CN117778504A - 一种抗氧化鹿心肽的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种抗氧化鹿心肽的制备方法，属于梅花鹿加工技术领域；包括步骤为：S1取鹿心，清洗至无血水，切小块后加入生理盐水后进行组织匀浆，制得浆液；S2向浆液中加入蛋白酶，充分酶解后，冷冻干燥后得到鹿心肽。本发明通过向鹿心中加入胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶中的任意一种，以对鹿心进行酶解，酶解后能够得到仍具有生物活性能力的鹿心肽，如具有较强的抗氧化性，进而能够使得到的鹿心肽广泛用于抗氧化产品中，为鹿心的深度加工以及利用提供了新的方向；此外，本发明在整个提取过程中没有进行任何除杂操作，能够极大程度简化提取工艺，节约成本，而在简化工艺的前提下，依然不会影响鹿心肽的正常生物活性。
Description
技术领域
本发明涉及梅花鹿加工技术领域，特别是一种抗氧化鹿心肽的制备方法。
背景技术
鹿心多指梅花鹿或马鹿的心脏，其中含有多种与鹿茸成分相同的较丰富的活性成分，如多种氨基酸、维生素、多肽蛋白等，是增强人体新陈代谢功能、改善心血管疾病和神经系统功能的良药。
梅花鹿心中含有丰富的蛋白质，是鹿心重要功能成分，在促进主要功能活性时发挥重要作用。
为了进一步开发梅花鹿心的功能，本发明提供一种抗氧化鹿心肽的制备方法，通过优化工艺条件和参数，以最大程度提高鹿心肽的收率。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抗氧化鹿心肽的制备方法，其直接以鹿心为提取对象，通过优化工艺条件及参数，能够最大程度提高鹿心经酶解后所得鹿心肽提取率，同时能够使得到的鹿心肽仍然具有有效的生物活性能力，如抗氧化能力。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一种抗氧化鹿心肽的制备方法，包括如下步骤：
S1取鹿心，清洗至无血水，切小块后加入生理盐水后进行组织匀浆，制得浆液；
S2向浆液中加入蛋白酶，充分酶解后，冷冻干燥得到鹿心肽；
所述蛋白酶为胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶中的任意一种。
作为本申请的一些可实施方式，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶。
作为本申请的一些可实施方式，所述木瓜蛋白酶的活力≥2000u/mg。
作为本申请的一些可实施方式，所述木瓜蛋白酶的酶解条件如下：
水解温度为50-60℃；PH为7；底物浓度为10mg/ml；酶用量与鹿心质量比为10：1；酶解时间为6.5-7.5h。
作为本申请的一些可实施方式，所述木瓜蛋白酶的水解温度为55℃；酶解时间为7h。
相较现有技术，本发明的有益效果是：
1.本发明通过向鹿心中加入胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶中的任意一种，能够对鹿心进行酶解，以得到仍具有生物活性能力的鹿心肽，如具有较强的抗氧化能力，进而能够使得到的鹿心肽广泛用于抗氧化产品中，为鹿心的深度加工以及利用提供了新的方向；此外，本发明在整个提取过程中没有进行任何除杂操作，能够极大程度简化提取工艺，节约成本，而在简化工艺的前提下，依然不会影响鹿心肽的正常生物活性。
2.本发明通过在鹿心肽的提取工艺中加入木瓜蛋白酶，通过对木瓜蛋白酶的酶解条件进行优化，能够极大程度提高鹿心水解度，以及提高经酶解后所得鹿心肽提取率，经实验知，鹿心经木瓜蛋白酶水解7h，能够使鹿心水解度达到19.35％，鹿心肽收率达到32.026％；同时，经木瓜蛋白酶水解7h的鹿心肽的抗氧化能力极强，氧化能力远远高于经胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶水解后的鹿心肽。
附图说明
图1为DPPH自由基清除实验图；
图2为ABTS自由基清除实验图；
图3为羟基自由基清除实验图；
图4为SOD检测图；
图5为MDA检测图。
具体实施方式
下面将对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
一种抗氧化鹿心肽的制备方法，包括如下步骤：
S1取鹿心，清洗至无血水，切小块后加入生理盐水后进行组织匀浆，制得浆液；
S2向浆液中加入蛋白酶，充分酶解后，冷冻干燥得到鹿心肽；
其中，所述蛋白酶为胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶中的任意一种。
对梅花鹿心中的主要成分进行分析，结果发现，梅花鹿心中主要含有梅花鹿心干物质、粗蛋白、粗脂肪和粗灰分；通过对梅花鹿心中的组分进行分析，结果显示，梅花鹿心中粗蛋白含量占比最高为81.99±1.35(％in DM)，可知其蛋白质含量较为丰富，是鹿心重要功能成分，在促进主要功能活性时发挥重要作用。本发明通过向鹿心浆液中加蛋白酶(胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶中的任意一种)，能够对鹿心蛋白质进行水解，以得到鹿心肽。将水解后的鹿心肽分别进行DPPH、ABTS自由基清除活性、羟基自由基清除活性的体外抗氧化能力测定，结果显示，得到的鹿心肽在DPPH、ABTS自由基清除活性、羟基自由基清除活性试验中均具有一定的抗氧化能力。
本发明在整个提取过程中无需对鹿心中的其他组分，如干物质、粗脂肪和粗灰分进行除杂，极大程度简化了工艺，在简化工艺的基础上，只需要添加上述任意蛋白酶，即可实现有效提取鹿心肽和使提取得的鹿心肽具有较强抗氧化性的目的。
为了进一步提高鹿心肽的得率以及提高鹿心肽的抗氧化能力，作为本申请的一些可实施方式，对蛋白酶的种类作出了进一步限定，即蛋白酶为木瓜蛋白酶。木瓜蛋白酶相较其他几种蛋白酶，能够使鹿心的水解度和鹿心肽的收率均处于较高水平。
为了进一步提高鹿心肽的得率以及提高鹿心肽的抗氧化能力，作为本申请的一些可实施方式，对木瓜蛋白酶的酶活力作出了进一步限定，即所述木瓜蛋白酶的活力≥2000u/mg。
为了进一步提高鹿心肽的得率以及提高鹿心肽的抗氧化能力，作为本申请的一些可实施方式，对木瓜蛋白酶的酶解条件作出了进一步限定，即水解温度为50-60℃；PH为7；底物浓度为10mg/ml；酶用量与鹿心质量比为10：1；酶解时间为6.5-7.5h。
为了进一步提高鹿心肽的得率以及提高鹿心肽的抗氧化能力，作为本申请的一些可实施方式，对木瓜蛋白酶的酶解条件作出了进一步限定，即木瓜蛋白酶的水解温度为55℃；酶解时间为7h。
下面结合具体实施方式对本申请中鹿心肽的制备方法进行更进一步的详细说明。
实施例1
S1取鹿心清洗至无血水后切小块。其后，称取10份切小块后的鹿心，加入90份的生理盐水进行组织匀浆，制得浆液，其后在2500-3500r/min的速度下离心30-35min，取上清；
S2向上清液中加入蛋白水解酶，充分酶解后，冷冻干燥得到鹿心肽。
其中，上述步骤S2进行酶解时，将上清液分为4组，每组设置5个样品。
每组中的样品均加入同一种酶，每组中的5个样品分别进行3H、5H、7H、9H、24H的酶解。
其中，4组样品中的酶分别为胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶。
在实际酶解时，为了最大程度提高上述蛋白酶的酶解能力，需要限定各种蛋白酶的酶活力以及酶解条件，具体如下：
胰蛋白酶的活力为≥2500u/mg，本实施例中胰蛋白酶的活力为6000u/mg。
酶解条件如下：
水解温度为37℃；PH为8；底物浓度10mg/ml；酶用量与鹿心质量比为10：1。
木瓜蛋白酶的活力≥2000u/mg；本实施例中胰蛋白酶的活力为5000u/mg。
酶解条件如下：
水解温度为55℃；PH为7；底物浓度为10mg/ml；酶用量与鹿心质量比为10：1。
胃蛋白酶的活力为pepsin1：15000；
酶解条件如下：
水解温度为37℃；PH：2；底物浓度10mg/ml；酶用量与鹿心质量比为10：1。
中性蛋白酶活力为50u/mg；
酶解条件如下：
水解温度为50℃；PH：7；底物浓度为10mg/ml；酶用量与鹿心质量比为10：1。
酶解后，20个样品的收率和水解度如表1所示：
表1：
通过表1可知：木瓜蛋白酶在水解7h的收率最高，为32.026％；木瓜蛋白酶在水解7H时水解度为19.35％，在水解24h时，水解度达20.11％，但是即使增加了十几小时的酶解时间，整体水解度没有明显的提升，考虑到鹿心肽的收率以及综合水解度，木瓜蛋白酶在水解7h酶解达最佳。
实验例1
将上述20个样品分别进行DPPH、ABTS自由基清除活性、羟基自由基清除活性的体外抗氧化能力测定，样品浓度为1mg/ml，测定结果分别如图1-3所示。
通过图1-3可知：鹿心经不同酶及不同酶解时间所得鹿心肽均具有一定抗氧化能力，其中木瓜蛋白酶酶解7H所得鹿心肽分别在DPPH、ABTS自由基清除活性、羟基自由基清除活性试验中抗氧化能力最强。本试验表明，鹿心酶解所得鹿心肽抗氧化能力最高的条件为木瓜蛋白酶酶解7H。
实验例2
LPS处理RAW267.4细胞后，将细胞分为20组，分别添加上述经不同酶、不同酶解时间所得鹿心肽样品，进行细胞培养，收集对应细胞样品，进行细胞中氧化应激标记物SOD、MDA试剂盒测定，结果分别如图4和图5所示。
通过图4可知：不同酶解物处理组SOD含量均升高。其中，木瓜蛋白酶7小时提取物含量升高最为显著。
通过图5可知：不同酶解物处理组MDA含量均降低。其中，木瓜蛋白酶7小时提取物含量降低最为显著。
本试验表明：木瓜蛋白酶7小时提取物可降低细胞内氧化应激的产生，起到抗氧化效果。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。
Claims (5)
1.一种抗氧化鹿心肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1取鹿心，清洗至无血水，切小块后加入生理盐水后进行组织匀浆，制得浆液；
S2向浆液中加入蛋白酶，充分酶解后，冷冻干燥后得到鹿心肽。
2.根据权利要求1所述的一种抗氧化鹿心肽的制备方法，其特征在于，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶。
3.根据权利要求2所述的一种抗氧化鹿心肽的制备方法，其特征在于，所述木瓜蛋白酶的活力≥2000u/mg。
4.根据权利要求2所述的一种抗氧化鹿心肽的制备方法，其特征在于，所述木瓜蛋白酶
的酶解条件如下：
水解温度为50-60℃；PH为7；底物浓度为10mg/ml；酶用量与鹿心质量比为10：1；酶解时间为6.5-7.5h。
5.根据权利要求4所述的一种抗氧化鹿心肽的制备方法，其特征在于，木瓜蛋白酶的水解温度为55℃；酶解时间为7h。
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