18O，31P，32P，35S，18F和36Cl的同位素。本公开的某些同位素变体，例如其中掺有放射性同位素如3H或14C的那些，可用于药物和/或底物的组织分布研究。此外，用同位素(诸如氘2H)取代可提供某些由于更高的代谢稳定性而产生的治疗优势。本发明化合物的同位素变体可以通过常规技术一般地制备，诸如采用合适的试剂的同位素变体通过示例性方法和在说明书和实施例中描述的制备过程制备。
本发明在其范围内包括式(I)的化合物或相关盐的溶剂化物，例如水合物，醇化物等。
本文公开的化合物可以不同的异构体形式存在，所有这些均被本发明涵盖。具体地，对本发明化合物的任何提及意在包括其所有可能的共振形式。
本发明的化合物可以具有不对称中心、手性轴和手性平面(如描述于：E.L.Eliel和S.H.Wilen，《碳化合物的立体化学》(Stereochemistry of Carbon Compounds)，约翰父子出版公司(John Wiley&Sons)，纽约，1994，第1119-1190页)，且以外消旋体、外消旋混合物和个别非对映体形式存在，所有可能的异构体及其混合物，包括光学异构体和阻转异构体，所有这些立体异构体都包括在本发明中。本发明包括外消旋混合物、相对和绝对立体异构体、以及相对和绝对立体异构体的混合物。
阻转异构体是由于绕单键旋转受阻而产生的立体异构体：化合物77、77a、77b、78、78a和78b是根据本发明所述阻转异构体的具体实例。
本发明化合物和中间体的纯立体异构形式可以通过应用本领域已知的方法获得，并且意在被本发明的范围所涵盖。特别地，“纯立体异构形式”或“立体异构纯”是指具有至少80％，优选至少85％的过量立体异构体的化合物。例如，对映异构体可以通过其非对映异构体盐的选择性结晶或通过使用手性固定相的色谱技术彼此分离。纯的立体化学异构形式也可以衍生自合适起始原料的相应的纯的立体化学异构形式，前提条件是该反应是立体定向地发生的。术语“对映体纯”应以类似方式解释，考虑到对映体比例。
当任何变量(例如R1和R2等)在任何组成部分中多次出现时，其在各次出现时的定义相对于其它每次出现时都是独立的。而且，仅当取代基和变量的组合产生稳定的化合物时，这些组合才是被允许的。从取代基引入环系统的线表示所指示的键可以连接至任何可被取代的环原子。如果环系统是多环的，则意味着该键仅与近端环上的任何合适的碳原子连接。
可以理解，本发明化合物的取代基和取代方式可以由本领域普通技术人员选择，以提供化学上稳定并且可以容易地通过本领域已知技术以及下述那些方法由可以容易获得的起始物质合成的化合物。如果取代基本身被多于一个基团取代，则可以理解，这些多个基团可以在相同的碳上或在不同的碳上，只要能够形成稳定的结构即可。短语“任选地被取代(的)”应被认为等同于短语“未被取代或被一个或多个取代基取代(的)”，在这种情况下，优选的实施方式将具有零至三个取代基。更特别地，存在0-2个取代基。
表述“一个或多个取代基”具体地是指1、2、3、4或更多个取代基，具体地是指1、2、3或4个取代基，更具体地是指1、2或3个取代基。
如本文所用，“X4是键”表示在通式(I)中，Cy通过单键直接连接至R4。
如本文所用，“烷基”旨在包括具有指定碳原子数的支化和直链饱和脂族烃基。例如，“C1-6烷基”定义为包括具有以直链或支化排列的1、2、3、4、5、6个碳原子的基团，并且具体包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基等。优选地，“C1-6烷基”是指“C1-4烷基”或“C1-3烷基”。“C1-4烷基”被定义为包括具有以直链或支化排列的1、2、3或4个碳原子的基团。例如，“C1-4烷基”具体包括甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，叔丁基，异丁基等。“C1-3烷基”被定义为包括具有以直链或支化排列的1、2或3个碳的基团。例如，“C1-3烷基”具体包括甲基，乙基，正丙基，异丙基等。优选的烷基基团是甲基、乙基、异丙基、叔丁基或异丁基。
如本文所用，“烷氧基”表示通过氧桥连接的所示碳原子数的烷基基团。因此，“烷氧基”涵盖以上烷基的定义。C1-6烷氧基基团优选为直链或支化的C1-4烷氧基，更优选C1-3烷氧基基团，还更优选C1-2烷氧基基团。合适的烷氧基基团的实例包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基或叔丁氧基。优选的烷氧基基团包括甲氧基，乙氧基和叔丁氧基。
如本文所用，术语“卤代C1-6烷基”和“卤代C1-6烷氧基”和其变体(诸如“C1-6卤代烷基”)是指其中一个或多个(尤其是1-3个)氢原子已被卤素原子(尤其是氟或氯原子)替代的C1-6烷基或C1-6烷氧基基团。卤代C1-6烷氧基基团优选为直链或支化的卤代C1-4烷氧基基团，更优选卤代C1-3烷氧基基团，还更优选卤代C1-2烷氧基基团，例如OCF3、OCHF2、OCH2F、OCH2CH2F、OCH2CHF2或OCH2CF3，最特别地是OCF3或OCHF2。卤代C1-6烷基基团优选是直链或支化的卤代C1-3烷基基团，更优选地是卤代C1-2烷基基团，例如CF3、CHF2、CH2F、CH2CH2F、CH2CHF2、CH2CF3或CH(CH3)CF3，且更特别地是CF3、CHF2或CH(CH3)CF3。
如本文所用，术语“芳基”或“芳族环”是指包含碳原子和氢原子的单环或多环芳族环。如果指示，则此类芳族环可包含一个或多个杂原子，则也称为“杂芳基”或“杂芳族环”，优选地是独立地选自氮，氧和硫的1-3个，优选地是氮的杂原子。如本领域技术人员所公知的，杂芳基环比其全碳对位部分具有更少的芳族特性。因此，出于本发明的目的，杂芳基基团仅需要具有一定程度的芳族特性。优选地，芳基或杂芳基基团的环组分包含5或6个成员(即原子)。同样优选地，芳基或杂芳基基团是多环芳族环。芳基基团的说明性实例是任选取代的苯基。根据本发明所述杂芳基的说明性实例包括任选取代的噻吩，噁唑，噻唑，噻二唑，咪唑，吡唑，嘧啶，吡嗪和N-氧化吡啶。因此，任选地包含一个或多个杂原子，例如一个或两个杂原子的单环芳基的实例是5元或6元芳基或杂芳基基团，诸如但不限于苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、噻二唑基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、呋喃基、异噁唑基、噁二唑基和噁唑基。任选地包含一个或多个杂原子，例如一个或两个杂原子的多环芳族环的实例有：8-10元芳基或杂芳基基团，诸如但不限于，苯并咪唑基、苯并呋喃二酰基、苯并呋喃基、苯并呋吖基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并噁唑啉基(benzoxazolonyl)、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并二噁唑基、苯并异噁唑基，苯并异噻唑基，吲哚基，吲哚啉基、吲嗪基、吲唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、异吲哚啉基、异喹啉基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、喹嗪基、萘基、萘啶基和二氮杂萘基。根据本发明所述多环杂芳族环的其他实例是2H-吡唑并[3,4-b]吡啶、吲唑、2H-吡唑并[3,4-c]吡啶、6H-吡咯并[3,4-b]吡啶、6H-吡咯并[3,4-b]吡嗪、6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶、2H-吡唑并[3,4-d]嘧啶、1,5-萘啶、咪唑并[1,2-a]吡啶。根据本发明所述优选的芳基是苯基。根据本发明所述优选的杂芳基是吡啶基。
表述“任选取代的芳基”、“任选取代的杂芳基”、“任选取代的芳氧基”、“任选取代的杂芳基-C1-6烷基”、“任选取代的杂芳基-C1-6烷氧基”一般是指芳基、杂芳基或芳氧基基团，其中芳族或杂芳族环可以被一个或多个取代基取代。所述取代基的实例包括烷基、烷氧基、氨基、三氟甲基、芳基、杂芳基、羟基、羧基烷基等。
芳基或杂芳基环也可以具有部分不饱和结构，并且因此可以衍生自前述芳基或杂芳基基团的部分氢化类似物，而且还可以衍生自与环烷基或杂环烷基环稠合的芳基或杂芳基环。所述环还可以包含选自SO、SO2和C＝O的基团。所述部分不饱和芳基或杂芳基衍生物的实例包括2,3-二氢-1H-茚、2,3-二氢-1H-茚-1-酮、2,3-二氢异吲哚-1-酮、吲哚啉、1,2,3,4-四氢喹啉、1,2,3,4-四氢异喹啉、异吲哚啉、1-甲基-吲哚-2-酮、二氢喹唑啉、二氢喹喔啉、2,3-二氢苯并呋喃、苯并[d][1,3]二噁茂、1,3-二氢异苯并呋喃、3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪、2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂、喹唑啉-4(3H)-酮、4,5,6,7-四氢-1H-吲唑、4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪、2,3,4,5-四氢-1H-苯并[d]氮杂6′,7′-二氢螺[氮杂环丁烷-3,5′-吡咯并[1,2-a]咪唑]、2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英、苯并[d]噁唑-2(3H)-酮、2H-苯并[b][1,4]噁嗪-3(4H)-酮、吲哚啉-2-酮、1,2,3,4-四氢-1,5-萘啶、3′,4′-二氢-2′H-螺[氮杂环丁烷-3,1′-吡咯并[1,2-a]吡嗪]、3,4-二氢喹啉-2(1H)-酮、4-甲基-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-3(4H)-酮、喹喔啉-2(1H)-酮、4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、(6aS)-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪、3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-基、二氢呋喃并[2,3-b]吡啶基等。
应该注意的是，在整个说明书中所使用的定义中，可以存在各种杂环的不同异构体。例如，吡咯基可以是1H-吡咯基或2H-吡咯基。
还应该注意的是，在定义中使用的任何分子部分上的基团位置可以在该部分上的任何位置，只要它是化学稳定的即可。例如，吡啶基包括2-吡啶基，3-吡啶基，4-吡啶基。
如本文所用，术语“卤素”指氟、氯、溴和碘，其中优选氟、氯和溴。
术语“杂原子”是指在本文定义的环结构或饱和主链中除碳或氢以外的原子。典型的杂原子包括N(H)、O、S。
如本文所用，表述“C1-6烷基-NH2”、“C1-6烷基-NH(CH3)”、“C1-6烷基-N(CH3)2”、“C1-6烷基-NHCOCH3”是指如上所定义的C1-6烷基，其中任一个氢分别被式NH2、NH(CH3)、N(CH3)2或NHCOCH3的基团取代。优选地，所述“C1-6烷基-”是“C1-3烷基-”，因此涵盖有1、2或3个碳原子的烷基。
本文所用的表述“NH-C1-6烷基”、“N(C1-6烷基)2”是指氨基取代基，其中两个氢中的任一个被C1-6烷基链取代。
本文所用的表述“饱和5元或6元杂环”是指含有至少一个选自S、N或O、优选N的杂原子的饱和5元或6元环。所述饱和5元或6元杂环的实例为吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪、四氢呋喃、四氢吡喃等。
本发明包括式(I)和式(II)–(VI)中任一种化合物的游离碱及其药学上可接受的盐和立体异构体。本文例举的某些具体化合物是胺化合物的质子化盐。含有一个或多个N原子的化合物可以在任何一个，一些或全部N个原子上质子化。术语“游离碱”是指非盐形式的胺化合物。所涵盖的药学上可接受的盐不仅包括对于本文所述的具体化合物所例举的盐，而且还包括式(I)的化合物的游离形式的所有典型的药学上可接受的盐。可以使用本领域已知的技术分离所述特定盐化合物的游离形式。例如，可以通过用合适的稀释水性碱溶液例如稀释水性NaOH，碳酸钾，氨水和碳酸氢钠对盐进行处理来使游离形式再生。所述游离形式可能在某些物理性质(例如在极性溶剂中的溶解度)上与它们各自的盐形式有所不同，但是出于本发明的目的，酸式盐和碱式盐在药学上等同于它们各自的游离形式。
本发明化合物的药学上可接受的盐可以通过常规化学方法由含有碱性或酸性部分的本发明化合物合成。通常，碱性化合物的盐通过离子交换色谱或通过使游离碱与化学计量的量或与过量的形成所需盐的无机或有机酸在合适的溶剂或溶剂的各种组合中反应来制备。类似地，酸性化合物的盐通过与合适的无机或有机碱反应来形成。在一个优选的实施方式中，本发明的化合物具有至少一个酸性质子，并且相应的钠盐或钾盐可以例如通过与合适的碱反应而形成。
因此，本发明化合物的药学上可接受的盐包括通过使碱性速溶(instant)化合物与无机或有机酸或酸性化合物和无机或有机碱反应而形成的本发明化合物的常规无毒盐。例如，常规的无毒盐包括衍生自无机酸的盐，所述无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等；以及由有机酸制备的盐、所述有机酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、双羟萘酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、磺胺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙磺酸、三氟乙酸等。常规的无毒盐还包括衍生自无机碱的那些，诸如氢氧化钾、氢氧化钠、氢氧化镁或氢氧化钙，以及由有机碱诸如乙二胺、赖氨酸、三甲胺、葡甲胺等制备的盐。优选地，本发明的药学上可接受的盐包含一当量的式(I)的化合物和1、2或3当量的无机或有机酸或碱。更特别地，本发明的药学上可接受的盐是酒石酸盐，三氟乙酸盐或氯化物盐。
当本发明的化合物为酸性时，合适的“药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的无毒碱，包括无机碱和有机碱制备的盐。衍生自无机碱的盐包括铝、铵、钙、铜、铁、亚铁、锂、镁、锰盐、亚锰、钾、钠、锌等。特别优选的是铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。衍生自药学上可接受的有机无毒碱的盐包括以下的盐：伯、仲和叔胺，取代胺，包括天然存在的取代胺，环胺和碱性离子交换树脂，例如精氨酸，甜菜碱咖啡因，胆碱，N,N1-二苄基乙二胺，二乙胺，2-二乙氨基乙醇，2-二甲氨基乙醇，乙醇胺，乙二胺，N-乙基吗啉，N-乙基哌啶，葡糖胺，氨基葡萄糖，组氨酸，肼苯二胺(hydrabamine)，异丙胺，赖氨酸，甲基葡糖胺，吗啉，哌嗪，哌啶，聚胺树脂，普鲁卡因，嘌呤，可可碱，三乙胺，三甲胺，三丙胺，氨丁三醇等。
上述药学上可接受的盐和其它典型的药学上可接受的盐的制备更详细地描述于Berg等,“Pharmaceutical Salts(药用盐),”J.Pharm.Sci.,1977:66:1-19。
还应注意，本发明的化合物潜在地是内盐或两性离子，因为在生理条件下，化合物中的去质子化的酸性部分，例如羧基，可以是阴离子的，并且该电荷可以被质子化或烷基化碱性部分(诸如季氮原子)的阳离子电荷内部平衡掉。
优选地，本发明的化合物，包括其盐、立体异构体和溶剂化物，是SHP2抑制剂，这意味着例如它们可以抑制SHP2的活性或功能。然后，本发明涉及用作至少一种SHP2功能的抑制剂的化合物，以及抑制至少一种SHP2功能的方法，其包括将SHP2与本文所述的化合物接触的步骤。
“SHP2”是指“Src同源性-2-磷酸酶”，也称为SH-PTP2、SH-PTP3、Syp、PTPID、PTP2C、SAP-2或PTPN11。
SHP2的功能多种多样，因为SHP2参与多种信号转导过程，诸如RAS-ERK、JAK-STAT、PI3K-AKT、NF-κB和mTOR通路。SHP2主要通过活化RAS-ERK信号转导通路来调节癌细胞存活和增殖(T.Matozaki，Y.Murata，Y.Saito，H.Okazawa，H.Ohnishi，Cancer Sci，100(2009)，第1786-1793页)。在RAS-ERK通路中，SHP2作为上游的正向调节物，促进RAS-RAF-ERK激酶级联信号转导。因此，抑制SHP2会导致ERK去磷酸化并抑制RAS-RAF-ERK通路的促癌功能，从而抑制癌细胞生长并诱导细胞凋亡。近期，Chen等(Y.N.Chen，M.J.LaMarche，H.M.Chan，P.Fekkes，J.Garcia-Fortanet，M.G.Acker等，Nature，535(2016)，第148-152页)发现对SHP2耗竭敏感的癌细胞系也对EGFR耗竭敏感，这验证了RTK驱动的癌细胞依赖SHP2生存的报道。此外，最近的研究表明，SHP2是突变的KRAS驱动的癌症生长所必需的，而野生型KRAS扩增的胃食管癌可以通过联合抑制SHP2和MEK来控制(S.Mainardi，A.Mulero-Sanchez，A.Prahallad，G.Germano，A.Bosma，P.Krimpenfort等，Nat Med，24(2018)，第961-9页；D.A.Ruess，G.J.Heynen，K.J.Ciecielski，J.Ai，A.Berninger，D.Kabacaoglu等，Nat Med，24(2018)，第954-960页；G.S.Wong，J.Zhou，J.B.Liu，Z.Wu，X.Xu，T.Li等，Nat Med，24(2018))，第968-977页)。作为多种受体的下游靶标，SHP2还参与T细胞中的信号转导(M.Tajan，A.de Rocca Serra，P.Valet，T.Edouard，A.Yart，Eur J Med Genet，58(2015)，第509-525页；R.J.Salmond，D.R.Alexander，Trends Immunol，27(2006)，第154-160页)。它是PD-1信号转导通路的下游分子，不仅抑制T细胞活化，还导致T细胞无反应性。T细胞中的SHP2缺陷引发了小鼠中针对结肠炎相关癌症的抗肿瘤免疫反应(W.Liu，W.Guo，L.Shen，Z.Chen，Q.Luo，X.Luo等，Oncotarget，8(2017)，第7586-7597页)。因此，靶向SHP2可恢复甚至增强T细胞功能。
SHP2抑制可以通过以下方式评估或测量：细胞表型(例如增殖表型以及对EGFR和c-MET共抑制的抗性，BTBC细胞中的间充质表型)、细胞增殖、SHP2活性、活性SHP2产生的生化输出的变化、SHP2的表达或SHP2与天然结合配偶体的结合，这些都可作为SHP2抑制的测量指标进行监测。具体地，SHP2活性或功能的抑制可以通过IC50(将SHP2的活性降低至半最大水平的抑制剂的浓度)来测量，如在下文的试验中或在例如Chen等，Nature(535)2016或Bagdanoff等，J.Med.Chem，2019，62，1781-1792报道的SHP2抑制的生化测定中所描述的。优选地，本发明的化合物对SHP2表现出低于或等于10μM的IC50。优选的化合物表现出的对SHP2的酶促IC50(如下文所定义)低于或等于3μM(优选低于或等于0.5μM或在0.5μM至3μM)和/或，在基于细胞的试验中表现出的SHP2抑制的IC50(如下文所定义)低于或等于5μM(优选低于或等于1μM或在1μM至5μM)。那么，本发明的化合物，包括其盐、互变异构体、立体异构体和溶剂化物，可用于抑制SHP2活性的方法中。换句话说，它们可用于预防和/或治疗能通过抑制SHP2来改善的任何病症。
在一个优选的实施方式中，如上定义的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体用于抑制SHP2活性。对SHP2活性的抑制可以相对于适当的对照来测量，诸如受SHP2活性介导的疾病或病症影响的受对象或经历了SHP2活性介导的疾病或病症的整个治疗过程中的对象。优选地，相对于适当的对照，本发明的化合物抑制SHP2活性至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％。更优选地，相对于适当的对照，本发明的化合物抑制SHP2活性约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％。
还更优选地，相对于适当的对照，本发明的化合物抑制SHP2活性多于90％，例如约92％、94％、95％、98％、99％或100％。
因此，本发明的化合物可用于治疗疾病和用于进行生物试验、细胞试验、生化试验等。
本发明的一个目的是用于医疗用途的如上所定义的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体。
优选地，如上定义的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体用于抑制SHP2活性。SHP2活性的抑制进一步导致ERK去磷酸化和RAS-RAF-ERK通路促癌功能的抑制。然后，SHP2活性的抑制可以通过ERK去磷酸化来测量，其中ERK磷酸化可以通过本领域已知的任何方法来评估，例如如下文实施例中所描述的。ERK的去磷酸化可以参考任何适当的对照来测量。
更优选地，如上所定义的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体用于治疗和/或预防由SHP2活性介导的疾病或病症。优选地，由SHP2活性介导的疾病或病症选自以下组：癌症、心血管疾病、免疫性病症、自体免疫病症、纤维化、眼部病症、系统性红斑狼疮、糖尿病、中性粒细胞减少症及其组合。还优选地，由SHP2的活性介导的疾病或病症选自以下组：努南综合征、豹纹综合征、幼年型粒单核细胞白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、头颈部鳞状细胞癌、急性髓系白血病、乳腺癌、食道肿瘤、肺癌、结肠癌、头癌、胃部癌、淋巴瘤、成胶质细胞瘤、胃癌、胰腺癌及其组合。优选地，任何所述癌症是原发性癌症或癌症转移。
由SHP2活性介导的疾病或病症表示对象中的病况，其中调控，尤其是抑制SHP2活性可以预防、抑制、改善、减缓或根除该病况和/或其症状。所述疾病或病症的治疗可以包括向有需要的对象给予治疗有效量的根据本发明所述式(I)的化合物。
在由SHP2活性介导的疾病或病症中，经常在N-SH2/PTP接合部位(例如E76D/E76K)观察到突变，导致组成型活性蛋白和异常增殖。携带“PTPN11突变”的癌症包括但不限于：N58Y；D61Y，V；E69K；A72V，T，D；E76G，Q，K(全部)；G60A；D61Y；E69V；F71K；A72V；T73I；E76G，K；R289G；G503V(AML)；G60R，D61Y，V，N；Y62D；E69K；A72T，V；T73I；E76K，V，G，A，Q；E139D；G503A，R；Q506P(JMML)；G60V；D61V；E69K；F71L；A72V；E76A(MDS)；Y63C(CMML)；Y62C；E69K；T507K(神经母细胞瘤)；V46L；N58S；E76V(肺癌)；R138Q(黑色素瘤)；E76G(结肠癌)。本发明的化合物能在低浓度下表现出对野生型SHP2的亲和力，并且还对蛋白质的突变形式具有活性。
本发明的另一个方面涉及如上文所定义的本发明的化合物，包括其任何药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体，其用于预防/治疗SHP2介导的病症和/或由RAS-RAF-ERK通路的致癌功能介导的病症的方法。
本发明的另一个方面涉及预防/治疗SHP2介导的病症的方法，该方法包括以下步骤：向有其需要的患者给予治疗有效量的本发明化合物，包括其任何药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体，如上文所定义。在另一个方面，本发明涉及预防/治疗SHP2介导的病症的方法，该方法包括以下步骤：向有其需要的患者给予如下文进一步定义的治疗有效量的化疗剂与治疗有效量的本发明的化合物。
本发明的另一方面涉及如上文所定义的本发明化合物，包括其任何药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体在预防/治疗SHP2介导的病症中的应用。
在本发明的又一方面，提供了如上所定义的化合物、盐、溶剂化物、立体异构体，其用于治疗和/或预防选自以下组的疾病或病症：癌症、心血管疾病、免疫性病症、纤维化、眼部病症、系统性红斑狼疮、糖尿病、中性粒细胞减少症及其组合。优选地，所述疾病或病症选自以下组：努南综合征、豹纹综合征、幼年型粒单核细胞白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、头颈部鳞状细胞癌、急性髓系白血病、乳腺癌、食道肿瘤、肺癌、结肠癌、头癌、胃部癌、淋巴瘤、成胶质细胞瘤、胃癌、胰腺癌及其组合。优选地，癌症是原发癌或癌症转移。
在某些实施方式中，本发明涉及前述应用/方法，其中所述病症选自努南综合征(NS)和豹纹综合征(LS)。
在其它的实施方式中，本发明涉及前述应用/方法，其中所述SHP2介导的病症是由于细胞增殖失调引起的病症，包括癌症。癌症可能是激素依赖性的或激素抵抗的，诸如乳腺癌。优选地，癌症是RTK驱动的或KRAS驱动的，诸如KRAS扩增的胃食管癌。在某些实施方式中，癌症是实体瘤。在其他实施方式中，癌症是淋巴瘤或白血病或神经胶质瘤。在某些实施方式中，癌症是本文公开的或本领域已知的癌症的耐药表型。癌症可以是原发性或转移性的。肿瘤侵袭、肿瘤生长、肿瘤转移和血管生成也可以使用本文公开的组合物和方法来治疗。还可以使用本文公开的组合物和方法来治疗癌前瘤形成。
本发明的化合物可用于治疗选自但不限于以下的癌症：幼年型粒单核细胞白血病(JMML)；急性髓系白血病(AML)；骨髓增生异常综合征(MDS)；B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)；神经母细胞瘤细胞；食道癌；乳腺癌；肺癌；结肠癌；胃癌(gastric cancer)、头颈癌；卵巢癌；前列腺癌；以下部位癌症：口腔和咽部(唇、舌、口、喉、咽)、胃部(stomach)、小肠、大肠、结肠、直肠、肝和胆道；胰腺癌、骨癌、结缔组织癌、皮肤癌、子宫颈癌、子宫癌、子宫内膜癌、睾丸癌、膀胱癌、肾脏癌和其他泌尿组织癌，包括肾细胞癌(RCC)；胃食管癌(优选KRAS扩增的胃食管癌)、眼部癌、脑癌、脊髓癌、中枢和周围神经系统的其他组成部分以及脑膜等相关结构的癌；甲状腺和其他内分泌腺癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤和造血系统噁性肿瘤，包括白血病慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性粒细胞白血病(CML)、急性粒细胞白血病(AML)、慢性粒单核细胞白血病(CMML)和包括淋巴细胞、粒细胞和单核细胞的淋巴瘤。能使用本发明的化合物和方法治疗的其他类型的癌症包括但不限于腺癌、血管肉瘤、星形细胞瘤、听神经瘤、间变性星形细胞瘤、基底细胞癌、母细胞瘤、软骨肉瘤、绒毛膜癌、脊索瘤、颅咽管瘤、皮肤黑色素瘤、囊腺癌、内皮肉瘤、胚胎癌、室管膜瘤、尤因氏肿瘤、上皮癌、纤维肉瘤、胃癌、泌尿生殖道癌、多形性胶质母细胞瘤、血管母细胞瘤、肝细胞癌、肝癌、卡波西肉瘤、大细胞癌、平滑肌肉瘤、白血病、脂肪肉瘤、淋巴系统癌、淋巴瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、甲状腺髓样癌、髓母细胞瘤、脑膜瘤间皮瘤、骨髓瘤、粘液肉瘤神经母细胞瘤、神经纤维肉瘤、少突神经胶质瘤、成骨肉瘤、上皮性卵巢癌、乳头状癌、乳头状腺癌、副神经节瘤、甲状旁腺肿瘤、嗜铬细胞瘤、松果体瘤、浆细胞瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、皮脂腺癌、精原细胞瘤、皮肤癌、黑色素瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞癌、汗腺癌、滑膜瘤、甲状腺癌、葡萄膜黑色素瘤、肾母细胞瘤、间变性大细胞淋巴瘤、结肠炎相关癌症。
本发明的化合物可用于治疗与SHP2活性异常相关的任何其他疾病或病况。因此，本发明的其它方面涉及一种治疗患者的方法，所述患者优选是人，患者患有选自以下的病症：NS；LS；JMML；AML；MDS；B-ALL；神经母细胞瘤细胞；食道癌；乳腺癌；肺癌；结肠癌；胃癌；头颈癌。本发明还涉及本发明的化合物在制备用于治疗选自以下病症的药物中的应用：NS；LS；JMML；AML；MDS；B-ALL；神经母细胞瘤细胞；食道癌；乳腺癌；肺癌；结肠癌；胃癌；头颈癌。
本发明的化合物，包括其任何药学上可接受的盐、互变异构体、溶剂化物或立体异构体，可有效结合能用于预防/治疗由SHP2活性介导的疾病或病症的任何其他已知疗法。此类疗法可包括放疗。此类疗法还可以包括给予另一种药理活性化合物，或两种或更多种其他药理活性化合物，尤其是在预防/治疗癌症中具有活性的化合物，也称为“抗癌药物”或“化疗剂”。例如，如上定义的本发明的化合物，包括其任何药学上可接受的盐、互变异构体、溶剂化物或立体异构体，可以与任何一种或多种其他药理活性化合物组合同时、依次或分开给予。为了同时给予，本发明的化合物和另一种或多种药理活性化合物可以配制在相同的组合物中。
能与本发明的化合物组合的抗癌药物的类别包括但不限于：烷基化剂、抗代谢剂、抗有丝分裂剂、检查点抑制剂、植物生物碱和萜类化合物、拓扑异构酶抑制剂、细胞毒性抗生素、芳香化酶抑制剂、血管生成抑制剂、抗类固醇和抗雄激素、mTOR抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂等。化疗剂包括例如有丝分裂抑制剂(诸如紫杉烷、长春花生物碱、紫杉醇、多西紫杉醇、长春新碱、长春花碱、长春瑞滨或长春氟宁)，和其他抗癌剂，例如顺铂、5-氟尿嘧啶或5-氟-2-4(1H,3H)-嘧啶二酮(5FU)、氟他胺或吉西他滨。此类组合可以在治疗中提供显著的优势，包括协同活性。
烷基化剂是通过在DNA分子的鸟嘌呤碱基上添加烷基基团来发挥作用的化合物，其防止双螺旋的链按其应有的方式连接，从而导致DNA链断裂并影响癌细胞的繁殖能力。抗代谢药是干扰DNA合成所需的一种或多种酶或其反应的药物。抗有丝分裂剂是一种通过停止有丝分裂来阻断细胞生长的药物。检查点抑制剂是一种免疫疗法，其阻断停止免疫系统攻击癌细胞的蛋白质。拓扑异构酶抑制剂是阻断拓扑异构酶(拓扑异构酶I和II)作用的化合物，拓扑异构酶是一种在正常细胞周期中通过催化DNA链磷酸二酯主链的断裂和重新连接来控制DNA结构变化的酶。芳香化酶抑制剂是一类通过抑制芳香酶的作用来发挥作用的药物，芳香化酶通过芳香化过程将雄激素转化为雌激素。血管生成抑制剂是抑制新血管生长的物质，并用于治疗癌症和其他涉及血管增殖的疾病。mTOR抑制剂是一类抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的药物，mTOR是属于磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)相关激酶(PIKK)家族的丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶。mTOR通过mTORC1和mTORC2两种蛋白质复合物的形成和信号转导来调节细胞代谢、生长和增殖。最成熟的mTOR抑制剂是所谓的雷帕洛斯(rapalogs)(雷帕霉素及其类似物)，其在针对各种肿瘤类型的临床试验中显示出肿瘤反应。
因此，本发明的一个优选目的是如上所定义的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体与至少一种其它的治疗剂的联合应用。
在任何情况下，多种治疗剂(其中至少一种是本文公开的化合物)可以任何顺序或甚至同时给予。
优选地，所述至少一种其它的治疗剂选自下组：
(a)烷基化剂，其包括但不限于卡莫司汀、苯丁酸氮芥(LEUKERAN)、顺铂(PLATIN)、卡铂(PARAPLATIN)、奥沙利铂(ELOXATIN)、链脲佐菌素(ZANOSAR)、白消安(MYLERAN)、达卡巴嗪、异环磷酰胺、洛莫司汀(CCNU))、美法仑(ALKERAN)、普卡巴嗪(MATULAN)、替莫唑胺(TEMODAR)、噻替帕和环磷酰胺(ENDOXAN)；
(b)抗代谢药，其包括但不限于克拉屈滨(LEUSTATIN)、巯基嘌呤(PURINETHOL)、硫鸟嘌呤、喷司他丁(NIPENT)、胞嘧啶阿拉伯糖苷(阿糖胞苷，ARA-C)、吉西他滨(GEMZAR)、氟尿嘧啶(5-FU，CARAC)、卡培他滨(XELODA)、亚叶酸(FUSILEV)、甲氨蝶呤(RHEUMATREX)和雷替曲塞；
(c)抗有丝分裂剂，其通常是植物生物碱和萜类化合物或其衍生物，包括但不限于紫杉烷类，诸如多西他赛(TAXITERE)和紫杉醇(ABRAXANE，TAXOL)；长春花生物碱，诸如长春新碱(ONCOVIN)、长春花碱、长春地辛、长春瑞滨(NAVELBINE)和长春氟宁；
(d)检查点抑制剂，诸如抗PD-1或PD-L1抗体派姆单抗(KEYTRUDA)、纳武单抗(OPDIVO)、MEDI4736和MPDL3280A；抗CTLA-4抗体伊匹单抗(YERVOY)；靶向LAG3(淋巴细胞活化基因3蛋白)、KIR(杀伤细胞免疫球蛋白样受体)、4-1BB(肿瘤坏死因子受体超家族成员9)、TIM3(含T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域的蛋白质3)和/或OX40(肿瘤坏死因子受体超家族成员4)的抑制剂；
(e)拓扑异构酶抑制剂，其包括但不限于喜树碱(CTP)、伊立替康(CAMPTOSAR)、拓扑替康(HYCAMTIN)、替尼泊苷(VUMON)和依托泊苷(EPOSIN)；
(f)细胞毒性抗生素，其包括但不限于放线菌素D(更生霉素，COSMEGEN)、博莱霉素(BLENOXANE)、阿霉素(ADRIAMYCIN)、柔红霉素(CERUBIDINE)、表柔比星(ELLENCE)、氟达拉滨(FLUDARA)、伊达比星、丝裂霉素(MITOSOL)，米托蒽醌(NOVANTRONE)、普卡霉素；芳香化酶抑制剂，其包括但不限于氨鲁米特、阿那曲唑(ARIMIDEX)、来曲唑(FEMARA)、伏氯唑(RIVIZOR)和依西美坦(AROMASIN)；
(g)血管生成抑制剂，其包括但不限于金雀异黄素、舒尼替尼(SUTENT)和贝伐单抗(AVASTIN)；
(h)抗类固醇和抗雄激素，诸如氨鲁米特(CYTADREN)、比卡鲁胺(CASODEX)、环丙孕酮、氟他胺(EULEXIN)和尼鲁米特(NILANDRON)；
(i)酪氨酸激酶抑制剂，其包括但不限于伊马替尼(GLEEVEC)、厄洛替尼(TARCEVA)、拉帕替尼(TYKERB)、索拉非尼(NEXAVAR)和阿西替尼(INLYTA)；
(j)mTOR抑制剂，诸如依维莫司、替西罗莫司(TORISEL)和西罗莫司；单克隆抗体，诸如曲妥珠单抗(HERCEPTIN)和利妥昔单抗(RITUXAN)；
(k)其他药剂，诸如安吖啶；卡介苗(B-C-G)疫苗；布舍瑞林(ETILAMIDE)；氯喹(ARALEN)；氯膦酸盐、帕米膦酸盐和其他双膦酸盐；秋水仙碱；去甲氧绿胶霉素；二氯乙酸盐；雌莫司汀；非格司亭(NEUPOGEN)；氟氢可的松(FLORINEF)；戈舍瑞林(ZOLADEX)；干扰素；亚叶酸；亮丙瑞林(LUPRON)；左旋咪唑；氯尼达明；美司钠；二甲双胍；米托坦(o,p′-DDD，LYSODREN)；诺考达唑；奥曲肽(SANDOSTATIN)；哌立福辛；卟吩姆钠(尤其是与光疗和放射疗法结合使用)；苏拉明；他莫昔芬；二氯二茂钛；维A酸；合成代谢类固醇，诸如氟甲睾酮(HALOTESTIN)；雌激素，诸如雌二醇、己烯雌酚(DES)和双烯雌酚；孕激素，诸如醋酸甲羟孕酮(MPA)和甲地孕酮；睾酮；5-氟-2-4(1H,3H)-嘧啶二酮及其组合。
本发明进一步提供包含本发明化合物的药物制剂。具体地，本发明的另一目的是药物组合物，其包含单独或与至少一种其它的治疗剂组合的如上定义的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体，以及至少一种药学上可接受的赋形剂。优选地，药物组合物中的所述至少一种其它的治疗剂选自上文指出的那些。
在一个优选的实施方式中，本发明的药物组合或组合物用于治疗和/或预防如本文定义的疾病或病症，尤其是由SHP2活性介导的疾病或病症和/或选自以下组的疾病或病症：癌症、心血管疾病、免疫性病症、纤维化、眼部病症、系统性红斑狼疮、糖尿病、中性粒细胞减少症及其组合。
本发明还提供了包含一种或多种本发明化合物和药学上可接受的运载体的药物组合物。包含活性成分的药物组合物可以是适合口服使用的形式，例如片剂、含片、锭剂、水性或油性混悬剂、可分散粉末剂或粒剂、乳剂、硬或软胶囊、糖浆剂或酏剂。可根据药物组合物制造领域已知的任意方法来制备本发明的组合物，所述组合物可以包含选自以下组的一种或多种试剂：甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂，以提供药学上精良的和可口的制剂。片剂含有活性成分和药学上可接受的无毒赋形剂的混合物，所述药学上可接受的无毒赋形剂适合用于制备片剂。这些赋形剂可以是：例如，惰性稀释剂(诸如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠)；成粒剂和崩解剂(诸如微晶纤维素)，交联羧甲纤维素钠，玉米淀粉或藻酸；粘合剂(诸如淀粉、明胶、聚乙烯吡咯烷酮或阿拉伯胶)；和润滑剂(例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉)。片剂可以是未包衣的，也可以通过已知技术进行包衣，以掩盖药物的不良味道或延迟胃肠道中的崩解和吸收，从而在更长的时间内提供持续的作用。例如，可以使用水溶性掩味材料(诸如羟丙基-甲基纤维素或羟丙基纤维素)，或延时材料(诸如乙基纤维素，乙酸丁酸纤维素)。
口服使用的制剂也可制备成其中混有活性成分与惰性固体稀释剂(例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土)的硬明胶胶囊，或其中混有活性成分与水溶性运载体(诸如聚乙二醇)或油性介质(例如花生油、液体石蜡或橄榄油)的软明胶胶囊。
水性悬浮液含有活性材料与适用于制造水性悬浮液的赋形剂的混合物。此类赋形剂是悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯基吡咯烷酮、黄芪树胶和阿拉伯胶；分散剂或湿润剂可以是天然产生的磷脂(例如卵磷脂)，或环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如十七烷基乙烯氧基十六烷醇(heptadecaethyleneoxycetanol))，或者环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物(诸如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯)，或者环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如聚乙烯山梨聚糖单油酸酯)。水性悬浮液也可含有一种或多种防腐剂(例如对羟基苯甲酸乙酯或者对羟基苯甲酸正丙酯)、一种或多种着色剂、一种或多种调味剂、以及一种或多种甜味剂(诸如蔗糖，糖精或阿斯巴甜)。
油性悬浮液可通过将活性成分悬浮于植物油(例如，花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或例如液体石蜡的矿物油中来制备。油性悬浮液可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可添加甜味剂(诸如如上所示的那些)和调味剂，以提供可口的口服制剂。这些组合物可以通过添加抗氧化剂例如丁基化羟基苯甲醚或α-生育酚来保存。
适用于通过加水制备水性悬浮液的可分散粉末和颗粒提供活性成分，其与分散剂或湿润剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合。合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂的例子通过上文所提及的那些进行列举。也可存在其它赋形剂，例如甜味剂、调味剂和着色剂。这些组合物可以通过添加抗氧化剂例如抗坏血酸来保存。
本发明的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油(例如橄榄油或落花生油)，或者是矿物油(例如液体石蜡)，或者是它们的混合物。合适的乳化剂可以是天然产生的磷脂，例如大豆卵磷脂，和衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，例如脱水山梨醇单油酸酯，以及所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。乳液还可以包含甜味剂、调味剂、防腐剂和抗氧化剂。
糖浆剂和酏剂可与甜味剂(例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖)一起配制。此类制剂还可以包含缓和剂、防腐剂、调味剂和着色剂以及抗氧化剂。
药物组合物可以是无菌可注射水性溶液的形式。可用的可接受载剂和溶剂是水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。
无菌注射制剂也可以是无菌注射水包油微乳剂，其中活性成分溶解在油相中。例如，可以首先将活性成分溶解在大豆油和卵磷脂的混合物中。然后将油溶液引入水和甘油的混合物中，并进行加工以形成微乳剂。
可通过局部推注将可注射溶液或微乳剂引入患者的血流中。或者，以保持本发明化合物的恒定循环浓度的方式给予溶液或微乳剂可能是有利的。为了维持这样的恒定浓度，可以使用连续的静脉内递送装置。此类装置的一个实例是Deltec CADD-PLUSTM5400型静脉泵。
药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌可注射水性或油性悬浮液的形式。该悬浮液可以根据已知技术使用上文已经提到的那些合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂来配制。无菌注射制剂也可以是配制在无毒的肠胃外可接受稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如配制在1,3-丁二醇中的溶液剂。此外，常将无菌的非挥发油用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可采用各种低刺激非挥发油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，注射剂的制备中还用到脂肪酸如油酸。
本发明的化合物也可以栓剂形式进行给予，用于药物的直肠给予。这些组合物可通过将药物与合适的无刺激性赋形剂混合进行制备，这些合适的无刺激性赋形剂在常温下是固体，但在直肠温度下是液体，并因此在直肠中融化并释放药物。这些材料包括可可豆脂、甘油明胶、氢化植物油、各种分子量的聚乙二醇的混合物和聚乙二醇的脂肪酸酯。
对于局部使用，使用含有本发明的化合物的乳膏，软膏，胶冻，溶液或悬浮液等。出于本申请的目的，局部应用应包括漱口水和含漱剂。
本发明的化合物可通过局部使用合适的鼻内载剂和递送装置以鼻内形式给予，或使用本领域普通技术人员熟知的那些形式的经皮皮肤贴剂通过经皮途径给予。为了以透皮递送系统的形式给予，在整个给药方案中，剂量给药当然将会是连续的而不是间断的。本发明的化合物也可以使用基质(例如可可脂，甘油明胶，氢化植物油，各种分子量的聚乙二醇的混合物和聚乙二醇的脂肪酸酯)以栓剂形式递送。
本发明的化合物可以脂质体或其它微颗粒或其它纳米颗粒的形式存在，所述脂质体或其它微颗粒或其它纳米颗粒设计为靶向所述化合物。可接受的脂质体可以是中性，带负电或带正电的，其电荷是脂质体组分的电荷和脂质体溶液的pH的函数。脂质体通常可以使用磷脂和胆固醇的混合物制备。合适的磷脂包括磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇。可以添加聚乙二醇以改善脂质体的血液循环时间。可接受的纳米颗粒包括白蛋白纳米颗粒和金纳米颗粒。
当将本发明的化合物给予人类对象时，每日剂量通常将由处方医师确定，该剂量通常根据个体患者的年龄，体重，性别和反应以及患者症状的严重程度而变化。一般而言，约0.01mg/kg至约150mg/kg体重的剂量水平可用于治疗上述病况。
如本文所用，术语“组合物”旨在包括含有特定量特定成分的产物，以及直接或间接由特定量的特定成分组合获得的产物。
本发明的另一个目的涉及用本发明的化合物抑制SHP2的体外方法。例如，这可能有助于评估任何给定化合物是否是SHP2的抑制剂/活化剂，因此也作用于ERK通路。
本发明的另一目的涉及一种试剂盒，其包含其他类型的至少一个药学上可接受的小瓶或容器，其含有一个或多个剂量的本发明的化合物，包括其任何药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体，或含有本发明的药物组合物和任选地a)其用于哺乳动物的说明书和/或b)含有药学上可接受的稀释剂的输注袋或容器。
在某些实施方式中，本发明的化合物或组合物经肠胃外、肌内、静脉内、皮下、口服、肺部、鞘内、局部、鼻内或全身给予。
在某些实施方式中，给予本发明的化合物或组合物的患者是哺乳动物，优选灵长类动物，更优选人。
根据标准药学实践，本发明的化合物可以在药物组合物中单独地或与药学上可接受的运载体、赋形剂或稀释剂组合给予哺乳动物，优选人。在一个实施方式中，本发明的化合物可以给予动物。化合物可以口服或胃肠外给予，包括静脉内，肌内，腹膜内，皮下，直肠和局部给予途径。
如本文所用，术语“预防”是指没有疾病或病症的发展(如果没有发生)，或没有进一步的疾病或病症的发展(如果已经有疾病或病症的发展)。还考虑了预防与疾病或病症有关的某些或全部症状的能力。如本文所用，任何提及“处理”/“治疗”包括改善待治疗的疾病/病症的至少一种症状。这样的改善是通过与给予本发明的化合物或组合物之前的相同症状进行比较来评估的。
如本文所用，术语“治疗有效量”是指引起研究人员，兽医，医生或其它临床医师所寻求的在组织，系统，动物或人中的生物学或医学反应的活性化合物或药剂的量。
将通过以下非限制性实施例和生物学数据来描述本发明。
材料和方法
化学
如本文所用，下列缩写具有以下含义。如果缩写没有定义，则有其公知含义。
缩写
AccCl：乙酰氯；AcOH：乙酸；AlCl3：氯化铝；BOP：苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)鏻六氟磷酸盐；B2Pin2：4,4,4′,4′,5,5,5′,5′-八甲基-2,2′-双(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)；Boc2O：二碳酸二叔丁酯；t-BuLi：叔丁基锂；1-BuOH：1-丁醇；t-BuOK：叔丁醇钾；CDI：1,1′-羰基二咪唑；CDCl3：氘代氯仿；CHCl3：氯仿；mCPBA：间氯过苯甲酸；Cs2CO3：碳酸铯；CsF：氟化铯；CuBr：溴化铜；CuI：碘化铜；DBU：1,8-二氮杂环[5.4.0]十一碳-7-烯；DCM：二氯甲烷；DEAD：偶氮二甲酸二乙酯；DIAD：偶氮二甲酸二异丙酯；DIPEA：N,N-二异丙基乙胺；DMA：二甲基乙酰胺；DMAP：4-(二甲氨基)吡啶；DME：二甲氧基乙烷；DMF：二甲基甲酰胺；DMSO：二甲基亚砜；ES+：电喷雾正电离；Et2O：乙醚；EtOAc：乙酸乙酯；EtOH：乙醇；EtONa：乙醇钠；HCl：盐酸；h：小时；H2：氢气；HBF4：四氟硼酸；HCO2H：甲酸；H2O：水；H2SO4：硫酸HPLC：高效液相色谱；I2：碘；IPA：异丙醇；K2CO3：碳酸钾；KOAc：醋酸钾；KOH：氢氧化钾；K3PO4：磷酸钾；LCMS：液相色谱质谱法；LiAlH4：氢化铝锂；LDA：二异丙基氨基锂；MeCN：乙腈；MgSO4：硫酸镁；MeI：碘甲烷；MeOH：甲醇；min：分钟；MW：微波；NaBH4：硼氢化钠；NaHCO3：碳酸氢钠；NCS：N-氯代琥珀酰亚胺；NIS：N-碘代琥珀酰亚胺；NaH：氢化钠；NaNO2：亚硝酸钠；NaOH：氢氧化钠；NaOMe：甲醇钠；Na2SO4：硫酸钠；Na2S2O3：硫代硫酸钠；NaOtBu：2-甲基丙-2-油酸钠NBS：N-溴代琥珀酰亚胺；NH4HCO2：甲酸铵；NH4OH：氢氧化铵；N2：氮气；PPh3：三苯基膦；Pd2(dba)3：三(二亚苄基丙酮)二钯(0)；Pd(dppf)Cl2.DCM：[1,1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)与DCM的复合物；Pd(OH)2：氢氧化钯；Pd(PPh3)4：四(三苯基膦)钯(0)；POCl3：磷酰氯；RP：反相；RT：保留时间；rt：室温；RuPhos：二环己基(2′,6′-二异丙氧基联苯-2-基)膦；SEM：三甲基甲硅烷基乙氧基甲基；TCDI：1,1′-硫代羰基二咪唑TEA：三乙胺；[(t-Bu)3PH]BF4：四氟硼酸三叔丁基鏻；TFA：三氟乙酸；TFAA：三氟乙酸酐；THF：四氢呋喃；Ti(OEt)4：乙醇钛；Sat.：饱和；Sol.：溶液；TsCl：4-甲苯磺酰氯；UPLC：超高效液相色谱；Xantphos：4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基呫吨。
LC-MS分析通过UPLC Acquity Waters系统(配备有SQD光谱仪，单四极杆质量检测器和TUV检测器)进行，采用柱1：ACQUITY UPLC BEH SHIELD，RP18(2.1x50mm,id＝1.7μm)；柱2：ACQUITY UPLC HSS T3，RP18(2.1x50mm，id＝1.8μm)和柱3：ACQUITY UPLC BEH SHIELD，RP18(2.1x100mm，id＝1.7μm)和柱4：Phenomenex Kinetex EVO RP18(3×50mm，内径＝2.6μm)。柱温40℃或33℃。样品温度25℃或33℃。A相包含H2O(HiPerSolv Chromanorm WaterVWR，用于HPLC-MS)+0.05％TFA；B相包含MeCN(HiPerSolv Chromanorm AcetonitrileSuperGradient VWR，适用于UPLC/UHPLC仪器)+0.05％TFA；A2相包含H2O(HiPerSolvChromanorm Water VWR，用于HPLC-MS)/MeCN(HiPerSolv Chromanorm AcetonitrileSuperGradient VWR，适用于UPLC/UHPLC仪器)95/5v/v+20mM NH4HCO2缓冲液，pH＝7.4；B2相包含H2O(用于HPLC-MS的HiPerSolv Chromanorm Water VWR)/MeCN(HiPerSolvChromanorm Acetonitrile SuperGradient VWR，适用于UPLC/UHPLC仪器)20/80v/v+20mMNH4HCO2缓冲液组成，pH＝7.4；流速：0.5mL/分钟或1.8mL/分钟；紫外检测(DIODE阵列)200nm；100-1000m/z范围内的ESI+和ESI-检测。
方法1：柱1，运行时间：3分钟，运行梯度：2.80分钟内5％B至100％B+100％B持续0.2分钟，平衡时间：0,8分钟，电离模式：ESI+。
方法2：柱2，运行时间：3分钟，运行梯度：2.80分钟内0％B至45％B+100％B持续0.2分钟，平衡时间：0,8分钟，电离模式：ESI+。
方法3：柱3，运行时间：6分钟，运行梯度：5分钟内5％B至100％B+100％B持续1分钟，平衡时间：2分钟，电离模式：ESI+。
方法4：柱1，运行时间：3分钟，运行梯度：2.80分钟内40％B至100％B+100％B持续0.2分钟，平衡时间：0,8分钟，电离模式：ESI+。
方法5：柱4，运行时间：2分钟，运行梯度：1.84分钟内5％B2至95％B2，平衡时间：0.16分钟，电离模式：ESI+。
方法6(2分钟GRAD10 LUNA HILIC AB)：柱4，运行时间：2分钟，运行梯度：1.5分钟内92％B至70％B，平衡时间：0.5分钟，电离模式：ESI+
方法7(5分钟GRAD10 LUNA HILIC AB)：柱4，运行时间：5分钟，运行梯度：4.2分钟内92％B至70％B，平衡时间：0.8分钟，电离模式：ESI+
方法8(5分钟正常A2B2 ELS EVO)：柱4，运行时间：5分钟，运行梯度：4.75分钟内0％B2至95％B2，平衡时间：0.25分钟，电离模式：ESI+
方法9(5分钟强A2B2 ELS EVO)：柱4，运行时间：5分钟，运行梯度：4.75分钟内0％B2至95％B2，平衡时间：0.25分钟，电离模式：ESI+
制备本发明化合物的方法
本发明还包括制备本发明化合物的方法。以下方案是可用于制备本发明化合物的合成途径的实例。
在下面描述的反应方案中，保护反应性官能团(例如氨基、亚氨基、羟基、硫代或羧基)以避免它们参与不希望的反应是有用的。可以根据标准实践使用常规保护基团，例如参见T.Greene和P.G.M.Wuts，“《有机化学中的保护基团》(Protective Groups in OrganicChemistry)”，约翰威利父子公司(John Wiley and Sons)，1991。
本领域技术人员将容易理解，可以根据标准化学方法(例如通过成盐/脱盐)将本发明的某些化合物转化为本发明的其它化合物。
使用适当的起始材料，根据下文所述的方案和过程或其修饰来合成以下实例(表1)。
表1-根据实施例和实验数据(MS)制备的化合物。
具体实例的示例性且非限制性的合成方法将报道在下文。
中间体1：(S)-4′-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯
步骤1：1-苄基-1H-吡唑-3-甲醛
将在无水MeCN(27mL)中的苄基溴(3.0mL，25.26mmol)，K2CO3(5.10g，36.95mmol)和1H-吡唑-5-甲醛(1.42g，14.78mmol)的悬浮液在70℃下加热12小时。将混合物用甲苯稀释并用H2O(x2)和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空下除去溶剂。将残余物通过硅胶快速色谱纯化(0％至20％EtOAc于环己烷中)，得到黄色油状的标题化合物(1.86g，68％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.87(s，1H)，8.06(s，1H)，7.42-7.26(m，5H)，6.81(s，1H)，5.48(s，2H)；LCMS(ES+)方法1：m/z 187(M+H)+，RT 1.60分钟。
步骤2：4-((1-苄基-1H-吡唑-3-基)(羟基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸1-(叔丁基)4-乙酯
在-78℃下，将LDA(2N于THF中；6mL，12mmol)添加至无水THF(20mL)中的1-叔丁氧基羰基哌啶-4-羧酸乙酯(2.45g，9.52mmol)的搅拌溶液中。10分钟后，缓慢添加无水THF(5mL)中的1-苄基-1H-吡唑-3-甲醛(1.86g，9.99mmol)的溶液。5分钟后，将混合物升温至室温。20分钟后，在0℃用甲苯和2N HCl将混合物稀释至pH＝6。将有机层用H2O(x2)，盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂以得到呈黄色粘性固体的粗化合物，其不经纯化即用于下一步骤(4.35g)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.72(d，J＝2.2Hz，1H)，7.36-7.24(m，3H)，7.24-7.13(m，2H)，6.17(d，J＝2.2Hz，1H)，5.47(d，J＝5.5Hz，1H)，5.26(s，2H)，4.64(d，J＝5.5Hz，1H)，4.04-3.92(m，2H)，3.92-3.76(m，2H)，2.77-2.55(m，2H)，1.93-1.79(m，1H)，1.59-1.30(m，12H)，1.12(t，J＝7.1Hz，3H)；LCMS(ES+)方法1：m/z 444(M+H)+，RT 2.05分钟。
步骤3：4-((1-苄基-1H-吡唑-3-基)(羟基)甲基)-4(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在0℃下，将LiAlH4(2N于THF中；7.2mL，14.4mmol)添加至无水THF(30mL)中的4-((1-苄基-1H-吡唑-3-基)(羟基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸1-(叔丁基)4-乙酯(5.28g，11.90mmol)的搅拌溶液。1.5小时后，添加LiAlH4(2N于THF中；1mL，2.0mmol)。30分钟后，通过在0℃缓慢添加5％柠檬酸溶液(至pH＝6)和罗谢尔盐溶液来淬灭混合物并用甲苯稀释。将有机层用H2O(x2)和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂以得到呈无色固体的粗产物，其不经纯化即用于下一步骤(4.70g)。LCMS(ES+)方法1：m/z 402(M+H)+，RT 1.77分钟。
步骤4：4-((1-苄基-1H-吡唑-3-基)(羟基)甲基)-4-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在0℃向DCM中的4-((1-苄基-1H-吡唑-3-基)(羟基)甲基)-4-(羟基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(4.70g，11.71mmol)的搅拌溶液添加无水DIPEA(3.1mL，17.8mmol)和甲磺酰氯(0.950mL，12.27mmol)。5分钟后，将混合物用DCM稀释并在0℃添加5％柠檬酸溶液。然后将有机层用H2O和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂。将残余物通过硅胶快速色谱纯化(20％至70％EtOAc于环己烷中)，得到白色海绵状固体的标题化合物(经过3步，3.15g，56％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.76(d，J＝2.1Hz，1H)，7.36-7.23(m，3H)，7.23-7.16(m，2H)，6.23(d，J＝2.2Hz，1H)，5.42(d，J＝4.9Hz，1H)，5.29(s，2H)，4.63(d，J＝4.9Hz，1H)，4.32(d，J＝9.8Hz，1H)，4.18(d，J＝9.7Hz，1H)，3.51(br dd，J＝15.9，13.8Hz，2H)，3.21-2.96(m，5H)，1.57-1.31(m，13H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 480(M+H)+，RT 1.93分钟。
步骤5：4′-羟基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯
将1-BuOH(64mL)中的4-((1-苄基-1H-吡唑-3-基)(羟基)甲基)-4-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯溶液(3.7g，7.71mmol)的溶液在密封管中于120℃加热3小时，然后冷却至室温，添加甲酸铵(1.46g,23.15mmol)和Pd/C 10％wt(0.41g,0.39mmol))。将混合物加热回流15分钟，然后在室温下搅拌2小时。将混合物经α纤维素垫过滤并用EtOAc和MeOH洗涤。减压去除挥发物并通过硅胶快速色谱纯化产物(石油醚溶液中的3％MeOH+20％至100％EtOAc)，得到呈白色固体的标题化合物(经过2步的1.40g，2小时内61％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.42(d，J＝1.8Hz，1H)，6.11(d，J＝1.8Hz，1H)，5.52(d，J＝7.0Hz，1H)，4.61(d，J＝7.0Hz，1H)，4.04-3.95(m，2H)，3.66-3.54(m，2H)，3.15(br d，J＝9.3Hz，2H)，1.79-1.67(m，1H)，1.55-1.31(m，12H)；LCMS(ES+)方法1：m/z 294(M+H)+，RT1.43分钟。
步骤6：4′-氧代-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯
在0℃下向DCM(24mL)中的4′-羟基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯的搅拌溶液中(1.60g，5.45mmol))中分批添加戴斯-马丁高碘烷(2.55g，6.01mmol)。所得混合物升温至室温。1小时后，将混合物用DCM稀释并用10％Na2S2O3溶液，H2O和盐水洗涤有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂以得到黄色固体。将残余物通过硅胶快速色谱纯化(0％至100％EtOAc于石油醚中)以得到灰白色固体的标题化合物(1.25g，78％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.90(d，J＝2.2Hz，1H)，6.79(d，J＝2.2Hz，1H)，4.53(s，2H)，3.94(br d，J＝13.5Hz，2H)，2.97(br s，2H)，1.75-1.59(m，4H)，1.42(s，9H)；LCMS(ES+)方法1:m/z 292(M+H)+，RT 1.73分钟。
步骤7：(R,Z)-4′-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯
将Ti(OEt)4(4mL)中的(R)-(-)-叔丁基亚磺酰胺(790mg，6.52mmol)和4′-氧代-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯(980mg，2.17mmol)的溶液在100℃加热1小时。将混合物冷却至室温，用EtOAc和H2O稀释，固体沉淀，过滤并用EtOAc洗涤。将有机层用H2O(x3)和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂。将残余物通过硅胶快速色谱纯化(20％至100％EtOAc于石油醚中)以得到淡黄色固体的标题化合物(740mg，86％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.78(d，J＝2.1Hz，1H)，6.91(d，J＝2.1Hz，1H)，4.46(d，J＝2.9Hz，2H)，3.98(br d，J＝13.7Hz，2H)，3.09-2.80(m，2H)，1.63-1.86(m，4H)，1.42(s，9H)，1.20(s，9H)；LCMS(ES+)方法1：m/z 395(M+H)+，室温1.91min。
步骤8：(S)-4′-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯
在-50℃将NaBH4(227mg，6.00mmol)添加到在无水THF(15mL)中的(S,Z)-4′-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5]′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯(1.57g，3.97mmol)的溶液。5分钟后，将混合物升温至室温。1.5小时后，添加NaBH4(30mg，0.79mmol)，再过30分钟后，在0℃用EtOAc和H2O稀释混合物。将有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发溶剂以得到浅黄色固体，将其溶解在EtOH(16mL)中并在75℃加热1h(通过UPLC-MS观察到88/12的非对映体比率)。然后减压蒸发混合物并通过硅胶快速色谱纯化产物(DCM中的3％MeOH+0％至100％EtOAc)，得到呈白色固体的标题化合物(908mg，62％；非对映体比率＝97/3)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.46(d，J＝1.7Hz，1H)，6.07(d，J＝1.6Hz，1H)，5.93(d，J＝10.0Hz，1H)，4.43(d，J＝9.9Hz，1H)，4.19-4.11(m，1H)，4.08-3.96(m，2H)，3.82(br t，J＝14.0Hz，2H)，3.12-2.80(m，2H)，1.80-1.55(m，3H)，1.41(s，9H)，1.15(s，9H)；LCMS(ES+)方法1：m/z 397(M+H)+，RT 1.66分钟。
中间体2、3、4和5
中间体2：(R)-2-甲基-N-((S)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)丙烷-2-亚磺酰胺2,2,2-三氟乙酸盐
根据方法A制备中间体2：
在室温将TFA(0.2mL,2.61mmol)添加至无水DCM(1.5mL)中的(S)-4′-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4]5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯(中间体1；90mg，0.227mmol)的溶液。2小时后，将混合物减压蒸发，得到无色固体(95mg，定量)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.68-8.24(m，2H)，7.48(d，J＝1.8Hz，1H)，6.20-6.04(m，2H)，4.52(d，J＝10.0Hz，1H)，4.14(dd，J＝19.3，11.3Hz，2H)，3.44-3.18(m，2H)，3.17-2.89(m，2H)，2.07-1.65(m，4H)，1.30-1.09(m，9H)；LCMS(ES+)方法1：m/z 297(M+H)+，RT 0.89分钟。
中间体3：(R)-2-甲基-N-((S)-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)丙烷-2-亚磺酰胺2,2,2-三氟乙酸盐
从(S)-4′-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯开始，根据方法A，制备中间体3(从3-甲基-1H-吡唑-5-甲醛开始，以与中间体1相同的程序制备；138mg，0.34mmol)。将产物通过C18滤芯进行的快速色谱纯化(从0％至30％MeCN/H2O+0.1％TFA)，用EtOAc研磨得到呈米色固体的标题化合物(68mg，65％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 311(M+H)+，RT 0.98分钟。
中间体4：(R)-N-((S)-2′-甲氧基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺2,2,2-三氟乙酸盐
从(S)-4′-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2′-甲氧基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯开始，根据方法A，制备中间体4(从3-甲氧基-1H-吡唑-5-甲醛开始，以与中间体1相同的程序制备，160mg；0.38mmol)。将产物通过C18滤芯进行的快速色谱纯化(从0％至20％MeCN/H2O+0.1％TFA)，用EtOAc研磨得到呈米色固体的标题化合物(68mg，65％)LCMS(ES+)方法1：m/z 327(M+H)+，RT 0.81分钟。
中间体5：(S)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺二盐酸盐
根据方法B制备中间体5：
室温下，将HCl(4N于1,4二噁烷中；2.3mL，9.2mmol)添加至在DCM(5mL)中的(S)-4′-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯(中间体1；908mg，2.29mmol)的搅拌溶液中。2小时后，过滤产物，用DCM洗涤，减压干燥以得到浅黄色固体(463mg，75％)。1H NMR(DMSO-d6+TFA)δ8.97(br s，2H)，8.76(br s，3H)，7.54(d，J＝1.7Hz，1H)，6.33(d，J＝1.7Hz，1H)，4.59-4.45(m，1H)，4.41-4.18(m，2H)，3.38(br d，J＝12.7Hz，1H)，3.29-3.10(m，2H)，3.10-2.87(m，1H)，2.17-1.80(m，3H)，1.80-1.65(m，1H)；LCMS(ES+)方法2：m/z 193(M+H)+，RT 0.54分钟。
中间体6，7，8和9
中间体6：(S)-3′-氯-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺
步骤1：(S)-4′-((叔丁氧基羰基)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯
将无水DIPEA(0.40mL，2.30mmol)添加到在无水DCM(3mL)中的Boc2O(412mg，1.89mmol)和(S)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(中间体5；200mg，0.75mmol)的悬浮液中。3小时后，将混合物用DCM稀释并用5％柠檬酸溶液，H2O和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂。将残余物通过硅胶快速色谱纯化(0％至50％EtOAc于石油醚中)以得到无色固体的标题化合物(225mg，76％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 393(M+H)+，RT 1.95分钟。LCMS(ES+)方法1：m/z 393(M+H)+，RT 1.95分钟。
步骤2A：(S)-4′-((叔丁氧基羰基)氨基)-3′-氯-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯
在50℃将N-氯代琥珀酰亚胺(54.5mg，1.05mmol)添加至在无水DMF(1.7mL)中的(S)-4′-((叔丁氧基羰基)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯(152mg，0.39mmol)的搅拌溶液中。2.5小时后，将混合物用甲苯稀释并用H2O(x2)和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂，得到呈浅黄色固体的标题化合物(158mg，95％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.62-7.51(m，2H)4.86(d，J＝9.7Hz，1H)，4.17-4.02(m，2H)，3.71-3.52(m，2H)，3.32-3.08(m，2H)，1.72-1.52(m，4H)，1.46(s，18H)；LCMS(ES+)方法1：m/z 427(M+H)+，RT 2.14分钟。
步骤4：(S)-3′-氯-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺二盐酸盐(中间体6)
从(S)-4′-((叔丁氧基羰基)氨基)-3′-氯-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯(158mg，0.370mmol)开始，根据方法B(用于制备中间体5)，得到(S)-3′-氯-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺，其呈白色固体(112mg，定量)。LCMS(ES+)方法1：m/z 227(M+H)+，RT 0.36分钟。
中间体7：(S)-3′-溴-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺
步骤2B：(S)-3′-溴-4′-((叔丁氧羰基)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯
从NBS(53mg，0.30mmol)和(S)-4′-((叔丁氧基羰基)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯(如中间体6，步骤1一样制备；110mg，0.28mmol)开始，制备(S)-3′-溴-4′-((叔丁氧羰基)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯，得到黄色固体(132mg，定量)。1H NMR(DMSO-d6)δ7.54(s，1H)，7.48(d，J＝9.7Hz，1H)，4.77(d，J＝9.8Hz，1H)，4.06(d，J＝3.8Hz，2H)，3.44-3.64(m，2H)，3.05-3.27(m，2H)，1.48-1.68(m，4H)，1.41(d，J＝1.9Hz，18H)；LCMS(ES+)方法1：m/z 471(M+H)+，RT2.16分钟
步骤4：(S)-3′-溴-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺二盐酸盐(中间体7)
从(S)-3′-溴-4′-((叔丁氧羰基)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯(来自步骤2B；17mg，0.04mmol)开始，根据方法B，制备(S)-3′-溴-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺，其呈白色固体(12mg，80％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 271(M+H)+，RT 0.37分钟。
中间体8：(S)-3′-氟-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺
步骤2C：(S)-4′-((叔丁氧基羰基)氨基)-3′-氟-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯
在50℃将1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷双(四氟硼酸盐)(53mg，0.298mmol)添加到无水DMF(1.3mL)中的(S)-4′-((叔丁氧基羰基)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯(按中间体6，步骤1制备；65mg，0.17mmol)的搅拌溶液中。5小时后，将混合物用甲苯稀释并用H2O(x2)和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂。将残余物通过制备型HPLC纯化(从20％至65％MeCN/H2O+0.1％TFA)，得到呈浅黄色固体的标题化合物(10mg，14％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.57(d，J＝9.7Hz，1H)，7.44(d，J＝4.0Hz，1H)，4.85(d，J＝9.6Hz，1H)，4.01(s，2H)，3.69-3.48(m，2H)，3.26-2.97(m，2H)，1.66-1.47(m，4H)，1.37(s，18H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 411(M+H)+，RT2.06分钟。
步骤4：(S)-3′-氟-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺二盐酸盐(中间体8)
从(S)-4′-((叔丁氧基羰基)氨基)-3′-氟-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯(来自步骤2C；10mg，0.02mmol)开始，根据方法B，制备(S)-3′-氟-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺，其呈白色粉末状(5mg，73％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 211(M+H)+，RT 0.34分钟。
中间体9：(S)-3′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺
步骤3：(S)-4′-((叔丁氧基羰基)氨基)-3′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯
在密封的微波小瓶中，在脱气的干燥1,4-二噁烷(1mL)中的(S)-3′-溴-4′-((叔丁氧羰基)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯(80mg，0.170mmol)，CsF(52mg，0.34mmol)，三甲基环三硼氧烷(0.09mL，0.68mmol)和Pd(PPh3)4(19.6mg,0.02mmol)溶液在N2气氛下，于105℃加热5小时。将混合物用EtOAc稀释并用H2O(x2)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂。将粗品通过C18滤芯进行的快速色谱纯化(H2O中的10％至55％MeCN)以得到淡黄色粉末状的标题化合物(16mg，22％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 407(M+H)+，RT 1.99分钟。
步骤4：(S)-3′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(中间体9)
从(S)-4′-((叔丁氧基羰基)氨基)-3′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯(来自步骤3；15mg，0.04mmol)开始，根据方法B(用于制备中间体5)，制备(S)-3′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺，其呈白色粉末状(8mg，77％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 207(M+H)+，RT 0.36分钟。
中间体10：(S)-3′-氯-2′-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺
步骤1：(S)-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺二盐酸盐
从(R)-2-甲基-N-((S)-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)丙烷-2-亚磺酰胺(54mg，0.17mmol)开始，根据方法B(与制备中间体5的过程相同)，制备(S)-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺，其呈白色粉末状(42mg，86％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 211(M+H)+，RT 0.37分钟。
步骤2：(S)-4′-((叔丁氧基羰基)氨基)-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯
从(S)-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺开始，根据用于中间体6的过程，步骤1，来制备(S)-4′-((叔丁氧基羰基)氨基)-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯，得到标题化合物，其呈白色粉末状(34mg，54％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 407(M+H)+，RT 1.94分钟。
步骤3：(S)-4′-((叔丁氧基羰基)氨基)-3′-氯-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯
从(S)-4′-((叔丁氧基羰基)氨基)-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯(32mg,0.08mmol)开始，根据用于步骤2A，中间体6的过程，制备(S)-4′-((叔丁氧基羰基)氨基)-3′-氯-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯，得到淡黄色固体(33mg，95％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 441(M+H)+，RT2.19分钟。
步骤4：(S)-3′-氯-2′-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(中间体10)
从(S)-4′-((叔丁氧基羰基)氨基)-3′-氯-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-羧酸叔丁酯(30mg，0.07mmol)开始，根据方法B，制备(S)-3′-氯-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺，其呈白色粉状(19mg，83％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 241(M+H)+，RT 0.44分钟。
中间体11：2-氯-6-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪
步骤1：5-溴-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-酮
将在THF(120mL)中的5-溴-2,3-吡嗪二胺(4.1g，21.7mmol)和CDI(7.0g，43.4mmol)的溶液加热至60℃，持续72小时。然后，添加CDI(7.0g，43.4mmol)的第二部分并继续加热至60℃，持续24小时。冷却后，将混合物真空浓缩并通过反相色谱法纯化残余物(梯度洗脱0-50％MeCN(+0.1％TFA)/H2O(+0.1％TFA))。将挥发物蒸发得到残余物，将其与MeCN一起研磨并过滤以得到呈米色固体的标题化合物(3.04g，65％)。1H NMR(DMSO-d6)δ11.98(br s，1H)，11.91(br s，1H)，7.98(s，1H)。LCMS(ES+)m/z 215，217(M+H)+。
步骤2：5-[(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代]-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-酮
将在1,4-二噁烷(47mL)中的5-溴-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-酮(1.0g,4.65mmol)溶液用N2脱气5分钟，然后依次添加Pd2(dba)3(0.21g，0.23mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(0.27g，0.47mmol)，2-(三氟甲基)吡啶-3-硫醇(1.19g，5.12mmol)和DIPEA(1.62mL，9.3mmol)。将反应混合物用N2再脱气5分钟并加热至100℃，持续2小时。冷却后，将混合物真空浓缩，并将残余物用MeCN处理得到沉淀，将其滤出以得到呈米色固体的标题化合物(1.33g，91％)。1H NMR(DMSO-d6)δ11.96(br s，2H)，8.56(d，J＝3.7Hz，1H)，8.10(s，1H)，7.75(d，J＝8.3Hz，1H)，7.58(dd，J＝8.2和4.5Hz，1H)。LCMS(ES+)m/z 314(M+H)+。
步骤3：2-氯-6-[(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代]-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪(中间体11)
将在POCl3(20mL，0.21mol)中的5-[(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代]-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-酮(1.3g,4.15mmol)的溶液在密封小瓶中加热至120℃，持续8小时。冷却后，将混合物真空浓缩，得到残余物，将其通过反相色谱纯化(梯度洗脱0-100％MeCN/H2O+0.1％TFA)，得到呈淡黄色固体的标题化合物(TFA盐；0.26g，19％)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.71(d，J＝3.9Hz，1H)，8.55(s，1H)，8.05(d，J＝7.9Hz，1H)，7.70(dd，J＝8.1和4.6Hz，1H)。LCMS(ES+)m/z 332(M+H)+。
中间体12：3-氯-4-((2-(甲基磺酰基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-6-基)硫代)吡啶-2-胺
步骤1：5-溴-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-硫酮
将在1,4-二噁烷(55mL)中的5-溴吡嗪-2,3-二胺(5.0g，26.5mmol)溶液用TCDI(6.6g，37.0mmol)处理。将混合物在50℃下加热16小时。冷却后，将反应混合物真空浓缩，并在硅胶上纯化(用0-50％EtOAc/石油醚洗脱)以得到呈黄色固体的标题化合物(5.4g，79％)1H NMR(DMSO-d6)δ13.62(br s，1H)，8.22(s，1H)。LCMS(ES+)m/z 231，233(M+H)+。
步骤2：6-溴-2-(甲硫代)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪
将在H2O(85mL)中的5-溴-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-硫酮(3.0g,13.0mmol)溶液在室温下用NaOH(799mg，19.5mmol)处理并在此温度下搅拌直至起始材料完全溶解。然后，添加MeI(1.2mL，19.5mmol)并将反应混合物在室温下搅拌1小时。添加NaOH2N溶液直至澄清，并将水溶液用CHCl3洗涤，浓缩，并用水性HCl 6N酸化至pH＝6.5。滤出所得沉淀并用H2O洗涤以得到呈浅黄色固体的标题化合物(1.8g，56％)。1H NMR(DMSO-d6)δ7.76(s，1H)，2.55(s，3H)。LCMS(ES+)m/z 245，247(M+H)+。
步骤3：6-溴-2-(甲基磺酰基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪
在0℃将mCPBA(4.2g，18.4mmol)分批添加至在DCM(70mL)中的6-溴-2-(甲硫代)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪(1.8g，7.3mmol)，然后将所得反应混合物在室温下搅拌3小时。添加水性HCl 6N(10mL)后，用CHCl3/EtOH 95:5溶液(3x150 mL)提取混合物。有机相用H2O和盐水洗涤。将无水有机层真空浓缩，并将残余物在反相硅胶上纯化(用0-50％MeCN/H2O+0.1％TFA洗脱)以得到呈白色固体的标题化合物(1.5g，75％)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.79(s，1H)，3.56(s，3H)。LCMS(ES+)m/z 277，279(M+H)+。
步骤4：3-((2-(甲基磺酰基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-6-基)硫代)丙酸2-乙基己酯
向压力管中装入在1,4-二噁烷(15mL)中的Pd2(dba)3(66mg，0.07mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(83mg,0.14mmol)，DIPEA(1.0mL，5.8mmol)，3-巯基丙酸2-乙基己酯(722uL，3.2mmol)，6-溴-2-(甲基磺酰基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪(800mg，2.9mmol)。将混合物用N2脱气，加盖并在100℃加热持续30分钟。冷却后，将混合物真空浓缩并在硅胶上纯化(用在石油醚中的10-100％(EtOAc+10％MeOH)洗脱)得到呈浅黄色固体的标题化合物(993mg，75％)。LCMS(ES+)m/z 415(M+H)+。
步骤5：3-氯-4-((2-(甲基磺酰基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-6-基)硫代)吡啶-2-胺(中间体12)
在N2条件下将3-((2-(甲基磺酰基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-6-基)硫代)丙酸2-乙基己酯(100mg，0.24mmol)，3-氯-4-碘吡啶-2-胺(73.7mg，0.29mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(6.9mg，0.012mmol)和Pd2(dba)3(5.5mg，0.006mmol))的溶液溶解在1,4-二噁烷(1.4mL)和DMF(1.0mL)中，然后添加2-甲基丙-2-油酸钾(40.6mg，0.36mmol)和DIPEA(0.08mL，0.48mmol)，并将混合物在100℃搅拌，持续1小时。冷却后，将混合物真空浓缩并在硅胶上纯化(用在EtOAc中的5-100％(EtOAc+20％MeOH)洗脱)得到呈浅黄色固体的标题化合物(75mg，87％)。LCMS(ES+)m/z 356(M+H)+。
中间体13：6-氯-3-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-胺
步骤1：3-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)丙酸2-乙基己酯
向在N2气氛下干燥脱气的1,4二噁烷(7mL)中的3-溴-2-三氟甲基吡啶(712mg，3.15mmol)，3-硫烷基丙酸2-乙基己酯(0.79mL，3.47mmol)、Pd2(dba)3(289mg，0.32mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(183mg，0.32mmol)的混合物添加DIPEA(1.7mL，9.76mmol)，所的混合物在100℃加热，持续1小时。减压条件除去挥发物后，通过硅胶快速色谱纯化残余物(0％至20％EtOAc于环己烷中)，得到呈橙色固体的3-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)丙酸2-乙基己酯(809mg，70％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.52(br d，J＝4.2Hz，1H)，8.17(br d，J＝8.3Hz，1H)，7.72-7.65(m，1H)，3.95(d，J＝5.5Hz，2H)，3.42-3.33(m，2H)，2.69(t，J＝6.5Hz，2H)，1.34-1.18(m，9H)，0.89-0.79(m，6H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 364(M+H)+，RT 2.08分钟。
步骤2：2-(三氟甲基)吡啶-3-硫醇钾
将在无水THF(4mL)中的3-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)丙酸2-乙基己酯的溶液冷却至-78℃，向其添加在无水THF(20mL)中的t-BuOK(463mg,4.13mmol)。在-78℃搅拌20分钟后，用水性K2CO3(2M，0.25mL)猝灭反应并逐渐升温至室温(沉淀出棕色固体)。滤出固体，用THF(x2)洗涤并减压干燥，得到呈褐色固体的产物(300mg，98％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.63(d，J＝4.0Hz，1H)，7.52(d，J＝8.3Hz，1H)，6.77(dd，J＝8.1，4.2Hz，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 180(M+H)+，RT 1.69分钟。
步骤3：6-氯-3-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-胺(中间体13)
向在密封管中的脱气干燥1,4-二噁烷(10mL)中的2-氨基-3-溴-6-氯吡嗪(464mg，2.23mmol)和2-(三氟甲基)吡啶-3-硫醇钾(484mg，2.23mmol)溶液依次添加Pd2(dba)3(204mg，0.22mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(129mg，0.22mmol)，然后在N2气氛下添加无水DIPEA(1mL，5.74mmol)。将所得混合物回流1小时。减压蒸发挥发物，所得残余物通过硅胶快速色谱纯化(0％至30％EtOAc于环己烷中)，得到呈黄色固体的标题化合物(390mg，57％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.71(dd，J＝4.5，1.0Hz，1H)，8.00-7.94(m，1H)，7.74-7.68(m，2H)，7.16(s，2H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 307，309(M+H)+，RT 1.96分钟。
中间体14：3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-6-氯吡嗪-2-胺
步骤1：3-氯-4-碘吡啶-2-胺
将1,4二噁烷(8mL)中的3-氯-2-氟-4-碘吡啶(2.0g，7.77mmol)的溶液和在H2O中的30％NH4OH(20mL，155.3mmol)的溶液回流3小时。将混合物用EtOAc和H2O稀释，分离各相，并用EtOAc(3x10 mL)萃取水性层。将收集的有机层用盐水(x2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈褐色固体的3-氯-4-碘吡啶-2-胺(1.96g，定量)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.59(d，J＝5.1Hz，1H)，7.11(d，J＝5.1Hz，1H)，6.56(s，2H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 255(M+H)+，RT 0.92分钟。
步骤2：3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)丙酸甲酯
向在脱气干燥1,4-二噁烷(30mL)中的3-氯-4-碘吡啶-2-胺(1.96g,7.70mmol)和3-巯基丙酸甲酯(0.92mL,8.48mmol)的溶液，依次添加Pd2(dba)3(1g，1.15mmol)和[(t-Bu)3PH]BF4(334mg，1.15mmol)，然后在N2气氛下添加脱气的干燥DIPEA(4.0mL，23.76mmol)。将混合物在90℃下搅拌2小时。减压除去挥发物并通过二氧化硅快速色谱纯化残余物(在石油醚中的20％至100％EtOAc)，得到呈橙色固体的3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)丙酸甲酯(1.8g，93％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.81(d，J＝5.3Hz，1H)，6.57(d，J＝5.4Hz，1H)，6.25(s，2H)3.64(s，3H)，3.22(t，J＝7.0Hz，2H)，2.73(t，J＝7.0Hz，2H)；LCMS(ES+)方法1：m/z 247(M+H)+，RT 0.98分钟。
步骤3：2-氨基-3-溴-6-氯吡嗪
在0℃，向在EtOH(22mL)中的3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)丙酸甲酯(1.8g，7.29mmol)溶液添加EtONa(溶液20重量％于EtOH中，3.6mL，9.24mmol)。将混合物逐渐升温至室温。30分钟后，减压条件除去EtOH并用DCM(50mL)稀释残余物。观察到产物沉淀，过滤固体并用DCM(x3)洗涤，得到呈红色固体的标题化合物(1.3g，92％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.03(d，J＝5.4Hz，1H)，6.46(d，J＝5.3Hz，1H)，5.01(s，2H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 161,163(M+H)+，RT 0.56分钟。
步骤4：3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-6-氯吡嗪-2-胺(中间体14)
向在脱气干燥1,4-二噁烷(8mL)中的2-氨基-3-溴-6-氯吡嗪(419mg，2.01mmol)和2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇钠(367mg，2.01mmol)的溶液，依次添加Pd2(dba)3(184mg，0.20mmol)和[(t-Bu)3PH]BF4(58.5mg，0.202mmol)，然后在N2气氛下添加干燥DIPEA(0.87mL，5.02mmol)。将所得混合物在105℃搅拌1.5小时。减压除去挥发物，残余物通过C18滤芯进行的快速色谱纯化(在H2O中的5至45％MeCN+0.1％HCO2H)，得到呈橙色固体的标题产物(116mg，20％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.89(s，1H)，7.70(d，J＝5.3Hz，1H)，7.17(s，2H)，6.39(s，2H)，5.97(d，J＝5.3Hz，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 288(M+H)+，RT 1.13分钟。
中间体15：(S)-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪-4-硫醇钠
步骤1：(S)-3-((6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪-4-基)硫代)丙甲酸
从中间体30(70mg，0.23mmol)开始，根据中间体13所用的过程，步骤1，来制备(S)-3-((6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪-4-基)硫代)丙甲酸，并经C18滤芯快速色谱纯化(从0％至30％MeCN/H2O+0.1％TFA)，得到标题化合物(68mg，定量)，其呈淡黄色固体。LCMS(ES+)方法1：m/z 295(M+H)+，RT 1.12分钟。
步骤2：(S)-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪-4-硫醇钠(中间体15)
从(S)-3-((6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪-4-基)硫代)丙酸酯(68mg，0.23mmol)开始，根据用于中间体14的过程，步骤3，制备(S)-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪-4-硫醇钠，得到标题化合物(35mg，66％)，其呈白色粉末状。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.68-7.53(m，1H)，6.65-6.49(m，1H)，4.70-4.57(m，1H)，3.79(s，4H)，2.20-1.78(m，4H)；LCMS(ES+)方法1：m/z 209(M+H)+，RT1.64分钟。
中间体16和17：3-氯-4-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)吡啶-2-胺(16)和(S)-4-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪(17)
步骤1：3-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)丙酸甲酯
从2-溴-5-氯吡嗪(640mg，3.31mmol)和3-巯基丙酸甲酯(428mg，3.56mmol)开始，根据用于中间体13的过程，步骤1，制备3-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)丙酸甲酯，并通过硅胶快速色谱纯化(石油醚中的0％至40％EtOAc)得到标题化合物(710mg，92％)，其呈黄色固体。LCMS(ES+)方法1：m/z 233(M+H)+，RT 1.80分钟。
步骤2：5-氯吡嗪-2-硫醇钠
从3-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)丙酸甲酯(710mg，3.05mmol)开始，根据用于中间体14的过程，步骤3，制备5-氯吡嗪-2-硫醇钠，得到标题化合物(457mg，88％)，其呈黄色粉末状。LCMS(ES+)m/z 147(M+H)+。
步骤3A：3-氯-4-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)吡啶-2-胺(中间体16)
从3-氯-4-碘吡啶-2-胺(430mg，1.69mmol)，5-氯吡嗪-2-硫醇钠(250mg，1.48mmol)开始，根据用于中间体13的过程，步骤1，制备中间体16，并通过C18滤芯进行的快速色谱纯化(0％至30％MeCN/H2O+0.1％TFA)得到标题化合物(263mg，65％)，其呈浅黄色粉末状。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.82(d，J＝1.4Hz，1H)，8.65(d，J＝1.4Hz，1H)，7.81(d，J＝5.2Hz，1H)，6.51(s，2H)，6.45(d，J＝5.3Hz，1H)；LCMS(ES+)方法1：m/z 274(M+H)+，RT 1.16分钟。
步骤3B：(S)-4-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪(中间体17)
从中间体30(100mg，0.33mmol)和5-氯吡嗪-2-硫醇钠(59mg，0.35mmol)开始，根据用于中间体13的过程，步骤1，制备中间体17。产物通过C18滤芯进行的快速色谱纯化(从5％至45％MeCN/H2O+0.1％TFA)，得到呈棕色粉末状的标题化合物(60mg，56％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.68(d，J＝1.5Hz，1H)，8.38(d，J＝1.4Hz，1H)，7.66(d，J＝5.3Hz，1H)，6.54(d，J＝5.3Hz，1H)，4.49(dd，J＝10.3，3.6Hz，1H)，3.70-3.56(m，2H)，3.52-3.35(m，2H)，2.16-1.82(m，3H)，1.49(br dd，J＝10.0，7.6Hz，1H)；LCMS(ES+)方法1：m/z 321(M+H)+，RT 1.23分钟。
中间体18：8-溴-5-氯咪唑并[1,2-c]嘧啶
步骤1：5-溴-2-氯-N-(2,2-二甲氧基乙基)嘧啶-4-胺
在0℃，将氨基乙醛二甲基缩醛(1.5mL，13.76mmol)添加至在EtOH(15mL)中的无水TEA(2.0mL，14.35mmol)和5-溴-2,4-二氯-嘧啶(2.05g，8.99mmol)的溶液中。将混合物逐渐升温至室温并搅拌1小时。将混合物浓缩，然后用EtOAc稀释并用H2O(x2)洗涤。将有机层用盐水(x2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈白色粉末的标题化合物(2.63g，98％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.28(s，1H)，7.65(br t，J＝5.7Hz，1H)，4.58(t，J＝5.4Hz，1H)，3.48(t，J＝5.7Hz，2H)，3.31-3.26(m，6H)；LCMS(ES+)方法1：m/z 296(M+H)+，RT1.62分钟。
步骤2：8-溴咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-醇
浓H2SO4中的5-溴-2-氯-N-(2,2-二甲氧基乙基)嘧啶-4-胺(2.63g，8.86mmol)的悬浮液(8mL)在75℃搅拌40分钟。将混合物冷却至0℃并添加5N NaOH(50mL)直至观察到沉淀(pH＝6)。过滤固体，并用EtOAc(3x5 mL)萃取滤液。将收集的有机层用盐水(x2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到米色粉末(1.52g；80％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.90(br s，1H)，7.89(d，J＝1.5Hz，1H)，7.64(d，J＝4.6Hz，1H)，7.43(d，J＝1.6Hz，1H)；LCMS(ES+)方法1：m/z 214(M+H)+，RT 0.64分钟。
步骤3：8-溴-5-氯咪唑并[1,2-c]嘧啶(中间体18)
在密封微波瓶中，于0℃将无水DIPEA(1.6mL，9.2mmol)添加到在POCl3(8mL，85.6mmol)中的8-溴咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-醇(380mg，1.78mmol)的悬浮液。将混合物在115℃搅拌9小时，冷却并缓慢添加至冷H2O和EtOAc的搅拌混合物中。将有机层用H2O(2x10 mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将粗化合物通过C18滤芯进行的快速色谱纯化(从0％至35％MeCN/H2O+0.1％TFA)，得到呈米色粉末状的标题化合物(170mg，41％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.22-8.18(m，2H)，7.85(d，J＝1.5Hz，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 232(M+H)+，RT 1.21分钟。
中间体19：(R)-2-甲基-N-((S)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-基)丙烷-2-亚磺酰胺双(2,2,2-三氟乙酸盐)
步骤1：1-苄基-1,4,5,6-四氢环戊[c]吡唑-3-甲醛
将在无水MeCN(20.0mL)中的1,4,5,6-四氢环戊[c]吡唑-3-甲醛(1.0g，7.34mmol)的悬浮液用K2CO3(2.54g，18.36mmol)和苄基溴(1.48mL，12.49mmol)处理，并在70℃加热18小时。冷却后，将反应混合物用甲苯(200mL)稀释并用H2O(2x)和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-20％EtOAc于石油醚中)得到标题化合物(1.5g，90％)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.78(s，1H)，7.44-7.14(m，5H)，5.35(s，2H)，5.17(t，J＝5.7Hz，1H)，4.50(d，J＝5.7Hz，1H)，2.71-2.39(m，4H)。LCMS(ES+)方法2：m/z 227(M+H)+，RT 1.68分钟。
步骤2：4-((1-苄基-1,4,5,6-四氢环戊[c]吡唑-3-基)(羟基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸1-(叔丁基)4-乙酯
将在无水THF(11.2mL)中的哌啶-1,4-二羧酸1-(叔丁基)4-乙基酯(1.3g，2.69mmol)的溶液于-78℃冷却，用LDA(2N于THF中；3.31mL，6.63mmol)。将反应混合物在此温度搅拌10分钟，然后用在无水THF中的1-苄基-1,4,5,6-四氢环戊[c]吡唑-3-甲醛(1.5g，6.63mmol)溶液处理(2.8mL)。将反应混合物升温至室温并搅拌3小时。在0℃用NH4Cl饱和溶液猝灭反应并用EtOAc萃取(2x)。将合并的有机物用H2O和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩以得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-50％EtOAc于石油醚中)。获得呈白色粉末状的标题化合物(1.3g，41％)。
步骤3：4-((1-苄基-1,4,5,6-四氢环戊[c]吡唑-3-基)(羟基)甲基)-4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在无水THF(6.8mL)中的4-((1-苄基-1,4,5,6-四氢环戊[c]吡唑-3-基)(羟基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸1-(叔丁基)4-乙酯(1.3g，2.69mmol)的溶液在0℃冷却，用LiAlH4(1N于THF中；3.23mL，3.23mmol)处理并将混合物在0℃搅拌4小时。用柠檬酸(10％水性溶液)缓慢猝灭反应，然后用EtOAc稀释并用罗谢尔盐饱和溶液洗涤。分离各相，有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈白色固体的标题化合物(1.11g，93％)，将其作为粗品用于后续步骤。LCMS(ES+)方法2：m/z 442(M+H)+，RT 1.83分钟。
步骤4：4-((1-苄基-1,4,5,6-四氢环戊[c]吡唑-3-基)(羟基)甲基)-4-(((甲磺酰)氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
无水DCM(9.5mL)中的4-((1-苄基-1,4,5,6-四氢环戊[c]吡唑-3-基)(羟基)甲基)-4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.11g，2.51mmol)的溶液在0℃冷却，将其用DIPEA(1.32mL，7.54mmol)和甲磺酰氯(0.42mL，5.52mmol)处理。将混合物在0℃搅拌50分钟，然后用柠檬酸(10％水性溶液；50mL)猝灭。分离各相，并将有机层用H2O(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩以得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-100％EtOAc于石油醚中)。获得呈棕色固体的标题化合物(789mg，60％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.35-7.26(m，3H)，7.18(br d，J＝7.0Hz，2H)，5.33(d，J＝4.2Hz，1H)，5.14(s，2H)，4.53(d，J＝4.2Hz，1H)，4.32(d，J＝9.7Hz，1H)，4.19(d，J＝9.7Hz，1H)，3.58-3.45(m，2H)，3.15(s，3H)，3.12-3.05(m，2H)，2.60-2.53(m，2H)，2.44-2.39(m，2H)，1.58-1.40(m，4H)，1.36(s，9H)，1.36-1.33(m，2H)。LCMS(ES+)方法2：m/z 520(M+H)+，RT 1.95分钟。
步骤5：8-羟基-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-1′-羧酸叔丁酯
在密封管中，将1-BuOH(9.2mL)中的4-((1-苄基-1,4,5,6-四氢环戊[c]吡唑-3-基)(羟基)甲基)-4-(((甲磺酰)氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(789mg，1.52mmol)在120℃加热2小时。小心添加甲酸铵(287.2mg，4.55mmol)和Pd(OH)2(100mg，0.71mmol)，并将混合物在120℃加热1小时。冷却后，将混合物在硅藻土垫上过滤，用EtOAc和MeOH洗涤。将滤液减压蒸发并将残余物用EtOAc研磨。滤出固体并减压蒸发滤液。获得呈黄色粉末状的标题化合物(460mg，91％)，将其作为粗品使用。LCMS(ES+)方法2：m/z 334(M+H)+，RT 1.48分钟。
步骤6：8-氧代-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-1′-羧酸叔丁酯
DCM(6.9mL)中的8-羟基-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-1′-羧酸叔丁酯(460mg，1.38mmol)的溶液在0℃冷却，将其用戴斯-马丁高碘烷(643.7mg，1.52mmol)处理。将所得混合物升温至室温并搅拌90分钟。然后将反应混合物冷却至0℃并用Na2S2O3(1M水性溶液)处理，分离各相，并用DCM(60mL)萃取水性相。将合并的有机物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩以得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-70％EtOAc于石油醚中)。获得呈白色粉末状的标题化合物(287mg，63％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ4.44(s，2H)，3.94(br d，J＝12.5Hz，2H)，2.96(br s，2H)，2.74-2.66(m，4H)，2.42-2.35(m，2H)，1.68-1.60(m，4H)，1.42(s，9H)。LCMS(ES+)方法2：m/z 332(M+H)+，RT 1.82分钟。
步骤7：(S,Z)-8-((叔丁基亚磺酰)亚氨基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-1′-羧酸叔丁酯
THF(2.0mL)和Ti(OEt)4(2.18mL,10.39mmol)中的(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(315.0mg,2.60mmol)和8-氧代-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-1′-羧酸叔丁酯(287.0mg，0.87mmol)的溶液在100℃加热4小时。冷却至室温后，将反应混合物用EtOAc和H2O稀释。滤出形成的固体并用EtOAc洗涤。分离各相，将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩以得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-70％EtOAc于石油醚中)。获得呈黄色粉末状的标题化合物(161mg，42％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ4.39(s，2H)，4.02-3.95(m，2H)，2.91-2.80(m，3H)，2.76-2.72(m，3H)，2.37-2.32(m，2H)，1.78-1.71(m，4H)，1.41(s，9H)，1.13(s，9H)。LCMS(ES+)方法2：m/z 435(M+H)+，RT1.90分钟。
步骤8：(S)-8-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-1′-羧酸叔丁酯
THF(2.3mL)中的(S,Z)-8-((叔丁基亚磺酰)亚氨基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊并[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-1′-羧酸叔丁酯(161.0mg，0.37mmol)的溶液在-50℃冷却，将其用NaBH4(21.0mg，0.56mmol)处理，该混合物升温至室温并搅拌3小时。将反应混合物用EtOAc稀释并用H2O洗涤，分离各相，有机相经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物溶解在EtOH(3mL)中，并将溶液加热回流1小时。减压除去挥发物后，通过快速色谱纯化残余物(梯度洗脱0-2.5％MeOH于EtOAc)。获得呈白色粉末状的标题化合物(65mg，24％，非对映体比率90/10)。LCMS(ES+)方法2：m/z 437(M+H)+，RT 1.72分钟。
步骤9：(S)-2-甲基-N-((S)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-基)丙烷-2-亚磺酰胺双(2,2,2-三氟乙酸盐)(中间体19)
DCM(1.2mL)中的(S)-8-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊并[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-1′-羧酸叔丁酯(65.0mg，0.15mmol)的溶液用TFA(0.3mL)处理并在室温搅拌30分钟。然后将反应混合物与甲苯和Et2O共蒸发，得到呈无色油状物的标题化合物(130mg，50％纯度，77％，非对映异构体比率88/12)，将其作为粗品用于后续步骤。LCMS(ES+)方法2：m/z 337(M+H)+，RT 0.98分钟。
中间体20：2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇
步骤1：(叔丁氧基羰基)(3-氯-4-碘吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯
将在DCM(44.0mL)中的3-氯-4-碘吡啶-2-胺(1.12g，4.40mmol)和Boc2O(5.06mL，22.01mmol)的溶液用DMAP(107mg，0.88mmol)和TEA(1.84mL，13.2mmol)处理，并在室温搅拌24小时。反应混合物用DCM稀释并用H2O，盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩以得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱5-50％EtOAc于石油醚中)。获得呈白色粉末状的标题化合物(1.85g，92％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.04(d，J＝5.0Hz，1H)，7.78(d，J＝5.0Hz，1H)，1.43(s，18H)；LCMS(ES+)方法2：m/z 455(M+H)+，RT 2.28分钟。
步骤2：3-((2-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-3-氯吡啶-4-基)硫代)丙酸2-乙基己酯
将在脱气干燥1,4-二噁烷(20.0mL)中的3-巯基丙酸2-乙基己酯(1.01mL，4.43mmol)和(叔丁氧基羰基)(3-氯-4-碘吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.83g，4.02mmol)的溶液用Pd2(dba)3(99.17mg,0.11mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(125.33mg,0.22mmol)和DIPEA(1.4mL,8.05mmol)处理，该混合物在95℃搅拌2小时。冷却后，将反应混合物在纤维素(solka floc)垫上过滤，然后减压除去挥发物，并通过快速色谱纯化残余物(梯度洗脱0-50％EtOAc于石油醚中)，得到橙色油状的标题化合物(2.19g，99％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.30(d，J＝5.0Hz，1H)，7.09(d，J＝5.0Hz，1H)，4.12-4.04(m，2H)，3.28(t，J＝7.3Hz，2H)，2.76(t，J＝7.3Hz，2H)，1.64-1.55(m，1H)，1.42(s，18H)，1.39-1.26(m，8H)，0.91(t，J＝7.2Hz，6H)；LCMS(ES+)方法2：m/z 545(M+H)+，RT 2.85分钟。
步骤3：2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇(中间体20)
THF(16.0mL)中的3-((2-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-3-氯吡啶-4-基)硫代)丙酸2-乙基己酯(2.51g，4.60mmol)的溶液冷却至-78℃，将其用t-BuOK(1.0M溶液于THF中；9.21mL，9.21mmol)处理，并且该混合物在-78℃搅拌1小时。添加H2O后，减压去除有机溶剂。用Et2O(3x)洗涤水性相，并将收集的有机物减压浓缩。残余物通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-100％MeCN于H2O中)以获得单和双-Boc产物的混合物(比率2/1)。将混合物溶解在1.4-二噁烷/饱和溶液NaHCO3溶液(50mL，1/1v/v)并用Boc2O(1.0g)处理。在室温下搅拌2小时后，将反应混合物减压浓缩，并将残余物用H2O和iPrOH/CHCl3(9/1)的混合物稀释，并用HCl(1N)洗涤。用iPrOH/CHCl3(9/1)溶液萃取水性相。有机相经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-100％MeCN/H2O+0.1％TFA)。获得呈黄色粉末状的标题化合物(664mg，90％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.56(d，J＝7.9Hz，1H)，6.74(d，J＝7.9Hz，1H)。LCMS(ES+)方法2：m/z 161(M+H)+，RT 0.32分钟。
中间体21：3-氯-2-((4-甲氧基苄基)氨基)吡啶-4-硫醇
步骤1：3-氯-4-碘-N-(4-甲氧基苄基)吡啶-2-胺
将3-氯-2-氟-4-碘吡啶(1.0g，3.88mmol)在DMSO(10.0mL)中的溶液用4-甲氧基苄胺(1.02mL，7.77mmol)处理并在80℃搅拌4小时。冷却后，将混合物用EtOAc和H2O稀释，分离两相，将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩以得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-50％EtOAc于石油醚中)。获得呈无色油状的标题化合物(1.35g，93％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.67(d，J＝5.3Hz，1H)，7.29(d，J＝8.2Hz，2H)，7.06(d，J＝5.3Hz，1H)，6.89(d，J＝8.1Hz，2H)，5.35(br s，1H)，4.58(d，J＝5.5Hz，2H)，3.81(s，3H)。LCMS(ES+)方法2：m/z 375(M+H)+，RT 2.31分钟。
步骤2：3-((3-氯-2-((4-甲氧基苄基)氨基)吡啶-4-基)硫代)丙酸2-乙基己酯
使用合成中间体20的步骤2中描述的过程获得呈橙色油状的标题化合物(1.61g，96％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.96(d，J＝5.5Hz，1H)，7.29(d，J＝8.2Hz，2H)，6.89(d，J＝8.1Hz，2H)，6.47(d，J＝5.7Hz，1H)，5.22(br s，1H)，4.61(d，J＝5.5Hz，2H)，4.10-4.03(m，2H)，3.81(s，3H)，3.24(t，J＝7.5Hz，2H)，2.74(t，J＝7.5Hz，2H)，1.62-1.55(m，1H)，1.40-1.25(m，8H)，0.90(t，J＝7.5Hz，6H)；LCMS(ES+)方法2：m/z 465(M+H)+，RT 2.75分钟。
步骤3：3-氯-2-((4-甲氧基苄基)氨基)吡啶-4-硫醇(中间体21)
将3-((3-氯-2-((4-甲氧基苄基)氨基)吡啶-4-基)硫代)丙酸2-乙基己酯(1.61g，3.46mmol)在MeOH(34.7mL，0.86mol)中的溶液用NaOMe(25重量％于MeOH中；13.23mL，14.54mmol)处理并将混合物在室温搅拌18小时。添加H2O后，减压去除溶剂。用Et2O(3x)洗涤水性相，然后将其冷却至0℃，用HCl(6N水性溶液)酸化并用CHCl3/iPrOH(9/1)的混合物萃取。有机相经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩以得到标题化合物(960mg，99％)，将其作为粗品使用。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.83(d，J＝5.3Hz，1H)，7.30(d，J＝8.2Hz，2H)，6.89(d，J＝8.1Hz，2H)，6.56(d，J＝5.3Hz，1H)，5.25(br s，1H)，4.61(d，J＝5.0Hz，2H)，3.81(s，3H)。LCMS(ES+)方法2：m/z 281(M+H)+，RT 1.11分钟。
中间体22：3-氨基-5-氯吡嗪-2-硫醇
步骤1：3-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫代)丙酸甲酯
在脱气干燥1,4-二噁烷(10mL)中的3-溴-6-氯吡嗪-2-胺(1.0g，4.8mmol)的溶液用Pd(OAc)2(26.93mg，0.12mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(138.80mg，0.24mmol)，3-巯基丙酸甲酯(0.53mL，4.8mmol)和DIPEA(1.67mL，9.6mmol)处理。将混合物在密封小瓶中于95℃搅拌18小时。冷却后，将反应混合物通过纤维素垫过滤。减压除去挥发物，并通过快速色谱纯化残余物(梯度洗脱5-50％EtOAc于石油醚中)，得到呈浅黄色粉末状的标题化合物(1.06g，89％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.82(s，1H)，4.83(br s，2H)，3.72(s，3H)，3.47(t，J＝6.9Hz，2H)，2.78(t，J＝6.9Hz，2H)；LCMS(ES+)方法2：m/z 248(M+H)+，RT1.53分钟。
步骤2：3-氨基-5-氯吡嗪-2-硫醇(中间体22)
THF(8.6mL)中的3-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫代)丙酸甲酯(1.06g，4.28mmol)的溶液冷却至-30℃，将其用EtONa(溶液20重量％于EtOH中；9.9mL，5.56mmol)处理。将混合物逐渐升温至室温。2小时后，减压条件除去EtOH并用DCM稀释残余物。观察到产物沉淀，过滤固体并用NaOH(1N)水性溶液处理。将水性相用DCM洗涤并用HCl(6N)水性溶液处理。黄色固体沉淀，过滤并干燥以得到标题化合物(0.69g，99％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ14.07(br s，1H)，7.85(br s，1H)，7.11(s，1H)，6.96(br s，1H)。LCMS(ES+)方法2：m/z 162(M+H)+，RT 0.68分钟。
中间体23：1-乙酰基-4-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫代)-3,3-二氟吲哚啉-2-酮
步骤1：3,3-二氟-4-碘吲哚啉-2-酮
DCM(10.6mL)中的4-碘吲哚啉-2,3-二酮(780mg，2.86mmol)的溶液在0℃冷却，将其用N,N-二乙基-1,1,1-三氟-λ-4-磺胺(1.13mL，8.57mmol)逐滴处理。将所得混合物在室温搅拌18小时，然后在剧烈搅拌下逐滴添加至NaHCO3(1.95g于10.5mL H2O)的水性溶液中。分离各层，并用DCM(2x50 mL)萃取水性相。将合并的有机层用H2O，盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，将残余物通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-50％EtOAc于石油醚中)，得到呈棕色粉末的标题化合物(425mg，纯度87％，44％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.3(br s，1H)，7.54(d，J＝8.1Hz，1H)，7.25(t，J＝7.7Hz，1H)，6.99(d，J＝7.9Hz，1H)；LCMS(ES+)方法1：m/z 296(M+H)+，RT 1.60分钟。
步骤2：1-乙酰基-3,3-二氟-4-碘吲哚啉-2-酮
将在THF(2.6mL)中的的3,3-二氟-4-碘吲哚啉-2-酮(200mg，0.680mmol)溶液冷却至0℃，将其用硼烷二甲硫醚复合物(2M于THF中；1.36mL，2.71mmol)逐滴处理。将所得混合物在室温搅拌2小时，然后通过逐滴添加10％柠檬酸水性溶液(1mL)猝灭。然后添加H2O(5mL)，并用EtOAc(2x30 mL)萃取混合物。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下部分浓缩。在0℃下添加DIPEA(0.24mL，1.36mmol)和AcCl(0.1mL，1.36mmol)并将混合物搅拌2小时。添加H2O，并分离有机层。用EtOAc萃取水性相。将组合的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，将残余物通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-50％EtOAc于石油醚中)，得到标题化合物(70mg，纯度32％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 323(M+H)+，RT 1.73分钟。
步骤3：1-乙酰基-4-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫代)-3,3-二氟吲哚啉-2-酮(中间体23)
1,4-二噁烷(2.0mL)中的Pd2(dba)3(20.34mg，0.02mmol)和DIPEA(0.15mL，0.89mmol)，1-乙酰基-3,3-二氟-4-碘吲哚啉-2-酮(90.0mg,0.28mmol)，3-氨基-5-氯吡嗪-2-硫醇(中间体22；49.52mg，0.31mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(25.71mg，0.04mmol)的脱气悬浮液在65℃加热1小时。冷却后，将反应混合物通过纤维素垫过滤。减压除去挥发物并以粗品使用标题化合物。LCMS(ES+)方法1：m/z 355(M+H)+，RT 1.64分钟。
中间体24：1-苄基-4,6-二氢-1H-呋喃并[3,4-c]吡唑-3-甲醛
步骤1：2-氧代-2-(4-氧代四氢呋喃-3-基)乙酸乙酯
将在THF(120mL)中的二氢呋喃-3(2H)-酮(2.0g，23.23mmol)溶液冷却至-78℃，用LDA(2N于THF中；11.62mL，23.23mmol)处理并在-78℃搅拌15分钟。添加草酸二乙酯(3.47mL，25.55mmol)，并将反应混合物在-78℃搅拌30分钟，然后在室温搅拌3小时。将反应混合物用水性1N HCl猝灭，然后在EtOAc和水性柠檬酸之间分配。分离有机相，用H2O，盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩以得到无需进一步纯化即可使用的标题化合物(3.5g，81％)。
步骤2：1-苄基-4,6-二氢-1H-呋喃并[3,4-c]吡唑-3-羧酸乙酯
将在EtOH(25mL)中的2-氧代-2-(4-氧代四氢呋喃-3-基)乙酸乙酯(3.5g，18.8mmol)溶液用硫酸(0.25mL，13.55mmol)和二盐酸苄肼(3.67g，18.8mmol)并将反应混合物在85℃加热30分钟。冷却至室温后，通过添加2N NaOH中和反应物。然后将混合物真空浓缩并将残余物在EtOAc和H2O之间分配。分离有机相，然后用NaHCO3饱和溶液，盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，将残余物通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-50％EtOAc于石油醚中)，得到呈黄色固体的标题化合物(1.45g，28％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.40-7.38(m，3H)，7.30-7.28(m，2H)，5.31(s，2H)，4.94-4.92(m，2H)，4.40(q，J＝7.2Hz，2H)，4.30-4.28(m，2H)，1.38(t，J＝7.3Hz，3H)；LCMS(ES+)方法1：m/z 273(M+H)+，RT 1.59分钟。
步骤3：(1-苄基-4,6-二氢-1H-呋喃并[3,4-c]吡唑-3-基)甲醇
THF(50mL)中的1-苄基-4,6-二氢-1H-呋喃并[3,4-c]吡唑-3-羧酸乙酯(1.7g，6.24mmol)的溶液在0℃用LiAlH4(1M于THF中；7.49mL，7.49mmol)处理，该混合物在该温度搅拌1小时。通过在0℃添加H2O(1.1mL)和在H2O中的15％NaOH(0.28mL)来猝灭反应。然后添加Na2SO4，并将混合物在室温下搅拌1小时。通过纤维素垫过滤固体，并将滤液浓缩至干，得到呈无色油状物的标题化合物(1.33g，93％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 231(M+H)+，RT 1.03分钟。
步骤4：1-苄基-4,6-二氢-1H-呋喃并[3,4-c]吡唑-3-甲醛(中间体24)
将在DCM(50mL)中的(1-苄基-4,6-二氢-1H-呋喃并[3,4-c]吡唑-3-基)甲醇(1.33g，5.78mmol)溶液在0℃用NaHCO3饱和溶液(1.46g，17.33mmol)和戴斯-马丁高碘烷(3.18g，7.51mmol)处理，并将该混合物在该温度下搅拌2小时。通过添加1MNa2S2O3水性溶液猝灭反应，并用DCM(3x)萃取。将合并的有机层用NaHCO3饱和溶液，盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，将残余物通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-30％EtOAc于石油醚中)，得到呈白色粉末状的标题化合物(1.1g，83％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 229(M+H)+，RT 1.38分钟。
中间体25：(R)-N-((S)-1,8-二氢-3H,6H-螺[呋喃[3,4-d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
根据中间体19所述的过程制备(R)-N-((S)-1,8-二氢-3H,6H-螺[呋喃[3,4-d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺双(2,2,2-三氟乙酸盐)(使用在步骤2中的中间体24，1-苄基-4,6-二氢-1H-呋喃[3,4-c]吡唑-3-甲醛，并使用Pd/C(10％w/w)代替步骤5中的Pd(OH)2)。获得呈无色油状的中间体25。LCMS(ES+)方法1：m/z 339(M+H)+，RT 0.75分钟。
中间体26：8-溴-5-氯咪唑并[1,5-a]吡嗪
步骤1：2-溴-3-(溴甲基)-5-氯吡嗪
CCl4(10mL)中的2-溴-5-氯-3-甲基吡嗪(1.0g，4.82mmol)的溶液用NBS(1.29g，7.23mmol)和2-[(E)-(1-氰基-1-甲基-乙基)偶氮]-2-甲基-丙腈(166.6mg，0.96mmol)处理。反应混合物在100℃加热16小时。将反应混合物冷却至室温并用DCM和H2O稀释。分离各相，有机相用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，将残余物通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-12％EtOAc于石油醚中)，得到呈黄色油状的标题化合物(664mg，75％纯度，36％)。
步骤2：N-((3-溴-6-氯吡嗪-2-基)甲基)甲酰胺
将在DMF(5.7mL)中的2-溴-3-(溴甲基)-5-氯吡嗪(984mg，3.44mmol)溶液用二甲酰胺钠(490mg，5.15mmol)处理并将所得混合物在室温搅拌30分钟。添加MeOH(11.4mL)和H2O(114uL)并将所得混合物在70℃搅拌1小时。减压除去挥发物，并通过快速色谱纯化残余物(梯度洗脱0-100％EtOAc于石油醚中)，得到呈浅黄色固体的标题化合物(325mg，纯度75％，28％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 248-250(M+H)+，RT 0.90分钟。
步骤3：8-溴-5-氯咪唑并[1,5-a]吡嗪(中间体26)
将溶解在POCl3(1.5mL，0.64mmol)中的N-((3-溴-6-氯吡嗪-2-基)甲基)甲酰胺(160.0mg，0.64mmol)溶液在90℃加热30分钟。将混合物冷却至室温后，减压去除溶剂。将残余物溶解在EtOAc中并用NaHCO3水性饱和溶液处理。分离各相，并用H2O和盐水洗涤有机相。有机项经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。用MeOH处理残余物，过滤固体并再次用MeOH洗涤。减压浓缩溶剂以得到残余物并通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-100％EtOAc于石油醚中)，得到呈黄色固体的标题化合物(130mg，87％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 230-232(M+H)+，RT 1.14分钟。
中间体27：6-氯-3-((8-氯-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-胺
根据中间体41所述的过程，步骤2，使用中间体22制备上述中间体。获得呈橙色固体的中间体27(52mg，46％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 326(M+H)+，RT 1.33分钟。
中间体28：(S)-4′-碘-6a′,7′-二氢-6′H,9′H-螺[环丙烷-1,8′-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪]
步骤1：(S)-6-(((2-氟吡啶-3-基)氧基)甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-羧酸叔丁酯
将2-氟-3-羟基吡啶(850mg，7.51mmol)和(6S)-6-(羟甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-羧酸叔丁酯(2.13g，9.39mmol)溶解在无水THF(15.0mL)中，然后在室温、氩气氛下添加PPh3(3.94g，15.03mmol)和DIAD(2.95mL，15.03mmol)。将所得混合物搅拌18小时。将混合物浓缩，并通过柱色谱法纯化粗产物(洗脱：0-50％EtOAc于环己烷中)，以得到呈黄色油状的标题化合物(1.26g，52％)。LCMS(ES+)方法5：m/z 267[M+H-tBu]+。
步骤2：(S)-6-(((2-氟吡啶-3-基)氧基)甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷
(S)-6-(((2-氟吡啶-3-基)氧基)甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-羧酸叔丁酯(1.26g,3.92mmol)溶解于DCM(7mL)，用1,4-二噁烷中的HCl(4N；7.0mL)处理。将反应混合物在室温搅拌4小时。完成后，减压蒸发溶剂。用DCM稀释粗产物并浓缩以得到呈灰白色固体(2xHCl盐)的标题化合物(1.02g，定量)。LCMS(ES+)方法6：m/z 223(M+H)+。
步骤3：(S)-6a′,7′-二氢-6′H,9′H-螺[环丙烷-1,8′-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪]
(S)-6-(((2-氟吡啶-3-基)氧基)甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷(1.02g，4.58mmol)溶解于EtOH(27.5mL)，添加K2CO3(3.17g，22.92mmol)。混合物在65℃搅拌18小时，然后过滤并浓缩滤液。通过柱色谱法纯化粗产物(洗脱：0-40％EtOAc于环己烷中)，以得到呈黄色油状的标题化合物(448mg，51％)。LCMS(ES+)方法5：m/z 203(M+H)+。
步骤4：(S)-4′-碘-6a′,7′-二氢-6′H,9′H-螺[环丙烷-1,8′-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪](中间体28)
(S)-6a′,7′-二氢-6′H,9′H-螺[环丙烷-1,8′-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪](285mg，1.40mmol)溶解于无水THF(7.0mL)中，然后在-78℃，N2气氛下添加t-BuLi(1.7M于戊烷中；2.90mL，4.93mmol)。混合物在该温度下搅拌1小时。然后，在-78℃逐滴添加在无水THF(1.0mL)中的I2(715.3mg，2.81mmol)溶液。将所得混合物升温至室温并搅拌3小时。完成后，在0℃用H2O猝灭反应并用EtOAc萃取(3x)。分离各相，用盐水洗涤有机层，经Na2SO4干燥和过滤。将滤液浓缩，并通过柱色谱法纯化粗产物(洗脱：0-10％EtOAc于环己烷中)，以得到呈白色固体的标题化合物(308mg，66％)。1H NMR(500MHz DMSO-d6)δ7.28(d，J＝5.3Hz，1H)，6.85(d，J＝5.3Hz，1H)，4.54(dd，J＝10.4，3.4Hz，1H)，3.93-3.84(m，1H)，3.56(d，J＝10.5Hz，1H)，3.49(t，J＝10.0Hz，1H)，3.16(d，J＝10.6Hz，1H)，1.83(t，J＝10.9Hz，1H)，1.62(dd，J＝11.8，5.7Hz，1H)，0.72-0.55(m，4H)；LCMS(ES+)m/z 329[M+H]+
中间体29：3-(((S)-6a′,7′-二氢-6′H,9′H-螺[环丙烷-1,8′-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪]-4′-基)硫代)丙酸2-乙基己基酯
步骤1：3-(((S)-6a′,7′-二氢-6′H,9′H-螺[环丙烷-1,8′-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪]-4′-基)硫代)丙酸2-乙基己基酯(中间体29)
将中间体28(200mg，0.61mmol)溶解在无水1,4-二噁烷(2.0mL)中，在20℃添加3-巯基丙酸庚-3-基酯(152.5μL，0.67mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(35.2mg，0.06mmol)，Pd2(dba)3(33.5mg，0.04mmol)和DIPEA(212.9μL，1.22mmol)。将混合物用氩气吹扫并在压力容器中在回流温度下加热1小时。完成后，将混合物用H2O稀释并用DCM(x3)萃取。合并的有机萃取物用盐水(x2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法纯化粗产物(洗脱：0-30％EtOAc于环己烷中)，以得到呈橙色油状的标题化合物(245mg，96％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.65(d，J＝5.4Hz，1H)，6.41(d，J＝5.4Hz，1H)，4.50(dd，J＝10.3，3.3Hz，1H)，4.05-3.94(m，3H)，3.72(d，J＝10.0Hz，1H)，3.52(t，J＝9.9Hz，1H)，3.30(d，J＝10.2Hz，1H)，3.18(t，J＝7.5Hz，2H)，2.67(t，J＝7.5Hz，2H)，1.86(t，J＝0.9Hz，1H)，1.70-1.60(m，1H)，1.58-1.50(m，1H)，1.39-1.31(m，2H)，1.27(s，6H)，0.88(t，J＝7.3Hz，6H)，0.78-0.58(m，4H)；LCMS(ES+)方法9：m/z 419[M+H]+。
中间体30：(S)-4-碘-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪
步骤1：(S)-2-(((2-氟吡啶-3-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
将2-氟-3-羟基吡啶(300mg，2.65mmol)和Boc-L-脯氨醇(640.7mg，3.18mmol)溶解在无水THF(5.3mL)中，然后在室温，N2气氛下添加PPh3(1.04g，3.98mmol)和DEAD(624μL，3.98mmol)。将所得混合物在室温搅拌18小时，浓缩，并通过柱色谱法纯化粗产物(洗脱：0-20％EtOAc于环己烷中)，以得到呈淡黄色油状物的标题化合物(403mg，51％)。LCMS(ES+)方法5：m/z 241[M+H-tBu]+。
步骤2：(S)-2-氟-3-(吡咯烷-2-基甲氧基)吡啶
(S)-2-(((2-氟吡啶-3-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(353mg,1.19mmol)溶解于DCM(2.1mL)，添加1,4-二噁烷中的HCl(4N；7.0mL)。将混合物在室温搅拌4小时。完成后，减压蒸发溶剂。用DCM稀释粗产物并在此蒸发。重复该过程三次，得到呈白色固体(2xHCl盐)的标题化合物(284mg，定量)。LCMS(ES+)方法7：m/z 197(M+H)+。
步骤3：(S)-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪
将(S)-2-氟-3-(吡咯烷-2-基甲氧基)吡啶双HCl盐(284mg，1.16mmol)溶解于EtOH(6.9mL)中并添加K2CO3(800mg，5.79mmol)。将混合物在65℃下搅拌18小时。完成后，过滤混合物，并将滤液减压浓缩。通过柱色谱法纯化粗产物(洗脱：0-3％MeOH于CHCl3中)，以得到呈黄色油状的标题化合物(191mg，93％)。LCMS(ES+)方法5：m/z 177(M+H)+。
步骤4：(S)-4-碘-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪(中间体30)
(S)-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪(191mg，1.08mmol)溶解于无水THF(5.4mL)中，然后在-78℃，N2气氛下逐滴添加BuLi(2.5M于戊烷中；1.08mL，2.71mmol)。将混合物温热至0℃并搅拌1.5小时，然后冷却回-78℃，并在-78℃逐滴添加在无水THF(650μL)中的I2(330mg，1.30mmol)溶液。将所得混合物升温至室温并搅拌18小时，然后用饱和水性NH4Cl溶液猝灭并用EtOAc稀释。分离各相，用盐水洗涤有机层，经MgSO4干燥和过滤。将滤液浓缩，并通过柱色谱法纯化粗产物(洗脱：0-25％EtOAc于环己烷中)，以得到呈米色固体的标题化合物(85mg，26％)。1H NMR(300MHz DMSO-d6)δ7.32(d，J＝5.3Hz，1H)，6.85(d，J＝5.3Hz，1H)，4.58(dd，J＝10.3，3.5Hz，1H)，3.71-3.50(m，2H)，3.43(t，J＝9.8Hz，2H)，2.16-1.81(m，3H)，1.57-1.39(m，1H)；LCMS(ES+)方法8：m/z 303[M+H]+。
中间体31：5-溴-4-氯-2-甲基-2H-吲唑
步骤1：5-溴-4-氯-1H-吲唑
将在AcOH(17mL)中的4-溴-3-氯-2-甲基苯胺(867mg，3.93mmol)的溶液用在H2O(1.5mL)中的NaNO2(339.0mg，4.91mmol)的溶液处理。将混合物在室温搅拌1小时。减压浓缩溶剂，将残余物悬浮在H2O中，过滤并用H2O和正庚烷洗涤。分离各相，减压浓缩有机相以得到残余物并通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-30％EtOAc于环己烷中)，得到呈淡橙色固体的标题化合物(328mg，36％)。LCMS(ES+)m/z 231(M+H)+，RT 1.59分钟。
步骤2：5-溴-4-氯-2-甲基-2H-吲唑(中间体31)
在0℃，用四氟硼酸三甲基氧鎓(1.43g，9.65mmol)处理在EtOAc(32mL)中的5-溴-4-氯-1H-吲唑(1.49g，6.45mmol)溶液。将所得混合物升温至室温并搅拌5小时。完成后，将混合物用NaHCO3饱和溶液淬灭并用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过快速色谱纯化粗产物(梯度洗脱0-30％EtOAc于正庚烷)，得到呈橙色固体的标题化合物(900mg，57％)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6):δ8.49(s，1H)，7.52(d，J＝9.0Hz，1H)，7.44(d，J＝9.0Hz，1H)，4.16(s，3H)。LCMS(ES+)m/z 245(M+H)+，RT 1.69分钟。
中间体32和33：3-氯-4-碘-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶和2-氯-5-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪
步骤1：3-氯-4-碘-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶(中间体32)
将在DMF(3mL)中的3-氯-2-氟-4-碘吡啶(200mg，0.78mmol)，1H-吡唑(105.8mg，1.55mmol)和K2CO3(217.9mg，1.55mmol)溶液在80℃搅拌3小时。冷却后，将混合物用5％柠檬酸处理，并将所得水性层用DCM(3x 2mL)萃取。将收集的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物，将残余物通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-50％EtOAc于石油醚中)，得到呈无定型白色固体的标题化合物(196mg，83％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 306(M+H)+，RT 1.70分钟。
步骤2：2-氯-5-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪(中间体33)
5-氯吡嗪-2-硫醇钠溶液(按照合成中间体16，步骤1和2的方法制备；30mg，0.18mmol)，在1,4-二噁烷(0.6mL)中的3-氯-4-碘-2-(1H-吡唑-1-基))吡啶(中间体32；62mg，0.20mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(10.3mg，0.02mmol)，Pd2(dba)3(16.3mg，0.02mmol)和DIPEA(84uL，0.48mmol)的溶液在110℃加热1小时。冷却后，减压除去溶剂，得以到残余物，将其通过反相色谱法纯化(15-55％MeCN/H2O+0.1％TFA)。
减压除去溶剂后，将所得残余物溶解在EtOAc中并用NaHCO3饱和溶液处理。将有机相用Na2SO4干燥，过滤，并减压蒸发，得到呈黄色固体的标题化合物(13mg，23％)。
LCMS(ES+)方法1：m/z 324,26(M+H)+，RT 1.88分钟。
中间体34和35：3-氯-2-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)-4-碘吡啶和2-氯-5-((3-氯-2-(3,5-二甲基-1H-吡唑)-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪
步骤1：3-氯-2-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)-4-碘吡啶(中间体34)
在DMF(3mL)中的K2CO3(217.9mg，1.55mmol)和3,5-二甲基-1H-吡唑(149.4mg，1.55mmol)，3-氯-2-氟-4-碘吡啶(200mg，0.78mmol)的溶液在微波辐射下于80℃搅拌8小时。冷却后，将混合物减压浓缩并将残余物溶解在EtOAc中，用H2O和5％柠檬酸洗涤。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并减压浓缩以得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-50％EtOAc于石油醚中)，得到呈淡黄色固体的标题化合物(150mg，58％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.18(d，J＝2.6Hz，2H)，6.07(s，1H)，2.18(s，3H)，2.12(s，3H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 334，336(M+H)+，RT 1.79分钟。
步骤2：2-氯-5-((3-氯-2-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪(中间体35)
5-氯吡嗪-2-硫醇钠溶液(按照合成中间体16，步骤1和2的报道制备；30mg，0.18mmol)，在1,4-二噁烷(0.6mL)中的中间体34(67mg，0.20mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(20.5mg，0.04mmol)，Pd2(dba)3(32.5mg，0.04mmol)和DIPEA(92uL，0.53mmol)的溶液在110℃加热1小时。真空蒸发溶剂后，将残余物溶解在DCM(5mL)中并用H2O洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压条件下去除溶剂。将产物通过硅胶快速色谱纯化(梯度洗脱25％EtOAc于石油醚中)以获得标题化合物(29mg，40％)。LCMS(ES+)方法1：m/z352，354(M+H)+，RT 1.95分钟。
中间体36：3-氯-4-((6-氯哒嗪-3-基)硫代)吡啶-2-胺
步骤1：3-氯-4-((6-氯哒嗪-3-基)硫代)吡啶-2-胺
将在1,4-二噁烷(1.0mL)中的中间体20(25.1mg，0.16mmol)，3-氯-6-碘哒嗪(25mg，0.10mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(12mg，0.02mmol)，Pd2(dba)3(9.5mg，0.01mmol)和DIPEA(54uL，0.31mmol)的溶液在90℃加热24小时。冷却后，减压除去溶剂，得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-70％EtOAc+5％MeOH于石油醚中)以得到呈白色粉末的标题化合物(12mg，42％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 273(M+H)+，RT 1.77分钟。
中间体37：(S)-4’-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-4’H,6’H-螺[哌啶-4,5’-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-1-羧酸叔丁酯
步骤1：1-苄基-1H-1,2,3-三唑-4-甲醛
在干燥MeCN(34mL)中的1H-1,2,3-三唑-5-甲醛(1.0g，10.3mmol)，K2CO3(3.6g，25.76mmol)和苄基溴(1.3mL，10.96mmol)的悬浮液，于70℃加热1小时。将混合物用甲苯稀释并用H2O(x2)和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压条件下去除溶剂。将残余物通过硅胶快速色谱纯化(10％至30％EtOAc于石油醚中)以得到呈白色粉末状的标题化合物(965mg，50％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.02(s，1H)，8.98(s，1H)，7.44-7.30(m，5H)，5.70(s，2H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 188(M+H)+，RT 1.39分钟。
步骤2：4-((1-苄基-1H-1,2,3-三唑-4-基)(羟基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸1-(叔丁基)4-乙酯
从1-苄基-1H-1,2,3-三唑-4-甲醛(965mg，5.15mmol)开始，与合成中间体1的步骤2中所述的过程相同。LCMS(ES+)方法1：m/z 445(M+H)+，RT 1.94分钟。
步骤3：4-((1-苄基-1H-1,2,3-三唑-4-基)(羟基)甲基)-4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
从4-((1-苄基-1H-1,2,3-三唑-4-基)(羟基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸1-(叔丁基)4-乙基酯(2.0g，4.48mmol)开始，与合成中间体1的步骤3中所述的过程相同。LCMS(ES+)方法1：m/z 403(M+H)+，RT 1.65分钟。
步骤4：4-((1-苄基-1H-1,2,3-三唑-4-基)(羟基)甲基)-4-(((甲磺酰)氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
从4-((1-苄基-1H-1,2,3-三唑-4-基)(羟基)甲基)-4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.74g，4.32mmol)开始，与合成中间体1的步骤4中所述的过程相同，通过硅胶快速色谱纯化(20％至80％EtOAc于环己烷中)后得到白色固体(838mg，40％，3步)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.04(s，1H)，7.40-7.26(m，5H)，5.66-5.54(m，3H)，4.76(d，J＝4.9Hz，1H)，4.38-4.28(m，1H)，4.28-4.20(m，1H)，3.68-3.47(m，2H)，3.19-3.02(m，4H)，1.54-1.32(m，14H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 481(M+H)+，RT 1.83分钟。
步骤5：4′-羟基-4′H,6′H-螺[环己烷-1,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4-羧酸叔丁酯
在密封管中，将在无水MeOH(25mL)中的4-((1-苄基-1H-1,2,3-三唑-4-基)(羟基)甲基)-4-(((甲磺酰基)氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(838mg，1.74mmol)的溶液在90℃加热24小时。减压除去挥发物。将白色粉末溶解在DME(6mL)中，并添加NaOH(20％于H2O中；2.0mL，11.94mmol)和苯硫酚(0.9mL，8.74mmol)。将混合物在90℃加热6小时。在冷却后，将混合物用EtOAc稀释并用H2O(x2)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压条件下去除溶剂。反相纯化(5％至40％MeCN/H2O+0.1％TFA)后获得呈灰白色粉末状的标题化合物(210mg，42％，2步)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.66(s，1H)，5.79(d，J＝6.9Hz，1H)，4.73(d，J＝6.9Hz，1H)，4.32-4.21(m，2H)，3.66-3.54(m，2H)，3.26-3.10(m，2H)，1.81-1.69(m，1H)，1.57-1.37(m，12H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 295(M+H)+，RT 1.34分钟。
步骤6：4′-氧代-4′H,6′H-螺[环己烷-1,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4-羧酸叔丁酯
从4′-羟基-4′H,6′H-螺[环己烷-1,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4-羧酸叔丁酯(210mg，0.713mmol)开始，与合成中间体1的步骤6中所述的过程相同。LCMS(ES+)方法1：m/z 293(M+H)+，RT 1.61分钟。
步骤7：(R,Z)-4′-((叔丁基亚磺酰)亚氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-1-羧酸叔丁酯
从4′-氧代-4′H,6′H-螺[环己烷-1,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4-羧酸叔丁酯(208mg，0.71mmol)开始，与合成中间体1的步骤7中所述的过程相同，通过硅胶快速色谱(0％至100％EtOAc+5％MeOH的石油醚溶液)纯化后，得到标题化合物(265mg，94％，2步)，其呈白色粉末状。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.20(s，1H)，4.75-4.61(m，2H)，3.96(br d，J＝13.3Hz，2H)，3.09-2.84(m，2H)，1.86-1.82(m，2H)，1.82-1.62(m，2H)，1.42(s，9H)，1.22(s，9H)。LCMS(ES+)方法1：m/z396(M+H)+，RT 1.87分钟。
步骤8：(S)-4’-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-4’H,6’H-螺[哌啶-4,5’-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-1-羧酸叔丁酯
从(R,Z)-4′-((叔丁基亚磺酰)亚氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-1-羧酸叔丁酯(265mg，0.67mmol)开始，与合成中间体1的步骤8中所述的过程相同，通过硅胶快速色谱(0％至3％MeOH于EtOAc)纯化后得到标题化合物(100mg，40％，2步)，其呈无色固体。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.58(s，1H)，6.03(d，J＝9.9Hz，1H)，4.56(d，J＝10.0Hz，1H)，4.35(dd，J＝24.1，11.8Hz，2H)，3.93-3.70(m，2H)，3.00(s，2H)，1.76-1.58(m，3H)，1.41(s，10H)，1.15(s，9H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 398(M+H)+，RT 1.53分钟。
步骤9：(R)-2-甲基-N-((S)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-基)丙烷-2-亚磺酰胺(中间体37)
在室温将TFA(0.3mL，3.92mmol)添加到在DCM中的(S)-4′-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.25mmol)。2小时后，减压除去挥发物，得到无色固体(130mg)。LCMS(ES+)方法1：m/z 298(M+H)+。
中间体38：(2-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-3-氯吡啶-4-基)硼酸
步骤1：(4-溴-3-氯吡啶-2-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸叔丁酯
将在DCM(6mL)中的4-溴-3-氯吡啶-2-胺(106mg，0.51mmol)和Boc2O(558mg，2.55mmol)的溶液用DMAP(12.5mg，0.10mmol)和TEA(0.21mL，1.53mmol)处理。将所得混合物室温搅拌12小时。然后逐滴添加H2O(5mL)，并用Et2O(2x50mL)萃取混合物。将有机相用H2O，盐水洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩以得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-50％EtOAc于石油醚中)以得到呈白色固体的标题化合物(184mg，88％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.35(d，J＝4.0Hz，1H)，7.94(d，J＝4.1Hz，1H)，1.36(s，18H)。LCMS(ES+)m/z 407，409(M+H)+，RT 2.26分钟。
步骤2：(2-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-3-氯吡啶-4-基)硼酸(中间体38)
在1,4-二噁烷(2.5mL)中的(4-溴-3-氯吡啶-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.25mmol)，KOAc(48.2mg，0.49mmol)，Pd(dppf)Cl2 DCM(20.3mg，0.02mmol)和B2Pin2(68.5mg，0.27mmol)的溶液在85℃搅拌16小时。冷却后，将混合物在纤维素垫上过滤，并将滤液用EtOAc洗涤。将有机相真空浓缩，得到标题化合物，将其原样用于后续步骤。LCMS(ES+)m/z 373(M+H)+，RT 1.55分钟。
中间体39：6-氯-3-碘-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪
步骤1：6-氯-3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪
将6-氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(850mg，5.5mmol)悬浮于MeCN(7mL)中，然后依次添加NIS(1.86g，8.25mmol)和HBF4(48％于H2O中；1.72mL，13.14mmol)。将所得混合物回流3小时，然后通过冰浴冷却并过滤。用冷MeCN(x3)洗涤黄色沉淀物以获得呈黄色固体的标题化合物(1.25g，81％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ14.66(br s，1H)，8.70(s，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 281(M+H)+，RT 1.65分钟。
步骤2：6-氯-3-碘-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(中间体39)
将6-氯-3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(754mg，2.69mmol)溶解在DCM(13mL)中并用3,4-二氢-2H-吡喃(0.76mL，8.33mmol)和对甲苯磺酸(155mg，0.90mmol)。将反应物在室温下搅拌30分钟，然后倒入NaHCO3饱和溶液(30mL)并用DCM(x3)萃取。真空蒸发合并的有机萃取物，将残余物通过硅胶快速色谱纯化(0％至20％EtOAc于石油醚中)以得到浅黄色固体的标题化合物(600mg，61％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.59(s，1H)，5.99(dd，J＝10.4和2.6Hz，1H)，4.14(m，1H)，3.82(m，1H)，2.67(m，1H)，2.19(m，1H)，2.00(m，1H)，1.92-1.74(m，2H)，1.67(m，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 365(M+H)+，RT 2.16分钟。
中间体40：(R)-2-甲基-N-((S)-5′H,7′H-螺[哌啶-4,6′-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑]-7′-基)丙烷-2-亚磺酰胺
步骤1：1-三苯甲基-1H-1,2,4-三唑-3-甲醛
在室温将K2CO3(732mg，5.29mmol)添加至在无水DMF(6mL)中的1H-1,2,4-三唑-5-甲醛(257mg，2.65mmol)的溶液。10分钟后，添加三苯甲基氯(1.1g，3.97mmol)并将反应混合物在50℃搅拌40分钟。再次添加K2CO3(732mg，5.29mmol)并将反应混合物在50℃再搅拌90分钟。将反应物用EtOAc稀释并添加H2O。分离有机层，用H2O(x2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂。将所得粗品通过硅胶快速色谱纯化(10％至30％EtOAc于石油醚中)以得到灰白色固体的标题化合物(494mg，55％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.07(d，J＝0.6Hz，1H)，8.15(s，1H)，7.49-7.33(m，10H)，7.21-7.10(m，5H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 362(M+Na)+，RT2.22分钟。
步骤2：4-(羟基(1-三苯甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸1-(叔丁基)4-乙酯
在-78℃下，将LDA(2N于THF中；1.1mL，2.12mmol)添加至无水THF(9mL)中的1-叔丁氧基羰基哌啶-4-羧酸乙酯(0.39mL，1.58mmol)的溶液中。10分钟后，缓慢添加无水THF(8mL)中的1-苄基-1H-吡唑-3-甲醛(589mg，1.74mmol)溶液。将所得混合物升温至室温并搅拌40分钟。通过添加1N HCl溶液猝灭反应并用EtOAc萃取。有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将所得粗品通过硅胶快速色谱纯化(30％至50％EtOAc于石油醚中)以得到呈白色泡沫状的标题化合物(780mg，83％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.92(s，1H)，7.43-7.30(m，9H)，7.21-7.06(m，6H)，4.83(br d，J＝7.7Hz，1H)，4.19-3.85(m，3H)，3.54-3.27(m，1H)，3.06-2.87(m，1H)，2.87-2.67(m，1H)，2.23-2.09(m，1H)，2.02-1.90(m，1H)，1.72-1.56(m，2H)，1.56-1.40(m，10H)，1.18(t，J＝7.2Hz，3H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 597(M+H)+，RT 2.50分钟。
步骤3：4-(羟基(1-三苯甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基)-4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在0℃下，将LiAlH4(2N溶液于THF中；0.11mL，0.21mmol)添加至无水THF(1mL)中的4-(羟基(1-三苯甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸4-乙酯(98mg，0.16mmol)。将反应混合物在0℃搅拌1小时，然后添加另外的LiAlH4(2N溶液于THF中；0.05mL，0.095mmol)。在0℃下30分钟后，通过添加罗谢尔盐溶液猝灭混合物并用EtOAc和H2O稀释。有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂以得到呈白色泡沫的粗品标题化合物，其不经进一步纯化即用于后续步骤(84mg)。LCMS(ES+)(方法1)m/z 555(M+H)+，RT 2.23分钟。
步骤4：4-(羟基(1-三苯甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基)-4-(((甲磺酰基)氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在室温向无水DCM中的粗品4-(羟基(1-三苯甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基)-4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(84mg，0.15mmol)的搅拌溶液添加无水DIPEA(0.05mL，0.30mmol)和甲磺酰氯(0.014mL，0.18mmol)。将反应物在室温搅拌20分钟，然后用DCM稀释并用5％柠檬酸溶液和H2O洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压去除溶剂。将所得粗品通过硅胶快速色谱纯化(30％至100％EtOAc于石油醚中)以得到呈白色泡沫状的标题化合物(21mg，22％，经过两个步骤)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.00(s，1H)，7.42-7.31(m，9H)，7.18-7.10(m，6H)，4.90(br d，J＝5.4Hz，1H)，4.32(dd，J＝9.8，26.3Hz，2H)，3.80-3.58(m，2H)，3.24-2.98(m，3H)，2.87(s，3H)，1.82-1.63(m，2H)，1.50-1.43(m，11H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 633(M+H)+，RT 2.35分钟。
步骤5：7′-羟基-5′H,7′H-螺[哌啶-4,6′-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑]-1-羧酸叔丁酯
在无水DMF(2.7mL)中的DIPEA(0.07mL，0.40mmol)和4-(羟基(1-三苯甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基)-4-(((甲磺酰基)氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.16mmol)的溶液在140℃加热4小时。将反应冷却至室温，用MeOH稀释并浓缩。所得粗品通过制备型HPLC(0％至40％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化并冻干。将残余物用EtOAc溶解并用1N NaOH水性溶液洗涤。用EtOAc/MeOH 9:1(x2)萃取水性层，然后将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到呈无色油状的标题化合物(42mg，90％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.03(s，1H)，5.04(br s，1H)，4.84(s，1H)，3.93(d，J＝10.9Hz，1H)，3.75(d，J＝10.9Hz，1H)，3.52-3.34(m，4H)，2.17-2.02(m，1H)，1.68-1.54(m，2H)，1.40(s，10H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 295(M+H)+，RT 1.12分钟。
步骤6：7′-氧代-5′H,7′H-螺[哌啶-4,6′-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑]-1-羧酸叔丁酯
在无水DCM(5.2mL)中的7′-羟基-5′H,7′H-螺[哌啶-4,6′-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑]-1-羧酸叔丁酯溶液(145mg，0.49mmol)，在室温下添加戴斯-马丁高碘烷(231mg，0.54mmol)。将所得混合物在室温下搅拌1小时，然后用DCM稀释并用Na2S2O3水性溶液洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂以得到呈棕色固体的粗品化合物，其不经进一步纯化即用于后续步骤(240mg)。LCMS(ES+)方法1：m/z293(M+H)+，RT 1.40分钟。
步骤7：(R,Z)-7′-((叔丁基亚磺酰)亚氨基)-5′H,7′H-螺[哌啶-4,6′-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑]-1-羧酸叔丁酯
将Ti(OEt)4(3mL)中的(R)-(-)-叔丁基亚磺酰胺(179mg，1.48mmol)和7′-氧代-5′H,7′H-螺[哌啶-4,6′-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑]-1-羧酸叔丁酯(理论值0.493mmol)的粗品悬浮液在100℃加热1小时。将混合物冷却至室温，用EtOAc和H2O稀释，固体沉淀并过滤。将滤液用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂。将所得粗品通过硅胶快速色谱纯化(0％至10％MeOH于DCM中)以得到呈黄色固体的标题化合物(105mg，54％，经过两个步骤)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.37(s，1H)，4.35-4.13(m，4H)，3.13-2.80(m，2H)，2.37-2.17(m，1H)，2.15-1.96(m，1H)，1.90-1.71(m，2H)，1.51(s，9H)，1.34(s，9H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 396(M+H)+，RT 1.50分钟。
步骤8：(S)-7′-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-5′H,7′H-螺[哌啶-4,6′-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑]-1-羧酸叔丁酯
在-50℃将NaBH4(18mg，0.48mmol)添加到在无水THF(15mL)中的(R,Z)-7′-((叔丁基亚磺酰)亚氨基)-5′H,7′H-螺[哌啶-4,6′-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑]-1-羧酸叔丁酯(105mg，0.27mmol)的溶液。将反应混合物在-50℃搅拌30分钟，然后通过添加H2O和EtOAc猝灭。分离各相，用EtOAc/MeOH以9:1萃取水性层。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物溶解在EtOH(2.5mL)中，并将溶液在70℃搅拌9小时。减压除去溶剂并通过反相色谱法纯化所得粗品(从0％至40％MeCN/H2O+0.1％TFA)以得到呈白色固体的标题化合物(90mg，85％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ9.65(s，1H)，6.24(d，J＝10.0Hz，1H)，4.84(d，J＝10.0Hz，1H)，4.34(d，J＝11.8Hz，1H)，4.19(d，J＝12.0Hz，1H)，3.80-3.40(m，2H)，3.26-2.92(m，2H)，1.75-1.46(m，4H)，1.39(s，9H)，1.18(s，9H)LCMS(ES+)方法1：m/z 398(M+H)+，RT 1.37分钟。
步骤9：(R)-2-甲基-N-((S)-5′H,7′H-螺[哌啶-4,6′-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑]-7′-基)丙烷-2-亚磺酰胺(中间体40)
向DCM(3.5mL)中的(S)-7′-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-5′H,7′H-螺[哌啶-4,6′-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑]-1-羧酸叔丁酯(68mg，0.17mmol)的溶液添加TFA(0.26mL，3.42mmol)，并将所得溶液在室温下搅拌1.5小时。真空除去溶剂以获得粗品标题化合物，其不经进一步纯化即用于后续步骤(88mg)。LCMS(ES+)方法1：m/z 298(M+H)+，RT 0.46分钟。
中间体41：8-氯-7-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶
步骤1：8-氯-7-碘-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶
EtOH(2.5mL)中的氯丙酮(160uL，2mmol)和3-氯-4-碘吡啶-2-胺(254mg，1mmol)的混合物在MW辐射下于65℃加热3小时。添加其它的氯丙酮(640uL)并将所得混合物在MW辐射下于100℃搅拌8小时。除去溶剂，并将残余物溶解在DCM(2mL)中并用NaHCO3饱和溶液洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂以得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-50％EtOAc于石油醚中)。1HNMR(DMSO-d6)δ8.26(d，J＝7.1Hz，1H)，7.81(d，J＝0.8Hz，1H)，7.23(d，J＝7.1Hz，1H)，2.34(d，J＝0.7Hz，3H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 293，295(M+H)+，RT 1.62分钟。
步骤2：8-氯-7-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶
5-氯吡嗪-2-硫醇钠溶液(按照合成中间体16，步骤1和2的方法制备；45mg，0.27mmol)，在1,4-二噁烷(0.6mL)中的8-氯-7-碘-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶(89mg，0.3mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(30mg，0.05mmol)，Pd2(dba)3(48mg，0.05mmol)和DIPEA(139uL，0.8mmol)的溶液在110℃加热1小时。溶剂蒸发后，将残余物溶解在EtOAc(2mL)中并用NaHCO3饱和溶液洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂以得到残余物，将其通过硅胶快速色谱纯化(梯度洗脱0-50％EtOAc于石油醚中)以得到标题化合物(40mg，48％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 311，313(M+H)+，RT 1.14分钟。
中间体42：6-溴-3-((S)-4′-(((R)-叔丁基亚磺酰)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯
步骤1：3-羟基-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯
向50ml烧瓶中装入EtOH(19.0mL)和1,2-二氨基丙烷(0.99mL，11.48mmol)，并将所得澄清，无色溶液冷却至0℃。将2-氧代丙二酸二乙酯(1.75mL，11.48mmol)添加至溶液中，并将反应混合物升温至室温并搅拌2小时，然后在95℃加热24小时。冷却后，将所得反应混合物减压浓缩溶剂以得到残余物并通过快速色谱纯化(梯度洗脱40-100％EtOAc于石油醚中)，得到呈黄色固体的标题化合物(360mg，17％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.83(br s，1H)，7.33(br s，1H)，4.26(q，J＝8.0Hz，2H)，2.24(s，3H)，1.27(t，J＝8.0Hz，3H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 183(M+H)+，RT 0.70分钟。
步骤2：6-溴-3-羟基-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯
向烧瓶中装入在DMF(6.6mL)中的3-羟基-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(300mg，1.65mmol)的溶液，并将所得溶液冷却至0℃。添加1-溴吡咯烷-2,5-二酮(307.7mg，1.73mmol)并将反应混合物升温至室温并搅拌2小时，用H2O和EtOAc稀释。将有机相用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩，得到为粗品的标题化合物(430mg，100％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 261-263(M+H)+，RT 1.22分钟。
步骤3：6-溴-3-氯-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯
向烧瓶中加入PPh3(1.3g，4.94mmol)，在1,4-二噁烷(15.0mL)中的1-氯吡咯烷-2,5-二酮(0.67g，5.02mmol)，并将所得溶液在室温下搅拌30分钟。添加6-溴-3-羟基-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(430mg，1.65mmol)并将所得混合物在100℃加热1小时冷却后，添加TEA(4mL，1.65mmol)。真空浓缩挥发物，并通过快速色谱纯化残余物(梯度洗脱35％EtOAc于石油醚中)，得到呈黄色油状的标题化合物(310mg，67％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.49(q，J＝8.0Hz，2H)，2.74(s，3H)，1.44(t，J＝8.0Hz，3H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 279-281(M+H)+，RT1.81分钟。
步骤4：6-溴-3-((S)-4′-(((R)-叔丁基亚磺酰)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(中间体42)
将在MeCN(7mL)中的中间体2(422.2mg，0.64mmol)的溶液用K2CO3(296.7mg，2.15mmol)处理。将反应混合物在55℃搅拌18小时。冷却后，将反应混合物用EtOAc稀释并用H2O，盐水洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-100％EtOAc于石油醚中)，得到呈黄色粉末状的标题化合物(153mg，53％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.46(d，J＝1.8Hz，1H)，6.08(d，J＝1.5Hz，1H)，5.96(d，J＝10.1Hz，1H)，4.45(d，J＝9.9Hz，1H)，4.32(q，J＝7.0Hz，2H)，4.19(d，J＝11.2Hz，1H)，4.06(d，J＝11.6Hz，1H)，3.82-3.67(m，2H)，3.25-3.16(m，2H)，1.90-1.83(m，1H)，1.77-1.60(m，3H)，1.32-1.29(m，3H)，1.19-1.15(m，3H)，1.13(s，9H)。LCMS(ES+)方法2：m/z 539(M+H)+，RT 1.81分钟。
中间体43：6-氯-3-碘-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1,5-二氢-4H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮
步骤1：4,6-二氯-3-碘-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶
THF(29mL)中的对甲苯磺酸一水合物(241.6mg,1.27mmol)和3,4-二氢-2H-吡喃(1.68mL，18.4mmol)，4,6-二氯-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(2.0g，6.35mmol)的溶液在70℃加热1.5小时。完成后，真空除去溶剂并通过快速色谱纯化粗产物(梯度洗脱0-5％MeOH于CHCl3中)，得到呈白色固体的标题化合物(2.23g，88％)。LCMS(ES+)m/z 399(M+H)+。
步骤2：6-氯-3-碘-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1,5-二氢-4H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮THF(28mL)中的4,6-二氯-3-碘-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(2.82g，7.0mmol)的溶液用5M NaOH水性溶液处理(12.7mL，63.45mmol)。将混合物在室温下搅拌5小时，然后添加THF(14mL)。将所得混合物在室温下搅拌18小时，然后用6M水性HCl溶液酸化，并用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物用正庚烷研磨并干燥，得到呈白色固体的标题化合物(1.8g，67％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.40(s，1H)，5.66(dd，J＝10.2，2.2Hz，1H)，3.91(d，J＝11.3Hz，1H)，3.71-3.59(m，1H)，2.35-2.17(m，1H)，2.04-1.90(m，1H)，1.89-1.78(m，1H)，1.77-1.62(m，1H)，1.60-1.48(m，2H)。
步骤3：6-氯-3-碘-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1,5-二氢-4H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮
DMF(21mL)中的6-氯-3-碘-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1,5-二氢-4H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮(1.75g，4.6mmol)溶液用K2CO3(763mg，5.5mmol)处理，接着缓慢添加MeI(314.9μL，5.0mmol)。将混合物在室温搅拌18小时。完成后，将混合物用H2O稀释并通过过滤收集固体沉淀物。将粗产物用EtOAc研磨，得到呈白色固体的标题化合物(1.04g，57％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ5.73(dd，J＝10.2，1.5Hz，1H)，4.08(d，J＝1.5Hz，1H)，3.73(t，J＝11.3Hz，1H)，3.68(s，3H)，2.54-1.43(m，1H)，2.09(d，J＝10.7Hz，1H)，1.86(d，J＝13.3Hz，1H)，1.82-1.65(m，2H)，1.58(d，J＝12.3Hz，1H)。LCMS(ES+)m/z 311(M+H-THP)+。
中间体44：3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-硫醇
步骤1：3-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)丙酸2-乙基己酯
1,4-二噁烷(8mL)中的4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(51mg，0.09mmol)和Pd2(dba)3(40mg，0.04mmol)，3-硫烷基丙酸2-乙基己酯(0.4mL，1.8mmol)，中间体32(500mg，1.64mmol)的溶液用DIPEA(0.57mL，3.27mmol)处理，并且混合物在100℃加热2小时。冷却后，将反应混合物在纤维素垫上过滤，然后真空浓缩溶剂。通过快速色谱纯化粗产物(0-100％EtOAc于石油醚)，得到呈橙色油状的标题化合物(640mg，99％)。LCMS(ES+)方法1：m/z398(M+H)+，RT 2.49分钟。
步骤2：3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-硫醇(中间体44)
将在MeOH(9.8mL)中的3-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)丙酸2-乙基己酯(390mg，0.98mmol)溶液用NaOMe(25重量％于MeOH中；0.9mL mL，0.98mmol)处理并将混合物在室温搅拌2h，然后将溶剂在真空浓缩。将获得的残余物溶解在H2O中，用Et2O(3x)洗涤，然后将水性相用MeCN稀释并冻干，以得到呈黄色粘性固体的标题产物(168mg，90％纯度，73％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 212(M+H)+，RT 1.12分钟。
中间体45：5-溴-2-氯-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮
步骤1：5-溴-2-氯嘧啶-4(3H)-酮
将在THF(40mL)中的5-溴-2,4-二氯-嘧啶(2.0g，8.78mmol)溶液用NaOH(1M水性溶液；30.7mL，30.72mmol)处理并在室温下搅拌90分钟，然后用H2O(100mL)稀释并用HCl(6N水性溶液)酸化至pH 4-5。将混合物用EtOAc(4x100 mL)萃取，并将收集的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩以得到残余物，将其用己烷研磨，得到呈白色固体的标题化合物(1.0g，54％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 209(M+H)+，RT 0.72分钟。
步骤2：5-溴-2-氯-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮(中间体45)
将冷却至0℃的在DMF(10mL)中的5-溴-2-氯嘧啶-4(3H)-酮(1.0g，4.77mmol)溶液用Cs2CO3(3.1g，9.55mmol)和MeI(0.89，14.32mmol)处理，并在0℃搅拌3小时和在室温搅拌1.5小时，然后用H2O(20mL)稀释并用EtOAc(5x10mL)萃取。将收集的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩以得到残余物，将其通过快速色谱纯化(0-80％EtOAc于石油醚中)，得到呈黄色粉末状的标题化合物(220mg，21％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.27(s，1H)，3.59(s，3H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 223(M+H)+，RT 0.97分钟。
中间体46：4-氯-2-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2H-吲唑
步骤1：5-溴-4-氯-1H-吲唑
将在AcOH(17mL)中的4-溴-3-氯-2-甲基苯胺(867mg，3.93mmol)的溶液用在H2O(1.5mL)中的NaNO2(339.0mg，4.91mmol)的溶液处理。将混合物在室温搅拌1小时，然后浓缩，将残余物悬浮在H2O中，过滤，并用H2O和正庚烷洗涤。将有机相真空浓缩以得到残余物，将其通过快速色谱纯化(0-30％EtOAc于环己烷中)以得到呈浅橙色固体的标题化合物(328mg，36％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 231(M+H)+，RT 1.59分钟。
步骤2：5-溴-4-氯-2-甲基-2H-吲唑
在0℃，用四氟硼酸三甲基氧鎓(1.43g，9.65mmol)处理在EtOAc(32mL)中的5-溴-4-氯-1H-吲唑(1.49g，6.45mmol)溶液。将所得混合物升温至室温并搅拌5小时。完成后，将混合物用NaHCO3饱和溶液淬灭并用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过快速色谱纯化粗产物(0-30％EtOAc于正庚烷中)，得到呈橙色固体的标题化合物(900mg，57％)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6):δ8.49(s，1H)，7.52(d，J＝9.0Hz，1H)，7.44(d，J＝9.0Hz，1H)，4.16(s，3H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 245(M+H)+，RT 1.69分钟。
步骤3：4-氯-2-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2H-吲唑(中间体46)
将在1,4-二噁烷(11mL)中的KOAc(657.2mg，6.70mmol)和Pd(dppf)Cl2·DCM(163.3mg，0.223mmol)，B2pin2(1.36g，5.36mmol)，5-溴-4-氯-2-甲基-2H-吲唑(548.0mg，2.23mmol)的溶液加热至120℃，持续18小时。完成后，将混合物冷却至室温，滤出固体沉淀并用EtOAc洗涤。将滤液真空浓缩并将残余物溶解在甲苯和正庚烷中直至沉淀出现。将悬浮液通过硅藻土垫过滤，并将滤液真空浓缩。将残余物用正庚烷研磨，滤出固体并减压浓缩滤液，得到呈浅棕色固体的标题化合物(1.15g，99％)。1H NMR(300MHz DMSO-d6)δ8.52(s，1H)，7.50(d，J＝8.7Hz，1H)，7.42(d，J＝8.7Hz，1H)，4.18(s，3H)，1.32(s，12H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 293(M+H)+，RT 1.89分钟。
中间体47：4-硝基苯磺酸6-氯吡啶并[2,3-b]吡嗪-2-基酯
用TEA(0.92mL，6.6mmol)和4-硝基苯磺酰氯(1.22g，5.51mmol)处理在DMF(10mL)中的6-氯吡啶并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮(1.0g，5.5mmol)的溶液。将混合物在室温搅拌1小时，然后倒入H2O中，滤出形成的沉淀并干燥以得到呈棕色固体的标题产物(1.87g，92％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.13(s，1H)，8.52-5.50(m，5H)，8.01(d，J＝8.7Hz，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 367(M+H)+，RT 1.78分钟。
中间体48：6-氯-5-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)吡嗪-2-胺
步骤1：5-溴-6-氯吡嗪-2-胺
向冷却至-20℃在无水DCM(40mL)中的6-氯烷基吡嗪-2-胺(1.2g，9.2mmol)悬浮液中分批添加NBS(1.64g，9.2mmol)并搅拌反应混合物3小时。然后将混合物用H2O处理并减压浓缩。将所得粗化合物通过硅胶快速色谱纯化(50％至100％EtOAc于石油醚中)以得到呈黄色粉末状的标题化合物(1g，51％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.10(br s，2H)，7.59-7.72(m，1H)；LCMS(ES+)方法1：m/z 208(M+H)+，RT 1.53分钟。
步骤2：6-氯-5-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)吡嗪-2-胺
在N2气氛下，向在干燥脱气的1,4二噁烷(1.5ml)中的Pd2(dba)3(20mg，0.02mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(12.5mg，0.022mmol)，5-氯吡嗪-2-硫醇钠(根据中间体16，步骤1和2的报道制备；30mg，0.18mmol)，5-溴酰基-6-氯烷基-吡嗪-2-胺(56mg，0.27mmol)的混合物添加无水DIPEA(0.1mL，0.57mmol)并将混合物在100℃加热1小时。去除挥发物后，残余物直接通过反相色谱法纯化(10％至55％MeCN/H2O+0.1％TFA)。将收集的级分放在一起并用EtOAc萃取。有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂以得到黄色固体(10mg，20％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 274(M+H)+，RT 1.72分钟。
中间体49：8-氯-7-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶
向如实施例31(14mg，0.047mmol)，步骤1中报道制备的那样，在无水DMF(0.5mL)中的8-氯-7-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)咪唑并[1,2-a]吡啶(14mg，0.047mmol)添加NCS。将所得混合物加热至80℃持续15分钟，然后用EtOAc稀释并用H2O(x3)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂以得到黄色固体(15mg，96％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.69(d，J＝1.5Hz，1H)，8.57(d，J＝1.4Hz，1H)，8.40(d，J＝7.1Hz，1H)，7.89(s，1H)7.23(d，J＝7.1Hz，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 331(M+H)+，RT 1.88分钟。
中间体50：8-氯-7-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶
步骤1：3-氯-2-肼基-4-碘吡啶
将在1-BuOH(0.8mL)中的水合肼(0.5mL，10.2mmol)，3-氯-2-氟-4-碘吡啶(200mg，0.78mmol)的混合物在室温搅拌3小时。通过过滤收集固体沉淀物以得到呈白色固体的标题化合物(200mg，95％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 270(M+H)+，RT 0.81分钟。
步骤2：8-氯-7-碘-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶
向微波小瓶中加入3-氯-2-肼基-4-碘吡啶(200mg，0.74mmol)和HCO2H(1mL，26.4mmol)，并将所得溶液在100℃下用MW照射15小时。将溶液用水稀释并过滤沉淀，得到呈白色固体的标题化合物(142mg，68％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 279(M+H)+，RT 1.15分钟。
步骤3：8-氯-7-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶
从8-氯-7-碘-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶(50mg，0.18mmol)和5-氯吡嗪-2-硫醇盐(按合成中间体16的步骤1和2的报道制备，23mg，0.14mmol)开始，根据中间体16，步骤3A中所述的程序，制备上述化合物。获得呈黄色粉末状的中间体50(32mg，55％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 299(M+H)+，RT 1.41分钟。
中间体51：8-氯-7-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)-3-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶
步骤1：8-氯-7-碘-3-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶
在0℃，将65重量％硝酸(0.38mL，5.50mmol)添加至在硫酸(7mL)中的8-氯-7-碘咪唑并[1,2-a]吡啶(按照合成中间体41，步骤1的报道制备；383mg，1.38mmol)的搅拌溶液中。1小时后，在0℃将NaHCO3饱和溶液缓慢添加至混合物中并用EtOAc萃取产物。将有机层用H2O洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂以得到黄色固体(347mg，77％)，其不经任何进一步纯化即用于后续步骤(240mg)。1H-NMR(300MHz DMSO-d6)δ9.00(d，J＝7.2Hz，1H)，8.75(s，1H)，7.86(d，J＝7.2Hz，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 324(M+H)+，RT 1.75分钟。
步骤2：8-氯-7-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)-3-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶
从8-氯-7-碘-3-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶(50mg，0.15mmol)和5-氯吡嗪-2-硫醇盐(按合成中间体16的步骤1和2的报道制备，26mg，0.15mmol)开始，根据对于中间体16所述过程，步骤3A，制备上述化合物。LCMS(ES+)方法1：m/z 342(M+H)+，RT 1.75分钟。
中间体52：N-(8-氯-7-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2,2,2-三氟乙酰胺
步骤1N-(3-氯-4-碘吡啶-2-基)-4-甲基苯磺酰胺
将在吡啶(0.85mmol)中的对甲苯磺酰氯(637mg，3.34mmol)和3-氯-4-碘吡啶-2-胺(500mg，1.96mmol)的混合物在室温下搅拌12小时。然后将所得黄色混合物用H2O稀释并用EtOAc(3x)萃取。将有机层用1M HCl溶液洗涤并蒸发。将残余物溶解在1,4-二噁烷(1.5mL)中并用在H2O(600uL)中的10％KOH处理，然后在70℃下加热1.5小时。将所得溶液用6N HCl(300uL)酸化，然后用DCM(3x)萃取。将收集的有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压除去溶剂，得到白色固体(370mg)，其无需进一步纯化即可用于后续步骤。LCMS(ES+)方法1：m/z409(M+H)+，RT 2.04分钟。
步骤2：2-(3-氯-4-碘-2-(甲苯磺酰基)吡啶-1(2H)-基)乙酰胺
依次添加在DMF(5mL)中的N-(3-氯-4-碘吡啶-2-基)-4-甲基苯磺酰胺(370mg，0.91mmol)，DIPEA(173uL，1.00mmol)和碘乙酰胺(184mg，1.0mmol)。将所得混合物在室温搅拌2天并加热至75℃，持续24小时。添加其它的的DIPEA(173uL，1.0mmol)和碘乙酰胺(184mg，1.0mmol)并将反应在75℃再搅拌2小时。除去挥发物后，将残余物在EtOAc和H2O中分配，分离各相，并用Na2SO4干燥有机层，过滤并减压除去溶剂以得到棕色油状物(600mg)，其无需进一步处理即可用于后续步骤。LCMS(ES+)方法1：m/z 466(M+H)+，RT 1.81分钟。
步骤3：N-(8-氯-7-碘咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2,2,2-三氟乙酰胺
在室温下，向在DCM(1.5mL)中的2-(3-氯-4-碘-2-(甲苯磺酰亚氨基)吡啶-1(2H)-基)乙酰胺(600mg，0.64mmol)的溶液分批添加添加TFAA(0.7mL，5.03mmol)。将得到的混合物在50℃搅拌2小时。除去挥发物，将粗品化合物溶解在DCM中，并用NaHCO3饱和溶液(3x)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压条件下去除溶剂。将所得粗品化合物通过硅胶快速色谱纯化(0％至30％EtOAc于石油醚中)以得到呈黄色固体的标题化合物(170mg，50％，经过3步)。LCMS(ES+)方法1：m/z 390(M+H)+，RT 1.48分钟。
步骤4：N-(8-氯-7-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2,2,2-三氟乙酰胺
从N-(8-氯-7-碘咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2,2,2-三氟乙酰胺(50mg，0.13mmol)和5-氯吡嗪-2-硫醇盐(按合成中间体16的步骤1和2的报道制备，23mg，0.14mmol)开始，根据对于中间体16所述过程，步骤3A，制备上述化合物。获得呈棕色粉末状的中间体52(32mg，61％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.68(d，J＝1.4Hz，1H)，8.62(d，J＝1.4Hz，1H)，8.35(d，J＝7.2Hz，1H)，7.81(s，1H)，7.19(d，J＝7.2Hz，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 408(M+H)+，RT1.70分钟。
中间体53：8-氯-7-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺
步骤1：8-氯-7-碘咪唑并[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯
向在IPA(0.7mL)和H2O(0.7mL)中的3-氯-4-碘吡啶-2-胺(100mg，0.39mmol)溶液添加溴丙酮酸乙酯(0.05mL，0.39mmol)。将所得混合物在MW辐射下加热至80℃，持续30分钟，然后用油浴再加热6小时。过滤沉淀物，用Et2O洗涤所得黄色粉末并减压干燥，得到标题化合物(70mg，60％)。1H NMR(300MHz DMSO-d6)δ8.66(s，1H)，8.34(d，J＝7.1Hz，1H)，7.42(d，J＝7.1Hz，1H)，4.34(q，J＝7.1Hz，2H)，1.33(t，J＝7.1Hz，3H)。LCMS(ES+)方法1：m/z351(M+H)+，RT 1.69分钟。
步骤2：8-氯-7-碘咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺
将在1,4二噁烷(1mL)中的8-氯-7-碘咪唑并[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯(68mg，0.19mmol)悬浮液和在H2O中的NH4OH 30％悬浮液(0.8mL，5.82mmol)回流10小时。将所得混合物用EtOAc和H2O稀释并添加K2CO3。有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂以得到淡黄色粉末(34mg，54％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.46(s，1H)，8.37(d，J＝7.2Hz，1H)，7.65(br s，1H)，7.50(br s，1H)，7.39(d，J＝7.2Hz，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 321(M+H)+，RT1.35分钟。
步骤3：8-氯-7-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺
从8-氯-7-碘咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺(33mg，0.10mmol)和5-氯吡嗪-2-硫醇钠(按合成中间体16的步骤1和2的报道制备，18mg，1.07mmol)开始，根据对于中间体16所述过程，步骤3A，制备上述化合物。将粗品化合物通过反相色谱法(5％至55％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到呈棕色粉末状的标题化合物(15mg，42％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.82(d，J＝1.4Hz，1H)，8.74-8.67(m，2H)，8.61(s，1H)，7.82(br s，1H)，7.65(br s，1H)，7.23(d，J＝7.2Hz，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 340(M+H)+，RT 1.54分钟。
中间体54：8-氯-7-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-腈
步骤1：8-氯-7-碘咪唑并[1,2-a]吡啶-2-腈
将在POCl3中的8-氯-7-碘咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺(按照中间体53，步骤2中所述制备82mg，0.25mmol)的悬浮液在100℃搅拌4小时。将所得沉淀过滤并用MeCN(3x)洗涤，减压干燥，得到呈灰白色粉末状的标题化合物(59mg，76％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.87(s，1H)，8.39(d，J＝7.2Hz，1H)，7.50(d，J＝7.1Hz，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 304(M+H)+，RT 1.68分钟。
步骤2：8-氯-7-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-腈
从8-氯-7-碘咪唑并[1,2-a]吡啶-2-腈(57mg，0.19mmol)和5-氯吡嗪-2-硫醇钠(按合成中间体16的步骤1和2的报道制备，29mg，0.172mmol)开始，根据对于中间体16所述过程，步骤3A，制备上述化合物。将粗品化合物通过反相色谱法(15％至55％MeCN/H2O+0.1％TFA)的手段直接纯化以得到呈黄色固体的标题化合物(29mg，52％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.90(s，1H)，8.73(d，J＝1.4Hz，1H)，8.64(d，J＝1.4Hz，1H)，8.60(d，J＝7.2Hz，1H)，7.19(d，J＝7.2Hz，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 322(M+H)+，RT 1.86分钟。
中间体55：6-氯-5-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)吡啶-2-胺
步骤1：6-氯-5-碘吡啶-2-胺
向在无水MeCN(15mL)中的6-氯吡啶-2-胺(500mg，3.89mmol)溶液分批添加NIS(880mg，3.9mmol)并将所得混合物在室温下搅拌30分钟。添加另外的NIS(500mg，1.22mmol)，并将混合物再搅拌30分钟。通过添加H2O(50mL)沉淀所需化合物，过滤并减压干燥，得到米色粉末(822mg，83％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.74(d，J＝8.4Hz，1H)，6.53(brs，2H)，6.23(d，J＝8.4Hz，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 255(M+H)+，RT 1.69分钟。
步骤2：6-氯-5-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)吡啶-2-胺
从6-氯-5-碘吡啶-2-胺(70mg，0.27mmol)和5-氯吡嗪-2-硫醇钠(按合成中间体16的步骤1和2的报道制备，49mg，0.29mmol)开始，根据对于中间体16所述过程，步骤3A，制备上述化合物。将粗品化合物通过反相色谱法(10％至55％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化，得到呈棕色固体的标题化合物(47mg，64％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.61(d，J＝1.4Hz，1H)，8.24(d，J＝1.4Hz，1H)，7.67(d，J＝8.4Hz，1H)，6.97(br s，2H)，6.48(d，J＝8.4Hz，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z273(M+H)+，RT 1.83分钟。
中间体56：5-氯-6-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)咪唑并[1,2-a]吡啶
步骤15-氯-6-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)咪唑并[1,2-a]吡啶
从中间体55(25mg，0.09mmol)开始，按照实施例31的步骤1中所述的过程制备上述化合物。将残余物通过反相色谱法(0％至30％MeCN/H 2O+0.1％TFA)纯化，得到呈棕色固体的标题化合物(25mg，91％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 297(M+H)+，RT 1.14分钟。
中间体57：2-氯-5-((3-氯-2-(1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪
从1H-咪唑开始，根据对于中间体33所述过程，并在步骤1中使用DMSO代替DMF，使用热加热法，制备上述中间体。获得呈棕色固体的中间体57(34mg，97％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 324(M+H)+，RT 1.13分钟。
中间体58：6-氯-3-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-胺
上述中间体根据中间体33所述的程序制备，在步骤1中使用热加热并在步骤2中使用中间体22代替5-氯吡嗪-2-硫醇钠。获得呈米色固体的中间体58(30mg，95％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 339(M+H)+，RT 1.78分钟。
中间体59：2-氯-5-((3-氯-2-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪
从1H-咪唑开始，根据对于中间体33所述的过程，并在步骤1中使用DMSO代替DMF，使用热加热法，制备上述中间体。获得呈米色固体的中间体59(24mg，62％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 342(M+H)+，RT 2.03分钟。
中间体60：6-氯-3-((3-氯-2-(1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-胺
从1H-咪唑开始，根据中间体33所述的过程，在步骤1中在热加热法下使用DMSO代替DMF，在步骤2中用中间体22代替5-氯吡嗪-2-硫醇盐，制备上述中间体。获得呈米色固体的中间体60(18mg，54％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 339(M+H)+，RT 1.13分钟。
中间体61：2-氯-5-((3-氯-2-(1H-吡咯-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪
从1H-咪唑开始，根据中间体33所述的过程，在步骤1的热加热法下使用NaH代替K2CO3作为碱，制备上述中间体。获得呈白色固体的中间体61(6mg，31％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 323(M+H)+，RT 2.25分钟。
中间体62：8-氯-7-碘咪唑[1,2-a]吡啶-2(3H)-酮
将K2CO3(60mg，0.55mmol)添加至在H2O(2.5mL)中的溴乙酸(110mg，0.79mmol)溶液中。10分钟后，添加3-氯-4-碘吡啶-2-胺(200mg，0.79mmol)并将混合物在100℃加热5小时。过滤棕色沉淀并用H2O清洗。将固体溶解于MeOH和TFA中，通过反相色谱法(0％至25％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化，得到呈黄色粉末状的标题化合物(42mg，18％)。LCMS(ES+)方法1：m/z295(M+H)+，RT 0.68分钟。
中间体63：1-(3-氯-4-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)吡啶-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
步骤1 1-(3-氯-4-碘吡啶-2-基)-1H-吡咯-3-羧酸叔丁酯
从1H-吡咯-3-羧酸叔丁酯开始，根据对于中间体33所述的过程，步骤1，在热加热法下使用NaH(60％于矿物油中)代替K2CO3作为碱，制备上述中间体。将残余物通过快速色谱纯化(梯度洗脱10-100％EtOAc于石油醚中)，得到呈无色固体的标题化合物(240mg，70％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.13(dd，J＝5.0，10.9Hz，2H)，7.76(t，J＝1.9Hz，1H)，7.30(dd，J＝2.2，3.1Hz，1H)，6.55(dd，J＝1.7，3.1Hz，1H)，1.51(s，9H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 405(M+H)+，RT 2.40分钟。
步骤2 1-(3-氯-4-碘吡啶-2-基)-1H-吡咯-3-羧酸
室温下，向在DCM(2mL)中的1-(3-氯-4-碘吡啶-2-基)-1H-吡咯-3-羧酸叔丁酯(235mg，0.58mmol)溶液添加TFA(0.5mL，6.53mmol)，并将所得混合物搅拌3小时。添加MeCN，通过过滤收集固体沉淀物以得到呈白色固体的标题化合物(171mg，84％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.20(br s，1H)，8.18(br d，J＝12.1Hz，2H)，7.87(br s，1H)，7.35(br s，1H)，6.64(br s，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 349(M+H)+，RT 1.72分钟。
步骤3：1-(3-氯-4-碘吡啶-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
室温下，向在无水DCM(0.8mL)中的NH4Cl(9.5mg,0.18mmol)和1-(3-氯-4-碘吡啶-2-基)-1H-吡咯-3-羧酸叔丁酯(50mg，0.14mmol)溶液顺序添加DIPEA(0.08mL，0.43mmol)和BOP(83mg，0.19mmol)。所得混合物在室温搅拌30分钟。添加H2O，通过过滤收集固体沉淀物以得到呈白色固体的标题化合物(37mg，74％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.11(dd，J＝5.0，16.7Hz，2H)，7.82(s，1H)，7.52(br s，1H)，7.28(t，J＝2.6Hz，1H)，6.93(br s，1H)，6.70-6.62(m，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 348(M+H)+，RT 1.47分钟。
步骤4：1-(3-氯-4-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)吡啶-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
从1-(3-氯-4-碘吡啶-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺(36mg，0.10mmol)和5-氯吡嗪-2-硫醇钠(按合成中间体16的步骤1和2的报道制备，22mg，0.10mmol)开始，根据对于中间体16所述的过程，步骤3A，制备上述化合物。将粗品化合物通过反相色谱法(5％至55％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到呈浅红色粉末状的标题化合物(26mg，68％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.92(d，J＝1.3Hz，1H)，8.83(d，J＝1.3Hz，1H)，8.34(d，J＝5.2Hz，1H)，7.87(t，J＝1.8Hz，1H)，7.55(br s，1H)，7.40-7.30(m，2H)，6.95(br s，1H)，6.68(dd，J＝1.7，3.0Hz，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 366(M+H)+，RT 1.64分钟。
中间体64：1-(3-氯-4-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)吡啶-2-基)-N-甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺
步骤1：1-(3-氯-4-碘吡啶-2-基)-N-甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺
根据中间体63所述的过程，在步骤3中使用在THF中的2M甲胺(0.09mL，0.18mmol)代替NH4Cl来制备上述化合物。获得呈白色固体的标题化合物(35mg，70％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 362(M+H)+，RT 1.58分钟。
步骤2：1-(3-氯-4-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)吡啶-2-基)-N-甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺
从1-(3-氯-4-碘吡啶-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺(36mg，0.10mmol)和5-氯吡嗪-2-硫醇钠(按合成中间体16的步骤1和2的报道制备，30mg，0.14mmol)开始，根据对于中间体16所述的过程，步骤3A，制备上述化合物。将粗品化合物通过反相色谱法(5％至55％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化以得到呈黄色固体的标题化合物(24mg，65％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.92(d，J＝1.1Hz，1H)，8.83(d，J＝1.1Hz，1H)，8.34(d，J＝5.2Hz，1H)，8.00(br d，J＝4.4Hz，1H)，7.83(br t，J＝1.7Hz，1H)，7.39-7.28(m，2H)，6.68(dd，J＝1.6，2.8Hz，1H)，2.74(d，J＝4.3Hz，3H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 380(M+H)+，RT 1.73分钟。
中间体65：1-(3-氯-4-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
步骤1：1-(3-氯-4-碘吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸甲酯
从1H-吡唑-4-羧酸甲酯开始，根据对于中间体33所述的过程，步骤1，并使用NaH(60％于矿物油中)代替K2CO3作为碱，在热加热法下制备上述化合物。将混合物用5％柠檬酸溶液淬灭并用EtOAc稀释。将有机层用H2O洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，得到呈米色固体的化合物(280mg，86％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.82(s，1H)，8.25-8.18(m，3H)，3.81(s，3H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 364(M+H)+，RT 1.81分钟。
步骤2：1-(3-氯-4-碘吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
在密封管中，在1,4二噁烷(4mL)中的1-(3-氯-4-碘吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸甲酯(280mg，0.77mmol)和在H2O中的30％NH4OH(3.1mL，24.3mmol)溶液在100℃加热9小时。添加H2O，将混合物冷却至0C并通过过滤收集固体沉淀物，得到呈白色固体的标题化合物(113mg，40％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.67(s，1H)，8.19(s，2H)，8.14(s，1H)，7.77(brs，1H)，7.23(br s，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 349(M+H)+，RT 1.28分钟。
步骤3：1-(3-氯-4-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
从1-(3-氯-4-碘吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(113mg，0.32mmol)和5-氯吡嗪-2-硫醇盐(按合成中间体16的步骤1和2的报道制备，68mg，0.32mmol)开始，根据中间体16，步骤3A中所述的过程制备上述化合物。将粗品化合物通过反相色谱法(5％至60％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化以得到呈黄色固体的标题化合物(10mg，8％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.92(d，J＝1.3Hz，1H)，8.85(d，J＝1.3Hz，1H)，8.71(s，1H)，8.37(d，J＝5.2Hz，1H)，8.16(s，1H)，7.81(br s，1H)，7.44(d，J＝5.3Hz，1H)，7.24(br s，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z367(M+H)+，RT 1.50分钟。
中间体66：1-(3-氯-4-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)吡啶-2-基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺
步骤1：1-(3-氯-4-碘吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸
在室温下，向在无水DMF(2mL)中的1H-吡唑-4-羧酸甲酯(54mg，0.43mmol)的溶液依次添加NaH(60％于矿物油中；18.6mg，0.47mmol)和3-氯-2-氟-4-碘吡啶(100mg，0.39mmol)。30分钟后，将混合物用H2O淬灭。添加THF(2mL)和NaOH(4N，0.5mL，2mmol)，并将所得混合物再搅拌6小时，然后在0℃用6N HCl酸化直至pH＝1，并用EtOAc(3x)萃取产物。有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂以得到呈黄色固体的标题化合物，其不经进一步纯化即用于后续步骤(137mg)。LCMS(ES+)方法1：m/z 350(M+H)+，RT 1.50分钟。
步骤2：1-(3-氯-4-碘吡啶-2-基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺
从1-(3-氯-4-碘吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸(60mg，0.17mmol)开始，根据对于中间体63所述的过程，步骤3，用二甲胺盐酸盐(21mg，0.26mmol)代替NH4Cl，制备上述化合物。将粗品通过反相色谱法(0％至30％MeCN/H 2O+0.1％TFA)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(51mg，78％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 377(M+H)+，RT 1.42分钟。
步骤3：1-(3-氯-4-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)吡啶-2-基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺
从1-(3-氯-4-碘吡啶-2-基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(25mg，0.07mmol)和5-氯吡嗪-2-硫醇钠(按合成中间体16的步骤1和2的报道制备，15mg，0.07mmol)开始，根据对于中间体16所述的过程，步骤3A，制备上述化合物。将粗品化合物通过反相色谱法(5％至55％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化以得到呈白色粉末状的标题化合物(16mg，61％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.93(s，1H)，8.86(d，J＝1.1Hz，1H)，8.62(s，1H)，8.39(d，J＝5.2Hz，1H)，8.08(s，1H)，7.45(d，J＝5.2Hz，1H)，3.19(br s，3H)，3.00(br s，3H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 395(M+H)+，RT 1.63分钟。
中间体67：8-氯-7-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)-N,N-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺
步骤1：8-氯-7-碘咪唑并[1,2-a]吡啶-2-羧酸
在DME(1.5mL)中的8-氯-7-碘咪唑并[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯(按照合成中间体53，步骤1的报道制备，167mg，0.48mmol)悬浮液添加NaOH(5N，2mL，10mmol)。将所得混合物在室温搅拌48小时，然后冷却至-20℃。通过过滤收集沉淀物，得到呈白色固体的标题化合物(92mg，60％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 323(M+H)+，RT 1.18分钟。
步骤2：8-氯-7-碘-N,N-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺
根据对于中间体63所述的过程，步骤3，使用8-氯-7-碘咪唑并[1,2-a]吡啶-2-羧酸(83mg，0.26mmol)和二甲胺盐酸盐(32mg，0.40mmol)代替NH4Cl制备上述化合物。将残余物通过反相色谱法(0％至30％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(62mg，69％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.40(s，1H)，8.35(d，J＝7.2Hz，1H)，7.38(d，J＝7.1Hz，1H)，3.41(s，3H)，3.01(s，3H)。
步骤3：8-氯-7-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)-N,N-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺
从8-氯-7-碘-N,N-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺(50mg，0.14mmol)和5-氯吡嗪-2-硫醇钠(按合成中间体16的步骤1和2的报道制备，31mg，0.15mmol)开始，根据对于中间体16所述的过程，步骤3A，制备上述化合物。将粗品化合物直接通过0％至100％的快速色谱纯化(DCM/10％MeOH于EtOAc溶液中)以获得呈米色固体的标题化合物(40mg，75％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.72-8.67(m，1H)，8.63-8.52(m，2H)，8.45(s，1H)，7.12(d，J＝7.2Hz，1H)，3.43(s，3H)，3.03(s，3H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 368(M+H)+，RT 1.58分钟。
中间体68a和68b：6-氯-3-(2,3-二氯苯基)-2-甲基嘧啶-4(3H)-酮
步骤1：N-(2,3-二氯苯基)乙脒酰胺
在0℃用AlCl3(1.47g，11mmol)处理在无水DCE(10mL)和MeCN(0.78mL)中的2,3-二氯苯胺(1.62g，10.0mmol)的溶液。将反应混合物在0℃搅拌10分钟，然后在100℃搅拌18小时。冷却后，将反应混合物用冰H2O(30mL)处理并用DCM(2x)萃取。将NaOH(2M水溶液)添加至混合物中以调节pH至10并用DCM萃取水性相。合并的有机层经Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈棕色油状的标题化合物(1.62g，80％)，其无需进一步纯化，作为粗品使用。LCMS(ES+)方法1：m/z 203(M+H)+，RT 1.15分钟。
步骤2：3-(2,3-二氯苯基)-6-羟基-2-甲基嘧啶-4(3H)-酮
将在EtOH(8mL)中的N-(2，3-二氯苯基)乙脒酰胺(1.61g，7.93mmol)悬浮液用丙二酸二乙酯(2.42mL，15.86mmol)和EtONa(20％溶液于EtOH中；8.88mL，23.78mmol)处理，并将所得混合物在密封管中于120℃搅拌18小时。将反应混合物冷却至25℃并减压除去挥发物。将H2O添加到残余物中，将混合物冷却至0℃并用HCl(6M水性溶液)酸化至pH～2。将混合物升温至25℃并搅拌1小时。通过真空过滤收集形成的固体，用Et2O淋洗，并减压干燥，得到标题化合物(955mg，44％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 271(M+H)+，RT 1.08分钟。
步骤3：6-氯-3-(2,3-二氯苯基)-2-甲基嘧啶-4(3H)-酮
将在POCl3(10.0mL)中的3-(2,3-二氯苯基)-6-羟基-2-甲基嘧啶-4(3H)-酮(950mg，3.5mmol)的溶液在100℃加热4小时。将反应混合物冷却至室温并减压浓缩。将冰H2O添加到用DCM萃取的混合物中。有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空浓缩。通过快速色谱纯化粗产物(0-50％EtOAc于石油醚)，得到呈米色粉末状的标题化合物(500mg，49％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 289(M+H)+，RT 1.68分钟。上述阻转异构体混合物通过手性SFC在BergerSFCTMMiniGram-Mettler Toledo AG上使用OD(2x25 cm)柱进行分离(流速：10ml/分钟，Tcol 40℃，Pcol：120巴，调节剂：5％MeOH(+0,1％TEA)3分钟，5-15％6分钟，15％10分钟，15-5％1分钟；使用CO2作为超临界洗脱液)；第一次洗脱时获得中间体68a(室温10.39分钟)，第二次洗脱时获得中间体68b(室温11.21分钟)。
实施例
实施例1：(S)-1-(5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)；
在密封的微波小瓶中，将无水DIPEA(0.04mL，0.23mmol)添加至在无水DMSO(0.7mL)中的中间体11(20mg，0.06mmol)和中间体5(20mg，0.07mmol)的溶液中。反应混合物在120℃加热3h。将残余物通过制备型HPLC-MS直接纯化(5％至45％MeCN/H2O+0.1％TFA)，得到呈浅黄色粉末状的标题化合物(12.8mg，35％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.62(dd，J＝4.6，1.0Hz，1H)，8.50(br s，3H)8.29(s，1H)7.88(d，J＝8.1Hz，1H)，7.67-7.59(m，1H)，7.57(d，J＝1.8Hz，1H)，6.31(d，J＝1.8Hz，1H)，4.52(br d，J＝3.8Hz，1H)，4.42-4.02(m，4H)，3.36-3.71(m，2H)，2.03-1.67(m，4H)；LCMS(ES+)方法3：m/z 488(M+H)+，RT 2.08分钟。
实施例2：(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)；
在密封的微波小瓶中，将无水DIPEA(0.06mL，0.34mmol)添加至在无水1-BuOH(0.7mL)中的中间体5(40.3mg，0.15mmol)和中间体12(27mg，0.08mmol)的溶液中。将混合物在120℃加热10小时。将粗品通过制备型HPLC直接纯化(0％至30％MeCN/H2O+0.1％TFA)，得到呈浅白色粉末状的标题化合物(4.5mg，10％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.52(br s，3H)，8.32(s，1H)，7.71(d，J＝6.9Hz，1H)，7.58(d，J＝1.9Hz，1H)，6.32(d，J＝1.9Hz，1H)，6.26(d，J＝6.9Hz，1H)，4.53(br d，J＝4.1Hz，1H)，4.44-4.13(m，4H)，3.66-3.37(m，2H)，2.01-1.71(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 469(M+H)+，RT 1.93分钟。
实施例3：(S)-1-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)；
从在无水DMSO(0.7mL)中的中间体13(22mg，0.07mmol)和中间体5(14mg，0.05mmol)的溶液开始，根据用于实施例1的过程制备实施例3，其呈浅棕色粉末(5.3mg，16％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.47(br d，J＝4.7Hz，4H)，7.73(s，1H)，7.62-7.51(m，2H)，7.33(d，J＝7.9Hz，1H)，6.29(s，1H)，4.53-4.43(m，1H)，4.43-4.16(m，4H)，3.33-3.03(m，2H)，1.91-1.58(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 463(M+H)+，RT 2.15分钟。
实施例4：(S)-1-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从中间体14(20mg，0.07mmol)和中间体5(36.6mg，0.14mmol)开始，根据用于实施例1的过程制备实施例4，其呈浅黄色粉末状(6.8mg，18％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.46(br s，3H)，7.75(t，J＝3.4Hz，2H)，7.57(d，J＝1.7Hz，1H)，6.31(d，J＝1.8Hz，1H)，6.10(d，J＝6.9Hz，1H)，4.55-4.17(m，5H)，3.41-2.96(m，1H)，1.99-1.51(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 444(M+H)+，RT 1.42分钟。
实施例5：(S)-1-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-3′-氯-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从中间体14(26mg，0.09mmol)和中间体6(25mg，0.08mmol)开始，根据用于实施例1的过程，制备实施例5，其呈黄色粉末状(10.5mg，20％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.88-8.02(m，3H)，7.82-7.71(m，2H)，7.67(s，1H)，6.10(d，J＝6.9Hz，1H)，4.64(br s，1H)，4.44-4.14(m，4H)，3.39-3.09(m，2H)，1.93-1.55(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 478(M+H)+，RT 1.54分钟。
实施例6：(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
将无水DIPEA(0.050mL，0.29mmol)添加至在无水NMP(0.5mL)中的中间体5(21mg，0.08mmol)和中间体16(26mg，0.09mmol)的溶液中。将混合物在115℃加热10小时。通过制备型HPLC-MS(0％至35％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化残余物，得到呈浅黄色粉末状的标题化合物(13.6mg，31％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.69-8.31(m，5H)，7.74(d，J＝6.9Hz，1H)，7.57(d，J＝1.8Hz，1H)，6.32(d，J＝1.8Hz，1H)，6.20(d，J＝6.9Hz，1H)，4.57-4.21(m，5H)，3.49-3.32(m，1H)，3.32-3.17(m，1H)，1.95-1.63(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 429(M+H)+，RT 1.54分钟。
实施例7：(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-3′-氯-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从中间体16(25mg，0.09mmol)和中间体6(25.5mg，0.08mmol)开始，根据用于实施例6的过程，制备实施例7，其呈灰白色粉末状(12mg，25％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.75-8.48(m，4H)，8.39(d，J＝1.0Hz，1H)，7.74(d，J＝6.9Hz，1H)，7.67(s，1H)，6.20(d，J＝6.9Hz，1H)，4.66(br s，1H)，4.46-4.22(m，4H)，3.48-3.19(m，2H)，1.94-1.60(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 463(M+H)+，RT 1.66分钟。
实施例8：(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-3′-溴-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从中间体16(10.5mg，0.04mmol)和中间体7(12mg，0.03mmol)开始，根据用于实施例6的过程，制备实施例8，其呈浅黄色固体(3.6mg，17％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.79-8.62(m，4H)，8.50(d，J＝1.2Hz，1H)，7.85(d，J＝6.9Hz，1H)，7.77(s，1H)，6.31(d，J＝6.9Hz，1H)，4.74(br s，1H)，4.59-4.31(m，4H)，3.61-3.29(m，2H)，2.08-1.69(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 507(M+H)+，RT 1.70分钟。
实施例9：(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-3′-氟-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从中间体16(7.5mg，0.03mmol)和中间体8(5mg，0.02mmol)开始，根据用于实施例6的过程，制备实施例9，其呈黄色粉末状(2.7mg，20％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.84-8.61(m，4H)，8.49(d，J＝1.1Hz，1H)，7.84(d，J＝6.9Hz，1H)，7.67(d，J＝4.0Hz，1H)，6.31(d，J＝6.9Hz，1H)，4.77(br s，1H)，4.55-4.31(m，4H)，3.65-3.47(m，1H)，3.45-3.27(m，1H)，2.09-1.69(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 447(M+H)+，RT 1.59分钟。
实施例10：(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-3′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从中间体16(11mg，0.04mmol)和中间体9(8mg，0.03mmol)开始，根据用于实施例6的过程，制备实施例10，其白色固体(4.8mg，20％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.67(d，J＝1.1Hz，1H)，8.60-8.43(m，4H)，7.84(d，J＝6.9Hz，1H)，7.46(s，1H)，6.31(d，J＝6.9Hz，1H)，4.62(br s，1H)，4.54-4.28(m，4H)，3.64-3.48(m，1H)，3.47-3.30(m，1H)，2.20(s，3H)，2.06-1.92(m，2H)，1.90-1.77(m，1H)，1.76-1.66(m，1H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 443(M+H)+，RT 1.64分钟。
实施例11：(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：(R)-N-((S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
从中间体16(9.2mg，0.03mmol)和中间体3(10mg，0.03mmol)开始获得无需纯化即可使用的粗品化合物(17mg)，根据用于实施例6的过程，制备(R)-N-((S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺。
LCMS(ES+)方法1：m/z 547(M+H)+，RT 1.40分钟。
步骤2：(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(实施例11)
将HCl(4N于1,4二噁烷中；0.10mL，0.40mmol)添加至在DCM(0.5mL)中，来自先前步骤的材料(17mg，0.03mmol)溶液中。将粗品通过C18滤芯进行的快速色谱直接纯化(0％至35％MeCN/H2O+0.1％TFA)，得到呈浅米色粉末状的标题化合物(8.3mg，49％经过2步骤)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.57(d，J＝1.1Hz，1H)，8.53-8.26(m，4H)，7.74(d，J＝7.0Hz，1H)，6.20(d，J＝6.9Hz，1H)，6.10(s，1H)，4.52-4.12(m，5H)，3.46-3.30(m，1H)，3.30-3.15(m，1H)，2.20(s，3H)，1.90-1.63(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 443(M+H)+，RT 1.62分钟。
实施例12：(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2′-甲氧基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：(R)-N-((S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2′-甲氧基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
从中间体16(13mg，0.05mmol)和中间体4(15mg，0.04mmol)开始获得无需纯化即可使用的粗品化合物(25mg)，根据用于实施例6的过程，制备(R)-N-((S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2′-甲氧基-4′H,6′H-螺[哌啶-4，5′-吡咯并[1，2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺。LCMS(ES+)方法1：m/z 563(M+H)+，RT 1.38分钟。
步骤2：(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2′-甲氧基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(实施例12)
从来自先前步骤的材料开始，根据实施例11的过程得到实施例12(6.7mg，26％经过2个步骤)，其呈浅米色粉末状。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.57(br s，1H)，8.52-8.36(m，4H)，7.74(d，J＝6.9Hz，1H)，6.20(d，J＝6.9Hz，1H)，5.72(s，1H)，4.50-4.29(m，3H)，4.28-4.09(m，2H)，3.78(s，3H)，3.42-3.13(m，2H)，1.90-1.63(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z459(M+H)+，RT 1.64分钟。
实施例13：(S)-1-(5-(((S)-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
将K2CO3(26.6mg，0.19mmol)添加至在无水MeCN(0.5mL)中的中间体5(65mg，0.16mmol)和中间体17(20mg，0.07mmol)的溶液中。将混合物在110℃加热18小时。将粗品通过C18滤芯进行的快速色谱直接纯化(0％至35％MeCN/H2O+0.1％TFA)，得到呈黄色固体的标题化合物(21mg，56％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.59-8.43(m，4H)，8.35(s，1H)，7.57(s，1H)，7.46(d，J＝7.0Hz，1H)，6.32(s，1H)，6.17(d，J＝6.9Hz，1H)，4.81(dd，J＝10.4，3.6Hz，1H)，4.54-4.22(m，5H)，3.93-3.80(m，1H)，3.80-3.65(m，2H)，3.55-3.33(m，2H)，3.29-3.15(m，1H)，2.25-1.97(m，3H)，1.93-1.65(m，4H)，1.64-1.47(m，1H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 477(M+H)+，RT 1.68分钟。
实施例14：(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-3′-氯-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从中间体16(19mg，0.07mmol)和中间体10(19mg，0.06mmol)开始，根据用于实施例6的过程，制备实施例14，其呈浅黄色固体(12mg，32％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.57(brs，4H)，8.39(d，J＝0.8Hz，1H)，7.74(d，J＝6.9Hz，1H)，6.20(d，J＝6.9Hz，1H)，4.62(br s，1H)，4.47-4.22(m，4H)，3.49-3.19(m，2H)，2.17(s，3H)，1.96-1.58(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 477(M+H)+，RT 1.76分钟。
实施例15：(S)-1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：(R)-N-((S)-1-(8-溴咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
从中间体18(17mg，0.07mmol)和中间体2(26mg，0.06mmol)开始，根据用于实施例6的过程，制备(R)-N-((S)-1-(8-溴咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺，用时3小时，得到呈棕色固体的粗化合物(45mg)，其无需纯化即可使用。LCMS(ES+)方法1：m/z 492(M+H)+，RT 1.25分钟。
步骤2：(R)-N-((S)-1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
从(R)-N-((S)-1-(8-溴咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(45mg，0.06mmol)和2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇钠(根据用于中间体14步骤3的过程；20mg，0.10mmol)开始，根据用于中间体13的过程，步骤1，制备(R)-N-((S)-1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺，并通过制备型HPLC-MS(从0％至45％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化，得到标题化合物，其呈黄色固体(10mg，27％，经过2步骤)。LCMS(ES+)方法1：m/z 572(M+H)+，RT 1.19分钟。
步骤3：(S)-1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(实施例15)
从来自先前步骤的材料(10mg，0.02mmol)开始，根据实施例11步骤2的过程制备实施例15，并通过制备型HPLC-MS纯化(0％至35％MeCN/H2O+0.1％TFA)得到标题化合物其呈白色固体(3.9mg，45％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ1.85-1.72(m，1H)，2.07-1.89(m，2H)，2.24-2.07(m，1H)，3.59-3.42(m，1H)，3.69(br t，J＝11.3Hz，1H)，4.36-4.04(m，3H)，4.60-4.37(m，2H)，6.32(d，J＝1.7Hz，1H)，6.52-6.44(m，1H)，7.55(d，J＝1.7Hz，1H)，7.72(d，J＝6.9Hz，1H)，8.16(br s，2H)，8.50(br s，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 468(M+H)+，RT1.36分钟。
实施例16：(S)-1-(8-((4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：(S)-(1-(8-溴咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)氨基甲酸叔丁酯
将无水DIPEA(0.1mL，0.57mmol)添加至在无水NMP(0.5mL)中的中间体5(48mg，0.18mmol)和中间体18(40mg，0.17mmol)的溶液中。将混合物在120℃加热1.5小时，然后冷却至室温并添加Boc2O(113mg，0.52mmol)。在1小时后，将混合物用EtOAc稀释并用H2O(x2)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂。将产物通过C18滤芯进行的快速色谱纯化(从5％至45％MeCN/H2O+0.1％TFA)，以得到呈黄色固体的标题化合物(21mg，24％，2步骤)LCMS(ES+)方法1：m/z 488(M+H)+，RT 1.49分钟。
步骤2：(S)-3-((5-(4′-((叔丁氧羰基)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-8-基)硫代)丙酸甲酯
从(S)-(1-(8-溴咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)氨基甲酸叔丁酯(20mg，0.04mmol)和3-巯基丙酸甲酯(5.3mg，0.04mmol)开始，根据用于中间体14，步骤2的过程制备(S)-3-((5-(4′-((叔丁氧羰基)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-8-基)硫)丙酸甲酯，并通过制备型HPLC-MS(5％至55％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化得到标题化合物，其呈白色固体(18mg，83％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 528(M+H)+，RT 1.45分钟。
步骤3：(S)-5-(4′-((叔丁氧羰基)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-8-硫醇钠
从(S)-3-((5-(4′-((叔丁氧羰基)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-8-基)硫代)丙酸甲酯开始，根据用于中间体14的过程，步骤3，制备(S)-5-(4′-((叔丁氧羰基)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-8-硫醇钠，其呈淡黄色固体(15mg，94％)。LCMS(ES+)方法1：m/z464(M+H)+，RT 1.34分钟。
步骤4：(S)-(1-(8-((4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硫)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)氨基甲酸叔丁酯
在干燥脱气的1,4二噁烷(7mL)中的DIPEA(0.02mL，0.115mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(1.9mg，0.003mmol)，Pd2(dba)3(3mg，0.003mmol)，(S)-5-(4′-((叔丁氧羰基)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-8-硫醇钠(15mg，0.03mmol)，中间体31(9.5mg，0.03mmol)的混合物在N2气氛下在110℃搅拌4小时。除去挥发物后，通过制备型HPLC-MS(10％至55％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化粗品并获得白色固体(2mg，10％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 606(M+H)+，RT 1.65分钟。
步骤5：(S)-1-(8-((4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺
从(S)-(1-(8-((4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硫)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)氨基甲酸叔丁酯开始，根据用于合成实施例11步骤2的过程制备实施例16，得到标题化合物(0.6mg，54％)，其呈白色粉末状。LCMS(ES+)方法3：m/z 506(M+H)+，RT 1.82分钟。
实施例17：(S)-1-(8-(((S)-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：((S)-1-(8-(((S)-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)氨基甲酸叔丁酯
从(S)-(1-(8-溴咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)氨基甲酸叔丁酯(按照实施例16，步骤1制备；26mg，0.053mmol)和中间体15(15mg，0.06mmol)和中间体15(15mg，0.06mmol)开始，使用用于中间体14，步骤4的制备过程，根据中间体13所述的过程(步骤1)，制备((S)-1-(8-(((S)-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)氨基甲酸叔丁酯。将蒸发挥发物后获得的粗品通过硅胶快速色谱纯化(10％至100％(EtOAc+3％MeOH)于环己烷中)以得到标题化合物(15mg，45％)，其呈淡黄色固体。LCMS(ES+)方法1：m/z 616(M+H)+，RT 1.36分钟。
步骤2：(S)-1-(8-(((S)-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺
从来自先前步骤的材料(15mg，0.02mmol)开始，根据实施例11的过程(步骤2)，制备(S)-1-(8-(((S)-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺，以得到白色粉末(8.1mg，54％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.77-8.36(m，4H)，8.15(d，J＝3.6Hz，2H)，7.59(d，J＝1.8Hz，1H)，7.41(d，J＝6.9Hz，1H)，6.42-6.31(m，2H)，4.89(dd，J＝10.6，3.5Hz，1H)，4.55(br d，J＝3.2Hz，1H)，4.50-4.39(m，1H)，4.36-4.26(m，1H)，4.25-4.01(m，2H)，3.96-3.83(m，1H)，3.83-3.58(m，3H)，3.58-3.41(m，2H)，2.26-1.91(m，6H)，1.87-1.75(m，1H)，1.68-1.50(m，1H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 516(M+H)+，RT 1.46分钟。
实施例18：S)-1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-3′-氯-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：(S)-(1-(8-溴咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-3′-氯-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)氨基甲酸叔丁酯
从中间体18(40mg，0.17mmol)和中间体6(57mg，0.19mmol)开始，根据用于实施例16的过程，步骤1，制备(S)-(1-(8-溴咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-3′-氯-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)氨基甲酸叔丁酯，并通过制备型HPLC纯化(10％至65％MeCN/H2O，+0.1％TFA)，在用EtOAc稀释并蒸发至干后得到标题化合物，其呈黄色固体(32mg，35％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 522(M+H)+，RT 1.66分钟。
步骤2：(S)-(1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-3′-氯-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)氨基甲酸叔丁酯
从来自上一步骤的材料和2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇钠(根据中间体14，步骤3所用的程序制备；16mg，0.08mmol)开始，根据用于中间体13的过程(步骤1)，制备(S)-(1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-3′-氯-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)氨基甲酸叔丁酯，并通过制备型HPLC纯化(从10％至55％MeCN/H2O，+0.1％TFA)，得到标题化合物(25mg，68％)，其呈黄色固体；LCMS(ES+)方法1：m/z602(M+H)+，RT 1.49分钟。
步骤3：S)-1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-3′-氯-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺
从来自先前步骤的材料开始，根据实施例11步骤2的过程获得实施例18，得到呈白色粉末状的标题化合物(16mg，65％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.68(br s，3H)，8.51-8.44(m，1H)，8.18-8.05(m，2H)，7.74(d，J＝6.9Hz，1H)，7.69(br s，1H)，6.48-6.39(m，1H)，4.73(br s，1H)，4.41(dd，J＝11.7，9.0Hz，2H)，4.22-4.00(m，2H)，3.74-3.59(m，1H)，3.59-3.43(m，1H)，2.23-2.07(m，1H)，2.05-1.89(m，2H)，1.85-1.71(m，1H)。LCMS(ES+)方法3：m/z502(M+H)+，RT 1.49分钟。
实施例19：(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：(R)-N-((S)-1-(5-溴咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将在DMSO(1.0mL)中的中间体2(103.4mg，0.25mmol)的溶液用5-溴-8-氯咪唑并[1,5-a]吡嗪(58.6mg,0.25mmol)和DIPEA(0.16mL,0.88)处理，并将混合物在100℃加热40分钟。冷却后，将反应混合物用EtOAc和H2O稀释。将有机相用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩以得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-100％EtOAc(+20％MeOH)于石油醚中)。获得呈浅粉色粉末状的标题化合物(77mg，61％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.48(s，1H)，8.05(s，1H)，7.47(s，1H)，7.31(s，1H)，6.10(m，1H)，5.95(d，J＝9.9Hz，1H)，4.47(d，J＝9.3Hz，1H)，4.42-4.33(m，2H)，4.26(d，J＝11.4Hz，1H)，4.13(d，J＝11.0Hz，1H)，3.45-3.36(m，2H)，1.95-1.66(m，4H)，1.13(s，9H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 492(M+H)+，RT1.15分钟。
步骤2：(R)-N-((S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将在无水1,4-二噁烷(1.0mL)中的DIPEA(0.058mL，0.63mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(90.48mg，0.16mmol)，中间体20(0.01mL，0.23mmol)，(S)-N-((S)-1-(5-溴咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(77.0mg，0.16mmol)，Pd2(dba)3(14.32mg，0.02mmol)的悬浮液在110℃加热18小时。冷却后，将混合物在纤维素垫上过滤，将固体用EtOAc洗涤，并减压除去溶剂，得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-100％EtOAc于石油醚中至0-20％MeOH于DCM中)。获得呈黄色粉末状的标题化合物(29mg，27％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 572(M+H)+，RT1.77分钟。
步骤3：(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
在DCM(1.0mL)中的(S)-N-((S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-溶液4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(29.0mg，0.05mmol)溶液用HCl(4N于1,4-二噁烷中；0.05mL，0.10mmol)处理，并将反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后减压浓缩，并将残余物通过制备型HPLC纯化(40％至100％MeCN/H2O+0.1％TFA)得到标题化合物，其呈白色粉末状(10.6mg，44％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.44(br s，3H)，8.30(s，1H)，8.12(s，1H)，7.65-7.60(m，3H)，6.68(brs，2H)，6.33(s，1H)，5.78(d，J＝5.3Hz，1H)，4.67-4.50(m，3H)，4.45(d，J＝11.4Hz，1H)，4.30(d，J＝11.4Hz，1H)，3.64-3.42(m，2H)，1.96-1.72(m，4H)。LCMS(ES+)方法1:m/z 468(M+H)+，RT 0.80分钟。
实施例20：(S)-1′-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：(R)-N-((S)-1′-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
(R)-2-甲基-N-((S)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-基)丙烷-2-亚磺酰胺双(2,2,2-三氟乙酸盐)的溶液
在MeCN(0.4mL)中的K2CO3(28.8mg，0.21mmol)和3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-6-氯吡嗪-2-胺(中间体14；10.0mg，0.03mmol)，(中间体19；29.0mg，0.04mmol)在85℃加热16小时。冷却后，将反应混合物减压浓缩，并将残余物用EtOAc和H2O稀释。将有机相用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤和减压浓缩，并作为粗品用于后续步骤。
LCMS(ES+)方法1：m/z 588(M+H)+，RT 1.35分钟。
步骤2：(S)-1′-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-胺(三氟乙酸盐)
在HCl(1.25N于MeOH中；0.27mL，0.34mmol)中的(R)-N-((S)-1′-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(25.0mg，0.02mmol)在室温搅拌4小时。将混合物减压浓缩并通过制备型HPLC(10％至100％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化残余物以获得呈黄色粉末状的标题化合物(3.8mg，46％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.36(br s，3H)，7.72(s，1H)，7.68(d，J＝5.5Hz，1H)，6.89(br s，2H)，6.28(br s，2H)，5.85(d，J＝5.5Hz，1H)，4.38-4.14(m，5H)，3.16-3.08(m，2H)，2.78-2.56(m，4H)，2.35-2.30(m，2H)，1.85-1.60(m，4H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 484(M+H)+，RT 0.89分钟。
实施例21和实施例22：(S)-1′-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-胺(三氟乙酸盐)和1′-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊基[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-醇(三氟乙酸盐)
步骤1：(R)-N-((S)-1′-(5-溴咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊基[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
使用中间体19合成实施例19的步骤1中描述的过程以得到呈淡粉色固体的标题化合物(27mg，59％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 532(M+H)+，RT 1.41分钟。
步骤2：(R)-N-((S)-1′-(5-((3-氯-2-((4-甲氧基苄基)氨基)吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
在1,4-二噁烷(1.0mL)和H2O(0.2mL)的混合物中的(R)-N-((S)-1′-(5-溴咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(27.0mg，0.05mmol)和NaOtBu(24.3mg，0.25mmol)，Ruphos-PdG4(8.62mg，0.01mmol)，中间体21(21.3mg，0.08mmol)的悬浮液中在100℃加热16小时。冷却后，减压除去溶剂，得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-100％EtOAc于石油醚中至0-20％MeOH于DCM中)。获得呈橙色粉末状的标题化合物(27mg，68％纯度，38％，非对映体比率8/2)。LCMS(ES+)方法1：m/z 732(M+H)+，RT 2.05分钟。
步骤3：(S)-1′-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-胺(三氟乙酸盐)和1′-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-醇(三氟乙酸盐)
在TFA(1.0mL)中的(R)-N-((S)-1′-(5-((3-氯-2-((4-甲氧基苄基)氨基)吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(21mg，0.02mmol)于室温搅拌20小时。将所得混合物用甲苯稀释，减压浓缩溶剂。将残余物用HCl(3.0M于MeOH中；1.0mL，3mmol)处理并在室温下搅拌30分钟。将混合物减压浓缩并通过制备型HPLC(15％至100％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化残余物以得到呈白色粉末状的实施例21(TFA盐；0.7mg，7％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.36(br s，3H)，8.29(s，1H)，8.11(s，1H)，7.63(d，J＝5.5Hz，1H)，7.61(s，1H)，6.66(br s，2H)，5.77(d，J＝5.3Hz，1H)，4.65-4.52(m，2H)，4.44-4.39(m，1H)，4.34(d，J＝10.7Hz，1H)，4.20(d，J＝10.7Hz，1H)，3.70-3.61(m，1H)，2.76-2.55(m，5H)，2.36-2.28(m，2H)，1.98-1.67(m，4H)。LCMS(ES+)(方法2)m/z 508(M+H)+，RT 1.09分钟。获得呈白色粉末状的实施例22(TFA盐；0.4mg，4％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.28(s，1H)，8.11(s，1H)，7.63(d，J＝5.5Hz，1H)，7.58(s，1H)，6.72(br s，2H)，5.82(d，J＝5.5Hz，1H)，4.64(s，1H)，4.25-4.17(m，2H)，4.03-3.98(m，2H)，3.88-3.75(m，2H)，2.65-2.51(m，5H)，2.35-2.28(m，2H)，2.03-1.98(m，1H)，1.75-1.67(m，3H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 509(M+H)+，RT 1.30分钟。
实施例23：(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-2′-甲基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
实施例23用与实施例19报道的相同程序制备(在步骤1中使用中间体3，在步骤2中使用中间体21并且在步骤3中使用净TFA)并获得白色粉末(3mg，16％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.38(br s，3H)，8.30(s，1H)，8.12(s，1H)，7.63(d，J＝5.5Hz，1H)，7.61(s，1H)，6.70(br s，2H)，6.10(s，1H)，5.78(d，J＝5.5Hz，1H)，4.68-4.55(m，2H)，4.43(d，J＝3.3Hz，1H)，4.35(d，J＝11.2Hz，1H)，4.20(d，J＝11.2Hz，1H)，3.39-3.65(m，2H)，2.22(s，3H)，1.96-1.82(m，4H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 482(M+H)+，RT 0.95分钟。
实施例24：(S)-1-(5-(((R)-6a′,7′-二氢-6′H,9′H-螺[环丙烷-1,8′-吡啶并[3,2-b]吡咯)[1,2-d][1,4]噁嗪]-4′-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
根据用于合成实施例19的所述过程(在步骤2中使用中间体29和t-BuOK，以及在步骤3中使用HCl(1.0M于MeOH中))制备实施例24，并获得白色粉末(1.57mg，54％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.79(s，1H)，8.54(br s，3H)，8.45(s，1H)，7.76(s，1H)，7.60(d，J＝1.8Hz，1H)，7.41(d，J＝6.8Hz，1H)，6.34(d，J＝2.0Hz，1H)，6.21(d，J＝6.8Hz，1H)，4.86(dd，J1＝10.5Hz，J2＝3.7Hz，1H)，4.62-4.43(m，4H)，4.31(d，J＝11.4Hz，1H)，4.19-4.12(m，1H)，3.87-3.82(m，1H)，3.72(br d，J＝11.0Hz，1H)，3.58-3.50(m，1H)，3.38(d，J＝11.0Hz，1H)，2.01-1.87(m，4H)，1.81-1.74(m，2H)，1.40-1.23(m，5H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 542(M+H)+，RT 1.02分钟。
实施例25：(S)-1-(5-(((S)-6a′,7′-二氢-6′H,9′H-螺[环丙烷-1,8′-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪]-4′-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
根据用于合成实施例13所述的过程，使用(S)-4′-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)-6a′,7′-二氢-6′H,9′H-螺[环丙烷-1,8′-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪]2-乙基己基(按照步骤3中使用中间体28合成中间体17的方法制备)和中间体5，制备实施例25。获得呈浅黄色粉末状的实施例25(4.0mg，25％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.53(s，1H)，8.44(brs，3H)，8.31(s，1H)，7.59(d，J＝1.8Hz，1H)，7.46(d，J＝5.9Hz，1H)，6.31(d，J＝1.8Hz，1H)，5.97(br d，J＝5.9Hz，1H)，4.65(br d，J＝7.7Hz，1H)，4.50-4.46(m，1H)，4.43-4.36(m，2H)，4.35-4.24(m，2H)，4.02-3.94(m，1H)，3.65-3.60(m，2H)，3.38-3.17(m，3H)，1.92-1.66(m，6H)，0.76-0.63(m，4H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 503(M+H)+，RT 0.96分钟。
实施例26：(S)-1-(4-((3-氨基-5-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-3,3-二氟吲哚啉-1-基)乙-1-酮(三氟乙酸盐)
从中间体23和中间体5开始，根据用于实施例13的过程制备实施例26，其呈浅黄色粉末状(2.0mg，6％)。1H NMR(400MHz DMSO-d6)δ8.39(br s，3H)，8.00(br d，J＝9.0Hz，1H)，7.70(s，1H)，7.58(d，J＝1.8Hz，1H)，7.38(t，J＝8.1Hz，1H)，6.51(d，J＝7.9Hz，1H)，6.30(d，J＝1.8Hz，1H)，6.09(br s，2H)，4.62(br t，J＝17.2Hz，2H)，4.48-4.44(m，1H)，4.38-4.27(m，2H)，4.23(br d，J＝11.4Hz，2H)，3.27-3.20(m，1H)，3.14-3.06(m，1H)，2.22(s，3H)，1.83-1.71(m，3H)，1.65-1.61(m，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 513(M+H)+，RT 1.06分钟。
实施例27：(S)-1′-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,8-二氢-3H,6H-螺[呋喃[3,4-d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-胺(三氟乙酸盐)
从中间体25和中间体16(使用1-BuOH作为溶剂)开始，根据用于实施例6的过程制备实施例27，其呈白色粉末状(13.0mg，38％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.57(s，1H)，8.45(br s，3H)，8.36(s，1H)，7.69(d，J＝5.7Hz，1H)，6.77(br s，2H)，5.90(d，J＝5.7Hz，1H)，4.87-4.76(m，2H)，4.73(s，2H)，4.45-4.24(m，5H)，3.41-3.36(m，1H)，3.27-3.20(m，1H)，1.89-1.78(m，3H)，1.77-1.70(m，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 471(M+H)+，RT 0.84分钟。
实施例28：(S)-(4′-氨基-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-2′,3′-二基)二甲醇(三氟乙酸盐)
从步骤1中的中间体25(83mg，0.32mmol)和5-溴-8-氯咪唑并[1，5-a]吡嗪(50mg，0.22mmol)(使用DMSO作为溶剂)和步骤2中的中间体21(51mg，0.18mmol)开始，根据用于实施例15的过程，制备实施例28。步骤3使用HCl(3.0M在MeOH中；1.0mL，0.08mmol)分两步进行，然后在减压除去挥发物后添加TFA(2.0mL)。制备型HPLC(10％至45％MeCN/H2O+0.1％TFA)后得到标题化合物(17mg，38％)，其呈白色固体状。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.31(s，1H)，8.27(br s，3H)，8.12(s，1H)，7.64(d，J＝5.5Hz，1H)，7.61(s，1H)，6.81(br s，2H)，5.81(d，J＝5.7Hz，1H)，4.64-4.50(m，6H)，4.42(br s，3H)，4.35(d，J＝11.2Hz，1H)，4.22(d，J＝11.0Hz，1H)，3.67-3.61(m，1H)，3.51-3.43(m，1H)，2.02-1.81(m，3H)，1.73-1.65(m，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 528(M+H)+，RT 0.70分钟。
实施例29：(S)-1′-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-1,8-二氢-3H,6H-螺[呋喃[3,4-d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4′-哌啶]-8-胺(三氟乙酸盐)
根据用于实施例28的过程制备实施例29，其中使用TFA(2.0mL)分两步进行步骤3，接着在除去溶剂后添加HCl(1.25M于MeOH中；1.0mL)。制备型HPLC(10％至100％MeCN/H2O+0.1％TFA)后得到标题化合物(3.5mg，31％)，其呈白色固体状。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.43(br s，3H)，8.31(s，1H)，8.12(s，1H)，7.63(d，J＝5.5Hz，1H)，7.61(s，1H)，6.77(br s，2H)，5.79(d，J＝5.5Hz，1H)，4.86-4.76(m，2H)，4.73(s，2H)，4.66-4.55(m，2H)，4.43(br d，J＝11.0Hz，2H)，4.28(br d，J＝11.4Hz，1H)，3.78-3.71(m，1H)，3.60-3.54(m，1H)，1.99-1.75(m，4H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 510(M+H)+，RT 0.86分钟。
实施例30：(S)-1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：4-((5-溴咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)硫代)-3-氯-N-(4-甲氧基苄基)吡啶-2-胺
将在1,4-二噁烷(8.6mL)中的中间体21(330mg，0.88mmol)和5-溴-8-氯咪唑并[1,5-a]吡嗪(200mg，0.86mmol)的混合物在室温搅拌72小时。将反应混合物用EtOAc稀释并添加H2O。分离有机相，用H2O，盐水洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩，得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱10-100％EtOAc于石油醚中)，得到标题化合物，其呈浅黄色固体(170mg，41％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.40(s，1H)，8.04(d，J＝5.3Hz，1H)，7.90(s，1H)，7.56(s，1H)，7.32(d，J＝8.6Hz，2H)，6.90(d，J＝8.6Hz，2H)，6.80(d，J＝5.0Hz，1H)，5.37(br s，1H)，4.63(d，J＝5.5Hz，2H)，3.82(s，3H)；LCMS(ES+)方法1：m/z 476-478(M+H)+，RT2.13分钟。
步骤2：(S)-1-(8-((3-氯-2-((4-甲氧基苄基)氨基)吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺
在DMF(1.0mL)中的Cs2CO3(205mg，0.63mmol)和1-(2-羟基-1-萘基)萘-2-醇(1.5mg，0.01mmol)，CuBr(0.38mg，0.03mmol)，中间体2(47mg，0.21mmol)，4-((5-溴咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)硫代)-3-氯-N-(4-甲氧基苄基)吡啶-2-胺(50mg，0.10mmol)的混合物在100℃加热4小时。冷却后，将反应混合物在EtOAc和H2O之间分配。分离有机相，用H2O，盐水洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩以得到残余物，将其用在MeOH中的HCl(1.0M)处理并在室温下搅拌18小时。将反应混合物减压浓缩，得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱10-100％EtOAc于石油醚中和0-20％MeOH于DCM中)，得到标题化合物，其呈黄色固体(9.6mg，16％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 588(M+H)+，RT 1.55分钟。
步骤3：(S)-1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(实施例30)
将在TFA(0.5mL)中的来自先前步骤的材料(9mg，0.02mmol)溶液在室温下搅拌直至起始材料完全消耗，然后用甲苯稀释。真空除去挥发物后，通过制备型HPLC(10％至100％MeCN/H 2O+0.1％TFA)纯化残余物，得到标题化合物，其呈浅黄色固体(TFA盐；5.9mg，68％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.48(br s，4H)，7.77(s，1H)，7.75(d，J＝5.5Hz，1H)，7.59(br d，J＝2.0Hz，1H)，7.27(s，1H)，6.66(br s，2H)，6.42(d，J＝5.5Hz，1H)，6.33(d，J＝1.8Hz，1H)，4.54(br d，J＝4.2Hz，1H)，4.36(d，J＝11.4Hz，1H)，4.23(d，J＝11.5Hz，1H)，3.53-3.48(m，2H)，3.14-3.05(m，2H)，2.12-2.01(m，2H)，1.95-1.92(m，1H)，1.76-1.73(m，1H)；LCMS(ES+)方法1：m/z 468(M+H)+，RT 0.88分钟。
实施例31：(S)-1-(5-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：8-氯-7-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)咪唑并[1,2-a]吡啶
将在H2O(50％w/w；0.08mL，0.63mmol)中的氯乙醛添加至在H2O(1.5mL)中的中间体16(57mg，0.21mmol)的悬浮液，并且将该悬浮液于MW辐射在100℃加热4小时。将混合物冷却至0℃，用H2O稀释并用K2CO3将pH调节至10，并用DCM(3x)萃取产物。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压条件下去除溶剂，得到呈棕色粉末状的标题化合物(50mg，81％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.70(d，J＝1.4Hz，1H)，8.62(d，J＝7.2Hz，1H)，8.58(d，J＝1.5Hz，1H)，8.18(d，J＝1.3Hz，1H)，7.80(d，J＝1.2Hz，1H)，7.12(d，J＝7.1Hz，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 297(M+H)+，RT 1.11分钟。
步骤2：(S)-1-(5-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
将无水DIPEA(0.050mL，0.23mmol)添加至在无水NMP(0.5mL)中的中间体2(15mg，0.05mmol)的溶液中。将混合物在110℃加热6小时。在0℃添加HCl(4N于1,4二噁烷中；0.13mL，0.51mmol)并将混合物在室温搅拌1小时。通过制备型HPLC-MS(0％至35％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化产物，冻干后得到呈黄色粉末状的标题化合物(8.2mg，29％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.66(d，J＝7.2Hz，1H)，8.62-8.37(m，5H)，8.37-8.30(m，1H)，8.15(d，J＝2.1Hz，1H)，7.57(d，J＝1.8Hz，1H)，6.92(d，J＝7.2Hz，1H)，6.37-6.28(m，1H)，4.55-4.22(m，5H)，3.48-3.33(m，1H)，3.32-3.16(m，1H)，1.98-1.64(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z453(M+H)+，RT 1.53分钟。
实施例32：(S)-1-(5-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：8-氯-7-碘咪唑并[1,2-a]吡啶
将在H2O(50％w/w；0.30mL，2.36mmol)中的氯乙醛添加至在H2O(2mL)中的3-氯-2-氟-4-碘吡啶(200mg，0.79mmol)的悬浮液，并且该混合物于MW辐射在100℃加热4小时。将混合物冷却至0℃，用H2O稀释并用K2CO3碱化至pH＝10，并用DCM(3x)萃取产物。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压条件下去除溶剂，得到呈棕色粉末状的标题化合物(218mg，99％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.42(d，J＝7.1Hz，1H)，8.13(d，J＝1.1Hz，1H)，7.63(d，J＝1.1Hz，1H)，7.35(d，J＝7.1Hz，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 279(M+H)+，RT 0.81分钟。
步骤2：3-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)丙酸甲酯
在密封的微波小瓶中，于N2流中将8-氯-7-碘咪唑并[1,2-a]吡啶(52mg，0.19mmol)，3-巯基丙酸甲酯(0.02mL,0.20mmol)，Pd2(dba)3(17.1mg，0.02mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(11mg，0.02mmol)溶解在脱气的无水1,4-二噁烷(1.5mL)中。添加无水DIPEA(0.08mL，0.47mmol)，并将混合物在90℃加热1小时。冷却后，在减压下蒸发混合物，并通过快速色谱纯化残余物(梯度洗脱10-100％EtOAc于石油醚中)得到标题化合物(40mg，79％)，其呈浅黄色固体。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.55(d，J＝7.2Hz，1H)，8.00(d，J＝1.2Hz，1H)，7.57(d，J＝1.2Hz，1H)，7.06(d，J＝7.2Hz，1H)，3.41-3.27(m，5H)，2.71(t，J＝7.0Hz，2H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 271(M+H)+，RT 0.96分钟。
步骤3：8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-硫醇钠
在0℃，向在乙醇(1.2mL)中的3-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)丙酸甲酯(40mg，0.15mmol)的溶液添加NaOEt(20％w/w溶液于EtOH中；0.06mL，0.16mmol)。将混合物升温至室温。30分钟后，减压蒸发混合物并从DCM中沉淀产物。过滤橙色粉末，用DCM洗涤，减压干燥，得到标题化合物(25mg，82％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 185(M+H)+，RT 0.62分钟。
步骤4：(R)-N-((S)-1-(5-溴咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将无水DIPEA(0.08mL，0.46mmol)添加至在无水DMSO(0.7mL)中的中间体2(51mg，0.12mmol)和5-溴-8-氯咪唑并[1,5-a]吡嗪(25mg，0.11mmol)的溶液中。将混合物在85℃加热10小时。制备型HPLC(0％至35％MeCN/H2O+0.1％TFA)后得到标题化合物，其呈黄色固体状(31mg，58％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.49(s，1H)，8.05(s，1H)，7.48(d，J＝1.8Hz，1H)，7.31(s，1H)，6.10(d，J＝1.6Hz，1H)，5.96(d，J＝9.9Hz，1H)，4.53-4.21(m，4H)，4.18-4.07(m，1H)，3.50-3.36(m，2H)，1.95-1.59(m，4H)，1.13(s，9H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 492(M+H)+，RT 1.15分钟。
步骤5：(R)-N-((S)-1-(5-((8-氯咪唑[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
在密封的微波小瓶中，在N2流下(R)-N-((S)-1-(5-溴咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(30mg，0.06mmol)，8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-硫醇纳(来自步骤3；25mg，0.12mmol)，Pd2(dba)3(7mg，0.01mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(4.5mg，0.01mmol)溶解于脱气干燥的1,4-二噁烷(0.5mL)中。添加无水DIPEA(0.03mL，0.18mmol)，并将混合物在100℃加热1小时。制备型HPLC(0％至30％MeCN/H2O+0.1％TFA)后得到标题化合物，其呈黄色固体状(22mg，61％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.34(d，J＝7.2Hz，1H)，8.26(s，1H)，8.08(s，1H)，8.00(d，J＝1.2Hz，1H)，7.66(s，1H)，7.60(d，J＝1.1Hz，1H)，7.49(d，J＝1.7Hz，1H)，6.33(d，J＝7.2Hz，1H)，6.11(d，J＝1.7Hz，1H)，6.01(d，J＝9.9Hz，1H)，4.66-4.46(m，3H)，4.30(d，J＝11.2Hz，1H)，4.16(d，J＝11.0Hz，1H)，3.61-3.41(m，2H)，1.98-1.87(m，2H)，1.87-1.66(m，2H)，1.19-1.06(m，9H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 596(M+H)+，RT 1.15分钟。
步骤6：(S)-1-(5-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
将HCl(4N于1,4二噁烷中；0.05mL，0.20mmol)添加至在DCM(0.5mL)中，来自先前步骤的材料(21mg，0.04mmol)溶液中。在室温搅拌1小时后，减压蒸发溶剂。制备型HPLC(0％至30％MeCN/H2O+0.1％TFA)后得到标题化合物，其呈黄色粉末状(11mg，50％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ9.02(s，1H)，8.76-8.45(m，5H)，8.34(d，J＝2.0Hz，1H)，8.20(d，J＝2.0Hz，1H)，7.91(s，1H)，7.59(d，J＝1.7Hz，1H)，7.04(d，J＝7.2Hz，1H)，6.34(d，J＝1.8Hz，1H)，4.79-4.23(m，5H)，3.90-3.70(m，1H)，3.69-3.48(m，1H)，2.16-1.72(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 492(M+H)+，RT 1.39分钟。
实施例33：(S)-1-(5-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
将在NMP(0.4mL)中的DIPEA(28uL，0.16mmol)和中间体5(15mg，0.06mmol)，2-氯-5-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪(中间体33；15mg，0.06mmol)的溶液于MW在120℃加热3小时。冷却后，将反应混合物用EtOAc稀释并用6N HCl萃取。将水性层用DCM洗涤并用2N NaOH水性溶液碱化，然后用EtOAc萃取。将有机相减压浓缩，得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-100％(10％MeOH于EtOAc中+1/100NH4OH溶液)于EtOAc中)。蒸发含有产物的级分，将残余物溶解在MeCN(2mL)，H2O(1mL)和TFA(几滴)的混合物中，经冻干得到标题化合物，其呈黄色固体(4.5mg，23％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.61(d，J＝1.1Hz，1H)，8.47(br s，3H)，8.42(d，J＝1.2Hz，1H)，8.18-8.27(m，2H)，7.80(d，J＝1.2Hz，1H)，7.57(d，J＝1.8Hz，1H)，6.82(d，J＝5.3Hz，1H)6.54(t，J＝1.9Hz，1H)，6.32(d，J＝1.8Hz，1H)，4.18-4.59(m，5H)，3.18-3.46(m，2H)，1.67-1.96(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 480(M+H)+，RT 2.23分钟。
实施例34：(S)-1-(5-((3-氯-2-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
将在NMP(0.8mL)中的DIPEA(243uL，1.4mmol)和中间体5(31mg，0.12mmol)，中间体35(29mg，0.08mmol)的溶液在100℃加热3小时。冷却后，将反应混合物用H2O(2mL)稀释并用EtOAc萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂以得到残余物，将其通过反相色谱法纯化(梯度洗脱：0-30％MeCN/H2O+0.1％TFA)以得到标题化合物(30mg，69％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.59-8.63(m，1H)，8.43-8.52(m，3H)，8.43(d，J＝1.3Hz，1H)，8.26(d，J＝5.3Hz，1H)，7.58(d，J＝1.8Hz，1H)，6.87(d，J＝5.3Hz，1H)，6.32(d，J＝1.8Hz，1H)，6.02-6.12(m，1H)，4.25-4.53(m，5H)，3.33-3.48(m，1H)，3.16-3.32(m，1H)，2.16-2.22(m，3H)，2.10-2.15(m，3H)，1.68-1.94(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 508(M+H)+，RT 2.36分钟。
实施例35：(S)-1-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)哒嗪-3-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
将在1-BuOH(1.0mL)中的DIPEA(31.9uL，0.18mmol)和中间体36(10.0mg，0.04mmol)，中间体2(28.8mg，0.05mmol)的溶液在100℃搅拌24小时。除去挥发物后，将残余物用HCl(1.25M于MeOH中；3mL)处理并在室温下搅拌2小时。将反应混合物减压浓缩并通过制备型HPLC-MS(5％至100％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化残余物以获得标题化合物，其呈白色粉末状(3.5mg，22％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.46(br s，3H)，7.72(d，J＝5.5Hz，1H)，7.64(d，J＝9.4Hz，1H)，7.59(s，1H)，7.46(d，J＝9.2Hz，1H)，6.76(br s，2H)，6.32(s，1H)，5.95(d，J＝5.5Hz，1H)，4.47-4.38(m，3H)，4.30-4.25(m，1H)，3.38-3.34(m，1H)，3.26-3.18(m，1H)，1.87-1.75(m，3H)，1.70-1.65(m，1H)，1.27-1.24(m，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z429(M+H)+，RT 0.69分钟。
实施例36：(S)-1-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：(R)-N-((S)-1-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
从在无水DMSO(0.7mL)中的中间体13(14mg，0.05mmol)和中间体37(15mg，0.04mmol)开始获得无需纯化即可用于后续步骤的粗品化合物(28mg)，根据用于实施例6的过程，制备(R)-N-((S)-1-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺。LCMS(ES+)方法1：m/z 568(M+H)+，RT 1.72分钟。
步骤2：(S)-1-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-胺(实施例36)
从来自先前步骤的材料开始，根据实施例11所述的程序制备实施例36，在通过制备型HPLC纯化(5％至45％MeCN/H2O+0.1％TFA)后得到标题化合物，其呈棕色粉末状(3.1mg，15％，2步骤)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.82-8.42(m，4H)，7.75(d，J＝10.0Hz，2H)，7.54(dd，J＝8.1，4.6Hz，1H)，7.34(d，J＝8.3Hz，1H)，4.76-4.44(m，3H)，4.40-4.19(m，2H)，3.37-3.06(m，2H)，1.91-1.66(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 464(M+H)+，RT2.09分钟。
实施例37：(S)-1-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：(R)-N-((S)-1-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
从在无水DMSO(0.7mL)中的中间体14(21mg，0.07mmol)和中间体37(25mg，0.06mmol)开始获得无需纯化即可用于后续步骤的粗品化合物(37mg)，根据用于实施例6的过程，制备(R)-N-((S)-1-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺。LCMS(ES+)方法1：m/z 549(M+H)+，RT 1.13分钟。
步骤2：(S)-1-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-胺(实施例37)
从来自先前步骤的材料开始，根据实施例11所述的程序制备实施例37，在通过制备型HPLC纯化(0％至35％MeCN/H2O+0.1％TFA)后得到标题化合物，其呈棕色粉末状(6.5mg，22％，2步骤)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.55(br s，3H)，8.27(br s，2H)，7.80-7.71(m，3H)，6.10(d，J＝6.8Hz，1H)，4.74-4.64(m，1H)，4.58(br s，1H)，4.53-4.43(m，1H)，4.41-4.18(m，2H)，3.37-3.07(m，2H)，1.94-1.63(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 445(M+H)+，RT 1.36分钟。
实施例38：(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：(R)-N-((S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
从在无水NMP(0.5mL)中的中间体16(14mg，0.05mmol)和中间体37(16mg，0.04mmol)开始获得无需纯化即可用于后续步骤的粗品化合物(32mg)，根据用于实施例6的过程，制备(R)-N-((S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺。LCMS(ES+)方法1：m/z 534(M+H)+，RT 1.25分钟。
步骤2：(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-胺(实施例38)
从来自先前步骤的材料开始，根据实施例11所述的过程制备实施例38，在通过制备型HPLC纯化(0％至35％MeCN/H2O+0.1％TFA)后得到标题化合物，其呈白色粉末状(9mg，47％，2步骤)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.58(br d，J＝1.0Hz，4H)，8.39(d，J＝1.2Hz，1H)，7.85-7.66(m，2H)，6.20(d，J＝6.9Hz，1H)，4.76-4.23(m，5H)，3.52-3.19(m，2H)，1.97-1.70(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 430(M+H)+，RT 1.47分钟。
实施例39：(S)-1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：(S)-(1-(8-溴咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-基)氨基甲酸叔丁酯
从中间体18(18mg，0.07mmol)和中间体37(25mg，0.06mmol)开始，根据用于实施例6的过程，制备(S)-(1-(8-溴咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-基)氨基甲酸叔丁酯(反应过程中亚磺酰胺部分被去保护，并添加Boc2O(30mg，0.14mmol)以再次保护胺)。通过制备型HPLC(0％至45％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化后获得标题化合物，其呈黄色固体(15mg，50％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 489(M+H)+，RT1.36分钟。
步骤2：(S)-(1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-基)氨基甲酸叔丁酯
从来自上一步骤的材料(15mg，0.03mmol)和2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇钠(根据中间体14，步骤3所用的过程制备；8mg，0.04mmol)开始，根据用于中间体13的过程，步骤1，制备(S)-(1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-基)氨基甲酸叔丁酯，并通过制备型HPLC纯化(0％至45％MeCN/H2O+0.1％TFA)，得到标题化合物，其呈黄色固体(8mg，46％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 569(M+H)+，RT 1.26分钟。
步骤3：(S)-1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-胺(实施例39)
从来自先前步骤的材料(8mg，0.01mmol)开始，根据实施例11步骤2的过程制备实施例39，并通过制备型HPLC-MS纯化(0％至40％MeCN/H2O+0.1％TFA)得到标题化合物，其呈白色固体(4.1mg，62％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.66(br s，3H)，8.50(s，1H)，8.20-8.11(m，2H)，7.79(s，1H)，7.74(d，J＝6.9Hz，1H)，6.45(d，J＝6.9Hz，1H)，4.83(br d，J＝2.7Hz，1H)，4.67(br s，1H)，4.53(d，J＝12.3Hz，1H)，4.26-4.01(m，2H)，3.75-3.60(m，1H)，3.59-3.44(m，1H)，2.23-2.10(m，1H)，2.08-1.92(m，2H)1.77-1.90(m，1H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 469(M+H)+，RT 1.29分钟。
实施例40：(S)-1-(3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：(R)-N-((4′S)-1-(3-碘-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将在1-BuOH(0.8mL)中的DIPEA(67.4uL，0.38mmol)和中间体2(43.0mg，0.08mmol)，中间体39(23.0mg，0.06mmol)的溶液在100℃搅拌16小时。冷却后，将混合物在真空浓缩得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-100％EtOAc+10％MeOH于石油醚中)以得到呈黄色粉末状的标题化合物(19mg，48％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 625(M+H)+，RT1.70分钟。
步骤2：(4-(6-((S)-4′-((R)-叔丁基亚磺酰)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)-3-氯吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯
在1,4-二噁烷(0.9mL)和H2O(0.09mL)的脱气混合物中的K3PO4(38.8mg，0.18mmol)和中间体38(68.0mg，0.09mmol)，(R)-N-((4′S)-1-(3-碘-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-)1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(19.0mg，0.03mmol)，Pd(dppf)2Cl2·DCM(5.0mg，0.01mmol)的溶液在85℃加热30分钟。冷却后，将混合物过滤并在真空浓缩得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-100％EtOAc+10％MeOH于石油醚中)以得到标题化合物，其呈黄色粉末状(15mg，68％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 725(M+H)+，RT 2.40分钟。
步骤3：(S)-1-(3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(实施例40)
将在HCl(1.5M于MeOH中；0.07mL，0.21mmol)中的来自先前步骤的材料(15.0mg，0.02mmol)的溶液在室温搅拌5小时。然后将反应混合物减压浓缩，将残余物溶解在DCM(0.3mL)中并用TFA(0.3mL)处理。真空除去挥发物后，通过制备型HPLC(5％至100％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化粗品，得到标题化合物，其呈黄色固体(TFA盐；1.6mg，18％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.62(s，1H)，8.44(br s，3H)，8.09(d，J＝7.9Hz，1H)，7.65(d，J＝8.0Hz，1H)，7.58-7.56(m，1H)，6.30(d，J＝2.0Hz，1H)，4.51-4.44(m，2H)，4.42-4.36(m，2H)，4.30-4.25(m，1H)，3.46-3.38(m，1H)，3.33-3.24(m，1H)，1.92-1.78(m，3H)，1.73-1.67(m，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 437(M+H)+，RT 0.58分钟。
实施例41：(S)-1-(3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：(R)-N-((4′S)-1-(3-碘-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将在无水DMF(0.4mL)中的DIPEA(0.04uL，0.26mmol)和中间体39(18.7mg，0.05mmol)，中间体37(20.0mg，0.05mmol)的溶液在85℃加热5.5小时。将混合物用EtOAc稀释并用H2O(x2)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂以得到棕色固体，其不经纯化即用于后续步骤(38mg)。LCMS(ES+)方法1：m/z 626(M+H)+，RT 1.79分钟。
步骤2：(R)-N-((4′S)-1-(3-(2,3-二氯苯基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
在脱气的1,4-二噁烷/H2O＝9/1(5.5mL)中的K3PO4(31.0mg，3.27mmol)和Pd(dppf)2Cl2·DCM(8.0mg，0.01mmol)，(2,3-二氯苯基)硼酸(18.5mg，2.02mmol)，来自先前步骤的材料(38.0mg，0.05mmol)的混合物在100℃加热30分钟。将所得混合物用EtOAc稀释并用H2O(x2)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂以得到棕色固体，其不经进一步纯化即用于后续步骤(45mg)。LCMS(ES+)方法1：m/z 644(M+H)+，RT 2.18分钟。
步骤3：(S)-1-(3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4′-胺(实施例41)
在无水DCM(1.0mL)中来自先前步骤的材料(30.0mg，0.05mmol)的溶液用HCl(4N于1,4-二噁烷中，0.2ml，0.8mmol)，并且所得溶液在室温搅拌20分钟。蒸发后，通过制备型HPLC(5％至45％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化残余物，得到标题化合物，其呈黄色粉末状(9mg，31％，3步骤)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.74-8.41(m，4H)，7.84-7.65(m，3H)，7.59-7.43(m，1H)，4.71(d，J＝12.1Hz，1H)，4.65-4.29(m，4H)，3.52-3.20(m，2H)，2.00-1.70(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 456(M+H)+，RT 2.24分钟。
实施例42：(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-5′H,7′H-螺[哌啶-4,6′-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑]-7′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：(R)-N-((S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-5′H,7′H-螺[哌啶-4,6′-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑]-7′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将无水DIPEA(0.045mL，0.26mmol)添加至在无水NMP(0.6mL)中的中间体40(18mg，0.04mmol)和中间体16(15mg，0.06mmol)的溶液中，并将混合物在115℃加热下4.5小时。将粗品通过制备型HPLC(0％至40％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到标题化合物，其呈米色固体(15mg，65％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ9.68(s，1H)，8.56(br d，J＝1.0Hz，1H)，8.37(br d，J＝1.1Hz，1H)，7.74(d，J＝6.9Hz，1H)，6.29(d，J＝10.1Hz，1H)，6.19(d，J＝6.9Hz，1H)，4.92(d，J＝10.0Hz，1H)，4.36(dd，J＝12.0，32.8Hz，2H)，4.20-3.97(m，2H)，3.63-3.41(m，2H)，1.97-1.58(m，4H)，1.15(s，9H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 534(M+H)+，RT1.16分钟。
步骤2：(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-5′H,7′H-螺[哌啶-4,6′-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑]-7′-胺(实施例42)
将HCl(4N于二噁烷中，0.43mL，1.7mmol)添加至在DCM(1.4mL)中的来自先前步骤的材料(14mg，0.03mmol)的溶液中，并将反应混合物在室温搅拌30分钟。减压去除溶剂，所得粗品通过制备型HPLC纯化(0％至30％MeCN/H2O+0.1％TFA)，得到标题化合物，其呈白色固体(10mg，68％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ9.19(s，1H)，8.90(br s，3H)，8.60(br d，J＝1.1Hz，1H)，8.40(br d，J＝1.2Hz，1H)，7.75(d，J＝6.9Hz，1H)，6.19(d，J＝6.9Hz，1H)，4.76(s，1H)，4.48-4.21(m，4H)，3.43-3.20(m，2H)，1.97-1.67(m，4H)。LCMS(ES+)方法1：m/z430(M+H)+，RT 1.38分钟。
实施例43：(S)-1-(5-((8-氯-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
将在NMP(1.3mL)中的DIPEA(380uL，2.19mmol)和中间体5(34mg，0.13mmol)，中间体41(40mg，0.13mmol)的溶液在100℃加热3小时。冷却后，将反应用H2O(2mL)稀释并用EtOAc萃取。有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压条件下去除溶剂。将产物通过反相色谱纯化(梯度洗脱：0-25％MeCN/H2O+0.1％TFA)，得到标题化合物，其呈黄色固体(11mg，18％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.64-8.46(m，5H)，8.40(d，J＝1.2Hz，1H)，8.06(d，J＝1.0Hz，1H)，7.57(d，J＝1.9Hz，1H)，6.87(d，J＝7.2Hz，1H)，6.32(d，J＝1.8Hz，1H)，4.53-4.25(m，5H)，3.44-3.18(m，2H)，2.45(s，3H)，1.95-1.66(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 467(M+H)+，RT1.60分钟。
实施例44：(S)-1-(6-氨基-5-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：6-氯-3-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-胺
根据用于实施例6，中间体22(25mg，0.14mmol)和8-氯-7-碘咪唑并[1,2-a]吡啶的过程，制备6-氯-3-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫基)吡嗪-2-胺，并通过反相色谱纯化(0％至30％MeCN/H2O+0.1％TFA)得到标题化合物，其呈棕色固体(41mg，70％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.58(d，J＝7.2Hz，1H)，8.21(d，J＝1.6Hz，1H)，7.90(s，1H)，7.83(s，1H)，7.20(br s，2H)，6.88(d，J＝7.1Hz，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 312(M+H)+，RT 1.07分钟。
步骤2：(S)-1-(6-氨基-5-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(实施例44)
从中间体5(21mg，0.08mmol)和6-氯-3-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-胺(22mg，0.07mmol)开始，根据用于实施例6的过程制备实施例44，并通过反相色谱法纯化(0％至30％MeCN/H2O+0.1％TFA)，得到标题化合物，其呈黄色粉末状(12mg，32％)1HNMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.65(d，J＝7.2Hz，1H)，8.48(br s，3H)，8.34(d，J＝2.2Hz，1H)，8.14(d，J＝2.1Hz，1H)，7.77(s，1H)，7.57(d，J＝1.9Hz，1H)，6.75(d，J＝7.2Hz，1H)，6.32(d，J＝1.8Hz，1H)，4.48(br d，J＝4.3Hz，1H)，4.44-4.21(m，4H)，3.28(br t，J＝11.8Hz，1H)，3.21-3.05(m，1H)，1.90-1.60(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 468(M+H)+，RT1.39分钟。
实施例45：(S)-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(三氟乙酸盐)
步骤1：(R)-N-((S)-1-(5-溴-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
在-78℃用DIBAL-H(1M于己烷中；0.46mL，0.46mmol)处理在无水DCM(0.8mL)中的中间体42(50mg，0.09mmol)的溶液，并在此温度下搅拌反应混合物30分钟，然后升温至室温并搅拌18小时。将混合物冷却回-78℃，用罗谢尔盐饱和水性溶液(3mL)处理并在室温搅拌16小时。分离各相，并用DCM(2x)萃取水性相。合并的有机物经Na2SO4干燥并真空浓缩以得到残余物，将其通过制备型HPLC纯化(15％至100％MeCN/H2O+0.1％TFA)，得到标题化合物，其呈黄色粉末状(10mg，22％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 497-499(M+H)+，RT 1.55分钟。
步骤2：(R)-N-((S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将在1,4-二噁烷(0.5mL)中的4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(2.3mg，0.004mmol)和Pd2(dba)3(1.8mg，0.002mmol)，2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇钠(按中间体14所述制备；11mg，0.06mmol)，来自先前步骤的材料(10mg，0.02mmol)的溶液用DIPEA(21uL,0.12mmol)处理，并将反应混合物在100℃搅拌2小时。冷却后，过滤混合物并真空浓缩，得到标题化合物，其呈黄色粉末状(12mg，99％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 577(M+H)+，RT 2.11分钟。
步骤3：(S)-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(实施例45)
将在HCl(1.25M于MeOH中；0.18mL，0.23mmol)中的来自先前步骤的材料(13mg，0.02mmol)的溶液在室温搅拌1小时。真空除去挥发物后，通过制备型HPLC(5％至100％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化残余物，得到标题化合物，其呈无色固体(TFA盐；3mg，27％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.42(br s，3H)，7.67(d，J＝5.5Hz，1H)，7.59(d，J＝2.0Hz，1H)，6.76-6.49(m，1H)，6.32(d，J＝1.8Hz，1H)，5.81(d，J＝5.3Hz，1H)，4.51(br s，3H)，4.37(d，J＝11.4Hz，1H)，4.22(d，J＝11.2Hz，1H)，4.12-3.89(m，2H)，3.36-3.09(m，2H)，2.43(s，3H)，2.06-1.62(m，4H)；LCMS(ES+)方法1：m/z 473(M+H)+，RT 0.78分钟。
实施例46：(S)-3-(2-氨基-3-氯吡啶-4-基)-6-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-5-甲基-1,5-二氢-4H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮(三氟乙酸盐)
步骤1：6-((S)-4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-3-碘-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1,5-二氢-4H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮
将在DMSO(1mL)中的DIPEA(0.13uL，0.76mmol)和中间体2(94mg，0.15mmol)，中间体43(60mg，0.15mmol)的溶液在120℃加热18小时。冷却后，将混合物在真空浓缩得到残余物，将其通过反向色谱纯化(梯度洗脱0-100％MeCN于H2O中)以得到标题化合物，其呈黄色粉末状(47mg，56％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.44(d，J＝1.5Hz，1H)，6.11(s，1H)，5.63-5.60(m，1H)，4.16(d，J＝11.2Hz，1H)，4.08-4.03(m，2H)，3.94(br d，J＝11.0Hz，1H)，3.63-3.49(m，3H)，3.39(s，3H)，3.15-3.07(m，2H)，2.30-2.26(m，1H)，2.04-1.95(m，2H)，1.84-1.74(m，2H)，1.73-1.65(m，2H)，1.62-1.54(m，3H)；LCMS(ES+)分钟1：m/z 551(M+H)+，RT1.23分钟。
步骤2：(4-(6-((S)-4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基))-5-甲基-4-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-3-氯吡啶-2-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸叔丁酯
遵循实施例40步骤2中的合成所报道的过程，制备(4-(6-((S)-4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基))-5-甲基-4-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-3-氯吡啶-2-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸叔丁酯。LCMS(ES+)方法1：m/z 751(M+H)+，RT 1.77分钟。
步骤3：(S)-3-(2-氨基-3-氯吡啶-4-基)-6-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-5-甲基-1,5-二氢-4H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮(三氟乙酸盐)(实施例46)
将在DCM/TFA(9/1；0.5mL)的混合物中的来自先前步骤的粗品溶液在室温搅拌2小时。真空除去挥发物后，通过制备型HPLC(5％至100％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化残余物，得到标题化合物，其呈白色固体(TFA盐；0.8mg，2％经2步骤)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.59(br s，1H)，8.43(br s，3H)，7.94(d，J＝5.0Hz，1H)，7.60(br s，1H)，6.66(d，J＝5.0Hz，1H)，6.42(br s，2H)，6.32(br s，1H)，4.55-4.52(m，1H)，4.35(d，J＝11.4Hz，1H)，4.21(d，J＝11.4Hz，1H)，3.65-3.58(m，2H)，3.42(s，3H)，3.18-3.13(m，1H)，3.04-2.98(m，1H)，2.01-1.83(m，3H)，1.75-1.69(m，1H)；LCMS(ES+)方法1：m/z 467(M+H)+，RT 0.60分钟。
实施例47：(S)-1-(5-((5-氨基-3-氯吡嗪-2-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从中间体48(10mg，0.03mmol)和中间体5(14mg，0.05mmol)开始，根据用于实施例6的过程，制备标题化合物将残余物通过反相色谱法(5％至35％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到呈米色粉末状的标题化合物(3.5mg，20％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.49-8.30(m，4H)，8.11(d，J＝1.3Hz，1H)，7.74(s，1H)，7.57(d，J＝1.8Hz，1H)，6.38-6.25(m，1H)，4.56-4.11(m，5H)，3.40-3.03(m，2H)，1.93-1.55(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 430(M+H)+，RT 1.95分钟。
实施例48：(S)-1-(5-((3,8-二氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从中间体49(15mg，0.04mmol)和中间体5(15mg，0.05mmol)开始，根据用于实施例6的过程，制备实施例48。将残余物通过反相色谱法(0％至30％MeCN/H2O+0.1％TFA)的手段直接纯化，得到标题化合物，其呈米色粉末状(6.2mg，28％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.61-8.33(m，6H)，8.16(s，1H)，7.57(d，J＝1.8Hz，1H)，6.83(d，J＝7.3Hz，1H)，6.31(d，J＝1.8Hz，1H)4.57-4.20(m，5H)，3.47-3.15(m，2H)，1.93-1.64(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z487(M+H)+，RT 1.99分钟。
实施例49：(S)-1-(5-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-3′-氟-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从8-氯-7-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)咪唑并[1，2-a]吡啶(按照实施例31的步骤1中所述制备；16mg，0.054mmol)和中间体8(18.3mg，0.065mmol)开始，根据用于实施例6的过程，制备标题化合物。将残余物通过反相色谱法(0％至30％MeCN/H2O+0.1％TFA)的手段直接纯化，得到标题化合物，其呈黄色粉末状(15mg，55％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.78-8.54(m，5H)，8.40(d，J＝1.2Hz，1H)，8.33(d，J＝2.2Hz，1H)，8.15(d，J＝2.1Hz，1H)，7.57(d，J＝3.9Hz，1H)，6.92(d，J＝7.2Hz，1H)，4.67(br s，1H)，4.45-4.20(m，4H)，3.53-3.35(m，1H)，3.35-3.18(m，1H)，1.94-1.59(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 471(M+H)+，RT 1.56分钟。
实施例50：(S)-1-(5-((3,8-二氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-3′-氟-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从中间体49(15mg，0.04mmol)和中间体8(16mg，0.06mmol)开始，根据用于实施例6的过程，制备标题化合物将粗品化合物通过制备型HPLC(0％至35％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到标题化合物，其呈黄色粉末状(5mg，23％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.70-8.52(m，4H)，8.41-8.37(m，1H)，8.36(s，1H)，8.15(s，1H)，7.56(d，J＝4.0Hz，1H)，6.82(d，J＝7.2Hz，1H)，4.66(br s，1H)，4.40-4.23(m，4H)，3.48-3.36(m，1H)，3.33-3.19(m，1H)，1.91-1.59(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 505(M+H)+，RT 2.04分钟。
实施例51：(S)-1-(5-((8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从中间体50(35mg，0.12mmol)和中间体5(25mg，0.09mmol)开始，根据用于实施例6的过程，制备标题化合物将残余物直接通过快速色谱纯化(10％MeOH于EtOAc中+1％NH4OH)，用TFA冻干后得到标题化合物，其呈米色粉末状(6mg，7％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.33(s，1H)，8.60-8.35(m，6H)，7.59(d，J＝1.8Hz，1H)，6.55(d，J＝7.2Hz，1H)，6.32(d，J＝1.8Hz，1H)，4.54-4.23(m，5H)，3.45-3.30(m，1H)，3.30-3.15(m，1H)，1.92-1.62(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 454(M+H)+，RT 1.73分钟。
实施例52：(S)-1-(5-((8-氯-3-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
在室温下将5-氯烷基吡嗪-2-硫醇钠(按照中间体16，步骤3制备；26mg，0.16mmol)添加至在无水DMSO(0.7mL)中的中间体51(50mg，0.15mmol)的溶液中。4小时后，添加中间体5(30mg，0.11mmol)和无水DIPEA(0.11mL，0.63mmol)，并将混合物在100℃加热30分钟。将混合物通过反相色谱(5％至45％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化，得到标题化合物，其呈黄色粉末状(6mg，7％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.14-9.04(m，1H)，8.75(s，1H)，8.61-8.38(m，5H)，7.57(d，J＝1.9Hz，1H)，6.87(d，J＝7.4Hz，1H)，6.32(d，J＝1.8Hz，1H)，4.54-4.24(m，5H)，3.48-3.15(m，2H)，1.96-1.62(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 498(M+H)+，RT 2.24分钟。
实施例53：(S)-N-(7-((5-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2,2,2-三氟乙酰胺(三氟乙酸盐)
从中间体52(25mg，0.06mmol)和中间体5(19mg，0.07mmol)开始，根据用于实施例6的过程，制备实施例53。将粗品化合物通过制备型HPLC(0％至30％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到标题化合物，其呈黄色固体(3mg，7％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ1.90-1.62(m，4H)，3.29-3.15(m，1H)，3.45-3.30(m，1H)，4.57-4.19(m，5H)，6.32(d，J＝1.8Hz，1H)，6.76(d，J＝7.3Hz，1H)，7.59(d，J＝1.8Hz，1H)，7.94(s，1H)，8.27(d，J＝7.2Hz，1H)，8.62-8.32(m，6H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 564(M+H)+，RT 2.39分钟。
实施例54：(S)-7-((5-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺(三氟乙酸盐)
从中间体53(15mg，0.04mmol)和中间体5(22mg，0.083mmol)开始，以MeCN作为溶剂并以K2CO3作为碱，根据用于实施例1的过程，制备实施例54。将残余物通过反相色谱(5％至35％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到标题化合物，其呈米色粉末状(3.5mg，20％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.65-8.32(m，7H)，7.93(br s，1H)，7.74(br s，1H)，7.58(d，J＝1.8Hz，1H)，6.66(d，J＝7.2Hz，1H)，6.32(d，J＝1.8Hz，1H)，4.55-4.22(m，5H)，3.45-3.12(m，2H)，1.92-1.62(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 496(M+H)+，RT 1.86分钟。
实施例55：(S)-1-(5-((6-氨基-2-氯吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从中间体55(20mg，0.07mmol)和中间体5(22mg，0.08mmol)开始，使用MeCN代替作为溶剂并使用K2CO3作为碱，根据用于实施例1的过程，制备实施例55。将残余物通过反相色谱(0％至40％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到标题化合物，其呈黄色粉末状(14mg，35％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.70-8.34(m，4H)，8.08(d，J＝1.3Hz，1H)，7.74-7.60(m，2H)，6.54(d，J＝8.4Hz，1H)，6.41(d，J＝1.8Hz，1H)，4.59-4.51(m，1H)，4.50-4.22(m，4H)，3.45-3.14(m，2H)，2.00-1.66(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 429(M+H)+，RT 2.03分钟。
实施例56：(S)-1-(5-((5-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从中间体56(25mg，0.08mmol)和中间体5(23mg，0.08mmol)开始，以MeCN作为溶剂并以K2CO3作为碱，根据用于实施例1的过程，制备实施例56。将残余物通过反相色谱(0％至30％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到标题化合物，其呈黄色粉末状(18mg，38％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.59-8.40(m，5H)，8.35(d，J＝2.2Hz，1H)，8.30(d，J＝1.3Hz，1H)，7.98-7.91(m，1H)，7.75(d，J＝9.4Hz，1H)，7.57(d，J＝1.8Hz，1H)，6.31(d，J＝1.8Hz，1H)，4.47(br d，J＝4.6Hz，1H)，4.41-4.19(m，4H)，3.39-3.07(m，2H)，1.92-1.62(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 453(M+H)+，RT 1.55分钟。
实施例57：(S)-7-((5-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-腈(三氟乙酸盐)
从中间体54(22mg，0.07mmol)和中间体5(15mg，0.06mmol)开始，使用MeCN作为溶剂并使用K2CO3作为碱，根据用于实施例1的过程，制备实施例57。将残余物通过反相色谱(0％至40％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到标题化合物，其呈黄色粉末状(15mg，38％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.77(s，1H)，8.56-8.40(m，5H)，8.37(d，J＝1.2Hz，1H)，7.57(d，J＝1.8Hz，1H)，6.59(d，J＝7.3Hz，1H)，6.31(d，J＝1.8Hz，1H)，4.53-4.21(m，5H)，3.43-3.13(m，2H)，1.93-1.62(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 478(M+H)+，RT 2.18分钟。
实施例58：(S)-7-((5-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2(3H)-酮(三氟乙酸盐)
步骤1：(S)-(1-(吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)氨基甲酸叔丁酯
在无水MeCN(1mL)中的K2CO3(94mg，0.68mmol)和中间体5(36mg，0.14mmol)，2-氯吡嗪(0.02mL，0.28mmol)的混合物在110℃加热23小时。添加在无水MeCN(0.3ml)中的Boc2O(50mg，0.23mmol)的溶液。在15小时后，将所得混合物用EtOAc稀释并用H2O洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂。将残余物通过反相色谱纯化(从5％至50％MeCN/H2O+0.1％TFA)。收集含有产物的级分，添加NaHCO3粉末，并用EtOAc萃取产物，得到标题化合物，其呈白色固体(26mg，51％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 371(M+H)+，RT 1.50分钟。
步骤2：(S)-(1-(5-溴吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)氨基甲酸叔丁基酯
在0℃将NBS(12mg，0.07mmol)添加至来自先前步骤的材料(25mg，0.07mmol)的溶液中。在30分钟后，将混合物用EtOAc稀释并用H2O洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下去除溶剂，以得到棕色固体。将残余物通过反相色谱(10％至55％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到标题化合物，其呈黄色粉末状(20mg，65％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 449(M+H)+，RT 2.00分钟。
步骤3：(S)-3-((5-(4′-((叔丁氧羰基)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)丙酸甲酯
向压力管中装入在1,4二噁烷(0.4mL)中的DIPEA(0.02mL，0.12mmol)和Pd2(dba)3(5.2mg，0.01mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(3.3mg，0.01mmol)，3-巯基丙酸甲酯(0.01mL，0.08mmol)，来自先前步骤的材料(17mg，0.04mmol).将所得混合物用N2脱气1分钟，密封并在80℃加热30分钟。将反应混合物减压蒸发，得到棕色固体(25mg)，其无需进一步纯化即可用于后续步骤。LCMS(ES+)方法1：m/z 489(M+H)+，RT 1.94分钟。
步骤4：(S)-5-(4′-((叔丁氧基羰基)氨基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-硫醇钠
在0℃向在EtOH(0.5mL)中的来自先前步骤的材料(25mg，0.04mmol)的溶液中添加NaOEt(20重量％于EtOH中；0.03mL，0.08mmol)。使混合物升温至室温并减压除去挥发物，得到红色粘性固体。添加DCM，将混合物冷却至0℃并超声处理。有红色固体沉淀，将其过滤并减压干燥(18mg)。LCMS(ES+)方法1：m/z 403(M+H)+，RT 1.52分钟。
步骤5：(S)-(1-(5-((8-氯-2-氧代-2,3-二氢咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)氨基甲酸叔丁酯
将来自先前步骤的材料(18mg，0.03mmol)添加至在无水DMSO(0.5mL)中的中间体62(10.5mg，0.04mmol)的溶液中。将残余物通过反相色谱(0％至50％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到呈黄色粉末状的标题化合物(8mg，39％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.58(s，1H)，8.44-8.32(m，2H)，7.59-7.43(m，2H)，6.89(d，J＝6.9Hz，1H)，6.12(d，J＝1.7Hz，1H)，5.19(s，2H)，4.83(br d，J＝9.3Hz，1H)，4.22-4.00(m，4H)，3.69-3.43(m，2H)，1.80-1.65(m，4H)，1.39(s，9H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 569(M+H)+，RT 1.46分钟。
步骤6：(S)-7-((5-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2(3H)-酮
向在DCM(0.5mL)中来自先前步骤的材料(8mg，0.01mmol)的溶液中添加TFA(0.04mL，0.52mmol)并将所得混合物在室温搅拌30分钟。减压除去挥发物，将残余物通过反相色谱(0％至25％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到标题化合物，其呈黄色粉末状(4mg，21％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.68-8.31(m，6H)，7.58(d，J＝1.8Hz，1H)，6.87(d，J＝7.0Hz，1H)，6.32(d，J＝1.8Hz，1H)，5.19(s，2H)，4.55-4.22(m，5H)，3.52-3.19(m，2H)，1.95-1.65(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 469(M+H)+，RT 1.39分钟。
实施例59：(S)-1-(5-((3-氯-2-(1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从中间体57(30mg，0.09mmol)和中间体5(22mg，0.08mmol)开始，使用MeCN作为溶剂并使用K2CO3作为碱，根据用于实施例1的过程，制备实施例59。将残余物通过反相色谱(0％至25％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到标题化合物，其呈黄色粉末状(17mg，36％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ9.70(t，J＝1.3Hz，1H)，8.68-8.38(m，5H)，8.34(d，J＝5.3Hz，1H)，8.22(t，J＝1.7Hz，1H)，7.98-7.90(m，1H)，7.58(d，J＝1.8Hz，1H)，7.03(d，J＝5.3Hz，1H)，6.32(d，J＝1.8Hz，1H)，4.57-4.22(m，5H)，3.47-3.19(m，2H)，1.96-1.65(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 480(M+H)+，RT 1.57分钟。
实施例60：(S)-1-(6-氨基-5-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从中间体58(28mg，0.08mmol)和中间体5(20mg，0.07mmol)开始，使用NMP作为溶剂，根据用于实施例6的过程制备标题化合物。将残余物通过反相色谱(0％至40％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到标题化合物，其呈黄色粉末状(10mg，21％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.46(br s，3H)，8.25-8.19(m，2H)，7.83-7.75(m，2H)，7.57(d，J＝1.8Hz，1H)，6.68(d，J＝5.2Hz，1H)，6.57-6.51(m，1H)，6.31(d，J＝1.8Hz，1H)，4.55-4.18(m，5H)，3.39-3.06(m，2H)，1.95-1.59(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 495(M+H)+，RT 2.06分钟。
实施例61：(S)-1-(5-((3-氯-2-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从中间体59(24mg，0.07mmol)和中间体5(21mg，0.08mmol)开始，以MeCN作为溶剂并以K2CO3作为碱，根据用于实施例1的过程，制备实施例61。将粗品化合物通过制备型HPLC-MS(5％至40％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到标题化合物，其灰白色固体(20mg，46％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.62(br d，J＝1.1Hz，1H)，8.52-8.41(m，5H)，8.24(d，J＝5.2Hz，1H)，7.92(dd，J＝0.7，4.1Hz，1H)，7.59(d，J＝1.9Hz，1H)，6.85(d，J＝5.3Hz，1H)，6.32(d，J＝1.9Hz，1H)，4.62-4.19(m，5H)，3.49-3.33(m，1H)，3.32-3.15(m，1H)，1.98-1.60(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 498(M+H)+，RT 2.42分钟。
实施例62：(S)-1-(5-((3-氯-2-(1H-吡咯-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从中间体61(6mg，0.02mmol)和中间体5(6.1mg，0.02mmol)开始，根据用于实施例6的过程，制备实施例62。将粗品化合物通过制备型HPLC-MS(5％至60％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到标题化合物，其浅黄色固体(3mg，33％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.59(s，1H)，8.52-8.38(m，4H)，8.18(d，J＝5.3Hz，1H)，7.57(d，J＝1.8Hz，1H)，7.31(t，J＝2.2Hz，2H)，6.69(d，J＝5.3Hz，1H)，6.32(d，J＝1.8Hz，1H)，6.27(t，J＝2.2Hz，2H)，4.53-4.22(m，5H)，3.19-3.46(m，2H)，1.93-1.66(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 479(M+H)+，RT2.67分钟。
实施例63：(S)-1-(6-氨基-5-((3-氯-2-(1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从中间体60(18mg，0.05mmol)和中间体5(17.6mg，0.07mmol)开始，使用MeCN作为溶剂并使用K2CO3作为碱，根据用于实施例1的过程，制备实施例63。将粗品化合物通过制备型HPLC-MS(0％至30％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到标题化合物，其浅黄色固体(3mg，11％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ9.71(t，J＝1.4Hz，1H)，8.47(br s，3H)，8.34(d，J＝5.3Hz，1H)，8.19(t，J＝1.7Hz，1H)，7.95(t，J＝1.6Hz，1H)，7.78(s，1H)，7.57(d，J＝1.8Hz，1H)，6.88(d，J＝5.3Hz，1H)，6.32(d，J＝1.9Hz，1H)，4.54-4.20(m，5H)，3.38-3.09(m，2H)，1.90-1.65(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 495(M+H)+，RT 1.46分钟。
实施例64：(S)-1-(6-氨基-5-((8-氯-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从中间体27(8mg，0.02mmol)和中间体5(9mg，0.03mmol)开始，使用MeCN作为溶剂并使用K2CO3作为碱，根据用于实施例1的过程制备标题化合物。将残余物通过反相色谱(0％至30％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到呈黄色粉末状的标题化合物(4mg，24％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.59(d，J＝7.2Hz，1H)，8.46(br s，3H)，8.05(d，J＝1.0Hz，1H)，7.80-7.75(m，1H)，7.57(d，J＝1.8Hz，1H)，6.70(d，J＝7.2Hz，1H)，6.31(d，J＝1.9Hz，1H)，4.54-4.21(m，5H)，3.35-3.22(m，1H)，3.21-3.08(m，1H)，2.45(d，J＝0.8Hz，3H)，1.92-1.62(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 482(M+H)+，RT 1.47分钟。
实施例65：(S)-1-(4-((5-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-3-氯吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(三氟乙酸盐)
从中间体65(9mg，0.02mmol)和中间体5(8mg，0.03mmol)开始，使用在DMA中40％H2O的混合物作为溶剂并使用K2CO3作为碱，根据用于实施例1的过程，制备实施例65。将残余物通过反相色谱法(0％至45％MeCN/H2O+0.1％TFA)的手段直接纯化，得到标题化合物，其呈黄色粉末状(8.7mg，57％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.78-8.37(m，6H)，8.30-8.21(m，1H)，8.19-8.10(m，1H)，7.80(br s，1H)，7.57(d，J＝1.8Hz，1H)，7.24(br s，1H)，6.87(d，J＝5.3Hz，1H)，6.32(d，J＝1.8Hz，1H)，4.57-4.21(m，5H)，3.49(s，2H)，1.99-1.62(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 523(M+H)+，RT 1.86分钟。
实施例66：(S)-1-(4-((5-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-3-氯吡啶-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺(三氟乙酸盐)
从中间体63(10mg，0.03mmol)和中间体5(9mg，0.03mmol)开始，使用在DMA中40％H2O的混合物作为溶剂并使用K2CO3作为碱，根据用于实施例1的过程，制备实施例66。将残余物通过反相色谱(0％至30％MeCN/H2O+0.1％TFA)的手段直接纯化，得到标题化合物，其呈灰白色粉末状(13mg，75％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.65-8.60(m，1H)，8.56-8.40(m，4H)，8.24(d，J＝5.3Hz，1H)，7.85(t，J＝1.9Hz，1H)，7.60(d，J＝1.8Hz，1H)，7.54(br s，1H)，7.31(dd，J＝2.3，3.0Hz，1H)，6.94(br s，1H)，6.77(d，J＝5.3Hz，1H)，6.68(dd，J＝1.7，3.0Hz，1H)，6.33(d，J＝1.8Hz，1H)，4.56-4.23(m，5H)，3.38-3.19(m，2H)，1.94-1.65(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 522(M+H)+，RT 2.02分钟。
实施例67：(S)-1-(4-((5-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-3-氯吡啶-2-基)-N-甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺(三氟乙酸盐)
从中间体64(10mg，0.03mmol)和中间体5(9mg，0.03mmol)开始，使用在DMA中40％H2O的混合物代替作为溶剂并使用K2CO3作为碱，根据用于实施例1的过程，制备实施例67。将残余物通过反相色谱(0％至30％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到标题化合物，其呈灰白色粉末状(10mg，60％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.59(d，J＝0.9Hz，1H)，8.53-8.37(m，4H)，8.21(d，J＝5.3Hz，1H)，8.04(br s，1H)，7.82(t，J＝1.9Hz，1H)，7.57(d，J＝1.8Hz，1H)，7.30(dd，J＝2.3，3.0Hz，1H)，6.75(d，J＝5.3Hz，1H)，6.68(dd，J＝1.7，3.1Hz，1H)，6.32(d，J＝1.9Hz，1H)，4.54-4.23(m，4H)，3.48-3.32(m，1H)，3.32-3.16(m，1H)，2.74(s，3H)，1.96-1.64(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 536(M+H)+，RT 2.13分钟。
实施例68：(S)-7-((5-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-8-氯-N,N-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺(三氟乙酸盐)
从中间体67(22mg，0.06mmol)和中间体5(20mg，0.08mmol)开始，使用在DMA中40％H2O的混合物作为溶剂并使用K2CO3作为碱，根据用于实施例1的过程，制备标题化合物。将残余物通过反相色谱(0％至25％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到标题化合物，其呈灰白色粉末状(3.6mg，7％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.65-8.35(m，7H)，7.57(d，J＝1.8Hz，1H)，6.72(d，J＝7.2Hz，1H)，6.32(d，J＝1.7Hz，1H)，4.56-4.19(m，5H)，3.48-3.15(m，5H)，3.04(s，3H)，1.92-1.63(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 524(M+H)+，RT 1.88分钟。
实施例69：(S)-1-(4-((5-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-3-氯吡啶-2-基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(三氟乙酸盐)
从中间体66(7mg，0.02mmol)和中间体5(6mg，0.02mmol)开始，使用在DMA中40％H2O的混合物代替DMSO作为溶剂并使用K2CO3作为碱来代替DIPEA，根据用于实施例1的过程，制备实施例69。将残余物通过反相色谱(0％至30％MeCN/H2O 0.1％TFA)直接纯化，得到标题化合物，其呈灰白色粉末状(8.7mg，72％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.65-8.55(m，2H)，8.55-8.38(m，4H)，8.26(d，J＝5.3Hz，1H)，8.10-8.02(m，1H)，7.57(d，J＝1.8Hz，1H)，6.88(d，J＝5.3Hz，1H)，6.32(d，J＝1.8Hz，1H)，4.58-4.22(m，5H)，3.49-3.33(m，1H)，3.33-2.88(m，7H)，1.94-1.60(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 551(M+H)+，RT 2.04分钟。
实施例70(S)-1-(3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
根据合成实施例40所述的过程，在步骤2中使用中间体46，制备实施例70。去保护步骤在HCl(3M于MeOH中)中于室温进行，得到标题化合物，其呈黄色粉末状(7mg，66％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.38(br s，1H)，8.57(s，1H)，8.53(s，1H)，8.40(br s，3H)，7.70-7.63(m，2H)，7.60(br s，1H)，6.32(br s，1H)，4.52-4.36(m，4H)，4.30-4.27(m，1H)，4.24(s，3H)，3.29-3.23(m，2H)，1.95-1.78(m，3H)，1.73-1.67(m，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 475(M+H)+，RT 0.91分钟。
实施例71(S)-1-(3-(3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：(R)-N-((4′S)-1-(3-(3-氯-2-氟吡啶-4-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
使用(3-氯-2-氟吡啶-4-基)硼酸(28mg.0.16mmol)按照实施例40步骤2所述，制备上述化合物。获得呈黄色粉末状的标题化合物(15mg，30％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 628(M+H)+，RT 2.10分钟。
步骤2：(R)-N-((S)-1-(3-(3-氯-2-氟吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
向在DCM(0.5mL)中来自先前步骤的材料(15mg，0.02mmol)的溶液中添加TFA(0.1mL)并将所得混合物在室温搅拌15分钟。蒸发后，将残余物通过反相色谱法(5％至55％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化，得到标题化合物，其呈灰白色固体(7mg，53％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 544(M+H)+，RT 1.74分钟。
步骤3：(S)-1-(3-(3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺
K2CO3(7.2mg，0.05mmol)，(R)-N-((S)-1-(3-(3-氯-2-氟吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(7mg，0.01mmol)和1H-吡唑(2mg，0.03mmol)的混合物在MW辐射下于120℃加热5小时。将混合物冷却至0℃并添加HCl(4N于1,4-二噁烷中；0.05mL，0.20mmol)。将混合物升温至室温。将残余物通过反相色谱(0％至30％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到呈黄色粉末状的标题化合物(2mg，25％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.66-8.57(m，2H)，8.42(br s，3H)，8.25(d，J＝2.4Hz，1H)，8.02(d，J＝5.0Hz，1H)，7.79(d，J＝1.3Hz，1H)，7.56(d，J＝1.8Hz，1H)，6.57-6.51(m，1H)，6.30(d，J＝1.8Hz，1H)，4.56-4.24(m，5H)，3.51-3.22(m，2H)，2.01-1.63(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 488(M+H)+，RT 1.86分钟。
实施例72：(S)-1-(6-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡啶并[2,3-b]吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：(R)-N-((S)-1-(6-氯吡啶并[2,3-b]吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
使用合成实施例1中所述的条件，以1,4-二噁烷作为溶剂，在60℃使用中间体47(25mg，0.07mmol)和中间体2(50mg，0.10mmol)，持续18小时，制备实施例72。获得呈黄色粉末状的标题化合物(30mg，96％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 460(M+H)+，RT 1.50分钟。
步骤2：(R)-N-((S)-1-(6-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡啶并[2,3-b]吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
用中间体44(59mg，0.28mmol)和DIPEA(0.03mL，0.17mmol)处理在1,4-二噁烷(1.0mL)和DMSO(0.2mL)的混合物中的来自先前步骤的材料(30mg，0.07mmol)的溶液并在100℃搅拌18小时。冷却后，将反应混合物减压浓缩得到残余物，将其通过反相色谱纯化(0-100％MeCN于H2O中+0.1％TFA)，得到标题化合物，其呈黄色粉末状(21mg，49％)。
LCMS(ES+)方法1：m/z 635(M+H)+，RT 1.73分钟。
步骤3：(S)-1-(6-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡啶并[2,3-b]吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)(实施例72)
将在HCl(1.25M于MeOH中；0.5mL)中的来自先前步骤的材料(21mg，0.03mmol)的溶液在室温搅拌1小时，然后减压浓缩。通过制备型HPLC(13-100％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化残余物，得到标题化合物，其呈黄色粉末状(6mg，13％)1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.13(s，1H)，8.41(br s，3H)，8.37(br d，J＝5.3Hz，1H)，8.29(br d，J＝2.2Hz，1H)，8.12(d，J＝8.6Hz，1H)，7.87(d，J＝8.6Hz，1H)，7.84(s，1H)，7.60(s，1H)，7.38(d，J＝5.0Hz，1H)，6.58(br s，1H)，6.32(br s，1H)，4.63(br d，J＝13.8Hz，1H)，4.56-4.48(m，2H)，4.42(br d，J＝11.2Hz，1H)，4.30(br d，J＝11.2Hz，1H)，3.51-3.45(m，2H)，1.91-1.82(m，3H)，1.76-1.73(m，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 531(M+H)+，RT 1.06分钟。
实施例73(S)-1-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡啶并[2,3-b]吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
根据合成实施例72所述过程，在步骤2中使用2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇钠(根据中间体14的合成中报道的过程制备)，制备实施例73。获得呈黄色粉末状的标题化合物(3.5mg，8％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.08(s，1H)，8.40(br s，3H)，8.04(br d，J＝8.6Hz，1H)，7.82(br d，J＝5.3Hz，1H)，7.65(d，J＝8.6Hz，1H)，7.60(d，J＝1.5Hz，1H)，6.66(br s，2H)，6.47(d，J＝5.5Hz，1H)，6.32(d，J＝1.5Hz，1H)，4.62-4.48(m，3H)，4.41(br d，J＝11.4Hz，1H)，4.29(br d，J＝11.4Hz，1H)，3.48-3.30(m，2H)，1.91-1.72(m，4H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 480(M+H)+，RT 0.81分钟。
实施例74(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-1-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：(6-溴-3-氯吡嗪-2-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸叔丁酯
将在DCM(50mL)中的Boc2O(5.95mL，25.91mmol)和6-溴-3-氯吡嗪-2-胺(1.08g，5.18mmol)的溶液用DMAP(126.6mg，1.04mmol)，TEA(2.17mL，15.54mmol)处理并在室温搅拌4小时，然后用DCM稀释并用H2O，盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱5-50％EtOAc于石油醚溶中)。获得呈白色粉末状的标题化合物(1.93g，91％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.38(s，1H)，1.36(s，18H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 544(M+H)+，RT 2.37分钟。
步骤2：(叔丁氧基羰基)(3-氯-6-((3-氯-2-((4-甲氧基苄基)氨基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)氨基甲酸叔丁酯
根据合成中间体11所述的条件，步骤2，使用来自先前步骤的材料(500mg，1.22mmol)和中间体21(429mg，1.22mmol)在100℃持续1小时来制备标题化合物。获得呈白色粉末状的化合物(580mg，78％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.23(s，1H)，7.88(d，J＝5.3Hz，1H)，7.22(d，J＝8.6Hz，2H)，6.82(d，J＝7.8Hz，2H)，6.39(d，J＝5.3Hz，1H)，5.27-5.23(m，1H)，4.54(d，J＝5.5Hz，2H)，3.74(s，3H)，1.34(s，18H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 608-610(M+H)+，RT 2.68分钟。
步骤3：3-氯-6-((3-氯-2-((4-甲氧基苄基)氨基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-胺
将在DCM(8.7mL)中来自先前步骤的材料(580mg，0.95mmol)的溶液在0℃用TFA(0.87mL)处理并在室温搅拌2h，然后与甲苯和Et2O共蒸发。获得呈黄色固体的标题化合物(540mg，85％纯度，92％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.79(d，J＝5.5Hz，1H)，7.70(s，1H)，7.32(br s，2H)，7.23(d，J＝8.6Hz，2H)，6.85(d，J＝8.6Hz，2H)，6.32(d，J＝5.5Hz，1H)，4.52(br s，2H)，3.71(s，3H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 408(M+H)+，RT 2.12分钟。
步骤4：5-((3-氯-2-((4-甲氧基苄基)氨基)吡啶-4-基)硫代)-N2-甲基吡嗪-2,3-二胺
根据合成实施例1中所述的条件，使用3-氯-6-((3-氯-2-((4-甲氧基苄基)氨基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-胺(100mg，0.25mmol)和甲胺盐酸盐(49.6mg，0.75mmol)在100℃持续18小时，制备标题化合物。获得呈黄色粉末状的化合物(56mg，57％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.68(d，J＝5.3Hz，1H)，7.56(s，1H)，7.21(d，J＝8.6Hz，2H)，7.01(br t，J＝6.1Hz，1H)，6.84(d，J＝8.6Hz，2H)，6.78-6.75(m，1H)，6.39(br s，2H)，5.90(d，J＝5.5Hz，1H)，4.50-4.49(m，2H)，3.70(s，3H)，2.88(d，J＝5.5Hz，3H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 403(M+H)+，RT 1.51分钟。
步骤5：5-((3-氯-2-((4-甲氧基苄基)氨基)吡啶-4-基)硫代)-1-甲基-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-酮
根据合成中间体11所述的条件，步骤1，使用5-((3-氯-2-((4-甲氧基苄基)氨基)吡啶-4-基)硫代)-N2-甲基吡嗪-2,3-二胺(50mg，0.12mmol)，在80℃持续3小时，制备标题化合物。获得呈灰白色粉末状的化合物(35mg，66％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.24(s，1H)，8.22(s，1H)，7.69(d，J＝5.5Hz，1H)，7.22(d，J＝8.6Hz，2H)，7.14(br t，J＝6.1Hz，1H)，6.84(d，J＝8.6Hz，2H)，5.95(d，J＝5.3Hz，1H)，4.51(d，J＝6.1Hz，2H)，3.71(s，3H)，3.32(s，3H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 429(M+H)+，RT 1.77分钟。
步骤6：3-氯-4-((2-氯-1-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5-基)硫代)吡啶-2-胺
使用合成中间体11所述的条件，步骤3，使用5-((3-氯-2-((4-甲氧基苄基)氨基)吡啶-4-基)硫代)-1-甲基-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-酮(35mg，0.08mmol)在105℃反应24小时，制备标题化合物。获得呈浅黄色粉末状的化合物(10.2mg，38％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 327(M+H)+，RT 1.10分钟。
步骤7：(R)-N-((S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-1-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
使用合成实施例1中所述的条件，使用3-氯-4-((2-氯-1-甲基-1H-咪唑并[4，5-b]吡嗪-5-基)硫代)吡啶-2-胺(45mg，0.14mmol)和(R)-2-甲基-N-((S)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]]吡唑]-4′-基)丙烷-2-亚磺酰胺三氟乙酸盐(中间体2；72.1mg，0.14mmol)在100℃持续4小时制备标题化合物。获得呈棕色粉末状的化合物(5.4mg，7％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 587(M+H)+，RT 1.11分钟。
步骤8：(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-1-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)(实施例74)
将在HCl(1M于MeOH中；0.5mL)中的来自先前步骤的材料(5.4mg，0.01mmol)的溶液在室温搅拌2小时，然后减压浓缩。通过制备型HPLC(MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化残余物，得到标题化合物，其呈乳脂粉末状(1.9mg，94％纯度，29％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.50(brs，3H)，8.31(s，1H)，7.69-7.65(m，1H)，7.62(d，J＝1.8Hz，1H)，6.45(br s，2H)，6.36-6.34(m，1H)，5.91-5.89(m，1H)，4.55(br s，1H)，4.45-4.30(br m，2H)，4.16(br s，1H)，4.06(brs，1H)，3.75(s，3H)，3.58(br s，1H)，3.41(br s，1H)，2.12-2.10(br m，1H)，1.98-1.97(brm，1H)，1.92-1.90(br m，1H)，1.75(br d，J＝13.4Hz，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 483(M+H)+，RT 0.69分钟。
实施例75(S)-1-(8-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：5-溴-8-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪
将在1,4-二噁烷(3mL)中的中间体44(118mg，0.50mmol)和5-溴-8-氯咪唑并[1,5-a]吡嗪(120mg，0.52mmol)的溶液在室温搅拌20小时。通过过滤回收沉淀并用1,4-二噁烷洗涤，减压干燥以得到标题化合物，其呈淡米色粉末(200g，95％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.82(s，1H)，8.44(d，J＝5.0Hz，1H)，8.31(d，J＝2.2Hz，1H)，8.11(s，1H)，7.87-7.84(m，2H)，7.72(d，J＝4.8Hz，1H)，6.58(br s，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 407/409(M+H)+，RT 1.60分钟。
步骤2：(S)-1-(8-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-5-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)(实施例75)
将在DMF(1.2mL)中的Cs2CO3(240mg，0.74mmol)和1-(2-羟基-1-萘基)萘-2-醇(1.8mg，0.01mmol)，CuBr(0.44mg，0.003mmol)，中间体2(171mg，0.25mmol)，来自上一步骤的材料(50mg，0.12mmol)的溶液在100℃加热2小时。冷却后，将反应混合物用EtOAc稀释并用H2O，盐水洗涤，经Na2SO4干燥并减压浓缩，得到残余物，将其用HCl(1M于MeOH中；1mL)处理并在室温搅拌18小时。将反应混合物减压浓缩并通过制备型HPLC(MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化残余物以获得标题化合物，其呈黄色粉末状(7.0mg，9％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.50(br s，3H)，8.45(s，1H)，8.28(br s，1H)，8.21(br d，J＝5.3Hz，1H)，8.17(s，1H)，7.85(brs，1H)，7.70(s，1H)，7.61(br d，J＝1.5Hz，1H)，6.70(br d，J＝5.3Hz，1H)，6.59(br s，1H)，6.34(br d，J＝1.5Hz，1H)，4.70-4.59(m，2H)，4.52(br d，J＝4.4Hz，1H)，4.46(br d，J＝11.4Hz，1H)，4.32(br d，J＝11.2Hz，1H)，3.77-3.62(m，1H)，3.51-3.45(m，1H)，2.02-1.86(m，3H)，1.77-1.74(m，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z519(M+H)+，RT 1.1分钟。
实施例76(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮(三氟乙酸盐)
步骤1：(R)-N-((S)-1-(5-溴-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶]-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将在DMA(0.5mL)中的DIPEA(117uL，0.67mmol)和中间体2(76mg，0.12mmol)，中间体45(25mg，0.11mmol)的溶液在120℃搅拌1小时。在冷却后，将混合物用H2O稀释并用EtOAc(3x)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并减压蒸发以得到粗品，将其通过快速色谱法纯化(洗脱0-20％MeOH于EtOAc中)，得到标题化合物，其呈白色粉末状(15mg，28％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 483-485(M+H)+，RT 1.30分钟。
步骤2：(R)-N-((S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将在DMF(0.2mL)中的K3PO4(19.76mg,0.09mmol)和N,N,N′,N′-四甲基乙烷-1,2-二胺(1.9uL，0.01mmol)，CuI(1.18mg，0.01mmol)，2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇钠(根据用于合成中间体14的过程制备；8.5mg，0.05mmol)，来自先前步骤的材料的溶液(15.0mg，0.03mmol)的溶液在150℃于MW辐照6小时。冷却后，将混合物用EtOAc稀释，通过纤维素垫过滤并用MeOH洗涤。减压去除溶剂后，得到标题化合物，其呈棕色粉末状(17mg，97％)，并且无需进一步纯化即可使用。LCMS(ES+)方法1：m/z 563(M+H)+，RT 1.13分钟。
步骤3：(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮(三氟乙酸盐)(实施例76)
将在HCl(1.25M于MeOH中；0.1mL，0.13mmol)中的来自先前步骤的材料(17mg，0.03mmol)的溶液在室温搅拌2小时。减压去除溶剂，将残余物通过制备型HPLC纯化(3％-27％MeCN/H2O+0.1％TFA)，得到标题化合物，其呈白色粉末状(1.6mg，92％纯度，11％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.44(br s，3H)，8.17(s，1H)，7.67(br d，J＝5.5Hz，1H)，7.60(brd，J＝2.0Hz，1H)，6.58(br s，2H)，6.32(br d，J＝1.8Hz，1H)，6.09(br d，J＝5.5Hz，1H)，4.51(br s，1H)，4.37(br d，J＝11.4Hz，1H)，4.22(br d，J＝11.2Hz，1H)，3.82(br d，J＝14.0Hz，1H)，3.71(br d，J＝13.4Hz，1H)，3.42(s，3H)，3.34-3.27(m，1H)，3.18-3.12(m，1H)，2.04-1.97(m，1H)，1.89-1.82(m，2H)，1.70-1.67(m，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 459(M+H)+，RT 0.68分钟。
实施例77：(S)-6-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-2-甲基嘧啶-4(3H)-酮(三氟乙酸盐)
在DMA/H2O 6/4(0.5mL)混合物中的K2CO3(71.6mg，0.52mmol)和中间体5(将34.62mg，0.13mmol)，6-氯-3-(2,3-二氯苯基)-2-甲基嘧啶-4(3H)-酮的悬浮液(按照合成中间体68a和68b报道的制备；30mg，0.10mmol)在95℃加热2小时。
将残余物通过反相色谱(0％至30％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化，得到标题化合物，其呈白色固体(12mg，21％)。1H NMR(300MHz DMSO-d6)δ8.47(br s，3H)，7.81(dd，J＝7.5，2.1Hz，1H)，7.64-7.48(m，3H)，6.32(d，J＝1.8Hz，1H)，5.51(s，1H)，4.55-4.15(m，5H)，3.34-2.97(m，2H)，2.02(s，3H)，1.90-1.56(m，4H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 445(M+H)+，RT2.12分钟。
实施例77a和77b：(S)-6-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-2-甲基嘧啶-4(3H)-酮
根据合成实施例35所报道的过程，分别将中间体68a用于实施例77a和将中间体68b用于实施例77b，制备上述实施例。步骤1在DMF中进行。两种阻转异构体通过手性SFC在Berger SFCTMMiniGram-Mettler Toledo AG上使用OD-H柱进行分离(流速：10ml/分钟，Tcol 40℃，Pcol：120巴，调节剂：15％MeOH(+0.1％TEA)2分钟，15-55％8分钟，55％5分钟，，55-15％1分钟，15％2分钟；使用CO2作为超临界洗脱液)；第一次洗脱时获得中间体77b(室温11.65分钟)，第二次洗脱时获得实施例77a(室温12.35分钟)。
实施例78：(S)-6-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-5-氯-3-(2,3-二氯苯基)-2-甲基嘧啶-4(3H)-酮(三氟乙酸盐)
向在DCM(1.0mL)中的实施例77(42mg，0.08mmol)的溶液添加(11mg，0.08mmol)，将所得混合物在室温搅拌20分钟。减压去除溶剂，将所得粗品通过反相色谱(0％至35％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化，得到标题化合物，其呈白色粉末状(35mg，78％)。1H NMR(300MHz DMSO-d6+TFA)δ8.47(br s，3H)，7.84(dd，J＝2.1，7.6Hz，1H)，7.66-7.53(m，3H)，6.32(d，J＝1.8Hz，1H)，4.59-4.46(m，1H)，4.45-4.12(m，4H)，3.50-3.31(m，1H)，3.29-3.11(m，1H)，2.03(s，3H)，2.00-1.92(m，1H)，1.91-1.76(m，2H)，1.7-1.62(m，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z479(M+H)+，RT 2.27分钟。
实施例78a和78b：(S)-6-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-5-氯-3-(2,3-二氯苯基)-2-甲基嘧啶-4(3H)-酮
实施例78的阻转异构体的混合物通过手性SFC在Berger SFCTMMiniGram-MettlerToledo AG上使用IA(1x25cm)柱进行分离(流速：10ml/分钟，Tcol 40℃，Pcol：120巴，调节剂：30％MeOH(+0.1％TEA)3分钟，30-35％6分钟，35-40％11分钟，，40-30％2分钟，30％2分钟；使用CO2作为超临界洗脱液)；第一次洗脱时获得实施例78b(室温13.04分钟)，第二次洗脱时获得实施例78a(室温16.79分钟)。
实施例79(S)-1-(5-((8-氟喹啉-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
在DMA(0.3mL)中的K2CO3(18.95mg，0.14mmol)和中间体2(7mg，0.03mmol)，4-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-8-氟喹啉溶液(从2-氯-5-碘吡嗪和8-氟喹啉-4-硫醇钠，根据合成中间体33的报道的过程制备；8mg，0.03mmol)的溶液于120℃加热4小时，然后冷却并减压蒸发得到残余物(15mg，0.027mmol)，将其溶解在MeOH(0.5mL)中并用HCl(1.25M于MeOH中；0.3mL)处理并在室温搅拌3小时。减压去除溶剂，将残余物通过制备型HPLC(MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化，以获得标题化合物，其呈黄色粉末状(4mg，33％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.69(br d，J＝4.0Hz，1H)，8.60(br s，1H)，8.44(br s，4H)，8.01(d，J＝6.6Hz，1H)，7.69(br d，J＝7.2Hz，2H)，7.60(s，1H)，7.00(br s，1H)，6.33(s，1H)，4.50-4.26(m，5H)，3.41-3.35(m，1H)，3.27-3.21(m，1H)，1.91-1.78(m，3H)，1.72-1.68(m，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z448(M+H)+，RT 1.07分钟。
实施例80(S)-1-(5-((3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从在DMA/H2O＝1/1中的2-氯-5-((3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪(根据合成中间体33报道的程序，从3-氯-4-碘吡啶来制备)，根据用于合成实施例79所述的过程，步骤1，于90℃制备实施例80，其呈黄色粉末状(8.4mg，39％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.52(br s，1H)，8.48(br s，1H)，8.37(br s，3H)，8.32(br s，1H)，8.21(br d，J＝5.3Hz，1H)，7.52(br s，1H)，6.67(d，J＝5.0Hz，1H)，6.24(s，1H)，4.42-4.18(m，5H)，3.33-3.27(m，1H)，3.19-3.13(m，1H)，1.79-1.70(m，3H)，1.63-1.60(m，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 414(M+H)+，RT 1.01分钟。
实施例81(S)-1-(5-((3-氟-2-甲基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从在DMA/H2O＝1/1中的2-氯-5-((3-氟-2-甲基吡啶-4-基)硫代)吡嗪(根据合成中间体33报道的程序，从4-溴-3-氟-2-甲基吡啶来制备)，根据用于合成实施例79所述的过程，步骤1，于90℃制备实施例81，其呈黄色粉末状(1.2mg，8％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.55(br s，1H)，8.41(br s，3H)，8.37(br s，1H)，8.10(br s，1H)，7.60(br s，1H)，6.74(brs，1H)，6.31(br s，1H)，4.49-4.25(m，5H)，3.27-3.18(m，1H)，3.04-2.90(m，1H)，2.44(s，3H)，1.88-1.76(m，3H)，1.70-1.66(m，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 412(M+H)+，RT 0.94分钟。
实施例82：(S)-1-(5-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-胺
步骤1：1-甲苯磺酰基-1H-吡咯-2-甲醛
将NaH(60％于矿物油中；547mg，13.7mmol)于0℃添加至在无水DMF(20mL)中的1H-吡咯-2-甲醛(1.0g，10.52mmol)的溶液中。10分钟后，添加TsCl(3.0g，15.77mmol)，并将混合物升温至室温。16小时后，将混合物用EtOAc稀释并用5％柠檬酸溶液，H2O和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂以得到浅棕色固体，其不经进一步纯化即用于后续步骤(2.5g，96％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.88(s，1H)，7.97-7.87(m，3H)，7.48(d，J＝8.2Hz，2H)，7.29(dd，J＝1.7，3.8Hz，1H)，6.57(t，J＝3.4Hz，1H)，2.40(s，3H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 250(M+H)+，RT 1.81分钟。
步骤2：4-(羟基(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯-2-基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸1-(叔丁基)4-甲酯
从1-甲苯磺酰基-1H-吡咯-2-甲醛(2.5g，10mmol)和1-叔丁氧基羰基哌啶-4-羧酸乙酯(2.25g，8.74mmol)开始，根据中间体1所述的过程，步骤2，制备上述化合物。粗品化合物(5g)在后续步骤中使用而无需任何纯化。LCMS(ES+)方法1：m/z 507(M+H)+，RT 2.30分钟。
步骤3：4-(羟基(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯-2-基)甲基)-4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
从4-(羟基(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯-2-基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸1-(叔丁基)4-甲酯(5g)开始，根据中间体1所述的过程，步骤3，制备上述化合物。粗品化合物(3.9g)在后续步骤中使用而无需任何纯化。LCMS(ES+)方法1：m/z 465(M+H)+，RT 1.99分钟。
步骤4：4-(羟基(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯-2-基)甲基)-4-(((甲磺酰基)氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
从4-(羟基(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯-2-基)甲基)-4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.9g)开始，根据中间体1所述的过程，步骤4，制备上述化合物。将残余物通过硅胶快速色谱纯化(0％至70％EtOAc于环己烷中)，得到标题化合物，其呈红色海绵状固体(1.56g，34％经过3步骤)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ7.72(d，J＝8.3Hz，2H)，7.40(d，J＝8.2Hz，2H)，7.29(dd，J＝1.6，3.3Hz，1H)，6.37-6.28(m，2H)，5.31(s，1H)，4.52-4.41(m，1H)，4.38-4.29(m，1H)，3.75-3.48(m，2H)，3.21(s，3H)，2.89(br s，2H)，2.37(s，3H)，1.74-1.47(m，2H)，1.39-1.35(m，3H)，1.33(s，9H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 543(M+H)+，RT 2.07分钟。
步骤5：4-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)-4-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯-2-羰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
从4-(羟基(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯-2-基)甲基)-4-(((甲磺酰基)氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(250mg，0.46mmol)开始，根据中间体1所述的过程，步骤6，制备上述化合物。将残余物通过硅胶快速色谱纯化(0％至70％EtOAc于石油醚中)以得到标题化合物，其呈棕色固体(173mg，69％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.99-7.86(m，3H)，7.49(d，J＝8.3Hz，2H)，7.35-7.27(m，1H)，6.49(t，J＝3.5Hz，1H)，4.47(s，2H)，3.63(br d，J＝13.8Hz，2H)，3.13(s，3H)，3.03 -2.79(m，2H)，2.41(s，3H)，2.22-2.09(m，2H)，1.59(br t，J＝10.0Hz，2H)，1.40(s，9H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 541(M+H)+，RT 2.16分钟。
步骤6：1′-氧代-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1-羧酸叔丁酯
将4-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)-4-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯-2-羰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(173mg,0.32mmol)于60℃添加至在MeOH(4mL)中的4-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)-4-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯-2-羰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(173mg，0.32mmol)的搅拌溶液。1小时后，将混合物冷却至室温，用EtOAc和H2O稀释。将有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂以得到浅棕色固体(89mg，95％)，其不经纯化即用于后续步骤。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.33(d，J＝1.2Hz，1H)，6.65(dd，J＝1.0，3.9Hz，1H)，6.53(dd，J＝2.2，3.9Hz，1H)，4.29(s，2H)，3.95(br d，J＝13.7Hz，2H)，3.03-2.78(br s，2H)，1.70-1.50(m，4H)，1.41(s，9H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 291(M+H)+，RT 1.71分钟。
步骤7：1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-酮盐酸盐
将HCl(4N于1,4二噁烷；；0.8mL，3.2mmol)在室温下添加至在DCM(1.5mL)中的1′-氧代-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1-羧酸叔丁酯(89mg，0.31mmol)的溶液。3小时后，将混合物减压蒸发，得到深紫色固体(75mg)，其无需纯化即可用于后续步骤。LCMS(ES+)方法1：m/z 191(M+H)+，RT 0.62分钟。
步骤8：1-(5-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-酮
从1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-酮盐酸盐(68mg，0.3mmol)和中间体33(92mg，0.28mmol)开始，使用在DMA中40％H2O的混合物作为溶剂并使用K2CO3作为碱，根据用于实施例1的过程，制备上述化合物。将残余物通过硅胶快速色谱纯化(10％至100％EtOAc于石油醚中)，得到标题化合物，其呈黄色固体(93mg，68％经过3步骤)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.61(s，1H)，8.43(s，1H)，8.32-8.22(m，2H)，7.87-7.80(m，1H)，7.44-7.37(m，1H)，6.86(d，J＝5.3Hz，1H)，6.69(dd，J＝0.9，3.9Hz，1H)，6.63-6.54(m，2H)，4.55-4.42(m，4H)，3.35-3.17(m，2H)，1.89-1.70(m，4H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 478(M+H)+，RT 1.94分钟。
步骤9：(R,Z)-N-(1-(5-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
从在DME(1.5mL)中的(R)-(-)-叔丁基亚磺酰胺(70mg，0.58mmol)和1-(5-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-酮(93mg，0.19mmol)的溶液开始，根据中间体1所述的过程，步骤7，制备上述化合物。将残余物通过硅胶快速色谱法纯化(10％至100％EtOAc于石油醚中)以得到标题化合物，其呈黄色固体(60mg，53％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.62(s，1H)，8.43(s，1H)，8.29-8.22(m，2H)，7.84-7.81(m，1H)，7.34(s，1H)，6.89(d，J＝3.9Hz，1H)，6.83(d，J＝5.3Hz，1H)，6.55(ddd，J＝2.3，4.1，6.4Hz，2H)，4.55(br d，J＝13.4Hz，2H)，4.40(s，2H)，3.22(br t，J＝12.5Hz，2H)，2.04-1.80(m，4H)，1.16(s，9H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 581(M+H)+，RT 2.08分钟。
步骤10：(R)-N-((S)-1-(5-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将NaBH4(20mg，0.52mmol)在0℃添加至在无水THF(1mL)中来自先前步骤的材料(60mg，0.10mmol)的溶液中。5分钟后，将混合物升温至室温。4小时后，添加NaBH4(30mg，0.79mmol)，再过20小时后，在0℃用EtOAc和H2O稀释混合物。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发溶剂以得到浅黄色固体(59mg)，其不经纯化即用于后续步骤(UPLC-MS观测到的非对映体比率为98.5/1.5)。LCMS(ES+)方法1：m/z 583(M+H)+，RT 2.04分钟。
步骤11：(S)-1-(5-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-胺(实施例82)
将HCl(4N于1,4二噁烷中；0.70mL，2.8mmol)在室温添加至在MeCN/H2O＝1/1(4mL)混合物中的来自先前步骤的材料(55mg，0.1mmol)溶液中。10分钟后，添加HCl(4N于1,4二噁烷中；0.7mL，2.8mmol)，用H2O和EtOAc稀释，然后在0℃用10N KOH碱化至pH＝10。用EtOAc萃取水性相，合并有机层，经Na2SO4干燥，过滤，减压去除溶剂，得到米色固体。将残余物通过硅胶快速色谱法纯化(0％至10％MeOH于EtOAc中)，得到标题化合物，其呈黄色固体(10mg，19％，经过2步骤)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.60(s，1H)，8.42(s，1H)，8.38-8.12(m，5H)，7.83-7.80(m，1H)，6.85-6.79(m，2H)，6.55(t，J＝2.1Hz，1H)，6.18(t，J＝3.0Hz，1H)，6.10(d，J＝3.2Hz，1H)，4.44-4.17(m，4H)，4.16-3.98(m，1H)，3.43(br t，J＝10.8Hz，1H)，3.27(br t，J＝10.5Hz，1H)，1.93-1.54(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z 479(M+H)+，RT 2.45分钟。
实施例83：(S)-1-(5-((2,3-二氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
从在DMA中的2-氯-5-((2,3-二氯苯基)硫代)吡嗪(根据合成中间体33报道的程序，从1,2-二氯-3-碘苯来制备))，根据用于合成实施例79所述的过程，步骤1，于90℃制备实施例83，其呈灰白色粉末状(5.3mg，41％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.52(s，1H)，8.49(br s，3H)，8.33(s，1H)，7.59(br s，1H)，7.50(br d，J＝7.9Hz，1H)，7.27(t，J＝8.0Hz，1H)，6.89(br d，J＝7.9Hz，1H)，6.31(s，1H)，4.52-4.25(m，5H)，3.37-3.31(m，1H)，3.23-3.18(m，1H)，1.89-1.76(m，3H)，1.69-1.66(m，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 447(M+H)+，RT1.44分钟。
实施例84：(S)-1-(6-((2,3-二氯苯基)硫代)吡啶-3-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：(S)-N-((S)-1-(6-氯吡啶-3-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
在无水甲苯(0.52mL)中的NaOtBu(将10mg，0.10mmol)和5-溴-2-氯吡啶(10mg，0.050mmol)，Ruphos Pd G4(2.2mg，0.003mmol)，Ruphos(2.4mg，0.01mmol)，中间体2(17mg，0.06mmol)的悬浮液在N2气氛下脱气5分钟并在80℃加热12小时。冷却后，将混合物在纤维素垫上过滤，将固体用EtOAc洗涤，并减压除去溶剂，得到残余物，将其通过快速色谱纯化(梯度洗脱0-100％EtOAc于石油醚中至0-40％MeOH于EtOAc中)。获得呈黄色粉末状的标题化合物(10mg，47％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 408-410(M+H)+，RT 1.42分钟。
步骤2：(S)-N-((S)-1-(6-((2,3-二氯苯基)硫代)吡啶-3-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
用2,3-二氯苯硫醇(5.3mg，0.03mmol)和DIPEA(0.03mL，0.15mmol)处理溶解在1,4-二噁烷(0.3mL，0.004mol)中来自先前步骤的材料(10mg，0.02mmol)的溶液并在130℃搅拌12小时。冷却后，蒸发混合物，并将标题化合物(10mg)原样用于后续步骤。LCMS(ES+)方法1：m/z 550/552(M+H)+，RT 2.03分钟。
步骤3：(S)-1-(6-((2,3-二氯苯基)硫代)吡啶-3-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)(实施例84)
在MeOH(0.5mL)中来自先前步骤的材料(10mg，0.02mmol)的溶液用HCl(1.25M于MeOH中；0.25mL)在室温处理2小时。减压蒸发溶剂并通过HPLC(20％至50％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化残余物以获得标题化合物，其呈白色粉末状(0.5mg，4％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.39(br s，4H)，7.53-7.61(m，2H)，7.42(br s，1H)，7.35-7.39(m，1H)，7.30(t，J＝8.2Hz，1H)，7.06(br d，J＝8.1Hz，1H)，6.31(s，1H)，4.48(br s，1H)，4.34(br d，J＝11.2Hz，1H)，4.20(br d，J＝11.6Hz，1H)，3.87(br s，1H)，3.78(br d，J＝12.3Hz，1H)，3.13(br s，1H)，2.86-3.07(m，1H)，1.91(br s，1H)，1.82(br s，2H)，1.66(br s，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 446(M+H)+，RT 1.38分钟。
实施例85：(S)-1-(3-(2,3-二氯苯基)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：(R)-N-((S)-1-(3-溴咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将在无水DMF(1.2mL)中的无水DIPEA(90μL，0.52mmol)和中间体2(66mg，0.129mmol)，3-溴-8-氯咪唑并[1,5-a]吡嗪(30mg，0.129mmol)的溶液在110℃搅拌3小时。将混合物用EtOAc稀释并用H2O(x2)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压去除溶剂以得到棕色固体，其不经纯化即用于后续步骤(30mg)。LCMS(ES+)方法1：m/z 492-494(M+H)+，RT0.97分钟。
步骤2：(R)-N-((S)-1-(3-(2,3-二氯苯基)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
在脱气的1,4-二噁烷/H2O＝6/4(0.33mL)中的K3PO4(32.0mg，0.15mmol)和Pd(dppf)2Cl2·DCM(8.9mg，0.01mmol)，(2,3-二氯苯基)硼酸(15mg，0.079mmol)，来自先前步骤的材料(30mg，0.061mmol)的混合物在100℃加热45分钟。将所得混合物在纤维素垫上过滤，用MeOH洗涤，然后减压去除有机溶剂，得到棕色固体(34mg)，其无需进一步纯化即可用于后续步骤。LCMS(ES+)方法1：m/z 558，560(M+H)+，RT 1.30分钟。
步骤3：(S)-1-(3-(2,3-二氯苯基)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(实施例85)
将在MeOH(0.5mL)中来自先前步骤的材料(34mg，0.06mmol)的溶液用HCl(3M于MeOH中；0.3mL)在室温处理2小时。减压蒸发溶剂，将残余物通过制备型HPLC纯化，以获得标题化合物，其呈黄色粉末状(0.8mg，3％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.4(br s，3H)，8.08(s，1H)，7.92-7.89(m，1H)，7.60-7.58(m，3H)，7.25(d，J＝4.8Hz，1H)，7.18(d，J＝4.8Hz，1H)，6.33(br s，1H)，4.52-4.46(m，4H)，4.26(d，J＝1.4Hz，1H)，3.34-3.27(m，1H)，3.19-3.12(m，1H)，1.78-1.70(m，3H)，1.72-1.65(m，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 454(M+H)+，RT 0.9分钟。
实施例86：(S)-6-(1′-氨基-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-2-甲基嘧啶-4(3H)-酮
步骤1：1-(1-(2,3-二氯苯基)-2-甲基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-基)-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-酮
将BOP(120mg，0.27mmol)和DBU(0.08mL，0.56mmol)添加至在无水MeCN(1mL)中的3-(2,3-二氯苯基)-6-羟基-2-甲基嘧啶-4(3H)-酮(根据中间体68a和68b，步骤2中所述的过程制备；60mg，0.22mmol)和1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-酮盐酸盐(根据实施例82步骤7所述的过程制备；54mg，0.24mmol)的悬浮液。将混合物在室温下搅拌17小时，然后用EtOAc稀释，用HCl 2N，H2O，盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压除去溶剂。将残余物通过硅胶快速色谱纯化(10％至100％EtOAc于石油醚中)以得到标题化合物，其呈黄色固体(61mg，62％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 443(M+H)+，RT 1.83分钟。
步骤2：(R,Z)-N-(1-(1-(2,3-二氯苯基)-2-甲基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-基)-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
从1-(1-(2,3-二氯苯基)-2-甲基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-基)-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-酮(61mg,0.14mmol)和(R)-(-)-叔丁基亚磺酰胺(51mg,0.42mmol)开始，使用DME(1mL)作为溶剂，根据中间体1所述的过程，步骤7，制备上述化合物。将残余物通过硅胶快速色谱纯化(0％至100％(EtOAc+10％MeOH)于石油醚中)以得到标题化合物，其呈淡黄色固体(50mg，65％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.85-7.77(m，1H)，7.60-7.53(m，2H)，7.35-7.30(m，1H)，6.91-6.85(m，1H)，6.50(s，1H)，5.49(d，J＝1.4Hz，1H)，4.51-4.24(m，4H)，3.16-3.02(m，2H)，2.01(s，3H)，1.95-1.69(m，4H)，1.17(s，9H)。LCMS(ES+)方法1：m/z546(M+H)+，RT 1.98分钟。
步骤3：(R)-N-((S)-1-(1-(2,3-二氯苯基)-2-甲基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-基)-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将NaBH4(34mg，0.93mmol)添加至在无水THF(1mL)中的(R,Z)-N-(1-(1-(2,3-二氯苯基)-2-甲基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-基)-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(50mg，0.09mmol)的溶液。2小时后，添加NaBH4(34mg，0.93mmol)并继续搅拌3天。将混合物在0℃用EtOAc和H2O洗稀释。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发溶剂以得到浅黄色固体(42mg)，其不经纯化即用于后续步骤。(通过UPLC-MS观察到93/7的非对映体比率)。LCMS(ES+)方法1：m/z 548(M+H)+，RT 1.96分钟。
步骤4：(S)-6-(1′-氨基-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-2-甲基嘧啶-4(3H)-酮(实施例86)
从(R)-N-((S)-1-(1-(2,3-二氯苯基)-2-甲基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-基)-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(42mg)开始，根据实施例82所述的过程，步骤11，制备上述化合物。将残余物通过硅胶快速色谱纯化(0％至15％MeOH于EtOAc中)，得到标题化合物，其呈白色固体(10mg，24％，经过2步骤)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.23(br s，3H)，7.84-7.71(m，1H)，7.58-7.45(m，2H)，6.77(br d，J＝14.9Hz，1H)，6.16(t，J＝3.0Hz，1H)，6.11-6.07(m，1H)，5.50(s，1H)，4.43-3.94(m，5H)，3.36-3.22(m，1H)，3.19-3.04(m，1H)，2.00(s，3H)，1.86-1.46(m，4H)。LCMS(ES+)方法3：m/z444(M+H)+，RT 2.34，2.38分钟(阻转异构体的混合物)。
实施例87：(S)-1-(5-((3-氟-2-甲基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯烷]-1′-胺
步骤1：1-(5-((3-氟-2-甲基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′–酮
从2-氯-5-((3-氟-2-甲基吡啶-4-基)硫代)吡嗪(15mg,0.07mmol；根据合成中间体33所报道的过程，使用4-溴-3-氟-2-甲基吡啶制备)和1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-酮盐酸盐(15mg，0.06mmol；根据实施例82，步骤7所报道的过程制备)开始，使用在DMA中40％H2O的混合物作为溶剂和使用K2CO3作为碱，根据用于实施例1的过程，制备标题化合物。粗品化合物(24mg)在后续步骤中使用而无需任何进一步纯化。LCMS(ES+)方法1：m/z 410(M+H)+，RT 1.41分钟。
步骤2：(R,Z)-N-(1-(5-((3-氟-2-甲基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
从来自先前步骤的材料(24mg，0.06mmol)和(R)-(-)-叔丁基亚磺酰胺(21mg，0.18mmol)开始，使用DME(0.7mL)，根据中间体1步骤7报道的过程制备标题化合物。将残余物通过硅胶快速色谱纯化(0％至100％(EtOAc+10％MeOH)于石油醚中)，得到标题化合物，其呈黄色固体(18mg，59％，经过2步骤)。LCMS(ES+)方法1：m/z 513(M+H)+，RT 1.58分钟。
步骤3：(R)-N-((S)-1-(5-((3-氟-2-甲基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
从(R,Z)-N-(1-(5-((3-氟-2-甲基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺开始，根据实施例86所述的过程，步骤3，制备标题化合物。粗品化合物(18mg)在后续步骤中使用而无需进一步纯化。LCMS(ES+)(97/3非对映体比率)(方法1)：m/z 515(M+H)+，RT 1.56分钟。
步骤4：(S)-1-(5-((3-氟-2-甲基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯烷]-1′-胺(实施例87)
从(R)-N-((S)-1-(5-((3-氟-2-甲基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1′H,3′H-螺[哌啶-4,2′-吡咯嗪]-1′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(18mg)开始，根据实施例86所述的过程，步骤4，制备标题化合物。将残余物通过硅胶快速色谱法纯化(0％至15％MeOH于EtOAc中)，得到标题化合物，其呈黄色固体(4mg，28％，经过2步骤)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.56(s，1H)，8.39(s，1H)，8.35-8.18(m，4H)，7.13(t，J＝6.2Hz，1H)，6.86-6.77(m，1H)，6.20-6.15(m，1H)，6.10(d，J＝3.0Hz，1H)，4.45-4.02(m，5H)，3.57-3.35(m，1H)，3.35-3.18(m，1H)，2.58(br d，J＝2.5Hz，3H)，1.93-1.54(m，4H)。LCMS(ES+)(方法3)：m/z 411(M+H)+，RT 1.84分钟。
实施例88：(S)-6-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-2,5-二甲基嘧啶-4(3H)-酮(三氟乙酸盐)
步骤1：(S)-N-((S)-1-(1-(2,3-二氯苯基)-2,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
在DMF(1mL)中的DIPEA(0.3mL，1.77mmol)和中间体2(182mg，0.35mmol)，6-氯-3-(2,3-二氯苯基)-2,5-二甲基嘧啶-4(3H)-酮(阻转异构体的混合物；按照合成中间体68所报道的方法制备，步骤2，使用2-甲基丙二酸二乙酯作为试剂；90mg，0.30mmol)的溶液在100℃加热12小时。将反应混合物在纤维素垫上过滤，用EtOAc洗涤并将溶剂减压浓缩。在下一步骤中直接使用残余物，无需进一步纯化(105mg)。LCMS(ES+)方法1：m/z 579，581(M+H)+，RT1.90分钟。
步骤2：(S)-6-(4′-氨基-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-2,5-二甲基嘧啶-4(3H)-酮(实施例88)
在MeOH(1mL)中的(S)-N-((S)-1-(1-(2,3-二氯苯基)-2,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的溶液用在MeOH中的HCl(3M,0.5mL)处理1小时。减压蒸发溶剂并通过反相色谱(15％至35％MeCN/H2O+0.1％TFA)直接纯化残余物以获得标题化合物，其呈白色固体(35mg，25％)。1H NMR(400MHz DMSO-d6)δ8.42(br s，3H)，7.83(br dd，J＝7.2Hz，1H)，7.61-7.53(m，3H)，6.32(s，1H)，4.51(br s，1H)，4.36(br d，J＝11.4Hz，1H)，4.20(br d，J＝11.4Hz，1H)，4.03-3.78(m，2H)，3.88-3.74(m，2H)，3.23(br t，J＝12.6Hz，1H)，3.14-2.86(m，1H)，2.00(s，3H)，1.93(m，4H)，1.75-1.88(m，2H)，1.65(br d，J＝12.7Hz，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 459(M+H)+，RT 1.20分钟。
实施例89：(S)-1-(3-(3-氟-2-甲基吡啶-4-基)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
根据合成实施例85所述的过程使用(3-氟-2-甲基吡啶-4-基)硼酸(从4-溴-3-氟-2-甲基吡啶开始，根据合成中间体46步骤3报道的程序来制备)，制备实施例89，其呈黄色粉末状(2.5mg，6％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.48(d，J＝4.4Hz，1H)，8.45(bs s，3H)，8.14(s，1H),7.60-7.57(m，3H)，7.25(d，J＝4.8Hz，1H)，6.32(s，1H)，4.54-4.42(m，4H)，4.26(d，J＝10.9Hz，1H)，3.34-3.27(m，1H)，3.19-3.12(m，1H)，2.58(s，3H)，1.78-1.70(m，3H)，1.72-1.65(m，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 419(M+H)+，RT 0.68分钟。
实施例90：(S)-1-(6-(2,3-二氯苯氧基)吡啶-3-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)
步骤1：5-溴-2-(2,3-二氯苯氧基)吡啶
将在THF(1.2mL)中的2,3-二氯苯酚(80mg,0.49mmol)的溶液在室温用氢化钠(39mg，0.98mmol)处理30分钟，然后添加5-溴-2-氯吡啶(86mg，0.49mmol)并将混合物回流搅拌12小时。冷却至室温后，将反应混合物用EtOAc和H2O稀释。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。。将残余物通过硅胶快速色谱法纯化(0％至100％EtOAc于石油醚中)以得到标题化合物，其呈黄色油状(27mg，17％)。LCMS(ES+)方法1：m/z 318，320(M+H)+，RT 2.38分钟。
步骤2：(S)-1-(6-(2,3-二氯苯氧基)吡啶-3-基)-4′H,6′H-螺[哌啶-4,5′-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4′-胺(三氟乙酸盐)(实施例90)
将在无水甲苯(0.8mL)中的NaOtBu(25mg，0.25mmol)和5-溴-2-(2,3-二氯苯氧基)吡啶(37mg，0.08mmol)，Ruphos Pd G4(3.6mg，0.003mmol)，Ruphos(3.9mg,0.01mmol)，中间体2(38mg，0.09mmol)中的溶液在N2气氛下脱气5分钟并在80℃加热12小时。冷却后，将混合物在纤维素垫上过滤，用EtOAc洗涤。减压除去溶剂得到残余物，将其直接溶解在MeOH(0.8mL)中，并在室温用在MeOH中的HCl(3M，0.5mL，0.08mmol)处理1小时。在浓缩后，将残余物通过反相色谱(20％至45％MeCN/H2O+0.1％TFA)纯化，得到标题化合物，其呈黄色固体(6mg，16％)。1H NMR(400MHz DMSO-d6)δ8.46(br s，3H)，7.81(d，J＝2.4Hz，1H)，7.57-7.64(m，2H)，7.50(d，J＝8.1Hz，1H)，7.39(t，J＝8.2Hz，1H)，7.19(d，J＝8.1Hz，1H)，7.06(d，J＝9.0Hz，1H)，6.31(s，1H)，4.47(br s，1H)，4.31(br d，J＝11.2Hz，1H)，4.17(br d，J＝11.2Hz，1H)，3.54-3.65(m，2H)，2.97(br t，J＝11.2Hz，1H)，2.82(br t，J＝11.2Hz，1H)，1.98-1.74(m，3H)，1.59-1.69(m，1H)。LCMS(ES+)方法1：m/z 430(M+H)+，RT 1.42分钟。
生物学
SHP2抑制酶试验
该试验按照YP Chen等，Nature(535)2016所述进行。使用以下缓冲液，将20μL/孔的测定体积组装在384孔黑色聚苯乙烯低结合微孔板(格瑞纳(Greiner))中：60mM HEPESpH 7.2，75mM NaCl，75mM KCl，1mM EDTA pH 8，0.05％tween-20，5mM DTT。SHP-2酶(由Origene合成，Met1–Leu525，目录号TP750155)以0.5nM的终浓度使用。该酶由500nM IRS1肽(序列：H2N-LN(pY)IDLDLV(dPEG8)LST(pY)ASINFQK-酰胺SEQ ID No.1)活化，并与75μMDiFMUP(Sigma(西格玛公司))作为底物一起孵育。
简言之，将连续稀释的DMSO测定化合物转移至试验板的底部。在孵育30分钟后将SHP2与IRS1肽一起添加，将DiFMUP底物添加到反应中并在室温孵育30分钟。最后添加5μL160μM bpV(双过氧[1,10-菲咯啉]氧钒酸钾[V]，西格玛公司)以停止并淬灭反应。根据DiFMUP激发和发射波长，通过酶标仪(Envision，帕金埃尔默公司(PerkinElme)检测荧光。荧光越低，SHP2抑制越高。
各化合物稀释液的活性计算为载剂(DMSO，0％抑制)和无酶(100％抑制)之间的抑制百分比。使用四参数逻辑回归将抑制百分比与化合物稀释度进行拟合。拐点(即达到半最大抑制的浓度)是IC50。
本发明化合物在SHP2抑制酶测定中的IC50结果如表2所示。图例：A表示IC50小于或等于0.05μM；B表示IC50大于0.05μM且小于或等于0.3μM；C表示IC50高于0.3μM。
表2-本发明化合物的SHP2抑制
磷酸化-ERK细胞试验
按照制造商试剂和说明，使用“先进磷酸-ERK1/2(Thr202/Tyr204)”TR-FRET试剂盒(Cisbio，目录号#64AERPEG/H)检测ERK磷酸化。
简言之，将20.000个/孔KYSE-520细胞(DSMZ ACC 371)铺板在6μLRPMI-1640(英杰公司(Invitrogen))生长培养基中，将其置于384个白色低容量高碱度TC微孔板(格瑞纳)中。过夜孵育后，用DMSO系列稀释化合物处理细胞，并在37℃下孵育2小时。孵育后，添加2μL/孔的4X裂解缓冲液(Cisbio 64KL1FDF)，并在轻轻振荡的情况下与细胞一起孵育30分钟。最后，添加裂解物与2μL/孔的Eu穴状化合物(供体)和在检测缓冲液(由Cisbio试剂盒#64AERPEG/H提供)中1:100稀释的D2(接受体)偶联抗体(由Cisbio试剂盒#64AERPEG/H提供)。然后将板密封并于室温在黑暗中孵育。过夜孵育后，在合适的读数器(Envision，帕金埃尔默公司)检测TR-FRET信号。TR-FRET信号越低，细胞中SHP2的抑制越高。
各化合物稀释物的活性分别计算为载剂DMSO处理的细胞与无细胞、0％抑制和100％抑制之间的百分比。使用四参数逻辑回归将活性百分比与化合物稀释度进行拟合。拐点(即达到半最大抑制的浓度)是IC50。
本发明化合物在磷酸-ERK细胞试验中的IC50结果显示于表3。图例：“+”表示IC50等于或高于0.5μM；“++”表示IC50小于0.5μM且高于或等于0.1μM；“+++”表示IC50小于0.1μM。
表3-本发明化合物的pERK活性
通过表面等离子共振(SPR)进行结合动力学试验
使用Biacore T200仪器(Cytiva，瑞典)开发了一种用于测量SHP2抑制剂结合动力学的结合试验。磷酸酶的重组生物素化版本(Avi-G4SG4S-PTPN11(1-525))由Viva Biotech生产：将酶在HBS-P pH 7.4(Cytiva，瑞典)中稀释至30μg/ml，然后以10μl/分钟在高达6000RU的S系列链霉亲和素传感器芯片(SA)上注射。将化合物在10mM Hepes pH 7.4，150mM NaCl，0.05％P-20，1mM EDTA，5mM DTT和2％DMSO中从300nM连续稀释至3.7nM(1:3稀释)，然后使用2分钟的接触时间和60分钟的解离时间，通过单循环动力学过程(SCK)测试。采用Biacore T200评估软件(Cytiva)进行数据分析，并根据1:1Langmuir结合模型通过全局拟合评估动力学参数。各分子在分开的流道上进行三重复测试。
表4.选定化合物的K解离和停留时间
序列表
<110> IRBM股份公司 (IRBM S.P.A.)
国家化学成分收集和筛选中心 (C.N.C.C.S. S.C.A.R.L. CollezioneNazionale dei Composti
Chimici e Centro Screening)
<120> 作为 SHP2 抑制剂的唑衍生物 (AZOLE DERIVATIVES AS SHP2 INHIBITORS)
<130> PCT151102
<150> EP21166822.3
<151> 2021-04-02
<160> 1
<170> PatentIn 版本3.5
<210> 1
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 1
Leu Asn Ile Asp Leu Asp Leu Val Leu Ser Thr Ala Ser Ile Asn Phe
1 5 10 15
Gln Lys

Claims (17)

1.一种式(I)的化合物：
其中：
X1是CR1或N；X2是CR2或N；X3是CR3或N；
R1、R2和R3各自任选地选自H、卤素、OC1-3烷基或C1-3烷基，其任选地被NH2、OH或卤素取代；或
R1和R2与它们相连的碳原子一起连接形成稠合的五元、六元或七元饱和或部分不饱和环，该环任选地含有选自O、S和N的一个或两个杂原子并且任选地在各次出现时被选自卤素、OH、NH2、OCH3、C1-3烷基的一个或多个取代基取代；或
R2和R3与它们相连的碳原子一起连接形成稠合的五元、六元或七元饱和或部分不饱和环，该环任选地含有选自O、S和N的一个或两个杂原子并且任选地在各次出现时被选自卤素、OH、NH2、OCH3、C1-3烷基的一个或多个取代基取代；或
X4是CR5R6、O、S，或X4为键；
R4是芳基、杂芳基、部分不饱和芳基、部分不饱和杂芳基环，所述芳基、杂芳基、部分不饱和芳基、部分不饱和杂芳基环各自任选地被独立选自以下的一个或多个取代基取代：C(＝O)CH3、C(＝O)OCH3、OH、卤素、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)2、C1-6烷基、C3-5环烷基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C(＝O)NR’R”、NR’C(＝O)C1-6烷基、NR'C(＝O)C1-6卤代烷基、CN、卤代C1-6烷氧基、C1-6烷氧基、饱和5-或6-元杂环、芳基或杂芳基，其中所述饱和5元或6元杂环、芳基或杂芳基各自任选地被一个或多个CH3、NH2、卤素或OH取代，并且其中R’和R”各自独立地为H或C1-6烷基，优选H或CH3；
R5和R6各自独立地选自H、C1-6烷基、OH、卤素；
Cy-X4-R4对应于如下所示的式(A)-(M)中的任一个：
其中：
-R7选自H、C1-3烷基和NH2；优选H、CH3和NH2；
-R8是H、卤素、C1-3烷基，其中所述C1-3烷基任选地被一个或多个卤素或OH取代；
-R9、R10、R11、R13、R14、R15、R16、R18、R21和R26在各次出现时各自独立地选自H、卤素、C1-6烷基或卤代C1-6烷基；
-R12、R17、R19和R20选自H和CH3；
-R23和R27独立地选自H、C1-6烷基和羟基C1-6烷基；
-R24是H、卤代C1-6烷基或卤素；
-R25是H、卤素、C1-6烷基、卤代C1-6烷基或羟基C1-6烷基；
-Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7和Y8各自独立地选自N和C；
并且其中当X1为CR1，且X2为CR2，且X3为CR3，且Cy-X4-R4对应于通式(A)时，R4为：
其中R28是H、卤素或C1-3烷基，并且R29是杂芳基；
或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体。
2.根据权利要求1所述的式(I)的化合物，其具有通式(IA)、(IB)、(IC)或(ID)：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体。
3.根据前述权利要求中任一项所述的式(I)的化合物，其中所述R1、R2和R3各自独立地选自H、Br、Cl、F、OCH3、CH3和CH2OH，或者R2和R3连接在一起形成选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、四氢呋喃、四氢吡咯的稠合环。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的式(I)的化合物，其中所述Cy-X4-R4选自：
5.根据权利要求1至4中任一项所述的式(I)的化合物，其中所述X4是S、O，或X4是键。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的式(I)的化合物，其中R4选自：苯基、吡啶、嘧啶、吡嗪、咪唑并[1,2-a]吡啶、吲哚、2H-吲唑、2,3-吲哚啉、2,3,3a,4-四氢-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并噁嗪、6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪、2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶、1,8-萘啶、三唑并[4,3-a]吡啶、咪唑并[1,2-a]吡啶-2(3H)-酮，所述环各自任选地被独立选自以下的一个或多个取代基取代：C(＝O)CH3、C(＝O)OCH3、OH、卤素、NH2、CF3、C(＝O)CH3、C1-3烷基、C(＝O)NH2、C(＝O)NHC1-3烷基、C(＝O)N(C1-3烷基)2、CN、C3-5环烷基、芳基或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基各自任选地被以下的一个或多个取代：卤素、C(＝O)NH2、C(＝O)NHCH3、C(＝O)N(CH3)2、C1-3烷基和NHC(＝O)CF3。
7.根据权利要求6所述的式(I)的化合物，其中R4选自以下组：2-(三氟甲基)吡啶-3-基、2-氨基-3-氯吡啶-4-基、(S)-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪-4-基、4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基、(R)-6a',7'-二氢-6'H,9'H-螺[环丙烷-1,8'-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪]-4'-基、3,3-二氟吲哚啉-1-基-乙-1-酮、8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基、3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基、3-氯-2-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基、2,3-二氯苯基、8-氯-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基、8-氯-2-氰基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基、5-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、6-氨基-2-氯吡啶-3-基、3-氯-2-(1H-吡咯-1-基)吡啶-4-基、3-氯-2-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基、3-氯-2-(1H-咪唑)-1-基)吡啶-4-基、5-氨基-3-氯吡嗪-2-基、3,8-二氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基、8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-7-基、8-氯-3-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基、8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2,2,2-三氟乙酰胺、8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺、8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-腈、8-氯咪唑[1,2-a]吡啶-2(3H)-酮、3-氯吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺、3-氯吡啶-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺、3-氯吡啶-2-基)-N-甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺、8-氯-N,N-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺、3-氯吡啶-2-基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺和8-氟喹啉-4-基。
8.式(I)的化合物，其选自：
-(S)-1-(5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-3'-氯-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-3'-氯-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-3'-溴-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-3'-氟-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-3'-甲基-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2'-甲基-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2'-甲氧基-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-(((S)-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-3'-氯-2'-甲基-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(8-((4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(8-(((S)-6a,7,8,9-四氢-6H-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-3'-氯-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4'-哌啶]-8-胺；
-(S)-1'-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4'-哌啶]-8-胺；
-1'-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-1,2,3,8-四氢-6H-螺[环戊[d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4'-哌啶]-8-醇；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-2'-甲基-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-(((R)-6a',7'-二氢-6'H,9'H-螺[环丙烷-1,8'-吡啶并[3,2-b]吡咯)[1,2-d][1,4]噁嗪]-4'-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-(((S)-6a',7'-二氢-6'H,9'H-螺[环丙烷-1,8'-吡啶并[3,2-b]吡咯并[1,2-d][1,4]噁嗪]-4'-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(4-((3-氨基-5-(4'-氨基-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-3,3-二氟吲哚啉-1-基)乙-1-酮；
-(S)-1'-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,8-二氢-3H,6H-螺[呋喃[3,4-d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4'-哌啶]-8-胺；
-(S)-(4'-氨基-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-2',3'-二基)二甲醇；
-(S)-1'-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-1,8-二氢-3H,6H-螺[呋喃[3,4-d]吡咯并[1,2-b]吡唑-7,4'-哌啶]-8-胺；
-(S)-1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-5-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((3-氯-2-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)哒嗪-3-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4'-胺；
-(S)-1-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4'-胺；
-(S)-1-(8-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4'-胺；
-(S)-1-(3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-5'H,7'H-螺[哌啶-4,6'-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑]-7'-胺；
-(S)-1-(5-((8-氯-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(6-氨基-5-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-(4'-氨基-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇；
-(S)-3-(2-氨基-3-氯吡啶-4-基)-6-(4'-氨基-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-5-甲基-1,5-二氢-4H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮；
-(S)-1-(5-((5-氨基-3-氯吡嗪-2-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((3,8-二氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-3'-氟-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((3,8-二氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-3'-氟-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((8-氯-3-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-N-(7-((5-(4'-氨基-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2,2,2-三氟乙酰胺；
-(S)-7-((5-(4'-氨基-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺；
-(S)-1-(5-((6-氨基-2-氯吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((5-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-7-((5-(4'-氨基-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-腈；
-(S)-7-((5-(4'-氨基-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2(3H)-酮；
-(S)-1-(5-((3-氯-2-(1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(6-氨基-5-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((3-氯-2-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((3-氯-2-(1H-吡咯-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(6-氨基-5-((3-氯-2-(1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(6-氨基-5-((8-氯-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(4-((5-(4'-氨基-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-3-氯吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
-(S)-1-(4-((5-(4'-氨基-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-3-氯吡啶-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺；
-(S)-1-(4-((5-(4'-氨基-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-3-氯吡啶-2-基)-N-甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；
-(S)-7-((5-(4'-氨基-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-8-氯-N,N-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺；
-(S)-1-(4-((5-(4'-氨基-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-3-氯吡啶-2-基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺；
-(S)-1-(3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(3-(3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(6-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡啶并[2,3-b]吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡啶并[2,3-b]吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-1-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(8-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)咪唑并[1,5-a]吡嗪-5-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(4'-氨基-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
-(S)-6-(4'-氨基-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-2-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
-(S)-6-(4'-氨基-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-5-氯-3-(2,3-二氯苯基)-2-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
-(S)-1-(5-((8-氟喹啉-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((3-氟-2-甲基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(5-((3-氯-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1'H,3'H-螺[哌啶-4,2'-吡咯嗪]-1'-胺；
-(S)-1-(5-((2,3-二氯苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(6-((2,3-二氯苯基)硫代)吡啶-3-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(3-(2,3-二氯苯基)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-6-(1'-氨基-1'H,3'H-螺[哌啶-4,2'-吡咯嗪]-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-2-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
-(S)-6-(4'-氨基-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-2,5-二甲基嘧啶-4(3H)-酮；
-(S)-1-(3-(3-氟-2-甲基吡啶-4-基)咪唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
-(S)-1-(6-(2,3-二氯苯氧基)吡啶-3-基)-4'H,6'H-螺[哌啶-4,5'-吡咯并[1,2-b]吡唑]-4'-胺；
或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体。
9.式(I)的化合物，其为(S)-1-(5-((3-氟-2-甲基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1'H,3'H-螺[哌啶-4,2'-吡咯烷]-1'-胺，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体。
10.根据前述权利要求中任一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体，其用于医疗用途。
11.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体，其用于治疗和/或预防由SHP2活性介导的疾病或病症。
12.根据前述权利要求中任一项所述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体，其用于治疗和/或预防选自以下组的疾病或病症：癌症、心血管疾病、免疫性病症、自体免疫病症、纤维化、眼部病症、系统性红斑狼疮、糖尿病、中性粒细胞减少症及其组合。
13.根据权利要求11或12所述应用的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体，其中所述疾病或病症选自以下组：努南综合征、豹纹综合征、幼年型粒单核细胞白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、头颈部鳞状细胞癌、急性髓系白血病、乳腺癌、食道肿瘤、肺癌、结肠癌、头癌、胃部癌、淋巴瘤、成胶质细胞瘤、胃癌、胰腺癌及其组合。
14.根据权利要求12或13所述应用的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体，其中所述癌症中的任一种是原发性癌症或癌症转移。
15.根据权利要求10-14中任一项所述应用的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体，其中该应用与放疗或至少一种其它的治疗剂联合，优选地所述至少一种其它的治疗剂选自以下组：
(a)烷基化剂，其包括但不限于卡莫司汀、苯丁酸氮芥(LEUKERAN)、顺铂(PLATIN)、卡铂(PARAPLATIN)、奥沙利铂(ELOXATIN)、链脲佐菌素(ZANOSAR)、白消安(MYLERAN)、达卡巴嗪、异环磷酰胺、洛莫司汀(CCNU))、美法仑(ALKERAN)、普卡巴嗪(MATULAN)、替莫唑胺(TEMODAR)、噻替帕和环磷酰胺(ENDOXAN)；
(b)抗代谢药，其包括但不限于克拉屈滨(LEUSTATIN)、巯基嘌呤(PURINETHOL)、硫鸟嘌呤、喷司他丁(NIPENT)、胞嘧啶阿拉伯糖苷(阿糖胞苷，ARA-C)、吉西他滨(GEMZAR)、氟尿嘧啶(5-FU，CARAC)、卡培他滨(XELODA)、亚叶酸(FUSILEV)、甲氨蝶呤(RHEUMATREX)和雷替曲塞；
(c)抗有丝分裂剂，其通常是植物生物碱和萜类化合物或其衍生物，包括但不限于紫杉烷类，诸如多西他赛(TAXITERE)和紫杉醇(ABRAXANE，TAXOL)；长春花生物碱，诸如长春新碱(ONCOVIN)、长春花碱、长春地辛、长春瑞滨(NAVELBINE)和长春氟宁；
(d)检查点抑制剂，诸如抗PD-1或PD-L1抗体派姆单抗(KEYTRUDA)、纳武单抗(OPDIVO)、MEDI4736和MPDL3280A；抗CTLA-4抗体伊匹单抗(YERVOY)；靶向LAG3(淋巴细胞活化基因3蛋白)、KIR(杀伤细胞免疫球蛋白样受体)、4-1BB(肿瘤坏死因子受体超家族成员9)、TIM3(含T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域的蛋白质3)和/或OX40(肿瘤坏死因子受体超家族成员4)的抑制剂；
(e)拓扑异构酶抑制剂，其包括但不限于喜树碱(CTP)、伊立替康(CAMPTOSAR)、拓扑替康(HYCAMTIN)、替尼泊苷(VUMON)和依托泊苷(EPOSIN)；
(f)细胞毒性抗生素，其包括但不限于放线菌素D(更生霉素，COSMEGEN)、博莱霉素(BLENOXANE)、阿霉素(ADRIAMYCIN)、柔红霉素(CERUBIDINE)、表柔比星(ELLENCE)、氟达拉滨(FLUDARA)、伊达比星、丝裂霉素(MITOSOL)，米托蒽醌(NOVANTRONE)、普卡霉素；芳香化酶抑制剂，其包括但不限于氨鲁米特、阿那曲唑(ARIMIDEX)、来曲唑(FEMARA)、伏氯唑(RIVIZOR)和依西美坦(AROMASIN)；
(g)血管生成抑制剂，其包括但不限于金雀异黄素、舒尼替尼(SUTENT)和贝伐单抗(AVASTIN)；
(h)抗类固醇和抗雄激素，诸如氨鲁米特(CYTADREN)、比卡鲁胺(CASODEX)、环丙孕酮、氟他胺(EULEXIN)和尼鲁米特(NILANDRON)；
(i)酪氨酸激酶抑制剂，其包括但不限于伊马替尼(GLEEVEC)、厄洛替尼(TARCEVA)、拉帕替尼(TYKERB)、索拉非尼(NEXAVAR)和阿西替尼(INLYTA)；
(j)mTOR抑制剂，诸如依维莫司、替西罗莫司(TORISEL)和西罗莫司；单克隆抗体，诸如曲妥珠单抗(HERCEPTIN)和利妥昔单抗(RITUXAN)；
(k)其他药剂，诸如安吖啶；卡介苗(B-C-G)疫苗；布舍瑞林(ETILAMIDE)；氯喹(ARALEN)；氯膦酸盐、帕米膦酸盐和其他双膦酸盐；秋水仙碱；去甲氧绿胶霉素；二氯乙酸盐；雌莫司汀；非格司亭(NEUPOGEN)；氟氢可的松(FLORINEF)；戈舍瑞林(ZOLADEX)；干扰素；亚叶酸；亮丙瑞林(LUPRON)；左旋咪唑；氯尼达明；美司钠；二甲双胍；米托坦(o,p'-DDD，LYSODREN)；诺考达唑；奥曲肽(SANDOSTATIN)；哌立福辛；卟吩姆钠(尤其是联合光疗和放射疗法)；苏拉明；他莫昔芬；二氯二茂钛；维A酸；合成代谢类固醇，诸如氟甲睾酮(HALOTESTIN)；雌激素，诸如雌二醇、己烯雌酚(DES)和双烯雌酚；孕激素，诸如醋酸甲羟孕酮(MPA)和甲地孕酮；睾酮；5-氟-2-4(1H,3H)-嘧啶二酮及其组合。
16.一种药物组合物，其包含如权利要求1-9中任一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体，其单独存在或与至少一种其它的治疗剂联合，以及至少一种药学上可接受的赋形剂，优选所述至少一种其它的治疗剂选自以下组：
(a)烷基化剂，其包括但不限于卡莫司汀、苯丁酸氮芥(LEUKERAN)、顺铂(PLATIN)、卡铂(PARAPLATIN)、奥沙利铂(ELOXATIN)、链脲佐菌素(ZANOSAR)、白消安(MYLERAN)、达卡巴嗪、异环磷酰胺、洛莫司汀(CCNU))、美法仑(ALKERAN)、普卡巴嗪(MATULAN)、替莫唑胺(TEMODAR)、噻替帕和环磷酰胺(ENDOXAN)
(b)抗代谢药，其包括但不限于克拉屈滨(LEUSTATIN)、巯基嘌呤(PURINETHOL)、硫鸟嘌呤、喷司他丁(NIPENT)、胞嘧啶阿拉伯糖苷(阿糖胞苷，ARA-C)、吉西他滨(GEMZAR)、氟尿嘧啶(5-FU，CARAC)、卡培他滨(XELODA)、亚叶酸(FUSILEV)、甲氨蝶呤(RHEUMATREX)和雷替曲塞；
(c)抗有丝分裂剂，其通常是植物生物碱和萜类化合物或其衍生物，包括但不限于紫杉烷类，诸如多西他赛(TAXITERE)和紫杉醇(ABRAXANE，TAXOL)；长春花生物碱，诸如长春新碱(ONCOVIN)、长春花碱、长春地辛、长春瑞滨(NAVELBINE)和长春氟宁；
(d)检查点抑制剂，诸如抗PD-1或PD-L1抗体派姆单抗(KEYTRUDA)、纳武单抗(OPDIVO)、MEDI4736和MPDL3280A；抗CTLA-4抗体伊匹单抗(YERVOY)；靶向LAG3(淋巴细胞活化基因3蛋白)、KIR(杀伤细胞免疫球蛋白样受体)、4-1BB(肿瘤坏死因子受体超家族成员9)、TIM3(含T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域的蛋白质3)和/或OX40(肿瘤坏死因子受体超家族成员4)的抑制剂；
(e)拓扑异构酶抑制剂，其包括但不限于喜树碱(CTP)、伊立替康(CAMPTOSAR)、拓扑替康(HYCAMTIN)、替尼泊苷(VUMON)和依托泊苷(EPOSIN)；
(f)细胞毒性抗生素，其包括但不限于放线菌素D(更生霉素，COSMEGEN)、博莱霉素(BLENOXANE)、阿霉素(ADRIAMYCIN)、柔红霉素(CERUBIDINE)、表柔比星(ELLENCE)、氟达拉滨(FLUDARA)、伊达比星、丝裂霉素(MITOSOL)，米托蒽醌(NOVANTRONE)、普卡霉素；芳香化酶抑制剂，其包括但不限于氨鲁米特、阿那曲唑(ARIMIDEX)、来曲唑(FEMARA)、伏氯唑(RIVIZOR)和依西美坦(AROMASIN)；
(g)血管生成抑制剂，其包括但不限于金雀异黄素、舒尼替尼(SUTENT)和贝伐单抗(AVASTIN)；
(h)抗类固醇和抗雄激素，诸如氨鲁米特(CYTADREN)、比卡鲁胺(CASODEX)、环丙孕酮、氟他胺(EULEXIN)和尼鲁米特(NILANDRON)；
(i)酪氨酸激酶抑制剂，其包括但不限于伊马替尼(GLEEVEC)、厄洛替尼(TARCEVA)、拉帕替尼(TYKERB)、索拉非尼(NEXAVAR)和阿西替尼(INLYTA)；
(j)mTOR抑制剂，诸如依维莫司、替西罗莫司(TORISEL)和西罗莫司；(12)单克隆抗体，诸如曲妥珠单抗(HERCEPTIN)和利妥昔单抗(RITUXAN)；
(k)其他药剂，诸如安吖啶；卡介苗(B-C-G)疫苗；布舍瑞林(ETILAMIDE)；氯喹(ARALEN)；氯膦酸盐、帕米膦酸盐和其他双膦酸盐；秋水仙碱；去甲氧绿胶霉素；二氯乙酸盐；雌莫司汀；非格司亭(NEUPOGEN)；氟氢可的松(FLORINEF)；戈舍瑞林(ZOLADEX)；干扰素；亚叶酸；亮丙瑞林(LUPRON)；左旋咪唑；氯尼达明；美司钠；二甲双胍；米托坦(o,p'-DDD，LYSODREN)；诺考达唑；奥曲肽(SANDOSTATIN)；哌立福辛；卟吩姆钠(尤其是联合光疗和放射疗法)；苏拉明；他莫昔芬；二氯二茂钛；维A酸；合成代谢类固醇，诸如氟甲睾酮(HALOTESTIN)；雌激素，诸如雌二醇、己烯雌酚(DES)和双烯雌酚；孕激素，诸如醋酸甲羟孕酮(MPA)和甲地孕酮；睾酮；5-氟-2-4(1H,3H)-嘧啶二酮及其组合。
17.根据权利要求16所述的药物组合物，用于如权利要求11-15中任一项所定义的用途。
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