CN117736222A - 具有三环或四环并环结构的mta协同性prmt5抑制剂化合物 - Google Patents
具有三环或四环并环结构的mta协同性prmt5抑制剂化合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117736222A CN117736222A CN202311132886.0A CN202311132886A CN117736222A CN 117736222 A CN117736222 A CN 117736222A CN 202311132886 A CN202311132886 A CN 202311132886A CN 117736222 A CN117736222 A CN 117736222A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mmol
- compound
- ethyl acetate
- give
- carbonitrile
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 322
- 229940125897 PRMT5 inhibitor Drugs 0.000 title claims abstract description 10
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 title abstract description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 57
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 27
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 11
- -1 hydrate Substances 0.000 claims description 365
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 340
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 106
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 56
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 49
- 239000012453 solvate Substances 0.000 claims description 39
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 38
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 claims description 36
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 claims description 36
- 102100034607 Protein arginine N-methyltransferase 5 Human genes 0.000 claims description 35
- 101710084427 Protein arginine N-methyltransferase 5 Proteins 0.000 claims description 35
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 32
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 claims description 29
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 26
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 26
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 25
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 claims description 25
- 125000006552 (C3-C8) cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 24
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 claims description 24
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 23
- 125000000000 cycloalkoxy group Chemical group 0.000 claims description 22
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 22
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 19
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 19
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims description 18
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 15
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 claims description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 13
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 13
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 9
- 102100034187 S-methyl-5'-thioadenosine phosphorylase Human genes 0.000 claims description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 7
- 125000004008 6 membered carbocyclic group Chemical group 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 6
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 5
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 claims description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 5
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 5
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims description 5
- 101100434927 Caenorhabditis elegans prmt-5 gene Proteins 0.000 claims description 4
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 4
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 3
- 125000000592 heterocycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006332 Choriocarcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007990 Giant Cell Tumor of Tendon Sheath Diseases 0.000 claims description 2
- 206010066476 Haematological malignancy Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 2
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 201000008754 Tenosynovial giant cell tumor Diseases 0.000 claims description 2
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005188 adrenal gland cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011243 gastrointestinal stromal tumor Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010044412 transitional cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 101710136206 S-methyl-5'-thioadenosine phosphorylase Proteins 0.000 claims 1
- 201000005179 adrenal carcinoma Diseases 0.000 claims 1
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1107
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 412
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 314
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 271
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 249
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 236
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 207
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 203
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 190
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 188
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 176
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical class O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 144
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 143
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 141
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 140
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 131
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 105
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 103
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 91
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 84
- 239000000047 product Substances 0.000 description 80
- PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N N-bromosuccinimide Chemical compound BrN1C(=O)CCC1=O PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 68
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 66
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 58
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 54
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 49
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- JFDZBHWFFUWGJE-UHFFFAOYSA-N benzonitrile Chemical compound N#CC1=CC=CC=C1 JFDZBHWFFUWGJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 47
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 46
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 44
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 43
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 42
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 42
- HJUGFYREWKUQJT-UHFFFAOYSA-N tetrabromomethane Chemical compound BrC(Br)(Br)Br HJUGFYREWKUQJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical class [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 229910000024 caesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 38
- FJDQFPXHSGXQBY-UHFFFAOYSA-L caesium carbonate Chemical compound [Cs+].[Cs+].[O-]C([O-])=O FJDQFPXHSGXQBY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 37
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 36
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 35
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 35
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 32
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 26
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 125000001820 oxy group Chemical group [*:1]O[*:2] 0.000 description 26
- MUJIDPITZJWBSW-UHFFFAOYSA-N palladium(2+) Chemical compound [Pd+2] MUJIDPITZJWBSW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 25
- KTWOOEGAPBSYNW-UHFFFAOYSA-N ferrocene Chemical compound [Fe+2].C=1C=C[CH-]C=1.C=1C=C[CH-]C=1 KTWOOEGAPBSYNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 24
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 23
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 21
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- GTCAXTIRRLKXRU-UHFFFAOYSA-N methyl carbamate Chemical compound COC(N)=O GTCAXTIRRLKXRU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- PIBWKRNGBLPSSY-UHFFFAOYSA-L palladium(II) chloride Chemical compound Cl[Pd]Cl PIBWKRNGBLPSSY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 18
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 16
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 14
- OKKJLVBELUTLKV-VMNATFBRSA-N methanol-d1 Chemical compound [2H]OC OKKJLVBELUTLKV-VMNATFBRSA-N 0.000 description 14
- LQZMLBORDGWNPD-UHFFFAOYSA-N N-iodosuccinimide Substances IN1C(=O)CCC1=O LQZMLBORDGWNPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 13
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 13
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 13
- LFKDJXLFVYVEFG-UHFFFAOYSA-N tert-butyl carbamate Chemical compound CC(C)(C)OC(N)=O LFKDJXLFVYVEFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- ZCSHNCUQKCANBX-UHFFFAOYSA-N lithium diisopropylamide Chemical compound [Li+].CC(C)[N-]C(C)C ZCSHNCUQKCANBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 12
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 12
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 11
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- GPAYUJZHTULNBE-UHFFFAOYSA-N diphenylphosphine Chemical compound C=1C=CC=CC=1PC1=CC=CC=C1 GPAYUJZHTULNBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- CRHWEIDCXNDTMO-UHFFFAOYSA-N ditert-butylphosphane Chemical compound CC(C)(C)PC(C)(C)C CRHWEIDCXNDTMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 11
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 10
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 10
- NXQGGXCHGDYOHB-UHFFFAOYSA-L cyclopenta-1,4-dien-1-yl(diphenyl)phosphane;dichloropalladium;iron(2+) Chemical compound [Fe+2].Cl[Pd]Cl.[CH-]1C=CC(P(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)=C1.[CH-]1C=CC(P(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)=C1 NXQGGXCHGDYOHB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- 125000003963 dichloro group Chemical group Cl* 0.000 description 10
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 10
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 10
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 10
- WORJRXHJTUTINR-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxane;hydron;chloride Chemical compound Cl.C1COCCO1 WORJRXHJTUTINR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 9
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 9
- WUUGFSXJNOTRMR-IOSLPCCCSA-N 5'-S-methyl-5'-thioadenosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CSC)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 WUUGFSXJNOTRMR-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical group CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- JRNVZBWKYDBUCA-UHFFFAOYSA-N N-chlorosuccinimide Chemical compound ClN1C(=O)CCC1=O JRNVZBWKYDBUCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 208000035224 Ring chromosome 12 syndrome Diseases 0.000 description 8
- HTJWUNNIRKDDIV-UHFFFAOYSA-N bis(1-adamantyl)-butylphosphane Chemical compound C1C(C2)CC(C3)CC2CC13P(CCCC)C1(C2)CC(C3)CC2CC3C1 HTJWUNNIRKDDIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 8
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 8
- WJKHJLXJJJATHN-UHFFFAOYSA-N triflic anhydride Chemical compound FC(F)(F)S(=O)(=O)OS(=O)(=O)C(F)(F)F WJKHJLXJJJATHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- HJNHUFQGDJLQRS-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromopropoxy)oxane Chemical compound BrCCCOC1CCCCO1 HJNHUFQGDJLQRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 7
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 7
- 125000002572 propoxy group Chemical group [*]OC([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 7
- 125000004289 pyrazol-3-yl group Chemical group [H]N1N=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 7
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 7
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 7
- YYROPELSRYBVMQ-UHFFFAOYSA-N 4-toluenesulfonyl chloride Chemical compound CC1=CC=C(S(Cl)(=O)=O)C=C1 YYROPELSRYBVMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010034457 5'-methylthioadenosine phosphorylase Proteins 0.000 description 6
- KWLOIDOKWUESNM-UHFFFAOYSA-N 5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1h-pyrazole Chemical compound O1C(C)(C)C(C)(C)OB1C1=CC=NN1 KWLOIDOKWUESNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N N-Butyllithium Chemical compound [Li]CCCC MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000035187 Ring chromosome 14 syndrome Diseases 0.000 description 6
- MEFKEPWMEQBLKI-AIRLBKTGSA-N S-adenosyl-L-methioninate Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](C[S+](CC[C@H](N)C([O-])=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 MEFKEPWMEQBLKI-AIRLBKTGSA-N 0.000 description 6
- 229960001570 ademetionine Drugs 0.000 description 6
- 125000004202 aminomethyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])* 0.000 description 6
- ILAHWRKJUDSMFH-UHFFFAOYSA-N boron tribromide Chemical compound BrB(Br)Br ILAHWRKJUDSMFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 6
- CSJLBAMHHLJAAS-UHFFFAOYSA-N diethylaminosulfur trifluoride Chemical compound CCN(CC)S(F)(F)F CSJLBAMHHLJAAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 6
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M sodium iodide Chemical compound [Na+].[I-] FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- CYPYTURSJDMMMP-WVCUSYJESA-N (1e,4e)-1,5-diphenylpenta-1,4-dien-3-one;palladium Chemical compound [Pd].[Pd].C=1C=CC=CC=1\C=C\C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1.C=1C=CC=CC=1\C=C\C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1.C=1C=CC=CC=1\C=C\C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 CYPYTURSJDMMMP-WVCUSYJESA-N 0.000 description 5
- VEFLKXRACNJHOV-UHFFFAOYSA-N 1,3-dibromopropane Chemical compound BrCCCBr VEFLKXRACNJHOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ZZRFDLHBMBHJTI-UHFFFAOYSA-N 1-(oxan-2-yl)-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyrazole Chemical compound O1C(C)(C)C(C)(C)OB1C1=CC=NN1C1OCCCC1 ZZRFDLHBMBHJTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NHQDETIJWKXCTC-UHFFFAOYSA-N 3-chloroperbenzoic acid Chemical compound OOC(=O)C1=CC=CC(Cl)=C1 NHQDETIJWKXCTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- GTLDTDOJJJZVBW-UHFFFAOYSA-N zinc cyanide Chemical compound [Zn+2].N#[C-].N#[C-] GTLDTDOJJJZVBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- KZPYGQFFRCFCPP-UHFFFAOYSA-N 1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene Chemical compound [Fe+2].C1=CC=C[C-]1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=C[C-]1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 KZPYGQFFRCFCPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- GBCGIJAYTBMFHI-UHFFFAOYSA-N 3-methyl-3-sulfanylbutan-1-ol Chemical compound CC(C)(S)CCO GBCGIJAYTBMFHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 4
- 125000000131 cyclopropyloxy group Chemical group C1(CC1)O* 0.000 description 4
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 4
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 description 4
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 4
- JHLVEBNWCCKSGY-UHFFFAOYSA-N tert-butyl n-methylcarbamate Chemical compound CNC(=O)OC(C)(C)C JHLVEBNWCCKSGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000000876 trifluoromethoxy group Chemical group FC(F)(F)O* 0.000 description 4
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 1,1-Dichloroethane Chemical compound CC(Cl)Cl SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DGKTUNIJIIPACU-UHFFFAOYSA-N 2-bromo-3-hydroxybenzonitrile Chemical compound OC1=CC=CC(C#N)=C1Br DGKTUNIJIIPACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HKOGGJDYHCNTIY-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxynaphthalene-1-carbonitrile Chemical compound C1=CC=CC2=CC(O)=CC(C#N)=C21 HKOGGJDYHCNTIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LELOWRISYMNNSU-UHFFFAOYSA-N Hydrocyanic acid Natural products N#C LELOWRISYMNNSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000003708 Protein arginine N-methyltransferase Human genes 0.000 description 3
- 108020000912 Protein arginine N-methyltransferase Proteins 0.000 description 3
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 3
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 3
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 125000006413 ring segment Chemical group 0.000 description 3
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 3
- IOGXOCVLYRDXLW-UHFFFAOYSA-N tert-butyl nitrite Chemical compound CC(C)(C)ON=O IOGXOCVLYRDXLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012414 tert-butyl nitrite Substances 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-M triflate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- ULTHEAFYOOPTTB-UHFFFAOYSA-N 1,4-dibromobutane Chemical compound BrCCCCBr ULTHEAFYOOPTTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ANIVZBBYWMPEOI-UHFFFAOYSA-N 1-bromo-3-fluoronaphthalene Chemical compound C1=CC=CC2=CC(F)=CC(Br)=C21 ANIVZBBYWMPEOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DNCDUFNGOHSZEA-UHFFFAOYSA-N 1-fluoro-3-methoxynaphthalen-2-ol Chemical compound FC1=C(C(=CC2=CC=CC=C12)OC)O DNCDUFNGOHSZEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 1-naphthol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=CC=CC2=C1 KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004214 1-pyrrolidinyl group Chemical group [H]C1([H])N(*)C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- RKMGAJGJIURJSJ-UHFFFAOYSA-N 2,2,6,6-Tetramethylpiperidine Substances CC1(C)CCCC(C)(C)N1 RKMGAJGJIURJSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 2-(2-cyanopropan-2-yldiazenyl)-2-methylpropanenitrile Chemical compound N#CC(C)(C)N=NC(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SZLJWMUBSCYTLD-UHFFFAOYSA-N 2-bromo-3-(bromomethyl)benzonitrile Chemical compound BrCC1=CC=CC(C#N)=C1Br SZLJWMUBSCYTLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FFTOQOKMASMDFH-UHFFFAOYSA-N 3-amino-5-methoxybenzonitrile Chemical compound COC1=CC(N)=CC(C#N)=C1 FFTOQOKMASMDFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QOXOZONBQWIKDA-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxypropyl Chemical group [CH2]CCO QOXOZONBQWIKDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SHLSSLVZXJBVHE-UHFFFAOYSA-N 3-sulfanylpropan-1-ol Chemical compound OCCCS SHLSSLVZXJBVHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PQNQMYMGUXGWTG-UHFFFAOYSA-N 4-bromonaphthalen-2-ol Chemical compound C1=CC=CC2=CC(O)=CC(Br)=C21 PQNQMYMGUXGWTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KRDRCVJCTNBELJ-UHFFFAOYSA-N 4-chloro-3-hydroxybenzonitrile Chemical compound OC1=CC(C#N)=CC=C1Cl KRDRCVJCTNBELJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQQPSJDOZDIKTE-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-chloro-4-fluorophenol Chemical compound OC1=CC(Br)=C(F)C=C1Cl NQQPSJDOZDIKTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JRMBUELLJPLSTO-UHFFFAOYSA-N 6-fluoroquinoline-8-carbonitrile Chemical compound N1=CC=CC2=CC(F)=CC(C#N)=C21 JRMBUELLJPLSTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DOINWPRJXLNEBB-UHFFFAOYSA-N 8-bromo-6-fluoroquinoline Chemical compound N1=CC=CC2=CC(F)=CC(Br)=C21 DOINWPRJXLNEBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GRSVBDFSSVEGTG-UHFFFAOYSA-N COC(C(I)=C1)=CC(N)=C1C#N Chemical compound COC(C(I)=C1)=CC(N)=C1C#N GRSVBDFSSVEGTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910021589 Copper(I) bromide Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910021595 Copper(I) iodide Inorganic materials 0.000 description 2
- 108010009392 Cyclin-Dependent Kinase Inhibitor p16 Proteins 0.000 description 2
- 102100024458 Cyclin-dependent kinase inhibitor 2A Human genes 0.000 description 2
- OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N Deuterated methanol Chemical compound [2H]OC([2H])([2H])[2H] OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N 0.000 description 2
- PMQNEXJSTFREBM-UHFFFAOYSA-N FC1=C(C=C(C2=CC=CC=C12)C#N)I Chemical compound FC1=C(C=C(C2=CC=CC=C12)C#N)I PMQNEXJSTFREBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- 101000757232 Homo sapiens Protein arginine N-methyltransferase 2 Proteins 0.000 description 2
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N Pyrazole Chemical compound C=1C=NNC=1 WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZJUKTBDSGOFHSH-WFMPWKQPSA-N S-Adenosylhomocysteine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CSCC[C@H](N)C(O)=O)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 ZJUKTBDSGOFHSH-WFMPWKQPSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 150000001483 arginine derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 125000003725 azepanyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000002393 azetidinyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000004069 aziridinyl group Chemical group 0.000 description 2
- YNHIGQDRGKUECZ-UHFFFAOYSA-L bis(triphenylphosphine)palladium(ii) dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Pd+2].C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 YNHIGQDRGKUECZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical class OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000012230 colorless oil Substances 0.000 description 2
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 2
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 2
- NKNDPYCGAZPOFS-UHFFFAOYSA-M copper(i) bromide Chemical compound Br[Cu] NKNDPYCGAZPOFS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DOBRDRYODQBAMW-UHFFFAOYSA-N copper(i) cyanide Chemical compound [Cu+].N#[C-] DOBRDRYODQBAMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LSXDOTMGLUJQCM-UHFFFAOYSA-M copper(i) iodide Chemical compound I[Cu] LSXDOTMGLUJQCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- YJMNOKOLADGBKA-UHFFFAOYSA-N cyanonaphthalene Natural products C1=CC=C2C(C#N)=CC=CC2=C1 YJMNOKOLADGBKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- YNHIGQDRGKUECZ-UHFFFAOYSA-N dichloropalladium;triphenylphosphanium Chemical compound Cl[Pd]Cl.C1=CC=CC=C1[PH+](C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1[PH+](C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 YNHIGQDRGKUECZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001640 fractional crystallisation Methods 0.000 description 2
- 125000001188 haloalkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 150000004677 hydrates Chemical class 0.000 description 2
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- GWVMLCQWXVFZCN-UHFFFAOYSA-N isoindoline Chemical compound C1=CC=C2CNCC2=C1 GWVMLCQWXVFZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 125000000250 methylamino group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 2
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 2
- 125000002816 methylsulfanyl group Chemical group [H]C([H])([H])S[*] 0.000 description 2
- 125000004170 methylsulfonyl group Chemical group [H]C([H])([H])S(*)(=O)=O 0.000 description 2
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 125000002757 morpholinyl group Chemical group 0.000 description 2
- YWWARDMVSMPOLR-UHFFFAOYSA-M oxolane;tetrabutylazanium;fluoride Chemical compound [F-].C1CCOC1.CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC YWWARDMVSMPOLR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 2
- HXITXNWTGFUOAU-UHFFFAOYSA-N phenylboronic acid Chemical compound OB(O)C1=CC=CC=C1 HXITXNWTGFUOAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJAPPYDYQCXOEF-UHFFFAOYSA-N phthalazin-1(2H)-one Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NN=CC2=C1 IJAPPYDYQCXOEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004193 piperazinyl group Chemical group 0.000 description 2
- XUWHAWMETYGRKB-UHFFFAOYSA-N piperidin-2-one Chemical compound O=C1CCCCN1 XUWHAWMETYGRKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003386 piperidinyl group Chemical group 0.000 description 2
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 125000000719 pyrrolidinyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 2
- CIIFKVFOVFJZDM-UHFFFAOYSA-N quinoline-8-carbonitrile Chemical compound C1=CN=C2C(C#N)=CC=CC2=C1 CIIFKVFOVFJZDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 2
- 235000009518 sodium iodide Nutrition 0.000 description 2
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- 125000004568 thiomorpholinyl group Chemical group 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CXNIUSPIQKWYAI-UHFFFAOYSA-N xantphos Chemical compound C=12OC3=C(P(C=4C=CC=CC=4)C=4C=CC=CC=4)C=CC=C3C(C)(C)C2=CC=CC=1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 CXNIUSPIQKWYAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JPMOXHQRIUKDJJ-UHFFFAOYSA-N (1-fluoro-3-methoxynaphthalen-2-yl) trifluoromethanesulfonate Chemical compound FC(S(=O)(=O)OC1=C(C2=CC=CC=C2C=C1OC)F)(F)F JPMOXHQRIUKDJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NWGZOALPWZDXNG-LURJTMIESA-N (2s)-5-(diaminomethylideneamino)-2-(dimethylamino)pentanoic acid Chemical compound CN(C)[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N NWGZOALPWZDXNG-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- JHHZLHWJQPUNKB-SCSAIBSYSA-N (3r)-pyrrolidin-3-ol Chemical compound O[C@@H]1CCNC1 JHHZLHWJQPUNKB-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 125000001376 1,2,4-triazolyl group Chemical group N1N=C(N=C1)* 0.000 description 1
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KGKAYWMGPDWLQZ-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(bromomethyl)benzene Chemical compound BrCC1=CC=CC=C1CBr KGKAYWMGPDWLQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PZKDJJMHRYNBOR-UHFFFAOYSA-N 1,3-dibromo-2-chloro-5-fluorobenzene Chemical compound FC1=CC(Br)=C(Cl)C(Br)=C1 PZKDJJMHRYNBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OXHNLMTVIGZXSG-UHFFFAOYSA-N 1-Methylpyrrole Chemical compound CN1C=CC=C1 OXHNLMTVIGZXSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004973 1-butenyl group Chemical group C(=CCC)* 0.000 description 1
- HZFIOFGZCRLYOH-UHFFFAOYSA-N 1h-pyrazol-1-ium;bromide Chemical compound Br.C=1C=NNC=1 HZFIOFGZCRLYOH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LTMRRSWNXVJMBA-UHFFFAOYSA-L 2,2-diethylpropanedioate Chemical compound CCC(CC)(C([O-])=O)C([O-])=O LTMRRSWNXVJMBA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- GCUOLJOTJRUDIZ-UHFFFAOYSA-N 2-(2-bromoethoxy)oxane Chemical compound BrCCOC1CCCCO1 GCUOLJOTJRUDIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XDBZJXRPEKFIFR-UHFFFAOYSA-N 2-(oxan-2-yloxy)ethanol Chemical compound OCCOC1CCCCO1 XDBZJXRPEKFIFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UOXJNGFFPMOZDM-UHFFFAOYSA-N 2-[di(propan-2-yl)amino]ethylsulfanyl-methylphosphinic acid Chemical compound CC(C)N(C(C)C)CCSP(C)(O)=O UOXJNGFFPMOZDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DBECKESJFGWYFN-UHFFFAOYSA-N 2-bromo-3-fluorobenzonitrile Chemical compound FC1=CC=CC(C#N)=C1Br DBECKESJFGWYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PHZMJSCJHNIUSL-UHFFFAOYSA-N 2-bromo-3-formylbenzonitrile Chemical compound BrC1=C(C=O)C=CC=C1C#N PHZMJSCJHNIUSL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RNHZLKDKPMISMY-UHFFFAOYSA-N 2-bromo-3-methylbenzonitrile Chemical compound CC1=CC=CC(C#N)=C1Br RNHZLKDKPMISMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YLMFXCIATJJKQL-UHFFFAOYSA-N 2-bromo-4-fluoroaniline Chemical compound NC1=CC=C(F)C=C1Br YLMFXCIATJJKQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YUQUNWNSQDULTI-UHFFFAOYSA-N 2-bromobenzenethiol Chemical compound SC1=CC=CC=C1Br YUQUNWNSQDULTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KFTYFTKODBWKOU-UHFFFAOYSA-N 2-methylsulfonylethanol Chemical compound CS(=O)(=O)CCO KFTYFTKODBWKOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WBJBTFNQTJXHDL-UHFFFAOYSA-N 2h-naphthalen-1-imine Chemical compound C1=CC=C2C(=N)CC=CC2=C1 WBJBTFNQTJXHDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHUSNGUPJXGLPL-UHFFFAOYSA-N 3-bromo-5-methoxyaniline Chemical compound COC1=CC(N)=CC(Br)=C1 FHUSNGUPJXGLPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003974 3-carbamimidamidopropyl group Chemical group C(N)(=N)NCCC* 0.000 description 1
- GHYUOOZZOMUNSY-UHFFFAOYSA-N 3-chloro-5-hydroxybenzonitrile Chemical compound OC1=CC(Cl)=CC(C#N)=C1 GHYUOOZZOMUNSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SJTNTIRIRIPZDV-UHFFFAOYSA-N 3-methoxynaphthalen-2-ol Chemical compound C1=CC=C2C=C(O)C(OC)=CC2=C1 SJTNTIRIRIPZDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XPXXXQZNUQAFQY-UHFFFAOYSA-N 3-methylsulfonylpropan-1-ol Chemical compound CS(=O)(=O)CCCO XPXXXQZNUQAFQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COPMASWDWLENMV-UHFFFAOYSA-N 4,4,5,5-tetramethyl-2-prop-1-enyl-1,3,2-dioxaborolane Chemical compound CC=CB1OC(C)(C)C(C)(C)O1 COPMASWDWLENMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UEVFFMZHGNYDKM-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-chlorophenol Chemical compound OC1=CC(Br)=CC=C1Cl UEVFFMZHGNYDKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SFHYNDMGZXWXBU-LIMNOBDPSA-N 6-amino-2-[[(e)-(3-formylphenyl)methylideneamino]carbamoylamino]-1,3-dioxobenzo[de]isoquinoline-5,8-disulfonic acid Chemical compound O=C1C(C2=3)=CC(S(O)(=O)=O)=CC=3C(N)=C(S(O)(=O)=O)C=C2C(=O)N1NC(=O)N\N=C\C1=CC=CC(C=O)=C1 SFHYNDMGZXWXBU-LIMNOBDPSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 1
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 1
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFQXGDRROLQZHY-UHFFFAOYSA-N Fc1cc(C#N)c2ccccc2c1 Chemical compound Fc1cc(C#N)c2ccccc2c1 HFQXGDRROLQZHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100025210 Histone-arginine methyltransferase CARM1 Human genes 0.000 description 1
- 102000006947 Histones Human genes 0.000 description 1
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 1
- 101000721661 Homo sapiens Cellular tumor antigen p53 Proteins 0.000 description 1
- 101000615488 Homo sapiens Methyl-CpG-binding domain protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000757216 Homo sapiens Protein arginine N-methyltransferase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000924541 Homo sapiens Protein arginine N-methyltransferase 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000775582 Homo sapiens Protein arginine N-methyltransferase 6 Proteins 0.000 description 1
- 101000693024 Homo sapiens Protein arginine N-methyltransferase 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000796142 Homo sapiens Protein arginine N-methyltransferase 8 Proteins 0.000 description 1
- 101000796144 Homo sapiens Protein arginine N-methyltransferase 9 Proteins 0.000 description 1
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000037984 Inhibitory immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008026 Inhibitory immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100021299 Methyl-CpG-binding domain protein 2 Human genes 0.000 description 1
- YDGMGEXADBMOMJ-LURJTMIESA-N N(g)-dimethylarginine Chemical compound CN(C)C(\N)=N\CCC[C@H](N)C(O)=O YDGMGEXADBMOMJ-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100021010 Nucleolin Human genes 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 102100022985 Protein arginine N-methyltransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100022988 Protein arginine N-methyltransferase 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100034603 Protein arginine N-methyltransferase 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100032140 Protein arginine N-methyltransferase 6 Human genes 0.000 description 1
- 102100026297 Protein arginine N-methyltransferase 7 Human genes 0.000 description 1
- 102100031365 Protein arginine N-methyltransferase 8 Human genes 0.000 description 1
- 102100031369 Protein arginine N-methyltransferase 9 Human genes 0.000 description 1
- 108010026552 Proteome Proteins 0.000 description 1
- 108010085478 SPT5 transcriptional elongation factor Proteins 0.000 description 1
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical compound [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006069 Suzuki reaction reaction Methods 0.000 description 1
- DHXVGJBLRPWPCS-UHFFFAOYSA-N Tetrahydropyran Chemical compound C1CCOCC1 DHXVGJBLRPWPCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- UGAPHEBNTGUMBB-UHFFFAOYSA-N acetic acid;ethyl acetate Chemical compound CC(O)=O.CCOC(C)=O UGAPHEBNTGUMBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 208000024447 adrenal gland neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YDGMGEXADBMOMJ-UHFFFAOYSA-N asymmetrical dimethylarginine Natural products CN(C)C(N)=NCCCC(N)C(O)=O YDGMGEXADBMOMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 125000005605 benzo group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002047 benzodioxolyl group Chemical group O1OC(C2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000004618 benzofuryl group Chemical group O1C(=CC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000004541 benzoxazolyl group Chemical group O1C(=NC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- ZPQVSAYWOQAEMZ-UHFFFAOYSA-N boric acid;1h-pyrazole Chemical compound OB(O)O.C=1C=NNC=1 ZPQVSAYWOQAEMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UWTDFICHZKXYAC-UHFFFAOYSA-N boron;oxolane Chemical compound [B].C1CCOC1 UWTDFICHZKXYAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- KXZJHVJKXJLBKO-UHFFFAOYSA-N chembl1408157 Chemical compound N=1C2=CC=CC=C2C(C(=O)O)=CC=1C1=CC=C(O)C=C1 KXZJHVJKXJLBKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 108010030886 coactivator-associated arginine methyltransferase 1 Proteins 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- OPQARKPSCNTWTJ-UHFFFAOYSA-L copper(ii) acetate Chemical compound [Cu+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O OPQARKPSCNTWTJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 125000006165 cyclic alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000392 cycloalkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- SHQSVMDWKBRBGB-UHFFFAOYSA-N cyclobutanone Chemical compound O=C1CCC1 SHQSVMDWKBRBGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000582 cycloheptyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000640 cyclooctyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- UZBHNSVUMGIKLU-UHFFFAOYSA-N cyclopenten-1-ylboronic acid Chemical compound OB(O)C1=CCCC1 UZBHNSVUMGIKLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- YOXHCYXIAVIFCZ-UHFFFAOYSA-N cyclopropanol Chemical compound OC1CC1 YOXHCYXIAVIFCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 1
- 230000009615 deamination Effects 0.000 description 1
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- NKLCNNUWBJBICK-UHFFFAOYSA-N dess–martin periodinane Chemical compound C1=CC=C2I(OC(=O)C)(OC(C)=O)(OC(C)=O)OC(=O)C2=C1 NKLCNNUWBJBICK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WMKGGPCROCCUDY-PHEQNACWSA-N dibenzylideneacetone Chemical compound C=1C=CC=CC=1\C=C\C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WMKGGPCROCCUDY-PHEQNACWSA-N 0.000 description 1
- AZSZCFSOHXEJQE-UHFFFAOYSA-N dibromodifluoromethane Chemical compound FC(F)(Br)Br AZSZCFSOHXEJQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004683 dihydrates Chemical class 0.000 description 1
- JMRYOSQOYJBDOI-UHFFFAOYSA-N dilithium;di(propan-2-yl)azanide Chemical compound [Li+].CC(C)[N-]C(C)C.CC(C)N([Li])C(C)C JMRYOSQOYJBDOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 1
- 150000002085 enols Chemical class 0.000 description 1
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 description 1
- NPTDXPDGUHAFKC-UHFFFAOYSA-N ethynylcyclopropane Chemical group C#CC1CC1 NPTDXPDGUHAFKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RWTNPBWLLIMQHL-UHFFFAOYSA-N fexofenadine Chemical group C1=CC(C(C)(C(O)=O)C)=CC=C1C(O)CCCN1CCC(C(O)(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)CC1 RWTNPBWLLIMQHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N formamide Substances NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000011087 fumaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002541 furyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000012224 gene deletion Methods 0.000 description 1
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 1
- 230000005182 global health Effects 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 102000046485 human PRMT2 Human genes 0.000 description 1
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N hydrazine Substances NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940071870 hydroiodic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005945 imidazopyridyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 description 1
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- UEXQBEVWFZKHNB-UHFFFAOYSA-N intermediate 29 Natural products C1=CC(N)=CC=C1NC1=NC=CC=N1 UEXQBEVWFZKHNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003402 intramolecular cyclocondensation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002497 iodine compounds Chemical class 0.000 description 1
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000002183 isoquinolinyl group Chemical group C1(=NC=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000000842 isoxazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000004973 liquid crystal related substance Substances 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- NQMRYBIKMRVZLB-UHFFFAOYSA-N methylamine hydrochloride Chemical compound [Cl-].[NH3+]C NQMRYBIKMRVZLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000004682 monohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 101150102751 mtap gene Proteins 0.000 description 1
- PEECTLLHENGOKU-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-4-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1.CN(C)C1=CC=NC=C1 PEECTLLHENGOKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- WOOWBQQQJXZGIE-UHFFFAOYSA-N n-ethyl-n-propan-2-ylpropan-2-amine Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C.CCN(C(C)C)C(C)C WOOWBQQQJXZGIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 108010044762 nucleolin Proteins 0.000 description 1
- TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N octane Chemical compound CCCCCCCC TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000005961 oxazepanyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002971 oxazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003585 oxepinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003566 oxetanyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- YJVFFLUZDVXJQI-UHFFFAOYSA-L palladium(ii) acetate Chemical compound [Pd+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O YJVFFLUZDVXJQI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CRWVOXFUXPYTRK-UHFFFAOYSA-N pent-4-yn-1-ol Chemical compound OCCCC#C CRWVOXFUXPYTRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003003 phosphines Chemical class 0.000 description 1
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N potassium tert-butoxide Chemical compound [K+].CC(C)(C)[O-] LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- VVWRJUBEIPHGQF-UHFFFAOYSA-N propan-2-yl n-propan-2-yloxycarbonyliminocarbamate Chemical compound CC(C)OC(=O)N=NC(=O)OC(C)C VVWRJUBEIPHGQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N propane-1,3-diol Chemical class OCCCO YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003226 pyrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000714 pyrimidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- JHHZLHWJQPUNKB-UHFFFAOYSA-N pyrrolidin-3-ol Chemical compound OC1CCNC1 JHHZLHWJQPUNKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000168 pyrrolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002943 quinolinyl group Chemical group N1=C(C=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000012363 selectfluor Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910001494 silver tetrafluoroborate Inorganic materials 0.000 description 1
- WRIKHQLVHPKCJU-UHFFFAOYSA-N sodium bis(trimethylsilyl)amide Chemical compound C[Si](C)(C)N([Na])[Si](C)(C)C WRIKHQLVHPKCJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004289 sodium hydrogen sulphite Substances 0.000 description 1
- 229910052979 sodium sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N sodium sulfide (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[S-2] GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical class [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- LJRGBERXYNQPJI-UHFFFAOYSA-M sodium;3-nitrobenzenesulfonate Chemical compound [Na+].[O-][N+](=O)C1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 LJRGBERXYNQPJI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- XHFLOLLMZOTPSM-UHFFFAOYSA-M sodium;hydrogen carbonate;hydrate Chemical class [OH-].[Na+].OC(O)=O XHFLOLLMZOTPSM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000003003 spiro group Chemical group 0.000 description 1
- 210000001324 spliceosome Anatomy 0.000 description 1
- 125000000446 sulfanediyl group Chemical group *S* 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- XFZZZOMHBHBURH-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 4-aminobutanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)CCCN XFZZZOMHBHBURH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZGNPLWZYVAFUNZ-UHFFFAOYSA-N tert-butylphosphane Chemical compound CC(C)(C)P ZGNPLWZYVAFUNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003718 tetrahydrofuranyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003698 tetramethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000000335 thiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002053 thietanyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- ZULTYUIALNTCSA-UHFFFAOYSA-N zinc hydride Chemical compound [ZnH2] ZULTYUIALNTCSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000051 zinc hydride Inorganic materials 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
发明涉及式(I)的具有三环或四环并环结构的MTA协同性PRMT5抑制剂化合物、包含它们的药物组合物以及它们的制备方法和用途，其中R1至R10、X1至X7和p如说明书中所定义。
Description
发明领域
本发明涉及具有三环或四环并环结构的MTA协同性PRMT5抑制剂化合物、包含它们的药物组合物以及它们的制备方法和用途。
背景技术
尽管在过去的十几年肿瘤治疗取得了巨大进展，比如以免疫检查点抑制剂为代表的药物改变了肿瘤治疗范式，癌症仍然是一项艰巨的全球健康挑战，仍然迫切需要开发新的靶点和治疗方法。
蛋白质精氨酸甲基转移酶(PRMT)可以将S-腺苷甲硫氨酸(SAM)上的甲基基团转移到蛋白质精氨酸侧链的胍基氮原子上，生成甲基化精氨酸和S-腺苷高半胱氨酸(SAH)(Stopa et al.Cell.Mol.Life Sci.2015,72,2041)。PRMT催化的蛋白质底物甲基化在调节关键细胞过程中发挥重要作用，包括转录、细胞信号传导、mRNA翻译、DNA损伤、受体运输、蛋白质稳定性和和RNA剪接等(Wang et al.J.Med.Chem.2018,61,9429)。根据PRMT的催化活性和产物类型，PRMTs可以分为三大类：I型、II型和III型。I型主要包括PRMT1、PRMT2、PRMT3、PRMT4、PRMT6、PRMT8，催化底物形成不对称二甲基化精氨酸；II型包括PRMT5和PRMT9，催化底物形成对称二甲基化精氨酸；III型仅包括PRMT7，负责催化底物形成单甲基化精氨酸(Shailesh et al.Oncotarget 2018,9(94),36705)。PRMT5作为一种II型精氨酸甲基转移酶可以甲基化不同的底物，包括剪接体Sm蛋白、核仁蛋白、p53、组蛋白H2A、H3和H4、SPT5转录延伸因子和MBD2(Karkhansis,V.et al.Trends Biochem.Sci.2011,36,633)。最近的研究结果表明，它是一种致癌基因，其上调可导致多种不同癌症中的肿瘤细胞增殖和侵袭性，包括结直肠癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌和胰腺癌，以及淋巴瘤、白血病和胶质母细胞瘤。PRMT5的异常表达与多种肿瘤相关，是开发抗肿瘤药物的重要潜在靶点(Kim andRonai,Cell Stress 2020,4(8),207)。
编码甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)的基因定位于染色体9p上的区域9p21，靠近CDKN2A肿瘤抑制基因位点(Marjon et al.Annu.Rev.Cancer Biol.2021,5,372)。CDKN2A的缺失在人类癌症中非常常见，由于这两个基因非常接近，这通常导致MTAP的共缺失(Barbarino etal.J Cell Mol Med.2020,24(10),5566)。MTAP基因缺失发生在大约10％的癌症中，包括胰腺癌、肺癌和膀胱癌。MTAP缺失会导致甲基硫腺苷(MTA)的积累，它与SAM具有相似的结构，并通过改变MTA和SAM的比例使细胞对PRMT5抑制敏感(Kryukov et al.Science 2016,351(6278),1218)。升高的MTA会选择性地与SAM竞争结合PRMT5，并能部分抑制PRMT5的甲基化活性，从而降低整个蛋白质组的对称精氨酸二甲基化水平，提高细胞对调节甲基小体活性的敏感性(McKinney et al.J.Med.Chem.2021,64,15,11150)。
靶向MTAP缺失肿瘤细胞中的PRMT5是一种潜在的合成致死策略，为选择性杀伤特定基因变异的癌细胞提供了一种有前景的方法(Marjon et al.Annu.Rev.CancerBiol.2021,5,375)。PRMT5抑制剂根据作用机制可以分为三类，即SAM竞争、非竞争性抑制剂以及MTA-协同PRMT5抑制剂(Smith,C.R.et al.J Med Chem 2022,65,1749)。MTA-协同PRMT5抑制剂可以与MTA协同选择性杀死MTAP缺失的肿瘤细胞，同时对野生型MTAP的正常细胞不具杀伤能力。考虑到PRMT5在调节造血功能中起着关键作用，这类抑制剂比那些MTA-非协同抑制剂将有更好的治疗窗口。目前只有少数几个MTA-协同PRMT5抑制剂处于早期临床阶段，因此这个领域还需要更多的努力和研发投入。本发明的化合物具有三环或四环并环结构，是MTA协同性PRMT5抑制剂，其能选择性地抑制MTAP缺失的癌细胞的生长。
发明简述
一方面，本发明提供了一种式(I)的化合物，
其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐：
其中:
各独立地为单键或双键；
R1至R4独立地选自H、卤素、羟基、氰基、NR5R6、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基、卤代C1-6烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基，其中所述芳基，杂芳基、C3-8环烷基和杂环烷基任选地被一个或多个独立地选自卤素、羟基、氰基、NR5R6、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基和卤代C1-6烷氧基的取代基取代，或者
R2和R3与它们所连接的原子一起形成芳基、杂芳基、碳环基团或杂环基团，其中所述芳基、杂芳基、碳环基团或杂环基团任选地被一个或多个独立地选自卤素、羟基、氰基、NR5R6、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基和卤代C1-6烷氧基的取代基取代；或者
R3和R4与它们所连接的原子一起形成芳基、杂芳基、碳环基团或杂环基团，其中所述芳基、杂芳基、碳环基团或杂环基团任选地被一个或多个独立地选自卤素、羟基、氰基、NR5R6、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基和卤代C1-6烷氧基的取代基取代，
其中R5和R6独立地选自H和C1-6烷基，或者R5和R6与它们所连接的N原子一起形成含氮杂环基团；
X1和X2之一是CR7R8，另一个选自CR7R8、O、N和S，其中S可以任选被氧化，其中R7和R8独立地选自H和C1-6烷基，或者R7和R8与它们所连接的原子一起形成3至6元碳环基团或杂环基团；
X3、X6和X7独立地选自C和N；
X4和X5独立地选自CH和N，
R9和R10独立地选自H和C1-6烷基，或者R9和R10与它们所连接的原子一起形成3至6元碳环基团或杂环基团；
p＝0、1、2、3、4或5。
本发明的另一方面，提供了一种药物组合物，其包含：
(1)治疗有效量的本发明的式(I)或(Ia)的化合物、其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐作为活性成分；和
(2)药学上可接受的载体。
本发明的另一方面，提供了一种体内或体外抑制PRMT5活性的方法，其包括使有效量的至少一种本发明的式(I)或(Ia)的化合物、其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐与PRMT5接触。
本发明的另一方面，提供了一种抑制MTAP缺失的癌细胞的生长的方法，其包括使有效量的至少一种本发明的式(I)或(Ia)的化合物、其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐与所述的细胞接触。
本发明的另一方面，提供了本发明的式(I)或(Ia)的化合物、其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐或包含所述化合物的药物组合物在制备用作PRMT5抑制剂、特别是MTA-协同PRMT5抑制剂的药物中的用途。
本发明的另一方面，提供了本发明的式(I)或(Ia)的化合物、其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐或包含所述化合物的药物组合物在制备用于治疗由PRMT5介导或至少部分由PRMT5介导的疾病的药物中的用途。
本发明的另一方面，提供了本发明的式(I)或(Ia)的化合物、其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐或包含所述化合物的药物组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
本发明的另一方面，提供了用作PRMT5抑制剂、特别是MTA-协同PRMT5抑制剂的本发明的式(I)或(Ia)的化合物、其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐或包含所述化合物的药物组合物。
本发明的另一方面，提供了用于治疗由PRMT5介导或至少部分由PRMT5介导的疾病的药物的本发明的式(I)或(Ia)的化合物、其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐或包含所述化合物的药物组合物。
发明详述
本发明提供了一种式(I)的化合物，
其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐：
其中:
各独立地为单键或双键；
R1至R4独立地选自H、卤素、羟基、氰基、NR5R6、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基、卤代C1-6烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基，其中所述芳基，杂芳基、C3-8环烷基和杂环烷基任选地被一个或多个独立地选自卤素、羟基、氰基、NR5R6、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基和卤代C1-6烷氧基的取代基取代，或者
R2和R3与它们所连接的原子一起形成芳基、杂芳基、碳环基团或杂环基团，其中所述芳基、杂芳基、碳环基团或杂环基团任选地被一个或多个独立地选自卤素、羟基、氰基、NR5R6、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基和卤代C1-6烷氧基的取代基取代；或者
R3和R4与它们所连接的原子一起形成芳基、杂芳基、碳环基团或杂环基团，其中所述芳基、杂芳基、碳环基团或杂环基团任选地被一个或多个独立地选自卤素、羟基、氰基、NR5R6、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基和卤代C1-6烷氧基的取代基取代，
其中R5和R6独立地选自H和C1-6烷基，或者R5和R6与它们所连接的N原子一起形成含氮杂环基团；
X1和X2之一是CR7R8，另一个选自CR7R8、O、N和S，其中S可以任选被氧化，其中R7和R8独立地选自H和C1-6烷基，或者R7和R8与它们所连接的原子一起形成3至6元碳环基团或杂环基团；
X3、X6和X7独立地选自C和N；
X4和X5独立地选自CH和N，
R9和R10独立地选自H和C1-6烷基，或者R9和R10与它们所连接的原子一起形成3至6元碳环基团或杂环基团；
p＝0、1、2、3、4或5。
在一个实施方案中，R1至R4独立地选自H、卤素、羟基、氰基、NR5R6、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基和C3-8环烷氧基，其中R5和R6如上所定义。
在一个实施方案中，R1选自H、卤素、氰基和C3-8环烷氧基。
在一个实施方案中，R1选自H和氰基、特别是是氰基。
在一个实施方案中，R2选自H、卤素、氰基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷氧基、C3-8环烷基和C3-8环烷氧基。
在一个实施方案中，R2选自H和C3-8环烷氧基。
在一个实施方案中，R3选自H和卤素。
在一个实施方案中，R2和R3与它们所连接的原子一起形成芳基或杂芳基，其中所述的芳基和杂芳基任选地被一个或多个独立地选自卤素、羟基、氰基、NR5R6、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基和卤代C1-6烷氧基的取代基取代。
在一个实施方案中，R2和R3与它们所连接的原子一起形成苯基。
在一个实施方案中，R4选自H、卤素、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C3-8环烷基和氰基。
在一个实施方案中，R4选自H和卤素。
在一个实施方案中，X1和X2之一是CH2，另一个选自CH2、O、N和S，其中S可以任选被氧化。
在一个实施方案中，X1是CH2且X2选自CH2、O和S。
在一个实施方案中，X2是CH2且X1选自CH2、O和SO2。
在一个实施方案中，X3是N。
在一个实施方案中，X4是N。
在一个实施方案中，X3和X4同时是N。
在一个实施方案中，X5是CH。
在一个实施方案中，X6是C。
在一个实施方案中，X7是C。
在一个实施方案中，X5是CH并且X6和X7均是C。
在一个实施方案中，R9和R10独立地选自H和C1-6烷基。
在一个实施方案中，本发明的式(I)化合物具有如下式(Ia)的结构：
其中R1至R4、X1、X2和p如上所定义。
在一个实施方案中，本发明的化合物选自如下化合物：
在一些实施方案中，所述由PRMT5介导或至少部分由PRMT5介导的疾病是癌症。
在一些实施方案中，所述的癌症是实体瘤或血液系统恶性肿瘤(例如白血病、淋巴瘤或骨髓瘤)。
在一些实施方案中，所述的癌症选自卵巢癌、肺癌(包括非小细胞肺癌)、脑瘤(包括成胶质细胞瘤(GBM))、腱鞘巨细胞瘤、胃肠道间质肿瘤(GIST)、胃癌、食道癌、结肠癌、结肠直肠癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、宫颈癌、黑色素瘤、间皮瘤、间皮内膜癌、肾癌、肝癌、甲状腺癌、头颈癌、尿路上皮癌、膀胱癌、子宫内膜癌、绒毛膜癌、肾上腺癌、肉瘤、白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各实施方案和在下文中具体描述的实施方案(如实施例)中的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。
术语
在本发明中，除非特别指出，所用术语具有本领域技术人员公知的一般含义。
在本发明中，所述卤素为F、Cl、Br或I，优选F或Cl。
在本发明中，术语“烷基”表示饱和的线性或支链烃部分，例如术语“C1-6烷基”是指具有1至6个碳原子的直链或支链烷基，非限制性地包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和已基等。
在本发明中，术语“烷氧基”表示通过氧原子连接的烷基基团，例如-O-(C1-6烷基)基团。例如术语“C1-6烷氧基”是指具有1至6个碳原子的直链或支链烷氧基，非限制性地包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基和丁氧基等。
在本发明中，术语“环烷基”表示饱和的环状烃基部分。术语“C3-8环烷基”是指在环上具有3至8个碳原子的环状烷基，非限制性地包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基等。
在本发明中，术语“环烷氧基”表示通过氧原子连接的饱和的环烷基。术语“C3-8环氧烷基”是指在环上具有3至8个碳原子的环烷氧基，非限制性地包括环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基、环庚氧基和环辛氧基等。
在本发明中，术语“碳环基团”表示饱和或部分不饱和的环状烃基部分，例如环烷基和环烯基。
本文所用的术语“芳基”是指由一个环或多个如两个稠环组成的碳环烃基，其中至少一个环是芳族环。芳基的例子包括但不限于苯基、萘基等。
在本发明中，术语“杂环基”表示包含至少一个碳原子和至少一个(如1-3个)选自N、O、S的环杂原子的3至10元、例如3、4、5、6、7或8元环状基团，其可以是饱和或部分不饱和的，并且其中的S原子可以任选地被氧化。“杂环基”包括单环、桥环、螺环等二环结构，例如3元至8元杂环基，3元至6元杂环基等。杂环基的例子包括四氢呋喃基、吡咯烷基、氧杂环丁基、氧杂环己基、氮杂环丁基、氮杂环丙基、硫杂环丁基、氮杂环庚烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、氧杂环庚烷基、氧氮杂环庚烷基等。
在本发明中，术语“含氮杂环基”表示包含至少一个氮原子和任选的一个或多个(如1-3个)另外的选自N、O、S的环杂原子的3至10元、例如3、4、5、6、7或8元环状基团。“含氮杂环基”的例子包括吡咯烷基、氮杂环丁基、氮杂环丙基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、氮杂环庚烷基、氧氮杂环庚烷基等。
在本发明中，术语“杂芳基”是指具有5～10个环原子，例如5、6或7个环原子的单环或二环环状芳族基团，其在环中包含至少一个(如1-3个)独立地选自N、O和S的环杂原子，其余环原子是碳原子。杂芳基的例子包括咪唑基、吡啶基、吡咯基、噻唑基、呋喃基、噁唑基、异噁唑基、吡唑基、噻吩基、嘧啶基、1,2,4-三氮唑基、苯并噁唑基、咪唑并吡啶基、三唑并吡啶基、苯并呋喃基、吡唑并嘧啶基、苯并间二氧杂环戊烯基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基等。
本文所用的术语“卤代烷基”是指其中一个或多个氢原子、例如1、2、3、4或5个氢原子被卤素原子替代的本文所定义的烷基，并且当超过一个氢原子被卤素原子替代时，所述卤素原子可以彼此相同或不同。卤代烷基的例子包括但不限于-CF3、-CHF2、-CH2CF3、-CH(CF3)2等。
本文所用的术语“任选”、“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情况可以发生或可以不发生，并且该描述包括所述事件或情况发生的情形以及所述事件或情况不发生的情形。例如，“任选被取代的烷基”包括本文定义的“未被取代的烷基”和“被取代的烷基”。本领域技术人员应当理解的是，对于含有一个或多个取代基的任意基团而言，所述基团不包括任何在空间上不切实际的、化学上不正确的、合成上不可行的和/或内在不稳定的取代模式。
本领域技术人员应当理解的是，一些式(I)的化合物可以包含一个或多个手性中心，因此存在两个或更多个立体异构体。这些异构体的外消旋混合物、单个异构体和一种对映异构体富集的混合物，以及当有两个手性中心时的非对映异构体和特定的非对映异构体部分富集的混合物均在本发明的范围内。本领域技术人员还应当理解的是，本发明包括式(I)的化合物的所有单个立体异构体(例如对映异构体)、外消旋混合物或部分拆分的混合物，以及在适当的情况下，包括其单个互变异构体。
外消旋混合物可以以其本身的形式使用或者可以被拆分成它们的单个异构体。通过拆分可以得到立体化学上的纯的化合物或者富集一种或多种异构体的混合物。分离异构体的方法是众所周知的(参见Allinger N.L.和Eliel E.L.,"Topics inStereochemistry"，第6卷，Wiley Interscience，1971)，包括物理方法，例如使用手性吸附剂的色谱法。可以由手性前体制备得到手性形式的单个异构体。或者，可以通过与手性酸形成非对映异构体盐而由混合物化学分离得到单个异构体，将所述的盐分级结晶，然后游离出拆分的碱中的一个或两个，任选地重复这一过程，从而得到一个或两个基本上不包含另一种异构体的异构体，即光学纯度>95％的异构体。或者，可以将外消旋物共价连接到手性化合物(辅助物)上，得到非对映异构体，可通过色谱法或分级结晶法将其分离，之后化学除去手性辅助物，得到纯的对映异构体。
术语“互变异构体”指的是因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体。互变异构体之间可以互相转换，例如烯醇式和酮式是典型的互变异构体。
“药学上可接受的盐”，指的是无毒的、生物学上可耐受的或其他生物学上适合于给予治疗个体的式(I)的化合物的游离酸或碱的盐。例如，药学上可接受的盐是酸加成盐，包括例如衍生自无机酸和有机酸的加成盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸和硝酸，所述有机酸包括例如对甲苯磺酸、水杨酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸等。有关药学上可接受的盐的一般描述参见例如：S.M.Berge等人，“Pharmaceutical Salts”,J.Pharm.Sci.,1977,66:1-19,以及Handbook ofPharmaceutical Salts,Properties,Selection,and Use,Stahl和Wermuth编，Wiley-VCHand VHCA,Zurich,2002。
术语“溶剂合物”意指包含化学计量的或非化学计量的溶剂的溶剂加成形式。一些化合物具有在固体状态中网罗固定摩尔比的溶剂分子的倾向，从而形成溶剂合物。如果溶剂是水，则形成的溶剂合物是水合物，当溶剂是乙醇时，则形成的溶剂合物是乙醇合物。水合物是通过一个或多个分子的水与一分子所述物质形成的，其中水保留其H2O的分子状态，这样的组合能形成一种或多种水合物，例如半水合物、一水合物和二水合物。
术语“抑制”是指生物活动或过程的基线活性的降低。术语“抑制PRMT5活性”是指相对于不存在本发明化合物时的PRMT5活性，对存在本发明的化合物的直接或间接响应导致的PRMT5活性的降低。活性的降低可以是由本文所述的式(I)化合物和/或其药学上可接受的盐与PRMT5直接相互作用引起的，或者是由本文所述的式(I)化合物和/或其药学上可接受的盐与一种或多种其它因子相互作用进而影响PRMT5活性引起的。例如，本文所述的式(I)化合物和/或其药学上可接受的盐的存在可通过直接与PRMT5结合而降低PRMT5的活性、可通过直接或间接地影响另一种因子来降低PRMT5的活性，或者通过直接或间接地减少存在于细胞或机体中的PRMT5的量来降低PRMT5的活性。
本文所用的术语“有效量”是指通常足以对需要治疗具有由PRMT5活性介导或至少部分由PRMT5介导的疾病或障碍例如癌症的患者产生有益治疗效果的本发明化合物的量或剂量。可以通过常规方法(例如建模、剂量递增研究或临床试验)结合常规影响因素(例如给药或施药的方式或途径、药物成分的药代动力学、疾病或障碍的严重程度和病程、个体先前的或正在进行的治疗、个体的健康状况和对药物的反应、以及主治医生的判断)来确定本发明中活性成分的有效量或剂量。
典型的剂量范围是从约0.0001至约200毫克活性成分每公斤个体体重每天，例如从约为0.001至100毫克/公斤/天，或者约为0.01至35毫克/公斤/天，或者约为0.1至10毫克/公斤，每日一次或分剂量单位服用(例如，每日两次、每日三次、每日四次)。对于一个70公斤的人而言，合适剂量例证范围是从约0.05至约7克/天，或者约为0.2至约5克/天。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
通用合成方法
在本申请中，当化合物的名称与结构式不一致时，以化合物的结构式为准，除非上下文内容表明结构不正确，而化合物的名称是正确的。
本文所述的式(I)化合物可以用商业上可获得的原料、通过本领域已知的方法或本专利申请所公开的方法或类似的方法合成。
路线1中所示的合成路线举例说明了代表性的本发明化合物的通用合成方法。
代表性合成方法
路线1
其中X1、X2、R1至R4、R9、R10以及p如上所定义。
本发明化合物可通过上述合成方法或类似的方法制备。含有适当取代基的芳基溴化合物或碘化合物A1在钯催化剂的存在下和吡唑硼酸酯发生Suzuki反应得到化合物A2。A2在酸性条件下(如盐酸或三氟醋酸等)脱去羟基的保护基。所得到的游离羟基可和四溴化碳、三苯基膦反应转化为溴，从而得到化合物A3。该羟基也可通过其它适当条件转化为其它离去基团。A3在碱性条件下进行分子内关环反应可得到三环化合物A4。后者经N-溴代琥珀酰亚胺处理可转化为吡唑溴化物A5。随后A5和硼酸酯A6在钯催化下反应得到化合物A7。A7在酸性条件下脱去氨基的保护得到最终化合物A8。
具体实施方式
以下实施例仅为进一步描述本发明，而非限制本发明的范围。
实施例
实施例给出了代表性的本发明化合物的制备及相关结构鉴定数据。必须说明，下述实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。
1H NMR图谱是用Bruker AVANCE NEO 400M测定而得，化学位移用ppm表示。1H NMR的表示方法：s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，m＝多重峰，br＝变宽的，dd＝双重峰的双重峰，dt＝三重峰的双重峰。若提供偶合常数时，其单位为Hz。
质谱是用Agilent 6120B and/or Shimadzu LCMS2010仪测定得到。
在下列实施例中，除非另有指明，所有温度为摄氏温度，压力为一个或接近一个大气压；除非另有指明，各种起始原料和试剂来自市售或者是根据已知的方法合成，市售原料和试剂均不经进一步纯化直接使用。
实施例中如无特殊说明，反应中的溶液是指水溶液。
对化合物进行纯化，采用硅胶柱层析洗脱剂体系和薄层色谱法，其中洗脱剂体系常用为：石油醚和乙酸乙酯体系以及二氯甲烷和甲醇体系。其中溶剂的体积比根据化合物的极性不同而不同，也可以加入少量的酸性或碱性试剂进行调节，如醋酸或三乙胺等。或采用制备型高效液相色谱进行纯化。
以下为一些常用的缩略语：
CD3OD：氘代甲醇。
CDCl3：氘代氯仿。
DMSO-d6：氘代二甲基亚砜。
CBr4：四溴化碳
Cs2CO3：碳酸铯
DCM：二氯甲烷
ESI：电喷雾离子化
MeCN：乙腈
NBS：N-溴代琥珀酰亚胺
NCS:N-氯代琥珀酰亚胺
NIS:N-碘代琥珀酰亚胺
DAST:二乙胺基三氟化硫
DIAD:偶氮二甲酸二异丙酯
DIPEA:N,N-二异丙基乙胺
DMAP:4-二甲氨基吡啶
DMP:戴斯-马丁氧化剂
LDA:二异丙基氨基锂
m-CPBA:间氯过氧苯甲酸
cataCXium-A-Pd-G3:甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)
TsCl:对甲苯磺酰氯
Pd(dppf)Cl2：1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)
Pd2(dba)3:三(二亚苄基丙酮)钯
Pd(PPh3)2Cl2:双三苯基磷二氯化钯
Pd(dtbpf)Cl2:[1,1'-双(二叔丁基膦)二茂铁]二氯化钯(II)
prep-HPLC：制备型高效液相色谱
PPh3：三苯基膦
Selectfluor:1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷二(四氟硼酸)盐
TEA:三乙胺
TFA：三氟醋酸
Xantphos:4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽
实施例1：
1-[4-(氨基甲基)-1-氧代-2H-苯并[2,1-d][1,2]二嗪-6-基]-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1.5]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
第一步：
将化合物2-溴-3-羟基苯-1-甲腈(1000mg，5.05mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，在冰浴下向其中加入氢化钠(303mg,7.58mmol,60％)，在氮气保护下反应1小时。然后向反应液滴加2-(3-溴丙氧基)四氢-2H-吡喃(1.2g,5.55mmol)。反应液继续在室温下反应1小时后，反应体系用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭，乙酸乙酯(100mL)萃取三次，合并有机相并用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-10％)纯化得到棕色固体产品2-溴-3-{[3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-氧基)丙基]氧基}苯-1-甲腈(680mg，收率：37.6％)。LCMS:ESI m/z 341(M+H)+。
第二步：
将化合物2-溴-3-{[3-(3,4,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]丙基]氧基}苯-1-甲腈(680mg，1.99mmol)和1H-吡唑-3-硼酸频哪酯(426mg，2.2mmol)溶解在二氧六环(6mL)和水(2mL)中，加入碳酸钾(690mg,5.0mmol)和1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(163mg，0.20mmol)，在氮气保护下加热到100℃反应3小时。冷却至室温后，反应体系用饱和氯化铵溶液(10mL)淬灭，乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，干燥过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到棕色固体产品2-(2H-吡唑-3-基)-3-{[3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]氧基}苯-1-甲腈(250mg，收率：36.3％)。LCMS:ESI m/z 328(M+H)+。
第三步：
将化合物2-(2H-吡唑-3-基)-3-{[3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]氧基}苯-1-甲腈(250mg，0.76mmol)溶解在MeOH(2mL)中，在冰浴下向其中加入盐酸(2mL，2N)溶液。反应混合物在室温下反应2小时。将混合物浓缩后得到粗产品，将该粗产品悬浮在二氯甲烷(10mL)中，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH到10，收集有机层，干燥过滤后浓缩得到棕色油状粗产品3-[(3-羟丙基)氧基]-2-(2H-吡唑-3-基)苯-1-甲腈(150mg，收率：76.7％)。LCMS:ESI m/z244(M+H)+。
第四步：
将化合物3-[(3-羟丙基)氧基]-2-(2H-吡唑-3-基)苯-1-甲腈(150mg，0.62mmol)和三苯基膦(194mg，0.74mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，降温至0℃加入四溴化碳(225mg,0.68mmol)，混合物在室温下氮气保护反应2小时。反应混合物用水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到黄色油状产品3-[(3-溴丙基)氧基]-2-(2H-吡唑-3-基)苯-1-甲腈(100mg，收率：50.0％)。LCMS:ESI m/z 306(M+H)+。
第五步：
将化合物3-[(3-溴丙基)氧基]-2-(2H-吡唑-3-基)苯-1-甲腈(100mg，0.33mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入碳酸铯(266mg，0.82mmol)和NaI(50mg，0.33mmol)，反应混合物加热到50℃反应2小时。反应混合物用水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到黄色油状产品6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(70mg，收率：90.4％)。LCMS:ESI m/z 226(M+H)+。
第六步：
将化合物6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(70mg，0.31mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，降温至-40℃，分批加入N-溴化丁二酰亚胺(55mg，0.31mmol)，在此温度下反应30分钟，反应混合物用水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，该粗产物通过硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到黄色固体产品1-溴-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮辛环-12-甲腈(70mg，收率：70.4％)。LCMS:ESI m/z 306(M+H)+。
第七步：
将化合物1-溴-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(50mg，0.16mmol)和(4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(73mg，0.18mmol,该化合物按文献报道方法合成J MedChem 2022,65,1749)溶解在二氧六环(3mL)和水(1mL)中，向反应体系中加入碳酸钾(57mg，0.41mmol)和1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(6mg)，反应体系加热到100℃，在氮气保护下反应3小时，反应体系用饱和氯化铵溶液(10mL)淬灭，乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，该粗产物通过硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷＝0-20％)纯化，得到淡黄色固体产品((7-(12-氰基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(50mg，收率：61.0％)。LCMS:ESI m/z499(M+H)+。
第八步：
将化合物((7-(12-氰基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧杂氮杂-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.06mmol)溶解在二氯甲烷(2mL)中，在0℃下向反应体系中加入三氟乙酸(1mL)。混合物在室温下反应1小时后浓缩，得到的粗产品悬浮在DCM(5mL)，用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH值至8-9，收集有机层，干燥过滤后浓缩得到粗产品经反相制备得到白色固体产品1-[4-(氨基甲基)-1-氧代-2H-苯并[2,1-d][1,2]二嗪-6-基]-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1.5]氧氮杂辛环-12-甲腈(7mg，收率：28.7％)；1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.22(d,J＝8.3Hz,1H),8.09(s,1H),7.76-7.71(m,3H),7.57-7.55(m,1H),7.51(d,J＝8.4Hz,1H),4.769-4.58(m,2H),4.39-4.21(m,2H),4.13-4.05(m,1H),4.01-3.96(m,1H),2.23-2.12(m,1H),2.04-1.98(m,1H)。LCMS:ESIm/z 399(M+1)+。
实施例2：
4-(氨基甲基)-6-(8,8-二氧基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-1-基)酞嗪-1(2H)-酮的制备
第一步:
将化合物2-溴苯硫酚(1000mg,5.29mmol)溶解在四氢呋喃(15mL)中，在冰浴下向反应体系中加入氢化钠(250mg,6.35mmol,60％)，反应液升至室温反应1h；再次将反应液冷却到零度，然后向反应液滴加2-(3-溴丙氧基)四氢-2H-吡喃(1.1mL,6.35mmol)。反应液继续在零度下反应5分钟，然后升至室温反应1小时。将反应液倒入冰水(50mL)中，乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并有机相并用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-20％)纯化得到无色油状产品2-(3-((2-溴苯基)硫基)丙氧基)四氢-2H-吡喃(1.5g,收率:85.6％)。LCMS:ESI m/z 331(M+1)+。
第二步:
将化合物2-(3-((2-溴苯基)硫基)丙氧基)四氢-2H-吡喃(1.50g,4.53mmol)溶解在二氧六环(20mL)和水(4mL)中，向其中加入1H-吡唑-3-硼酸频哪酯(1.05g,5.43mmol)，碳酸钾(1.56g,11.3mmol)和1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(0.33g)，反应体系加热到90℃，在氮气保护下反应16小时。冷却至室温后，反应体系用乙酸乙酯(20mL)和水(10mL)稀释，收集有机相并用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，该粗产物通过硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝15-30％)纯化，得到白色固体产品5-(2-((3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)硫基)苯基)-1H-吡唑(1.16g,收率:80.5％)。LCMS:ESIm/z 319(M+1)+。
第三步:
将化合物5-(2-((3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)硫基)苯基)-1H-吡唑(1.16g,3.64mmol)溶解在四氢呋喃(10mL)中并在冰浴下向其中加入盐酸二氧六环溶液(1.8mL，4N)。反应混合物在室温下反应30分钟。反应液用乙酸乙酯(20mL)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH到8-10，收集有机层，干燥过滤后浓缩得到黄色油状产品3-(2-(1H-吡唑-5-基)苯基)硫基)丙-1-醇(750mg,收率:87.9％)，该粗产品可直接用于下一步反应。LCMS:ESI m/z 235(M+1)+。
第四步：
将化合物3-(2-(1H-吡唑-5-基)苯基)硫基)丙-1-醇(0.75g,3.20mmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，在零度下向其中加入三苯基膦(1.26g,4.80mmol)和四溴化碳(1.27g,3.84mmol)，混合物在室温下氮气保护反应2小时。反应混合物直接浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝5-35％)纯化，得到白色固体产品5-(2-((3-溴丙基)硫基)苯基)-1H-吡唑(0.55g,收率:57.8％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.57(d,J＝1.7Hz,1H),7.50-7.47(m,1H),7.43-7.39(m,1H),7.24(dt,J＝7.1,5.1Hz,3H),6.57(s,1H),3.50(t,J＝6.2Hz,2H),2.88(t,J＝7.0Hz,2H),1.92(d,J＝6.6Hz,2H)。LCMS:ESI m/z 297(M+1)+。
第五步：
将化合物5-(2-((3-溴丙基)硫基)苯基)-1H-吡唑(0.50g,1.68mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中，加入碳酸铯(1.64g,5.05mmol)，反应混合物加热到80℃反应2小时。反应混合物用饱和氯化铵溶液(100mL)淬灭，用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷＝0-2％)纯化，得到无色油状产品6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环(0.25g,收率:68.7％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.65-7.60(m,1H),7.49(d,J＝1.7Hz,1H),7.34-7.29(m,3H),6.20(d,J＝1.7Hz,1H),3.67(s,1H),2.71(s,2H),2.17-2.09(m,2H)。LCMS:ESI m/z217(M+1)+。
第六步：
将化合物6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环(250mg,1.16mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，降温至零度，向其中加入间氯过氧苯甲酸(498mg,2.89mmol)，在室温下反应2小时，反应混合物用水(10mL)稀释，用二氯甲烷(15mL)萃取三次，合并的有机相依次用10％的亚硫酸氢钠溶液和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷＝0-4％)纯化，得到白色固体产品6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环8,8-二氧化物(120mg,收率:41.8％)。LCMS:ESI m/z 249(M+1)+。
第七步：
将化合物6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环8,8-二氧化物(120mg,0.48mmol)溶解在乙腈(5mL)中，在零度下向其中加入N-溴化丁二酰亚胺(86mg,0.48mmol)，反应体系在室温下反应3h，反应混合物浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝10-55％)纯化，得到白色固体产品1-溴-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环8,8-二氧化物(140mg,收率:88.5％)。1H NMR(400MHz,MeOD):δ8.25(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),7.85(ddd,J＝10.9,7.4,1.6Hz,2H),7.65-7.56(m,2H),4.53-4.41(m,1H),3.83-3.72(m,1H),3.50-3.41(m,2H),2.35-2.25(m,2H)。LCMS:ESI m/z 327(M+1)+。
第八步：
将化合物1-溴-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环8,8-二氧化物(50mg,0.15mmol)溶解在二氧六环(5mL)和水(1mL)中，向其中加入(4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(73.6mg,0.18mmol)，向反应体系中加入碳酸钾(53mg,0.38mmol)和1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(11mg)，在氮气保护下，加热到90℃反应4小时。待冷至室温后，反应体系用乙酸乙酯(10mL)和水(5mL)稀释，收集有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷＝0-5％)纯化，得到白色固体产品((7-(8,8-二氧基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(40mg,收率:50.2％)。LCMS:ESI m/z 522(M+1)+。
第九步:
将化合物((7-(8,8-二氧基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(40mg,0.08mmol)溶解在二氯甲烷(1mL)中，在零度下向反应体系中加入三氟乙酸(0.5mL)，混合物在室温下反应30分钟，将浓缩后得到的粗产物经反相制备得到白色固体产品4-(氨基甲基)-6-(8,8-二氧基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-1-基)酞嗪-1(2H)-酮(5.3mg,收率:16.4％)。LCMS:ESI m/z 422[M+H]+。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.37(d,J＝8.0Hz,1H),8.22(d,J＝8.4Hz,1H),8.05(s,1H),7.87(t,J＝7.8Hz,1H),7.74(dd,J＝8.1,7.0Hz,1H),7.67(dd,J＝8.4,1.4Hz,1H),7.53(d,J＝1.0Hz,1H),7.37(d,J＝7.6Hz,1H),4.56-4.51(m,1H),4.32(d,J＝16.2Hz,1H),4.10(d,J＝16.2Hz,1H),3.90-3.81(m,1H),3.55-3.51(m,2H),2.39-2.36(m,2H)。
实施例3：
1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-5,6-二氢-8H-苯并[f]吡唑并[1,5-d][1,4]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
第一步：
将化合物2-溴-3-甲基苯-1-甲腈(1.8g,9.18mmol)和N-溴代丁二酰亚胺(1.63g,9.18mmol)溶解在四氯化碳(20mL)中，再向其中加入偶氮二异丁腈(0.15g,0.92mmol)，反应混合加热到80℃，在氮气保护下反应12小时。冷至室温，将反应混合物过滤，浓缩滤液得到粗产品，经硅胶柱柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝1:10)得到无色油状产品2-溴-3-(溴甲基)苯-1-甲腈(1.5g,收率:59.4％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.61(dd,J＝7.8,1.4Hz,1H),7.55(dd,J＝7.7,1.4Hz,1H),7.36(t,J＝7.7Hz,1H),4.54(s,2H)。
第二步：
将化合物2-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)乙醇(0.9mL,6.55mmol)溶解在无水四氢呋喃(20mL)中，在冰浴下向反应体系中加入氢化钠(0.33g,8.18mmol,60％)，反应液在该温度下反应30分钟，然后向其中加入2-溴-3-(溴甲基)苯-1-甲腈(1.5g,5.46mmol)；反应液继续在室温下反应2小时。反应液用饱和氯化铵水溶液(20mL)淬灭，乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并有机相并用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝10-15％)纯化，得到无色油状产品2-溴-3-({[2-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)乙基]氧基}甲基)苯-1-甲腈(1.6g,收率:86.2％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.80(d,J＝7.7Hz,1H),7.62-7.55(m,1H),7.43(t,J＝7.7Hz,1H),4.67(d,J＝4.7Hz,3H),3.99-3.92(m,1H),3.91-3.84(m,1H),3.80-3.75(m,2H),3.71-3.65(m,1H),3.56-3.48(m,1H),1.88-1.70(m,2H),1.67-1.60(m,2H),1.57-1.50(m,2H)。
第三步：
将化合物2-溴-3-({[2-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)乙基]氧基}甲基)苯-1-甲腈(1.60g,4.70mmol)溶解在二氧六环(20mL)和水(5mL)中，向其中加入1H-吡唑-3-硼酸频哪酯(1.10g,5.64mmol)，碳酸钾(1.62g,11.7mmol)和1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(0.34g)，反应体系加热到90℃，在氮气保护下反应16小时。冷却至室温，反应体系用乙酸乙酯(20mL)和水(10mL)稀释，收集有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷＝0-5％)纯化，得到淡黄色固体产品2-(1H-吡唑-5-
基)-3-({[2-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)乙基]氧基}甲基)苯-1-甲腈(0.50g,收率:32.5％)。LCMS:ESI m/z 328(M+1)+。
第四步：
将化合物2-(1H-吡唑-5-基)-3-({[2-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)乙基]氧基}甲基)苯-1-甲腈(500mg,1.53mmol)溶解在乙酸乙酯(5mL)中，在冰浴下向其中加入盐酸二氧六环溶液(5mL，4N)。反应混合物在室温下反应30分钟。反应液用乙酸乙酯(20mL)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH到8-10，收集有机层，干燥过滤后浓缩得到黄色油状粗产品3-{[(2-羟乙基)氧基]甲基}-2-(1H-吡唑-5-基)苯-1-甲腈(250mg,收率:67.3％)，该粗产品可以直接用于下一步反应。LCMS:ESI m/z 244(M+1)+。
第五步：
将化合物3-{[(2-羟乙基)氧基]甲基}-2-(1H-吡唑-5-基)苯-1-甲腈(200mg,0.82mmol)溶解在二氯甲烷(4mL)中，在0℃下向其中加入三苯基膦(431mg,1.64mmol)和四溴化碳(545mg,1.64mmol)，在氮气保护下，室温反应2小时。反应混合物直接浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝15-20％)纯化，得到白色固体产品3-{[(2-溴乙基)氧基]甲基}-2-(1H-吡唑-5-基)苯-1-甲腈(100mg,收率:39.7％)。LCMS:ESI m/z 306(M+1)+。
第六步：
将化合物3-{[(2-溴乙基)氧基]甲基}-2-(1H-吡唑-5-基)苯-1-甲腈(200mg,0.65mmol)溶解在乙腈(200mL)中，向其中加入碳酸铯(425mg,1.31mmol)，反应混合物在室温下反应2小时，过滤浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷＝0-2％)纯化，得到黄色固体产品5,6-二氢-8H-苯并[f]吡唑并[1,5-d][1,4]氧氮杂辛环-12-甲腈(120mg,收率:81.6％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.77(dd,J＝17.4,7.7Hz,2H),7.65-7.55(m,2H),6.66(d,J＝1.4Hz,1H),4.78(d,J＝12.8Hz,1H),4.55(dd,J＝15.1,4.1Hz,1H),4.11-4.06(m,1H),3.85(dd,J＝15.1,9.9Hz,1H),3.74(dt,J＝12.7,4.9Hz,2H)。LCMS:ESI m/z 226(M+1)+。
第七步：
将化合物5,6-二氢-8H-苯并[f]吡唑并[1,5-d][1,4]氧氮杂辛环-12-甲腈(120mg,0.53mmol)溶解在乙腈(10mL)中，在0℃下向其中加入N-溴化丁二酰亚胺(94.8mg,0.53mmol)，反应体系在室温下反应3h，反应混合物浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-55％)纯化，得到白色固体产品1-溴-5,6-二氢-8H-苯并[f]吡唑并[1,5-d][1,4]氧氮杂辛环-12-甲腈(80mg,收率:49.4％)。LCMS:ESI m/z 304(M+1)+。
第八步：
将化合物1-溴-5,6-二氢-8H-苯并[f]吡唑并[1,5-d][1,4]氧氮杂辛环-12-甲腈(20mg,0.07mmol)溶解在二氧六环(5mL)和水(1mL)中，向其中加入((4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(31.7mg,0.08mmol)，碳酸钾(22.7mg,0.164mmol)和1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(4mg)，反应混合物在氮气保护下，加热到90℃反应4小时。冷却至室温后，反应体系用乙酸乙酯(10mL)和水(5mL)稀释，收集有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经Prep-TLC(乙酸乙酯/石油醚＝2:1)纯化，得到白色固体产品((7-(12-氰基-5,6-二氢-8H-苯并[f]吡唑并[1,5-d][1,4]氧氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(12mg,收率:36.6％)。LCMS:ESI m/z 499(M+1)+。
第九步：
将化合物((7-(12-氰基-5,6-二氢-8H-苯并[f]吡唑并[1,5-d][1,4]氧氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(10mg,0.02mmol)溶解在二氯甲烷(1mL)中，在0℃下向反应体系中加入三氟乙酸(0.5mL)，混合物在室温下反应30分钟，将浓缩后得到的粗产品经反相HPLC制备得到白色固体产品1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-5,6-二氢-8H-苯并[f]吡唑并[1,5-d][1,4]氧氮杂辛环-12-甲腈(3.7mg,收率:46.3％)。1H NMR(400MHz,MeOD):δ8.19(d,J＝8.4Hz,1H),8.16(s,1H),8.02-8.00(m,1H),7.81-7.77(m,3H),7.41(dd,J＝8.3,1.6Hz,1H),4.97(d,J＝13.1Hz,1H),4.55(dd,J＝15.4,3.9Hz,1H),4.47(d,J＝16.2Hz,1H),4.32(d,J＝16.3Hz,1H),4.17(dd,J＝13.0,3.5Hz,1H),4.07-3.93(m,2H),3.75-3.70(m,1H)。LCMS:ESI m/z 399(M+1)+。
实施例4：
1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-12-甲腈
第一步：
将化合物2-溴-3-氟苯-1-甲腈(1.00g,5.00mmol)溶解在二氧六环(10mL)和水(2mL)中，向其中加入1-(2-四氢吡喃基)-1H-吡唑-5-硼酸频哪酯(2.09g,7.50mmol)，碳酸氢钠(1.05g,12.5mmol)和二氯[1,1'-双(二叔丁基膦)二茂铁钯(II)(0.32g)，反应体系加热到90℃，在氮气保护下反应4小时。冷却至室温后，反应体系用乙酸乙酯(20mL)和水(5mL)稀释。收集有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝15-25％)纯化，得到白色固体产品3-氟-2-[2-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基)吡唑-3-基]苯-1-甲腈(1.1g,收率:81.1％)。LCMS:ESI m/z 272(M+1)+。
第二步：
将化合物3-巯基-1-丙醇(0.38mL,4.42mmol)溶解在无水N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，在零度下向其中加入氢化钠(440mg,11.1mmol,60％),反应混合物在该温度下反应30分钟，然后向其中加入3-氟-2-[2-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基)吡唑-3-基]苯-1-甲腈(1.00g,3.69mmol)。得到的反应体系加热到120℃反应过夜。冷却至室温后，反应体系用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后得到粗产品经硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷＝0-5％)得到无色油状产品3-(3-羟丙基)硫基)-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈(1.1g,收率:86.9％)。LCMS:ESI m/z 344(M+1)+。
第三步:
将化合物3-(3-羟丙基)硫基)-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈(1.00g,2.91mmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，在0℃下向其中加入三苯基膦(1.53g,5.82mmol)和四溴化碳(1.93g,5.82mmol),反应混合物在室温下反应2小时，浓缩后粗品经硅胶柱层析得到淡黄色固体产品3-(3-溴丙基)硫基)-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈(400mg,收率:33.8％)。LCMS:ESI m/z 406(M+1)+。
第四步:
将化合物3-(3-溴丙基)硫基)-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈(400mg,0.98mmol)溶解在乙酸乙酯(5mL)中，在零度下向其中加入盐酸二氧六环溶液(5mL,4M),反应混合物在室温下反应30分钟。反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH到9-10，收集有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后得到黄色油状粗产品3-((3-溴丙基)硫基)-2-(1H-吡唑-5-基)苯甲腈(250mg,收率:78.8％)，该粗产品可以直接用于下一步反应。LCMS:ESI m/z 322(M+1)+。
第五步:
将化合物3-((3-溴丙基)硫基)-2-(1H-吡唑-5-基)苯甲腈(250mg,0.776mmol)溶解在乙腈(200mL)中，在零度下向其中加入碳酸铯(632mg,1.94mmol),在室温下反应2小时。反应液经过滤浓缩得到粗品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-40％)纯化，得到白色固体产品6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-12-甲腈(100mg,收率:53.4％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.89(dd,J＝7.9,1.1Hz,1H),7.68(dd,J＝7.8,1.1Hz,1H),7.57(d,J＝1.9Hz,1H),7.43(t,J＝7.8Hz,1H),6.45(d,J＝1.9Hz,1H),4.51-4.41(m,1H),3.64-3.56(m,1H),2.86(dt,J＝14.9,4.1Hz,1H),2.66-2.53(m,1H),2.17-2.09(m,2H)。LCMS:ESI m/z242(M+1)+。
第六步:
将化合物6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-12-甲腈(100mg,0.41mmol)溶解在乙腈(2mL)中，在0℃下向其中加入N-溴代丁二酰亚胺(73.8mg,0.41mmol),室温反应3小时，浓缩得到粗产品经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-40％)纯化，得到白色固体产品1-溴-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-12-甲腈(80mg,收率:60.3％)。LCMS:ESI m/z 320(M+1)+。
第七步:
将化合物1-溴-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-12-甲腈(50mg,0.16mmol)溶解在二氧六环(5mL)和水(1mL)中，向其中加入(4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(94.0mg,0.23mmol),碳酸钾(54.0mg,0.39mmol)和二氯[1,1'-双(二叔丁基膦)二茂铁钯(II)(10mg),在氮气保护下，加热到90℃反应4小时。冷却至室温后，反应混合物用乙酸乙酯(10mL)和水(5mL)稀释。收集有机层用饱和食盐水洗，干燥过滤后，浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷＝0-10％)纯化得到白色固体产品((7-(12-氰基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(35mg,收率:43.6％)。LCMS:ESI m/z 515(M+1)+
第八步:
将化合物((7-(12-氰基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(35mg,0.07mmol)溶解在二氯甲烷(1mL)中，在零度下向其中加入三氟乙酸(0.5mL),室温下反应30分钟。浓缩得到粗产品，经反相HPLC纯化得到白色固体产品1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-12-甲腈(4.5mg,收率:16％)。1H NMR(400MHz,MeOD):δ8.27(d,J＝7.0Hz,1H),8.18(d,J＝8.4Hz,1H),8.15(s,1H),7.84(d,J＝6.9Hz,1H),7.75(t,J＝7.8Hz,1H),7.67(s,1H),7.40-7.33(m,1H),4.56-4.51(m,1H),4.41(d,J＝16.2Hz,1H),4.27(d,J＝16.2Hz,1H),3.84-3.78(m,1H),3.16-3.13(m,1H),2.87-2.80(m,1H),2.36-2.27(m,1H),2.15-2.09(m,1H)。LCMS:ESI m/z 415(M+1)+。
实施例5：
1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-5,6,7,8-四氢苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂壬环-13-甲腈的制备
第一步：
将化合物2-溴-3-羟基苯-1-甲腈(1.00g，5.05mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，在零度下向其中加入氢化钠(0.30g,7.58mmol,60％)，在氮气保护下反应1小时。然后再加入2-[(4-溴丁基)氧基]四氢吡喃(0.93ml，5.05mmol)。反应混合物在室温下继续反应1小时。用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(100ml)萃取三次，合并的有机相用水和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到棕色固体的产品2-溴-3-{[4-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2基氧基)丁基]氧基}苯-1-甲腈(1.00g，收率：53.10％)。LCMS:ESI m/z:355(M+1)+。
第二步：
将化合物2-溴-3-{[4-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2基氧基)丁基]氧基}苯-1-甲腈(1000mg，2.82mmol)和1H-吡唑-3-硼酸频哪酯(50mg,2.82mmol)溶解在二氧六环(6mL)和水(2mL)中，加入碳酸钾(970mg,7.06mmol)和二氯[1,1'-双(二叔丁基膦)二茂铁钯(II)(10mg),在氮气保护下，加热到100℃反应3小时。冷却至室温后，反应混合物用水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并的有机相用水和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到白色油状产品2-(2H-吡唑-3-
基)-3-{[4-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丁基]氧基}苯-1-甲腈(900mg，收率：88.7％)。LCMS:ESI m/z:342(M+1)+。
第三步：
将化合物2-(2H-吡唑-3-基)-3-{[4-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丁基]氧基}苯-1-甲腈(900mg,2.64mmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，在零度下向其中加入三氟乙酸(5mL)。在室温下反应1小时。反应混合物浓缩后溶解在二氯甲烷(30mL)中，然后用饱和碳酸氢钠溶液调节pH到8-9，用二氯甲烷(50mL)萃取三次，合并的有机相用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到棕色油状的产品3-[(4-羟基丁基)氧基]-2-(2H-吡唑-3-基)苯-1-甲腈(600mg，收率：84.1％)。LCMS:ESI m/z258(M+1)+。
第四步：
将化合物3-[(4-羟基丁基)氧基]-2-(2H-吡唑-3-基)苯-1-甲腈(600mg,2.33mmol)和三苯基膦(734mg，2.8mmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，在零度下向其中加入四溴化碳(773mg，2.33mmol)。室温反应2小时，用水(10mL)稀释，用二氯甲烷(50mL)萃取三次，合并的有机相用水和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到黄色固体产品3-[(4-溴丁基)氧基]-2-(2H-吡唑-3-基)苯-1-甲腈(600mg，收率：76.34％)。LCMS:ESI m/z:320/322(M+H)+。
第五步：
将化合物3-[(4-溴丁基)氧基]-2-(2H-吡唑-3-基)苯-1-甲腈(250mg，0.78mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入碳酸铯(636mg，1.95mmol)和碘化钠(117mg，0.78mmol)，50℃反应12小时。冷却至室温用水(20mL)稀释，乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并的有机相用水和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到白色固体产品5,6,7,8-四氢苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂壬环-13-甲腈(100mg，收率：50.85％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.95(s,4H),7.74-7.70(m,1H),7.66(d,J＝4.9Hz,2H),7.58(d,J＝1.8Hz,1H),6.41(d,J＝1.8Hz,1H),4.27(s,2H),4.09-3.63(m,2H),2.01-1.90(m,2H),1.75-1.66(m,2H)。LCMS:ESI m/z 240(M+H)+。
第六步：
将化合物5,6,7,8-四氢苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂壬环-13-甲腈(100mg，0.42mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，降温至零度加入NBS(75mg，0.42mmol)，混合物在室温下反应5小时。反应液用水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到白色固体的1-溴-5,6,7,8-四氢苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂壬环-13-甲腈(70mg，收率：50.0％)。LCMS:ESI m/z318/320(M+H)+。
第七步：
将化合物1-溴-5,6,7,8-四氢苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂壬环-13-甲腈(35mg，0.11mmol)和((4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(48mg，0.12mmol)溶解在二氧六环(1.5mL)和水(0.5mL)中，向其中加入碳酸钾(38mg，0.28mmol)和[1,1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)(8mg)，在氮气保护下加热到100℃反应3小时。冷却至室温后，反应混合物用水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷0-10％)纯化，得到黄色油状产品((7-(13-氰基-5,6,7,8-四氢苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂壬环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(35mg，收率：58.97％)。LCMS:ESI m/z 513(M+H)+。
第八步：
将化合物((7-(13-氰基-5,6,7,8-四氢苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂壬环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(35mg，0.07mmol)溶解在二氯甲烷(2mL)中，在零度下向其中加入三氟乙酸(1mL)，在室温下反应1小时。浓缩后将粗品溶解在二氯甲烷(10mL)中，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH到8-9，收集有机相，浓缩得粗产品，经反相制备得白色固体产品1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞甲嗪-6-基)-5,6,7,8-四氢苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂壬环-13-甲腈(5mg，收率：17.4％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.22(d,J＝8.3Hz,1H),8.16(s,1H),8.12-8.10(m,1H),7.85-7.79(m,1H),7.78-7.72(m,3H),7.57-7.47(m,3H),4.54-4.48(m,1H),4.42-4.35(m,2H),4.31-4.24(m,2H),3.63-3.55(m,1H),2.16-2.05(m,2H),1.90-1.79(m,2H)。LCMS:ESI m/z 413(M+1)+。
实施例6：
1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-5,6-二氢苯并[f]吡唑并[1,5-d][1,4]氧氮杂庚环-11-甲腈的制备
第一步:
将化合物2-溴-3-羟基苯-1-甲腈(0.50g，2.53mmol)和2-[(2-溴乙基)氧基]四氢吡喃(0.42mL，2.78mmol)溶于乙腈(10mL)中，向其中加入碳酸铯(2.47g，7.57mmol)。反应混合物在50℃下反应过夜。冷却至室温，将反应混合物用水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝1：3)纯化，得到淡黄色油状产品2-溴-3-(2-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯甲腈(500mg，收率：60.71％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.49-7.44(m,1H),7.41-7.33(m,2H),4.77(t,J＝3.2Hz,1H),4.31-4.27(m,2H),4.09-4.04(m,1H),3.96-3.82(m,2H),3.56-3.48(m,1H),1.86-1.68(m,2H),1.61-1.47(m,4H)。
第二步:
将化合物1H-吡唑-3-硼酸频哪酯(446mg，2.30mmol)、2-溴-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯甲腈(500mg，1.53mmol)和碳酸钾(635mg，4.60mmol)溶于二氧六环(5mL)和水(1mL)中，在氮气保护下加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(112mg)。反应混合物在氮气保护下加热到100℃反应过夜。冷却至室温后，将反应混合物浓缩经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝1：3)纯化，得到淡黄色油状产品2-(1H-吡唑-5-基)-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯甲腈(250mg，收率：52.5％)。LCMS:ESI m/z314(M+1)+。
第三步：
将化合物2-(1H-吡唑-5-基)-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)乙氧基)苯甲腈(250mg，0.80mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，在零度下加入三氟乙酸(1mL)，室温反应1小时。浓缩，加入水(5mL)，用饱和碳酸氢钠水调节pH到9，并用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到黄色半固体粗产品3-[(2-羟乙基)氧基]-2-(2H-吡唑-3-基)苯-1-甲腈(100mg，收率:41％)，该粗产品可以直接用于下一步。LCMS:ESI m/z230(M+1)+。
第四步：
将化合物3-[(2-羟乙基)氧基]-2-(2H-吡唑-3-基)苯-1-甲腈(100mg，0.44mmol)和三苯基膦(229mg，0.87mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，在氮气保护下加入四溴化碳(289mg，0.87mmol)，在室温下反应1小时。加入水(10mL)稀释，并用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到淡黄色固体粗产品3-[(2-溴乙基)氧基]-2-(2H-吡唑-3-基)苯-1-甲腈(110mg收率:85.6％)，该粗产品可以直接用于下一步。LCMS:ESIm/z 292(M+1)+。
第五步：
将化合物3-[(2-溴乙基)氧基]-2-(2H-吡唑-3-基)苯-1-甲腈(110mg，0.38mmol)溶于乙腈(100mL)中，向其中加入碳酸铯(245mg，0.75mmol)，在50℃下反应过夜。冷却至室温后，将反应混合物过滤浓缩后经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到白色固体产品5,6-二氢苯并[f]吡唑并[1,5-d][1,4]氧氮杂庚环-11-甲腈(60mg，收率：75.4％)白色固体。LCMS:ESI m/z 212(M+1)+。
第六步:_
将化合物5,6-二氢苯并[f]吡唑并[1,5-d][1,4]氧氮杂庚环-11-甲腈(60mg，0.28mmol)溶于乙腈(3mL)中，加入N-溴代琥珀酰亚胺(51mg，0.28mmol)，在室温下反应1小时。将反应混合物浓缩后经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到白色固体产品1-溴-5,6-二氢苯并[f]吡唑并[1,5-d][1,4]氧氮杂庚环-11-甲腈(60mg，收率：72.80％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.86(d,J＝7.6Hz,1H),7.82(s,1H),7.71(t,J＝8.0Hz,1H),7.62(d,J＝8.0Hz,1H),4.67-
4.52(m,2H),4.49-4.40(m,2H)。LCMS:ESI m/z 290(M+1)+。
第七步:
将化合物((4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(83mg，0.21mmol)、1-溴-5,6-二氢苯并[f]吡唑并[1,5-d][1,4]氧氮杂庚环-11-甲腈(50mg，0.17mmol)和碳酸钾(71mg，0.52mmol)溶于二氧六环(1mL)和水(0.2mL)中，在氮气保护下加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(13mg)。在氮气保护下加热到100℃反应过夜。冷却至室温后，将反应混合物浓缩得到粗产品，硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-100％)纯化，得到所需产物((7-(11-氰基-5,6-二氢苯并[f]吡唑并[1,5-d][1,4]氧氮杂庚环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(50mg，收率：59.9％),为淡黄色固体。LCMS:ESI m/z485(M+1)+。
第八步：
将化合物((7-(11-氰基-5,6-二氢苯并[f]吡唑并[1,5-d][1,4]氧氮杂庚环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(50mg，0.10mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，在冰浴下加入三氟乙酸(1mL)。室温下反应1小时。浓缩得粗产品经反相制备得到白色固体产品1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-5,6-二氢苯并[f]吡唑并[1,5-d][1,4]氧氮杂庚环-11-甲腈(20mg，收率：50.4％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.29(d,J＝8.4Hz,1H),8.09(s,1H),7.84(d,J＝1.2Hz,1H),7.68-7.66(m,2H),7.65-7.58(m,2H),4.84-4.75(m,2H),4.62-4.57(m,2H),4.49-4.39(m,1H),4.36-4.20(m,2H).LCMS:ESI m/z385(M+1)+。
实施例M-7和P-7：
1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈异构体M-7和异构体P-7的制备
第一步:
将化合物4-溴代萘-2-醇(2.2g，9.9mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，向其中加入氰化亚铜(1.3g，14.8mmol)。加热到150℃反应1小时。冷却至室温后向反应混合物中加入10％的NaOH溶液(30mL)，搅拌5分钟，过滤，滤液调节pH到2-3，并用乙酸乙酯(100mL)萃取三次。合并的有机相依次用水和饱和食盐水洗，用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到所棕色固体产品3-羟基萘-1-甲腈(1.0g，收率：59.6％)。LCMS:ESI m/z 168(M-1)_。
第二步：
将化合物3-羟基萘-1-甲腈(1.0g，5.9mmol)溶解在乙腈(6mL)中，向其中加入2-[(3-溴丙基)氧基]四氢吡喃(1.6g，7.08mmol)和碳酸铯(5.8g，17.7mmol)，在室温下反应3小时。用乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)稀释。收集有机层，水相用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并有机相用饱和食盐水洗，干燥浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到无色油状产品3-{[3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]氧基}萘-1-甲腈(1.4g，收率：76.2％)。LCMS:ESI m/z 311(M+1)+。
第三步：
将化合物3-{[3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]氧基}萘-1-甲腈(1.4g，4.5mmol)溶解在无水四氢呋喃(20mL)中，冷却到-65度，缓慢加入二异丙基氨基锂(4.5mL，9mmol)，在该温度下反应20分钟，然后加入I2(1.3g，4.95mol)的四氢呋喃(2mL)溶液，滴加过程中保持内温低于-60℃，并继续反应2小时。用饱和氯化铵溶液淬灭。升至室温，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，收集有机层，用饱和食盐水洗涤，干燥浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得黄色固体产品2-碘-3-{[3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]氧基}萘-1-甲腈(1.3g，收率：66％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.01(d,J＝8.0Hz,2H),7.79(s,1H),7.69-7.59(m,2H),4.60(s,1H),4.28(dd,J＝14.9,9.1Hz,2H),3.92(dt,J＝9.9,6.4Hz,1H),3.76-3.67(m,1H),3.62(dt,J＝9.8,6.1Hz,1H),3.46-3.38(m,2H),2.14-2.03(m,2H),1.75-1.66(m,1H),1.61(t,J＝9.0Hz,1H),1.42(dd,J＝37.9,16.2Hz,5H),1.25(d,J＝10.2Hz,1H)。
第四步：
将化合物2-碘-3-{[3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]氧基}萘-1-甲腈(1300mg，3.0mmol)溶解在二氧六环/水(20mL，v/v 9：1)中，向其中加入1H-吡唑-3-硼酸频哪酯(611mg，3.15mol)、[1,1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)(109.8mg)和碳酸钾(2100mg，14.9mmol)，在氮气保护下加热到80℃反应3小时。冷至室温后用乙酸乙酯(20mL)和水(10mL)稀释。收集有机层，用饱和食盐水洗，干燥浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到棕色油状产品2-(1H-吡唑-5-基)-3-(3-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)-1-萘腈(566mg，收率：50％)。LCMS:ESI m/z 378(M+1)+。
第五步：
将化合物2-(1H-吡唑-5-基)-3-(3-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)-1-萘腈(566mg，1.5mmol)溶解在二氯甲烷(3mL)中，在零度下，向其中加入三氟乙酸(1mL)，在0℃反应30分钟。浓缩反应液，加入水(5mL)，用饱和碳酸氢溶液条件pH到9，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并有机层，用饱和食盐水洗，干燥浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到棕色油状产品3-[(3-羟丙基)氧基]-2-(2H-吡唑-3-基)萘-1-甲腈(430mg，收率：76％)。LCMS:ESI m/z 294(M+1)+。
第六步：
将化合物3-[(3-羟丙基)氧基]-2-(2H-吡唑-3-基)萘-1-甲腈(430mg，1.5mmol)溶解在二氯甲烷(20mL)中，在零度下向其中加入四溴化碳(984mg，3mol)和三苯基膦(786mg，3mmol)，在室温下反应1小时。用饱和氯化铵溶液淬灭，用二氯甲烷(50mL)萃取三次，合并有机层，干燥过滤后浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得黄色固体产品3-[(3-溴丙基)氧基]-2-(2H-吡唑-3-基)萘-1-甲腈(399mg，收率：75％)。LCMS:ESI m/z357(M+1)+。
第七步：
将化合物3-[(3-溴丙基)氧基]-2-(2H-吡唑-3-基)萘-1-甲腈(399mg，1.1mmol)溶解在乙腈(500mL)中，向其中加入碳酸铯(1100mg，3.3mmol)，在室温下反应1.5小时。过滤浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-100％)纯化，得到黄色固体产品6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈(303mg，收率：99％)。1HNMR(400MHz,DMSO)δ8.22(s,1H),8.14(dd,J＝11.9,7.9Hz,2H),7.82-7.72(m,2H),7.62(d,J＝1.9Hz,1H),6.71(d,J＝1.9Hz,1H),4.75-3.91(m,4H),2.01(dd,J＝20.8,18.4Hz,2H).LCMS:ESI m/z276(M+1)+。
第八步：
将化合物6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈(303mg，1.09mmol)溶解在乙腈(20mL)中，在零度下向其中加入N-溴代丁二酰亚胺(235mg，1.32mmol)，在室温下反应1.5小时。直接浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-100％)纯化，得淡黄色固体产品1-溴-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈(353mg，收率：91％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.28(s,1H),8.17(dt,J＝8.6,7.6Hz,2H),7.85-7.76(m,3H),4.76(dd,J＝12.2,4.5Hz,1H),4.52(dd,J＝14.8,5.5Hz,1H),4.13-3.98(m,2H),2.07-1.91(m,2H)。LCMS:ESI m/z 355(M+1)+。
第九步：
将化合物1-溴-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈(353mg，1mmol)溶解在二氧六环：水(10mL，9：1)中，向其中加入(4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(421mg，1.05mmol)、[1,1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)(36.6mg)和碳酸钾(414mg，3mmol)，在氮气保护下加热到100℃反应3小时。冷却至室温后，用乙酸乙酯(20mL)和水(5mL)稀释。收集有机层，干燥过滤后浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-100％)纯化，得白色固体产品({[7-(14-氰基-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3H-苯并[2,1-d][1，2]二嗪-1-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(112mg，收率：20％)，LCMS:ESI m/z 549(M+1)+。
第十步：
将化合物({[7-(14-氰基-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3H-苯并[2,1-d][1,2]二嗪-1-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(110mg，0.2mmol)溶解在二氯甲烷(4mL)中，在零度下向其中加入三氟乙酸(2mL)，在零度下反应1.5小时。浓缩反应液，加入二氯甲烷(10mL)，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH到9，收集有机层，干燥过滤浓缩后得到粗产品，经硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷＝0-20％)纯化，得到白色固体产品1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈(77mg,收率：85.6％)。经SFC拆分后得到两个轴手性异构体，(设备:Waters Thar 80preparative SFC,柱子型号:ChiralPak C-IG,250×21.2mm,I.D.,5μm；流动相:A for CO2 and B for MEOH+
0.1％NH3·H2O；梯度:B 42％；流速:40mL/min；压力:100bar,柱温:35℃；波长:220nm；循环时间:12min；制备总时长:2小时.)
异构体M-7(峰1，保留时间4.08分钟)12.5mg，白色固体；1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.26(s,1H),8.16(d,J＝8.3Hz,1H),8.11(d,J＝11.1Hz,2H),7.99(d,J＝8.0Hz,1H),7.75-7.66(m,3H),7.52(d,J＝8.2Hz,1H),4.91(d,J＝4.7Hz,1H),4.66-4.61(m,1H),4.25-4.20(m,1H),4.08-3.99(m,2H),3.79-3.75(m,1H),2.37-2.21(m,1H),2.04-1.98(m,1H)。LCMS:ESI m/z449(M+1)+。
异构体P-7,(峰2，保留时间6.01分钟)13.9mg，白色固体；1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.26(s,1H),8.16-8.10(m,3H),7.99(d,J＝8.0Hz,1H),7.75-7.66(m,3H),7.49(d,J＝8.0Hz,1H),4.93-4.89(m,1H),4.66-4.61(m,1H),4.23-4.18(m,1H),4.07-4.01(m,2H),3.91-3.87(m,1H),2.35-2.24(m,1H),2.05-1.99(m,1H)。LCMS:ESI m/z 449(M+1)+。
实施例8:
1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-9-氯-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈的制备
第一步：
将化合物1-溴-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈(180mg,0.51mmol)溶解在AcOH(3mL)中，向其中加入N-氯代丁二酰亚胺(82mg,0.61mmol)，在80℃反应1小时。将反应液浓缩，然后加入乙酸乙酯(10mL)，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH到9，收集有机相。干燥过滤浓缩后得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-60％)纯化，得到淡黄色固体产品1-溴-9-氯-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈(140mg,收率:70.6％)。LCMS:ESI m/z 388(M+1)+。
第二步：
将化合物1-溴-9-氯-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈(50mg,0.13mmol)溶解在二氧六环：水(3mL，9：1)中，向其中加入(4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(62mg,0.15mmol)、1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(5mg)和碳酸钾(53mg,0.38mmol)，在氮气保护下加热到100℃反应3小时。冷却至室温后，用乙酸乙酯(20mL)和水(5mL)稀释。收集有机层，干燥过滤后浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-100％)纯化，得到淡黄色固体产品(7-(9-氯-14-氰基-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(30mg,收率:39％)。LCMS:ESI m/z 583(M+1)+。
第三步：
将化合物(7-(9-氯-14-氰基-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(30mg,0.05mmol)溶解在二氯甲烷(3mL)中，在零度下向其中加入三氟乙酸(1mL),室温下反应1.5小时，浓缩并溶解在二氯甲烷(10mL)中,用碳酸氢钠饱和水溶液调节pH到9-10，收集有机相，干燥过滤浓缩后得到粗产品，经反相HPLC制备得到淡黄色固体产品1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-9-氯-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈(5mg,收率:20.7％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.52(d,J＝8.5Hz,1H),8.12(d,J＝7.9Hz,2H),8.05(d,J＝8.4Hz,1H),7.89(t,J＝7.7Hz,1H),7.82-7.76(m,2H),7.36(d,J＝8.2Hz,1H),4.95-4.91(m,1H),4.71-4.66(m,1H),4.46-4.42(m,1H),4.24-4.18(m,2H),4.13-4.06(m,1H),2.37-2.29(m,1H),2.09-2.03(m,1H)。LCMS:ESI m/z 483(M+H)+。
实施例9：
1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二酞嗪-6-基)-5,6,7,8-四氢苯并[c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-12-甲腈的制备
第一步：
将化合物2-(3-溴丙氧基)四氢-2H-吡喃(3.81mL，22.4mmol)溶解在乙腈(50mL)中，然后加入三苯基膦(7.05g，26.9mmol)和碳酸钾(1.55g，11.2mmol)，在95℃反应过夜。冷却至室温，过滤并浓缩滤液，加入乙醚(20mL)并搅拌30分钟，过滤，滤饼用乙醚(20mL)洗涤，真空干燥，得到白色固体产品三苯基(3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)溴化鏻(6.4g，收率：58.8％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.94-7.76(m,15H),4.59-4.55(m,1H),3.88-3.81(m,2H),3.51-3.30(m,4H),1.98-1.94(m,2H),1.88-1.79(m,1H),1.74-1.66(m,1H),1.59-1.49(m,4H)。
第二步：
将化合物三苯基(3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)溴化鏻(1.73g，3.57mmol)在氮气保护下溶于无水四氢呋喃(20mL)中，在冰浴下加入双(三甲基硅基)氨基钠(1.55mL，3.10mmol，2M四氢呋喃溶液)，反应液在该温度下反应15分钟，然后加入2-溴-3-甲酰基苯甲腈(500mg，2.38mmol)，在室温下继续反应30分钟。将反应液慢慢倒入冰水(20mL)中，并用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并有机相并用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝5-10％)纯化得到无色油状产品2-溴-3-(4-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁-1-烯-1-基)苯甲腈(500mg，收率：62.5％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.63-7.55(m,1H),7.49-7.43(m,1H),7.33-7.28(m,1H),6.75-6.71(m,0.5H),6.47-6.44(m,0.5H),6.24-6.17(m,0.5H),5.90-5.83(m,0.5H),4.58-4.51(m,1H),3.84-3.73(m,2H),3.51-3.38(m,2H),2.54-2.33(m,2H),1.77-1.62(m,2H),1.53-1.44(m,4H)。
第三步：
将化合物2-溴-3-(4-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁-1-烯-1-基)苯甲腈(500mg,1.49mmol)溶解于1,4-二氧六环(10mL)和水(2mL)中，再加入1H-吡唑-3-硼酸频哪酯(433mg,2.23mmol)，碳酸钾(617mg,4.46mmol)和1,1'-双(二叔丁基膦)二茂铁二氯合钯(II)(96mg),在氮气保护下加热到90℃反应16小时。冷却至室温后，反应体系用乙酸乙酯(20mL)和水(10mL)稀释，收集有机相并用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝15-30％)纯化，得到白色固体产品2-(1H-吡唑-5-基)-3-(4-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁-1-烯-1-基)苯甲腈(450mg,收率：93.6％)。LCMS:ESI m/z 324(M+H)+。
第四步
将化合物2-(1H-吡唑-5-基)-3-(4-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁-1-烯-1-基)苯甲腈(450mg，1.39mmol)溶于甲醇(10mL)中，加入钯碳(296mg，10％)，并用氢气置换三次，该反应液在氢气(20psi)氛下室温下反应2小时。过滤反应液，滤饼用MeOH(5mL)洗涤三次。合并滤液并浓缩至干，得到淡黄色油状物产品2-(1H-吡唑-5-基)-3-(4-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁基)苯甲腈(400mg，收率：88.3％)，该粗产品可以直接用于下一步反应。LCMS:ESI m/z 326(M+H)+。第五步：
将化合物2-(1H-吡唑-5-基)-3-(4-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁基)苯甲腈(400mg，1.23mmol)溶解在乙酸乙酯(5mL)中，在冰浴下向其中加入盐酸二氧六环溶液(4mL，16.0mmol，4M)，室温下反应30分钟。反应液用乙酸乙酯(20mL)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH到8-10，收集有机层，干燥过滤后浓缩得到黄色油状粗产品3-(4-羟基丁基)-2-(1H-吡唑-5-基)苯甲腈(200mg，收率：67.4％)，该粗产品可以直接用于下一步反应。LCMS:ESI m/z242(M+H)+。第六步：
将化合物3-(4-羟基丁基)-2-(1H-吡唑-5-基)苯甲腈(200mg,0.83mmol)溶解在二氯甲烷(4mL)中，在冰浴下加入三苯基膦(434mg,1.66mmol)和四溴化碳(549mg，1.66mmol)，反应液在室温下反应2小时。直接将反应混合物浓缩得到粗产品。经硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝0-35％)纯化，得到无色油状产品3-(4-溴丁基)-2-(1H-吡唑-5-基)苯甲腈(200mg，收率：79.3％)。LCMS:ESI m/z 304(M+H)+。
第七步：
将化合物3-(4-溴丁基)-2-(1H-吡唑-5-基)苯甲腈(200mg,0.66mmol)溶解在乙腈(20mL)中，然后加入碳酸铯(429mg,1.32mmol)，反应液在室温下反应2小时。将反应混合物过滤浓缩后经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-40％)纯化，得到白色固体产品5,6,7,8-四氢苯并[c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-12-甲腈(110mg,收率：74.9％)。LCMS:ESI m/z 224(M+H)+。
第八步：
将化合物5,6,7,8-四氢苯并[c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-12-甲腈(110mg，0.49mmol)溶解在乙腈(2mL)中，加入N-溴代丁二酰亚胺(87.7mg,0.49mmol)，在室温下反应3小时。将反应混合物直接浓缩后经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-35％)纯化，得到白色固体产品1-溴-5,6,7,8-四氢苯并[c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-12-甲腈(100mg，收率：67.2％)。LCMS:ESI m/z302/304(M+H)+。
第九步：
将化合物1-溴-5,6,7,8-四氢苯并[c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-12-甲腈(50mg，0.17mmol)溶解在1.4-二氧六环(1mL)和水(0.2mL)中，在氮气保护下分别加入(4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(99.6mg,0.25mmol)、碳酸钾(69mg,0.5mmol)和二氯[1,1'-双(二叔丁基膦)二茂铁钯(II)(10.7mg)，在氮气保护下加热到95℃反应过夜。冷却至室温后，反应液用乙酸乙酯(10mL)和水(2mL)稀释。收集有机层，用饱和食盐水洗涤，干燥过滤后浓缩得粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝0-60％)，得到白色固体产品(7-(12-氰基-5,6,7,8-四氢苯并[c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(25mg,收率：30.4％)。LCMS:ESI m/z 497(M+H)+。
第十步：
将化合物(7-(12-氰基-5,6,7,8-四氢苯并[c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(25mg,0.05mmol)溶解在二氯甲烷(0.5mL)中，在零度下向其中加入三氟乙酸(0.1mL),室温下反应30分钟。浓缩得到粗产品，经反相HPLC制备得到白色固体产品1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-5,6,7,8-四氢苯并[c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-12-甲腈(4.5mg,收率:22.6％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.21(d,J＝8.4Hz,1H),8.15(s,1H),7.88(d,J＝5.7Hz,1H),7.74-7.67(m,2H),7.64(s,1H),7.56(d,J＝8.3Hz,1H),4.50-4.45(m,1H),4.09-3.94(m,2H),3.71-3.65(m,1H),3.17-3.12(m,1H),2.33-2.18(m,2H),2.12-2.05(m,1H),1.84-1.72(m,1H),1.65-1.56(m,1H)。LCMS:ESI m/z 397(M+H)+。
实施例10：
1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-9-氯-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
第一步：
将化合物5-溴-2-氯苯酚(17.0g,81.95mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中，在氮气保护下加入氰化锌(8.9g,83.18mmol)和1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(1.6g,2.18mmol)，在氮气保护下加热到145℃反应5小时。冷却至室温后，将反应液倒入水(300mL)中，用乙酸乙酯(200mL)萃取三次。合并有机层，依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到出产品。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-20％)纯化，得到白色固体产品4-氯-3-羟基苯甲腈(9.0g,收率：49.4％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44(d,J＝8.3Hz,1H),7.30(d,J＝1.8Hz,1H),7.18(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),5.92(s,1H)。
第二步：
将化合物4-氯-3-羟基苯甲腈(5.0g，32.56mmol)溶于二氯乙烷(500mL)中，冷却至零下10℃，加入N-碘代丁二亚胺(2.5g，11.11mmol)，反应液在该温度继续反应6h。反应体系倒入饱和亚硫酸氢钠溶液(100mL)中，乙酸乙酯(200mL)萃取三次，合并有机相并用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。经反相硅胶柱层析(乙腈/水＝0-50％)纯化，得到白色固体产品4-氯-3-羟基-2-碘代苯甲腈(450mg，收率：4.9％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)7.44(d,J＝8.3Hz,1H),7.18(d,J＝8.3Hz,1H),6.24(s,1H)。
第三步：
将化合物4-氯-3-羟基-2-碘代苯甲腈(300mg,1.07mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，依次加入碳酸铯(699mg,2.15mmol)和2-(3-溴丙氧基)四氢-2H-吡喃(0.22mL，1.29mmol)，在室温下反应过夜。反应体系用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并有机相并用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-20％)纯化，得到淡黄色油状产品4-氯-2-碘-3-(3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)苯甲腈(350mg，收率：77.3％)。LCMS:ESI m/z 422(M+H)+。
第四步：
将化合物4-氯-2-碘-3-(3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)苯甲腈(350mg,0.83mmol)溶解在1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)中，然后在氮气保护下依次加入1H-吡唑-3-硼酸频哪酯(242mg，1.25mmol)、碳酸钾(344mg，2.49mmol)和二氯[1,1'-双(二叔丁基膦)二茂铁钯(II)(53.6mg)，将反应体系加热到90℃反应15小时。冷却至室温后，用乙酸乙酯(10mL)和水(5mL)稀释，收集有机层，依次用水和饱和食盐水洗涤，干燥过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到黄色固体产品4-氯-2-(1H-吡唑-5-基)-3-(3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)苯甲腈(230mg，收率：76.6％)。LCMS:ESI m/z 362(M+H)+。
第五步：
将化合物4-氯-2-(1H-吡唑-5-基)-3-(3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)苯甲腈(200mg,0.55mmol)溶解在乙酸乙酯(5mL)中，在冰浴下向其中加入盐酸二氧六环溶液(2mL，8.0mmol，4M)，反应液在室温反应30分钟。反应液用乙酸乙酯(10mL)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH到8-10，收集有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤后浓缩得到黄色油状粗产品4-氯-3-(3-羟基丙氧基)-2-(1H-吡唑-5-基)苯甲腈(150mg，收率：97.7％)，该粗产品可以直接用于下一步反应。LCMS:ESI m/z 278(M+H)+。
第六步：
将化合物4-氯-3-(3-羟基丙氧基)-2-(1H-吡唑-5-基)苯甲腈(150mg,0.54mmol)溶解在二氯甲烷(2mL)中，在冰浴下加入三苯基膦(283mg,1.08mmol)和四溴化碳(358mg，1.08mmol)。反应液在室温下反应2小时。直接将反应液浓缩得粗产品。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-35％)纯化，得到无色油状物产品3-(3-溴丙氧基)-4-氯-2-(1H-吡唑-5-基)苯甲腈(100mg,收率：54.4％)。LCMS:ESI m/z 340(M+H)+。
第七步：
将化合物3-(3-溴丙氧基)-4-氯-2-(1H-吡唑-5-基)苯甲腈(100mg,0.29mmol)溶解在乙腈(100mL)中，然后加入碳酸铯(428mg,1.32mmol)，反应液在室温下反应2小时。过滤并浓缩得粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-40％)纯化，得到白色固体产品9-氯-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(60mg,收率：78.7％)。LCMS:ESI m/z 260(M+H)+。
第八步：
将化合物9-氯-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(50mg，0.19mmol)溶解在乙腈(5mL)中，加入N-溴代丁二酰亚胺(34.3mg，0.19mmol)，在室温下反应3小时。将反应液直接浓缩得粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-40％)纯化，得到白色固体产品1-溴-9-氯-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(40mg,收率：61.4％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.59(d,J＝8.3Hz,1H),7.54(s,1H),7.48(d,J＝8.4Hz,1H),4.66-4.58(m,2H),3.84-3.73(m,2H),2.26-2.19(m,1H),1.86-1.81(m,1H)。LCMS:ESI m/z 338(M+H)+。
第九步：
将化合物1-溴-9-氯-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(40mg，0.12mmol)溶解在1,4-二氧六环(3mL)和水(0.6mL)中，在氮气保护下分别加入(4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(71.1mg,0.18mmol)、碳酸钾(49.0mg,0.35mmol)和二氯[1,1'-双(二叔丁基膦)二茂铁钯(II)(7.6mg)，反应体系加热到95℃反应4小时。冷却至室温后，反应体系用饱和氯化铵溶液(10mL)淬灭，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-60％)纯化，得到白色固体产品(7-(9-氯-12-氰基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(20mg，收率：31.8％)。LCMS:ESI m/z 533(M+H)+。
第十步：
将化合物(7-(9-氯-12-氰基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(20mg，0.04mmol)溶解在二氯甲烷(0.5mL)中，在零度下向其中加入三氟乙酸(0.2mL),室温下反应30分钟。直接浓缩得到粗产品，经反相HPLC纯化得到白色固体产品1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-9-氯-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(2mg，收率：12.3％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.23(d,J＝8.4Hz,1H),8.09(s,1H),7.87(d,J＝8.4Hz,1H),7.77(d,J＝1.3Hz,1H),7.56(d,J＝8.4Hz,1H),7.44(dd,J＝8.4,1.5Hz,1H),4.80-4.75(m,1H),4.69-4.64(m,1H),4.49-4.32(m,2H),4.12-4.02(m,2H),2.26-2.16(m,1H),2.07-2.03(m,1H)。LCMS:ESI m/z 433(M+H)+。
实施例11：
1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-9-氯-11-环丙氧基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
第一步：
将化合物5-溴-2-氯-4-氟苯酚(4.99g，22.18mmol)溶在N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中，向其中加入氰化锌(2.60g，22.79mmol)和1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(0.81g，1.11mmol)。在氮气保护下加热至120℃反应24小时。用乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)稀释反应物，收集有机相，水相用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并的有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到黄色固体产品4-氯-2-氟-5-羟基苯-1-甲腈(2.2g，收率：57.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.86(d,J＝8.9Hz,1H),7.74(d,J＝5.7Hz,1H)。LCMS:ESI m/z 170(M-1)-。
第二步：
将化合物4-氯-2-氟-5-羟基苯-1-甲腈(2.2g，12.83mmol)溶在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，在零度下加入N-碘代丁二酰亚胺(2.89g，12.83mmmol)，反应体系在室温下反应1.5小时。用乙酸乙酯(30mL)和水(30mL)稀释反应物，收集有机相，水相用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并的有机相用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到黄色固体产品4-氯-6-氟-3-羟基-2-碘代苯-1-甲腈(2g，收率：52.4％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.76(s,1H),7.84(d,J＝8.9Hz,1H)。LCMS:ESI m/z 296(M-1)-。
第三步：
将化合物4-氯-6-氟-3-羟基-2-碘代苯-1-甲腈(2g，6.72mmol)溶在乙腈(20mL)中，向其中加入碳酸铯(4.38g，13.45mmol)和2-(3-溴丙氧基)四氢-2H-吡喃(1.37mL，8.07mmol)，反应液加热到60℃反应5小时。过滤反应混合物，浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到黄色油状产品4-氯-6-氟-2-碘-3-{[3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]氧基}苯-1-甲腈(2g，收率：67.6％)。LCMS:ESI m/z 438(M-1)-。
第四步：
将化合物4-氯-6-氟-2-碘-3-{[3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]氧基}苯-1-甲腈(2g，4.55mmol)溶在二氧六环(16mL)和水(4mL)中，向其中加入1-(2-四氢吡喃基)-1H-吡唑-5-硼酸频哪酯(1.27g，4,55mmol)、二氯[1,1'-双(二叔丁基膦)二茂铁钯(II)(330mg)和碳酸钾(1.26g，9.09mmol)，反应液在氮气下加热到80℃反应12小时，用乙酸乙酯(30mL)和水(20mL)稀释反应混合物。收集有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到淡黄色固体产品4-氯-6-氟-3-{[3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]氧基}-2-[2-(3,3,5,5-四氢-2H-吡喃-2-基)吡唑-3-基]苯-1-甲腈(300mg，收率：14.2％)。LCMS:ESI m/z 464(M+1)+。
第五步：
将化合物4-氯-6-氟-3-{[3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]氧基}-2-[2-(3,3,5,5-四氢-2H-吡喃-2基)吡唑-3-基]苯-1-甲腈(300mg，0.65mmol)溶在N,N-二甲基乙酰胺(3mL)中，向其中加入碳酸铯(421mg，1.29mmol)和环丙醇(38mg，0.65mmol)，在室温下搅拌2小时。反应液用乙酸乙酯(20mL)和水(10mL)稀释，收集有机相，水相用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，合并有机相用饱和食盐水洗涤，水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到淡黄色固体产品4-氯-6-(环丙氧基)-3-{[3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]氧基}-2-[2-(3,3,5,5-四氢-2H-吡喃-2基)吡唑-3-基]苯-1-甲腈(300mg，收率：92.4％)。LCMS:ESI m/z 502(M+H)+。
第六步：
将化合物4-氯-6-(环丙氧基)-3-{[3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]氧基}-2-[2-(3,3,5,5-四氢-2H-吡喃-2]基]吡唑-3-基]苯-1-甲腈(300mg，0.59mmol)溶解在二氯甲烷(3mL)中，冰浴下向其中加入三氟乙酸(1mL)。在室温下反应1小时。将反应混合物浓缩并用水(10mL)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9，收集二氯甲烷层，水相用二氯甲烷(10mL)萃取三次，合并有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，该经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-100％)纯化，得到淡黄色固体产品4-氯-6-(环丙氧基)-3-[(3-羟丙基)氧基]-2-(2H-吡唑-3-基)苯-1-甲腈(149mg，收率：75％)。LCMS:ESI m/z 334(M+H)+。
第七步：
将化合物4-氯-6-(环丙氧基)-3-[(3-羟丙基)氧基]-2-(2H-吡唑-3-基)苯-1-甲腈(150mg，0.45mmol)和三苯基膦(235mg，0.89mmol)溶在二氯甲烷(5mL)中，在冰浴下向其中加入四溴化碳(298mg，0.89mmol)，反应液在室温下反应2小时。反应体系用饱和氯化铵(5mL)淬灭，用二氯甲烷(10mL)萃取三次，合并的有机层用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得淡黄色固体产品3-[(3-溴丙基)氧基]-4-氯-6-(环丙氧基)-2-(2H-吡唑-3-基)苯-1-甲腈(160mg，收率：89.7％)。LCMS:ESI m/z396/398(M+H)+。
第八步：
将化合物3-[(3-溴丙基)氧基]-4-氯-6-(环丙氧基)-2-(2H-吡唑-3-基)苯-1-甲腈(160mg，0.41mmol)溶在乙腈(200mL)中，溶液中加入碳酸铯(394mg，1.21mmol)，反应液在50℃下反应2小时。过滤反应体系，并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到白色固体产品9-氯-11-环丙氧基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(110mg，收率：86.4％)。LCMS:ESI m/z 316(M+H)+。
第九步：
将化合物9-氯-11-环丙氧基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(100mg，0.32mmol)溶解在乙腈(5mL)中，在冰浴下向其中加入N-溴代丁二酰亚胺(56mg，0.32mmol)，反应液在室温下反应2h。反应体系用水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并有机相用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到白色固体产品1-溴-9-氯-11-环丙氧基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(100mg，收率：80.1％)。LCMS:ESI m/z394/396(M+H)+。
第十步：
将化合物1-溴-9-氯-11-(环丙氧基6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(20mg，0.05mmol)溶解在二氧六环(3mL)和水(1mL)中，向其中加入(4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(20mg，0.05mmol)，碳酸钾(21mg，0.15mmol)和二氯[1,1'-双(二叔丁基膦)二茂铁钯(II)(6.6mg)，反应液加热到90℃反应4小时，反应体系用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(5mL)萃取三次，合并有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得粗产物，经硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷＝0-10％)纯化，得到淡黄色固体产品(7-(9-氯-12-氰基-11-环丙氧基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(10mg，收率：33.5％)。LCMS:ESI m/z 589(M+H)+。
第十一步：
将化合物(7-(9-氯-12-氰基-11-环丙氧基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(10mg，0.017mmol)溶解在二氯甲烷(3mL)中，在室温下缓慢加入三氟乙酸(1mL)。反应液在室温下反应1小时。反应体系浓缩后加入二氯甲烷(10mL)，然后用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至8-9，然后收集有机相，水相用二氯甲烷(10mL)萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得粗产物，经Prep-HPLC纯化得白色固体产品1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-9-氯-11-环丙氧基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(0.83mg，收率：10％)。LCMS:ESI m/z489(M+H)+。
中间体1：
1-溴-9-氯-11-氟-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
第一步：
将化合物5-溴-2-氯-4-氟苯酚(4.99g，22.18mmol)溶在N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中，向其中加入氰化锌(2.60g，22.79mmol)和1,1'-双(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(810mg，1.11mmol)。在氮气保护下，将反应体系加热到120℃反应24小时。用乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)稀释反应物，收集有机相，水相用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并有机相，并依次用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到黄色固体产品4-氯-2-氟-5-羟基-1-苯甲腈(2.2g，收率：57.8％)。LCMS:ESI m/z 170(M-H)-。
第二步：
在冰浴下，将化合物4-氯-2-氟-5-羟基-1-苯甲腈(2.2g，12.83mmol)溶在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，向其中加入N-碘代丁二酰亚胺(2.89g，12.83mmmol)，反应体系在室温下反应1.5小时。用乙酸乙酯(30mL)和水(30mL)稀释反应物，收集有机相，水相用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到黄色固体产品4-氯-6-氟-3-羟基-2-碘-1-苯甲腈(2g，收率：52.4％)。LCMS:ESI m/z 296(M-H)-。
第三步：
将化合物4-氯-6-氟-3-羟基-2-碘-1-苯甲腈(500mg，1.68mmol)溶解在1.4-二氧六环(10mL)和水(2mL)中，在氮气保护下，依次加入1-(2-四氢吡喃基)-1H-吡唑-5-硼酸频哪酯(561mg，2.02mmol)、碳酸钠(356mg，3.36mmol)和甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(122mg，0.168mmol)，将反应加热到90℃反应3小时。冷却至室温后，用乙酸乙酯(50mL)和水(10mL)稀释反应物。分离有机层，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝25-35％)纯化得到黄色油状的4-氯-6-氟-3-羟基-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-苯甲腈(400mg，收率：74.0％)。LCMS:ESI m/z 322(M-H)+。
第四步：
在冰浴下，将化合物4-氯-6-氟-3-羟基-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-苯甲腈(400mg，1.24mmol)加入到盐酸二氧六环溶液(5mL，4M)中，室温反应30分钟。将反应液浓缩后用乙酸乙酯(10mL)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH到8-10，收集有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到白色固体状的4-氯-6-氟-3-羟基-2-(1H-吡唑-5-基)苯甲腈(290mg，收率：98.2％)。LCMS:ESI m/z 238(M+H)+。
第五步：
将化合物4-氯-6-氟-3-羟基-2-(1H-吡唑-5-基)-苯甲腈(290mg，1.22mmol)溶解在乙腈(100mL)中，向其中加入1,3-二溴丙烷(0.19mL，1.83mmol)和碳酸铯(1.19g，3.66mmol)，在氮气保护下，将反应液加热到80℃反应2小时。过滤并浓缩得粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝40-50％)纯化，得到白色固体产品9-氯-11-氟-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(170mg，收率：50.2％)。LCMS:ESI m/z278(M+H)+。
第六步：
将化合物9-氯-11-氟-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(170mg，0.61mmol)溶解在乙腈(4mL)中，向其中加入N-溴代丁二酰亚胺(109mg，0.61mmol)，并将混合物在室温下反应2小时。将反应液直接浓缩得粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到白色固体产品1-溴-9-氯-11-氟-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(110mg，收率：50.4％)。LCMS:ESI m/z 356(M+H)+。
下列中间体从相应的起始原料开始按照中间体1的合成方法合成(对应的起始原料标注在起始原料列):
中间体4：
1-溴-9-氯-11-(吡咯烷-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
第一步：
将化合物1-溴-9-氯-11-氟-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(100mg，0.28mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺中(2mL)中，向其中加入吡咯烷(171mg，0.42mmol)和碳酸钾(116mg，0.84mmol)，在氮气保护下，将反应液加热到80℃反应4小时。反应液冷却至室温后，用乙酸乙酯(50mL)和水(10mL)稀释反应物。分离有机层，用水和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝25-35％)纯化，得到黄色固体产品1-溴-9-氯-11-(吡咯烷-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(100mg，收率87.5％)。LCMS:ESI m/z407(M+H)+。
下列中间体从相应的起始原料开始按照中间体4的合成方法合成(对应的起始原料标注在起始原料列):
中间体28：
1-溴-9-氯-11-(1H-吡唑-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
在冰浴下，将化合物吡唑(28mg，0.35mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，缓慢加入氢化钠(12mg，0.51mmol)，在该温度下反应1小时，然后再向其中加入1-溴-9-氯-11-氟-6,7-二氢-5H-苯并吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(120mg，0.34mmol)，反应体系在室温下继续反应30分钟。反应体系用饱和氯化铵溶液(10mL)淬灭，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，合并有机相，并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-60％)纯化得到无色油状产品1-溴-9-氯-11-(1H-吡唑-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(130mg，收率：90.7％)。LCMS:ESI m/z404(M+H)+。
中间体29：
1-溴-9-氯-11-甲氧基-6,7-二氢-5H-苯并吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
第一步：
将化合物11-氯-9-氟-6,7-二氢-5H-苯并吡唑[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(80mg,0.29mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，冰浴下向其中加入甲醇钠(24mg,0.43mmol)，在氮气保护下，将反应体系加热到80℃反应12小时。反应液冷却至室温，反应混合物用水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并有机相，并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-60％)纯化，得到白色固体产品9-氯-11-甲氧基-6,7-二氢-5H-苯并吡唑[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(80mg，收率:91.1％)。LCMS:ESI m/z 290(M+H)+。
第二步：
在冰浴下，将化合物9-氯-11-甲氧基-6,7-二氢-5H-苯并吡唑[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(80mg，0.27mmol)溶解在乙腈(2mL)中，向其中加入N-溴代丁二酰亚胺(49mg，0.28mmol)，在该温度下反应2小时，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-60％)纯化，得到无色油状产品1-溴-9-氯-11-甲氧基-6,7-二氢-5H-苯并吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(80mg，收率：4.67％)。LCMS:ESI m/z 370(M+H)+。
中间体30：
1-溴-9-氯-11-苯氧基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
在冰浴下，将化合物苯酚(40mg，0.41mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，缓慢加入氢化钠(17mg，0.41mmol，60％)，在该温度下反应1小时，然后再向其中加入1-溴-9-氯-11-氟-6,7-二氢-5H-苯并吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(100mg，0.28mmol)，在氮气保护下，将反应体系加热到80℃反应30分钟。反应体系用饱和氯化铵溶液(10mL)淬灭，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并有机相，并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化得到无色油状产品1-溴-9-氯-11-苯氧基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(72mg，收率：59.6％)。LCMS:ESI m/z 430(M+H)+。
下列中间体从相应的起始原料开始按照中间体30的合成方法合成(对应的起始原料标注在起始原料列):
中间体33：
1-溴-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-12-甲腈的制备
第一步：
将化合物2-溴-3-氟-1-苯甲腈(1g,5.00mmol)溶解在二氧六环(10mL)和水(2mL)中，向其中加入1-(2-四氢吡喃基)-1H-吡唑-5-硼酸频哪酯(2.09g,7.50mmol)，碳酸氢钠(1.05g,12.5mmol)和二氯[1,1'-双(二叔丁基膦)二茂铁钯(II)(320mg)，在氮气保护下，将反应体系加热到90℃反应4小时，反应体系用乙酸乙酯(20mL)和水(5mL)稀释，收集有机相，并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝15-25％)纯化，得到白色固体产品3-氟-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-1-苯甲腈(1.1g,收率:81.1％)。LCMS:ESI m/z 272(M+H)+。
第二步：
在冰浴下，将化合物3-巯基-3-甲基-1-丁醇(530mg，4.42mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，缓慢加入氢化钠(130mg，5.53mmol)，在此温度下反应1小时，然后加入3-氟-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-1-苯甲腈(1g，3.69mmol)，升至室温继续反应1小时。反应体系用饱和氯化铵溶液(30mL)淬灭，乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并有机相，并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-10％)纯化得到无色油状产品3-((4-羟基-2-甲基丁-2-基)硫烷基)-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-1-苯甲腈(800mg，收率：55.5％)。LCMS:ESI m/z 372(M+H)+。
第三步：
在冰浴下，将化合物3-((4-羟基-2-甲基丁-2-基)硫烷基)-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-1-苯甲腈(800mg，2.15mmol)溶解在甲醇(10mL)中，向其中加入盐酸溶液(5mL，2N)，在此温度下反应1小时。浓缩反应混合物，并溶解在二氯甲烷(30mL)中，用饱和碳酸氢钠溶液将pH调节至8-9，收集有机层，干燥浓缩得到棕色油状粗产品3-((4-羟基-2-甲基丁-2-基)硫烷基)-2-(1H-吡唑-5-基)-1-苯甲腈(570mg，收率：87.5％)，该粗产品可以直接用于下一步反应。LCMS:ESI m/z 288(M+H)+。
第四步：
在冰浴下，将化合物3-((4-羟基-2-甲基丁-2-基)硫烷基)-2-(1H-吡唑-5-基)-1-苯甲腈(200mg,0.69mmol)和四溴化碳(462mg,1.39mmol)溶解在二氯甲烷(8mL)中，向其中加入三苯基膦(365mg,1.39mmol)，在氮气保护下反应1小时。反应混合物用水(20mL)稀释，用二氯甲烷(30mL)萃取三次，合并有机相，并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到白色固体产品3-((4-溴-2-甲基丁-2-基)硫烷基)-2-(1H-吡唑-5-基)-1-苯甲腈(80mg,收率:31.2％)。LCMS:ESI m/z 350(M+H)+。
第五步：
将化合物3-((4-溴-2-甲基丁-2-基)硫烷基)-2-(1H-吡唑-5-基)-1-苯甲腈(80mg，0.23mmol)溶解在乙腈(50mL)中，向其中加入碳酸铯(223mg，0.68mmol)，在氮气保护下，加热到60℃反应1小时，过滤浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-60％)纯化，得到浅黄色固体产品7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-12-甲腈(40mg，收率：58.7％)。LCMS:ESI m/z 270(M+H)+。
第六步：
将化合物7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-12-甲腈(40mg，0.15mmol)溶解在乙腈(2mL)中，加入N-溴代丁二酰亚胺(26mg，0.15mmol)，在室温下反应2小时。反应混合物用水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并有机相，并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-70％)纯化，得到白色固体产品1-溴-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-12-甲腈(50mg,收率：91.8％)。LCMS:ESI m/z 348(M+H)+。
下列中间体从相应的起始原料开始按照中间体33的合成方法合成(对应的起始原料标注在起始原料列):
中间体35：
1-溴-9-氯-11-环戊基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
第一步：
在冰浴下，将化合物9-氯-11-氟-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(400mg，1.44mmol)溶解在N.N-二甲基甲酰胺(8mL)中，向其中加入2-羟乙基甲砜(268mg，2.16mmol)，然后缓慢加入氢化钠(173mg，4.32mmol)。在氮气保护下，将反应混合物升至室温反应1小时。用稀盐酸(1N)将反应混合物pH调至5，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并有机相，并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝25-40％)纯化，得到白色固体状9-氯-11-羟基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(380mg，收率：95.7％)。LCMS:ESIm/z 276(M+H)+。
第二步：
在冰浴下，将化合物9-氯-11-羟基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(380mg，1.38mmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，向其中加入三乙胺(0.58mL，4.14mmol)、4-二甲氨基吡啶(16.8mg，0.14mmol)和三氟甲磺酸酐(0.34mL，2.07mmol)。将反应液温度升至室温下反应2小时。用乙酸乙酯(20mL)和水(10mL)稀释，收集有机相，并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到黄色固体粗产品9-氯-12-氰基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-11-基三氟甲磺酸酯(350mg，收率：62.3％)。LCMS:ESI m/z408(M+H)+。
第三步：
将化合物9-氯-12-氰基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-11-基三氟甲磺酸酯(250mg，0.61mmol)溶解在1.4-二氧六环(5mL)和水(1mL)中，向其中加入环戊烯-1-基硼酸(82.4mg，0.74mmol)、碳酸钾(254mg，1.84mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)(45mg)，在氮气保护下，将应混合物加热到90℃反应2小时。反应液冷却至室温，用乙酸乙酯(20mL)和水(10mL)稀释。分离有机层，水层用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝30-40％)纯化，得到黄色固体9-氯-11-(环戊-1-烯-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(150mg，收率：75.1％)。LCMS:ESIm/z 326(M+H)+。
第四步：
将化合物9-氯-11-(环戊-1-烯-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(110mg，0.34mmol)溶解在乙醇(5mL)中，加入10％的钯碳(8mg)。反应体系在氢气氛下反应2小时。过滤反应液，滤饼用甲醇(5mL)洗涤三次。将合并的滤液浓缩至干，得到白色固体粗产品9-氯-11-环戊基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(90mg，收率：81.3％)，该粗产品可以直接用于下一步反应。LCMS:ESI m/z 328(M+H)+。
第五步：
在冰浴下，将化合物9-氯-11-环戊基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(90mg，0.28mmol)溶解在乙腈(2mL)中，然后加入N-溴代丁二酰亚胺(49mg，0.27mmol)，反应体系在该温度下反应2小时。将反应溶液浓缩经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝20-30％)纯化，得到白色固体1-溴-9-氯-11-环戊基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(90mg，收率：80.6％)。LCMS:ESI m/z 406(M+H)+。
下列中间体从相应的起始原料开始按照中间体35的合成方法合成(对应的起始原料标注在起始原料列):
中间体38：
1-溴-9-氯-11-(三氟甲氧基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
第一步：
在冰浴下，将化合物9-氯-11-羟基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(200mg，0.73mmol)溶解在N.N-二甲基甲酰胺(4mL)中，向其中加入氢化钠(58mg，1.45mmol)，在该温度下反应30分钟。然后再向其中加入二溴二氟甲烷(228mg，1.09mmol)，室温反应2小时。将反应液缓慢倒入冰水中，用乙酸乙酯(20mL)和水(10mL)稀释。分离有机层，水层用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝25-35％)纯化，得到白色固体11-(溴二氟甲氧基)-9-氯-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(130mg，收率：44.3％)。LCMS:ESI m/z 404(M+H)+。
第二步：
将化合物11-(溴二氟甲氧基)-9-氯-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(130mg，0.39mmol)溶解在二氯乙烷(3mL)中，加入四氟硼酸银(479mg，2.46mmol)，氮气保护下，将反应液加热到70℃反应2小时。用二氯甲烷(20mL)和水(10mL)稀释。分离有机层，水层用二氯甲烷(15mL)萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝10-40％)纯化，得到白色固体9-氯-11-(三氟甲氧基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(60mg，收率：37.5％)。LCMS:ESI m/z 344(M+H)+。
第三步：
将化合物9-氯-11-(三氟甲氧基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(60mg，0.18mmol)溶解在乙腈(2mL)中，然后向其中加入N-溴代丁二酰亚胺(31mg，0.17mmol)，反应体系在室温下反应2小时。用乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)稀释。分离有机层，水层乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝30-40％)纯化，得到白色固体1-溴-9-氯-11-(三氟甲氧基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(50mg，收率：67.8％)。LCMS:ESI m/z 422(M+H)+。
中间体39：
1-溴-9-氯-11-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
第一步：
将化合物1-溴-9-氯-11-氟-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(250mg，0.70mmol)溶解在N.N-二甲基甲酰胺(5mL)中，向其中加入3-羟基吡咯烷(92mg，1.05mmol)和碳酸钾(291mg，2.11mmol)，在氮气保护下，将反应液加热到100℃反应2小时。冷却至室温后，用水(10mL)稀释反应物，乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝25-35％)纯化，得到黄色固体1-溴-9-氯-11-(3-羟基吡咯烷-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(250mg，收率：84.2％)。LCMS:ESIm/z 423(M+H)+。
第二步：
在冰浴下，将化合物1-溴-9-氯-11-(3-羟基吡咯烷-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(250mg，0.59mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，加入戴斯-马丁试剂(501mg，1.18mmol)，反应液在室温下反应2小时。反应体系用饱和氯化铵溶液(10mL)淬灭，用二氯甲烷(15mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝15-20％)纯化，得到白色固体1-溴-9-氯-11-(3-氧代吡咯烷-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(160mg，收率：64.2％)。LCMS:ESI m/z 421(M+H)+。
第三步：
在冰浴下，将化合物1-溴-9-氯-11-(3-氧代吡咯烷-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈((160mg，0.38mmol)溶解在二氯甲烷(4mL)中，向其中加入二乙胺基三氟化硫(122mg，0.76mmol)，反应混合物在室温下反应2小时。反应液加饱和氯化铵(10mL)淬灭，用二氯甲烷(20mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝30-35％)纯化，得到白色固体1-溴-9-氯-11-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(80mg，收率47.5％)。LCMS:ESI m/z 443(M+H)+。
中间体40：
1-溴-9-氯-6,7,11,12-四氢-5H,10H-吡喃并[6,7-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈的制备
第一步：
在冰浴下，将化合物9-氯-11-羟基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(600mg，2.18mmol)溶解在N.N-二甲基甲酰胺(10mL)中，向其中加入N-碘代丁二酰亚胺(490mg，2.18mmmol)，反应混合物在该温度下反应2小时。用水(20mL)稀释反应物，用二氯甲烷(20mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝30-40％)纯化，得到白色固体9-氯-11-羟基-10-碘-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(450mg，收率：51.5％)。LCMS:ESI m/z 402(M+H)+。
第二步：
将化合物9-氯-11-羟基-10-碘-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(450mg，1.12mmol)溶解在1.4-二氧六环(5mL)和水(1mL)中，氮气保护下依次加入(E)-3-(叔丁基二甲基硅氧烷)丙烯-1-基硼酸频哪醇酯(401mg，1.35mmol)、碳酸钾(465mg，3.36mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)(82mg)，在氮气保护下，将反应液加热到80℃反应2小时。冷却至室温后，反应体系用饱和氯化铵溶液(10mL)淬灭，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝35-45％)纯化，得到黄色固体(E)-10-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基-1-烯-1-基)-9-氯-11-羟基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(250mg，收率：50.0％)。LCMS:ESI m/z 446(M+H)+。
第三步：
将化合物(E)-10-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基-1-烯-1-基)-9-氯-11-羟基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(250mg，0.56mmol)溶解在乙酸乙酯(5mL)中，向其中加入10％钯碳(59mg)。将反应体系在氢气氛围下反应2小时。过滤反应液，滤饼用甲醇(10mL)洗三次。将滤液浓缩干燥，得到白色固体10-(3-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-9-氯-11-羟基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(200mg，收率：79.6％)。LCMS:ESI m/z 448(M+H)+。
第四步：
在冰浴下，将化合物10-(3-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-9-氯-11-羟基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(200mg，045mmol)溶解在四氢呋喃(4mL)中，在氮气保护下，向其中加入四丁基氟化铵四氢呋喃溶液(0.67mL，0.67mmol)。反应混合物在室温下反应2小时。加饱和氯化铵溶液(5mL)淬灭，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝10-50％)纯化，得到白色固体9-氯-11-羟基-10-(3-羟丙基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(140mg，收率：94.0％)。LCMS:ESI m/z 334(M+H)+。
第五步：
在冰浴下，将化合物9-氯-11-羟基-10-(3-羟丙基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(130mg，0.39mmol)溶解在二氯甲烷(50mL)中，向其中加入三苯基膦(102mg，0.38mmol)和偶氮二甲酸二异丙酯(79mg,0.39mmol)，然后将反应体系升至室温反应2小时。加饱和氯化铵溶液(5mL)淬灭，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并有机相，并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝40-50％)纯化，得到白色固体9-氯-6-,7,11,12-四氢-5H,10H-吡喃并[6,7-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈(100mg，收率：81.3％)。LCMS:ESI m/z316(M+H)+。
第六步：
将化合物9-氯-6-,7,11,12-四氢-5H,10H-吡喃并[6,7-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈(100mg，0.32mmol)溶解在乙腈(2mL)中，加入N-溴代丁二酰亚胺(56mg，0.32mmol)，在室温反应2小时。将反应溶液浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝30-40％)纯化，得到白色固体1-溴-9-氯-6,7,11,12-四氢-5H,10H-吡喃并[6,7-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈(50mg，收率：40.0％)。LCMS:ESI m/z 394(M+H)+。
中间体41：
1-溴-12-(异吲哚啉-2-基)-6,7,8,9-四氢-5H-苯并[c]吡唑并[1,5-a]氮杂壬环-13-甲腈的制备
第一步：
在冰浴下，将化合物6-氟-3-羟基-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈(4.2g，14.6mmol)溶解在二氯甲烷(50mL)中，向其中加入三乙胺(6.1mL，43.9mmol)和三氟甲磺酸酐(6.19g，21.9mmol。反应液升至室温反应10分钟。用乙酸乙酯(100mL)和水(30mL)稀释反应物。收集有机层，水层用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并有机相，并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到白色固体粗产物3-氰基-4-氟-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)苯基三氟甲磺酸酯(4.2g，收率：68.5％)，该粗产品可直接用于下一步反应。LCMS:ESI m/z 420(M+H)+。
第二步：
将化合物3-氰基-4-氟-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)苯基三氟甲磺酸酯(4.2g，10.0mmol)溶解在1.4-二氧六环(100mL)和水(10mL)中，向其中加入叔丁基二甲基((5-(4.4.4,5,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)戊-4-烯-1-基)氧基)硅烷(4.25g，13.0mmol)、碳酸钾(4.15g，30.0mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)(370mg，0.50mmol)，在氮气保护下，将反应液加热到80℃反应2小时。冷却至室温后，反应体系用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并有机相，并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝15-25％)纯化，得到无色透明油状物3-(5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)戊-1-烯-1-基)-6-氟-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈(4.5g，收率：95.7％)。LCMS:ESI m/z 470(M+H)+。
第三步：
将化合物3-(5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)戊-1-烯-1-基)-6-氟-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈(5.6g，11.9mmol)溶解在甲醇(100毫升)中，加入10％钯碳(500mg)。将反应体系在氢气氛围下反应2小时。过滤反应液，滤饼用甲醇(50mL)洗三次。将滤液浓缩干燥，得到无色透明油状物粗产品3-(5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)戊基)-6-氟-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈(5.2g，收率：92.5％)。LCMS:ESI m/z 472(M+H)+。
第四步：
在冰浴下，将化合物3-(5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)戊基)-6-氟-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈(5.2g，11.0mmol)溶解在四氢呋喃(40mL)中，向其中加入四丁基氟化铵四氢呋喃溶液(16.5mL，16.5mmol，1M)，将反应液升至室温，然后室温下反应2小时。反应体系用饱和氯化铵溶液(40mL)淬灭，用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到淡黄色固体粗产物6-氟-3-(5-羟基戊基)-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈(2.6克，收率：66.0％)，该粗品可以直接用于下一步反应。LCMS:ESI m/z358(M+H)+。
第五步：
在冰浴下，将化合物6-氟-3-(5-羟基戊基)-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈(2.6g，7.27mmol)溶解在二氯甲烷(40mL)中，向其中加入三苯基膦(3.82g，14.5mmol)和四溴化碳(4.82g，14.5mmol)，在氮气保护下，将反应液升至室温反应2小时。反应体系用饱和氯化铵溶液(40mL)淬灭，用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝20-25％)纯化，得到白色固体3-(5-溴戊基)-6-氟-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈(2.5g，收率：81.8％)。LCMS:ESI m/z 420(M+H)+。
第六步：
冰浴下，将化合物3-(5-溴戊基)-6-氟-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈(2.5g，5.95mmol)缓慢加入盐酸1.4-二氧六环溶液(4N，10mL)中，混合物在室温下反应30分钟。用乙酸乙酯(50mL)和水(20mL)稀释反应混合物，收集有机层，用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到淡黄色固体粗产物3-(5-溴戊基)-6-氟-2-(1H-吡唑-5-基)苯甲腈(1.5g，收率：75.0％)。LCMS:ESI m/z 336(M+H)+。
第七步：
将化合物3-(5-溴戊基)-6-氟-2-(1H-吡唑-5-基)苯甲腈(1.5g，4.46mmol)溶解在乙腈(500mL)中，向其中加入碳酸铯(4.36g，13.4mmol)，将反应混合物加热到60℃反应4小时。冷却到室温，反应液在室温下反应2小时。过滤并浓缩得粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝30-40％)纯化，得到白色固体12-氟-6,7,8,9-四氢-5H-苯并[c]吡唑[1,5-a]氮杂壬环-13-甲腈(500mg，收率：43.9％)。LCMS:ESI m/z 256(M+H)+。
第八步：
将化合物12-氟-6,7,8,9-四氢-5H-苯并[c]吡唑并[1,5-a]氮杂壬环-13-甲腈(500mg，1.96mmol)溶解在乙腈(25mL)中，向其中加入N-溴代丁二酰亚胺(349mg，1.96mol)，将反应混合物在室温下反应12小时。浓缩得粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝30-40％)纯化，得到白色固体1-溴-12-氟-6,7,8,9-四氢-5H-苯并[c]吡唑并[1,5-a]氮杂壬环-13-甲腈(400mg，收率：61.1％)。LCMS:ESI m/z 334(M+H)+。
第九步：
将化合物1-溴-12-氟-6,7,8,9-四氢-5H-苯并[c]吡唑并[1,5-a]氮杂壬环-13-甲腈(400mg，1.20mmol)溶解在N.N-二甲基甲酰胺(10mL)中，向其中加入碳酸钾(496mg，3.59mmol)和异吲哚啉(214mg，1.80mmol)，在氮气保护下，将反应液加热到110℃反应2小时。用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合并的有机相用水和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝25-35％)纯化，得到黄色固体产品1-溴-12-(异吲哚-2-基)-6,7,8,9-四氢-5H-苯并[c]吡唑并[1,5-a]氮杂壬环-13-甲腈(300mg，收率:57.8％)。LCMS:ESI m/z 433(M+H)+。
中间体42：
1-溴-12-(异吲哚啉-2-基)-5,6,7,8-四氢苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂壬环-13-甲腈的制备
第一步：
将化合物6-氟-3-羟基-2-碘-1-苯甲腈(12g，45.63mmol)和1-(2-四氢吡喃基)-1H-吡唑-5-硼酸频哪酯(15.2g，54.75mmol)溶解在二氧六环(120mL)和水(40mL)中，加入碳酸钠(14.5g，136.88mol)和甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(1.66g，2.28mmol)，在氮气保护下，将反应体系加热到100℃反应12小时。反应体系用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭，乙酸乙酯(80mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，干燥并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到白色固体产品6-氟-3-羟基-2-[2-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基)吡唑-3-基]-1-苯甲腈(7.0g，收率：50.7％)。LCMS:ESI m/z 288(M+H)+。
第二步：
将化合物6-氟-3-羟基-2-[2-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基)吡唑-3-基]-1-苯甲腈(2g，6.96mmol)溶解在乙腈(700mL)中，加入碳酸铯(6.80g，20.89mmol)和1,4-二溴丁烷(1.80g，8.35mmol)，在氮气保护下，将反应体系加热到80℃反应12小时。将反应液过滤浓缩后得到粗产物，经硅胶层析柱(乙酸乙酯/石油醚＝0-40％)，得到棕色油状产品3-[(4-溴丁基)氧基]-6-氟-2-[2-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基)吡唑-3-基]-1-苯甲腈(1.5g，收率：45.9％)。LCMS:ESI m/z 424(M+H)+。
第三步：
在冰浴下，将化合物3-[(4-溴丁基)氧基]-6-氟-2-[2-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基)吡唑-3-基]-1-苯甲腈(1.5g，3.55mmol)溶解在甲醇(8mL)中，向其中加入盐酸溶液(8mL，2N)。在该温度下反应2小时。浓缩反应混合物，将残留物溶解在乙酸乙酯(100mL)中，并用饱和碳酸氢钠溶液将pH调节至8-9，收集有机层，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到白色固体粗产品3-[(4-溴丁基)氧基]-6-氟-2-(2H-吡唑-3-基)-1-苯甲腈(1g，收率：79.1％)，该粗产品可直接用于下一步反应。LCMS:ESI m/z 340(M+H)+。
第四步：
将化合物3-[(4-溴丁基)氧基]-6-氟-2-(2H-吡唑-3-基)-1-苯甲腈(1g，2.96mmol)溶解在乙腈(300mL)中，加入碳酸铯(2.89g，8.87mmol)，在氮气保护下加热到95℃反应3小时。将反应液过滤浓缩后得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到白色固体产品12-氟-5,6,7,8-四氢苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂壬环-13-甲腈(500mg，收率：62.4％)。LCMS:ESI m/z 258(M+H)+。
第五步：
在冰浴下，将化合物12-氟-5,6,7,8-四氢苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂壬环-13-甲腈(500mg，1.94mmol)溶解在乙腈(10mL)中，向其中加入N-溴代丁二酰亚胺(520mg，2.92mmol)，在氮气保护下，将反应体系加热到30℃反应18小时。反应混合物用水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到白色固体产品1-溴-12-氟-5,6,7,8-四氢苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂壬环-13-甲腈(600mg，收率：87.3％)。LCMS:ESI m/z 336(M+H)+。
第六步：
将化合物碳酸铯(581mg，1.79mmol)和2,3-二氢-1H-异吲哚(638mg，5.36mmol)悬浮在N,N-二甲基乙酰胺(8mL)中，向其中加入1-溴-12-氟-5,6,7,8-四氢苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂壬环-13-甲腈(600mg，1.79mmol)，在氮气保护下，用微波反应器将反应混合物加热到120℃反应3小时。反应混合物用水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到棕色固体产品1-溴-12-(异吲哚啉-2-基)-5,6,7,8-四氢苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂壬环-13-甲腈(140mg，收率：17.1％)。LC/MS:ESI m/z 435(M+H)+。
下列中间体从相应的起始原料开始按照中间体42的合成方法合成(对应的起始原料标注在起始原料列):
中间体44：
1-溴-10-氯-11-(5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
第一步：
将化合物5-氮杂螺[2.4]庚烷(226mg，2.33mmol)溶解在N,N-二甲基乙酰胺(10mL)中，向其中加入碳酸钾(643mg，4.66mmol)和1-溴-11-氟-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(500mg，1.55mmol)，在氮气保护下，将反应混合物加热到110℃反应12小时。反应混合物用水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-40％)纯化，得到棕色固体产品1-溴-11-(5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(370mg，收率：56.7％)。LCMS:ESI m/z 401(M+H)+。
第二步：
在冰浴下，将化合物1-溴-11-(5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(270mg，0.68mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，向其中加入N-氯代丁二酰亚胺(99mg,0.74mmol)，在氮气保护下，将反应混合物加热到60℃反应3小时。反应混合物用水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到黄色油状产品1-溴-10-氯-11-(5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(170mg，收率：55.1％)。LCMS:(ESI)m/z 435(M+H)+。
下列化合物从对应的中间体开始按照实施例11的合成方法合成(对应的起始原料标注在起始原料列):
中间体47：
1-溴-10-氯-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
第一步：
在冰浴下，将化合物3-氯-5-羟基苯甲腈(3g，19.5mmol)溶解在氨水(100mL)中，然后向其中加入碘(4.96g，19.5mmol)和碘化钾(16.2g，97.7mmol)的水(30mL)溶液，所得的混合体系在室温下反应过夜。过滤掉形成的固体，滤液用水(30mL)稀释，并用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝10-15％)纯化，得到白色固体产品5-氯-3-羟基-2-碘苯甲腈(1.45g，收率：26.6％)。LCMS:ESI m/z 278(M-H)-。
第二步：
将化合物5-氯-3-羟基-2-碘苯甲腈(1.45g，5.19mmol)溶解在1.4-二氧六环(35mL)和水(4mL)中，然后依次加入1-(2-四氢吡喃基)-1H-吡唑-5-硼酸频哪酯(2.16g，7.78mmol)、碳酸钠(1.10g，10.4mmol)和甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(0.19g，0.26mmol)，在氮气保护下，将反应液加热到90℃反应过夜。冷却至室温后，用乙酸乙酯(10mL)和水(5mL)稀释，收集有机层，依次用水和饱和食盐水洗涤，干燥过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝30-35％)纯化，得到白色固体5-氯-3-羟基-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈(1.06g，收率：67.3％)。LCMS:ESI m/z 304(M+H)+。
第三步：
在冰浴下，将化合物5-氯-3-羟基-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈(1.06g，3.49mmol)加入盐酸二氧六环溶液(4M,15mL)中。反应液在室温下反应1小时。直接浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝10-45％)纯化，得到白色固体5-氯-3-羟基-2-(1H-吡唑-5-基)苯甲腈(750mg，收率：97.9％)。LCMS:ESI m/z 220(M+H)+。
第四步：
将化合物5-氯-3-羟基-2-(1H-吡唑-5-基)苯甲腈(600mg，2.73mmol)溶解在乙腈(200mL)中，向其中加入碳酸铯(2.67g，8.19mmol)和1,3-二溴丙烷(0.42mL，4.10mmol)，反应液在室温下反应2小时。过滤并浓缩得粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-40％)纯化，得到白色固体10-氯-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(120mg，收率：16.9％)。LCMS:ESI m/z 260(M+H)+。
第五步：
将化合物10-氯-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(120mg，0.46mmol)溶解在乙腈(3mL)中，向其中加入N-溴代丁二酰亚胺(82.0mg，0.46mmol)。在室温下反应3小时。将反应液直接浓缩得粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-35％)纯化，得到白色固体1-溴-10-氯-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(100mg，收率：63.9％)。LCMS:ESI m/z 338(M+H)+。
下列中间体从相应的起始原料开始按照中间体47的合成方法合成(对应的起始原料标注在起始原料列):
中间体49：
1-溴-10-苯基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
第一步：
将化合物3-溴-5-甲氧基苯胺(10g，49.5mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中，依次加入氰化锌(11.6g，99.0mmol)和四(三苯基膦)钯(2.86g，2.48mmol)，在氮气保护下将反应液加热到120℃反应过夜。冷却至室温，用水(200mL)稀释反应液，用乙酸乙酯(100mL)萃取三次，合并有机相并用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-40％)纯化，得到黄色油状物3-氨基-5-甲氧基苯甲腈(4.5g，收率：61.4％)。LCMS:ESI m/z 149(M+H)+。
第二步：
将化合物3-氨基-5-甲氧基苯甲腈(4.5g，30.4mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中，加入N-碘代丁二酰亚胺(7.52g，33.4mmol)，然后在氮气保护下将反应液在室温下反应1小时，用水(100mL)稀释反应液，用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并有机相并用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到黄色固体2-氨基-5-碘-4-甲氧基苯甲腈(6.0g，收率：72.1％)。LCMS:ESI m/z 275(M+H)+。
第三步：
将化合物2-氨基-5-碘-4-甲氧基苯甲腈(6.0g，21.9mmol)溶解在水(10mL)和1.4-二氧六环(60mL)中，然后在氮气保护下依次加入1-(2-四氢吡喃基)-1H-吡唑-5-硼酸频哪酯(7.31g，26.3mmol)、碳酸钾(9.08g，65.7mmol)和甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(1.59g，2.19mmol)，将反应体系加热到70℃反应3小时。冷却至室温后，用水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(100mL)萃取三次，合并有机相并用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-40％)纯化，得到白色固体5-氨基-3-甲氧基-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈(5.4g，收率：82.7％)。LCMS:ESI m/z299(M+H)+。
第四步：
将化合物5-氨基-3-甲氧基-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈(5.0g，16.8mmol)溶解在乙腈(50mL)中，并依次加入亚硝酸叔丁酯(3.46g，33.5mmol)和溴化亚铜(4.81g，33.5mmol)，将反应混合物加热到60℃反应2小时。冷却至室温后，用水(100mL)稀释反应液，然后用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并有机相并用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到淡黄色固体5-溴-3-甲氧基-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈(3.0g，收率：49.4％)。LCMS:ESI m/z362(M+H)+。
第五步：
将化合物5-溴-3-甲氧基-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈(3.0g，8.28mmol)溶解在1,2-二氯乙烷(30mL)中，在冰浴下，向其中缓慢加入三溴化硼(10.4g，41.4mmol)，然后将反应液加热到70℃反应3小时。冷却至室温后，在冰浴下用甲醇淬灭反应，反应液用水(50mL)稀释，然后用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并有机相并用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到黄色固体5-溴-3-羟基-2-(1H-吡唑-5-基)苯甲腈(1.5g，收率：68.6％)。LCMS:ESI m/z 264(M+H)+。第六步：
将化合物5-溴-3-羟基-2-(1H-吡唑-5-基)苯甲腈(1.5g，5.68mmol)溶解在乙腈(500mL)中，加入碳酸铯(5.55g，17.0mmol)和1,3-二溴丙烷(2.29g，11.4mmol)，反应混合物加热到80℃反应过夜。反应混合物过滤并浓缩得到粗产物，其通过硅胶柱色谱法纯化(乙酸乙酯/石油醚＝0-40％)，得到黄色固体10-溴-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(650mg，收率：37.6％)。LCMS:ESI m/z 304(M+H)+。
第七步：
将化合物10-溴-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(120mg，0.39mmol)溶解在水(1mL)和1.4-二氧六环(4mL)中，然后在氮气保护下依次加入苯硼酸(72.2mg，0.592mmol)、碳酸钾(163mg，1.18mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)(32.2mg，0.039mmol)，将反应体系加热到80℃反应2小时。冷却至室温后，用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，合并有机相并用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-40％)纯化，得到黄色固体10-苯基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(110mg，收率：92.5％)。LCMS:ESI m/z 302(M+H)+。
第八步：
将化合物10-苯基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(110mg，0.37mmol)溶解在乙腈(3mL)中，然后加入N-溴代丁二酰亚胺(65mg，0.37mmol)。在室温下反应2小时。将反应液直接浓缩得粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到黄色固体1-溴-10-苯基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(130mg，收率93.7％)。LCMS:ESI m/z 380(M+H)+。
下列中间体从相应的起始原料开始按照中间体49的合成方法合成(对应的起始原料标注在起始原料列):
中间体56:
1-溴-10-(1H-吡唑-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
在冰浴下，将化合物10-氨基-1-溴-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(200mg，0.63mmol)溶解在乙腈(5mL)中，向其中依次加入吡唑(86mg，1.26mmol)、醋酸铜(375mg，1.88mmol)、醋酸(0.01mL)和亚硝酸叔丁酯(194mg,1.88mmol)，反应混合物在室温下反应2小时。反应体系用水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并有机相并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-75％)纯化，得到黄色固体产品1-溴-10-(1H-吡唑-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-腈(80mg，收率：34.5％)。LCMS:ESI m/z 370(M+H)+。
中间体57：
1-溴-10-(2-氧代吡咯烷-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
第一步：
将化合物10-溴-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(160mg,0.53mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，然后向其中加入4-氨基丁酸叔丁酯(126mg,0.79mmol)、碳酸铯(514mg，1.58mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(61mg，0.11mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(48mg，0.05mmol)；反应化合物在氮气保护下，加热到120℃反应8小时，冷却至室温，加冰水(5mL)淬灭，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到出产品。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-70％)纯化，得到棕色固体产品10-(2-氧代吡咯烷-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(105mg，收率64.7％)，LCMS:ESIm/z 309(M+H)+。
第二步：
将化合物10-(2-氧代吡咯烷-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(95mg，0.31mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，然后加入N-溴代丁二酰亚胺(55mg，0.31mmol)。在室温下反应2小时。将反应液直接浓缩得粗产品，经硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝0-5％)纯化，得到白色固体1-溴-10-(2-氧代吡咯烷-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(109mg，收率：91.4％)。LCMS:ESIm/z 387(M+1)+。
中间体58：
1-溴-10-(异吲哚啉-2-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
将化合物10-氨基-1-溴-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(150mg,0.47mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，然后向其中加入1,2-二(溴甲基)苯(161mg,0.61mmol)和N,N-二异丙基乙胺(182mg，1.41mmol)；在氮气保护下，将反应混合物加热到100℃反应4小时，冷却至室温，加水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产品。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到黄色固体产品1-溴-10-(异吲哚啉-2-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(100mg，收率50.5％)，LCMS:ESI m/z 421(M+H)+。
中间体59：
1-溴-10-(哌啶-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]恶唑嗪-12-甲腈的制备
第一步：
将化合物10-溴-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(300mg,0.97mmol)溶解在1,4-二氧六环(4mL)中，然后向其中加入2-哌啶酮(192mg,1.94mmol)、碳酸铯(948mg，2.91mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(112mg，0.19mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(89mg，0.097mmol)；反应化合物在氮气保护下，加热到100℃反应过夜，冷却至室温，加冰水(10mL)淬灭，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到出产品。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到黄色固体产品10-(2-氧代六氢吡啶-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并吡唑[5,1-d][1,5]氧氮杂辛烷-12-甲腈(200mg，收率64.1％)。LCMS:ESI m/z 323(M+H)+。
第二步：
将化合物10-(2-氧代六氢吡啶-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并吡唑[5,1-d][1,5]氧氮杂辛烷-12-甲腈(200mg,0.56mmol)溶解在乙腈(5mL)中，在冰浴下向其中加入N-溴代丁二酰亚胺(100mg,0.56mmol)，室温反应3小时，浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝0-5％)纯化，得到黄色固体产品1-溴-10-(2-氧代六氢吡啶-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并吡唑[5,1-d][1,5]氧氮杂辛烷-12-甲腈(220mg,收率:88.4％)。LCMS:ESI m/z 401(M+1)+。
第三步：
将化合物1-溴-10-(2-氧代六氢吡啶-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并吡唑[5,1-d][1,5]氧氮杂辛烷-12-甲腈(60mg,0.14mmol)溶解在四氢呋喃(3mL)中，在冰浴下向其中加入硼烷四氢呋喃(0.3mL,0.3mmol,1M)，反应混合物继续在该温度下反应1小时，反应体系用甲醇溶液(10mL)淬灭，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝10-50％)纯化，得到黄色固体产品1-溴-10-(六氢吡啶-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并吡唑[5,1-d][1,5]氧氮杂辛烷-12-甲腈(40mg,收率:69.1％)。LCMS:ESI m/z 387(M+1)+。
中间体60：
1-溴-10-环丁基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
第一步：
将化合物环丁酮(1.0g，14.3mmol)溶解在甲醇(10mL)中，将反应液升温至60℃后，缓慢加入对甲基苯磺酰肼(2.92g，15.7mmol)，滴加完成后继续反应1小时。将反应混合物冷却至室温后，反应液析出白色固体，过滤后干燥得到白色固体N’-环亚丁基-4-甲基苯磺酰肼(1.0g，29.4％)。LCMS:ESI m/z 239(M+H)+。
第二步：
将化合物10-溴-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(200mg,0.658mmol)溶解在1,4-二氧六环(5mL)中，然后向其中加入N’-环亚丁基-4-甲基苯磺酰肼(235mg,0.986mmol)、碳酸铯(643mg，1.97mmol)、三苯基膦(34.5mg，0.132mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(60mg，0.066mmol)；在氮气保护下，将反应混合物加热到100℃反应过夜，冷却至室温，过滤并浓缩得到粗产品。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到黄色固体产品10-(环丁-1-烯-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(95mg，收率52.1％)，LCMS:ESI m/z 278(M+H)+。
第三步：
将化合物10-(环丁-1-烯-1-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(95mg，0.343mmol)溶解在MeOH(3mL)中，室温下加入Pd/C(30mg,0.28mmol)。反应混合物在氢气氛下反应3小时。反应完毕，过滤并浓缩，得到黄色油状粗品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到黄色固体产品10-环丁基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(50mg，收率：52.3％)。LCMS:ESI m/z280(M+H)+。
第四步：
将化合物10-环丁基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(50mg，0.18mmol)溶解在乙腈(2mL)中，然后加入N-溴代丁二酰亚胺(31.9mg，0.18mmol)。将所得混合物在室温下反应2小时。浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到黄色固体1-溴-10-环丁基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(30mg，收率：65.5％)。LCMS:ESI m/z 358(M+H)+。
中间体61：
1-溴-10-(环丙基乙炔基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
第一步：
将化合物10-溴-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(120mg，0.39mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，依次加入碘化亚铜(7.51mg，0.04mmol)、三乙胺(399mg，3.95mmol)、二(三苯基磷)二氯化钯(II)(28mg，0.04mmol)和环丙乙炔(39mg,0.59mmol)，在氮气保护下，将反应液加热到120℃反应过夜。冷却至室温，用水(10mL)稀释反应液，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-40％)纯化，得到黄色固体10-(环丙基乙炔基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(70mg，收率：61.3％)。LCMS:ESI m/z 290(M+H)+。
第二步：
将10-(环丙基乙炔基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(70mg，0.242mmol)溶解在乙腈(3mL)中，然后加入N-溴代丁二酰亚胺(43.1mg，0.242mmol)。将所得混合物在室温下反应2小时。浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到黄色固体1-溴-10-(环丙基乙炔基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(45mg，收率：50.5％)。LCMS:ESI m/z 368(M+H)+。
实施例58：
1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-10-苯基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
第一步：
将化合物1-溴-10-苯基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-腈(100mg，0.26mmol)(中间体49)溶解在1.4-二氧六环(4mL)和水(1mL)中，向其中加入(4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(127mg，0.32mmol)、碳酸钾(109mg，0.79mmol)和甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(193mg，0.03mmol)，在氮气保护下，将反应液加热到80℃反应3小时。冷却至室温。用水(5mL)稀释反应液，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-40％)纯化，得到黄色油状物产品((7-(12-氰基-10-苯基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(70mg，收率：46.3％)。LCMS:ESI m/z 575(M+H)+。
第二步：
在冰浴下，将化合物((7-(12-氰基-10-苯基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(70mg，0.12mmol)溶解在二氯甲烷(1mL)中，向其中加入三氟乙酸(0.5mL),室温下反应30分钟。直接浓缩得到粗产品，经反相HPLC纯化得到白色固体产品1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-10-苯基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(20mg，收率：34.6％)。LCMS:ESI m/z475(M+1)+。
下列化合物从对应的中间体开始按照实施例58的合成方法合成(对应的起始原料标注在起始原料列):
实施例73：
1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-10-(吗啉-4-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈的制备
第一步：
将化合物10-氨基-1-溴-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(280mg，0.88mmol)溶解在水(2mL)和1,4-二氧六环(10mL)中，然后在氮气保护下依次加入(4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(466mg，1.32mmol)、碳酸钾(364mg，2.63mmol)和甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(64mg，0.09mmol)，在氮气保护下，将反应液加热到100℃反应过夜。冷却至室温。用水(10mL)稀释反应液，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，乙酸乙酯(10mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-100％)纯化，得到黄色固体产品((7-(10-氨基-12-氰基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(180mg，收率：40.0％)。LCMS:ESI m/z514(M+1)+。
第二步：
在冰浴下，将化合物((7-(10-氨基-12-氰基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(180mg，0.35mmol)溶解在乙腈(5mL)中，然后依次加入溴化亚铜(101mg，0.701mmol)和亚硝酸叔丁酯(72mg，0.70mmol)，在氮气保护下，将反应液加热到60℃反应2小时。冷却至室温。用水(20mL)稀释反应液，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-80％)纯化，得到淡黄色固体产品(7-(10-溴-12-氰基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(60mg，收率：29.7％)。LCMS:ESI m/z 577(M+1)+。
第三步：
将化合物(7-(10-溴-12-氰基-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(40mg,0.07mmol)溶解在1,4-二氧六环(2mL)中，向其中加入吗啉(87mg,0.14mmol)、碳酸铯(68mg，0.21mmol)、2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯(7mg，0.014mmol)和醋酸钯(2mg)；在氮气保护下，将反应混合物加热到100℃反应过夜，冷却至室温，加冰水(5mL)淬灭，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产品。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-100％)纯化，得到黄色油状产品(7-(12-氰基-10-(吗啉-4-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(15mg，收率：37.1％)。LCMS:ESI m/z 584(M+H)+。
第四步：
在冰浴下，将化合物(7-(12-氰基-10-(吗啉-4-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(15mg，0.03mmol)溶解在二氯甲烷(1mL)中，向其中加入三氟乙酸(0.3mL)，混合物在室温下反应30分钟，将浓缩后得到的粗产品经制备型反相HPLC纯化得到白色固体产品1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-10-(吗啉-4-基)-6,7-二氢-5H-苯并[b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-12-甲腈(2mg，收率：16.1％)。LCMS:ESI m/z 484(M+1)+。
下列化合物从对应的中间体开始按照实施例73的合成方法合成(对应的起始原料标注在起始原料列):
中间体62：
1-溴-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈的制备
第一步：
将化合物1-溴3-羟基萘(2.2g，9.9mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，向其中加入氰化亚铜(1.3g，14.8mmol)。将反应液加热到150℃反应1小时。向反应混合物中加入10％的NaOH溶液(30mL)，反应5分钟，过滤，滤液调pH到2-3，并用乙酸乙酯(100mL)萃取三次，合并的有机相依次用水和饱和食盐水洗，用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到棕色固体产品3-羟基-1-萘甲腈(1.0g，收率：59.6％)，LCMS:ESI m/z 168(M-H)-。
第二步：
将化合物3-羟基-1-萘甲腈(1g，5.9mmol)溶解在乙腈(6mL)中，向其中加入2-[(3-溴丙基)氧基]四氢吡喃(1.6g，7.08mmol)和碳酸铯(5.8g，17.7mmol)，在室温下反应3小时。用乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)稀释。收集有机层，水相用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水洗，用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到无色油状产品3-{[3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基)氧基]丙氧基}-1-萘甲腈(1.4g，收率：76.2％)。LCMS:ESI m/z 311(M+1)+。
第三步：
将化合物3-{[3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基)氧基]丙氧基}-1-萘甲腈(1.4g，4.5mmol)溶解在无水四氢呋喃(20mL)中，冷却到零下65℃，缓慢加入二异丙基氨基锂(4.5mL，9mmol)，在该温度下反应20分钟，然后加入碘(1.3g，4.95mol)的四氢呋喃(2mL)溶液，滴加过程中保持内温低于零下60℃，滴加完成后继续反应2小时。用饱和氯化铵溶液(10mL)淬灭。用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水洗，用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到黄色固体产品2-碘-3-{[3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基)氧基]丙氧基}-1-萘甲腈(1.3g，收率：66％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.01(d,J＝8.0Hz,2H),7.79(s,1H),7.69-7.59(m,2H),4.60(s,1H),4.28(dd,J＝14.9,9.1Hz,2H),3.92(dt,J＝9.9,6.4Hz,1H),3.76-3.67(m,1H),3.62(dt,J＝9.8,6.1Hz,1H),3.46-3.38(m,2H),2.14-2.03(m,2H),1.75-1.66(m,1H),1.61(t,J＝9.0Hz,1H),1.42(dd,J＝37.9,16.2Hz,5H),1.25(d,J＝10.2Hz,1H)。
第四步：
将化合物2-碘-3-{[3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基)氧基]丙氧基}-1-萘甲腈(1.3g，3.0mmol)溶解在二氧六环(20mL)和水(5mL)中，向其中加入1H-吡唑-3-硼酸频哪酯(611mg，3.15mol)、[1,1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)(109mg)和碳酸钾(2.1g，14.9mmol)，在氮气保护下，将反应液加热到80℃反应3小时。用乙酸乙酯(20mL)和水(10mL)稀释。收集有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到棕色油状产品2-(1H-吡唑-5-基)-3-(3-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)-1-萘甲腈(566mg，收率：50％)。LCMS:ESI m/z 378(M+1)+。
第五步：
将化合物2-(1H-吡唑-5-基)-3-(3-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)-1-萘甲腈(566mg，1.5mmol)溶解在二氯甲烷(3mL)中，在0℃下，向其中加入三氟乙酸(1mL)，在0℃反应30分钟。浓缩反应液，加入水(5mL)，用饱和碳酸氢溶液调节pH到9，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并有机层，用饱和食盐水洗，用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到棕色油状产品2-碘-3-{[3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基}-1-萘甲腈(430mg，收率：76％)。LCMS:ESI m/z 294(M+1)+。
第六步：
将化合物2-碘-3-{[3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基}-1-萘甲腈(430mg，1.5mmol)溶解在二氯甲烷(20mL)中，在冰浴下向其中加入四溴化碳(984mg，3.0mol)和三苯基膦(786mg，3.0mmol)，在室温下反应1小时。用饱和氯化铵溶液(10mL)淬灭，用二氯甲烷(50mL)萃取三次，合并有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-100％)纯化，得到黄色固体产品3-[(3-溴丙基)氧]-2-(2H-吡唑-3-基)-1-萘甲腈(399mg，收率：75％)。LCMS:ESI m/z 357(M+1)+。
第七步：
将化合物3-[(3-溴丙基)氧]-2-(2H-吡唑-3-基)-1-萘甲腈(399mg，1.1mmol)溶解在乙腈(500mL)中，向其中加入碳酸铯(1.1g，3.3mmol)，在室温下反应1.5小时。过滤浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-100％)纯化，得到淡黄色固体产品6,7-二氢-5H-萘并[3,2-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈(303mg，收率：99％)。LCMS:ESI m/z 276(M+1)+。
第八步：
将化合物6,7-二氢-5H-萘并[3,2-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈(303mg，1.09mmol)溶解在乙腈(20mL)中，在零度下向其中N-溴代丁二酰亚胺(235mg，1.32mmol)，在室温下反应1.5小时。直接浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-100％)纯化，得到淡黄色固体产品1-溴-6,7-二氢-5H-萘并[3,2-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈(353mg，收率：91％)。LCMS:ESI m/z 355(M+1)+。
中间体63：
1,1,3,3-四氘代丙基-1,3-二-对甲苯磺酸酯的制备
第一步：
将化合物氘代四氢铝锂(394mg,9.4mmol)悬浮在无水四氢呋喃(16mL)中，在冰浴下，缓慢滴加丙二酸二乙酯(1g,6.2mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，反应混合物在室温下反应过夜。加入15％氢氧化钠溶液淬灭，过滤并浓缩后得到淡黄色油状物粗产品1,1,3,3-四氘代丙烷-1,3-二醇(740mg，收率：98.4％)。该粗产品可以直接用于下一步反应。
第二步：
将化合物1,1,3,3-四氘代丙烷-1,3-二醇(500mg,6.24mmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，在冰浴下依次加入三乙胺(3.47mL,24.96mmol)和4-二甲氨基吡啶(76mg,0.62mmol)，然后缓慢加入对甲苯磺酰氯(2.97g,15.60mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液，反应混合液在室温下反应过夜。反应液用二氯甲烷(10mL)和水(10mL)稀释。收集有机相并用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化得到白色固体产品1,1,3,3-四氘代丙基-1,3-二-对甲苯磺酸酯(910mg,收率:37.5％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.75(d,J＝7.7Hz,4H),7.35(d,J＝7.8Hz,4H),2.46(s,6H),1.98(s,2H)。
下列中间体从相应的起始原料开始按照中间体63的合成方法合成(对应的起始原料标注在起始原料列):
中间体65：
1-溴-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-14-甲腈的制备
第一步：
将化合物1,3-二溴-2-氯-5-氟苯(16g,52.02mmol)和1-甲基吡咯(9.3mL,104.33mmol)溶解在甲苯(150mL)中，在零下30℃下，向反应体系中加入正丁基锂(21.9mL,54.75mmol,2.5M)，反应液在该温度下反应30分钟，将反应液升至室温反应12小时。将反应液倒入冰水(100mL)中，用乙酸乙酯(150mL)萃取三次，合并有机相并用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2-50％)纯化，得到无色油状产品5-溴-7-氟-9-甲基-1,4-二氢-1,4-环亚氨基萘(1.5g,收率:85.6％)。LCMS:ESI m/z 331(M+1)+。
第二步：
将化合物5-溴-7-氟-9-甲基-1,4-二氢-1,4-环亚氨基萘(7g，24.79mmol)溶解在氯仿(150mL)中，在冰浴下，向其中加入间氯过氧苯甲酸(8.56g,49.59mmol)，反应液在室温下反应18小时，反应混合物用饱和亚硫酸钠(500mL)淬灭，用二氯甲烷(250mL)萃取三次，合并有机相，并依次用10％的亚硫酸氢钠溶液和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝0-2％)纯化，得到无色油状产品1-溴-3-氟萘(5g,收率:80.7％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(d,J＝5.1Hz,1H),7.80-7.72(m,1H),7.64-7.38(m,4H)。
第三步：
将化合物1-溴-3-氟萘(5g,20.00mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(1.62g,2.00mmol)、氢化锌(5.87g,49.99mmol)、1,1'-双(二苯基膦)二茂铁(2.26g,3.00mmol)和锌粉(0.13g,2.00mmol)悬浮于N,N-二甲基甲酰胺(60mL)中，在氮气保护下加热到115℃反应4小时。冷却至室温，反应体系用乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)稀释，收集有机相，水相用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并有机相并用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝0-1％)纯化，得到白色固体产品3-氟-1-萘甲腈(2.8g,收率：73.6％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.23(d,J＝8.3Hz,1H),7.88(d,J＝7.4Hz,1H),7.76-7.61(m,4H)。
第四步：
将化合物3-氟-1-萘甲腈(2.8g，16.35mmol)溶解在无水四氢呋喃(50mL)中，冷却到零下65℃，缓慢加入二异丙基氨基锂(9.0mL，18mmol)，在该温度下反应30分钟，然后加入碘(5.00g，19.63mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，滴加过程中保持内温低于零下60℃，并继续反应10小时。反应混合物用饱和氯化铵溶液(100mL)淬灭。升至室温，用乙酸乙酯(100mL)萃取三次，合并有机层，用饱和食盐水洗涤，干燥浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝石油醚/乙酸乙酯＝0-2％)纯化，得白色固体产品3-氟-2-碘-1-萘甲腈(2.52g，收率：46.8％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)8.24-8.17(m,1H),7.86-7.84(m,1H),7.75-7.63(m,3H)。
第五步：
将化合物3-氟-2-碘-1-萘甲腈(2.52g，8.48mmol)溶解在二氧六环(30mL)和水(5mL)中，向其中加入1H-吡唑-3-硼酸频哪酯(1.96g，10.11mmol)、[1,1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)(616mg，0.87mmol)和碳酸钾(3.5g，25.34mmol)，在氮气保护下，将反应液加热到90℃反应3小时。冷却至室温，反应体系在通过减压浓缩得粗产品，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2-30％)纯化，得到白色固体产品3-氟-2-(2H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈(1.12g，收率：50.1％)。LCMS:ESI m/z 237.9(M+H)+。
第六步：
将化合物3-氟-2-(2H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈(1.12g，3.19mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，向其中加入硫化钠(365mg，6.49mmol)，在氮气保护下加热到100℃反应18小时。用水(20mL)淬灭。用乙酸乙酯(40mL)萃取三次，收集有机相，用饱和食盐水洗涤，干燥浓缩得粗产品，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5-50％)纯化，得黄色固体产品2-(2H-吡唑-5-基)-3-巯基-1-萘甲腈(280mg，收率：31.5％)。LCMS:ESI m/z 249.9(M-H)-。
第七步：
将化合物2-(2H-吡唑-5-基)-3-巯基-1-萘甲腈(280mg，1.00mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中，向其中加入1,3-二溴丙烷(403mg，2.00mmol)和碳酸钾(420mg，3.04mmol)，反应体系在80℃下反应3小时。过滤浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5-20％)纯化，得到黄色固体产品6,7-二氢-5H-萘并[3,2-b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-14-甲腈(110mg，收率：34.5％)。LCMS:ESI m/z 291.9(M+1)+。
第八步：
将化合物6,7-二氢-5H-萘并[3,2-b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-14-甲腈(90mg，0.28mmol)溶解在乙腈(3mL)中，在冰浴下，向其中加入N-溴代丁二酰亚胺(50mg，0.28mmol)，在室温下反应2小时。直接浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5-20％)纯化，得淡黄色固体产品1-溴-6,7-二氢-5H-萘并[3,2-b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-14-甲腈(40mg，收率：34.9％)。LCMS:ESI m/z 355(M+1)+。
下列中间体从相应的起始原料开始按照中间体65的合成方法合成(对应的起始原料标注在起始原料列):
中间体68：
1-溴-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-14-甲腈的制备
第一步：
在冰浴下，将化合物3-羟基-1-萘甲腈(1g，5.91mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，向其中加入碘甲烷(0.74mL，11.82mmol)和碳酸钾(2.45g，17.73mmol)，反应混合物在室温反应2小时。反应体系用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并有机相并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-15％)纯化，得到棕色固体产品3-甲氧基-1-萘甲腈(700mg，收率：64.6％)。LCMS:ESI m/z 184(M+H)+。
第二步：
将化合物3-甲氧基-1-萘甲腈(500mg，2.73mmol)溶解在无水四氢呋喃(5mL)中，冷却到零下78℃，缓慢加入二异丙基氨基锂(0.72mL，5.46mmol)，在该温度下反应30分钟，然后加入碘(825mg，3.27mmol)的四氢呋喃溶液，滴加过程中保持内温低于零下60℃，滴加完成后缓慢升至室温，继续反应1小时。反应混合物用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭。用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并有机层，用饱和食盐水洗涤，干燥浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝0-20％)纯化，得到棕色固体产品3-甲氧基-2-碘-1-萘甲腈(650mg，收率：77.1％)。LCMS:ESI m/z 310(M+H)+。
第三步：
将化合物3-甲氧基-2-碘-1-萘甲腈(630mg，2.04mmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，在冰浴下，向其中加入三溴化硼(1.53g，6.11mmol)，反应混合物在该温度下继续反应1小时，反应混合物用饱和氯化铵溶液(10mL)淬灭。用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并有机层，用饱和食盐水洗涤，干燥浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝0-10％)纯化，得到棕色固体产品3-羟基-2-碘-1-萘甲腈(500mg，收率：83.1％)。LCMS:ESI m/z 296(M+H)+。
第四步：
将化合物3-羟基-2-碘-1-萘甲腈(3g，10.17mmol)和1-(2-四氢吡喃基)-1H-吡唑-5-硼酸频哪酯(3.4g，12.22mmol)溶解在二氧六环(50mL)和水(10mL)中，加入碳酸钾(4.22g,30.53mmol)和1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(400mg，0.56mmol)，在氮气保护下，将反应混合物加热到100℃反应3小时。冷却至室温，浓缩反应液得到粗产物，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5-30％)纯化，得到棕色固体产品3-羟基-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈(1.4g，收率：43.1％)。LCMS:ESI m/z 320(M+H)+。
第五步：
将化合物3-羟基-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈(1.4g，4.39mmol)溶解在二氯甲烷(20mL)中，在冰浴下，向其中加入三乙胺(0.91mL，6.58mol)和三氟甲磺酸酐(1.86g，6.59mmol)，反应混合物在该温度下反应1小时。浓缩反应液后得到粗产品，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2-25％)纯化，得到黄色固体产品4-氰基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)萘-2-基三氟甲磺酸酯(1.4g，收率：70.7％)。LCMS:ESIm/z 452.1(M+1)+。
第六步：
将化合物4-氰基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)萘-2-基三氟甲磺酸酯(2.3g，5.09mmol)和(E)-4,4,5,5-四甲基-2-(4-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-1-丁烯-1-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(2.16g，7.64mmol)溶解在二氧六环(25mL)和水(5mL)中，向其中加入甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(230mg)和碳酸钾(2.11g，15.28mmol)，在氮气保护下，将反应混合物加热到100℃反应3小时。冷却至室温，反应液用水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-10％)纯化，得到白色固体产品(E)-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(4-((四氢-1H-吡喃-2-基)氧基)-1-丁烯-1-基)-1-萘甲腈(700mg，收率：49.4％)。LCMS:ESI m/z 458.2(M+1)+。
第七步：
将化合物(E)-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(4-((四氢-1H-吡喃-2-基)氧基)-1-丁烯-1-基)-1-萘甲腈(700mg，0.92mmol)溶解在甲醇(50mL)中，在室温下加入10％ Pd/C(50mg)，在氢气氛中反应18小时。过滤后浓缩滤液得到黄色油状产品2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(4-((四氢-1H-吡喃-2-基)氧基)丁基)-1-萘甲腈(590mg，收率：90.0％)。LCMS:ESI m/z 460.2(M+1)+。
第八步：
将化合物2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(4-((四氢-1H-吡喃-2-基)氧基)丁基)-1-萘甲腈(590mg，0.83mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，在零度下，向其中加入三氟乙酸(1.3mL)，在室温下反应30分钟。浓缩反应液得到粗产品，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10-50％)纯化，得到黄色固体产品3-(4-羟基丁基)-2-(2H-吡唑-3-基)-1-萘甲腈(300mg，收率：98.7％)。LCMS:ESI m/z 292.2(M+1)+。
第九步：
将化合物3-(4-羟基丁基)-2-(2H-吡唑-3-基)-1-萘甲腈(300mg，0.82mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，在冰浴下，向其中加入四溴化碳(550mg，1.66mol)和三苯基膦(430mg，1.64mmol)，在室温下反应30分钟。浓缩反应液得到粗产品，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2-20％)纯化，得黄色固体产品3-(4-溴丁基)-2-(2H-吡唑-3-基)-1-萘甲腈(200mg，收率：61.7％)。LCMS:ESI m/z 354.2(M+1)+。
第十步：
将化合物3-(4-溴丁基)-2-(2H-吡唑-3-基)-1-萘甲腈(200mg，0.57mmol)溶解在乙腈(200mL)中，向其中加入碳酸钾(235mg，1.70mmol)，在氮气保护下，加热到80℃反应2小时。过滤浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2-10％)纯化，得到黄色固体产品5,6,7,8-四氢萘并[3,2-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-14-甲腈(130mg，收率：75.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.33(s,1H),8.14(s,2H),7.79(dd,J＝18.6,7.3Hz,2H),7.66(s,1H),6.64(s,1H),4.37(d,J＝14.2Hz,1H),3.61(t,J＝12.6Hz,1H),3.16-3.00(m,1H),2.21(s,1H),1.93(dd,J＝27.9,15.2Hz,2H),1.68-1.52(m,2H)。
第十一步：
将化合物5,6,7,8-四氢萘并[3,2-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-14-甲腈(130mg，0.43mmol)溶解在乙腈(5mL)中，在零度下，向其中N-溴代丁二酰亚胺(72mg，0.41mmol)，在室温下反应2小时。直接浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2-25％)纯化，得淡黄色固体产品1-溴-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-14-甲腈(120mg，收率：71.6％)。LCMS:ESI m/z 354.1(M+1)+。
中间体69:
1-溴-6,7,8,9-四氢-5H-萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂壬环-15-甲腈的制备
第一步：
将化合物4-氰基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-萘-2-基三氟甲磺酸酯(1.6g,3.54mmol)和戊-4-炔-1-醇(450mg,5.31mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，向其中加入碘化亚铜(140mg,0.71mmol)、三乙胺(1.48mL,10.63mmol)和二-(三苯基膦)二氯化钯(250mg,0.35mmol)，在氮气保护下，将反应混合物加热到100℃反应3小时。冷却至室温，反应液用水(40mL)淬灭，用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到淡黄色固体产品3-(5-羟基戊-1-炔-1-基)-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈(1.1g,收率：76.5％)。LCMS:ESI m/z 386(M+1)+。
第二步：
将化合物3-(5-羟基戊-1-炔-1-基)-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈(1.1g，2.71mmol)溶解在甲醇(50mL)中，在室温下加入10％ Pd/C(100mg)，在氢气氛中反应10小时。过滤后浓缩滤液得到黄色油状产品3-(5-羟基戊基)-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈(980mg，收率：89.1％)。LCMS:ESI m/z 390(M+1)+。
第三步：
将化合物3-(5-羟基戊基)-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈(980mg,2.52mmol)溶解在乙腈(10mL)中，加入N-溴代丁二酰亚胺(447mg,2.52mmol)，在室温下反应2小时。反应液用乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)稀释，收集有机相，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并有机相，用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到淡黄色固体产品2-(4-溴-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(5-羟基戊基)-1-萘甲腈(850mg,收率：72.1％)。LCMS:ESI m/z 468(M+1)+。
第四步：
将化合物2-(4-溴-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(5-羟基戊基)-1-萘甲腈(800mg,1.71mmol)和三苯基膦(896mg,3.42mmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，在冰浴下加入四溴化碳(1.13g，3.41mmol)。反应液在室温下反应1小时。反应液用饱和氯化铵溶液(10mL)稀释，用二氯甲烷(20mL)萃取三次，合并有机相，用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到淡黄色固体3-(5-溴戊基)-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈(740mg，收率：81.6％)，LCMS:ESI m/z530(M+1)+。
第五步：
将化合物3-(5-溴戊基)-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈(700mg,1.32mmol)溶解在二氯甲烷(9mL)中，在冰浴下，向其中加入三氟乙酸(3mL)，室温下反应1小时，用水(10mL)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH到7，用二氯甲烷(10mL)萃取三次，合并有机相，用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到黄色固体2-(4-溴-2H-吡唑-3-基)-3-(5-溴戊基)-1-萘甲腈(550mg,收率：93.4％).LCMS:ESI m/z 446(M+1)+。
第六步：
将化合物2-(4-溴-2H-吡唑-3-基)-3-(5-溴戊基)-1-萘甲腈(540mg,1.21mmol)溶解在乙腈(500mL)中，然后加入碳酸铯(787mg,2.42mmol)，在氮气保护下，将反应液加热到80℃反应1小时。过滤并浓缩得粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到黄色固体产品1-溴-6,7,8,9-四氢-5H-萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂壬环-15-甲腈(400mg,收率：90.4％)。LCMS:ESI m/z 366(M+1)+。
中间体70：
1-溴-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氮氧杂壬环-15-甲腈的制备
第一步：
将化合物3-羟基-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈(710mg,2.22mmol)溶解在乙腈(700mL)中，依次加入碳酸钾(614mg,4.45mmol)和1,4-二溴丁烷(481mg，2.22mmol)，在氮气保护下，加热到80℃反应12小时。过滤并浓缩得到粗产物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-40％)纯化，得到棕色油状产品3-(4-溴丁氧基)-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈(650mg，收率：64.4％)。LCMS:ESI m/z 454(M+H)+。
第二步：
将化合物3-(4-溴丁氧基)-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈(650mg,1.43mmol)溶解在二氯甲烷(6mL)中，在氮气保护下加入盐酸1,4-二氧六环溶液(3mL)，在室温下反应1小时。将反应液pH调至7-8，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。合并有机层，依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产品。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到黄色固体产品3-(4-溴丁氧基)-2-(1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈(430mg,收率：81.2％)。LCMS:ESI m/z 370(M+H)+。
第三步：
将化合物3-(4-溴丁氧基)-2-(1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈(430mg，1.16mmol)溶解在乙腈(400mL)中，加入碳酸铯(757mg,2.32mmol)，氮气保护下，加热到60℃反应过夜。反应液冷却至室温，直接过滤并浓缩得到粗产物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到白色固体产品5,6,7,8-四氢萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氮氧杂壬环-15-甲腈(250mg，收率：74.4％)。LCMS:ESI m/z 290(M+H)+。
第四步：
将化合物5,6,7,8-四氢萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氮氧杂壬环-15-甲腈(250mg，0.864mmol)溶解在乙腈(5mL)中，加入N-溴代丁二酰亚胺(154mg，0.86mmol)，在氮气保护下，室温反应过夜。将反应液直接浓缩得粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到白色固体产品1-溴-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氮氧杂壬环-15-甲腈(180mg,收率：56.6％)。LCMS:ESI m/z 368(M+H)+。
中间体71：
(7-(14-氰基-9-氟-5,6,7,8-四氢-萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备
第一步：
将化合物2,2,6,6-四甲基哌啶(3.1g，19.86mmol)溶解在无水四氢呋喃(50mL)中，在冰浴下向其加入正丁基锂(7.9mL，19.86mmol，2.5M)，在氮气保护下反应30分钟。然后在零下78℃下向其缓慢加入4-氟-1-萘甲腈(3.4g，19.86mmol)，反应液继续在-78℃下反应2小时。然后在该温度下再向其中缓慢加入碘(5.0g，19.86mmol)的四氢呋喃溶液，继续反应2小时。反应体系用水(100mL)淬灭，乙酸乙酯(500mL)萃取三次，合并有机相并依次用饱和亚硫酸氢钠(100mL)和饱和食盐水(100mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/二氯甲烷＝0-2％)纯化得到黄色固体产品4-氟-3-碘-1-萘甲腈(4.1g，收率：69.5％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.21(d,J＝8.4Hz,1H),8.18-8.13(m,2H),7.81-7.76(m,1H),7.74-7.68(m,1H)。
第二步：
将化合物4-氟-3-碘-1-萘甲腈(5.0g，16.83mmol)和((E)-4,4,5,5-四甲基-2-(4-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-1-丁烯-1-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(9.5g，33.66mmol)溶解在二氧六环(200mL)和水(40mL)中，向其中加入磷酸钾(8.9g，42.08mmol和1.1’-双(二叔丁基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(1.1g，1.68mmol),在氮气保护下，将反应体系加热到80℃反应过夜，反应体系用水(100mL)淬灭，乙酸乙酯(300mL)萃取三次，合并有机相并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-5％)纯化，得到黄色油状产品(E)-4-氟-3-(4-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁-1-烯-1-基)-1-萘甲腈(4.2g，收率：76.6％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.17-8.11(m,2H),8.03(d,J＝6.8Hz,1H),7.71-7.62(m,2H),6.82-6.76(m,1H),6.53-6.42(m,1H),4.67-4.63(m,1H),3.97-3.87(m,2H),3.62-3.52(m,2H),2.66-2.59(m,2H),1.90-1.73(m,2H),1.64-1.52(m,4H)。
第三步：
将化合物(E)-4-氟-3-(4-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁-1-烯-1-基)-1-萘甲腈(7.2g，22.13mmol)溶解在甲醇(400mL)和四氢呋喃(100mL)中，向其中加入10％钯碳(1.2g)，将反应体系加热到35℃，在氢气氛下反应过夜。过滤反应液并浓缩，得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-6％)纯化，得到黄色油状产品4-氟-3-(4-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁基)-1-萘甲腈(5g，收率：69.1％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20-8.12(m,2H),7.80(d,J＝6.8Hz,1H),7.72-7.63(m,2H),4.60-4.55(m,1H),3.89-3.76(m,2H),3.54-3.40(m,2H),2.91-2.83(m,2H),1.87-1.66(m,6H),1.61-1.50(m,4H)。
第四步：
在氮气保护下，将化合物4-氟-3-(4-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁基)-1-萘甲腈(2.0g，6.11mmol)溶解在四氢呋喃(150mL)中，在零下78℃下向其加入二异丙基氨基锂(6.1mL，12.23mmol)，在该温度下反应1小时。然后在零下78℃下向反应液中加入碘(1.9g，7.33mmol)的四氢呋喃溶液，在该温度下继续反应2小时。反应体系用饱和氯化铵溶液(100mL)淬灭，乙酸乙酯(500mL)萃取三次，合并有机相并依次用饱和亚硫酸氢钠(100mL)和食盐水(100mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/二氯甲烷＝0-3％)纯化得到浅黄色油状产物4-氟-2-碘-3-(4-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁基)-1-萘甲腈(1.6g，收率:57.9％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20-8.09(m,2H),7.70-7.63(m,2H),4.60-4.57(m,1H),3.89-3.75(m,2H),3.52-3.42(m,2H),3.08-3.03(m,1H),2.89-2.85(m,1H),1.86-1.66(m,6H),1.61-1.48(m,4H)。
第五步：
将化合物4-氟-2-碘-3-(4-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁基)-1-萘甲腈(4.1g，9.05mmol)和1-(2-四氢吡喃基)-1H-吡唑-5-硼酸频哪酯(3.8g，13.57mmol)溶解在二氧六环(100mL)和水(20mL)中，向其中加入碳酸钠(2.9g，27.13mmol)和甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(700mg)，在氮气保护下，将反应体系加热到80℃反应过夜，冷却至室温，将反应体系用水(100mL)淬灭，乙酸乙酯(100mL)萃取三次，合并有机相并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-25％)纯化，得到黄色油状产品(4-氟-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(4-((四氢-2-吡喃-2-基)氧基)丁基)-1-萘甲腈(2.4g，收率：55.6％)。LCMS:ESI m/z 478(M+H)+。
第六步：
在冰浴下，将化合物(4-氟-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(4-((四氢-2-吡喃-2-基)氧基)丁基)-1-萘甲腈(2.4g，5.03mmol)溶解在二氯甲烷(20mL)中，向其中加入盐酸二氧六环溶液(20mL，4N)。反应混合物在室温下反应2小时。反应液用乙酸乙酯(20mL)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH到8-10，收集有机层，干燥过滤后浓缩得到黄色油状产品4-氟-3-(4-羟基丁基)-2-(1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈(1.3g，收率：83.6％)，该粗产品可直接用于下一步反应。LCMS:ESI m/z 310(M+H)+。
第七步：
在冰浴下，将化合物4-氟-3-(4-羟基丁基)-2-(1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈(1.3g，4.20mmol)溶解在二氯甲烷(30mL)中，向其中加入三苯基膦(2.2g，8.41mmol)和四溴化碳(2.8g，8.4mmol)，在氮气保护下，在室温下反应2小时。反应体系用水(50mL)淬灭，乙酸乙酯(200mL)萃取三次，合并有机相并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-10％)纯化，得到黄色油状产物3-(4-溴丁基)-4-氟-2-(1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈(1.2g，收率：76.7％)。LCMS:ESI m/z 372(M+H)+。
第八步：
将化合物3-(4-溴丁基)-4-氟-2-(1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈(1.2g，3.22mmol)溶解在乙腈(500mL)中，向其中加入碳酸铯(3.2g，9.67mmol)，将反应混合物加热到80℃反应2小时。过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-35％)纯化，得到白色固体产品9-氟-5,6,7,8-四氢-萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-14-甲腈(580mg，收率：61.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.27(d,J＝8.2Hz,1H),8.21(d,J＝8.3Hz,1H),7.96-7.90(m,1H),7.89-7.85(m,1H),7.68(d,J＝1.9Hz,1H),6.70(d,J＝1.9Hz,1H),4.37(dd,J＝14.6,5.9Hz,1H),3.70(dd,J＝14.6,10.9Hz,1H),3.29-3.27(m,1H),2.22-2.17(m,1H),2.02-1.96(m,1H),1.70-1.56(m,3H)。LCMS:ESI m/z 292(M+H)+。
第九步：
在冰浴下，将化合物9-氟-5,6,7,8-四氢-萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-14-甲腈(350mg，1.20mmol)溶解在乙腈(5mL)和N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，向其中加入N-溴代丁二酰亚胺(214mg,1.20mmol)，反应混合物在室温下反应2小时，反应混合物用水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并有机相并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到黄色固体产品1-溴-9-氟-5,6,7,8-四氢-萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-14-甲腈(360mg，收率：80.9％)。LCMS:ESI m/z 370(M+H)+。
第十步：
将化合物1-溴-9-氟-5,6,7,8-四氢-萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-14-甲腈(400mg，1.08mmol)和(4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(520mg，1.30mmol)溶解在二氧六环(10mL)和水(2mL)中，向反应体系中加入碳酸钠(343mg，3.24mmol)和甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(78mg,0.11mmol)，在氮气保护下，将反应体系加热到80℃反应过夜，反应直接浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-75％)纯化，得到黄色固体产品(7-(14-氰基-9-氟-5,6,7,8-四氢-萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(360mg，收率：59.01％)。LCMS:ESI m/z 565(M+H)+。
中间体72：
(7-(9-氰基-14-氟-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备
第一步：
在零下78℃下，将化合物2,2,6,6-四甲基哌啶(9.13g,58.421mmol)溶解在无水四氢呋喃(200mL)中，向其加入正丁基锂(23.4mL,58.421mmol，2.5M)，在氮气保护下反应30分钟。然后在该温度下向其中缓慢加入4-氟-1-萘甲腈(10g,58.42mmol)，反应液继续在-78℃下反应2小时。然后在该温度下再向反应混合物中缓慢加入碘(14.8g,58.42mmol)的四氢呋喃溶液，继续反应2小时。反应体系用水(150mL)淬灭，乙酸乙酯(500mL)萃取三次，合并有机相，并依次用饱和亚硫酸氢钠(100mL)和饱和食盐水(100mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/二氯甲烷＝0-2％)纯化得到黄色固体产品4-氟-2-碘-1-萘甲腈和4-氟-3-碘-1-萘甲腈的混合物(4.1g，收率：69.5％)。
第二步：
将4-氟-2-碘-1-萘甲腈和4-氟-3-碘-1-萘甲腈的混合物(9.8g,32.99mmol)和((E)-4,4,5,5-四甲基-2-(4-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-1-丁烯-1-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(13.96g,49.483mmol)溶解在二氧六环(40mL)和水(8mL)中，向其中加入磷酸钾(17.5g,82.47mmol)和1.1’-双(二叔丁基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(2.13g,3.29mmol),在氮气保护下，将反应体系加热到80℃反应过夜，反应体系用水(100mL)淬灭，乙酸乙酯(300mL)萃取三次，合并有机相并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-5％)纯化，得到黄色油状产品(E)-4-氟-2-(4-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁-1-烯-1-基)-1-萘甲腈和(E)-4-氟-3-(4-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁-1-烯-1-基)-1-萘甲腈的混合物(10g,收率：93.2％)。
第三步：
将(E)-4-氟-2-(4-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁-1-烯-1-基)-1-萘甲腈和(E)-4-氟-3-(4-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁-1-烯-1-基)-1-萘甲腈的混合物(10g,30.73mmol)溶解在甲醇(400mL)和四氢呋喃(100mL)中，向其中加入10％钯碳(1g)，将反应体系加热到35℃，在氢气氛下反应48小时。过滤反应液并浓缩，得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-6％)纯化，得到黄色油状产品4-氟-2-(4-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁基)-1-萘甲腈和4-氟-3-(4-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁基)-1-萘甲腈的混合物(6.6g,收率：65.61％)。
第四步：
在氮气保护下，将4-氟-2-(4-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁基)-1-萘甲腈和4-氟-3-(4-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁基)-1-萘甲腈的混合物(5.8g,17.72mmol)溶解在四氢呋喃(150mL)中，冷却至零下78℃，向其中加入二异丙基氨基锂(17.7mL，35.43mmol)，在该温度下反应1小时。然后在零下78℃下向反应液中加入碘(5.40g,21.26mmol)的四氢呋喃溶液，在该温度下继续反应2小时。反应体系用水(100mL)淬灭，乙酸乙酯(500mL)萃取三次，合并有机相，并依次用饱和亚硫酸氢钠(100mL)和食盐水(100mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/二氯甲烷＝0-3％)纯化得到浅黄色油状产物4-氟-3-碘-2-(4-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁基)-1-萘甲腈和4-氟-2-碘-3-(4-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁基)-1-萘甲腈的混合物(4.5g，收率:56％)。
第五步：
将4-氟-3-碘-2-(4-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁基)-1-萘甲腈和4-氟-2-碘-3-(4-(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁基)-1-萘甲腈的混合物(6.4g,14.12mmol)和1-(2-四氢吡喃基)-1H-吡唑-5-硼酸频哪酯(5.89g,21.18mmol)溶解在二氧六环(100mL)和水(20mL)中，向其中加入碳酸钠(4.49g,42.36mmol)和甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(1.03g)，在氮气保护下，将反应体系加热到80℃反应2小时，冷却至室温，将反应体系用水(100mL)淬灭，乙酸乙酯(500mL)萃取三次，合并有机相，并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-25％)纯化，得到黄色油状产品4-氟-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-2-(4-((四氢-1H-吡喃-2-基)氧基)丁基)-1-萘甲腈和4-氟-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(4-((四氢-2-吡喃-2-基)氧基)丁基)-1-萘甲腈的混合物(5.4g，收率：80.1％)。LCMS:ESI m/z 478(M+H)+。
第六步：
在冰浴下，将4-氟-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-2-(4-((四氢-1H-吡喃-2-基)氧基)丁基)-1-萘甲腈和4-氟-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(4-((四氢-2-吡喃-2-基)氧基)丁基)-1-萘甲腈的混合物(5.4g,11.31mmol)缓慢加入到盐酸二氧六环溶液(20mL，4N)中。反应混合物在室温下反应2小时。直接浓缩得到黄色油状粗产品4-氟-2-(4-羟基丁基)-3-(1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈和4-氟-3-(4-羟基丁基)-2-(1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈的混合物(3g，收率：85.8％)，该粗产品可直接用于下一步反应。LCMS:ESI m/z 310(M+H)+。
第七步：
在冰浴下，将4-氟-2-(4-羟基丁基)-3-(1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈和4-氟-3-(4-羟基丁基)-2-(1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈的混合物(3g，9.7mmol)溶解在二氯甲烷(30mL)中，向其中加入三苯基膦(5.09g,19.39mmol)和四溴化碳(6.43g,19.39mmol)，在氮气保护下，在室温下反应2小时。反应体系用水(50mL)淬灭，乙酸乙酯(200mL)萃取三次，合并有机相，并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-10％)纯化，得到黄色油状产物2-(4-溴丁基)-4-氟-3-(1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈和3-(4-溴丁基)-4-氟-2-(1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈(2.5g，收率：69.3％)。LCMS:ESI m/z 372(M+H)+。
第八步：
将2-(4-溴丁基)-4-氟-3-(1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈和3-(4-溴丁基)-4-氟-2-(1H-吡唑-5-基)-1-萘甲腈的混合物(2.5g,6.72mmol)溶解在乙腈(500mL)中，向其中加入碳酸铯(6.56g,20.15mmol)，将反应混合物加热到80℃反应2小时。过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-35％)纯化，得到14-氟-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-9-甲腈和9-氟-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-14-甲腈的混合物，进一步经反相HPLC分离纯化，得到白色固体状目标产品14-氟-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-9-甲腈(100mg，收率：5.1％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.25(dd,J＝8.1,6.5Hz,2H),7.93-7.85(m,1H),7.81-7.74(m,1H),7.67(d,J＝1.9Hz,1H),6.57(d,J＝1.8Hz,1H),4.41(dd,J＝14.8,6.0Hz,1H),3.66(dd,J＝14.7,10.6Hz,1H),3.46(dd,J＝13.8,8.9Hz,1H),2.39(t,J＝9.3Hz,1H),2.25-2.01(m,2H),1.90-1.71(m,2H)，LCMS:ESI m/z 292(M+H)+。
第九步：
在冰浴下，将化合物14-氟-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-9-甲腈(70mg，0.22mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，向其中加入N-溴代丁二酰亚胺(40mg,0.23mmol)，反应混合物在室温下反应2小时，反应混合物用水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并有机相并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-20％)纯化，得到白色固体产品1-溴-14-氟-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-9-甲腈(50mg，收率：56.2％)。LCMS:ESI m/z 370(M+H)+。第十步：
将化合物1-溴-14-氟-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-9-甲腈(50mg,0.12mmol)和(4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(65mg,0.145mmol)溶解在二氧六环(2mL)和水(0.5mL)中，向反应体系中加入碳酸钠(40mg，0.38mmol)和甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(10mg)，在氮气保护下，将反应体系加热到80℃反应过夜，反应直接过滤，浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝5-50％)纯化，得到黄色固体产品(7-(9-氰基-14-氟-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(35mg，收率：45.9％)。LCMS:ESIm/z 565(M+H)+。
中间体73：
1-溴-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-9,14-二甲腈的制备
将化合物1-溴-9-氟-5,6,7,8-四氢萘并[3,2-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-14-甲腈(150mg，0.41mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入氰化钠(39mg，0.81mmol)。反应体系在氮气保护下，加热到100℃反应2小时，反应混合物用水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到黄色固体产品1-溴-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-9,14-二甲腈(120mg，收率：74.6％)。LCMS:ESIm/z 377(M+H)+。
中间体74：
1-溴-14-氟-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环的制备
第一步：
在冰浴下，将化合物3-甲氧基-2-萘酚(400mg,2.296mmol)溶解在乙腈(30mL)，向其中缓慢加入1-氯甲基-4-氟-1,4二氮杂双环[2.2.2]辛烷二(四氟硼酸盐)(813mg,2.29mmol)，在氮气保护下，反应混合物在室温反应过夜。直接浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝25-35％)纯化，得到棕色固体1-氟-3-甲氧基-2-萘酚(120mg,收率：27.2％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.63(s,1H),7.82-7.74(m,2H),7.46-7.30(m,2H),7.19(s,1H),3.93(s,3H)。
第二步：
在冰浴下，将化合物1-氟-3-甲氧基-2-萘酚(560mg，2.91mmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，向其中加入三乙胺(1.21mL，8.74mmol)和三氟甲磺酸酐(1.23g，4.37mmol)，反应混合物在室温反应30分钟。用水(10mL)稀释，乙酸乙酯(30mL)萃取三次，收集有机相，分别用饱和氯化铵溶液和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得淡黄色透明油状粗产品1-氟-3-甲氧基-萘-2-基三氟甲磺酸酯(800mg，收率：84.7％)。LCMS:ESI m/z 325(M+H)+。
第二步：
将化合物1-氟-3-甲氧基-萘-2-基三氟甲磺酸酯(800mg，2.47mmol)溶解在1.4-二氧六环(16mL)和水(3mL)中，向其中依次加入1-(2-四氢吡喃基)-1H-吡唑-5-硼酸频哪酯(824mg，2.96mmol)、碳酸钠(785mg，7.40mmol)和甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(180mg，0.25mmol，在氮气保护下，将反应体系加热到80℃反应2小时。冷却至室温后，反应体系用饱和氯化铵溶液(10mL)淬灭，用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝25-35％)纯化，得黄色固体产品5-(1-氟-3-甲氧基-萘-2-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑(500mg，收率：62.1％)。LCMS:ESI m/z 327(M+H)+。
第三步：
在冰浴下，将化合物5-(1-氟-3-甲氧基-萘-2-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑(500mg，1.53mmol)溶解在二氯乙烷(10mL)中，向其中缓慢加入三溴化硼(1.15g，4.60mmol)。将反应混合物加热到70℃反应16小时。用甲醇淬灭，减压浓缩，得到的粗品溶解在乙酸乙酯(50mL)中，用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝25-35％)纯化，得白色固体产品4-氟-3-(1H-吡唑-5-基)-2-萘酚(250mg，收率：71.5％)。LCMS:ESI m/z 229(M+H)+。
第四步：
将化合物4-氟-3-(1H-吡唑-5-基)-2-萘酚(250mg，1.10mmol)溶解在乙腈(100mL)中，向其中加入1,3-二溴丙烷(0.223mL，2.19mmol)和碳酸铯(1.07g，3.29mmol)，将反应液加热到80℃反应16小时。冷却至室温，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝30-40％)纯化，得到白色固体产品14-氟-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环(60mg，收率：20.4％)。LCMS:ESI m/z 269(M+H)+。
第五步：
将化合物14-氟-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环(60mg，0.22mmol)溶解在乙腈(5mL)中，向其中加入N-溴代丁二酰亚胺(40mg，0.22mmol)，在室温下反应2小时。将反应液直接浓缩得粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝30-40％)纯化，得到白色固体产品1-溴-14-氟-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环(40mg，收率：51.5％)。LCMS:ESI m/z 347(M+H)+。
中间体75：
R-((7-(14-氰基-9-(3-羟基吡咯烷-1-基)-5,6,7,8-四氢-萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备
将化合物(7-(14-氰基-9-氟-5,6,7,8-四氢-萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(70mg，0.12mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，向其中加入碳酸钾(51mg，0.37mmol)和(R)-3-吡咯烷醇(27mg，0.31mmol)，在氮气保护下，将反应体系加热到80℃反应3小时。反应混合物用乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)稀释。收集有机相，用饱和食盐水洗，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝0-30％)纯化，得到黄色固体产物R-((7-(14-氰基-9-(3-羟基吡咯烷-1-基)-5,6,7,8-四氢-萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(32mg，收率：40.86％)。LCMS:ESIm/z 632(M+H)+。
中间体76：
((7-(14-氰基-9-(2-甲氧基乙氧基)-5,6,7,8-四氢-萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸酯的制备
在冰浴下，将化合物乙二醇单甲醚(48mg，0.64mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，向其中加入叔丁醇钾(36mg，0.32mmol)，反应30分钟。然后向反应液加入(7-(14-氰基-9-氟-5,6,7,8-四氢-萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(90mg，0.16mmol)。在氮气保护下，将反应液加热到80℃，反应5分钟，反应体系用水(20mL)淬灭，乙酸乙酯(10mL)萃取三次，合并有机相并用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-75％)纯化，得到棕色固体产品((7-(14-氰基-9-(2-甲氧基乙氧基)-5,6,7,8-四氢-萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸酯(80mg，收率：80.9％)。LCMS:ESI m/z621(M+H)+。
中间体77：
(7-(14-氰基-9-(甲氨基)-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备
在冰浴下，将化合物(7-(14-氰基-9-氟-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(25mg,0.04mmol)和碳酸铯(72mg,0.22mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，向其加入甲胺盐酸盐(18mg,0.27mmol)，在氮气保护下，将反应体系缓慢升至120℃，氮气保护下反应6小时。反应体系用水(5mL)淬灭，乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并有机相并依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-80％)纯化，得到黄色固体产品7-(14-氰基-9-(甲氨基)-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(23mg,收率：90.2％)。LCMS:ESI m/z 576(M+H)+。
下列中间体从相应的起始原料开始按照中间体77的合成方法合成(对应的起始原料标注在起始原料列):
中间体79：
7-(14-氰基-9-(甲基磺酰基)-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备
第一步：
将化合物(7-(14-氰基-9-氟-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(90mg，0.16mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，在室温下向其加入甲醇钠(22mg，0.32mmol)，在氮气保护下，将反应体系加热到80℃，反应1小时。冷却至室温，反应体系用水(20mL)淬灭，乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-75％)纯化，得到浅黄色固体产品((7-(14-氰基-9-(甲硫基)-5,6,7,8-四氢-萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(85mg，收率：89.9％)，LCMS:ESI m/z 593(M+H)+。
第二步:
在冰浴下，将化合物((7-(14-氰基-9-(甲硫基)-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(85mg,0.14mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，向其中加入间氯过氧苯甲酸(74mg，0.43mmol)，在室温下反应过夜。反应体系用水(20mL)稀释，二氯甲烷(20mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-60％)纯化，得到浅黄色固体产品7-(14-氰基-9-(甲基磺酰基)-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(48mg，收率：53.6％)。LCMS:ESI m/z 625(M+H)+。中间体80：
(7-(14-氰基-9-羟基-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备
将化合物(7-(14-氰基-9-氟-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(20mg,0.04mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)和水(0.2mL)中，向其中加入氢氧化钠(1.2mg，0.11mmol)，在氮气保护下，将反应混合物加热到100℃，反应2小时，冷却至室温，反应体系用水(10mL)淬灭，乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝50-60％)纯化，得到浅黄色固体产品(7-(14-氰基-9-羟基-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(15mg,收率：75.3％)。LCMS:ESI m/z 563(M+H)+。
中间体81：
7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-14-甲腈的制备
第一步：
在冰浴下，将化合物3-巯基-3-甲基-1-丁醇(300mg，1.12mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，向其中分批加入氢化钠(34mg，1.40mmol)，在此温度下反应1小时，然后加入3-氟-2-[2-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基)吡唑-3-基]-1-萘甲腈(300mg，0.93mmol)，反应液在室温下反应1小时。反应体系用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-70％)纯化，得到无色油状产品3-[(4-羟基-2-甲基丁-2-基)硫烷基]-2-[2-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基)吡唑-3-基]-1-萘甲腈(300mg，收率：72.42％)。LCMS:ESI m/z 422(M+H)+。
第二步：
在冰浴下，将化合物3-[(4-羟基-2-甲基丁-2-基)硫烷基]-2-[2-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基)吡唑-3-基]-1-萘甲腈(350mg，0.83mmol)溶解在甲醇(4mL)中，向其中加入盐酸溶液(4mL，2N)。在此温度下继续反应1小时。浓缩并将残留物溶解在二氯甲烷(10mL)中，用饱和碳酸氢钠溶液将pH调节至8-10，收集有机层，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到棕色油状粗产品3-[(4-羟基-2-甲基丁-2-基)硫烷基]-2-(2H-吡唑-3-基)-1-萘甲腈(230mg，收率：77.99％)，该粗产品可直接用于下一步反应。LCMS:ESI m/z 338(M+H)+。
第三步：
在冰浴下，将化合物3-[(4-羟基-2-甲基丁-2-基)硫烷基]-2-(2H-吡唑-3-基)-1-萘甲腈(150mg，0.45mmol)溶解在二氯甲烷(4mL)中，向其中加入四溴化碳(295mg，0.89mmol)和三苯基膦(233mg，0.89mmol)，在氮气保护下在室温反应1小时。反应混合物用水(10mL)稀释，用二氯甲烷(15mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到黄色油状产品3-[(4-溴-2-甲基丁-2-基)硫烷基]-2-(2H-吡唑-3-基)-1-萘甲腈(150mg，收率：80.07％)。LCMS:ESI m/z400(M+H)+。
第四步：
将化合物3-[(4-溴-2-甲基丁-2-基)硫烷基]-2-(2H-吡唑-3-基)萘-1-甲腈(150mg，0.38mmol)溶解在乙腈(40mL)中，向其中加入碳酸铯(366mg，1.12mmol)，在氮气保护下，将反应混合物加热到60℃反应1小时，过滤浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到浅黄色固体产品7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]硫氮杂辛环-14-甲腈(100mg，收率：79.4％)。LCMS:ESI m/z 320(M+H)+。
下列中间体从相应的起始原料开始按照中间体81的合成方法合成(对应的起始原料标注在起始原料列):
中间体83：
6,7-二氢-5H-吡唑并[5’,1':4,5][1,5]硫氮杂辛环并[2,3-g]喹啉-14-甲腈的制备
第一步：
在室温下，将化合物2-溴-4-氟苯胺(14g，73.67mmol)、甘油(13.57g，147.35mmol)和3-硝基苯磺酸钠(24.88g，110.52mmol)缓慢加入到硫酸溶液(40mL)中。将反应体系加热到150℃反应4小时，将反应物缓慢倒入冰水中，然后用氢氧化钠中和至碱性，用二氯甲烷(200mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到白色固体产品8-溴-6-氟喹啉(12.8g，收率：73.0％)。LCMS:ESI m/z 226(M+H)+。
第二步：
将化合物8-溴-6-氟喹啉(5g，22.12mmol)和氰化锌(6.49g，55.30mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(60mL)中，加入1,1'-双(二苯基膦)二茂铁(2.45g，4.42mmol、锌粉(0.15g,2.21mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(2.03g,2.21mmol)。在氮气保护下，将反应体系加热到115℃反应5小时，冷却至室温，反应混合物用水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(100mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，该粗产物通过硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到浅黄色固体产品6-氟喹啉-8-甲腈(2.6g，收率：64.8％)。LCMS:ESI m/z 173(M+H)+。
第三步：
在氮气保护下，将化合物6-氟喹啉-8-甲腈(2.6g，15.10mmol)溶解在四氢呋喃(30mL)中，冷却至零下78℃，向其中加入N,N-二异丙基氨基锂(9.8mL，19.63mmol，2N)，在此温度下反应30分钟，再向其中加入碘(4.60g，18.12mmol)，在该温度下继续反应30分钟。反应体系用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭，乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，干燥并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-10％)纯化，得到黄色固体产品6-氟-7-碘喹啉-8-甲腈(3.3g，收率：69.7％)。LCMS:ESI m/z 299(M+H)+。
第四步：
将化合物6-氟-7-碘喹啉-8-甲腈(3.3g，11.07mmol)和1-(2-四氢吡喃基)-1H-吡唑-5-硼酸频哪酯(3.39g，12.18mmol)溶解在二氧六环(30mL)和水(10mL)中，加入碳酸钾(4.59g，33.22mmol)和二氯[1,1'-双(耳叔丁基膦)二茂铁钯(II)(720mg，1.11mmol)，在氮气保护下，将反应体系加热到100℃反应3小时。冷却至室温后，反应体系用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭，乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，干燥并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到浅黄色固体产品6-氟-7-[1-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基)吡唑-5-基]喹啉-8-甲腈(2.4g，收率：63.9％)。LCMS:ESI m/z 323(M+H)+。
第五步：
在冰浴下，将化合物3-硫基-1-丙醇(0.32mL，3.72mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，向其中分批加入氢化钠(110mg，4.65mmol，60％)，反应30分钟后，再加入6-氟-7-[1-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基)吡唑-5-基]喹啉-8-甲腈(1g，3.10mmol)，反应体系加热到100℃反应1小时。冷却至室温后，反应体系用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭，乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，干燥并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-10％)纯化，得到棕色固体产品6-[(3-羟丙基)硫烷基]-7-[1-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基)吡唑-5-基]喹啉-8-甲腈(900mg，收率：69.8％)。LCMS:ESI m/z395(M+H)+。
第六步：
在冰浴下，将化合物6-[(3-羟丙基)硫烷基]-7-[1-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-2-基)吡唑-5-基]喹啉-8-甲腈(900mg，2.28mmol)溶解在甲醇(10mL)中，加入盐酸溶液(5mL，2N)。在此温度下反应1小时。浓缩反应混合物，将残留物溶解在二氯甲烷(20mL)中，用饱和碳酸氢钠溶液将pH调节至8-10，收集有机层，干燥浓缩得到棕色油状粗产品6-[(3-羟丙基)硫烷基]-7-(1H-吡唑-5-基)喹啉-8-甲腈(570mg，收率：76.47％)，该粗产品可直接用于下一步反应。LCMS:ESI m/z 311(M+H)+。
第七步：
在冰浴下，将化合物6-[(3-羟丙基)硫烷基]-7-(1H-吡唑-5-基)喹啉-8-甲腈(570mg，1.84mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，加入四溴化碳(1.22g，3.68mmol)和三苯基膦(965mg，3.68mmol)，在氮气保护下，在室温反应1小时。反应混合物用水(10mL)稀释，用二氯甲烷(30mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到黄色油状产品6-[(3-溴丙基)硫烷基]-7-(1H-吡唑-5-基)喹啉-8-甲腈(400mg，收率：55.3％)。LCMS:ESI m/z 373(M+H)+。
第八步：
将化合物6-[(3-溴丙基)硫烷基]-7-(1H-吡唑-5-基)喹啉-8-甲腈(500mg，1.34mmol)溶解在乙腈(100mL)中，加入碳酸铯(1.31g，4.02mmol)，将反应混合物加热到60℃反应1小时，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-80％)纯化，得到白色固体产品6,7-二氢-5H-吡唑并[5’,1':4,5][1,5]硫氮杂辛环并[2,3-g]喹啉-14-甲腈(380mg收率：92.2％)。LCMS:ESI m/z 293(M+H)+。
中间体84：
1-溴-9-氯-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-14-甲腈的制备
第一步：
将化合物9-氟-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-14-甲腈(300mg，1.03mmol)和2-羟乙基甲砜(256mg，2.06mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，向其加入氢化钠(82mg，2.06mmol)，在氮气保护下，室温反应1小时，反应混合物用水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-35％)纯化，得到黄色固体产品9-羟基-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-14-甲腈(200mg，收率：67.1％)。LCMS:ESI m/z 290(M+H)+。
第二步：
在冰浴下，将化合物9-羟基-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-14-甲腈(200mg，0.69mmol)和三乙胺(0.38mL，2.77mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，向其加入三氟甲磺酸酐(390mg，1.38mmol)。在室温下反应1小时，反应混合物用水(10mL)淬灭，用二氯甲烷(30mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到棕色油状粗产物14-氰基-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-9-基三氟甲磺酸酯(220mg，收率：75.5％)该粗品可以直接用于下一步反应。LCMS:ESI m/z 422(M+H)+。
第三步：
将化合物14-氰基-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-9-基三氟甲磺酸酯(120mg，0.28mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，向其加入氯化锂(60mg，1.42mmol)，在氮气保护下，将反应体系加热至100℃反应过夜。反应混合物用水(10mL)淬灭，用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-25％)纯化，得到黄色油状产品9-氯-5,6,7,8-四氢萘并[3,2-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-14-甲腈(15mg，收率：17.1％)。LCMS:ESI m/z 308(M+H)+。
第四步：
在冰浴下，将化合物9-氯-5,6,7,8-四氢萘并[3,2-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-14-甲腈(15mg，0.05mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，向其中加入N-溴化丁二酰亚胺(9mg，0.05mmol)，反应体系在室温下反应2小时，反应混合物用水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-55％)纯化，得到黄色固体产品1-溴-9-氯-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-14-甲腈(10mg，产率：53.1％)。LCMS:ESIm/z 389(M+H)+。
中间体85：
1-溴-9-甲基-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-14-甲腈的制备
第一步：
将化合物14-氰基-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-9-基三氟甲磺酸酯(100mg，0.24mmol)和三甲基环三硼氧烷(28mg，0.48mmol)溶解在二氧六环(5mL)和水(1mL)中，向其中加入碳酸钾(98mg，0.71mmol)和二氯[1,1'-双(二叔丁基膦)二茂铁钯(II)(17mg，0.02mmol)，在氮气保护下，将反应体系加热到80℃，反应过夜。将反应混合物真空浓缩，得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到黄色油状产品9-甲基-5,6,7,8-四氢萘并[3,2-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-14-甲腈(50mg，产率：73.3％)。LCMS:ESI m/z288(M+H)+。
第二步：
在冰浴下，将化合物9-甲基-5,6,7,8-四氢萘并[3,2-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-14-甲腈(50mg，0.17mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，向其中加入N-溴化丁二酰亚胺(31mg，0.17mmol)，反应体系在室温下反应2小时，反应混合物用水(10mL)淬灭，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合并的有机相用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)纯化，得到黄色固体产品1-溴-9-甲基-5,6,7,8-四氢萘并[2,3-c]吡唑并[1,5-a]氮杂辛环-14-甲腈(55mg，产率：86.31％)。LCMS:ESI m/z 366(M+H)+。中间体86：
1-溴-6,7-二氢-5H-萘并[3,2-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环的制备
第一步：
将化合物3-溴-2-萘酚(1g，4.49mmol)溶解在1,4-二氧六环(12mL)和水(3mL)中，向其中加入1H-吡唑-3-硼酸频哪酯(1g，5.38mmol)、碳酸钾(1.8g，13.45mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)(300mg，0.45mmol)，在氮气保护下，将反应液加热到100℃反应2小时，冷却至室温后，将反应混合物用水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并有机相并用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-20％)纯化，得到棕色固体产品3-(1H-吡唑-5-基)-2-萘酚(460mg，收率：48.8％)。LCMS:ESI m/z 209(M-H)+。
第二步：
将化合物3-(1H-吡唑-5-基)-2-萘酚(460mg，2.2mmol)溶解在乙腈(250mL)中，向其中加入1,3-二溴丙烷(0.24mL，2.41mmol)和碳酸铯(1.43g，4.38mmol)，在氮气保护下，将反应液在60℃反应过夜，过滤并浓缩滤液得到粗产物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-20％)纯化得到淡黄色固体产品6,7-二氢-5H-萘并[3,2-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环(40mg，收率：7.3％)。LCMS:ESI m/z 251(M+H)+。
第三步：
将化合物6,7-二氢-5H-萘并[3,2-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环(40mg，0.16mmol)溶解在乙腈(3mL)中，向其中加入N-溴代丁二酰亚胺(28mg，0.16mmol)，反应体系在室温下反应3小时，反应混合物用水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，合并有机相并用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)纯化，得到白色固体产品1-溴-6,7-二氢-5H-萘并[3,2-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环(37mg，收率：70.3％)。LC/MS(ESI)m/z:329(M+H)+。
实施例75:
1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-9-氯-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈的制备
第一步：
将化合物1-溴-6,7-二氢-5H-萘并[3,2-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈(180mg,0.51mmol)(中间体62)溶解在醋酸(3mL)中，向其中加入N-氯代丁二酰亚胺(82mg,0.61mmol)，在氮气保护下，将反应体系加热到80℃反应1小时。将反应液浓缩，然后加入乙酸乙酯(10mL)，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH到9，收集有机相。干燥过滤后浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0-60％)纯化，得到淡黄色固体产品1-溴-9-氯-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈(140mg,收率:70.6％)。LCMS:ESI m/z388(M+H)+。
第二步：
将化合物1-溴-9-氯-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈(600mg,1.54mmol)溶解在二氧六环(10mL)和水(2mL)中，向其中加入(4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(867mg,2.16mmol)、1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(113mg)和碳酸钾(533mg,3.86mmol)，在氮气保护下，将反应体系加热到90℃反应4小时。冷却至室温后，用乙酸乙酯(20mL)和水(5mL)稀释。收集有机层，干燥过滤后浓缩得到粗产品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝50-60％)纯化，得到白色固体产品(7-(9-氯-14-氰基-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(150mg,收率:16.7％)。LCMS:ESI m/z 583(M+H)+。第三步：
在冰浴下，将化合物(7-(9-氯-14-氰基-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-1-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲基)氨基甲酸叔丁酯(320mg,0.55mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，向其中加入三氟乙酸(1mL),室温下反应30分钟，浓缩并溶解在二氯甲烷(10mL)中,用碳酸氢钠饱水溶液调节pH到9-10，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经制备型反相HPLC纯化得到淡黄色固体产品1-(4-(氨基甲基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)-9-氯-6,7-二氢-5H-萘并[2,3-b]吡唑并[5,1-d][1,5]氧氮杂辛环-14-甲腈(70mg,收率：26.4％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.52(d,J＝8.5Hz,1H),8.12(d,J＝7.9Hz,2H),8.05(d,J＝8.4Hz,1H),7.89(t,J＝7.7Hz,1H),7.82-7.76(m,2H),7.36(d,J＝8.2Hz,1H),4.95-4.91(m,1H),4.71-4.66(m,1H),4.46-4.42(m,1H),4.24-4.18(m,2H),4.13-4.06(m,1H),2.37-2.29(m,1H),2.09-2.03(m,1H)。LCMS:ESI m/z 483(M+H)+。
经SFC拆分后得到两个轴手性异构体，(设备:SHIMADZU PREP SOLUTION SFC,柱子型号:ChiralPak AD,250×30mm I.D.,5μm；流动相A：CO2，流动相B：IPA+0.1％MEA；梯度:B45％；流速:40mL/min；压力:100bar，柱温:35度；波长:220nm；循环时间:9min；制备总时长:3小时)
75A(峰1，保留时间2.87分钟)，白色固体，19.23mg。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.51(d,J＝8.5Hz,1H),8.15(d,J＝8.3Hz,1H),8.13(s,1H),8.05(d,J＝8.3Hz,1H),7.90-7.85(m,1H),7.80-7.75(m,1H),7.72(d,J＝1.4Hz,1H),7.48-7.43(m,1H),4.96-4.91(m,1H),4.71-4.64(m,1H),4.24-4.16(m,1H),4.14-4.06(m,1H),3.96(d,J＝15.8Hz,1H),3.77(d,J＝16.0Hz,1H),2.38-2.28(m,1H),2.10-2.02(m,1H)。LCMS:ESI m/z 483(M+H)+。
75B(峰2，保留时间4.14分钟)，白色固体，28.92mg。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.52(d,J＝8.5Hz,1H),8.15-8.10(m,2H),8.05(d,J＝8.4Hz,1H),7.89(t,J＝7.3Hz,1H),7.83(d,J＝1.3Hz,1H),7.81-7.75(m,1H),7.37-7.32(m,1H),4.96-4.91(m,1H),4.72-4.64(m,1H),4.51(d,J＝16.2Hz,1H),4.29(d,J＝16.2Hz,1H),4.25-4.17(m,1H),4.13-4.06(m,1H),2.39-2.28(m,1H),2.11-2.02(m,1H)。LCMS:ESI m/z 483(M+H)+。
下列化合物从对应的中间体开始按照实施例75的合成方法合成(对应的起始原料标注在起始原料列):
PRMT5酶活性测试方法
测试化合物和阳性化合物：
·用DMSO将所有化合物配成10mM或20mM的储备液
·阳性化合物：MRTX9768(CAS#2629314-68-5；MCE,cat#HY-138684)
实验条件：
·阳性化合物MRTX9768在DMSO中从200μM开始连续4倍稀释，共10个浓度
·测试化合物在DMSO中从200μM开始连续3倍稀释，共10个浓度
·在65.67μL测定缓冲液中加入1μL系列稀释化合物，得到3X化合物和阳性化合物工作液
·制备3X阳性对照(3μM MRTX9768)和3X阴性对照(1.5％ DMSO)
·密封稀释板，在平板振动筛上并振动稀释板15分钟
实验材料和试剂：
耗材和仪器：
实验方法：
·向384孔实验板(6008280,PerkinElmer)中添加4μL 3X系列稀释化合物
·制备3X PRMT5酶工作液
·将4μL 3X PRMT5酶添加到384孔实验板中
·密封实验板，在1000rpm下离心384孔实验板1min，并置于25℃孵育箱中孵育30分钟
·准备3X PRMT5底物工作液
·将4μL 3X PRMT5底物工作液加入384孔实验板中开始反应
·密封实验板，在1000rpm下离心384孔实验板1min，并置于25℃孵育箱中孵育90分钟
·用Protin-A-Eu、抗组蛋白H4(R3二甲基对称)抗体和streptavidin-d2制备4X检测溶液
·将4μL 4X检测溶液添加到384孔实验板中
·密封实验板，在1000rpm下离心384孔实验板1min，并置于25℃孵育箱中孵育30分钟
·在BMG平板阅读器上读取波长为665nm和615nm
数据处理：
·抑制率％计算公式如下：
阳性对照的平均RR
阴性对照的平均RR
化合物对HCT116细胞抗增殖作用的测定
使用HCT116 WT和HCT116 MTAP(-/-)细胞系进行抗增殖作用的测定。细胞在添加了10％胎牛血清和青霉素-链霉素的McCoy's 5A培养基中培养，放于37℃，5％ CO2培养箱中。用PBS清洗细胞两次后，使用胰蛋白酶将细胞消化，离心进行细胞计数。用于实验的细胞活率到90％以上才可进行实验。将HCT116 WT和HCT116 MTAP(-/-)细胞铺到384细胞培养板中，每孔100个细胞，40μL培养基。
使用DMSO将化合物从10mM开始连续4倍稀释，共10个浓度。通Echo550将DMSO梯度稀释的化合物转移40nL到384细胞培养板中。将384微孔板置于细胞培养箱中培养10天(37℃，5％CO2)。
培养10天后，将40μL CTG检测试剂(Promega，cat#G7573)加入到384微孔板中，在摇床上混合10分钟以诱导细胞裂解。之后将384微孔板置于37℃，5％ CO2的条件下避光孵育30分钟。通过多功能酶标仪Envision进行读数。
按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率：
肿瘤细胞生长抑制率％＝100-(Signalcmpd-SignalAve_BL)/(SignalAve_VC-SignalAve_BL)X100
细胞内赖氨酸对称双甲基化测定实验(SDMA In Cell Western)
用DMSO将所有化合物配成10mM或20mM的储备液。测试化合物在DMSO中从5mM开始连续4倍稀释，共10个浓度。化合物板在1000rpm转速下离心1min。HCT116 MTAP(-/-)细胞或HCT116 WT细胞培养于RPMI 1640培养基中，加10％ FBS(v/v)和100个单位/mL的青霉素-链霉素混合液，置于37℃、5％ CO2条件下培养。将30μL细胞加入到多聚D-赖氨酸涂层的384孔培养板中，每孔500个细胞。细胞板在37℃、5％ CO2条件下培养24小时。化合物梯度稀释，将60nL 384孔稀释板中的化合物添加到384孔细胞板中。细胞板在37℃、5％ CO2条件下培养96小时。
移除培养基，每孔添加50μL 4％多聚甲醛，常温下孵育20分钟以固定细胞。吸除多聚甲醛，用含0.1％吐温20的PBS(PBST)洗涤缓冲液洗涤4次。向每个细胞板中添加30μL冰甲醇，并将细胞板置于-20℃下10分钟。吸除甲醇，用PBST洗涤缓冲液100μL每孔清洗细胞板4次。将含0.05％吐温20的Odyssey封闭缓冲液每孔30μL添加到每个细胞板中，并在室温下摇动培养2小时。去除封闭缓冲液，每孔添加30μL Symmetric Di-Methyl Arginine Motif[sdme-RG]MultiMabTM兔一抗(在封闭缓冲液中1:500稀释)，并在4℃下培养过夜(16小时)。吸除一抗，用洗涤缓冲液100μL每孔清洗细胞板4次，每次浸泡5min。每孔添加30μL山羊抗兔IgG(800CW)二抗(1:800稀释，DRAQ5 1:10000稀释)，并在室温下培养2小时。洗涤缓冲液100μL每孔清洗细胞板4次。细胞板在室温下干燥，使用LI-COR Odyssey测量700nm和800nm波长下的累计强度并成像。
每孔的比率由公式SDMA 800nm值/DRAQ5 700nm值来确定。计算仅用DMSO处理的对照孔(最小抑制)对照组的平均比值，并用于确定细胞板中每个测试孔的抑制百分比。测定抑制百分比，并使用每浓度化合物的三个重复孔生成IC50曲线。抑制率％＝100-(单个测试样品比率/最小抑制比率)*100。
通过上述实验测得的本发明化合物的实验结果如下表1所示。
表1.化合物活性数据表
实验结果表明，本发明化合物展示了非常强的PRMT5酶抑制活性，而且在在MTAP缺失的细胞中显示了比野生型细胞更好的抑制赖氨酸对称甲基化的活性，以及更好的抑制细胞增殖的活性，其选择可以高达100倍以上，如实施例P-7。这也显示本发明的化合物具有选择性杀死MTAP缺失的癌细胞，同时对正常细胞没有杀伤副作用的潜能，预示本发明化合物具有很好的治疗安全窗口。
Claims (29)
1.式(I)的化合物，
其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐：
其中:
各独立地为单键或双键；
R1至R4独立地选自H、卤素、羟基、氰基、NR5R6、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基、卤代C1-6烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基，其中所述芳基，杂芳基、C3-8环烷基和杂环烷基任选地被一个或多个独立地选自卤素、羟基、氰基、NR5R6、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基和卤代C1-6烷氧基的取代基取代，或者
R2和R3与它们所连接的原子一起形成芳基、杂芳基、碳环基团或杂环基团，其中所述芳基、杂芳基、碳环基团或杂环基团任选地被一个或多个独立地选自卤素、羟基、氰基、NR5R6、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基和卤代C1-6烷氧基的取代基取代；或者
R3和R4与它们所连接的原子一起形成芳基、杂芳基、碳环基团或杂环基团，其中所述芳基、杂芳基、碳环基团或杂环基团任选地被一个或多个独立地选自卤素、羟基、氰基、NR5R6、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基和卤代C1-6烷氧基的取代基取代，
其中R5和R6独立地选自H和C1-6烷基，或者R5和R6与它们所连接的N原子一起形成含氮杂环基团；
X1和X2之一是CR7R8，另一个选自CR7R8、O、N和S，其中S可以任选被氧化，其中R7和R8独立地选自H和C1-6烷基，或者R7和R8与它们所连接的原子一起形成3至6元碳环基团或杂环基团；
X3、X6和X7独立地选自C和N；
X4和X5独立地选自CH和N，
R9和R10独立地选自H和C1-6烷基，或者R9和R10与它们所连接的原子一起形成3至6元碳环基团或杂环基团；
p＝0、1、2、3、4或5。
2.根据权利要求1所述的化合物，其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，其中R1至R4独立地选自H、卤素、羟基、氰基、NR5R6、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基和C3-8环烷氧基，其中R5和R6a如上所定义。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，其中R1选自H、卤素、氰基和C3-8环烷氧基、特别是氰基。
4.根据权利要求1至3任意一项所述的化合物，其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，其中R2选自H、卤素、氰基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷氧基、C3-8环烷基和C3-8环烷氧基。
5.根据权利要求1至4任意一项所述的化合物，其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，其中R3选自H和卤素。
6.根据权利要求1所述的化合物，其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，其中R2和R3与它们所连接的原子一起形成芳基或杂芳基，其中所述的芳基和杂芳基任选地被一个或多个独立地选自卤素、羟基、氰基、NR5R6、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基和卤代C1-6烷氧基的取代基取代。
7.根据权利要求6所述的化合物，其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，其中R2和R3与它们所连接的原子一起形成苯基。
8.根据权利要求1至7任意一项所述的化合物，其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，其中R4选自H、卤素、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C3-8环烷基和氰基。
9.根据权利要求1至8任意一项所述的化合物，其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，其中X1和X2之一是CH2，另一个选自CH2、O、N和S，其中S可以任选被氧化。
10.根据权利要求1至9任意一项所述的化合物，其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，其中X1是CH2且X2选自CH2、O和S。
11.根据权利要求1至9任意一项所述的化合物，其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，其中X2是CH2且X1选自CH2、O和SO2。
12.根据权利要求1至11任意一项所述的化合物，其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，其中X3是N。
13.根据权利要求1至12任意一项所述的化合物，其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，其中X4是N。
14.根据权利要求1至13任意一项所述的化合物，其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，其中X3和X4同时是N。
15.根据权利要求1至14任意一项所述的化合物，其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，其中X5是CH。
16.根据权利要求1至15任意一项所述的化合物，其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，其中X6是C。
17.根据权利要求1至16任意一项所述的化合物，其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，其中X7是C。
18.根据权利要求1至17任意一项所述的化合物，其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，其中X5是CH并且X6和X7均是C。
19.根据权利要求1至18任意一项所述的化合物，其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，其中R9和R10独立地选自H和C1-6烷基。
20.根据权利要求1所述的化合物，其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有式(Ia)的结构：
其中R1至R4、X1、X2和p如权利要求1至11任意一项所定义。
21.根据权利要求1所述的化合物，其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自如下化合物：
22.一种药物组合物，其包含：
(1)治疗有效量的权利要求1至21任意一项所述的化合物、其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐作为活性成分；和
(2)药学上可接受的载体。
23.权利要求1至21任意一项所述的化合物、其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐或权利要求22所述的药物组合物在制备用作PRMT5抑制剂、特别是MTA-协同PRMT5抑制剂的药物中的用途。
24.权利要求1至21任意一项所述的化合物、其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐或权利要求22所述的药物组合物在制备用于治疗由PRMT5介导或至少部分由PRMT5介导的疾病的药物中的用途。
25.权利要求24所述的用途，其中所述由PRMT5介导或至少部分由PRMT5介导的疾病是癌症。
26.权利要求25所述的用途，其中所述的癌症是实体瘤或血液系统恶性肿瘤，例如白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。
27.权利要求25所述的用途，其中所述的癌症选自卵巢癌、肺癌(包括非小细胞肺癌)、脑瘤(包括成胶质细胞瘤(GBM))、腱鞘巨细胞瘤、胃肠道间质肿瘤(GIST)、胃癌、食道癌、结肠癌、结肠直肠癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、宫颈癌、黑色素瘤、间皮瘤、间皮内膜癌、肾癌、肝癌、甲状腺癌、头颈癌、尿路上皮癌、膀胱癌、子宫内膜癌、绒毛膜癌、肾上腺癌、肉瘤、白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。
28.体内或体外抑制PRMT5活性的方法，其包括使有效量的至少一种权利要求1至21任意一项所述的化合物、其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐与PRMT5接触。
29.抑制MTAP缺失的癌细胞的生长的方法，其包括使有效量的至少一种权利要求1至21任意一项所述的化合物、其对映异构体、非对映异构体、外消旋体、互变异构体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐与所述的细胞接触。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2022111531761 | 2022-09-21 | ||
| CN202211153176 | 2022-09-21 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117736222A true CN117736222A (zh) | 2024-03-22 |
Family
ID=90249578
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311132886.0A Pending CN117736222A (zh) | 2022-09-21 | 2023-09-04 | 具有三环或四环并环结构的mta协同性prmt5抑制剂化合物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117736222A (zh) |
-
2023
- 2023-09-04 CN CN202311132886.0A patent/CN117736222A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2019201352B2 (en) | Bromodomain inhibitors | |
| JP7335882B2 (ja) | ピリミジン縮合環式化合物及びその製造方法、並びに使用 | |
| CN115448923B (zh) | 嘧啶并环化合物及其制备方法和应用 | |
| KR102075886B1 (ko) | 신규한 피라졸로[3,4-d]피리미딘 화합물 또는 그 염 | |
| JP7140337B2 (ja) | ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－３－オンの大環状誘導体、その医薬組成物及び応用 | |
| JP2022509149A (ja) | ピリミジンと５員窒素ヘテロ環の誘導体、その製造方法、およびそれらの医学的使用 | |
| EA036932B1 (ru) | Производные аммония, способ их получения и фармацевтические композиции, содержащие их | |
| CA2990089A1 (en) | New aminoacid derivatives, a process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them | |
| KR20070104936A (ko) | 화합물 | |
| KR20100094551A (ko) | 유기 화합물 | |
| JP2021524457A (ja) | Ａ２ａ／ａ２ｂ阻害剤としての縮合ピリミジン誘導体 | |
| KR20100016432A (ko) | Ｐｉ３ｋ 저해제로서 2-모르폴린-4-일-피리미딘 | |
| CN108137588B (zh) | 三环稠合吡啶-2-酮衍生物及其作为brd4抑制剂的用途 | |
| JP2021512908A (ja) | Ａｔｒ阻害剤及びその応用 | |
| CN112292374B (zh) | 一种新型磷酸肌醇3-激酶抑制剂及其制备方法和用途 | |
| US20180086770A1 (en) | Method for producng tricyclic compound, and tricyclic compound capable of being produced by said production method | |
| WO2020241853A1 (ja) | ベンゾトリアゾール誘導体 | |
| CN115353508B (zh) | 5-吡啶-1h-吲唑类化合物、药物组合物和应用 | |
| AU2021256157A1 (en) | Tricyclic compounds as EGFR inhibitors | |
| AU2009323287A2 (en) | Quinolone compound and pharmaceutical composition | |
| CN116143806A (zh) | 一类含氮杂环类化合物、制备方法和用途 | |
| CA3083320C (en) | Piperidinyl derivatives as inhibitors of ubiquitin specific protease 7 | |
| CN110407854B (zh) | 新的四环化合物 | |
| JP6900406B2 (ja) | Ａｋｔ阻害剤としてのジヒドロピラゾロアゼピン系化合物 | |
| CN117736222A (zh) | 具有三环或四环并环结构的mta协同性prmt5抑制剂化合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |