CN117658985A - Ulk1和parp1双靶点抑制剂 - Google Patents

Ulk1和parp1双靶点抑制剂 Download PDF

Info

Publication number
CN117658985A
CN117658985A CN202211046925.0A CN202211046925A CN117658985A CN 117658985 A CN117658985 A CN 117658985A CN 202211046925 A CN202211046925 A CN 202211046925A CN 117658985 A CN117658985 A CN 117658985A
Authority
CN
China
Prior art keywords
substituted
alkyl
compound
unsubstituted
ring
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202211046925.0A
Other languages
English (en)
Inventor
校登明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanjing Gentai Pharmaceutical Technology Co ltd
Original Assignee
Nanjing Gentai Pharmaceutical Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanjing Gentai Pharmaceutical Technology Co ltd filed Critical Nanjing Gentai Pharmaceutical Technology Co ltd
Priority to CN202211046925.0A priority Critical patent/CN117658985A/zh
Publication of CN117658985A publication Critical patent/CN117658985A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明涉及式I结构的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、酯、光学异构体或前药，包含式I结构的化合物的药物组合物及其作为ULK1及PARP1双靶点抑制剂在抗肿瘤药物的用途。

Description

ULK1和PARP1双靶点抑制剂
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种ULK1和PARP1双靶点抑制剂。
背景技术
聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)是存在于多数真核细胞中的一个多功能蛋白质翻译后修饰酶，其家族共有18个亚型。其中，PARP-1占最大比例，在DNA损伤修复中起主要作用[Peraltaleal A,et al.,Free Radical Biology and Medicine 2009,47(1):13-26]。
在DNA损伤中，最严重的损伤是单链断裂(SSB)和双链断裂(DSB)，其中单链断裂更常见。这些断裂如果不能得到及时，准确的修复，会使得基因组变得不稳定，进而引起癌变，或直接导致细胞死亡。为了维持正常的生理功能，细胞有多种DNA损伤发现及修复机制。对于单链断裂的损伤的修复主要依赖于PARP，其中，PARP1发挥90％以上的功能[LangelierM,et al.,Nucleic Acids Research 2014,42(12):7762-7775]。对于双链断裂而言，发生情况虽少但后果严重，如不能及时修复，细胞DNA会变的不稳定，最终走向死亡。同源重组(HR)是DNA双链断裂修复的一种高保真，无错误的修复方式，参与这种修复的蛋白涉及BRCA,ATM,RAD51等。最为人熟知的是BRCA蛋白，携带家族遗传性BRCA1/2突变的人群发生恶性肿瘤的风险显著提高，特别在乳腺癌和卵巢癌。BRCA1/2是双链断裂同源重组修复的关键蛋白。BRCA1/2突变导致DNA双链断裂修复受阻，引起基因组不稳定，继而引发癌症。由于细胞的生存机制，双链断裂修复受阻会使得细胞更依赖于PARP主导的单链断裂修复。相比于BRCA功能完善的肿瘤细胞，BRCA缺失的肿瘤细胞对PARP抑制剂的敏感性是前者的100倍。PARP抑制剂在BRCA缺失的癌症患者中的成功应用是DNA损伤修复应答(DDR)中“合成致死”的典型案例[Bryant H E.,Nature 2005,434(7035):913-917；Farmer H,et al.,Nature2005,434(7035):917-921]。目前，已成功上市的PARP抑制剂包括Olaparib、Rucaparib、Niraparib和Talazoparib。
自噬是一种保守的细胞内降解过程，决定哪些细胞器、蛋白质和入侵微生物被溶酶体降解。这种保守的过程在细胞对营养缺乏和其他压力，除了需要适当的细胞和组织胚胎发育过程中的稳态和防御病原体。自噬途径的缺陷与某些人类病理学有关，包括传染病、神经退行性疾病和癌症。
自噬是通过ULK预启动复合物启动的多步骤途径，预启动复合物由unc-51-like自噬激活激酶1(ULK1)或其同源物ULK2，自噬相关蛋13(ATG13)、ATG101和粘着斑激酶(FAK)家族相互作用蛋白(FIP200)组成[Hosokawa N.,et al.,Autophagy 2009,5:973-979；GanleyI G,et al.,J Biol Chem 2009,5:973-979]。自噬在压力条件下通过AMPK激活和非压力条件下由mTOR来抑制.[Laplante M,et al.,Cell 2012,149:274-293]。AMPK通过两种机制激活自噬：首先，通过磷酸化mTOR复合成分raptor和TSC2抑制mTOR活性；其次，通过直接磷酸化ULK1/2的N端的多个位点到mTOR磷酸化位点，激活ULK1/2。相反，mTOR通过直接磷酸化和抑制ULK1/2功能来抑制自噬。
作为自噬信号通路唯一的丝氨酸/苏氨酸激酶，ULK1/2在自噬中通过磷酸化ULK1/2预启动复合体中三种蛋白质(ATG13、ATG101和FIP200)9-11和下游的Beclin1启动蛋白质复合体(Beclin1、VPS34、ATG9和ATG16L1)的蛋白发挥关键作用[Papinski D,et al.,Mol.Cell 2014,53:471-483；Papinski D,et al.,J Mol Biol 2016,428:1725-1741；EganD,et al.,Mol Cell 2015,59:285-297；Alsaadi R,EMBO Rep.2019,20:No.e46885]。
敲除ULK1或使用小分子ULK1抑制剂能有效抑制自噬，引发凋亡，抑制肿瘤细胞生长[Si-Tu Xue,et al.,Autophagy 2020,16(10):1823-1837；Huiyu R,et al.,J.Med.Chem.2020,63:14609-14625]。
Parp1抑制剂诱导自噬是造成Parp1抑制剂原发耐药的主要原因，联合使用Parp1抑制剂与自噬抑制剂在不同的肿瘤中表现出很强的协同抗癌作用[Pai Bellare G,etal.,Cancer 2021,124:1260-1274；Fu X T,et al.,Cancer Cell Int.2019,19:71；Luo T,et al.,Autophagy 2016,12:1355-1371；Lu S,et al.,Cell Death Dis.2018,9:646；LiuY,et al.,AMB Expr 2019,9:108；Janice M S-O,et al.,Cancer 2020,126:894-907]。
因此，开发一种能同时抑制ULK1和Parp1的双靶点抑制剂，将能提供一种新型、安全、有效的抗癌新药。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供新颖的、未见文献报道的ULK1和PARP1双靶点抑制剂的化合物，其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、酯、光学异构体或前药，所述化合物在制药中的用途以及使用本发明化合物预防或治疗人或哺乳动物与ULK1及PARP1异常活性相关疾病的方法。
为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案是：
式I的化合物
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、酯、光学异构体或前药，其中，
m、n分别独立地选自0、1、2或3；
优选地，m、n分别独立地选自1或2；
R1为H、卤素、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、羟基取代C1-6烷基、烷氧基取代C1-6烷基、C3-6环烷基、卤代C3-6环烷基或C3-6杂环烷基；
优选地，R1为卤素、C1-3烷基、卤代C1-3烷基、C3-6环烷基或C3-6杂环烷基；
更优选地，R1选自三氟甲基，卤素，环丙烷；
进一步优选地，R1选自三氟甲基。
R2为其中，A环选自取代或非取代的5-6元芳环、取代或非取代的5-6元杂芳环，或取代或非取代的5-6元杂环；其中，所述A环中取代的5-6元芳环、取代的5-6元杂芳环和取代的5-6元杂环中的取代基各自独立选自卤素、氰基、羟基、氨基、单(C1-3烷基)胺基、双(C1-3烷基)胺基、C1-3烷基、卤代C1-3烷基、C1-3烷氧基，或卤代C1-3烷氧基；
优选地，R2为其中，A环选自取代或非取代的6元芳环、取代或非取代的6元杂芳环，或取代或非取代的6元杂环；其中，所述A环中取代的6元芳环、取代的6元杂芳环和取代的6元杂环中的取代基各自独立选自卤素、氰基、羟基、氨基、单(C1-3烷基)胺基、双(C1-3烷基)胺基、C1-3烷基、卤代C1-3烷基、C1-3烷氧基，或卤代C1-3烷氧基；
更优选地，A环选自取代或非取代的苯环、取代或非取代的吡啶环，或取代或非取代的四氢吡啶环；其中，所述A环中取代的苯环、取代的吡啶环和取代的四氢吡啶环中的取代基各自独立选自卤素、氰基、羟基、氨基、单(C1-3烷基)胺基、双(C1-3烷基)胺基、C1-3烷基、卤代C1-3烷基、C1-3烷氧基，或卤代C1-3烷氧基；
进一步优选地，R2选自以下结构之一：
R3为-NR5R6、-NHNR5R6、-NR5OR6、-OR5、-ONR5R6或-SR5；其中，R5、R6各自独立地选自H、取代或非取代的C6-10芳基、取代或非取代的C3-9杂芳基、取代或非取代的C1-3烷基，取代或非取代的C3-8环烷基，或取代或非取代的C3-7杂环烷基；其中，所述R5、R6选取的取代的C6-10芳基、取代的C3-9杂芳基、取代的C1-3烷基，取代的C3-8环烷基和取代的C3-7杂环烷基中的取代基各自独立地选自卤素、氰基、羟基、氨基、单(C1-3烷基)胺基、双(C1-3烷基)胺基、C1-3烷基、卤代C1-3烷基、C1-3烷氧基，或卤代C1-3烷氧基；R5、R6及与之相连的N可以形成3-6元杂环；
优选地，R3为-NR5R6、-OR5，其中，R5、R6各自独立地选自H、取代或非取代的C6芳基、取代或非取代的C3-5杂芳基、取代或非取代的C1-3烷基、取代或非取代的C3-5环烷基，或取代或非取代的C3-5杂环烷基；其中，所述R5、R6选取的取代的C6芳基、取代的C3-5杂芳基、取代的C1-3烷基、取代的C3-5环烷基和取代的C3-5杂环烷基中的取代基各自独立地选自卤素、氰基、羟基、氨基、单(C1-3烷基)胺基、双(C1-3烷基)胺基、C1-3烷基、卤代C1-3烷基、C1-3烷氧基，或卤代C1-3烷氧基。R5、R6及与之相连的N可以形成3-6元杂环；
进一步优选地，R3选自以下结构之一：
X为CH或N；
优选的，所述化合物选自如下任一结构所示：
本发明进一步提出了以上任一项所述的化合物在制备预防或治疗与unc-51-like自噬激活激酶1(ULK1)和/或聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(Parp1)相关疾病的药物中的用途。
其中，所述与unc-51-like自噬激活激酶1(ULK1)和/或聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(Parp1)相关疾病为癌症，包括固体肿瘤和恶性血液肿瘤。
一种药物组合物，包含一种或多种以上任一项所述的化合物。
一种药物制剂，包含治疗有效量的以上任一项所述的化合物，以及在药学上可接受的赋形剂。
所述的药物制剂，其配制用于选自口服施用、肠胃外施用、口腔施用、鼻腔施用、局部施用或直肠施用的施用途径。
所述的药物制剂用于治疗与unc-51-like自噬激活激酶1(ULK1)和/或聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1)酶活性异常的疾病或状况，包括向需要的人或哺乳动物施用所述的药物制剂；所述与unc-51-like自噬激活激酶1(ULK1)和/或聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1)酶活性异常的疾病为癌症。
本发明包括将所述药物制剂与ULK1/PARP1接触的步骤，所述的接触步骤包括体外或者体内试验。
上述化合物I的制备方法：包括以下步骤：
步骤1(step1)：化合物A-1和化合物B(胺，羟胺，肼，醇或硫醇)进行亲核取代得到化合物A-2；
步骤2(step2)：化合物A-2与化合物C进行偶联生成化合物A-3；
步骤3(step3)：化合物A-3用盐酸脱BOC得到化合物A-4；
步骤4(step4)：化合物A-4与有机酸D偶合得到权利要求1中所述的化合物I；
其中m，n，R1，R2，R3，X如前所述。
上述方法中反应所得的每一个产物可以通过传统分离技术来得到，这种传统技术包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱分离等。合成所需要的起始原料可以自己合成或从商业机构购买获得，例如，但不限于，Adrich或Sigma。这些原料可以使用常规手段进行表征，比如物理常数和光谱数据。本发明所描述的化合物可以使用合成方法得到单一的光学异构体或者是光学异构体的混合物。
本发明中字母上标表示基团的标号，下标表示该原子的个数，例如：R1、R2、R3表示第1～3个R基团，C1-4烷基表示含1～4个C原子的烷基。取代基上C原子数不计算在主链中。
本申请提出的化合物对ULK1及PARP1均表现出很强的抑制作用，因此，这些化合物将对Parp1抑制剂诱导自噬而造成Parp1抑制剂原发耐药的很多肿瘤，如三阴乳腺癌，卵巢癌等表现良好的抑制作用。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1中间体M-7的合成。
中间体M-7的合成路线如下：
(1)(Z)7-(3-溴-4-氟苄叉)呋喃[3,4-b]吡啶-5(7H)-酮(M-3)的合成
向100ml三口瓶中加入化合物M-1(10g，67mmol，1.00eq)，化合物M-2(15.6g，67mmol，1.00eq)，醋酸钠(550mg，6.7mmol，0.1eq)升温至170℃，搅拌2h，取样点板(PE：EA＝1:1)，显示有新点(Rf-0.6)生成。将体系降温至室温，加入EA(200ml)溶解，拌样过柱，得产物M-3(2.7g，12.6％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ＝8.97-8.98(m,1H)；8.26-8.32(m,1H)；8.24-8.26(m,1H)；7.50-7.53(m,1H)；7.40-7.42(m,1H)；7.35(s,1H),7.11-7.17(m,1H)。
(2)8-(3-溴-4-氟苄基)吡啶并[3,2-d]哒嗪-5(6H)-酮(M-4)的合成。
向100ml三口瓶中加入化合物M-3(3.7g，11.56mmol，1.00eq)，水合肼(3.7ml，1V)，乙醇(37ml，10V)升温至70℃，搅拌过夜。取样点板(DCM：MeOH＝20:1)，显示原料(Rf＝0.8)已无剩余，有新点生成(Rf＝0.5)。将体系降温至室温，加入水(37ml)浓缩走乙醇后抽滤，烘干得类白色固体产物M-4(1.5g，38.9％)。1H NMR(400MHz,D6-DMSO)：δ＝12.79(s,1H)；9.16(m,1H)；8.53-8.60(m,1H)；7.84-7.88(m,1H)；7.65(s,1H)；7.35-7.37(m,1H),7.25-733(m,1H),4.38(s,2H)。
(3)2-氟-5-((5-氧代-5,6-二氢吡啶并[3,2-d]哒嗪-8-基)甲基)苯甲酸甲酯(M-5)的合成。
向100ml单口瓶中加入化合物M-4(1g，2.99mmol，1.00eq)，DMF(5ml，5V)，TEA(2ml，2V)，MeOH(5ml，5V)，Pd(OAc)2(100mg，0.1W)，Xantphos(100mg，0.1W)，CO置换，升温至100℃，搅拌过夜，取样HPLC检测，显示无原料剩余。将体系浓缩，后加入水(10ml)，(EA:THF＝1:1)(10ml)分液，有机相干燥浓缩过柱，得淡黄色固体产物M-5(0.6g，65％)。
(4)2-氟-5-((5-氧代-1,2,3,4,5,6-六氢吡啶[3,2-d]哒嗪-8-基)甲基)苯甲酸甲酯(M-6)的合成。
向100ml单口瓶中加入化合物M-5(0.5g，1.59mmol，1.00eq)，铂碳(0.1g，0.2W)，醋酸(1.5ml，3V)，四氢呋喃(5ml，10V)，N2置换后加入铂碳(0.1g，0.2W)，H2置换后升温至50℃，搅拌过夜。取样点板(DCM：MeOH＝20:1)，显示原料(Rf＝0.5)已无剩余，有新点生成(Rf＝0.3)。将体系降温至室温，铺硅藻土抽滤，THF洗滤饼，加入水(5ml)EA(5ml)，加入碳酸钠溶液，分液，有机相浓缩干燥，得白色固体产物M-6(0.4g，80％)。LC-MS m/z＝318.1[M+1]+
(5)2-氟-5-((5-氧代-1,2,3,4,5,6-六氢吡啶[3,2-d]哒嗪-8-基)甲基)苯甲酸(M-7)的合成。
向100ml三口瓶中加入化合物M-6(400mg，1.26mmol，1.00eq)，氢氧化锂一水合物(79.3mg，1.89mmol，1.5eq)，水(3.2ml，3V)，四氢呋喃(8ml，20V)50℃搅拌过夜。取样点板(DCM：MeOH＝10:1)，显示原料(Rf＝0.5)已无剩余，有新点生成(Rf＝0.2)。将体系降温至室温，加入水(5ml)EA(8ml)，分液，将水相用2M盐酸水溶液将Ph值调至1-2，此时体系中有固体析出，搅拌0.5h，抽滤得白色固体产物M-7(200mg，52.4％)。1H NMR(400MHz,d6-DMSO)：δ＝13.23(s,br,1H),11.86(s,1H),7.73-7.75(m,1H)；7.45-7.47(m,1H)；7.21-7.25(m,1H)；6.45(s,1H)；3.84(s,2H)；3.17(m,2H),2.32-2.35(m,2H),1.68-1.71(m,2H)。
实施例2化合物I-1的合成。
化合物I-1的合成路线：
(1)2-氯-N-环丙基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(A-2-1)的合成。
向化合物A-1-1(1.447g,6.7mmol)的甲醇溶液中在0℃下加入化合物B-1(649mg,11.3mmol)。混合液升温到室温，搅拌4小时，倒入水(50ml)中,用乙酸乙酯(2x10ml)萃取，有机相拥无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，剩余物通过柱色谱法用乙酸乙酯/石油醚＝1：20进行纯化，得到产物A-2-1(200mg,18.9％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ＝8.27(s,1H)；7.27(s,1H)；2.93-2.99(m,1H)；0.90-1.02(m,2H)；0.60-0.68(m,2H)。、
(2)6-(4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯A-3-1
化合物A-2-1(150mg,0.63mmol),化合物C-1(173mg,0.69mmol),Pd2dba3(58mg,0.063mmol),Xantphos(73mg,0.126mmol)和Cs2CO3(245mg,0.75mmol)在Dioxane(10ml)的混合溶液中在130℃下搅拌4小时，浓缩后，剩余物通过柱色谱法用乙酸乙酯/石油醚＝1:4--1:2进行纯化，得到产物A-3-1(157mg,55％).LC-MS m/z＝449.7[M+1]+。
(3)N4-环丙基-N2-(1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺(A-4-1)的合成。
向化合物A-3-1(150mg,0.334mmol)的乙醇(10ml)中加入HCl(4M的盐酸的二氧六环溶液,10ml),混合液在室温下搅拌过夜，浓缩，用NaOH溶液调pH＝8，用乙酸乙酯(2x10ml)萃取，有机相水洗，干燥，过滤，浓缩，真空干燥得定量的产物A-4-1直接用于下一步反应。LC-MS m/z＝349.7[M+1]+。
(4)4-(3-(6-(4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-羰基)-4-氟苄基)酞嗪-1(2H)-酮(I-1)的合成。
化合物A-4-1(14mg,0.04mmol),化合物M-7(12mg,0.04mmol),HATU(15mg,0.04mmol)和DIEA(10mg,0.08mmol)在DMF(1ml)溶液中在室温下搅拌2小时，倒入水(10ml)中，用乙酸乙酯萃取(2x10ml),有机相用饱和NaCl洗后，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，剩余物用柱色谱法用MeOH/DCM＝1：10进行纯化，得到产物I-1(10mg,40％).LC-MS m/z＝629.5[M+1]+
实施例3化合物I-2的合成。
化合物I-2的合成路线：
(1)8-(3-(6-(4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-羰基)-4-氟苄基)-1,2,3,4-四氢吡啶[3,2-d]哒嗪-5(6H)-酮(I-2)的合成。
化合物A-4-2(23mg,0.066mmol)、化合物M-7(20mg,0.066mmol),HATU(25mg,0.066mmol)和DIEA(17mg,0.13mmol)在DMF(2ml)溶液中在室温下搅拌2小时，倒入水(10ml)中,用乙酸乙酯萃取(2x10ml),有机相用饱和NaCl洗后，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，剩余物用柱色谱法用MeOH/DCM＝1：10进行纯化，得到产物I-2(20mg,48％)。LC-MS m/z＝635.6[M+1]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ＝11.1-10.9(m,1H),8.16(s,1H),7.73(m,1H),7.61(m,1H),7.28-7.20(m,2H),7.15-7.08(m,2H),6.82(m,1H),5.39(s,1H),4.88(s,1H),4.48(s,1H),4.20(m,1H),3.87-3.85(m,2H),3.73-3.71(m,1H),3.57(s,1H),3.22(s,2H),2.97(s,1H),2.87-2.85(m,2H),2.58-2.57(m,2H),1.45-1.35(m,2H),0.90-0.87(m,2H),0.65-0.64(m,2H)。
实施例4化合物I-3的合成。
化合物I-3的合成路线：
(1)5-(4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)异二氢吲哚-2-羧酸叔丁酯(A-3-2)的合成。
化合物A-2-1(355.5mg,1.5mmol),化合物C-2(386.6mg,1.65mmol),Pd2dba3(137.7mg,0.15mmol),Xantphos(172.8mg,0.3mmol)和Cs2CO3(585mg,1.8mmol)在Dioxane(10ml)的混合溶液中在130℃下搅拌4小时，冷却后过滤浓缩，剩余物通过柱色谱法用乙酸乙酯/石油醚＝1:3进行纯化，得到产物A-3-2(177.8mg,27％).LC-MS m/z＝436.1[M+1]+。
(2)N4-环丙基-N2-(异吲哚啉-5-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺(A-3-2)的合成。
向化合物A-3-2(20mg,0.046mmol)的乙酸乙酯(2ml)中加入HCl(4M的盐酸的乙酸乙酯溶液,4ml),混合液在室温下搅拌过夜，室温反应完全，抽滤出所得固体，使用石油醚洗涤固体3次，真空干燥得到固体A-4-2的盐酸盐，直接用于下一步反应。
(3)8-(3-(5-(4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)异吲哚啉-2-羰基)-4-氟苄基)-1,2,3,4-四氢吡啶并[3,2-d]哒嗪-5(6H)-酮(I-3)的合成。
上述反应所得化合物A-4-2盐酸盐,化合物M-7(17.94mg,0.059mmol),HATU(22.49mg,0.059mmol)和DIEA(15.27mg,0.12mmol)在DMF(2ml)溶液中在室温下搅拌2小时，倒入水(10ml)中，用乙酸乙酯萃取(3x10ml),有机相用饱和NaCl洗后，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，剩余物用柱色谱法纯化，得到产物I-3(16.5mg,45％).LC-MS m/z＝621.2[M+1]+
实施例5化合物I-4的合成。
化合物I-4的合成路线：
(1)7-(4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(A-3-3)的合成。
化合物A-2-1(355.5mg,1.5mmol),化合物C-3(409.2mg,1.65mmol),Pd2dba3(137.7mg,0.15mmol),Xantphos(172.8mg,0.3mmol)和Cs2CO3(585mg,1.8mmol)在Dioxane(10ml)的混合溶液中在130℃下搅拌4小时，冷却后过滤浓缩，剩余物通过柱色谱法用乙酸乙酯/石油醚＝1:3进行纯化，得到产物A-3-3(333.3mg,49.4％).LC-MS m/z＝450.2[M+1]+。
(2)N4-环丙基-N2-(1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺(A-4-3)的合成。
向化合物A-3-3(35mg,0.077mmol)的乙酸乙酯(2ml)中加入HCl(4M的盐酸的乙酸乙酯溶液,4ml),混合液在室温下搅拌过夜，室温反应完全，抽滤出所得固体，使用石油醚洗涤固体3次，真空干燥得到固体A-4-3的盐酸盐，直接用于下一步反应。
(3)8-((3-(7-(4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-羰基)-4-氟苯基)甲基)-1,2,3,4-四氢吡啶并[3,2-d]哒嗪-5(6H)-酮(I-4)的合成。
上述反应所得化合物A-4-3盐酸盐,化合物M-7(26.49mg,0.087mmol),HATU(33.21mg,0.087mmol)和DIEA(11.27mg,0.17mmol)在DMF(2ml)溶液中在室温下搅拌2小时，倒入水(10ml)中，用乙酸乙酯萃取(3x10ml)，有机相用饱和NaCl洗后，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，剩余物用柱色谱法纯化，得到产物I-4(23.8mg,48.2％).LC-MS m/z＝635.3[M+1]+
实施例6化合物I-5的合成。
化合物I-5的合成路线：
(1)3-(4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-5,6-二氢-1,7-萘啶-7(8H)-羧酸叔丁酯(A-3-4)的合成。
化合物A-2-1(177.75mg,0.75mmol),化合物C-4(205.68mg,0.83mmol),Pd2dba3(68.85mg,0.075mmol)，Xantphos(86.4mg,0.15mmol)和Cs2CO3(292.5mg,0.9mmol)在1，4二氧六环(10ml)的混合溶液中在130℃下搅拌4小时，冷却后过滤浓缩，剩余物通过柱色谱法用乙酸乙酯/石油醚＝1:3进行纯化，得到产物A-3-4(101.3mg,30％).LC-MS m/z＝451.2[M+1]+。
(2)N4-环丙基-N2-(5,6,7,8-四氢-1,7-萘啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺(A-4-4)的合成。
向化合物A-3-4(35mg,0.077mmol)的乙酸乙酯(2ml)中加入HCl(4M的盐酸的乙酸乙酯溶液，5ml),混合液在室温下搅拌过夜，室温反应完全，抽滤出所得固体，使用石油醚洗涤固体3次，真空干燥得到固体A-4-4的盐酸盐，直接用于下一步反应。(3)8-(3-(3-(4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-5,6,7,8-四氢-1,7-萘啶-7-羰基)-4-氟苄基)-1,2,3,4-四氢吡啶并[3,2-d]哒嗪-5(6H)-酮(I-5)的合成。
上述反应所得化合物A-4-4盐酸盐,化合物M-7(19.7mg,0.065mmol),HATU(24.7mg,0.065mmol)和DIEA(16.8mg,0.13mmol)在DMF(2ml)溶液中在室温下搅拌2小时，倒入水(10ml)中，用乙酸乙酯萃取(3x10ml),有机相用饱和NaCl洗后，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，剩余物用柱色谱法纯化，得到产物I-5(22mg,46％).LC-MS m/z＝636.2[M+1]+
实施例7化合物I-6的合成。
化合物I-6的合成路线：
(1)3-(4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-7,8-二氢-1,6-萘啶-6(5H)-羧酸叔丁酯(A-3-5)的合成。
化合物A-2-1(177.75mg,0.75mmol),化合物C-5(205.68mg,0.83mmol),Pd2dba3(68.85mg,0.075mmol),Xantphos(86.4mg,0.15mmol)和Cs2CO3(292.5mg,0.9mmol)在Dioxane(10ml)的混合溶液中在130℃下搅拌4小时，冷却后过滤浓缩，剩余物通过柱色谱法用乙酸乙酯/石油醚＝1:3进行纯化，得到产物A-3-5(120mg,45％).LC-MS m/z＝451.2[M+1]+。
(2)N4-环丙基-N2-(5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺(A-4-5)的合成。
向化合物A-3-5(20mg,0.044mmol)的乙酸乙酯(2ml)中加入HCl(4M的盐酸的乙酸乙酯溶液,5ml),混合液在室温下搅拌过夜，室温反应完全，抽滤出所得固体，使用石油醚洗涤固体3次，真空干燥得到固体A-4-5的盐酸盐，直接用于下一步反应。
(3)8-((3-(3-(4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-6-羰基)-4-氟苯基)甲基)-1,2,3,4-四氢吡啶并[3,2-d]哒嗪-5(6H)-酮(I-6)的合成。
上述反应所得化合物A-4-5盐酸盐,化合物M-7(4.5mg,0.015mmol),HATU(5.7mg,0.015mmol)和DIEA(3.8mg,0.03mmol)在DMF(2ml)溶液中在室温下搅拌2小时，倒入水(10ml)中，用乙酸乙酯萃取(3x10ml),有机相用饱和NaCl洗后，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，剩余物用柱色谱法纯化，得到产物I-6(5.2mg,28.6％).LC-MS m/z＝636.2[M+1]+
实施例5对ULK1和Parp1的体外抑制活性(IC50值)的测定。
(1)对ULK1的体外抑制活性(IC50值)的测定：
实验方法：底物溶液的配制是将底物聚(Glu，Tyr)钠盐(Sigma Aldrich，St.Louis，MO)加入到底物反应缓冲液(20mM Hepes(pH 7.5)，10mM MgCl2，1mM EGTA，0.02％Brij35,0.02mg/ml BSA，0.1mM Na3VO4，2mM DTT和1％DMSO)中(最终底物在反应中的浓度是0.2uM)。将测试化合物用100％DMSO配制成10mM浓度的储备液中，并在384孔循环烯烃共聚物LDV微量培养板中进行10次剂量的3倍连续稀释。将ULK1激酶(重组人源全长蛋白，组氨酸标签，在昆虫细胞中表达，Invitrogen，Carlsbad，CA)加入底物溶液中并轻轻混合(最终ULK1在反应中的浓度为8nM)。然后，通过声学液体转移技术(Echo550；纳升范围)(Labcyte Inc，Sunnyvale，CA)将100％DMSO中的测试化合物加入到激酶反应混合物中，并在室温下温育20分钟。将33P-ATP(特定活性10μCi/μl)加入到反应混合物中以引发反应，随后在室温下孵育2小时。取小部分反应液点在P-81离子交换滤纸(Whatman)上。用0.75％磷酸缓冲液洗去滤纸上未结合的磷酸盐(三次)并干燥后，测量留在滤纸上的放射性。
数据分析：
激酶活性数据用测试样品中剩余激酶活性与载体(二甲基亚砜)空白反应的百分比来表示。使用Prism(GraphPad Software)软件对获得数据进行曲线拟合来计算IC 50值。
(2)对Parp1的体外抑制活性(IC50值)的测定。
Parp1酶活性抑制实验用ELISA-Based Assay检测；
酶：Human PARP1(BPS,Cat#80501)
底物：组蛋白(Active Motif,Cat#81167)；活化的DNA(Genscript)；
抗体：Anti-rabbit IgG,HRP-linked Antibody(CST,Cat#7074P2)；
Anti-Poly/Mono-ADP Ribose(E6F6A)Rabbit mAb(CST,Cat#83732S)；
ELISA Femto Substrate(ThermoFisher Scientific,Cat#37074)。
实验步骤：
第一天：将组蛋白溶液加入每个孔中，并在4℃下孵育过夜。
第二天：
1)准备组蛋白涂层板
用PBST缓冲液清洗组蛋白384孔涂层板3次。在每个孔中加入50μl封闭缓冲液，然后在室温下孵育60分钟。
2)化合物配制
用100％DMSO准备10mM的化合物原液。然后通过连续稀释制备1000x化合物溶液。
3)酶反应
在25℃下孵育PARP1和DNA混合物10分钟。对于每个反应，取10μl PARP1/DNA混合物和5μl测试化合物/对照，在室温下孵育10分钟。然后在每个孔中加入10μl 2.5x NAD+，并在25℃下孵育60分钟。用PBST缓冲液洗板3次。
4)检测
将20μl anti-Poly/Mono-ADP Ribose Rabbit mAb添加到每个孔中，然后在室温下孵育90分钟。用PBST缓冲液洗板3次。
加入20μl稀释的(1:2000在封闭缓冲液中)anti-rabbit IgG,HRP-linked抗体。在室温下孵育60分钟，并使用PBST缓冲液清洗板3次。然后在每个孔中加入25μl ECL底物并立即读板。
5)数据分析
抑制率(％inhibition)计算公式：
％inhibition＝(Valuectrl1-Valuecpd)/(Valuectrl1-Valuectrl2)*100％
Ctrl1:无抑制剂对照；Ctrl2:无酶对照；cpd:待测化合物
(3)实验结果
表1.ULK1及Parp1酶活性的抑制结果
如表1所示，本发明所述代表化合物对ULK1及Parp1均表现出很强的抑制作用(<50nM)。

Claims (11)

1.式I所示的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、酯、光学异构体或前药，
其中，
m、n分别独立地选自0、1、2或3；
R1为H、卤素、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、羟基取代C1-6烷基、烷氧基取代C1-6烷基、C3-6环烷基、卤代C3-6环烷基或C3-6杂环烷基；
R2为其中，A环选自取代或非取代的5-6元芳环、取代或非取代的5-6元杂芳环，或取代或非取代的5-6元杂环；其中，所述A环中取代的5-6元芳环、取代的5-6元杂芳环和取代的5-6元杂环中的取代基各自独立选自卤素、氰基、羟基、氨基、单(C1-3烷基)胺基、双(C1-3烷基)胺基、C1-3烷基、卤代C1-3烷基、C1-3烷氧基，或卤代C1-3烷氧基；
R4选自H、卤素、C1-3烷基、卤代C1-3烷基、C1-3烷氧基或卤代C1-3烷氧基；
R3为-NR5R6、-NHNR5R6、-NR5OR6、-OR5、-ONR5R6或-SR5；其中，
R5、R6各自独立地选自H、取代或非取代的C6-10芳基、取代或非取代的C3-9杂芳基、取代或非取代的C1-3烷基，取代或非取代的C3-8环烷基，或取代或非取代的C3-7杂环烷基；其中，所述R5、R6选取的取代的C6-10芳基、取代的C3-9杂芳基、取代的C1-3烷基，取代的C3-8环烷基和取代的C3-7杂环烷基中的取代基各自独立地选自卤素、氰基、羟基、氨基、单(C1-3烷基)胺基、双(C1-3烷基)胺基、C1-3烷基、卤代C1-3烷基、C1-3烷氧基，或卤代C1-3烷氧基；
R5、R6及与之相连的N可以形成3-6元杂环；
X为CH或N。
2.根据权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、酯、光学异构体或前药，其特征在于，m、n分别独立地为1或2。
3.根据权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、酯、光学异构体或前药，其特征在于，R1选自卤素、C1-3烷基、卤代C1-3烷基、C3-6环烷基或C3-6杂环烷基；优选地，R1为三氟甲基。
4.根据权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、酯、光学异构体或前药，其特征在于，R2为其中，A环选自取代或非取代的6元芳环、取代或非取代的6元杂芳环，或取代或非取代的6元杂环；其中，所述A环中取代的6元芳环、取代的6元杂芳环和取代的6元杂环中的取代基各自独立选自卤素、氰基、羟基、氨基、单(C1-3烷基)胺基、双(C1-3烷基)胺基、C1-3烷基、卤代C1-3烷基、C1-3烷氧基，或卤代C1-3烷氧基。
优选地，A环选自取代或非取代的苯环、取代或非取代的吡啶环，或取代或非取代的四氢吡啶环；其中，所述A环中取代的苯环、取代的吡啶环和取代的四氢吡啶环中的取代基各自独立选自卤素、氰基、羟基、氨基、单(C1-3烷基)胺基、双(C1-3烷基)胺基、C1-3烷基、卤代C1-3烷基、C1-3烷氧基，或卤代C1-3烷氧基。
进一步优选地，R2选自以下结构之一：
5.根据权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、酯、光学异构体或前药，其特征在于，R3为-NR5R6、-OR5，其中，R5、R6各自独立地选自H、取代或非取代的C6芳基、取代或非取代的C3-5杂芳基、取代或非取代的C1-3烷基、取代或非取代的C3-5环烷基，或取代或非取代的C3-5杂环烷基；其中，所述R5、R6选取的取代的C6芳基、取代的C3-5杂芳基、取代的C1-3烷基、取代的C3-5环烷基和取代的C3-5杂环烷基中的取代基各自独立地选自卤素、氰基、羟基、氨基、单(C1-3烷基)胺基、双(C1-3烷基)胺基、C1-3烷基、卤代C1-3烷基、C1-3烷氧基，或卤代C1-3烷氧基；R5、R6及与之相连的N可以形成3-6元杂环；
优选地，R3选自以下结构之一：
6.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物选自如下任一结构：
7.权利要求1～6中任一项所述的化合物在制备预防或治疗与unc-51-like自噬激活激酶1(ULK1)和/或聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(Parp1)相关疾病的药物中的用途。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述与unc-51-like自噬激活激酶1(ULK1)和/或聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(Parp1)相关疾病为癌症，包括固体肿瘤和恶性血液肿瘤。
9.一种药物组合物，包含一种以上如权利要求1～6中任一项所述的化合物。
10.一种药物制剂，包含治疗有效量的如权利要求1～6中任一项所述的化合物，以及在药学上可接受的赋形剂。
11.权利要求1～6中任一项所述的化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)化合物A-1和化合物B进行亲核取代得到化合物A-2，其中，A-1为B为胺、羟胺、肼、醇或硫醇；
(2)化合物A-2与化合物C/>进行偶联生成化合物A-3
(3)化合物A-3用酸脱BOC得到化合物A-4
(4)化合物A-4与有机酸D/>偶合得到权利要求1中所述的化合物I/>其中m，n，R1，R2，R3，X如权利要求1～6中任一项所述。
CN202211046925.0A 2022-08-30 2022-08-30 Ulk1和parp1双靶点抑制剂 Pending CN117658985A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211046925.0A CN117658985A (zh) 2022-08-30 2022-08-30 Ulk1和parp1双靶点抑制剂

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211046925.0A CN117658985A (zh) 2022-08-30 2022-08-30 Ulk1和parp1双靶点抑制剂

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117658985A true CN117658985A (zh) 2024-03-08

Family

ID=90084965

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211046925.0A Pending CN117658985A (zh) 2022-08-30 2022-08-30 Ulk1和parp1双靶点抑制剂

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN117658985A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8741911B2 (en) Raf inhibitor compounds
AU2018224488A1 (en) Modulators of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator protein and methods of use
KR20160145796A (ko) BET 단백질의 저해제로서의 1H-피롤로[2,3-c]피리딘-7(6H)-온 및 피라졸로[3,4-c]피리딘-7(6H)-온
JP6139792B2 (ja) タンキラーゼ阻害剤としてのピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−４−オン化合物
SK285757B6 (sk) Ftalazíny s aktivitou inhibujúcou angiogenézu, spôsob ich prípravy, ich použitie a prostriedky, ktoré ich obsahujú
EP1209158A1 (en) Substituted beta-carbolines
WO2005080392A1 (ja) ピラゾロキノロン誘導体およびその用途
AU2014250836A1 (en) Quinazolines and azaquinazolines as dual inhibitors of RAS/RAF/MEK/ERK and PI3K/AKT/PTEN/mTOR pathways
TW202110849A (zh) Ｄｎａ依賴性蛋白激酶抑制劑
CA2783340C (en) Inhibitors of akt activity
CN102482276A (zh) 杂环化合物及其用途
WO2021139775A1 (zh) 吡啶酮化合物及应用
WO2022193871A1 (zh) Krasg12d突变蛋白抑制剂的制备及其应用
US20230348399A1 (en) Novel pyrimidine derivative and use thereof
WO2021254529A1 (zh) 双环类化合物
EP1134221A1 (en) Substituted beta-carbolines as lkB kinase inhibitors
CZ20013660A3 (cs) Substituované 3-kyano-(1,7),(1,5) a (1,8)-naftyridinové inhibitory tyrosinových kináz
CN111909101B (zh) 一种egfr激酶抑制剂及其在制备抗癌药物方面的应用
WO2018054304A1 (zh) 呋喃并喹啉二酮类化合物及其医药用途
CN117658985A (zh) Ulk1和parp1双靶点抑制剂
CN113493438B (zh) 四氢异喹啉类化合物
ES2328626T3 (es) Derivados de imidazopiridina utiles como inhibidores de inos.
WO2022188758A1 (zh) 喹啉化合物的盐或晶型及其制备方法和应用
EA027058B1 (ru) Терапевтическое применение имидазопиридиновых производных соединений
KR102572704B1 (ko) 신규한 피리미딘 유도체 및 이의 용도

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication