CN117700573A - 一种具有抗抑郁活性的枸杞多糖及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有抗抑郁活性的枸杞多糖及其制备方法，它由以下方法制备得到：取枸杞子，加入提取，合并滤液，浓缩，加乙醇，静置过夜，取沉淀冻干，得枸杞粗多糖；取枸杞粗多糖，用水溶解，加入胃蛋白酶，恒温酶解；再用胰蛋白酶，水浴酶解；沸水浴终止反应，冷却，离心，收集上清液，冻干，得枸杞多糖产物。发明首先通过常规的水提醇沉后，得到枸杞粗多糖，然后再用胃蛋白酶和胰蛋白酶联合进行酶解消化的工艺，制备得到一定分子量的酶解后的枸杞糖类成分，实验发现其具有很好的抗抑郁症的功效，本发明的酶解消化工艺，绿色环保，无化学污染，且枸杞为药食两用的药材，老少皆宜，安全性好。
Description
技术领域
本发明属于中医药领域，具体地说，本发明涉及一种具有抗抑郁活性的枸杞多糖及其制备方法与应用。
背景技术
枸杞子为茄科植物宁夏枸杞Lycium barbarum L.的干燥成熟果实。现代药理学研究报道，枸杞子中含有多糖、黄酮、香豆素、酚酸、生物碱、氨基酸等多种活性成分，具有滋肾、润肺、补肝、明目功效，治肝肾阴亏，腰膝酸软，头晕，目眩，目昏多泪，虚劳咳嗽，消渴，遗精等症。
目前，关于枸杞多糖也有一定的研究，大部分是集中在枸杞多糖提高免疫力方面的研究。目前还没有关于枸杞多糖用于抗抑郁症方面的研究。
另外现有技术也有较多的枸杞多糖的提取工艺的研究，但是大多采用水提醇沉和色谱材料分离得到。消化是机体代谢和营养物质吸收的关键步骤，将枸杞多糖进行体外模拟胃肠道消化，可以更简单有效的评估其营养价值和应用价值。然而，目前还没有模拟人体胃肠道消化后枸杞多糖的相关研究报道。
因此，本发明采用体外模拟胃肠消化的方法对枸杞子多糖进行提取，筛选其潜在的活性，开发其新的临床用途。
发明内容
发明目的：本发明的目的是基于枸杞子目前的已有研究，采用体外模拟胃肠消化的方法对枸杞子多糖进行提取酶解消化，并筛选其潜在的抗抑郁的活性，开发其新的临床用途，安全性好，具有重要的意义。
技术方案：为了实现以上目的，本发明采用的技术方案为：
一种具有抗抑郁活性的枸杞多糖，它是由下列方法制备得到的：
(1)枸杞粗多糖的提取
取枸杞子加水，回流提取，过滤，合并滤液，减压浓缩，浓缩液加入无水乙醇，边加边快速搅拌，静置过夜，弃上清液，沉淀冻干，得枸杞粗多糖；
(2)体外模拟胃肠消化枸杞多糖产物
取步骤(1)枸杞粗多糖，溶解于水中，用HCl调pH至强酸性，加入胃蛋白酶，混匀，置于恒温振荡器中水浴酶解；再用NaOH调pH至弱碱性，加入胰蛋白酶，混匀，水浴酶解；然后沸水浴终止反应，冷却至室温，酶解液离心，收集上清液，冻干，得枸杞多糖产物。
作为优选方案，以上所述的一种具有抗抑郁活性的枸杞多糖，它是由下列方法制备得到的：
(1)枸杞粗多糖的提取
取枸杞子药材按固液比1:6～12，加入蒸馏水，回流提取1～3次，每次1～3h，过滤，合并滤液，减压浓缩，浓缩液加入无水乙醇，边加边快速搅拌，至浓缩液中乙醇浓度为70％～80％，静置过夜，弃上清液，沉淀冻干，得枸杞粗多糖。
(2)体外模拟胃肠消化枸杞多糖产物
取步骤(1)枸杞粗多糖，按固液比1:6～12溶解于37℃的双蒸水中，用0.5～1MHCl调pH至2.0～3.0，加入5～10％质量浓度的胃蛋白酶，混匀，置于恒温振荡器中水浴酶解2～3h；再用0.5～1MNaOH调pH至7～8，加入5～10％质量浓度的胰蛋白酶，混匀，37℃水浴酶解2～4h；沸水浴终止反应，冷却至室温，酶解液低温离心10～30min，收集上清液，冻干，得体外模拟胃肠消化枸杞多糖产物。
作为优选方案，以上所述的一种具有抗抑郁活性的枸杞多糖，它是由下列方法制备得到的：
(1)枸杞粗多糖的提取
取枸杞子药材按固液比1:10，加入蒸馏水，回流提取2次，每次2h，两层纱布过滤，合并滤液，65℃减压浓缩，浓缩液加入无水乙醇，边加边快速搅拌，至浓缩液中乙醇浓度为80％，静置过夜，弃上清液，沉淀冻干，得枸杞粗多糖；
(2)体外模拟胃肠消化枸杞多糖产物
取步骤(1)枸杞粗多糖，按质量体积比1:10溶解于37℃的双蒸水中，用1MHCl调pH至2.0，加入质量浓度5％的胃蛋白酶，混匀，置于恒温振荡器中37℃水浴酶解2h；再用1MNaOH调pH至7.5，加入质量浓度5％胰蛋白酶，混匀，37℃水浴酶解4h；沸水浴10min终止反应，冷却至室温，酶解液4℃离心10min，收集上清液，冻干，得体外模拟胃肠消化枸杞多糖产物。
本发明通过实验发现，制备得到的枸杞多糖具有抗抑郁活性，可用途制备抗抑郁活性的药物。
本发明可将枸杞多糖与药学上可接受的载体制备成片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、散剂、膏剂、合剂、口服液或注射剂等常规的中药制剂。
一种具有抗抑郁活性的药物，本发明制备得到的枸杞多糖。
有益效果：
本发明深入研究枸杞子中潜在的多糖类成分，但是大分子多糖类成分吸收性较差，目前不同方法制备得到的多糖，其分子量和结构不一样，潜在的药理活性也是难以预期的。本发明首先通过常规的水提醇沉后，得到枸杞粗多糖，然后再用胃蛋白酶和胰蛋白酶联合进行酶解消化的工艺，制备得到一定分子量的酶解后的枸杞糖类成分，并通过实验发现其具有很好的防治抑郁症的功效，本发明的酶解消化工艺，绿色环保，无化学污染，且枸杞为药食两用的药材，老少皆宜，安全性好。
附图说明
图1是抗抑郁模型中蔗糖偏好率柱状比较图。
图2是枸杞多糖LBP-1抗抑郁活性评价柱状结果图。
图3是枸杞多糖LBP-2抗抑郁活性评价柱状结果图。
具体实施方式
下面结合具体实施对本发明作进一步阐述，但这些实施例不应解释为限制本发明。
实施例1
(1)枸杞粗多糖的提取
取枸杞子药材按固液比1:10，加入蒸馏水，回流提取2次，每次2h，两层纱布过滤，合并滤液，65℃减压浓缩，浓缩液加入无水乙醇，边加边快速搅拌，至浓缩液中乙醇浓度为80％，静置过夜，弃上清液，沉淀冻干，得枸杞粗多糖；
(2)体外模拟胃肠消化枸杞多糖产物
取步骤(1)枸杞粗多糖，按质量体积比1:10溶解于37℃的双蒸水中，用1MHCl调pH至2.0，加入质量浓度5％的胃蛋白酶，混匀，置于恒温振荡器中37℃水浴酶解2h；再用1MNaOH调pH至7.5，加入质量浓度5％胰蛋白酶，混匀，37℃水浴酶解4h；沸水浴10min终止反应，冷却至室温，酶解液4℃离心10min，收集上清液，冻干，得体外模拟胃肠消化枸杞多糖产物(LBP-1)。
实施例2
一种具有抗抑郁活性的枸杞多糖，它是由下列方法制备得到的：
(1)枸杞粗多糖的提取
取枸杞子药材按固液比1:10，加入蒸馏水，回流提取2次，每次2h，两层纱布过滤，合并滤液，65℃减压浓缩，浓缩液加入无水乙醇，边加边快速搅拌，至浓缩液中乙醇浓度为80％，静置过夜，弃上清液，沉淀冻干，得枸杞粗多糖；
(2)体外模拟胃肠消化枸杞多糖产物
取步骤(1)枸杞粗多糖，按质量体积比1:10溶解于37℃的双蒸水中，用1MHCl调pH至2.0，加入质量浓度5％的胃蛋白酶，混匀，置于恒温振荡器中37℃水浴酶解2h；沸水浴10min终止反应，冷却至室温，酶解液4℃离心10min，收集上清液，冻干，得体外模拟胃肠消化枸杞多糖产物(LBP-2)。
实施例3抗抑郁药效评价
1、动物分组及给药
实验动物随机分为空白对照组(Control)、慢性应激模型组(CUMS)、LBP-1给药低剂量组(L-LBP-1，40mg/kg)、中剂量组(M-LBP-1，80mg/kg)、高剂量组(H-LBP-1，160mg/kg)、给药低剂量组(L-LBP-2，40mg/kg)、中剂量组(M-LBP-2，80mg/kg)、高剂量组(H-LBP-2，160mg/kg)以及阳性药对照组(艾司西酞普兰，ESC，5mg/kg)，每组12只。
2、实验方法
2.1慢性不可预知抑郁模型建立：适应性饲养1周，除空白对照组外，其余各组均采用日间应激源和夜间应激源连续2周诱导建立小鼠抑郁症模型。日间应激源包括：寒冷(4℃，1h)；强迫游泳(4℃，10min)；束缚(1h)；夹尾(1min)；禁食禁水(24h)；空间拥挤(3h)；不定向摇晃鼠笼(10min)。夜间应激源包括：潮湿垫料(12h)；持续光照(12h)；无垫料(12h)；倾斜鼠笼(倾斜角度45°，12h)；闪烁灯光(12h)。单笼饲养的小鼠每天暴露在随机选择的非重复日间应激源和夜间应激源中。
2.2糖水偏好测试(SPT)：造模2周和给药2周后分别测试1次，所有小鼠禁食禁水12h，统一单笼饲养，每只小鼠给予一瓶1％蔗糖溶液和一瓶纯水，继续禁食，中途交换糖水瓶和纯水瓶位置，记录12h内蔗糖消耗量和纯水消耗量，计算蔗糖偏好。
2.3旷场测试(OFT)：连续给药2周后进行测试，测试前小鼠适应测试环境1h，利用ANY-maze软件划分敞箱区间和中心区域、设置比例尺、小鼠颜色及测试时间，摄像机开启视频记录功能，记录下5min内小鼠的自主移动过程。
2.4悬尾测试(TST)：连续给药2周后进行测试，测试前小鼠适应测试环境1h，用医用胶带将小鼠尾巴末端1cm处粘在30cm高的悬尾箱挂钩上，保持6min。摄像机记录小鼠活动状态，Any-Maze软件记录并分析每只小鼠最后4min期间的不动时间。
2.5强迫游泳测试(FST)：连续给药2周后进行测试，将小鼠放入高28cm、直径15cm的玻璃容器中，测试前小鼠适应测试环境1h，适应时间结束后取出小鼠，向烧杯内注入23-25℃的纯水，使水深达12cm，放入小鼠，立即开启Any-Maze软件开始摄像记录小鼠游泳状态6min，统计分析后4min的不动时间。
3、实验结果
(1)抗抑郁模型建立：造模2周后进行SPT试验，结果见图1，由图1可知，模型组(CUMS)蔗糖偏好率显著低于空白对照组(p＜0.01)，表明模型组小鼠快感缺失，抑郁症模型建立。
(2)体外模拟胃肠消化枸杞多糖产物(LBP)抗抑郁活性评价
模型建立后，按照分组和给药设置，给药组和阳性药组给予相应剂量的药物，空白组和模型组给予等量生理盐水，连续给药2周后进行OFT、SPT、TST和FST试验，结果见图2和图3。
SPT测试结果显示(图2A和3A)，体外模拟胃肠道消化枸杞多糖产物LBP-1灌胃给药2周能够显著提高CUMS诱导抑郁小鼠的糖水偏好率(p＜0.05)。与CUMS组相比，LBP-1中剂量和高剂量给药组的糖水偏好率与阳性药显示出相同的作用，均达到极显著水平(p＜0.01)，表明枸杞多糖产物LBP-1灌胃给药具有一定的抗抑郁作用。相比而言枸杞多糖产物LBP-1比枸杞多糖产物LBP-2效果更明显。
OFT测试结果显示(图2B和3B)，与CUMS组相比，不同剂量的LBP-1和LBP-2给药组以及阳性药组(ESC)小鼠的活动总路程均无显著差异(p＞0.05)，表明LBP-1和LBP-2灌胃给药对小鼠的自主活动行为无显著影响，药物无中枢兴奋或抑制作用。
TST测试结果显示(图2C和3C)，与空白对照组相比，CUMS组小鼠的悬尾不动时间极显著延长(p＜0.01)，表明模型建立成功。给予不同剂量的枸杞多糖产物LBP-1和枸杞多糖产物LBP-2灌胃2周后，与CUMS组相比，各给药剂量组小鼠的TST不动时间显著缩短，其中LBP-1的中剂量组和高剂量组小鼠的TST不动时间与阳性药组(ESC)作用一致，均达到极显著水平(p＜0.01)，表明LBP-1具有较好的抗抑郁作用。相比而言枸杞多糖产物LBP-1比枸杞多糖产物LBP-2效果更明显。
FST测试结果显示(图2D和3D)，与空白对照组相比，CUMS组小鼠FST不动时间极显著延长(p＜0.01)，表明模型建立成功。给予不同剂量的枸杞多糖产物LBP-1和枸杞多糖产物LBP-2灌胃2周后，与CUMS组相比，各剂量组小鼠的FST不同时间均有缩短，其中LBP-1中剂量组和高剂量组达到极显著水平，与阳性药组(ESC)作用一致(p＜0.01)，表明LBP-1具有一定的抗抑郁作用。相比而言枸杞多糖产物LBP-1比枸杞多糖产物LBP-2效果更明显。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种具有抗抑郁活性的枸杞多糖，其特征在于，它是由下列方法制备得到的：
(1)枸杞粗多糖的提取
取枸杞子加水，回流提取，过滤，合并滤液，减压浓缩，浓缩液加入无水乙醇，边加边快速搅拌，静置过夜，弃上清液，沉淀冻干，得枸杞粗多糖；
(2)体外模拟胃肠消化枸杞多糖产物
取步骤(1)枸杞粗多糖，溶解于水中，用HCl调pH至强酸性，加入胃蛋白酶，混匀，置于恒温振荡器中水浴酶解；再用NaOH调pH至弱碱性，加入胰蛋白酶，混匀，水浴酶解；然后沸水浴终止反应，冷却至室温，酶解液离心，收集上清液，冻干，得枸杞多糖产物。
2.根据权利要求1所述的一种具有抗抑郁活性的枸杞多糖，其特征在于，它是由下列方法制备得到的：
(1)枸杞粗多糖的提取
取枸杞子药材按固液比1:6～12，加入蒸馏水，回流提取1～3次，每次1～3h，过滤，合并滤液，减压浓缩，浓缩液加入无水乙醇，边加边快速搅拌，至浓缩液中乙醇浓度为70％～80％，静置过夜，弃上清液，沉淀冻干，得枸杞粗多糖。
(2)体外模拟胃肠消化枸杞多糖产物
取步骤(1)枸杞粗多糖，按固液比1:6～12溶解于37℃的双蒸水中，用0.5～1MHCl调pH至2.0～3.0，加入5～10％质量浓度的胃蛋白酶，混匀，置于恒温振荡器中水浴酶解2～3h；再用0.5～1MNaOH调pH至7～8，加入5～10％质量浓度的胰蛋白酶，混匀，37℃水浴酶解2～4h；沸水浴终止反应，冷却至室温，酶解液低温离心10～30min，收集上清液，冻干，得体外模拟胃肠消化枸杞多糖产物。
3.根据权利要求1所述的一种具有抗抑郁活性的枸杞多糖，其特征在于，它是由下列方法制备得到的：
(1)枸杞粗多糖的提取
取枸杞子药材按固液比1:10，加入蒸馏水，回流提取2次，每次2h，两层纱布过滤，合并滤液，65℃减压浓缩，浓缩液加入无水乙醇，边加边快速搅拌，至浓缩液中乙醇浓度为80％，静置过夜，弃上清液，沉淀冻干，得枸杞粗多糖；
(2)体外模拟胃肠消化枸杞多糖产物
取步骤(1)枸杞粗多糖，按质量体积比1:10溶解于37℃的双蒸水中，用1MHCl调pH至2.0，加入质量浓度5％的胃蛋白酶，混匀，置于恒温振荡器中37℃水浴酶解2h；再用1M NaOH调pH至7.5，加入质量浓度5％胰蛋白酶，混匀，37℃水浴酶解4h；沸水浴10min终止反应，冷却至室温，酶解液4℃离心10min，收集上清液，冻干，得体外模拟胃肠消化枸杞多糖产物。
4.权利要求1～3任一项所述的枸杞多糖在制备抗抑郁活性的药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，将枸杞多糖与药学上可接受的载体制备成片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、散剂、膏剂、合剂、口服液或注射剂。
6.一种具有抗抑郁活性的药物，其特征在于，它包括权利要求1～3任一项所述的枸杞多糖。
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