CN117801089A - 一种卵形鲳鲹促摄食新型多肽Nicol1及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种卵形鲳鲹促摄食新型多肽Nicol1及编码所述多肽Nicol1的基因，以及所述多肽Nicol1的成熟肽Nicol1‑17及编码所述成熟肽Nicol1‑17的核苷酸序列，所述多肽Nicol1的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，编码所述多肽Nicol1的基因的序列如SEQ ID NO：2所示；本发明编码鱼类Nicol1多肽的基因在鱼类的神经系统高表达，并通过分子调控机制研究及生理实验证实该基因产生的成熟肽Nicol1‑17具有调节鱼类摄食的功能，能够用于调节鱼类摄食以及制备促进鱼类摄食的饲料。
Description
技术领域
本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种卵形鲳鲹促摄食新型多肽Nicol1及其应用。
背景技术
Nicol1(又称C4ORF48)是一种新型活性多肽。在中枢神经系统和外周组织中广泛表达，缺失Nicol1会导致生长异常和智力迟钝。此外，Nicol1与哺乳动物的生殖调控密切相关。在小鼠中能与Nell2形成紧密的分子复合物，是精子成熟和雄性生育能力所不可或缺的信号。敲除Nicol1基因的雄性小鼠会因附睾分化缺陷和精子成熟不足而不育。这提示Nicol1多肽调控神经内分泌过程并参与多种生理活动。然而，Nicol1的成熟肽尚未被鉴定，其是否参与摄食调控也还不清楚。
脊椎动物的下丘脑是食物摄取和能量平衡控制的关键中枢，下丘脑神经元释放的多肽在调节摄食方面起主要作用，既作用于下丘脑，也作用于整个大脑的其他食欲调节中心。动物摄食行为的调控涉及多种调控因子，包括神经肽Y(NPY)、刺鼠关联蛋白(AgRP)和Orexin等，而生长激素释放激素受体(GHRHR)和生长激素(GH)也参与调控摄食和生长。这些因子共同构成了一个复杂而精确的神经内分泌调控网络，维持着能量摄入和支出的动态平衡。在这些调节因子中找出关键的调控因子对于开发高活性的促摄食、促生长剂具有重要意义。多肽类活性物质具有活性高、用量少、成本低、无毒副作用、易合成等优点，因此具有广阔的应用前景。
卵形鲳鲹肉质细嫩，味道鲜美，是中国南部沿海海水养殖的主要品种之一。目前对卵形鲳鲹的研究大多集中在营养、食品加工和抗菌免疫等方面，对其基础生物学研究的缺乏严重阻碍了这一重要经济鱼类的产业发展。因此，深入研究Nicol1多肽在鱼类中的作用机制和应用价值，可以为养殖行业提供新的技术和方法，推动其可持续发展。
发明内容
本发明的目的在于提供一种卵形鲳鲹促摄食新型多肽Nicol1及编码所述多肽Nicol1的基因，以及所述多肽Nicol1的成熟肽Nicol1-17及编码所述成熟肽Nicol1-17的核苷酸序列。
本发明的目的还在于提供上述多肽Nicol1、编码所述多肽Nicol1的基因、上述成熟肽Nicol1-17或编码所述成熟肽Nicol1-17的核苷酸序列的应用。
本发明的最后一个目的在于提供一种鱼类促摄食饲料，包含上述的多肽Nicol1、上述的编码多肽Nicol1的基因、上述的成熟肽Nicol1-17或上述的编码成熟肽Nicol1-17的核苷酸序列。
本发明的上述第一个目的可以通过以下技术方案来实现：一种卵形鲳鲹促摄食新型多肽Nicol1，所述多肽Nicol1的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
编码所述卵形鲳鲹促摄食新型多肽Nicol1的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQID NO：2所示。
本发明还提供了所述多肽Nicol1的成熟肽Nicol1-17，其氨基酸序列如SEQ IDNO：3所示。
根据Nicol1基因的生物学特点，本发明提供了鱼类第一例Nicol1成熟肽。
本发明进一步提供了编码所述成熟肽Nicol1-17的核苷酸序列，所述核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。
本发明通过对鱼类基因组和卵形鲳鲹转录组信息的分析比对，在多种鱼类中发现Nicol1基因的存在。根据获得的序列设计引物，使用分子克隆技术，在卵形鲳鲹中克隆得到Nicol1的开放阅读框(ORF)序列为273bp，编码90个氨基酸残基，计算分子量为9.697kDa，等电点为5.69，其中N-端信号肽由25个氨基酸残基组成。
序列比对分析表明，鱼类的Nicol1多肽前体与哺乳类的序列存在较大差异，在鱼类中高度保守。鱼类Nicol1多肽前体包含2个预测的裂解位点，剪切修饰产生一条含有17个氨基酸残基的成熟肽，将其命名为Nicol1-17。
通过RT-PCR技术检测卵形鲳鲹Nicol1基因在各种组织中的表达，结果显示雌性中Nicol1在大脑和卵巢中大量表达，在垂体和肌肉中表达较高，但在其他组织中表达较弱。雄性中Nicol1在大脑中的表达量较强，其次是垂体和心脏，但在其他组织中的表达量较弱。从中显示出Nicol1具有明显的性别二态性和组织表达特异性。Nicol1在大脑和垂体中的高表达显示其在上游神经内分泌调控中发挥着重要的作用。
因此，本发明提供了上述鱼类Nicol1多肽的成熟肽(Nicol1-17成熟肽)，其氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；编码所述成熟肽的核苷酸序列，所述核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。
本发明的上述第二个目的可以通过以下技术方案来实现：本发明上述多肽Nicol1、编码所述多肽Nicol1的基因、上述成熟肽Nicol1-17或编码所述成熟肽Nicol1-17的核苷酸序列的应用，包括在鱼类摄食调节中的应用以及用于制备鱼类人工饲料中的应用，尤其是用于制备鱼类促摄食饲料的应用。
具体地包括：上述多肽Nicol1、编码所述多肽Nicol1的基因、上述成熟肽Nicol1-17或编码所述成熟肽Nicol1-17的核苷酸序列在鱼类摄食调节中的应用以及上述成熟肽Nicol1-17或编码所述成熟肽Nicol1-17的核苷酸序列在制备鱼类人工饲料中的应用。
进一步地，所述的饲料能促进鱼类摄食。
实验证明，本发明鱼类Nicol1多肽基因可以用于鱼类摄食调控。
用实时荧光定量PCR(qPCR)检测卵形鲳鲹Nicol1基因在饥饿状态下的表达变化，结果表明：与对照组相比，禁食2天和7天后卵形鲳鲹下丘脑中Nicol1基因的表达水平显著升高。而禁食7天后复投喂的实验组的Nicol1表达量回归到对照组水平(P<0.05)。这说明Nicol1多肽基因与卵形鲳鲹的摄食调控相关，是促摄食因子。
采用腹腔注射方式研究化学合成的Nicol1-17成熟肽在卵形鲳鲹体内对摄食调控的影响。结果表明：向卵形鲳鲹腹腔注射Nicol1-17 3小时后，剂量为10ng/gbw和100ng/gbw时可显著刺激NPY的表达。而剂量为1ng/gbw和10ng/gbw时可显著刺激GHRHR的表达。腹腔注射Nicol1-17 6小时后，剂量为1ng/gbw时可显著刺激AgRP、GHRHR和GH的表达。而剂量为1ng/gbw、10ng/gbw和100ng/gbw时可显著刺激NPY的表达。
采用离体孵育方式研究化学合成的Nicol1-17成熟肽在卵形鲳鲹体外对摄食调控的影响。结果表明：用Nicol1-17孵育下丘脑3小时后，1μM和10μM剂量的Nicol1-17可以刺激AGRP表达量显著上调。0.1μM、1μM和10μM剂量的Nicol1-17可以刺激NPY的表达量显著上调。用10μM的Nicol1-17孵育垂体3小时后，垂体中的GHRHR和GH mRNA表达水平显著升高。此外，用Nicol1-17孵育下丘脑6小时后，1μM和10μM剂量的Nicol1-17可以使AGRP表达量显著增加。10μM剂量的Nicol1-17可以刺激NPY mRNA表达量显著增加。对垂体孵育6小时后，剂量为1μM和10μM的Nicol1-17能显著刺激GHRHR和GH的表达上调。
总体而言，腹腔注射实验的结果与本研究的离体孵育实验结果基本一致。从体内和体外两个方面共同证明了Nicol1-17多肽可以和NPY、AgRP、GHRHR和GH协同作用，共同发挥促食欲功能。
本发明的上述最后一个目的可以通过以下技术方案来实现：一种鱼类促摄食饲料，包含上述的多肽Nicol1、上述编码多肽Nicol1的基因、上述的成熟肽Nicol1-17或上述编码成熟肽Nicol1-17的核苷酸序列。
分别往卵形鲳鲹腹腔注射0.8％鱼类生理盐水(对照组)和1ng/gbw剂量的Nicol1-17成熟肽(注射组)。结果表明：对照组每条鱼的平均摄食量为0.0263g/gbw；注射组每条鱼平均摄食量为0.0386g/gbw。注射组的摄食量高出对照组46.77％，显示出Nicol1-17成熟肽具有较强的促摄食作用。
从分子和实际应用的实践表明，Nicol1-17成熟肽具有促进摄食的生理功能。因此，本发明鱼类Nicol1基因编码的成熟肽Nicol1-17可以用于促进鱼类摄食。
本发明具有以下有益效果：
(1)本发明基于卵形鲳鲹的理论研究，鉴定了鱼类Nicol1基因编码的成熟肽Nicol1-17具有调节鱼类摄食的功能，并且可以和摄食调控关键因子NPY、AgRP、GHRHR和GH协同作用，共同发挥促摄食作用；
(2)本发明实际应用的实验也证明了Nicol1-17成熟肽可以显著增加卵形鲳鲹的摄食量，这为开发出低成本的高效诱食剂，作为饲料添加剂，促进鱼类养殖等的发展具有广泛的应用价值。
附图说明
下面参照附图结合实施例对本发明作进一步的描述。
图1是本发明实施例1中物种间Nicol1的氨基酸多重比对，成熟肽用下划线表示，潜在的裂解位点用方框表示；
图2是本发明实施例2中卵形鲳鲹Nicol1基因在雌雄各组织的表达分析，Nicol1mRNA在雌性和雄性卵形鲳鲹不同组织中的表达，β-actin作为内参基因，Br，大脑；Pi，垂体；Li，肝脏；Ki，肾脏；He，心脏；Mu，肌肉；In，肠道；Sp，脾脏；Gi，鳃；Go，性腺；Nc，阴性对照；
图3是本发明实施例3中卵形鲳鲹下丘脑中Nicol1基因在饥饿过程的表达变化，数值以平均值±标准误表示(n＝8)，*表示与对照组有显著性差异(P<0.05)；
图4是本发明实施例4中Nicol1-17成熟肽腹腔注射对卵形鲳鲹下丘脑中AgRP、NPY和垂体中GHRHR、GH表达的影响。分别腹腔注射不同剂量的Nicol1-17 3小时和6小时，数值以平均值±标准误表示(n＝6)，*表示与对照组有显著性差异(P<0.05)；**表示与对照组有极显著差异(P<0.01)；
图5是本发明实施例5中Nicol1-17成熟肽离体孵育对卵形鲳鲹下丘脑中AgRP、NPY和垂体中GHRHR、GH表达的影响，分别以不同剂量的Nicol1-17离体孵育卵形鲳鲹的下丘脑和垂体，处理时间分别为3小时和6小时，数值以平均值±标准误表示(n＝3)，*表示与对照组有显著性差异(P<0.05)；**表示与对照组有极显著差异(P<0.01)；
图6是本发明实施例6中Nicol1-17成熟肽腹腔注射对卵形鲳鲹摄食的影响，数值以平均值±标准误表示(n＝8)，**表示与对照组有极显著差异(P<0.01)。
具体实施方式
以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。
下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
下述实施方法中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规实验方法。
下述实施方法和实施例中所使用的术语，除非特殊说明，一般具有本领域的普通技术人员通常理解的含义。
实施例1
1.卵形鲳鲹脑总RNA的提取
使用MS-222麻醉卵形鲳鲹后解剖分离出大脑组织，经液氮速冻后保存于-80℃待用。
使用Trizol试剂法提取获得卵形鲳鲹大脑组织总RNA。
2.cDNA第一链的合成
取1μg卵形鲳鲹大脑总RNA样品进行DNA酶处理以除去基因组DNA的污染，使用PrimeScriptTM反转录试剂盒进行反转录制备cDNA，然后置于-20℃保存备用。
3.引物设计
通过对GenBank收录的同源物种预测的Nicol1 cDNA序列与卵形鲳鲹转录组数据库进行比对，鉴定出卵形鲳鲹Nicol1的高度保守区域，并使用NCBI网站的Primer-Blast工具设计全长引物用于基因亚克隆。
设计的引物如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示。
Nicol1-F：CATCGACTGATTGACGGTCAG(SEQ ID NO：5)
Nicol1-R：GATGGCAGCTGGACGTGTCCTC(SEQ ID NO：6)
4.卵形鲳鲹Nicol1基因cDNA序列的克隆
以合成的第一链cDNA作为模板，以上述引物进行PCR扩增。
PCR扩增程序为：94℃预变性2min，94℃30s，59℃30s，72℃30s，35个循环，72℃延伸10min。
用1.5％的琼脂糖凝胶电泳法鉴定扩增产物，将扩增产物纯化后连接到pEASY-T3载体，将连接产物转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中，在37℃条件下使用含氨苄的LB固体培养基培养，筛选阳性单克隆测序。
测序结果经BLAST比对分析，比对结果表明目的产物确为基因Nicol1。
5、Nicol1多肽的序列比对分析
通过对鱼类基因组和卵形鲳鲹转录组信息的分析比对，在多种鱼类中发现Nicol1基因的存在。根据获得的序列设计引物，使用分子克隆技术，在卵形鲳鲹中克隆得到Nicol1的开放阅读框(ORF)序列为273bp(包括终止密码子TGA)，编码90个氨基酸残基的多肽前体，计算分子量为9.697kDa，等电点为5.69。
使用SignalP网站工具预测信号肽，发现Nicol1多肽的N-端含有一条由25个氨基酸残基组成的信号肽。使用NeuroPred网站工具预测多肽前体的裂解位点，发现Nicol1多肽前体中含有两个预测的裂解位点，剪切修饰产生一条由17个氨基酸残基构成的成熟肽，将其命名为Nicol1-17。
具体如下所示：
卵形鲳鲹Nicol1 ORF序列和推导的氨基酸序列。信号肽用下划线表示；Nicol1-17成熟肽用阴影表示；方框表示预测的裂解位点。
序列比对分析表明，鱼类的Nicol1多肽前体与哺乳类的序列存在较大差异，在鱼类中高度保守。
获得的卵形鲳鲹促摄食新型多肽Nicol1，所述多肽Nicol1的氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示。
编码所述卵形鲳鲹促摄食新型多肽Nicol1的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQID NO：2所示。
鱼类Nicol1多肽前体包含1条信号肽和2个预测的裂解位点，剪切修饰产生一条含有17个氨基酸残基的成熟肽，将其命名为Nicol1-17(如图1所示)。
图1中物种间Nicol1的氨基酸多重比对，成熟肽用下划线表示，潜在的裂解位点用方框表示，从图1中可以得知卵形鲳鲹Nicol1与多种鱼类的Nicol1具有较高的同源性，预示着其在硬骨鱼中可能具有保守的功能。
所述多肽Nicol1的成熟肽Nicol1-17，其氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。
编码所述成熟肽Nicol1-17的核苷酸序列，所述核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。
实施例2卵形鲳鲹Nicol1基因的组织表达
使用Trizol试剂法从卵形鲳鲹的大脑、垂体、肝脏、肾脏、心脏、肌肉、肠道、脾脏、鳃和性腺等不同组织中提取总RNA，使用PrimeScriptTM反转录试剂盒进行反转录制备cDNA。用以上cDNA为模板进行RT-PCR扩增，以β-actin为内参。
PCR扩增程序为：94℃预变性2min，94℃30s，59℃30s，72℃30s，35个循环，72℃延伸10min。
产物使用1.5％的琼脂糖凝胶电泳进行检测，使用全自动数码凝胶成像分析系统(Tanon-1600，上海天能)对电泳结果进行拍照并进行半定量分析。
本实施例卵形鲳鲹Nicol1基因在雌雄各组织的表达分析如图2所示，Nicol1 mRNA在雌性和雄性卵形鲳鲹不同组织中的表达，β-actin作为内参基因，Br，大脑；Pi，垂体；Li，肝脏；Ki，肾脏；He，心脏；Mu，肌肉；In，肠道；Sp，脾脏；Gi，鳃；Go，性腺；Nc，阴性对照。
图2中的结果显示：雌性中Nicol1在大脑和卵巢中大量表达，在垂体和肌肉中表达较高，但在其他组织中表达较弱。雄性中Nicol1在大脑中的表达量较强，其次是垂体和心脏，但在其他组织中的表达量较弱。
从中显示出Nicol1具有明显的性别二态性和组织表达特异性。Nicol1在大脑和垂体中的高表达显示其在上游神经内分泌调控中发挥着重要的作用。
实施例3卵形鲳鲹Nicol1基因在饥饿过程的表达变化
将卵形鲳鲹(体重110±10g)随机分为5组(n＝8)，分别为投喂2天，禁食2天，投喂7天，禁食7天和复投喂7天。分别放入5个1m3的海水网箱中，持续供水，水温为29-31℃。以每餐约占体重2％的比例投喂商品饲料，每天上午9:00投喂一餐。驯化2周后，两组鱼投喂2天或7天，其余3组不投喂。试验期间喂食组和禁食组的鱼在2天后取样。禁食7天后，1个禁食组复投喂至饱腹。然后在喂食3小时后对喂食组、禁食组和复投喂组进行取样。取出每条鱼的下丘脑，放入生物样品稳定试剂中，然后将其保存在-20℃温度下，用于实时荧光定量PCR分析Nicol1在下丘脑中的表达变化。
用实时荧光定量PCR检测卵形鲳鲹下丘脑中Nicol1基因在饥饿过程的表达变化，如图3中所示。qPCR条件如下：95℃变性1min，然后95℃15s、60℃30s和72℃20s循环40次(荧光数据采集)。参考基因β-actin用于对表达值进行归一化处理。数值以平均值±标准误表示(n＝8)，*表示与对照组有显著性差异(P<0.05)。
图3中的结果表明：与对照组相比，禁食2天和7天后卵形鲳鲹下丘脑中Nicol1基因的表达水平显著升高。而禁食7天后复投喂的实验组的Nicol1表达量回归到对照组水平(*P<0.05)。这说明Nicol1多肽基因与卵形鲳鲹的摄食调控相关。
因此，可以将鱼类Nicol1多肽基因用于鱼类摄食调控中。
实施例4卵形鲳鲹Nicol1-17成熟肽在体注射对摄食调控的作用
采用腹腔注射方式研究化学合成的Nicol1-17成熟肽(SEQ ID NO：3)在卵形鲳鲹体内对摄食调控的影响。Nicol1-17成熟肽由吉尔生化有限公司(上海，中国)合成，其中N-端进行乙酰化处理，C-端进行酰胺化处理。对多肽的N-端进行乙酰化，对C-端进行酰胺化可以提高多肽的稳定性、生物活性和降低免疫原性，从而改善多肽的药物性质。经分析型高效液相色谱测定，合成多肽的纯度＞95％。
卵形鲳鲹饲养在流动海水的室内网箱中，海水温度为29℃-31℃。Nicol1-17多肽溶于生理盐水中。用100mg/L的MS-222(Sigma,美国)将鱼麻醉，分别腹腔注射1、10和100ng/g体重(ng/g body weight，ng/gbw)的Nicol1-17多肽。阴性对照组的鱼只注射生理盐水(0.8％NaCl)。注射3小时和6小时后分别对下丘脑和垂体进行取样。
采用qPCR方法检测了卵形鲳鲹下丘脑中AgRP、NPY和垂体中GHRHR、GH表达的影响。qPCR条件如下：95℃变性1min，然后95℃15s、60℃30s和72℃20s循环35次(荧光数据采集)。参考基因β-actin用于对表达值进行归一化处理。数值以平均值±标准误表示(n＝6)，*表示与对照组有显著性差异(P<0.05)；**表示与对照组有极显著差异(P<0.01)。
图4中的结果表明：向卵形鲳鲹腹腔注射Nicol1-17 3小时后，剂量为10ng/gbw和100ng/gbw时可显著刺激NPY的表达。而剂量为1ng/gbw和10ng/gbw时可显著刺激GHRHR的表达。腹腔注射Nicol1-17 6小时后，剂量为1ng/gbw时可显著刺激AgRP、GHRHR和GH的表达。而剂量为1ng/gbw、10ng/gbw和100ng/gbw时可显著刺激NPY的表达(图4)。NPY、AgRP、GHRHR和GH基因与摄食调控密切相关，可以在动物体内发挥促摄食作用。
上述结果表明，Nicol1-17可以在卵形鲳鲹体内与摄食调控关键因子NPY、AgRP、GHRHR和GH协同作用，共同发挥促摄食作用。
实施例5卵形鲳鲹Nicol1-17成熟肽离体孵育对摄食调控的作用
用100mg/L的MS-222(Sigma,美国)将卵形鲳鲹麻醉后分离下丘脑和垂体，用M-199培养基(Gibco，美国)洗涤三次。将下丘脑和垂体组织剪碎成小块并转移到12孔培养板中。每孔含有2mL M-199培养基，其中含有青霉素(100IU/mL)和链霉素(100μg/mL)。将培养基放入5％CO2加湿培养箱并在25℃预培养2小时后，换上含有不同剂量Nicol1-17多肽的培养基，包括0、0.1、1和10μM(n＝3)。体外培养3小时和6小时后收集样本，保存在-80℃温度下，通过qPCR进行基因表达检测。
qPCR条件如下：95℃变性1min，然后95℃15s、60℃30s和72℃20s循环35次(荧光数据采集)。参考基因β-actin用于对表达值进行归一化处理。数值以平均值±标准误表示(n＝3)，*表示与对照组有显著性差异(P<0.05)；**表示与对照组有极显著差异(P<0.01)。
图5中的结果表明：用Nicol1-17孵育下丘脑3小时后，1μM和10μM剂量的Nicol1-17可以刺激AGRP表达量显著上调。0.1μM、1μM和10μM剂量的Nicol1-17可以刺激NPY的表达量显著上调。用10μM的Nicol1-17孵育垂体3小时后，垂体中的GHRHR和GH mRNA表达水平显著升高。此外，用Nicol1-17孵育下丘脑6小时后，1μM和10μM剂量的Nicol1-17可以使AGRP表达量显著增加。10μM剂量的Nicol1-17可以刺激NPY mRNA表达量显著增加。对垂体孵育6小时后，剂量为1μM和10μM的Nicol1-17能显著刺激GHRHR和GH的表达上调。
总体而言，腹腔注射实验的结果与本研究的离体孵育实验结果基本一致。从体内和体外两个方面共同证明了Nicol1-17多肽可以和NPY、AgRP、GHRHR和GH协同作用，共同发挥促食欲功能。
实施例6卵形鲳鲹Nicol1-17成熟肽腹腔注射对卵形鲳鲹摄食的影响
将体重110±10g的卵形鲳鲹随机分配到海水网箱中，每个网箱1条卵形鲳鲹。卵形鲳鲹每天定时(上午9：00)投喂一次，食物投喂量约为体重的2％。驯养两周后开始正式实验。卵形鲳鲹用MS-222麻醉后，称量每组中个体体重(body weight,bw)，根据体重分别腹腔注射0.8％鱼类生理盐水(对照组)和1ng/gbw卵形鲳鲹Nicol1-17成熟肽(实验组)。注射3小时后，分别向每组卵形鲳鲹投喂固定重量的食物，让每组卵形鲳鲹自由摄食2小时。同时将等量的食物放入水中，以计算食物在水中2小时中的重量变化。将各组剩余的食物分别收集并烘干，根据剩余的食物的重量计算各组中单位体重卵形鲳鲹的摄食量。
Nicol1-17成熟肽腹腔注射对卵形鲳鲹摄食的影响如图6所示，数值以平均值±标准误表示(n＝8)，**表示与对照组有极显著差异(P<0.01)。
图6中结果表明：对照组每条鱼的平均摄食量为0.0263g/gbw；注射组每条鱼平均摄食量为0.0386g/gbw。注射组的摄食量高出对照组46.77％，显示出Nicol1-17成熟肽具有较强的促摄食作用(图6)。
因此，1ng/gbw的Nicol1-17成熟肽腹腔注射能够显著性增加卵形鲳鲹的摄食量(图6)。
从分子和实际应用的实践表明，Nicol1-17成熟肽具有促进摄食的生理功能。
所以，本实施例鱼类Nicol1多肽基因编码的成熟肽Nicol1-17可以用于促进鱼类摄食。
此外，由于Nicol1多肽是完整的多肽前体，而Nicol1-17成熟肽是这个多肽完成剪切修饰之后最终发挥作用的最小单位，只需要17个氨基酸就能发挥出它的作用，可以大大降低合成的成本与合成的难度。
进一步地，可以制作一种鱼类促摄食饲料，包含上述实施例1中的多肽Nicol1及编码多肽Nicol1的基因、上述实施例4中的成熟肽Nicol1-17及编码成熟肽Nicol1-17的核苷酸序列。
本发明鉴定了鱼类Nicol1基因编码的成熟肽Nicol1-17具有调节鱼类摄食的功能，并且可以和摄食调控关键因子NPY、AgRP、GHRHR和GH协同作用，共同发挥促摄食作用；这为开发出低成本的高效诱食剂，作为饲料添加剂，促进鱼类养殖等的发展具有广泛的应用价值。
以上实施例仅用于阐述本发明，而本发明的保护范围并非仅局限于以上实施例。所属技术领域的普通技术人员在不脱离本发明创造构思的前提下做出的改进和变形，均属于本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种卵形鲳鲹促摄食新型多肽Nicol1，其特征在于：所述多肽Nicol1的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.编码权利要求1所述卵形鲳鲹促摄食新型多肽Nicol1的基因，其特征在于：所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
3.权利要求1所述多肽Nicol1的成熟肽Nicol1-17，其特征在于：其氨基酸序列如SEQID NO：3所示。
4.编码权利要求3所述成熟肽Nicol1-17的核苷酸序列，其特征在于：所述核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。
5.权利要求1所述的多肽Nicol1或权利要求2所述的基因在鱼类摄食调节中的应用。
6.权利要求3所述的成熟肽Nicol1-17或权利要求4所述的核苷酸序列在鱼类摄食调节中的应用。
7.权利要求3所述的成熟肽Nicol1-17或权利要求4所述的核苷酸序列在制备鱼类人工饲料中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述的饲料能促进鱼类摄食。
9.一种鱼类促摄食饲料，其特征在于：包含权利要求1所述的多肽Nicol1、权利要求2所述的基因、权利要求3所述的成熟肽Nicol1-17或权利要求4所述的核苷酸序列。
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