CN117701025A - 尼罗蓝-parp抑制剂染料及其合成方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种尼罗蓝‑PARP抑制剂染料及其合成方法与应用，以尼罗蓝染料为母体设计合成了一例可同时用于细胞成像与光动力治疗的光敏染料，该类染料保留尼罗蓝染料高的摩尔消光系数、荧光成像和活性氧产生效率，可有效提高对乳腺癌细胞的杀伤能力，尤其对BRCA突变乳腺癌细胞具有更高的致死能力，同时降低光敏剂在正常细胞中的暗毒性，且诱导乳腺癌细胞发生铁死亡，从而实现对乳腺癌广泛杀伤，对于乳腺癌治疗具有广泛的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及有机染料技术领域，尤其涉及尼罗蓝-PARP抑制剂染料及其合成方法与应用。
背景技术
目前，癌症是对人类生命健康威胁最大的疾病之一。据美国癌症协会数据显示：2023年美国预计新发乳腺癌病例数约29万，位居女性癌症发病率第一位，是最常见的恶性肿瘤。研究表明，具有乳腺癌易感基因(Breast Cancer Susceptibility Gene，BRCA)突变女性，患癌风险远高于正常女性，面临严重健康风险。顺铂、阿霉素等化疗药物是典型的DNA损伤药物，通过断裂肿瘤细胞内DNA双链杀伤癌细胞，被广泛使用在乳腺癌治疗中。然而细胞内存在的DNA损伤修复途径会减少药物杀伤癌细胞效能，导致癌症治疗失败，同时由于这类药物靶向性差，毒副作用大，易引起免疫缺陷等问题。因此，针对乳腺癌，亟需开发更加精准、高效、安全的治疗模式。
在正常细胞中含有聚ADP-核糖聚合酶(Poly ADP-Ribose Polymerase，PARP)和BRCA，可通过碱基切除或同源重组方式修复DNA损伤。而对于携带BRCA突变的癌细胞，当PARP修复通路被阻断时，缺乏BRCA修复途径的癌细胞因DNA损伤致死。这种方式被称为“合成致死”，只杀伤BRCA突变的癌细胞而不损伤正常细胞。PARP抑制剂配合损伤DNA的药物虽然取得一定疗效。但两者治疗时细胞易产生耐药性、用药剂量大、药品毒副作用大等局限性，且对不携带BRCA突变乳腺癌患者治疗效果差，进而限制其大规模临床应用。
发明内容
针对现有技术存在的PARP抑制剂配合损伤DNA的药物在治疗时细胞易产生耐药性、用药剂量大、药品毒副作用大等局限性，且对不携带BRCA突变乳腺癌患者治疗效果差，进而限制其大规模临床应用的问题，本发明的提供一种尼罗蓝-PARP抑制剂染料，保留尼罗蓝染料优异的荧光性能和高效的光动力效果，与PARP抑制剂联合使用可降低在正常细胞的毒性，同时提高对乳腺癌细胞损伤能力，尤其对BRCA突变乳腺癌细胞具有更高的致死能力，且在PARP抑制剂疗法的基础上合理构建联合治疗体系，从而在乳腺癌细胞中发挥最优治疗效果具有重要的研究意义。
为了实现上述目的，本发明的技术方案是：一种尼罗蓝-PARP抑制剂染料，其结构如通式I所示：
在通式I中，
R1选自PARP抑制剂中奥拉帕利、尼拉帕利、卢卡帕利、维利帕利及衍生物中一种；
X选自氧、硫、硒、碲中的一种，优选为氧或硫；
Y-选自卤素离子、ClO4 -、BF4 -中的一种，优选为卤素离子或ClO4 -。
n选自任意正整数，选为1、2或3，更优选地，n为2，此时烷基链延长，对终产物性能影响较小。
尼罗蓝-PARP抑制剂染料的合成方法，其工艺过程如下所示：
其合成方法包括如下步骤：
(1)在水溶液中，N,N-二乙基对苯二胺为原料，加入到硫酸铝水溶液中，冰浴搅拌下依次加入NaS2O3和ZnCl2，逐滴加入KMnO4，反应2-4h后，经亲核取代、硝基还原、氧化反应等，再经过抽滤得到沉淀物，经萃取、浓缩、纯化得到式Z-1所示的化合物；
或将3-羟基-N,N-二乙基苯胺加入到浓盐酸和超纯水的混合溶液中，反应温度-5-0℃，缓慢加入亚硝酸钠水溶液，搅拌反应2-4h，静置，抽滤得淡黄色固体，经醋酸钠洗涤、浓缩得到式Z-2所示的化合物；
(2)在80-100℃下，在有机溶剂中，加入1-萘胺和溴酸乙酯反应15-24h。反应完成后，经减压、浓缩、纯化得到式Z-3所示的化合物。然后再将上述产物中加入碱，室温下搅拌4-8h。待反应完后用酸将反应混合物酸化，经萃取、浓缩、纯化，得到含有不同烷基链取代的中间产物Z-4；
(3)在有机溶剂中，在50-100℃下，将中间产物Z-1或Z-2与Z-4在无机碱的催化下发生缩合反应，经过过滤，加入酸调节PH值到3-4，萃取，浓缩，纯化得到尼罗蓝染料NBS；在室温下，在有机溶液中，加入尼罗蓝染料NBS和有机碱，室温搅拌0.5-1h，然后加入R1抑制剂反应1-2h，经萃取，干燥，浓缩，纯化得蓝色固体产物I。
在上述步骤(1)中，所述的萃取溶剂选自甲醇、乙醇、乙腈、乙酸乙酯、乙醚、丙酮、丙醇的任意一种或几种组合的混合溶剂；
在上述步骤(2)中，所述的极性溶剂选自乙醇、石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯中的一种或几种组合的混合溶剂；所述的无机碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸铯、乙醇钠中的任意一种；
在上述步骤(3)中，所述的有机溶剂选自乙醇、甲醇、二氯甲烷、DMF的任意一种或几种组合的混合溶剂；所述的无机碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸银中的任意一种；所述的极性溶剂选自甲醇、二氯甲烷、乙腈、乙醚、丙酮、异丙醇的任意一种或几种组合的混合溶剂；有机碱选自三乙胺、吡啶和HATU中的任意一种。
进一步地，所述步骤(2)中式Z-1或式Z-2所示化合物与式Z-4所示化合物反应的摩尔比为1：1.5；
所述步骤(3)中尼罗蓝染料NBS与R1抑制剂反应的摩尔比为1：1.5。
所述的尼罗蓝-PARP抑制剂染料在乳腺癌治疗中的应用，具体地，所述应用包括在生物成像、联合治疗或光动力治疗等方面中的应用。
综上所述，本发明具有以下有益效果：
1、由于PARP抑制剂的引入，本申请所述的尼罗蓝-PARP抑制剂染料能够快速被乳腺癌癌细胞摄取，具有传统尼罗蓝染料优异的荧光性能，高的摩尔消光系数和高效的活性氧产生能力。
2、经实验测试，本申请所述的尼罗蓝-PARP抑制剂染料在正常细胞具有较低的暗毒性，药剂量在2.0μM时仍然保持在80％以上存活率，而在乳腺癌细胞中存活率仅有50％左右，有较高的致死能力，并且在低剂量光照时(5mW,5min)杀伤能力进一步增强，尤其对BRCA突变乳腺癌细胞具有更高的杀伤能力，IC50为0.35μM。
3、本申请所述的尼罗蓝-PARP抑制剂染料同时保留尼罗蓝染料优异的荧光性能和高效的光动力效果，在与PARP抑制剂联合使用时可降低在正常细胞的毒性，同时提高对乳腺癌细胞损伤能力，尤其对BRCA突变乳腺癌细胞具有更高的致死能力，在乳腺癌治疗方面具有良好的应用前景。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1本发明实施例NBSO、NBSV和对比例NBS-C在不同试剂中吸收和荧光光谱。
图2本发明实施例NBSO、NBSV和对比例NBS-C在二氯甲烷中的活性氧捕获剂DPBF的紫外吸收衰减曲线。
图3本发明实施例NBSO在HCC1937细胞中摄取实验。
图4本发明实施例NBSO在HCC1937细胞中的溶酶体定位图。。
图5本发明实施例NBSO和NBSV对不同细胞的毒性实验。
图6本发明实施例NBSO对MCF-7细胞的损伤实验。
图7本发明实施例NBSO对HCC1937细胞的凋亡实验。
具体实施方式
以下，进一步对本发明进行详细说明。
除另有说明外，本文中使用的术语具有以下含义。
本文中使用的术语“卤素”包括氟、氯、溴和碘。
本发明中使用的术语“烷基”包括直链烷基和支链烷基。
本发明中使用的术语“MTT”指的是一种检测细胞存活和生长的方法。
本申请所述的尼罗蓝-PARP抑制剂染料，其结构如通式I所示：
在通式I中，
R1选自PARP抑制剂中奥拉帕利、尼拉帕利、卢卡帕利、维利帕利及衍生物中一种；
X选自氧、硫、硒、碲中的一种，优选为氧或硫；
Y-选自卤素离子、ClO4 -、BF4 -中的一种，优选为卤素离子或ClO4 -。
n选自任意正整数，优选为1、2或3，更优选地，n为2。
以下结合实施例对通式I所示的尼罗蓝-PARP抑制剂染料进行详细说明。
实施例
本发明实施例1-5合成的化合物通用合成工艺过程如下所示：
实施例1
一类尼罗蓝-PARP抑制剂染料具有以下结构式：
其合成方法包括如下步骤：
(1)式Z-1所示化合物的合成
以N,N-二乙基对苯二胺(2.00g，12.18mmol)为原料，加入到的硫酸铝水溶液(8.22g，13.04mmol)中，冰浴搅拌下依次加入NaS2O3(4.42g，28mmol)和ZnCl2(1.74g，12.78mmol)并且在20min内逐滴加入KMnO4(0.53g，3.36mmol)，反应2h后，经亲核取代、硝基还原、氧化反应等步骤完成，抽滤得到大量灰黑色沉淀物经少许甲醇清洗后，置于10mL甲醇中回流10min过滤得灰绿色固体产物，1.50g，产率为44％，无需进一步纯化可直接用于下一步反应。
(2)式Z-4所示化合物的合成
将1-萘胺(2.00g,13.90mmol)和5-溴戊酸乙酯(3.00g,14.35mmol)加入到乙醇(15mL)中回流近18h，并通过TLC连续监测。反应完成后，减压蒸发溶剂，得到粗产物中间体。然后向粗产物中间体加入1，4-二氧六环(4mL)溶解粗产物，向该溶液中加入氢氧化钠(1M,1.5mL)，得到的混合物在室温下搅拌5小时。待反应完后用稀盐酸将反应混合物酸化至pH值为3，通过二氯甲烷3×15mL萃取，有机相经水洗后无水硫酸钠干燥，通过减压旋转蒸发除去溶剂，得到的粗产品通过硅胶柱色谱分离(V石油醚：V乙酸乙酯＝2:1)，获得固体粉末，2.04g，产率为54％。
(3)目标产物的合成
将化合物Z-1(0.50g，1.65mmol)和化合物Z-4(0.61g，2.51mmol)溶于20mL甲醇中，反应回流40min，将碳酸银(1g，3.60mmol)缓慢加入回流反应混合物，在完全加入后观察到强烈的颜色变化，0-5分钟内颜色由灰色转变成深蓝色溶液，加热30min后，反应瓶冷却至室温。反应混合物经过滤和蒸发得到深蓝色粗产物。粗产品用25mL二氯甲烷重溶，用饱和碳酸钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，有机相用0.4mL浓盐酸过滤酸化。通过减压旋转蒸发除去溶剂，得到的粗产品通过硅胶柱色谱分离(V二氯甲烷：V甲醇＝10:1)，获得蓝色固体粉末，命名为NBS-C，0.26g，产率为36％；
将制得的NBS-C化合物(0.10g，0.23mmol)和HATU(0.09g，0.25mmol)溶于10mL DMF中，室温搅拌半小时，然后加入奥拉帕尼Olaparib(0.13g，0.34mmol)反应1h，TLC连续监测有新的蓝色点生成，反应结束后，加入20mL水，用二氯甲烷(15mL×3)萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥后，过滤、减压蒸馏除去溶剂，硅胶柱分离提纯(V二氯甲烷：V甲醇＝20:1)，得蓝色固体产物，命名为NBSO，0.12g，产率为67％，并通过核磁共振波谱进行结构鉴定：
NBSO的核磁氢谱数据为：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),9.81(s,1H),9.01(d,J＝7.8Hz,1H),8.52(d,J＝6.7Hz,1H),8.25(d,J＝7.6Hz,1H),8.04-7.78(m,6H),7.58(d,J＝4.7Hz,1H),7.42(d,J＝8.7Hz,3H),7.33(s,1H),7.23(s,1H),4.32(s,2H),3.76-3.50(m,10H),3.37(s,2H),3.15(d,J＝15.9Hz,2H),2.40(s,2H),1.85–1.60(m,4H),1.23(t,J＝6.9Hz,6H)。
NBSO的核磁碳谱数据为：13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ171.12,164.46,159.85,158.02,155.59,153.50,151.34,145.30,140.23,137.38,135.32,134.06,133.95,133.71,132.64,132.33,132.25,132.04,131.85,131.74,130.06,129.53,129.40,128.35,126.54,125.91,125.26,124.61,124.07,123.88,123.60,117.93,116.51,116.30,105.88,103.55,45.61,44.34,41.64,36.89,32.29,28.35,22.56,13.13。
实施例2
一类尼罗蓝-PARP抑制剂染料具有以下结构式：
和实施例1的区别仅在于步骤(3)不同，具体地：采用维利帕利Veliparib(0.67g，0.28mmol)替换奥拉帕尼Olaparib(0.13g，0.34mmol)，硅胶柱分离提纯(V二氯甲烷：V甲醇＝20:1)，得蓝色固体产物，命名为NBSV，0.80g，产率为53％，并通过核磁共振波谱进行结构鉴定：
产物的核磁氢谱数据为：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.41(s,1H),9.73(s,1H),9.27(d,J＝3.4Hz,1H),8.94(d,J＝7.9Hz,1H),8.40(d,J＝8.2Hz,1H),7.96(d,J＝9.4Hz,1H),7.89(t,J＝7.6Hz,1H),7.78(t,J＝7.2Hz,1H),7.71(d,J＝6.8Hz,1H),7.63(d,J＝3.4Hz,1H),7.51-7.44(m,2H),7.41-7.31(m,2H),7.15(t,J＝7.8Hz,1H),3.83(d,J＝9.5Hz,2H),3.70-3.60(m,6H),2.44(d,J＝2.9Hz,2H),2.14-1.95(m,4H),1.86(s,3H),1.81-1.73(m,2H),1.67-1.60(m,2H),1.23(t,J＝6.9Hz,6H)。
产物的核磁碳谱数据为：13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ170.39,166.26,160.22,152.95,150.86,140.65,136.86,134.64,133.52,133.16,132.12,131.34,129.50,124.72,124.06,123.03,121.88,121.26,117.45,114.50,105.36,62.28,48.01,45.12,43.93,41.51,38.24,34.08,32.46,27.91,23.08,22.52,21.40,20.92,12.65。
测试例
为了证明实施例1-2制备的尼罗蓝-PARP抑制剂染料是一例常亮型光敏剂，能快速被乳腺癌癌细胞摄取，继承尼罗蓝染料优异的荧光性能，高的摩尔消光系数和高效的活性氧产生能力，且在无光照时，对正常细胞和其他癌细胞几乎没有损伤，可实现对乳腺癌尤其是BRCA突变的乳腺癌细胞进行治疗，对上述实施例合成的尼罗蓝-PARP抑制剂染料进行如下测试：
测试例1紫外可见吸收光谱和荧光光谱测定
将化合物NBSO、NBSV与化合物NBS-C用万分之一天平精确称量经过真空干燥后的染料，配制5mmol/L的DMSO染料母液于棕色样品瓶中，在4℃冰箱中保存备用。
将上述化合物配置成10μM浓度测试液，使用荧光-吸收光谱仪测试在不同溶剂中NBS-C、NBSO和NBSV(10μM)的吸收光谱和荧光光谱，记录其最大吸收和发射波长，测试结果参见图1。
图1(a)为NBS-C和NBSO吸收曲线；图1(b)为NBS-C和NBSO荧光曲线；图1(c)为NBSV吸收曲线；图1(d)为NBSV荧光曲线。
从图1可以看出，在甲醇和PBS体系中，NBSO、NBSV和NBS-C在NIR范围均表现出优异的光学吸收及荧光发射性质，并且两者吸收峰和发射峰光谱基本一致，表明经过抑制剂修饰后，染料分子光谱性能不受影响。
测试例2活性氧产生能力测试
将化合物NBSO、NBSV与NBS-C分别加入到含有3mL水溶液的石英皿中，并加入一定量的DPBF使其405nm处的吸光度约等于1。利用近红外光(660nm，0.5mW/cm2)照射测试石英皿，每隔1分钟测试一次紫外吸收，测试结果参见图2。
图2(a)为NBS-C的吸收曲线；图2(b)为NBSO的吸收曲线；图2(c)为NBSV的吸收曲线；图2(d)为DPBF在415nm的吸光度值随光照时间的线性关系图。
由图2可以看出，在660nm光照射下，含有NBS-C的DPBF溶液在415nm处的吸光度快速下降，而在相同条件下，含NBSO和NBSV溶液在415nm处吸光度也明显下降，并且两者速率几乎一直，说明Olaparib和Veliparib的引入不影响光敏剂产生ROS的能力。
测试例3细胞摄取测试
将HCC1937细胞分别接种到共聚焦细胞培养皿上，放置于细胞培养箱中孵育24h。成像之前分别向细胞培养皿中分别加入NBS-C和化合物NBSO孵育，在不用时间下置于单光子激光扫描共聚焦显微镜(Leica)成像，判断细胞对化合物NBSO以及对比分子NBS-C的摄取情况，测试结果参见图3。
从图3可以看出，在0-120min内，细胞内NBSO的荧光信号强度逐渐增加，在30min细胞内荧光信号达到最大值，120min内荧光信号基本保持不变，而对比分子NBS-C的荧光信号较弱，表明NBSO更易被癌细胞吸收。
测试例4亚细胞器定位实验
当MCF-7细胞密度在共聚焦培养皿中达到50％时，分别加入1μM化合物NBSO孵育30min后，再加入溶酶体商品化染料Lyso TrackerTMGreen DND孵育20min，然后用PBS清洗2次后添加新的培养基后置于激光共聚焦扫描显微镜下观察，测试结果参见图4。
如图4所示，NBSO的红色荧光与Lyso TrackerTMGreen DND的绿色荧光很好的重叠，皮尔森相关系数达到0.912，表示NBSO进入细胞后可以很好的定位于溶酶体。线粒体是细利于后续的光动力治疗。
测试例5光毒性与暗毒性
染料毒性通过MTT实验评估，分别加入含0、0.1、0.3、0.5、1.0、1.5、2.0μM的NBS-C、Olaparib、化合物NBSO和NBSV的培养基，孵育30min后，用660nm(5mW cm-2)光照射5min(光组)或避光放置5min(暗组)后放置于细胞培养箱中继续孵育24h，然后用移液枪移走DMEM培养基，用100μL PBS清洗一次后向每个孔加入100μL 5mg/mL MTT溶液孵育4h，然后用移液枪移走培养基，向每个孔中加入100μL二甲基亚砜后，轻轻摇晃96孔板使甲臜晶体溶解，用多功能酶标仪(Bio-Tek Synergy H1)分别测量每孔溶液在490nm处的吸光度值，计算细胞存活率。每个实验组重复6次，测试结果参见图5。
细胞存活率采用如下公式计算：
细胞存活率＝(OD实验组-OD空白组)/(OD对照组-OD空白组) (1)
其中OD实验组指含有药物的微孔在490nm处的吸光度值，OD对照组指仅含有培养基的微孔在490nm处吸光度值，OD空白组指含有DMSO的微孔在490nm处的平均吸光度值。
图5(a)为不同浓度NBSO孵育后细胞存活率；图5(b)为不同浓度药物孵育后MCF-7细胞存活率；图5(c)为不同浓度药物孵育后HCC1937细胞存活率；图5(d)为不同浓度NBSV孵育后MCF-7细胞存活率。
如图5所示，在避光条件下，4T1与正常MCF-10A细胞经NBSO处理后没有观察到细胞存活率的降低，低剂量Olaparib对其几乎没有杀伤能力，而MCF-7和HCC1937细胞经相同处理细胞存活率下降，尤其HCC1937细胞存活率低于50％，在光照后在0.3μM时已低于20％，表明尼罗蓝-PARP抑制剂有利于降低药剂量，且对乳腺癌细胞具有较高的杀伤能力，尤其对于发生BRCA突变细胞可最大程度进行杀伤。
测试例6细胞的损伤实验
将MCF-7细胞接种到细胞培养皿上，待细胞生长完全，经过不同处理方式：空白组、NBSO、NBSO+light(5mW cm-2，5min)。根据Calcein AM/PI双染试剂盒说明书配置工作液对细胞染色，置于共聚焦下采集荧光信号，测试结果参见图6。
如图6所示，空白组只检测到绿色(AM)荧光信号，表明细胞活力良好，而光照组，可以在细胞中观察到明显的红色(PI)荧光信号，说明细胞凋亡进入晚期，染色体被降解所导致。
测试例7细胞的凋亡实验
将HCC1937细胞进行预培养后，加入NBSO孵育30min，经避光和光照处理。然后将细胞用PBS洗涤2次，继续孵育以诱导细胞凋亡。随后移走RPMI培养基并加入500μL含5μLAnnexinV和10μL PI的binding buffer在37℃下孵育30min后，将细胞置于激光共聚焦下进行成像，测试结果参见图7。
如图7所示，当细胞用NBSO处理后，避光下FITC和PI通道中捕获到少量荧光信号，与对照组相比，部分细胞的形态也发生明显变化，说明在黑暗条件下，NBSO可诱导细胞死亡，可能是由于PARP抑制剂导致。在660nm光照后，细胞形态发生明显变化，FITC通道中荧光信号明显增强，AnnexinV与磷脂酰丝氨酸的特异性结合被锚定于细胞膜上，细胞发生凋亡。在细胞核区域也可以观察到明显的PI信号，说明凋亡过程进入晚期。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (10)
1.一种尼罗蓝-PARP抑制剂染料，其特征在于，其结构如通式I所示：
在通式I中，
R1选自PARP抑制剂；
X选自氧、硫、硒、碲中的一种；
Y-选自卤素离子、ClO4 -、BF4 -中的一种；
n选自任意正整数。
2.根据权利要求1所述的尼罗蓝-PARP抑制剂染料，其特征在于，所述的PARP抑制剂选自奥拉帕利、尼拉帕利、卢卡帕利、维利帕利中一种；
X选自氧或硫；Y-选自卤素离子或ClO4 -；
n选自1、2或3。
3.权利要求1-2任意一项所述的尼罗蓝-PARP抑制剂染料的合成方法，其特征在于，其工艺过程如下所示：
其合成方法包括如下步骤：
(1)在80-100℃下，将1-萘胺和溴酸乙酯在极性溶剂中反应15-24h，然后加入碱继续反应4-8h，待反应完后用酸将反应混合物酸化，经萃取、浓缩、纯化，得到式Z-4所示的含有不同烷基链取代的中间产物；
(2)在50-100℃下，在有机溶液中将式Z-1或式Z-2所示的化合物与式Z-4所示的化合物在无机碱的催化下发生缩合反应，经过过滤、含Y-的酸处理、萃取、浓缩、纯化得到尼罗蓝染料NBS；
(3)在有机溶剂中加入步骤(2)合成的尼罗蓝染料NBS和有机碱，室温搅拌0.5-1h，然后加入R1抑制剂反应1-2h，经萃取，干燥，浓缩，纯化得式I所示的化合物。
4.根据权利要求3所述的尼罗蓝-PARP抑制剂染料的合成方法，其特征在于，式Z-1所示的化合物采用如下方法合成：
在水溶液中，以N,N-二乙基对苯二胺为原料，加入到41wt％硫酸铝水溶液中，冰浴搅拌下依次加入NaS2O3和ZnCl2，逐滴加入13wt％的KMnO4，反应2-4h后，再经过抽滤得到沉淀物，经萃取、浓缩、纯化得到式Z-1所示的化合物。
5.根据权利要求3所述的尼罗蓝-PARP抑制剂染料的合成方法，其特征在于，式Z-2所示的化合物采用如下方法合成：
将3-羟基-N,N-二乙基苯胺加入到浓盐酸和超纯水的混合溶液中，反应温度-5-0℃，缓慢加入18wt％亚硝酸钠水溶液，搅拌反应2-4h，静置，抽滤，醋酸钠洗涤，浓缩，得到式Z-2所示的化合物。
6.根据权利要求3所述的尼罗蓝-PARP抑制剂染料的合成方法，其特征在于，所述步骤(2)中式Z-1或式Z-2所示化合物与式Z-4所示化合物反应的摩尔比为1：1.5；
所述步骤(3)中尼罗蓝染料NBS与R1抑制剂反应的摩尔比为1：1.5。
7.根据权利要求3所述的尼罗蓝-PARP抑制剂染料的合成方法，其特征在于，在步骤(2)中，采用含Y-的酸调节pH值为3-4。
8.根据权利要求3所述的尼罗蓝-PARP抑制剂染料的合成方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述的极性溶剂选自乙醇、石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯中的一种或几种组合的混合溶剂；所述的无机碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸铯、乙醇钠中的任意一种；
在步骤(2)中，所述的有机溶液选自乙醇、甲醇、二氯甲烷、DMF的任意一种或几种组合的混合溶剂；所述的无机碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸银中的任意一种；
在步骤(3)中，有机溶剂选自甲醇、二氯甲烷、乙腈、乙醚、丙酮、异丙醇的任意一种或几种组合的混合溶剂；有机碱选自三乙胺、吡啶和HATU中的任意一种。
9.根据权利要求4所述的尼罗蓝-PARP抑制剂染料的合成方法，其特征在于，萃取溶剂选自甲醇、乙醇、乙腈、乙酸乙酯、乙醚、丙酮、丙醇的任意一种或几种组合的混合溶剂。
10.权利要求1-2任意一项所述的尼罗蓝-PARP抑制剂染料在乳腺癌治疗中的应用。
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