CN117741159A - 幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒及其应用 - Google Patents
幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117741159A CN117741159A CN202311741131.0A CN202311741131A CN117741159A CN 117741159 A CN117741159 A CN 117741159A CN 202311741131 A CN202311741131 A CN 202311741131A CN 117741159 A CN117741159 A CN 117741159A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- helicobacter pylori
- magnetic bead
- sealing
- kit
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 title claims abstract description 63
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 title claims abstract description 63
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 title claims abstract description 58
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 47
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims abstract description 98
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims abstract description 72
- 239000012224 working solution Substances 0.000 claims abstract description 51
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 49
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 49
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims abstract description 32
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 26
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 19
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 6
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229930003756 Vitamin B7 Natural products 0.000 claims abstract description 4
- 239000011735 vitamin B7 Substances 0.000 claims abstract description 4
- 235000011912 vitamin B7 Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 28
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 15
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 15
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 claims description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 8
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 7
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 6
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 5
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 5
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 5
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 5
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 5
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 claims description 4
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 2
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 19
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 13
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 12
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 10
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 206010019375 Helicobacter infections Diseases 0.000 description 5
- 101100476480 Mus musculus S100a8 gene Proteins 0.000 description 5
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 4
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 101710112752 Cytotoxin Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 208000008469 Peptic Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 208000032369 Primary transmission Diseases 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000023652 chronic gastritis Diseases 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000001056 green pigment Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- -1 instruments Substances 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 208000011906 peptic ulcer disease Diseases 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 101150080234 vacA gene Proteins 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及化学发光体外检测技术领域，具体公开了幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒及其应用，包括校准品、酶工作液、分析缓冲液和磁珠工作液；所述磁珠工作液中的磁珠在包被过程中添加有封闭液1和封闭液2，所述封闭液1为维生素H，所述封闭液2为生物素化BSA。本发明的试剂盒采用双抗原夹心法检测人血清或血浆中的幽门螺杆菌尿素酶抗体，并通过在磁珠工作液中同时添加封闭液1和封闭液2，能降低幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒假阳率，提高试剂盒准确度，并且该试剂盒可用于快速大批量幽门螺杆菌尿素酶抗体的检测。
Description
技术领域
本发明涉及化学发光体外检测技术领域，具体涉及幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒及其应用。
背景技术
幽门螺杆菌(HP)是革兰阴性杆菌，外观为S型弯曲或弧形。唾液传播是主要的传播方式和途径。流行病学研究显示，HP是全球感染率最高的细菌之一，全球大约50％的人都携带有HP，其与消化道疾病关系密切，如慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌等。可致癌HP主要含有两种细胞毒素：一种是细胞毒素相关蛋白CagA，一种是空泡细胞毒素VacA。CagA通过依赖或不依赖酪氨酸磷酸化调控细胞增殖和分化，并能够引起胃上皮细胞发生转化而诱发癌变；VacA具有多种生物学活性，可诱导细胞空泡样变性和致细胞凋亡，也可通过多种信号通路发挥细胞毒作用，损伤机体。根据是否表达CagA和VacA将HP分为两种类型：I型为致病性较强的产毒菌株(CagA和VacA均表达，或表达其中一种)，其检出率约占总HP感染的50％-60％，这类菌株感染菌会直接影响有机体广泛组织炎症，并直接导致溃疡等各种上消化道系统的发生。II型为毒性较弱的不产毒菌株(CagA和VacA均不表达)，这一类HP菌株毒性较小，其不会产生细胞毒素菌株，细菌的致病力比较小，一旦有机体感染后大多会导致慢性浅表性胃炎等轻度疾病。故而，并不是所有的幽门螺杆菌均有较强的致病力，在临床治疗中将幽门螺杆菌阳性作为抗生素治疗的指标会直接导致耐药菌产生，造成过度医疗。因此，抗体分型检测有助于辅助诊断幽门螺杆菌感染，提高诊断水平，值得临床推广。
目前，幽门螺杆菌尿素酶抗体检测采用免疫印迹法、量子点免疫荧光层析技术，现有技术无法满足快速大批量的临床样本的检测，因此，本领域迫切需要一种能够快速检测、准确度高的新型幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒。
发明内容
本发明的目的在于提供幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒及其应用，采用双抗原夹心法检测人血清或血浆中的幽门螺杆菌尿素酶抗体，并通过在磁珠工作液中同时添加封闭液1和封闭液2，能降低幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒假阳率，提高试剂盒准确度，并且该试剂盒可用于快速大批量幽门螺杆菌尿素酶抗体的检测。
本发明通过下述技术方案实现：
幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒，包括校准品、酶工作液、分析缓冲液和磁珠工作液；
所述磁珠工作液中的磁珠在包被过程中添加有封闭液1和封闭液2，所述封闭液1为维生素H，所述封闭液2为生物素化BSA。
本发明中使用的磁珠工作液含有封闭液1和封闭液2，磁珠工作液中的封闭液1和封闭液2同时作用能够降低假阳率，提高检测准确度。
进一步地，磁珠工作液中，封闭液1的包被量为50μL/mg，封闭液2的包被量大于1μg/mg。
进一步地，磁珠工作液中，封闭液2的包被量为1μg/mg-4μg/mg。
进一步地，磁珠工作液中，封闭液2的包被量为2μg/mg。
封闭液2包被量为1μg/mg的磁珠工作液的试剂盒检测样本的阴性符合率为95％、阳性符合率100％，假阳率为4％；封闭液2包被量为2μg/mg的磁珠工作液的试剂盒检测样本的阴性符合率为100％、阳性符合率100％，无假阳；封闭液2包被量为4μg/mg的磁珠工作液的试剂盒检测样本的阴性符合率为100％、阳性符合率100％，无假阳，基于成本等综合考虑，封闭液2的包被量为2μg/mg为最优技术方案。
进一步地，磁珠工作液包括以下组分：
生物素化的幽门螺杆菌尿素酶抗原包被的链霉亲和素磁珠、封闭液1、封闭液2和磁珠缓冲液。
进一步地，磁珠缓冲液包括以下组分：
Tris、NaCl、盐酸、蔗糖、BSA、PC-950和Tween-20。
进一步地，分析缓冲液为含蛋白的缓冲液。
进一步地，酶工作液为含蛋白的缓冲液和酶标抗体的混合溶液。
幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒在检测血清或血浆中幽门螺杆菌尿素酶抗体的应用。
幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒在化学发光免疫分析仪上的应用。
本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：
1、本发明幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒，采用双抗原夹心法检测人血清或血浆中的Urease(幽门螺杆菌)抗体，能够实现大量临床样本的快速检测，并对幽门螺杆菌感染及患者感染幽门螺杆菌的类型进行辅助诊断。
2、本发明提供的幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒，通过在磁珠工作液中同时添加封闭液1和具有一定包被量的封闭液2，能够有效的降低样本假阳率，提高尿素酶抗体检测的准确性。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定，以下所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
在以下描述中，为了提供对本发明的透彻理解阐述了大量特定细节。然而，对于本领域普通技术人员显而易见的是：不必采用这些特定细节来实行本发明。在其他实施例中，为了避免混淆本发明，未具体描述公知的结构、材料或方法。以下实施例中所使用的材料、仪器和试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例中所使用的技术手段，如无特殊说明，均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
目前，幽门螺杆菌尿素酶抗体检测采用免疫印迹法、量子点免疫荧光层析技术，现有技术无法满足快速大批量的临床样本的检测，为解决该问题，本实施例提供一种幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒，包括校准品、酶工作液、分析缓冲液和磁珠工作液。
所述磁珠工作液中的磁珠在包被过程中添加有封闭液1和封闭液2，所述封闭液1为维生素H，所述封闭液2为生物素化BSA。
其中，磁珠工作液中，封闭液1的包被量为50μL/mg，封闭液2的包被量大于1μg/mg。更为具体地，所述磁珠工作液中，封闭液2的包被量为1μg/mg-4μg/mg。
具体地，所述磁珠工作液包括以下组分：
生物素化的幽门螺杆菌尿素酶抗原包被的链霉亲和素磁珠、封闭液1、封闭液2和磁珠缓冲液。其中，所述磁珠缓冲液包括以下组分：Tris、NaCl、盐酸、蔗糖、BSA、PC-950和Tween-20。
其中，分析缓冲液为含蛋白的缓冲液。
其中，酶工作液为含蛋白的缓冲液和酶标抗体的混合溶液。
在一个优选案例中，磁珠工作液中，封闭液2的包被量为2μg/mg。
本实施例所提供的幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒采用双抗原夹心法检测人血清或血浆中的幽门螺杆菌抗体，并通过在磁珠工作液中同时添加封闭液1和封闭液2，能降低幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒假阳率，提高试剂盒准确度，并且该试剂盒可用于快速大批量幽门螺杆菌尿素酶抗体的检测。
本实施例所提供的幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒在检测血清或血浆中幽门螺杆菌尿素酶抗体的应用。
本实施例所提供的幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒在化学发光免疫分析仪上的应用。
实施例1：
一种幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒，包括校准品、酶工作液、分析缓冲液和磁珠工作液；
所述分析缓冲液为含蛋白的缓冲液，具体由12.11g/L Tris、27.00g/L NaCl、约5.4mL/L浓HCl、20.00g/L蔗糖、10.00g/L BSA、1mL/L PC-950和0.5mL/L Tween 20组成。
所述酶工作液为含蛋白的缓冲液和酶标抗体的混合溶液，具体由12.11g/L Tris、9.00g/L NaCl、约5.4mL/L浓HCl、10.00g/L海藻糖、0.05g/L果绿色素、5.00g/L BSA、5.00g/L酪蛋白、0.1mL/L TX-100、3mL/L PC-300、10mL/L丙三醇和1mg/μg碱性磷酸酶标记的幽门螺杆菌尿素酶抗原组成。
所述磁珠工作液中包括以下组分：生物素化的幽门螺杆菌尿素酶抗原(大肠杆菌)包被的链霉亲和素磁珠、封闭液1、封闭液2、磁珠缓冲液。
具体地，磁珠缓冲液由12.11g/L Tris、27.00g/L NaCl、约5.4mL/L浓HCl、20.00g/L蔗糖、10.00g/L BSA、1mL/L PC-950和0.5mL/L Tween 20组成。
本实施例中，磁珠工作液中，封闭液1的包被量为50μL/mg，封闭液2的包被量为2μg/mg。
磁珠工作液的制备方法为：取链霉亲和素磁珠，沉降后弃去上清，用磁珠缓冲液以1:1体积比3次清洗后再用磁珠缓冲液1:1悬浮，向其中加生物素化的幽门螺杆菌尿素酶抗原(大肠杆菌)，加入的生物素化的幽门螺杆菌尿素酶抗原(大肠杆菌)和磁微粒的质量比为1:100，室温反应30min；再加入磁珠封闭液2，磁珠封闭液2与磁微粒的质量比为1:500，室温反应30min；再加入磁珠封闭液1，磁珠封闭液1加入的体积与磁微粒的质量比为1:20，室温反应30min；再次用磁珠缓冲液以1:1体积比3次清洗，清洗后重悬磁微粒，重悬后使磁微粒的工作浓度为0.2mg/mL。
实施例2：
本实施例基于实施例1，与实施例1的区别在于：
封闭液2的包被量为1μg/mg。
磁珠工作液的制备方法为：取链霉亲和素磁珠，沉降后弃去上清，用磁珠缓冲液以1:1体积比3次清洗后再用磁珠缓冲液1:1悬浮，向其中加生物素化的幽门螺杆菌尿素酶抗原(大肠杆菌)，加入的生物素化的幽门螺杆菌尿素酶抗原(大肠杆菌)和磁微粒的质量比为1:100，室温反应30min；再加入磁珠封闭液2，磁珠封闭液2与磁微粒的质量比为1:1000，室温反应30min；再加入磁珠封闭液1，磁珠封闭液1加入的体积与磁微粒的质量比为1:20，室温反应30min；再次用磁珠缓冲液以1:1体积比3次清洗，清洗后重悬磁微粒，重悬后使磁微粒的工作浓度为0.2mg/mL。
实施例3：
本实施例基于实施例1，与实施例1的区别在于：
封闭液2的包被量为4μg/mg。
磁珠工作液的制备方法为：取链霉亲和素磁珠，沉降后弃去上清，用磁珠缓冲液以1:1体积比3次清洗后再用磁珠缓冲液1:1悬浮，向其中加生物素化的幽门螺杆菌尿素酶抗原(大肠杆菌)，加入的生物素化的幽门螺杆菌尿素酶抗原(大肠杆菌)和磁微粒的质量比为1:100，室温反应30min；再加入磁珠封闭液2，磁珠封闭液2与磁微粒的质量比为1:250，室温反应30min；再加入磁珠封闭液1，磁珠封闭液1加入的体积与磁微粒的质量比为1:20，室温反应30min；再次用磁珠缓冲液以1:1体积比3次清洗，清洗后重悬磁微粒，重悬后使磁微粒的工作浓度为0.2mg/mL。
对比例1：
本对比例基于实施例1，与实施例1的区别在于：
磁珠工作液中不含封闭液2。
磁珠工作液的制备方法为：取链霉亲和素磁珠，沉降后弃去上清，用磁珠缓冲液以1:1体积比3次清洗后再用磁珠缓冲液1:1悬浮，向其中加生物素化的幽门螺杆菌尿素酶抗原(大肠杆菌)，加入的生物素化的幽门螺杆菌尿素酶抗原(大肠杆菌)和磁微粒的质量比为1:100，室温反应30min；再加入磁珠封闭液1，磁珠封闭液1加入的体积与磁微粒的质量比为1:20，室温反应30min；再次用磁珠缓冲液以1:1体积比3次清洗，清洗后重悬磁微粒，重悬后使磁微粒的工作浓度为0.2mg/mL。
进行以下试验来说明本发明的技术效果：
实验一：不加封闭液2的磁珠工作液、添加封闭液2的磁珠工作液在同等情况下，人血清样本检测比较实验。
实验材料：BNHS，0.2mol/L PBS(PH7.4)缓冲液，1mmol/L Tris缓冲液，幽门螺杆菌尿素酶抗原(大肠杆菌)，含有1％BSA的缓冲液Buffer，碱性磷酸酶标记的幽门螺杆菌尿素酶抗原，链霉亲和素磁珠，分别用不加封闭液2的磁珠工作液、添加封闭液2的磁珠工作液、幽门螺杆菌尿素酶抗体校准品C0,C1(C0,C1的信号值分别为7000、1000000)，样本Y1-Y50，底物液，清洗液，沃文特生物全自动化学发光免疫分析仪LA2000。
分析缓冲液，磁珠工作液、酶工作液共同组成试剂盒，校准品校准系统后，与比对厂家试剂盒同时测定血清样本Y1-Y50。
本试剂盒体系反应模式：先加入校准品或待测样本10μL，再依次加入分析缓冲液50μL、酶工作液50μL和磁珠工作液50μL，37℃共同孵育20min后，加入清洗液在磁场中清洗分离三次后，加入底物液37℃孵育5min于沃文特生物全自动化学发光免疫分析仪LA2000上检测，得到化学发光的信号值，沃文特生物全自动化学发光免疫分析仪LA2000仪器自带软件计算检测结果，判断阴阳性。
实验结果如表1所示：
表1
备注：“+”为阳性，“-”为阴性。
从表1数据可以看出，不加封闭液2的磁珠工作液的试剂盒检测样本的阴性符合率为93％、阳性符合率100％，假阳率为6％；添加封闭液2的磁珠工作液的试剂盒检测样本的阴性符合率为100％、阳性符合率100％，无假阳。以上数据表明，添加封闭液2的磁珠工作液对于假阳性现象具有明显改善效果。
实验二：不同浓度的封闭液2的磁珠工作液对样本测定比较实验。
按实施例1、实施例2、实施例3的方法对封闭液2浓度进行调节，观察其样本测定情况。
取样本Y1-Y50进行检测，结果见表2。
表2
备注：“+”为阳性，“-”为阴性。
从表2数据可以看出，封闭液2包被量为1μg/mg的磁珠工作液的试剂盒检测样本的阴性符合率为95％、阳性符合率100％，假阳率为4％；封闭液2包被量为2μg/mg的磁珠工作液的试剂盒检测样本的阴性符合率为100％、阳性符合率100％，无假阳；封闭液2包被量为4μg/mg的磁珠工作液的试剂盒检测样本的阴性符合率为100％、阳性符合率100％，无假阳。以上数据表明，封闭液2包被量为2μg/mg及4μg/mg的磁珠工作液对于假阳性现象具有明显改善效果。且考虑到封闭液包被量过高对样本检测可能会出现某些干扰，因此选择封闭液2包被量为2μg/mg。
综上，幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒在磁珠工作液中添加包被量为2μg/mg封闭液2能有效降低假阳率，提高提高尿素酶抗体检测的准确性，此外，该试剂盒能够实现大量临床样本的快速检测，并对幽门螺杆菌感染及患者感染幽门螺杆菌的类型进行辅助诊断。
以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒，其特征在于，包括校准品、酶工作液、分析缓冲液和磁珠工作液；
所述磁珠工作液中的磁珠在包被过程中添加有封闭液1和封闭液2，所述封闭液1为维生素H，所述封闭液2为生物素化BSA。
2.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠工作液中，封闭液1的包被量为50μL/mg，封闭液2的包被量大于1μg/mg。
3.根据权利要求2所述幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠工作液中，封闭液2的包被量为1μg/mg-4μg/mg。
4.根据权利要求3所述幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠工作液中，封闭液2的包被量为2μg/mg。
5.根据权利要求1所述幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠工作液包括以下组分：
生物素化的幽门螺杆菌尿素酶抗原包被的链霉亲和素磁珠、封闭液1、封闭液2和磁珠缓冲液。
6.根据权利要求5所述幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠缓冲液包括以下组分：
Tris、NaCl、盐酸、蔗糖、BSA、PC-950和Tween-20。
7.根据权利要求1-6任一项所述幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒，其特征在于，所述分析缓冲液为含蛋白的缓冲液。
8.根据权利要求1-6任一项所述幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒，其特征在于，所述酶工作液为含蛋白的缓冲液和酶标抗体的混合溶液。
9.如权利要求1-8任一项所述幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒在检测血清或血浆中幽门螺杆菌尿素酶抗体的应用。
10.如权利要求1-8任一项所述幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒在化学发光免疫分析仪上的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311741131.0A CN117741159A (zh) | 2023-12-18 | 2023-12-18 | 幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311741131.0A CN117741159A (zh) | 2023-12-18 | 2023-12-18 | 幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117741159A true CN117741159A (zh) | 2024-03-22 |
Family
ID=90280590
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311741131.0A Pending CN117741159A (zh) | 2023-12-18 | 2023-12-18 | 幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117741159A (zh) |
-
2023
- 2023-12-18 CN CN202311741131.0A patent/CN117741159A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fung et al. | Candida detection system (CAND-TEC) to differentiate between Candida albicans colonization and disease | |
| KR101669918B1 (ko) | 사람 체액 중의 시스타틴 ｃ의 측정방법 | |
| Schembri et al. | Comparison of commercial diagnostic tests for Helicobacter pylori antibodies | |
| AU2016342268B2 (en) | Improved methods and devices for accurate diagnosis of infections | |
| CN111175505B (zh) | 一种p53自身抗体检测试剂盒及其应用 | |
| CN111426830A (zh) | 联合诊断covid-19和肺炎支原体的胶体金免疫层析检测试纸及其制备方法 | |
| CN112409462B (zh) | 一种SARS-CoV-2特异性抗原和SARS-COV-2免疫球蛋白的检测试剂盒 | |
| CN111812336A (zh) | 用于检测冠状病毒抗体的检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN202916286U (zh) | 一种定量检测降钙素原pct的胶乳增强免疫比浊试剂盒 | |
| CN110988342B (zh) | 幽门螺杆菌磁微粒化学发光法检测试剂 | |
| CN117187189B (zh) | 一种用于检测乌司奴单抗的杂交瘤细胞株组合和抗体组合及其应用 | |
| CN117741159A (zh) | 幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒及其应用 | |
| CN112255404B (zh) | 一种稳定的血清胃蛋白酶原ii测定试剂盒及其制备方法和应用 | |
| CN115480058A (zh) | 幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白抗体检测试剂盒 | |
| Kuo et al. | Evaluation of urine ELISA test for detecting Helicobacter pylori infection in Taiwan: a prospective study | |
| KR20210144562A (ko) | Covid-19의 급성 호흡기 증후군 바이오마커 검출용 조성물 및 키트 | |
| US20040219540A1 (en) | Method for detecting pancreatic and gastro-intestinal illnesses | |
| CN112129933B (zh) | 一种免疫分析系统中抗生物素干扰的试剂、试剂盒及方法 | |
| WO1998055871A1 (en) | METHOD FOR DETECTING INFECTION WITH ENTEROHEMORRHAGIC $i(ESCHERICHIA COLI) | |
| CN114660292A (zh) | 检测c5补体的试剂盒及其检测方法和用途 | |
| CN114113591B (zh) | 一种灵敏检测大肠杆菌o157:h7的酶联免疫方法 | |
| CN112255405B (zh) | 一种稳定的血清胃蛋白酶原ⅰ测定试剂盒及其制备方法和应用 | |
| CN117805368A (zh) | 一种幽门螺杆菌空泡细胞毒素抗体检测试剂盒 | |
| CN112444626B (zh) | 一种非洲猪瘟病毒抗体elisa检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN115947842A (zh) | 用于检测白介素6的抗体组合及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |