CN117683069A - 从甜叶菊母液中获得莱鲍迪苷f和莱鲍迪苷u的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了从甜叶菊母液中获得莱鲍迪甙F和莱鲍迪甙U的制备方法，包括以下步骤：(1)取甜菊叶母液，加入30％双氧水，调节pH至8‑9，回流提取30‑60min，冷却至常温，过大孔树脂，分级洗脱，55‑65％乙醇洗脱，收集洗脱液；(2)洗脱液回收溶剂后过离子交换树脂柱，收集流出液，浓缩后加入低温无水甲醇搅拌均匀，过滤，得滤液和沉淀；(3)对所述滤液进行甲醇重结晶获得莱鲍迪甙F；(4)对所述沉淀进行重结晶处理获得莱鲍迪甙U。本发明提供的制备方法，能够有效地从甜菊糖母液中分离莱鲍迪甙F和莱鲍迪甙U。产品中的莱鲍迪甙F和莱鲍迪甙U分别含量大于95％。
Description
技术领域
本发明涉及甜叶菊有效成分的提取方法，特别涉及从甜叶菊母液中获得莱鲍迪甙A和莱鲍迪甙C的制备方法。
背景技术
甜叶菊(Stevia rebaudiana Bertoni)又称甜草、甜菊等，原产于巴拉圭、巴西等国家，其叶含有甜菊糖苷，甜菊糖苷是一种高甜度、低热量的新型天然甜味剂，主要是从菊科植物甜叶菊的叶子中提取的几种甜叶菊糖苷的混合物，例如甜菊苷(Stevioside)、莱鲍迪苷C(Rebaudioside C,RC)、莱鲍迪苷A(Rebaudioside A,RA)、莱鲍迪苷F(RebaudiosideF,RF)、莱鲍迪苷U(Rebaudioside U,RU)和甜茶苷(Rubusoside)。甜菊糖苷属于天然低热量的高倍甜味剂，其甜度是蔗糖的200-300倍，而热量仅为蔗糖的1/250左右，受到了科学界、产业界等多个领域的广泛重视，其中含量相对丰富的甜菊糖、莱鲍迪苷A(RA)等已广泛应用于饮料、食品、调味剂、酒类、乳制品等食品加工领域。目前市售的甜叶菊产品主要以STV，RA为主，以RC、RF和RU为主的产品较少，开发出RC为主的产品将会满足更多的社会需求。
发明内容
本发明提供一种从甜叶菊母液中获得莱鲍迪甙F和莱鲍迪甙U的制备方法。
本发明提供的技术方案是：从甜叶菊母液中获得莱鲍迪甙F和莱鲍迪甙U的制备方法，包括以下步骤：
(1)取甜菊叶母液，加入30％双氧水，调节pH至8-9，回流提取30-60min，冷却至常温，过大孔树脂，分级洗脱，55-65％乙醇洗脱，收集洗脱液；
(2)洗脱液回收溶剂后过离子交换树脂柱，收集流出液，浓缩后加入低温无水甲醇搅拌均匀，过滤，得滤液和沉淀；
(3)对所述滤液进行甲醇重结晶获得莱鲍迪甙F；
(4)对所述沉淀进行重结晶处理获得莱鲍迪甙U。
所述步骤(1)的甜菊叶母液为纯水溶解甜菊叶母液干粉获得，其中纯水为甜菊叶母液干粉的4-6倍量。
所述步骤(1)中的常温是指温度为24-30℃。
所述步骤(1)中的大孔树脂为大孔LX-19树脂。大孔树脂与甜菊叶母液之间的质量比为5-6﹕1。
所述步骤(1)中的分级洗脱为先25-35％乙醇洗脱，后55-65％乙醇洗脱。
所述步骤(2)中，离子交换树脂柱中，上层为阳离子交换树脂，下层为阴离子树脂。阳离子交换树脂和阴离子树脂之间的质量比为1-3:2-4。
所述步骤(2)中，洗脱液浓缩成浓缩液后加入低于0℃的无水甲醇，无水甲醇为浓缩液体积的0.5-1倍量。
所述步骤(3)中，滤液浓缩，烤干后，加入3-4倍的甲醇，常温结晶8-12小时，抽滤，洗涤，烘干，得莱鲍迪甙F晶体。
所述步骤(4)中，沉淀完全溶解于50％乙醇中，0-5℃放置结晶6-10小时，抽滤，甲醇洗涤，烘干，得莱鲍迪甙U晶体。
本发明具有以下优点：
1.本发明提供的制备方法，能够有效地从甜菊糖母液中分离莱鲍迪甙F和莱鲍迪甙U。产品中的莱鲍迪甙F和莱鲍迪甙U分别含量大于95％。
2.本发明提供的制备方法采用先氧化去除大量的杂质，再用树脂纯化获得高含量样品。全程只用到少量的溶剂。污染少，过程好控制。适合大生产。
3.本发明提供的制备方法，充分从甜叶菊母液糖中获得纯度大于95％莱鲍迪甙F和莱鲍迪甙U样品。对于有效的处理了甜叶菊母液糖的产品，可以间接的节约甜叶菊生产成本。
4.本发明提供的制备方法，产品溶剂残留少，无农药残留，很好的满足市场对其规格需求。同时本方法大大减少了生产工序，节约生产成本，工艺稳定性好。
附图说明
图1是实施例一的RU的HPLC图谱。
图2是实施例一的RF的HPLC图谱。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明。
实施例一
(1)取1KG甜叶菊母液干粉(50％总苷，RF 2％RU0.12％)，先用5000ML纯水溶解完全。加入5ML的30％双氧化水，用20％NAOH调PH为8.5，回流30min，放冷到常温25℃，进大孔5KGLX-19树脂，分级洗脱，先用30％洗脱15000ML，再用60％乙醇洗脱50L，分两段收集，前面收集0-30L，后段为30L-50L，收集高浓度后段洗脱液。
(2)高浓度后段洗脱液回收乙醇溶剂，过离子交换树脂1KG，离子交换树脂层为阳离子树脂D111，下层为阴离子树脂D945，阳离子树脂D111和阴离子树脂D945混合的质量比为1.5:2.5，收集流出液，浓缩到300ML。先加入300ML纯的低温无水甲醇(小于0℃)，搅拌均匀，抽滤，得滤液和沉淀。
(3)滤液浓缩，烤干，加入10ML的甲醇，常温结晶8小时，抽滤晶体，烤干，样品经HPLC检测，确定为RF。RF含量为95.8％以上，收率为1.6％。
(4)其二沉淀再200ML的50％乙醇溶解完全，2℃低温放置结晶6小时，用10ML的纯甲醇洗晶体，烤干，样品经HPLC检测，确定为RU。RU含量为95.6％以上，收率为1‰。
实施例二
(1)取1KG甜叶菊母液干粉(50％总苷，RU0.12％)，先用5000ML纯水溶解完全。加入5ML的30％双氧化水，用20％NAOH调PH为8.5，回流60min，放冷到常温25℃，进大孔5KGLX-19树脂，分级洗脱，先用35％洗脱15000ML，再用65％乙醇洗脱50L，分两段收集，前面收集0-30L，后段为30L-50L，收集高浓度后段洗脱液。
(2)高浓度后段洗脱液回收乙醇溶剂，过离子交换树脂1KG，离子交换树脂层为阳离子树脂D111，下层为阴离子树脂D945，阳离子树脂D111和阴离子树脂D945混合的质量比为1:2，收集流出液，浓缩到300ML。先加入300ML纯的低温无水甲醇(小于0℃)，搅拌均匀，抽滤，得滤液和沉淀。
(3)滤液浓缩，烤干，加入10ML的甲醇，常温结晶12小时，抽滤晶体，烤干，样品经HPLC检测，确定为RF。RF含量为95.1％以上，收率为1.65％。
(4)其二沉淀再200ML的50％乙醇溶解完全，2℃低温放置结晶10小时，用10ML的纯甲醇洗晶体，烤干，样品经HPLC检测，确定为RU。RU含量为95.25％以上，收率为1.05‰。
实施例三
(1)取1KG甜叶菊母液干粉(50％总苷，RU0.12％)，先用5000ML纯水溶解完全。加入5ML的30％双氧化水，用20％NAOH调PH为8.5，回流45min，放冷到常温25℃，进大孔5KGLX-19树脂，分级洗脱，先用35％洗脱15000ML，再用65％乙醇洗脱50L，分两段收集，前面收集0-30L，后段为30L-50L，收集高浓度后段洗脱液。
(2)高浓度后段洗脱液回收乙醇溶剂，过离子交换树脂1KG，离子交换树脂层为阳离子树脂D111，下层为阴离子树脂D945，阳离子树脂D111和阴离子树脂D945混合的质量比为3:4，收集流出液，浓缩到300ML。先加入300ML纯的低温无水甲醇(小于0℃)，搅拌均匀，抽滤，得滤液和沉淀。
(3)滤液浓缩，烤干，加入10ML的甲醇，常温结晶8小时，抽滤晶体，烤干，样品经HPLC检测，确定为RF。RF含量为95.2％以上，收率为1.7％。
(4)其二沉淀再200ML的50％乙醇溶解完全，2℃低温放置结晶8小时，用10ML的纯甲醇洗晶体，烤干，样品经HPLC检测，确定为RU。RU含量为95.3％以上，收率为1.04‰。
Claims (10)
1.从甜叶菊母液中获得莱鲍迪甙F和莱鲍迪甙U的制备方法，其特征是，包括以下步骤：
(1)取甜菊叶母液，加入30％双氧水，调节pH至8-9，回流提取30-60min，冷却至常温，过大孔树脂，分级洗脱，55-65％乙醇洗脱，收集洗脱液；
(2)洗脱液回收溶剂后过离子交换树脂柱，收集流出液，浓缩后加入低温无水甲醇搅拌均匀，过滤，得滤液和沉淀；
(3)对所述滤液进行甲醇重结晶获得莱鲍迪甙F；
(4)对所述沉淀进行重结晶处理获得莱鲍迪甙U。
2.根据权利要求1所述的从甜叶菊母液中获得莱鲍迪甙F和莱鲍迪甙U的制备方法，其特征是，所述步骤(1)的甜菊叶母液为纯水溶解甜菊叶母液干粉获得，其中纯水为甜菊叶母液干粉的4-6倍量。
3.根据权利要求1所述的从甜叶菊母液中获得莱鲍迪甙F和莱鲍迪甙U的制备方法，其特征是，所述步骤(1)中的常温为24-30℃。
4.根据权利要求1所述的从甜叶菊母液中获得莱鲍迪甙F和莱鲍迪甙U的制备方法，其特征是，所述步骤(1)中的大孔树脂为大孔LX-19树脂。大孔树脂与甜菊叶母液之间的质量比为5-6﹕1。
5.根据权利要求1所述的从甜叶菊母液中获得莱鲍迪甙F和莱鲍迪甙U的制备方法，其特征是，所述步骤(1)中的分级洗脱为先25-35％乙醇洗脱，后55-65％乙醇洗脱。
6.根据权利要求1所述的从甜叶菊母液中获得莱鲍迪甙F和莱鲍迪甙U的制备方法，其特征是，所述步骤(2)中，离子交换树脂柱中，上层为阳离子交换树脂，下层为阴离子树脂。
7.根据权利要求6所述的从甜叶菊母液中获得莱鲍迪甙F和莱鲍迪甙U的制备方法，其特征是，阳离子交换树脂和阴离子树脂之间的质量比为1-3:2-4。
8.根据权利要求1所述的从甜叶菊母液中获得莱鲍迪甙F和莱鲍迪甙U的制备方法，其特征是，所述步骤(2)中，洗脱液浓缩成浓缩液后加入低于0℃的无水甲醇，无水甲醇为浓缩液体积的0.5-1倍量。
9.根据权利要求1所述的从甜叶菊母液中获得莱鲍迪甙F和莱鲍迪甙U的制备方法，其特征是，所述步骤(3)中，滤液浓缩，烤干后，加入3-4倍的甲醇，常温结晶8-12小时，抽滤，洗涤，烘干，得莱鲍迪甙F晶体。
10.根据权利要求1所述的从甜叶菊母液中获得莱鲍迪甙F和莱鲍迪甙U的制备方法，其特征是，所述步骤(4)中，沉淀完全溶解于50％乙醇中，0-5℃放置结晶6-10小时，抽滤，甲醇洗涤，烘干，得莱鲍迪甙U晶体。
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