CN113493438B - 四氢异喹啉类化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了式(I)所示的取代芳基类化合物或药学可接受的盐，含有它们的药物组合物以及作为PRMT5抑制剂的用途。

Description

四氢异喹啉类化合物
本申请要求2020年3月20日向国家知识产权局提交的，专利申请号为202010202567.2，发明名称为“四氢异喹啉类化合物”的在先申请的优先权。所述在先申请的全文通过引用的方式结合于本申请中。
技术领域
本申请涉及作为PRMT5抑制剂的四氢异喹啉类化合物、其制备方法、含有该化合物的药物组合物、以及其在治疗PRMT5介导或相关性疾病中的用途。
背景技术
表观遗传学改变是驱动和维持肿瘤恶性化表型的关键介质。DNA甲基化，组蛋白乙酰化和甲基化，非编码RNA，翻译后修饰的变化都是癌症发生的表观遗传驱动力，而与DNA序列的变化无关。精氨酸甲基化是一类重要的翻译后修饰，通过调节转录和转录后RNA处理影响细胞生长和增殖，凋亡，血管生成和转移。存在三种类型的甲基精氨酸，ω-NG-单甲基精氨酸(MMA)，ω-NG，N’G-不对称二甲基精氨酸(ADMA)和ω-NG，N’G-对称二甲基精氨酸(SDMA)。这种修饰是由蛋白质精氨酸甲基转移酶(PRMT)家族催化的，从S-腺苷甲硫氨酸(AdoMet)把甲基转移到组蛋白和非组蛋白的精氨酸侧链。在人类基因组中注释了九个PRMT基因，基于产生的甲基精氨酸类型分为I型(PRMT1,2,3,4,6和8)，II型(PRMT5和PRMT9)，和III型酶(PRMT7)。PRMT5主要是II型酶，可催化精氨酸的对称二甲基化。PRMT5是在检测与Janus酪氨酸激酶(Jak2)相互作用蛋白的双杂交实验中被首次发现的。
PRMT5是一种通用的转录抑制因子，与其他转录因子形成复合物，包括BRG1和hBRM，Blimp1以及Snail。PRMT5通过对多种细胞质和细胞核中的底物的甲基化，包括组蛋白H4残基Arg3(H4R3)和H3残基Arg8(H3R8)而参与多种不同的细胞生物学过程。H4R3甲基化与转录抑制相关，而H3R8甲基化被视为即与转录激活又和转录抑制有关。PRMT5除了直接诱导抑制性组蛋白标记外，该酶在基因沉默中的作用还通过形成多抑制蛋白复合物来介导，包括NuRD组分，HDACs，MDB蛋白和DNA甲基转移酶。PRMT5通过与一些结合蛋白的相互作用进而影响其底物特异性。这种蛋白质复合物中的核心成分是MEP50。MEP50对于PRMT5的酶学活性是必须的。研究发现，PRMT5可以甲基化参与RNA剪接的蛋白，比如SmD3，可用于跟踪细胞生物PRMT5的化学活性。
PRMT5在肿瘤发生中起重要作用。研究发现PRMT5在多种肿瘤中的表达上调，包括淋巴瘤，肺癌，乳腺癌和结直肠癌。此外，PRMT5表达在套细胞淋巴瘤(MCL)病人样本中增高，而PRMT5敲除则可以抑制MCL细胞增殖，表明PRMT5在MCL中起重要作用。PRMT5过表达促进细胞增生，在黑色素瘤，乳腺癌和肺癌细胞系中，PRMT5敲除则可以抑制这些细胞的增殖。因此，PRMT5是癌症治疗的潜在靶点。
甲基硫腺苷磷酸化酶(MTAP)的丧失赋予了细胞对PRMT5及其结合蛋白WDR77的选择性依赖。MTAP由于与通常缺失的肿瘤抑制基因CDKN2A靠近而经常丢失。携带MTAP缺失的细胞的胞内甲硫基腺苷(MTA，被MTAP裂解的代谢物)浓度增加。此外，MTA特异性抑制PRMT5的酶活性。与MTAP表达的细胞相比，MTA或PRMT5小分子抑制剂显著抑制MTAP缺失的癌细胞系的细胞活力。
因此，本领域需要开发能够抑制PRMT5的活性并治疗各种PRMT5相关疾病的小分子。
发明内容
本发明提供一种式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐：
其中，R1选自
R2、R3、R4、R5独立地选自H、卤素、CN或任选被Ra1取代的以下基团：NH2、C1-C10烷基、C1-C10烷氧基、C3-C10环烷基或3-10元杂环基；
m选自0、1、2、3或4；
p选自0、1或2；
W选自化学键或任选被Ra2取代的CH2、任选被Ra2取代的OCH2、任选被Ra2取代的CH2CH2或任选被Ra2取代的OCH2CH2；
L选自O、S、NR12或者化学键；
X选自CR14、N或化学键；
Y选自CR14、N、O、S或NR13；
当X选自CH或N时，Y选自CH或N；或者，当X选自化学键时，Y选自O、S或NR13；
R6选自H或任选被Ra3取代的C1-C10烷基、C6-C10芳基、5-10元杂芳基、C3-C14环烷基或3-14元杂环基；
R7、R8、R9、R10独立地选自H、卤素、OH、CN或任选被Ra4取代的NH2、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、3-10元杂环基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷基氧基或3-10元杂环基氧基，或者R7、R8以及它们所连接的碳原子共同形成C3-C6环烷基、C＝O或者C3-C6杂环烷基，或者R9、R10以及它们所连接的碳原子共同形成C3-C6环烷基、C＝O或者C3-C6杂环烷基；
R11、R12、R13、R14独立地选自H或任选被Ra5取代的C1-C10烷基、C3-C10环烷基或3-10元杂环基；
Ra1、Ra2、Ra3、Ra4、Ra5独立地选自F、Cl、Br、I、OH、CN、＝O、NO2或任选被Rb取代的下列基团：C1-C10烷基、C3-C10环烷基、3-10元杂环基、C1-C10烷氧基、C3-C10环烷基氧基、3-10元杂环基氧基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、C6-C10芳基、5-10元杂芳基、C6-C10芳基氧基或5-10元杂芳基氧基；
每一个Rb选自F、Cl、Br、I、OH、CN、＝O、NO2或任选被Rc取代的下列基团：NH2、SH、C1-C10烷基、C3-C10环烷基、3-10元杂环基、C1-C10烷氧基、C3-C10环烷基氧基、3-10元杂环基氧基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、C6-C10芳基、5-10元杂芳基、C6-C10芳基氧基或5-10元杂芳基氧基；
每一个Rc选自F、Cl、Br、I、OH、CN、＝O、NO2、NH2、SH、C1-C10烷基、C3-C10环烷基、3-10元杂环基、C6-C10芳基或5-10元杂芳基。
在一些实施例中，Ra1选自卤素、＝O、CN、C1-C6烷基、C3-C6环烷基或3-10元杂环基。
在一些实施例中，Ra4选自卤素、CN、＝O或C1-C6烷基。
在一些实施例中，Ra5选自卤素、＝O、CN、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷基、C3-C6环烷基氧基、3-10元杂环基或3-10元杂环基氧基。
在一些实施例中，R2、R3、R4、R5独立地选自H、卤素、CN、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷基或3-6元杂环基。
在一些实施例中，R2、R3、R4、R5独立地选自H、卤素、CN、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。
在一些实施例中，R2、R3、R4、R5独立地选自H、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基。
在一些实施例中，R2选自H。
在一些实施例中，R3、R4独立地选自H、甲基或甲氧基。
在一些实施例中，R3、R4独立地选自H或甲基。
在一些实施例中，R3、R4独立地选自H。
在一些实施例中，R5选自H、甲基、或甲氧基。
在一些实施例中，R5选自H。
在一些实施例中，L独立地选自化学键、O、NH或S。
在一些实施例中，L独立地选自O、NH或S。
在一些实施例中，L独立地选自O或NH。
在一些实施例中，L独立地选自O。
在一些实施例中，L独立地选自化学键。
在一些实施例中，m选自0、1、2。
在一些实施例中，m选自0或1。
在一些实施例中，m选自0。
在一些实施例中，p选自0或1。
在一些实施例中，X选自CR14、N或化学键。
在一些实施例中，X选自CH、N或化学键。
在一些实施例中，X选自CH或化学键。
在一些实施例中，X选自CH。
在一些实施例中，X选自化学键。
在一些实施例中，Y选自CR14、N、O、S或NH。
在一些实施例中，Y选自CH、N、O、S或NH。
在一些实施例中，Y选自CH或S。
在一些实施例中，Y选自CH。
在一些实施例中，Y选自S。
在一些实施例中，X选自CH或N，Y选自CH。
在一些实施例中，X、Y均选自CH。
在一些实施例中，X选自化学键，Y选自O、S或NH。
在一些实施例中，X选自化学键，Y选自S。
在一些实施例中，R7、R8、R9、R10独立地选自H、卤素、OH、CN或C1-C6烷基、C3-C6环烷基、3-6元杂环基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷基氧基，或者R7、R8以及它们所连接的碳原子共同形成C3-C6环烷基、C＝O或者C3-C6杂环烷基，或者R9、R10以及它们所连接的碳原子共同形成C3-C6环烷基、C＝O或者C3-C6杂环烷基。
在一些实施例中，R7、R8、R9、R10独立地选自H、C1-C6烷基或C3-C6环烷基，或者R7、R8以及它们所连接的碳原子共同形成C3-C4环烷基，或者R9、R10以及它们所连接的碳原子共同形成C3-C4环烷基。
在一些实施例中，R7、R8、R9、R10独立地选自H、甲基或乙基，或者R7、R8以及它们所连接的碳原子共同形成环丙基，或者R9、R10以及它们所连接的碳原子共同形成环丙基。
在一些实施例中，R7、R8、R9、R10独立地选自H、甲基或乙基。
在一些实施例中，R7、R8以及它们所连接的碳原子共同形成环丙基。
在一些实施例中，R9、R10以及它们所连接的碳原子共同形成环丙基。
在一些实施例中，R7、R8以及它们所连接的碳原子共同形成C＝O。
在一些实施例中，R9、R10以及它们所连接的碳原子共同形成C＝O。
在一些实施例中，R7、R8、R9、R10独立地选自H。
在一些实施例中，R1选自
在一些实施例中，R1选自
在一些实施例中，R1选自
在一些实施例中，R1选自
在一些实施例中，R1选自
在一些实施例中，R1选自
在一些实施例中，Ra2选自卤素、＝O、CN、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷基、C3-C6环烷基氧基、3-10元杂环基或3-10元杂环基氧基。
在一些实施例中，Ra2选自卤素、CN或C1-C6烷基。
在一些实施例中，Ra2选自C1-C6烷基。
在一些实施例中，Ra2选自甲基。
在一些实施例中，W选自化学键或任选被Ra2取代的CH2、任选被Ra2取代的OCH2或任选被Ra2取代的CH2CH2。
在一些实施例中，W选自化学键或任选被Ra2取代的CH2或任选被Ra2取代的CH2CH2。
在一些实施例中，W选自化学键、CH2、CH2CH2、CH3CH、(CH3)2C或OCH2。
在一些实施例中，W选自化学键、CH2、CH2CH2、CH3CH或(CH3)2C。
在一些实施例中，R6选自任选被Ra3取代的以下基团：C1-C6烷基、苯基、萘基、5-10元杂芳基、C3-C6环烷基或3-6元杂环基。
在一些实施例中，R6选自任选被Ra3取代的以下基团：苯基、吡唑基、吡啶基、 异丙基或甲基。
在一些实施例中，R6选自任选被Ra3取代的以下基团：苯基、吡唑基、吡啶基、
在一些实施例中，Ra3选自卤素、CN、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基酰基或卤代C1-C6烷基。
在一些实施例中，Ra3选自卤素、CN、甲基、异丙基、叔丁基、甲氧基、乙酰基或三氟甲基。
在一些实施例中，Ra3选自卤素、CN、甲基、叔丁基、甲氧基、乙酰基或三氟甲基。
在一些实施例中选自
在一些实施例中选自
在一些实施例中，R11选自H或C1-C6烷基。
在一些实施例中，R11选自C1-C6烷基。
在一些实施例中，R11选自H、甲基或乙基。
在一些实施例中，R11选自甲基或乙基。
在一些实施方案中，所述式(I)化合物或其药学上可接受的盐选自式(II)化合物或其药学上可接受的盐：
其中R1、R2、R3、R4、R5、m如上文所定义。
在一些实施方案中，所述式(I)化合物或其药学上可接受的盐选自式(III)化合物或其药学上可接受的盐：
其中R1、R2、R3、R4、R5、m如上文所定义。
在一些实施方案中，本申请的式(I)化合物或其药学上可接受的盐选自以下化合物或其药学上可接受的盐：
/>
/>
在一些实施方案中，本申请的式(I)化合物或其药学上可接受的盐选自以下化合物或其药学上可接受的盐：
/>
/>
/>
/>
另一方面，本申请涉及药物组合物，其包含本申请的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本申请的药物组合物还包括药学上可接受的辅料。
另一方面，本申请涉及治疗哺乳动物由PRMT5介导或相关性的疾病的方法，包括对需要该治疗的哺乳动物，优选人类，给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物。
另一方面，本申请涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物在制备预防或者治疗PRMT5介导或相关性的疾病的药物中的用途。
另一方面，本申请涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物在预防或者治疗PRMT5介导或相关性的疾病中的用途。
另一方面，本申请涉及预防或者治疗PRMT5介导或相关性的疾病的式(I)化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物。
在一些实施方案中，所述PRMT5介导或相关性的疾病为癌症。
术语定义和说明
除非另有说明，本发明说明书和权利要求书中记载的基团和术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。这样的组合和结合后的基团定义及化合物结构，应当属于本发明说明书记载的范围内。
本发明中的处表示连接位点。
术语“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的无毒酸或碱的盐，包括无机酸和碱、有机酸和碱的盐。
术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体、非对映异构体和构象异构体。
本发明的化合物可以具有不对称原子如碳原子、硫原子、氮原子、磷原子或不对称双键。外消旋体、对映异构体、非对映异构体、几何异构体和单个的异构体都包括在本发明的范围之内。
本文中消旋体或者对映体纯的化合物的图示法来自Maehr，J.Chem.Ed.1985，62:114-120。除非另有说明，用楔形键和虚线键(和/>)表示一个立体中心的绝对构型。当本文所述化合物含有烯属双键或其它几何不对称中心，除非另有规定，它们包括E、Z几何异构体。同样地，所有的互变异构形式均包括在本发明的范围之内。
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子、不对称硫原子、不对称氮原子或不对称磷原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。本申请的含有不对称碳原子的化合物可以以光学活性纯的形式或外消旋形式被分离出来。光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分，或通过使用手性原料或手性试剂合成。立体异构体的非限制性实例包括但不限于：
本申请的化合物和中间体还可以以不同的互变异构体形式存在，并且所有这样的形式包含于本申请的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指可经由低能垒互变的不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括经由质子迁移的互变，如酮-烯醇及亚胺-烯胺异构化。质子互变异构体的具体实例是咪唑部分，其中质子可在两个环氮间迁移。价互变异构体包括通过一些成键电子的重组的互变。
结构单元应理解为具有环状共轭体系的芳香性环，任选地，/>可以是具有芳香性的6元环，如苯环或吡啶环；任选地，当X为化学键时，/>还可以是5元杂芳环，如吡咯环、呋喃环或噻吩环。
术语“药物组合物”表示一种或多种文本所述化合物或其生理学/药学上可接受的盐或前体药物与其它化学组分的混合物，其它组分例如生理学/药学上可接受的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。
术语“被取代”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧代(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代，氧代不会发生在芳香基上。
术语“任选”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可以发生或不发生，该描述包括发生所述事件或情况和不发生所述事件或情况。例如，乙基“任选”被卤素取代，指乙基可以是未被取代的(CH2CH3)、单取代的(如CH2CH2F)、多取代的(如CHFCH2F、CH2CHF2等)或完全被取代的(CF2CF3)。本领域技术人员可理解，对于包含一个或多个取代基的任何基团，不会引入任何在空间上不可能存在和/或不能合成的取代或取代模式。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。例如，如果一个基团被2个R所取代，则每个R都有独立的选项。
当其中一个变量选自化学键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表键或化学键时表示该结构实际上是A-Z。
当一个取代基的键交叉连接到一个环上的两个原子时，这种取代基可以与这个环上的任意原子相键合。例如，结构单元表示R5可在苯环上的任意一个位置发生取代。
术语“卤”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
术语“羟基”指-OH基团。
术语“氰基”指-CN基团。
术语“氨基”指-NH2基团。
术语“烷基”是指通式为CnH2n+1的烃基。该烷基可以是直链或支链的。例如，术语“C1-C10烷基”应理解为表示具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。所述烷基是例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1，2-二甲基丙基、新戊基、1，1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，1-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基或1，2-二甲基丁基等；“C1-C6烷基”应理解为表示具有1、2、3、4、5、6个碳原子的直链或支链饱和一价烃基(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、新戊基、己基、2-甲基戊基等)。
术语“烷氧基”指“烷基氧基”或“-O-烷基”。优选地，“C1-C10烷氧基”可以包含“C1-C6烷氧基”。
术语“卤代C1-C6烷基”应理解为被一个或多个卤素取代的C1-C6烷基。
术语“C1-C6烷基酰基”应理解为“C1-C6烷基-C(＝O)-”。
术语“C2-C10烯基”应理解为优选表示直链或支链的一价烃基，其包含一个或多个双键并且具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子，优选“C2-C6烯基”，进一步优选“C2-C4烯基”，更进一步优选C2或C3烯基。应理解，在所述烯基包含多于一个双键的情况下，所述双键可相互分离或共轭。所述烯基例如乙烯基、烯丙基、(E)-2-甲基乙烯基、(Z)-2-甲基乙烯基、(E)-丁-2-烯基、(Z)-丁-2-烯基、(E)-丁-1-烯基、(Z)-丁-1-烯基、异丙烯基、2-甲基丙-2-烯基、1-甲基丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、(E)-1-甲基丙-1-烯基、(Z)-1-甲基丙-1-烯基。
术语“C2-C10炔基”应理解为优选表示直链或支链的一价烃基，其包含一个或多个三键并且具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子，优选“C2-C6炔基”，进一步优选“C2-C4炔基”，更进一步优选C2或C3炔基。所述炔基是例如乙炔基、丙-1-炔基、丙-2-炔基、丁-1-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、1-甲基丙-2-炔基。
术语“C3-C14环烷基”应理解为表示饱和的一价单环、并环、螺环或桥环，其具有3～14个碳原子。如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基或环癸基，或者是双环烃基如十氢化萘环。术语“C3-C10环烷基”应理解为表示饱和的一价单环、并环、螺环或桥环，其具有3～10个碳原子；术语“C3-C6环烷基”应理解为表示饱和的一价单环、并环、螺环或桥环，其具有3～6个碳原子；术语“C3-C4环烷基”应理解为表示含有3或4个碳原子的饱和一价单环。环烷基的例子如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基或环癸基，或者是双环烃基如十氢化萘环。根据本发明，所述双环烃环包括桥环、螺环或并环结构。
术语“环烷基氧基”可理解为“环烷基-O”，优选地，“C3-C10环烷基氧基”可以包含“C3-C6环烷基氧基”和“C3-C4环烷基氧基”。
术语“杂环基”，是指单环杂环基、稠杂环基系统；稠杂环包括并杂环基、螺杂环基、桥杂环基，可以是饱和的、部分饱和的或不饱和的，但不是芳香性的；所述并杂环基、螺杂环基、桥杂环基包括但不限于6-18元并杂环基、5-18元螺杂环基或5-18元桥杂环基，所述并杂环基、螺杂环基、桥杂环基可含有1～5个杂原子，所述杂原子选自O、N、S。
术语“3-14元杂环基”意指饱和的或部分饱和的一价单环、并环、螺环或桥环，具有3～14个环原子，其包含1-5个，优选1-3个选自N、O和S的杂原子。术语“3-10元杂环基”意指饱和的或部分饱和的一价单环或双环烃环，其包含1-5个，优选1-3个选自N、O和S的杂原子。术语“3-6元杂环基”应理解为具有3、4、5、6个环原子的饱和的或部分饱和的一价单环或双环烃环，其包含1-5个，优选1-3个选自N、O和S的杂原子。特别地，所述杂环基可以包括但不限于：4元环，如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基；5元环，如四氢呋喃基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基；或6元环，如四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基或三噻烷基；或部分饱和的6元环如四氢吡啶基；或7元环，如二氮杂环庚烷基。任选地，所述3-14元杂环基可以是8-10元的苯并稠合的杂环基或8-10元的杂芳基稠合的杂环基，包括但不限于如苯并哌啶基、吡啶并哌啶基或嘧啶并哌啶基等；所述杂环基3-10元杂环基还可以包括但不限于5,5元环，如六氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基环，或者5,6元双环，如六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基环。含氮原子的环可以是部分不饱和的，即它可以包含一个或多个双键，例如但不限于2,5-二氢-1H-吡咯基、4H-[1,3,4]噻二嗪基、4,5-二氢噁唑基或4H-[1,4]噻嗪基，或者，它可以是苯并稠合的，例如但不限于二氢异喹啉基。根据本发明，所述杂环基是无芳香性的。
术语“C6-C10芳基”应理解为优选表示具有6、7、8、9、10个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的单环或双环烃环。特别是具有6个碳原子的环(“C6芳基”)，例如苯基；或者具有9个碳原子的环(“C9芳基”)，例如茚满基或茚基，或者具有10个碳原子的环(“C10芳基”)，例如四氢化萘基、二氢萘基或萘基。
术语“C6-C10芳基氧基”可理解为“C6-C10芳基-O”。
“5-10元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环、双环或三环芳族环系：其具有5、6、7、8、9、10个环原子，特别是5或6或9或10个环原子，且其包含1-5个，优选1-3个独立选自N、O和S的杂原子并且，另外在每一种情况下可为苯并稠和的。特别地，杂芳基选自噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基等以及它们的苯并衍生物，例如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、吲唑基、吲哚基、异吲哚基等；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等，以及它们的苯并衍生物，例如喹啉基、喹唑啉基、异喹啉基等；或吖辛因基、吲嗪基、嘌呤基等以及它们的苯并衍生物；或噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基等。
术语“5-10元杂芳基氧基”可理解为“5-10元杂芳基-O”。
术语“治疗”意为将本申请所述化合物或制剂进行给药以预防、改善或消除疾病或与所述疾病相关的一个或多个症状，且包括：
(i)预防疾病或疾病状态在哺乳动物中出现，特别是当这类哺乳动物易患有该疾病状态，但尚未被诊断为已患有该疾病状态时；
(ii)抑制疾病或疾病状态，即遏制其发展；
(iii)缓解疾病或疾病状态，即使该疾病或疾病状态消退。
术语“治疗有效量”意指(i)治疗或预防特定疾病、病况或障碍，(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文中所述的特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状发作的本申请化合物的用量。构成“治疗有效量”的本申请化合物的量取决于该化合物、疾病状态及其严重性、给药方式以及待被治疗的哺乳动物的年龄而改变，但可例行性地由本领域技术人员根据其自身的知识及本公开内容而确定。
术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
作为药学上可接受的盐，例如，可以提及金属盐、铵盐、与有机碱形成的盐、与无机酸形成的盐、与有机酸形成的盐、与碱性或者酸性氨基酸形成的盐等。
术语“药物组合物”是指一种或多种本申请的化合物或其盐与药学上可接受的辅料组成的混合物。药物组合物的目的是有利于对有机体给予本申请的化合物。
术语“药学上可接受的辅料”是指对有机体无明显刺激作用，而且不会损害该活性化合物的生物活性及性能的那些辅料。合适的辅料是本领域技术人员熟知的，例如碳水化合物、蜡、水溶性和/或水可膨胀的聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等。
词语“包括(comprise)”或“包含(comprise)”及其英文变体例如comprises或comprising应理解为开放的、非排他性的意义，即“包括但不限于”。
本申请还包括与本文中记载的那些相同的，但一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然中通常发现的原子量或质量数的原子置换的同位素标记的本申请化合物。可结合到本申请化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如分别为2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、31P、32P、35S、18F、123I、125I和36Cl等。
某些同位素标记的本申请化合物(例如用3H及14C标记的那些)可用于化合物和/或底物组织分布分析中。氚化(即3H)和碳-14(即14C)同位素对于由于它们易于制备和可检测性是尤其优选的。正电子发射同位素，诸如15O、13N、11C和18F可用于正电子发射断层扫描(PET)研究以测定底物占有率。通常可以通过与公开于下文的方案和/或实施例中的那些类似的下列程序，通过同位素标记试剂取代未经同位素标记的试剂来制备同位素标记的本申请化合物。
此外，用较重同位素(诸如氘(即2H))取代可以提供某些由更高的代谢稳定性产生的治疗优点(例如增加的体内半衰期或降低的剂量需求)，并且因此在某些情形下可能是优选的，其中氘取代可以是部分或完全的，部分氘取代是指至少一个氢被至少一个氘取代。
本发明的化合物的所有的同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
本申请的药物组合物可通过将本申请的化合物与适宜的药学上可接受的辅料组合而制备，例如可配制成固态、半固态、液态或气态制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等。
给予本申请化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、局部、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。
本申请的药物组合物可以采用本领域众所周知的方法制造，如常规的混合法、溶解法、制粒法、制糖衣药丸法、磨细法、乳化法、冷冻干燥法等。
在一些实施方案中，药物组合物是口服形式。对于口服给药，可以通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的辅料混合，来配制该药物组合物。这些辅料能使本申请的化合物被配制成片剂、丸剂、锭剂、糖衣剂、胶囊剂、液体、凝胶剂、浆剂、悬浮剂等，用于对患者的口服给药。
可以通过常规的混合、填充或压片方法来制备固体口服组合物。例如，可通过下述方法获得：将所述的活性化合物与固体辅料混合，任选地碾磨所得的混合物，如果需要则加入其它合适的辅料，然后将该混合物加工成颗粒，得到了片剂或糖衣剂的核心。适合的辅料包括但不限于：粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂或矫味剂等。
药物组合物还可适用于肠胃外给药，如合适的单位剂型的无菌溶液剂、混悬剂或冻干产品。
本文所述的通式Ⅰ化合物的所有施用方法中，每天给药的剂量为0.01到100mg/kg体重，优选为0.05到50mg/kg体重，更优选0.1到30mg/kg体重，以单独或分开剂量的形式。
本申请的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本申请的实施例。
本申请具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的，所述的溶剂须适合于本申请的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本申请的化合物，有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。
本领域合成路线规划中的一个重要考量因素是为反应性官能团(如本申请中的氨基)选择合适的保护基，例如，可参考Greene's Protective Groups in OrganicSynthesis(4th Ed).Hoboken,New Jersey:John Wiley&Sons,Inc.本申请引用的所有参考文献整体上并入本申请。
在一些实施方案中，本申请通式(I)的化合物可以由有机合成领域技术人员通过路线1来制备：
路线1
化合物M1与M2在碱存在下反应生成M3，M3水解生成M4，M4在缩合剂的存在下与M5反应得到M6，M6在酸性条件下进一步脱去Boc保护基生成式(I)化合物。
在一些实施方案中，本申请通式(I)的化合物可以由有机合成领域技术人员通过路线2来制备：
路线2
化合物S1与S2在碱存在下反应生成S3，S3在碱性条件下水解生成S4，S4在缩合剂的存在下反应生成S5，S5在钯催化剂如Pd(dppf)2Cl2的存在下与CO和乙醇反应得到S6，S6在碱性条件下水解得到S7，S7和S8在缩合剂的存在下生成S9，S9在酸性条件下进一步脱去Boc保护基生成式(I)化合物。
具体实施方式
实施例1、2-苄基-6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物1)的制备
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化合物1-2：
室温下将浓硫酸(14.5mL)加入到4-溴-3-甲氧基苯甲酸(1-1)(3.4g，14.7mmol)和2-(羟甲基)异吲哚啉-1,3-二酮(3.1g，17.7mmol)的混合物中，然后加热至80℃，反应3.0小时。将反应液冷却至室温，缓慢加入到冰水(200mL)中，搅拌30分钟，乳白色固体析出，过滤，收集滤饼。滤饼用水洗涤4次，至滤液pH至7.0。然后将滤饼加入到氨水(29mL)和乙醇(29mL)中，加热至80℃，反应3.0小时。将反应液冷却至室温，灰色固体析出，过滤，收集滤饼。滤饼用乙醚洗涤2次，得到目标中间体5-溴-6-甲氧基异吲哚啉-1-酮(1-2)(2.27g,收率：64％)。
LCMS:Rt:1.221min；MS m/z(ESI):242.1和244.1[M+H]+。
化合物1-3：
室温下将5-溴-6-甲氧基异吲哚啉-1-酮(1-2)(2.37g，9.79mmol)和碳酸铯(4.79g，14.68mmol)加入到N-甲基吡咯烷酮(95mL)中，然后再滴加苄溴(1.51mL,12.73mmol)，加热至40℃，反应16.0小时。反应完全后，将反应液冷却至室温，缓慢加入到水(400mL)中，灰色固体析出。过滤，收集滤饼。滤饼用乙醚洗涤2次，得到目标中间体2-苄基-5-溴-6-甲氧基异吲哚啉-1-酮(1-3)(2.40g,收率：74％)。
LCMS:Rt:1.854min；MS m/z(ESI):332.1,334.1[M+H]+。
中间体1-4：
室温下将2-苄基-5-溴-6-甲氧基异吲哚啉-1-酮(1-3)(300.0mg，0.90mmol)，分散到二氯甲烷(4.0mL)中，冷却至-78℃，缓慢滴加三溴化硼(815.0mg，3.25mmol)。滴加完毕后，室温反应3.0小时。反应完全后冷却至0℃，加入乙醇(10mL)淬灭，减压浓缩，然后用N-甲基吡咯烷酮(3.0mL)溶解。将溶液缓慢加入到冰水(50mL)中，灰色固体析出，过滤，收集滤饼。滤饼用乙醚洗涤2次，得到目标中间体2-苄基-5-溴-6-羟基异吲哚啉-1-酮(1-4)(240mg,收率：84％)。
LCMS:Rt:1.604min；MS m/z(ESI):318.1,320.1[M+H]+。
化合物1-5：
室温下将2-苄基-5-溴-6-羟基异吲哚啉-1-酮(1-4)(240mg，0.76mmol)和碳酸钾(314mg，2.27mmol)加入到N-甲基吡咯烷酮(5.0mL)中，然后再滴加碘乙烷(354mg，2.27mmol)，反应加热至60℃搅拌反应16小时。反应完全后将反应液冷却至室温，缓慢加入到冰水(50mL)中，黄色固体析出，过滤，收集滤饼，滤饼用乙醚洗涤2次，得到目标中间体2-苄基-5-溴-6-乙氧基异吲哚啉-1-酮(1-5)(150mg,收率：57％)。
LCMS:Rt:1.966min；MS m/z(ESI):346.1,348.1[M+H]+。
化合物1-6：
室温下将2-苄基-5-溴-6-乙氧基异吲哚啉-1-酮(1-5)(150mg，0.43mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(16mg，0.022mmol)和醋酸钾(127mg，1.3mmol)加入到无水乙醇(4.0mL)中，CO置换3次，加热至70℃反应2.0小时。反应完全后冷却至室温，减压浓缩。残余物经正相色谱柱(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝3:1,)纯化，得到目标中间体2-苄基-6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(1-6)(109mg,收率：74％)。
LCMS:Rt:1.820min；MS m/z(ESI):340.1[M+H]+。
化合物1-7：
室温下将2-苄基-6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(1-6)(109mg，0.32mmol)加入到甲醇(2.0mL)和水(2.0mL)的混合溶液中，加入氢氧化锂一水合物(41mg，0.96mmol)，加热至50℃，反应2.0小时。反应完全后，将反应体系降温至室温，用1mol/L的盐酸水溶液调节反应液的pH至5.0，后用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩得到目标中间体2-苄基-6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸(1-7)(100mg,收率：100％)。
LCMS:Rt:1.400min；MS m/z(ESI):312.1[M+H]+。
化合物1-8：
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室温下将2-苄基-6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸(1-7)(100mg,0.32mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(245mg,0.64mmol)和N,N-二异丙基乙胺(166mg,1.29mmol)加入到超干N,N-二甲基甲酰胺(2.5mL)中，然后加入(S)-3-((R)-2-氨基-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(合成方法参照US10494376B2)(113.0mg,0.39mmol)，室温反应1.5小时。反应完全后加入饱和食盐水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物用正相色谱柱(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，得到目标中间体叔丁基(S)-3-((R)-2-(2-苄基-6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(1-8)(140mg,收率：74％)。
LCMS:Rt:1.812min；MS m/z(ESI):586.4[M+H]+。
化合物1：
在0℃下叔丁基(S)-3-((R)-2-(2-苄基-6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(1-8)(140mg)的二氯甲烷(2.0mL)溶液中加入三氟乙酸(1.0mL)，反应液在室温下搅拌1小时。反应完全后减压浓缩，残余物用高效液相制备色谱法纯化(洗脱剂梯度见下表)，得到目标化合物2-苄基-6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物1)(32.66mg,收率:28％)。
洗脱剂梯度：
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ7.95(s,1H),7.48(s,1H),7.39-7.17(m,9H),4.80(s,2H),4.51-4.31(m,4H),4.30-4.18(m,3H),3.75-3.56(m,3H),3.29-3.14(m,2H),1.42(t,J＝6.9Hz,3H).
HPLC：99.891％@214nm，99.882％@254nm.
LCMS:Rt:1.305min；MS m/z(ESI):486.4[M+H]+。
实施例2、2-苄基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-6-甲氧基-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物2)的制备
化合物2-1：
室温下将2-苄基5-溴-6-甲氧基异吲哚啉-1-酮(1-3)(350mg，1.05mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(38mg，0.05mmol)和醋酸钾(310mg，3.16mmol)加入到无水乙醇(10.0mL)中，CO置换3次，加热至70℃反应2.0小时。反应完全后冷却至室温，减压浓缩。残余物经正相色谱柱(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝1:1,)纯化，得到目标中间体2-苄基-6-甲氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(2-1)(265mg,收率：77％)。
LCMS:Rt:1.784min；MS m/z(ESI):326.1[M+H]+。
化合物2-2：
室温下将2-苄基-6-甲氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(2-1)(265mg，0.81mmol)加入到甲醇(5.0mL)和水(5.0mL)的混合溶液中，然后再加入氢氧化锂一水合物(342mg，8.1mmol)，加热至50℃，反应2.0小时。反应完全后，将反应体系降温至室温，用1mol/L的盐酸水溶液调节反应液的pH至5.0，后用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到目标中间体2-苄基-6-甲氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸(2-2)(230mg,收率：95％)。
LCMS:Rt:1.383min；MS m/z(ESI):298.0[M+H]+。
化合物2-3：
室温下将2-苄基-6-甲氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸(2-2)(230mg,0.77mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(585mg,1.54mmol)和N,N-二异丙基乙胺(397mg,3.08mmol)加入到超干N,N-二甲基甲酰胺(5.0mL)然后加入(S)-3-((R)-2-氨基-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(271mg,0.93mmol)，室温反应1.5小时。反应完全后加入饱和食盐水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL)萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物用正相色谱柱(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝1:2)纯化，得到目标中间体叔丁基(S)-3-((R)-2-(2-苄基-6-甲氧基-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(2-3)(375mg,收率：85％)。
LCMS:Rt:1.958min；MS m/z(ESI):572.3[M+H]+。
化合物2：
在0℃下向叔丁基(S)-3-((R)-2-(2-苄基-6-甲氧基-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(2-3)(375mg，0.657mmol)的二氯甲烷(4.0mL)溶液中加入三氟乙酸(2.0mL)，反应液在室温下搅拌1小时。反应完全后减压浓缩，残余物用高效液相制备色谱法纯化(洗脱条件参照实施例1)，得到目标化合物2-苄基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-6-甲氧基-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物2)(36.05mg,收率:12％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ7.94(s,1H),7.49(s,1H),7.38-7.18(m,9H),4.80(s,2H),4.51-4.31(m,4H),4.30-4.23(m,1H),3.97(s,3H),3.75-3.54(m,3H),3.29-3.16(m,2H).
HPLC：97.583％@214nm，97.303％@254nm.
LCMS:Rt:1.234min；MS m/z(ESI):472.2[M+H]+。
实施例3、6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2-(1-苯乙基)异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物3)的制备
化合物3-1：
室温下将5-溴-6-甲氧基异吲哚啉-1-酮(1-2)(4.3g，17.8mmol)，分散到二氯甲烷(40mL)中，冷却至-78℃，缓慢滴加三溴化硼(44.4mL，89.0mmol)。滴加完毕后，室温反应3.0小时。反应完全后冷却至0℃，加入乙醇(80mL)淬灭，减压浓缩，然后用N-甲基吡咯烷酮(3.0mL)溶解。将溶液缓慢加入到冰水(600mL)中，灰色固体析出，过滤，收集滤饼。滤饼用乙醚洗涤2次，得到目标中间体5-溴-6-羟基异吲哚啉-1-酮(3-1)(4.03g,收率：99.5％)。
LCMS:Rt:1.262min；MS m/z(ESI):227.9,229.9[M+H]+。
化合物3-2：
室温下将5-溴-6-羟基异吲哚啉-1-酮(3-1)(4.03g，17.7mmol)和碳酸钾(7.3g，53.0mmol)加入到N-甲基吡咯烷酮(40.0mL)中，然后加入碘乙烷(4.2mL，53.0mmol)，反应加热至60℃搅拌反应5.0小时。反应完全后将反应液冷却至室温，缓慢加入到冰水(500mL)中，黄色固体析出，过滤，收集滤饼，得到目标中间体5-溴-6-乙氧基异吲哚啉-1-酮(3-2)(4.0g,收率：88％)。
LCMS:Rt:1.320min；MS m/z(ESI):256.0,258.0[M+H]+。
化合物3-3：
室温下将5-溴-6-乙氧基异吲哚啉-1-酮(3-2)(4.0g,15.6mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(572mg，0.78mmol)和醋酸钾(4.6g，46.8mmol)加入到无水乙醇(80.0mL)中，CO置换3次，加热至70℃反应2.0小时。反应完全后冷却至室温，减压浓缩。残余物经正相色谱柱(洗脱剂梯度：石油醚：乙酸乙酯＝1:2)纯化，得到目标中间体6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(3-3)(3.1g,收率：79.7％)。
LCMS:Rt:1.250min；MS m/z(ESI):250.0[M+H]+。
化合物3-4：
室温下将6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(3-3)(150mg，0.60mmol)和碳酸铯(294.0mg，0.90mmol)加入到N-甲基吡咯烷酮(3.0mL)中，然后再加入1-溴乙基苯(145mg,0.78mmol)，加热至40℃，反应16.0小时。反应完全后，将反应液冷却至室温，通过反相色谱柱纯化(85％乙腈水溶液)。得到目标中间体6-乙氧基-1-氧代-2-(1-苯基乙基)异吲哚啉-5-羧酸乙酯(3-4)(120mg,收率：57％)。
LCMS:Rt:1.906min；MS m/z(ESI):354.1[M+H]+。
化合物3-5：
室温下将6-乙氧基-1-氧代-2-(1-苯基乙基)异吲哚啉-5-羧酸乙酯(3-4)(120mg，0.34mmol)加入到甲醇(4.0mL)和水(4.0mL)的混合溶液中，然后加入氢氧化锂一水合物(143mg，3.4mmol)，加热至50℃，反应2.0小时。反应完全后，将反应体系降温至室温，用1mol/L的盐酸水溶液调节反应液的pH至5.0，用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。有机相合并用饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到目标中间体6-乙氧基-1-氧代-2-(1-苯乙基)异吲哚啉-5-羧酸(3-5)(110mg,收率：99％)。
LCMS:Rt:1.502min；MS m/z(ESI):326.1[M+H]+。
化合物3-6：
室温下将6-乙氧基-1-氧代-2-(1-苯乙基)异吲哚啉-5-羧酸(3-5)(110mg,0.34mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(257mg,0.68mmol)和N,N-二异丙基乙胺(174mg,1.35mmol)加入到超干N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)中，然后加入(S)-3-((R)-2-氨基-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(119.0mg,0.41mmol)，室温反应2.0小时。反应完全后加入饱和食盐水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物用正相色谱柱(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，得到目标中间体叔丁基(3S)-3-((1R)-2-(6-乙氧基-1-氧代-2-(1-苯乙基)异吲哚啉-5-羧酰胺基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉2(1H)-羧酸酯(3-6)(165mg,收率：82％)。
LCMS:Rt:2.06min；MS m/z(ESI):600.3[M+H]+。
化合物3：
在0℃下向叔丁基(3S)-3-((1R)-2-(6-乙氧基-1-氧代-2-(1-苯乙基)异吲哚啉-5-羧酰胺基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉2(1H)-羧酸酯(3-6)(165mg)的二氯甲烷(3.0mL)溶液中加入三氟乙酸(1.5mL)，反应液在室温下搅拌1小时。反应完全后减压浓缩，残余物用高效液相制备色谱法(洗脱剂及梯度同实施例1)纯化，得到目标化合物6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2-(1-苯乙基)异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物3)(77.53mg,收率:57.2％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ7.95(s,1H),7.45(s,1H),7.40-7.32(m,4H),7.31-7.19(m,5H),5.66(q,J＝7.2Hz,1H),4.55-4.33(m,3H),4.29-4.18(m,3H),4.08(d,J＝17.6Hz,1H),3.75-3.54(m,3H),3.29-3.11(m,2H),1.71(d,J＝7.2Hz,3H),1.41(t,J＝6.8Hz,3H).
HPLC：99.927％@214nm，99.765％@254nm.
LCMS:Rt:1.357min；MS m/z(ESI):500.3[M+H]+。
实施例4、6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2-((R)-1-苯乙基)异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐和6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2-((S)-1-苯乙基)异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物4和化合物5)的制备
6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2-(1-苯乙基)异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物3)(45mg)经手性拆分(拆分条件如下)，得到两个单一构型化合物(峰1，16.5mg；峰2，18.7mg)。
色谱仪：Waters SFC 80色谱柱：AS
色谱柱尺寸：250*25mm 10μm
流动相A：超临界CO2,流动相B:MeOH(+0.1％7mol/L氨甲醇溶液)；A:B 45:55
波长：214nm；流量：80g/min；柱温：RT
手性HPLC：峰1，Rt：1.537min；峰2，Rt：2.297min.
实施例5、6-乙氧基-2-(4-氟苄基)-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物6)的制备
化合物6-1：
室温下将6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(3-3)(200mg，0.80mmol)和碳酸铯(391.2mg，1.2mmol)加入到N-甲基吡咯烷酮(3.0mL)中，然后再加入4-氟溴苄(197mg,1.1mmol)，加热至40℃，反应16.0小时。反应完全后，将反应液冷却至室温，通过反相色谱柱纯化(85％乙腈水溶液)，得到目标中间体6-乙氧基-2-(4-氟苄基)-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(6-1)(165mg,收率：57％)。
LCMS:Rt:1.841min；MS m/z(ESI):358.1[M+H]+。
化合物6-2：
室温下将6-乙氧基-2-(4-氟苄基)-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(6-1)(165mg，0.46mmol)加入到甲醇(4.0mL)和水(4.0mL)的混合溶液中，然后加入氢氧化锂一水合物(194mg，4.6mmol)中，加热至50℃，反应2.0小时。反应完全后，将反应体系降温至室温，用1N的盐酸水溶液调节反应液的pH至5.0，用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。有机相合并用饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。得到目标中间体6-乙氧基-2-(4-氟苄基)-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸(6-2)(147mg,收率：97％)。
LCMS:Rt:1.462min；MS m/z(ESI):330.1[M+H]+。
化合物6-3：
室温下将6-乙氧基-2-(4-氟苄基)-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸(6-2)(147mg,0.45mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(340mg,0.89mmol)和N,N-二异丙基乙胺(231mg,1.79mmol)加入到超干N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)中，然后加入(S)-3-((R)-2-氨基-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(157.0mg,0.54mmol)，室温反应2小时。反应完全后加入饱和食盐水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物用正相色谱柱(洗脱剂：乙酸乙酯)纯化，得到目标中间体叔丁基(S)-3-((R)-2-(6-乙氧基-2-(4-氟苄基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(6-3)(241mg,收率：89％)。
LCMS:Rt:2.119min；MS m/z(ESI):604.2[M+H]+。
化合物6：
在0℃下向叔丁基(S)-3-((R)-2-(6-乙氧基-2-(4-氟苄基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(6-3)(241mg)的二氯甲烷(3.0mL)溶液中加入三氟乙酸(1.5mL)，反应液在室温下搅拌1小时。反应完全后减压浓缩，残余物用高效液相制备色谱法(洗脱剂及梯度同实施例1)纯化，得到目标化合物6-乙氧基-2-(4-氟苄基)-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物6)(36.51mg,收率:18％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ7.96(s,1H),7.48(s,1H),7.38-7.19(m,6H),7.11-7.04(m,2H),4.79(s,2H),4.50-4.33(m,4H),4.29-4.21(m,3H),3.73-3.51(m,3H),3.29-3.16(m,2H),1.41(t,J＝6.8Hz,3H).
HPLC：99.357％@214nm，98.182％@254nm.
LCMS:Rt:1.343min；MS m/z(ESI):504.2[M+H]+。
实施例6、2-(3,5-双(三氟甲基)苄基)-6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物7)的制备
化合物7的合成参考实施例5，将第一步中的4-氟溴苄替换为3,5-双三氟甲基苄基溴。最终得到目标化合物2-(3,5-双(三氟甲基)苄基)-6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物7)(31.88mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ7.99(s,1H),7.96-7.90(m,3H),7.51(s,1H),7.32-7.19(m,4H),4.98(s,2H),4.50-4.35(m,4H),4.31-4.21(m,3H),3.74-3.58(m,3H),3.29-3.16(m,2H),1.42(t,J＝7.2Hz,3H).
HPLC：99.786％@214nm，99.758％@254nm.
LCMS:Rt:1.502min；MS m/z(ESI):622.2[M+H]+。
实施例7、6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-2-(4-甲氧基苄基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物8)的制备
化合物8的合成参考实施例5，将第一步中的4-氟溴苄替换为1-(氯甲基)-4-甲氧基苯。最终得到目标化合物6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-2-(4-甲氧基苄基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物8)(33.25mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.48(s,1H),9.01(s,1H),8.50(t,J＝5.9Hz,1H),7.84(s,1H),7.35(s,1H),7.30-7.17(m,6H),6.97-6.85(m,2H),5.93(d,J＝5.6Hz,1H),4.65(s,2H),4.41-4.20(m,4H),4.24-4.12(m,3H),3.72(s,3H),3.61-3.38(m,2H),3.12(d,J＝8.2Hz,2H),1.29(t,J＝6.9Hz,3H).
HPLC：99.720％@214nm，99.361％@254nm.
LCMS:Rt:1.312min；MS m/z(ESI):516.4[M+H]+。
实施例8、2-(4-氰基苄基)-6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物9)的制备
化合物9的合成参考实施例5，将第一步中的4-氟溴苄替换为4-(溴甲基)苄腈。最终得到目标化合物2-(4-氰基苄基)-6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物9)(6.49mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ7.99(s,1H),7.77-7.66(m,2H),7.49(d,J＝6.9Hz,2H),7.47(s,1H),7.34-7.18(m,4H),4.89(s,2H),4.53-4.32(m,4H),4.31-4.12(m,3H),3.70-3.56(m,3H),3.20-3.04(m,2H),1.42(t,J＝7.0Hz,3H).
HPLC：98.223％@214nm，97.852％@254nm.
LCMS:Rt:1.277min；MS m/z(ESI):511.4[M+H]+。
实施例9、6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2-(吡啶-4-甲基)异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物10)的制备
化合物10-1：
室温下将6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(3-3)(200mg，0.80mmol)加入到四氢呋喃(3.0mL)中，加入钠氢(60％)(160mg,6.7mmol)，反应0.5小时，再加入4-(溴甲基)吡啶氢溴酸盐(305mg,1.2mmol)，升温到60℃，反应0.5小时。反应完全后，将反应液冷却至室温，缓慢滴加水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(30mL)萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。粗品用正相色谱柱(洗脱剂：乙酸乙酯)纯化，得到目标中间体6-乙氧基-1-氧代-2-(吡啶-4-基甲基)异吲哚啉-5-羧酸乙酯(10-1)(110mg,收率：40.28％)。
LCMS:Rt:0.769min；MS m/z(ESI):341.3[M+H]+。
化合物10-2：
室温下将6-乙氧基-1-氧代-2-(吡啶-4-基甲基)异吲哚啉-5-羧酸乙酯(10-1)(110mg，0.32mmol)加入到乙醇(3.0mL)、四氢呋喃(3.0mL)和水(1.5mL)的混合溶液中，然后加入氢氧化钠(65mg，1.62mmol)，加热至40℃，反应2小时。反应完全后，将反应体系降温至室温，用1N的盐酸水溶液调节反应液的pH至5.0，析出固体。将固体过滤，得到目标中间体6-乙氧基-1-氧代-2-(吡啶-4-基甲基)异吲哚啉-5-羧酸(10-2)(70mg,收率：75％)。
LCMS:Rt:0.472min；MS m/z(ESI):313.3[M+H]+。
化合物10-3：
室温下将6-乙氧基-1-氧代-2-(吡啶-4-基甲基)异吲哚啉-5-羧酸(10-2)(70mg,0.22mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(171mg,0.45mmol)和N,N-二异丙基乙胺(145mg,1.12mmol)加入到超干N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)中，然后加入(S)-3-((R)-2-氨基-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(130mg,0.45mmol)，加热至40℃，反应2小时。反应完全后加入饱和食盐水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物用正相色谱柱(洗脱剂：乙酸乙酯)纯化，得到目标中间体叔丁基(S)-3-((R)-2-(6-乙氧基-1-氧-2-(吡啶-4-基甲基)异吲哚啉-5-甲酰胺基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(10-3)(85mg,收率：65％)。
LCMS:Rt:0.758min；MS m/z(ESI):587.7[M+H]+。
化合物10：
在室温下向叔丁基(S)-3-((R)-2-(6-乙氧基-1-氧-2-(吡啶-4-基甲基)异吲哚啉-5-甲酰胺基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(10-3)(65mg)的二氯甲烷(3.0mL)溶液中加入三氟乙酸(1.5mL)，反应液在室温下搅拌1小时。反应完全后减压浓缩，残余物用高效液相制备色谱法(洗脱剂及梯度同实施例1)纯化，得到目标化合物6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2-(吡啶-4-甲基)异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物10)(12.02mg,收率:22％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ8.81(d,J＝6.5Hz,2H),8.04(s,1H),7.99(d,J＝6.5Hz,2H),7.52(s,1H),7.34-7.17(m,4H),5.14(s,2H),4.59(s,2H),4.42(t,J＝16.5Hz,2H),4.27(q,J＝6.9Hz,3H),3.79-3.59(m,3H),3.28-3.06(m,2H),1.43(t,J＝6.9Hz,3H).
HPLC：98.905％@214nm，98.001％@254nm.
LCMS:Rt:0.583min；MS m/z(ESI):487.4[M+H]+。
实施例10、6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物11)的制备
化合物11的合成参照实施例9，将4-(溴甲基)吡啶氢溴酸盐替换为4-(溴甲基)-1-甲基-1H-吡唑氢溴酸盐。最终得到目标化合物6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物11)(13.54mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ7.98(s,1H),7.90(s,1H),7.81(s,1H),7.44(s,1H),7.34-7.20(m,4H),4.72(s,2H),4.54-4.35(m,4H),4.29-4.22(m,3H),3.94(s,3H),3.81-3.55(m,3H),3.28-3.09(m,2H),1.41(t,J＝6.9Hz,3H).
HPLC：93.626％@214nm，93.698％@254nm.
LCMS:Rt:1.178min；MS m/z(ESI):490.3[M+H]+。
实施例11、6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2-苯乙基异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物12)的制备
化合物12-1：
室温下将6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(3-3)(200mg，0.80mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5.0mL)中，加入钠氢(96mg,2.4mmol)，室温反应0.5小时，再加入(2-溴乙基)苯(1.48g,8.0mmol)室温继续反应2.5小时。反应完全后，加入水(50mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。有机相合并用饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物用正相色谱柱(洗脱剂梯度:石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化。得到目标中间体6-乙氧基-1-氧代-2-苯乙基异吲哚啉-5-羧酸乙酯(12-1)(220mg,收率：78％)。
LCMS:Rt:1.652min；MS m/z(ESI):354.4[M+H]+。
化合物12-2：
室温下将6-乙氧基-1-氧代-2-苯乙基异吲哚啉-5-羧酸乙酯(12-1)(220mg，0.62mmol)加入到甲醇(6.0mL)和水(6.0mL)的混合溶液中，然后加入氢氧化锂一水合物(261mg，6.2mmol)中，加热至50℃，反应1.5小时。反应完全后，将反应体系降温至室温，用1mol/L的盐酸水溶液调节反应液的pH至5.0，用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。有机相合并用饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到目标中间体6-乙氧基-1-氧代-2-苯乙基异吲哚啉-5-羧酸(12-2)(175mg,收率：87％)。
LCMS:Rt:1.509min；MS m/z(ESI):326.1[M+H]+。
化合物12-3：
室温下将6-乙氧基-1-氧代-2-苯乙基异吲哚啉-5-羧酸(12-2)(175mg,0.54mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(409mg,1.07mmol)和N,N-二异丙基乙胺(276mg,2.14mmol)加入到超干N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)，然后加入(S)-3-((R)-2-氨基-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(212.6mg,0.65mmol)，室温反应2小时。反应完全后加入饱和食盐水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物用正相色谱柱(洗脱剂：乙酸乙酯)纯化，得到目标中间体叔丁基(S)-3-((R)-2-(6-乙氧基-1-氧代-2-苯乙基异吲哚啉-5-甲酰胺基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(12-3)(245mg,收率：76％)。
LCMS:Rt:1.993min；MS m/z(ESI):600.2[M+H]+。
化合物12：
在0℃下向中间体叔丁基(S)-3-((R)-2-(6-乙氧基-1-氧代-2-苯乙基异吲哚啉-5-甲酰胺基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(12-3)(244mg)的二氯甲烷(3.0mL)溶液中加入三氟乙酸(1.5mL)，反应液在室温下搅拌1小时。反应完全后减压浓缩，残余物用高效液相制备色谱法(洗脱剂及梯度同实施例1)纯化，得到目标化合物6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2-苯乙基异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物12)(32.27mg,收率:16％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ7.93(s,1H),7.40(s,1H),7.33-7.14(m,9H),4.15-4.35(m,2H),4.30(s,2H),4.28-4.17(m,3H),3.87(t,J＝7.2Hz,2H),3.75-3.56(m,3H),3.29-3.15(m,2H),2.99(t,J＝7.2Hz,2H),1.40(t,J＝7.2Hz,3H).
HPLC：99.067％@214nm，98.523％@254nm.
LCMS:Rt:1.343min；MS m/z(ESI):500.2[M+H]+。
实施例12、6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-2-(萘-2-基甲基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物13)的制备
化合物13-1：
室温下将6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(3-3)(200mg，0.80mmol)和碳酸铯(523.7mg，1.61mmol)加入到乙腈(10.0mL)中，再加入2-(溴甲基)萘(355mg,1.61mmol)，加热至60℃，反应2小时。反应完全后，将反应液冷却至室温，加入饱和食盐水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。粗品用正相色谱柱(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，得到目标中间体6-乙氧基-2-(萘-2-基甲基)-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(13-1)(200mg,收率：64％)。
LCMS:Rt:1.778min；MS m/z(ESI):390.4[M+H]+。
化合物13-2：
室温下将6-乙氧基-2-(萘-2-基甲基)-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(13-1)(200mg，0.51mmol)加入到乙醇(3.0mL)，四氢呋喃(3.0mL)和水(1.5mL)的混合溶液中，加入氢氧化钠(102mg，2.57mmol)，加热至40℃，反应2小时。反应完全后，将反应体系降温至室温，用1mol/L的盐酸水溶液调节反应液的pH至5.0，加入饱和食盐水(10mL)，用乙酸乙酯(20mL)萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到目标中间体6-乙氧基-2-(萘-2-基甲基)-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸(13-2)(140mg,收率：75％)。
LCMS:Rt:1.400min；MS m/z(ESI):362.1[M+H]+。
化合物13-3：
室温下将6-乙氧基-2-(萘-2-基甲基)-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸(13-2)(140mg,0.39mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(294mg,0.78mmol)和N,N-二异丙基乙胺(250mg,1.94mmol)加入到超干N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)中，然后加入(S)-3-((R)-2-氨基-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(170mg,0.58mmol)，加热至40℃，反应2小时。反应完全后加入饱和食盐水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物用正相色谱柱(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，得到目标中间体叔丁基(S)-3-((R)-2-(6-乙氧基-2-(萘-2-基甲基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(13-3)(180mg,收率：73％)。
LCMS:Rt:1.994min；MS m/z(ESI):636.5[M+H]+。
化合物13：
在室温下向叔丁基(S)-3-((R)-2-(6-乙氧基-2-(萘-2-基甲基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(13-3)(180mg)的二氯甲烷(3.0mL)溶液中加入三氟乙酸(1.5mL)，反应液在室温下搅拌1小时。反应完全后减压浓缩，残余物用高效液相制备色谱法(洗脱剂及梯度同实施例1)纯化，得到目标化合物6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-2-(萘-2-基甲基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物13)(32.31mg,收率:21％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.72(d,J＝10.2Hz,1H),9.04(d,J＝7.6Hz,1H),8.51(t,J＝5.7Hz,1H),7.89(t,J＝7.6Hz,3H),7.84(s,1H),7.79(s,1H),7.53-7.48(m,2H),7.40(d,J＝10.6Hz,2H),7.25-7.23(m,4H),4.91(s,2H),4.43-4.29(m,3H),4.29-4.14(m,4H),3.56-3.50(m,2H),3.47-3.42(m,1H),3.12(d,J＝7.6Hz,2H),1.31(t,J＝6.9Hz,3H).
HPLC：98.287％@214nm，94.550％@254nm.
LCMS:Rt:1.067min；MS m/z(ESI):536.3[M+H]+。
实施例13、6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-2-(萘-1-基甲基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物14)的制备
化合物14的合成参照实施例12，将2-(溴甲基)萘替换为1-(溴甲基)萘，最终得到目标产物6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-2-(萘-1-基甲基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物14)(26.71mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.59(d,J＝9.5Hz,1H),9.00(d,J＝9.6Hz,1H),8.47(t,J＝5.9Hz,1H),8.24-8.15(m,1H),8.03-7.86(m,2H),7.78(s,1H),7.64-7.42(m,4H),7.39(s,1H),7.33-7.11(m,4H),5.93(brs,1H),5.19(s,2H),4.33-4.17(m,7H),3.55-3.34(m,2H),3.08(d,J＝8.1Hz,2H),1.29(t,J＝6.9Hz,3H).
HPLC：98.941％@214nm，99.729％@254nm.
LCMS:Rt:1.078min；MS m/z(ESI):536.3[M+H]。
实施例14、6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2-苯基异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物15)的制备
化合物15-1：
室温下将6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(3-3)(200mg，0.80mmol)，碘苯(197mg，0.96mmol)和碳酸铯(522mg，1.6mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5.0mL)中，然后再加入碘化亚铜(15.2mg,0.08mmol)和N,N'-二甲基乙二胺(7.0mg,0.08mmol)。氮气保护下加热至100℃，反应1.5小时。反应完全后，加入水(50mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。有机相合并用饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物用正相色谱柱(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化。得到目标中间体6-乙氧基-1-氧代-2-苯基异吲哚啉-5-羧酸乙酯(15-1)(230mg,收率：88％)。
LCMS:Rt:1.936min；MS m/z(ESI):326.1[M+H]+。
化合物15-2：
室温下将6-乙氧基-1-氧代-2-苯基异吲哚啉-5-羧酸乙酯(15-1)(230mg，0.71mmol)加入到甲醇(6.0mL)和水(6.0mL)的混合溶液中，然后加入氢氧化锂一水合物(297mg，7.1mmol)，加热至50℃，反应1.5小时。反应完全后，将反应体系降温至室温，用1N的盐酸水溶液调节反应液的pH至5.0，用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。有机相合并用饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到目标中间体6-乙氧基-1-氧代-2-苯基异吲哚啉-5-羧酸(15-2)(210mg,收率：99％)。
LCMS:Rt:1.523min；MS m/z(ESI):298.0[M+H]+。
化合物15-3：
室温下将6-乙氧基-1-氧代-2-苯基异吲哚啉-5-羧酸(15-2)(210mg,0.71mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(540mg,1.42mmol)和N,N-二异丙基乙胺(366mg,2.84mmol)加入到超干N,N-二甲基甲酰胺(4.0mL)中，然后加入(S)-3-((R)-2-氨基-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(248mg,0.85mmol)，室温反应2小时。反应完全后加入饱和食盐水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物用正相色谱柱(洗脱剂：乙酸乙酯)纯化，得到目标中间体叔丁基(S)-3-((R)-2-(6-乙氧基-1-氧代-2-苯基异吲哚啉-5-甲酰胺)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(15-3)(240mg,收率：59％)。
LCMS:Rt:2.075min；MS m/z(ESI):572.2[M+H]+。
化合物15：
在0℃下向叔丁基(S)-3-((R)-2-(6-乙氧基-1-氧代-2-苯基异吲哚啉-5-甲酰胺)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(15-3)(240mg)的二氯甲烷(3.0mL)溶液中加入三氟乙酸(1.5mL)，反应液在室温下搅拌1小时。反应完全后减压浓缩，残余物用高效液相制备色谱法(洗脱剂及梯度同实施例1)纯化，得到目标化合物6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2-苯基异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物15)(37.82mg,收率:20％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.70(s,1H),9.03(s,1H),8.57(s,1H),7.99-7.77(m,3H),7.53-7.35(m,3H),7.33-7.07(m,5H),5.98(brs,1H),4.98(s,2H),4.47-4.05(m,5H),3.52-3.46(m,2H),3.13(d,J＝7.6Hz,2H),1.30(t,J＝6.8Hz,3H).
HPLC：99.653％@214nm，99.642％@254nm.
LCMS:Rt:1.334min；MS m/z(ESI):472.4[M+H]+。
实施例15、2-苄基-7-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-甲酰胺盐酸盐(化合物16)的制备
化合物16-2：
将2-(3-溴-4-甲氧基苯基)乙腈(16-1)(10g，44.2mmol)加入到四氢呋喃(100mL)中，冰浴下加入BH3·THF(110mL，110mmol)，升温至70℃反应2小时。反应完全后，将反应体系冷却至0℃，缓慢滴加甲醇(40mL)和浓盐酸(12mL)，升温至70℃继续反应2小时。冷却至室温后浓缩，用10％NaOH溶液调节pH至9。用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，有机相合并后用饱和食盐水洗涤三次，用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩后硅胶柱层析纯化(甲醇/二氯甲烷＝1/20，含0.2％三乙胺)得到目标中间体2-(3-溴-4-甲氧基苯基)乙烷-1-胺(16-2)(8g,收率：79％)。
LCMS:Rt:0.530min；MS m/z(ESI):230.0，232.0[M+H]+。
化合物16-3：
将(三氯甲基)碳酸酯(2.6g，8.7mmol)溶于二氯甲烷(80.0mL)中，冷却至0℃，缓慢加入2-(3-溴-4-甲氧基苯基)乙烷-1-胺(16-2)(4.0g，17.4mmol)，搅拌5分钟后缓慢滴加三乙胺(5mL，34.8mmol)，在0℃反应1小时。然后缓慢加入甲醇(20mL)和三乙胺(5mL，34.8mmol)，升至室温搅拌1小时。反应完全后用饱和食盐水洗涤三次，用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩后得到目标中间体(3-溴-4-甲氧基苯乙基)氨基甲酸甲酯(16-3)(3.7g,收率：57％)。
LCMS:Rt:1.348min；MS m/z(ESI):288.2,290.2[M+H]+。
化合物16-4：
室温下将甲基(3-溴-4-甲氧基苯乙基)氨基甲酸酯(16-3)(3.7g，12.9mmol)加入到伊顿试剂(30mL)中，90℃反应2小时。反应完全后，将反应体系倒入冰水(250mL)中，用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，有机相合并后用饱和食盐水洗涤三次，用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩后硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯：石油醚＝2:1)得到目标中间体6-溴-7-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(16-4)(900mg,收率：27％)。
LCMS:Rt:1.088min；MS m/z(ESI):256.0,258.0[M+H]+。
化合物16-5：
将6-溴-7-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(16-4)(750mg，3.0mmol)加入到四氢呋喃(10.0mL)中，冷却至0℃加入双(三甲硅烷基)氨基钾(4.5mL，4.5mmol)，搅拌1小时后加入溴化苄(610mg，3.0mmol)。反应完全后，加入饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，有机相合并后用饱和食盐水洗涤三次，用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩后得到目标中间体2-苄基-6-溴-7-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(16-5)(800mg,收率：77％)。
LCMS:Rt:1.783min；MS m/z(ESI):346.0，348.0[M+H]+。
化合物16-6：
将2-苄基-6-溴-7-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(16-5)(750mg，2.3mmol)在0℃下加入到1mol/L的三溴化硼二氯甲烷溶液(10.0mL)中。反应在室温搅拌2小时。反应完全后冷却到0℃，缓慢加入冰水(20mL)淬灭，后用二氯甲烷(20mL)萃取三次，有机相合并后用饱和食盐水洗涤三次，用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩后得到粗品目标中间体2-苄基-6-溴-7-羟基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(16-6)(750mg,收率：100％)。
LCMS:Rt:1.419min；MS m/z(ESI):331.9，333.9[M+H]+。
化合物16-7：
将2-苄基-6-溴-7-羟基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(16-6)(750mg，2.3mmol)溶于N-甲基吡咯烷酮(10.0mL)中，加入碳酸铯(1.5g，4.6mmol)和碘乙烷(720mg，4.6mmol),室温搅拌1小时。反应完全后，倒入冰水(100mL)中，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，有机相合并后用饱和食盐水洗涤三次，用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩后得到粗品，目标中间体2-苄基-6-溴-7-乙氧基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(16-7)(800mg,收率：97％)。
LCMS:Rt:2.058min；MS m/z(ESI):360.1，362.1[M+H]+。
化合物16-8：
将2-苄基-6-溴-7-乙氧基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(16-7)(800mg，2.2mmol)溶于乙醇(10.0mL)，加入乙酸钾(660mg，6.6mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(90mg，0.1mmol)。体系内空气置换成CO，升温至70℃搅拌4小时。反应完全后浓缩，溶于乙酸乙酯(20mL)后用饱和食盐水洗涤三次，用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩后反相柱纯化得到目标中间体2-苄基-7-乙氧基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-羧酸乙酯(16-8)(800mg,收率：97％)。
LCMS:Rt:1.774min；MS m/z(ESI):354.1[M+H]+。
化合物16-9：
将2-苄基-7-乙氧基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-羧酸乙酯(16-8)(300mg，0.85mmol)加入到甲醇(5.0mL)和水(5.0mL)的混合溶液中，然后加入氢氧化锂一水合物(357mg，8.5mmol)，加热至50℃，反应1.5小时。反应完全后，将反应体系降温至室温，用1mol/L的盐酸水溶液调节反应液的pH至5.0，后用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。得到目标中间体2-苄基-7-乙氧基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-羧酸(16-9)(250mg,收率：91％)。
LCMS:Rt:1.565min；MS m/z(ESI):326.1[M+H]+。
化合物16-10：
室温下将2-苄基-7-乙氧基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-羧酸(16-9)(250mg,0.77mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(585mg,1.54mmol)和N,N-二异丙基乙胺(397mg,3.08mmol)加入到超干N,N-二甲基甲酰胺(5.0mL)，然后加入(S)-3-((R)-2-氨基-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(269mg,0.92mmol)，室温反应2小时。反应完全后加入饱和食盐水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL)萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物用正相色谱柱(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝1:2)纯化，得到目标中间体叔丁基(S)-3-((R)-2-(2-苄基-7-乙氧基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-羧酰胺基)-1-羟乙基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(16-10)(300mg,收率：65％)。
LCMS:Rt:1.931min；MS m/z(ESI):600.2[M+H]+。
化合物16：
在0℃下向叔丁基(S)-3-((R)-2-(2-苄基-7-乙氧基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-羧酰胺基)-1-羟乙基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(16-10)(300mg)的二氯甲烷(3.0mL)溶液中加入三氟乙酸(1.5mL)，反应液在室温下搅拌1小时。反应完全后减压浓缩，残余物用高效液相制备色谱法(洗脱剂及梯度同实施例1)纯化，得到目标化合物2-苄基-7-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-甲酰胺盐酸盐(化合物16)(30.42mg,收率:12％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ7.76(s,1H),7.69(s,1H),7.37-7.31(m,4H),7.31-7.19(m,5H),4.79(s,2H),4.51-4.34(m,2H),4.30-4.19(m,3H),3.76-3.56(m,3H),3.56-3.48(m,2H),3.30-3.14(m,2H),2.93(t,J＝6.8Hz,2H),1.42(t,J＝6.8Hz,3H)。
HPLC：99.338％@214nm，99.448％@254nm.
LCMS:Rt:1.361min；MS m/z(ESI):500.2[M+H]+。
实施例16、5-苄基-3-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-4-氧代-5,6-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡咯-2-甲酰胺盐酸盐(化合物103)的制备
化合物103-2：
室温下将3-氨基巴豆酸乙酯(103-1)(10.0g，77.5mmol)和吡啶(6.7g，84.8mmol)加入到超干四氢呋喃(90mL)中，在-20℃下滴加氯乙酰氯(9.2g，82.1mmol)。滴加完毕后，升温至室温反应3.0小时。反应完全后，将反应液缓慢加入到水(200mL)中，用乙酸乙酯(200mL)萃取2次。有机相合并，用饱和食盐水(200mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥后过滤。滤液减压浓缩后所得残余物加入到乙酸乙酯(40mL)中，然后向其中加入石油醚(80mL)，搅拌30分钟，过滤。滤饼用石油醚(80mL)冲洗，收集滤饼干燥后得到(E)-3-氨基-2-(2-氯乙酰基)-2-丁烯酸乙酯(103-2)(12.0g,收率：76％)。
LCMS:Rt:1.336min；MS m/z(ESI):206.0[M+H]+。
化合物103-3：
室温下将(E)-3-氨基-2-(2-氯乙酰基)-2-丁烯酸乙酯(103-2)(12.0g，58.4mmol)，加入到无水乙醇(120mL)中，室温下缓慢滴加硫氢化钠一水合物(16.8g，226.8mmol)的水溶液(24mL)。滴加完毕后，室温反应1.5小时。反应完全后将溶液缓慢加入到水(340mL)中，有黄色固体析出，搅拌30分钟，过滤。收集滤饼，滤饼用乙酸乙酯(200mL)溶解，用饱和食盐水(200mL)和水(200mL)分别洗涤1次，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩得到4-羟基-2-甲基噻吩-3-羧酸乙酯(103-3)(8.3g,收率：76％)。
LCMS:Rt:1.890min；MS m/z(ESI):187.0[M+H]+。
化合物103-4：
室温下将4-羟基-2-甲基噻吩-3-羧酸乙酯(103-3)(8.3g，44.6mmol)和碳酸铯(44.0g，133.9mmol)加入到乙腈(210mL)中，然后再加入碘乙烷(18.0mL，133.9mmol)。反应体系加热至60℃搅拌反应16.0小时。反应完全后将反应液冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩。残余物用正相色谱柱(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝60:1)纯化，得到4-乙氧基-2-甲基噻吩-3-羧酸乙酯(103-4)(7.4g,收率：77％)。
LCMS:Rt:1.108min；MS m/z(ESI):215.3[M+H]+。
化合物103-5：
室温下将4-乙氧基-2-甲基噻吩-3-羧酸乙酯(103-4)(7.4g,34.6mmol)和N-溴代丁二酰亚胺(6.5g，36.3mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(47mL)中，然后加入醋酸(19mL)。室温反应16.0小时。反应完全后加入水(150mL)，用乙酸乙酯(150mL)萃取2次。有机相合并，用饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩。残余物经正相色谱柱(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝100:1)纯化，得到5-溴-4-乙氧基-2-甲基噻吩-3-羧酸乙酯(103-5)(8.5g,收率：84％)。
LCMS:Rt:0.951min；MS m/z(ESI):292.9，294.9[M+H]+。
化合物103-6：
室温下将5-溴-4-乙氧基-2-甲基噻吩-3-羧酸乙酯(103-5)(8.5g，28.9mmol)和过氧化苯甲酰(BPO)(932.0mg，2.89mmol)加入到四氯化碳(170mL)中，然后分批加入N-溴代丁二酰亚胺(5.4g，30.3mmol)。添加完毕，加热至80℃，N2氛围下，反应8.0小时。反应完全后，将反应液减压浓缩除去四氯化碳，然后加入水(200mL)，用乙酸乙酯(150mL)萃取2次。有机相合并，用饱和食盐水洗涤1次，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩。残余物经正相色谱柱(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝80:1)纯化，得到5-溴-2-(溴甲基)-4-乙氧基噻吩-3-羧酸乙酯(103-6)(7.5g,收率：70％)。
LCMS:Rt:1.447min；MS m/z(ESI):373.0[M+H]+。
化合物103-7：
室温下将中间体5-溴-2-(溴甲基)-4-乙氧基噻吩-3-羧酸乙酯(103-6)(1.0g,2.7mmol)和苄胺(302.0mg,2.8mmol)加入到乙腈(25mL)中，然后在0℃下加入碳酸钾(557.0mg，4.0mmol)中，室温反应16.0小时。反应完全后，向反应体系加入水(60mL)，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次。有机相合并，用饱和食盐水洗涤1次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物经正相色谱柱(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化，得到2-((苄氨基)甲基)-5-溴-4-乙氧基噻吩-3-羧酸乙酯(103-7)(740.0mg,收率：69％)。
LCMS:Rt:1.079min；MS m/z(ESI):397.9和399.9[M+H]+。
化合物103-8：
室温下将2-((苄氨基)甲基)-5-溴-4-乙氧基噻吩-3-羧酸乙酯(103-7)(600.0mg，1.51mmol)加入到甲醇(9mL)，四氢呋喃(9mL)和水(9mL)的混合溶剂中，然后加入氢氧化锂一水合物(633.0mg，15.1mmol)中，加热至35℃，反应3.0小时。反应完全后，将反应体系降温至室温，用1mol/L的盐酸水溶液调节反应液的pH至2.0，用乙酸乙酯:异丙醇(V/V＝9:1，45mL)萃取2次。有机相合并用饱和食盐水洗涤1次，无水硫酸钠干燥过滤。滤液减压浓缩得到2-((苄氨基)甲基)-5-溴-4-乙氧基噻吩-3-羧酸(103-8)粗品(550.0mg，收率：98％)。
LCMS:Rt:1.078min；MS m/z(ESI):370.0,372.0[M+H]+。
化合物103-9：
室温下将2-((苄氨基)甲基)-5-溴-4-乙氧基噻吩-3-羧酸(103-8)(550.0mg,1.49mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(1.13g,2.97mmol)和N,N-二异丙基乙胺(716.0mg,5.94mmol)加入到超干N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，室温反应2.0小时。反应完全后加入饱和食盐水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物经反相色谱柱(乙腈66％水溶液)纯化，得到5-苄基-2-溴-3-乙氧基-5,6-二氢-4H-噻吩[2,3-c]吡咯-4-酮(103-9)(190.0mg,收率：36％)。
LCMS:Rt:1.878min；MS m/z(ESI):351.9,353.9[M+H]+。
化合物103-10：
室温下将5-苄基-2-溴-3-乙氧基-5,6-二氢-4H-噻吩[2,3-c]吡咯-4-酮(103-9)(190.0mg,0.54mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(20.0mg，0.027mmol)和醋酸钾(159.0mg，1.62mmol)加入到无水乙醇(5mL)中，CO置换3次，加热至70℃反应16.0小时。反应完全后冷却至室温，减压浓缩。残余物经正相色谱柱(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝10:1)纯化，得到5-苄基-3-乙氧基-4-氧代-5,6-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡咯-2-羧酸乙酯(103-10)(135.0mg,收率：72％)。
LCMS:Rt:1.650min；MS m/z(ESI):346.0[M+H]+。
化合物103-11：
室温下将5-苄基-3-乙氧基-4-氧代-5,6-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡咯-2-羧酸乙酯(103-10)(120.0mg，0.348mmol)加入到乙腈(2.0mL)，四氢呋喃(2.0mL)和水(2.0mL)的混合溶剂中，然后加入氢氧化锂一水合物(146.0mg，3.48mmol)中，室温反应3.0小时。反应完全后，将反应体系降温至0℃，用1mol/L的盐酸水溶液调节反应液的pH至5.0，用乙酸乙酯(30mL)萃取2次。有机相合并用饱和食盐水洗涤1次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩得到5-苄基-3-乙氧基-4-氧代-5,6-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡咯-2-羧酸(103-11)(90.0mg,收率：82％)。
LCMS:Rt:1.189min；MS m/z(ESI):318.0[M+H]+。
化合物103-12：
室温下将5-苄基-3-乙氧基-4-氧代-5,6-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡咯-2-羧酸(103-11)(90.0mg,0.284mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(216.0mg,0.568mmol)和N,N-二异丙基乙胺(146mg,1.136mmol)加入到超干N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)，然后加入(S)-3-((R)-2-氨基-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(124.0mg,0.426mmol)，室温反应2.0小时。反应完全后加入饱和食盐水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物用正相色谱柱(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化，得到(S)-3-((R)-2-(5-苄基-3-乙氧基-4-氧代-5,6-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡咯-2-甲酰胺基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(103-12)(96.0mg,收率：57％)。
LCMS:Rt:1.930min；MS m/z(ESI):592.3[M+H]+。
化合物103：
在0℃下向(S)-3-((R)-2-(5-苄基-3-乙氧基-4-氧代-5,6-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡咯-2-甲酰胺基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(103-12)(96.0mg)的二氯甲烷(2.0mL)溶液中加入三氟乙酸(1.0mL)，反应1小时。反应完全后减压浓缩，残余物用高效液相制备色谱法(洗脱剂及梯度同实施例1)纯化，得到目标化合物5-苄基-3-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-4-氧代-5,6-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡咯-2-甲酰胺盐酸盐(化合物103)(34.9mg,收率:41％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ7.37-7.32(m,2H),7.32-7.24(m,6H),7.24-7.19(m,1H),4.90-4.85(m,2H),4.72(s,2H),4.51-4.33(m,4H),4.22-4.15(m,1H),3.74(dd,J＝5.2Hz,J＝14.0Hz,1H),3.67-3.58(m,1H),3.52(dd,J＝7.6Hz,J＝14.0Hz,1H),3.29-3.23(m,1H),3.20-3.11(m,1H),1.42(t,J＝7.2Hz,3H).
HPLC：99.411％@214nm，99.324％@254nm.
LCMS:Rt:1.353min；MS m/z(ESI):492.1[M+H]+。
实施例17、6-乙氧基-2-(4-氟苯乙基)-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物104)的制备
参考实施例11(化合物12)的合成方法，将第一步反应中的(2-溴乙基)苯替换为1-(2-溴乙基)-4-氟苯，得到目标化合物6-乙氧基-2-(4-氟苯乙基)-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物104)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ7.95(s,1H),7.40(s,1H),7.31-7.22(m,6H),6.99-6.95(m,2H),4.49-4.37(m,2H),4.35(s,2H),4.27-4.20(m,3H),3.85(t,J＝7.2Hz,2H),3.73-3.59(m,3H),3.26-3.17(m,2H),2.99(t,J＝7.2Hz,2H),1.40(t,J＝7.2Hz,3H).
LCMS:Rt:1.329min；MS m/z(ESI):518.4[M+H]+。
实施例18、6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2-(2-(吡啶-3-基)乙基)异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物105)的制备
/>
化合物105-2：
室温下将2-(吡啶-3-基)乙基-1-醇(700mg，5.69mmol)、三乙胺(1.7g,17mmol)加入到二氯甲烷(15mL)中，0℃下滴加甲基磺酰氯(850mg,7.39mmol)，室温反应2小时。反应完全后，将反应液中加硅胶浓缩，正相色谱柱(洗脱剂：乙酸乙酯，0.3％三乙胺)纯化，得到目标中间体2-(吡啶-3-基)甲磺酸乙酯(105-2)(720mg)。
LCMS:Rt:0.403min；MS m/z(ESI):202.1[M+H]+。
化合物105-3：
室温下将6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(3-3)(250mg，1mmol)、2-(吡啶-3-基)甲磺酸乙酯(105-2)(423mg，2.1mmol)和碳酸铯(748mg，2.3mmol)加到乙腈(7mL)中，80℃反应16小时。反应完全后，待反应液冷却至室温，将反应液中加硅胶浓缩，正相色谱柱纯化(洗脱剂：二氯甲烷:甲醇＝15:1，含0.3％三乙胺)纯化，收集产物、减压浓缩得到目标中间体6-乙氧基-1-氧代-2-(2-(吡啶-3-基)乙基)异吲哚啉-5-羧酸乙酯(105-3)(100mg,收率：28.2％)。
LCMS:Rt:0.908min；MS m/z(ESI):355.1[M+H]+。
其余步骤参考实施例11(化合物12)第2步至第4步的合成方法，得到目标化合物6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2-(2-(吡啶-3-基)乙基)异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物105)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ8.87(s,1H),8.74(d,J＝5.7Hz,1H),8.59(d,J＝8.1Hz,1H),8.05-7.96(m,2H),7.34(s,1H),7.32-7.19(m,4H),4.59(s,2H),4.51-4.37(m,2H),4.32-4.25(m,1H),4.24-4.17(m,2H),4.01(t,J＝6.8Hz,2H),3.77-3.57(m,3H),3.35-3.31(m,1H),3.30-3.29(m,1H),3.29-3.17(m,2H),1.40(t,J＝7.0Hz,3H).
LCMS:Rt:1.240min；MS m/z(ESI):501.1[M+H]+。
实施例19、6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2-(吡啶-3-甲基)异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物19)的制备
参考实施例5(化合物6)的合成方法，将第一步中的4-氟溴苄替换为3-(溴甲基)吡啶氢溴酸盐，得到目标化合物6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2-(吡啶-3-甲基)异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物19)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ8.55(d,J＝2Hz,1H),8.48-8.47(m,1H),8.02(s,1H),7.82-7.79(m,1H),7.48(s,1H),7.44-7.41(m,1H),7.11-7.09(m,3H),7.03-7.02(m,1H),4.86(s,2H),4.42(s,2H),4.27(q,J＝6.8Hz,2H),4.02(d,J＝4Hz,2H),3.86-3.84(m,1H),3.76-3.72(m,1H),3.59-3.54(m,1H),2.98-2.87(m,3H),1.47(t,J＝7.2Hz,3H).
LCMS:Rt:1.533min；MS m/z(ESI):487.1[M+H]+。
实施例20、2-(3-氯苄基)-6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物106)的制备
参考实施例5(化合物6)的合成方法，将第一步中的4-氟溴苄替换为1-(溴甲基)-3-氯苯，得到目标化合物2-(3-氯苄基)-6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物106)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ7.96(s,1H),7.48(s,1H),7.35-7.20(m,8H),4.79(s,2H),4.44-4.36(m,4H),4.28-4.21(m,3H),3.68-3.60(m,3H),3.25-3.21(m,2H),1.41(t,J＝7Hz,3H)
LCMS:Rt:1.068min；MS m/z(ESI):520.2[M+H]+。
实施例21、6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-2-(3-甲氧基苄基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物107)的制备
参考实施例5(化合物6)的合成方法，将第一步中的4-氟溴苄替换为1-(溴甲基)-3-甲氧基苯，得到目标产物6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-2-(3-甲氧基苄基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物107)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ7.95(s,1H),7.47(s,1H),7.29-7.20(m,5H),6.87-6.83(m,3H),4.76(s,2H),4.44-4.35(m,4H),4.27-4.21(m,3H),3.75(s,3H),3.71-3.58(m,3H),3.25-3.20(m,2H),1.41(t,J＝7Hz,3H)。
LCMS:Rt:0.998min；MS m/z(ESI):516.2[M+H]+。
实施例22、6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-2-异丁基-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物108)的制备
化合物108-2：
/>
室温下将6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(3-3)(200mg，0.8mmol)、1-溴-2-甲基丙烷(548mg，4mmol)和碳酸铯(520mg，1.6mmol)溶于乙腈(10mL)，氩气保护，80℃反应24小时。反应完成后，直接加硅胶浓缩，正相硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)，收集产品浓缩得6-乙氧基-2-异丁基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(108-2)(100mg,收率：40.9％)。
LCMS:Rt:1.767min；MS m/z(ESI):306.2[M+H]+。
化合物108-3：
室温下将6-乙氧基-2-异丁基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(108-2)(90mg，0.29mmol)加入到乙醇(2.0mL)、四氢呋喃(2.0mL)和水(1.0mL)的混合溶液中，然后加入氢氧化钠(35mg，0.88mmol)，氩气保护加热至40℃，反应2小时。反应完全后，将反应体系降温至0℃，用1mol/L的盐酸水溶液调节反应液的pH至5.0，减压浓缩，得到目标中间体6-乙氧基-2-异丁基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸(108-3)(90mg,收率：100％)。
LCMS:Rt:0.851min；MS m/z(ESI):278.1[M+H]+。
化合物108-4：
室温下将6-乙氧基-2-异丁基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸(108-3)(90mg,0.32mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(148mg,0.39mmol)和N,N-二异丙基乙胺(167mg,1.3mmol)加入到超干N,N-二甲基甲酰胺(2.0mL)，反应15分钟，然后加入(S)-3-((R)-2-氨基-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(113mg,0.39mmol)，室温反应2小时。反应完全后直接反相纯化(乙腈:水＝2:1)，收集产品浓缩得(S)-3-((R)-2-(6-乙氧基-2-异丁基-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰氨基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(108-4)(170mg,收率：96.2％)。
LCMS:Rt:1.353min；MS m/z(ESI):552.3[M+H]。
化合物108：
在室温下，将(S)-3-((R)-2-(6-乙氧基-2-异丁基-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰氨基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(108-4)(160mg，0.29mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，滴加4mol/L的盐酸二氧六环溶液(1mL)，反应3小时，反应完成后，将反应液浓缩，加纯水(10mL)溶解，冷冻干燥，得到目标化合物6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-2-异丁基-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物108)(110mg,收率:83％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ8.01(s,1H),7.43(s,1H),7.22-7.29(m,4H),4.50-4.38(m,4H),4.27-4.21(m,3H),3.75-3.60(m,3H),3.43(d,J＝7.6Hz,2H),3.27-3.18(m,2H),2.13-2.06(m,1H),1.42(t,J＝6.8Hz,3H),0.94(d,J＝10.4Hz,6H)。
LCMS:Rt:1.403min；MS m/z(ESI):452.3[M+H]+。
实施例23、6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-2-新戊基-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物109)的制备
化合物109-2：
将5-溴-6-甲氧基异吲哚-1-酮(1-2)(900mg,3.72mmol)溶于二氧六环(5mL)，加入浓盐酸(40mL)，在110℃反应48小时。冷却至室温浓缩得粗产物2-(氨基甲基)-4-溴-5-甲氧基苯甲酸(109-2)盐酸盐(950mg,收率：86％)。
LCMS:Rt:0.582min；MS m/z(ESI):260.1,262.1[M+H]+。
化合物109-3：
将2-(氨基甲基)-4-溴-5-甲氧基苯甲酸(109-2)盐酸盐(900mg,3.5mmol)和醋酸(2.5mL)溶于甲醇(250mL)，加入特戊醛(9g，105mmol)，在室温下分批次加入氰基硼氢化钠(13.2g，210mmol)。室温反应12小时，反应液冰浴冷却，缓慢加入6mol/L HCl调节pH到1，搅拌1h后加1mol/L NaOH调节pH到7，浓缩至大量固体析出。过滤后滤液反相纯化，得4-溴-5-甲氧基-2-((新戊胺)甲基)苯甲酸(109-3)(470mg,收率：40％)。
LCMS:Rt:1.456min；MS m/z(ESI):330.0,332.0[M+H]+。
化合物109-4：
/>
室温下将4-溴-5-甲氧基-2-((新戊胺)甲基)苯甲酸(109-3)(450mg,1.36mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(1.04g,2.73mmol)和N,N-二乙基乙胺(550mg,5.45mmol)加入到超干N,N-二甲基甲酰胺(10.0mL)，室温反应2小时。反应完全后加入水(30mL)，然后用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。有机相合并，用饱和食盐水(50mL)洗涤3次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物用正相色谱柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)，收集产品浓缩，得5-溴-6-甲氧基-2-新戊基异吲哚啉-1-酮(109-4)(260mg,收率：61％)。
LCMS:Rt:1.966min；MS m/z(ESI):312.0[M+H]+。
化合物109-5：
在0℃下将5-溴-6-甲氧基-2-新戊基异吲哚啉-1-酮(109-4)(260mg，0.83mmol)加入二氯甲烷(2.0mL)溶液中，然后再慢慢滴加三溴化硼(2.0mL)，室温反应2小时。反应完全后加入水(30mL)，然后用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。有机相合并，用饱和食盐水(50mL)洗涤3次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。得到目标中间体5-溴-6-羟基-2-新戊基异吲哚啉-1-酮(109-5)(230mg,收率：93％)。
LCMS:Rt:1.692min；MS m/z(ESI):298.0,300.0[M+H]+。
化合物109-6：
室温下将5-溴-6-羟基-2-新戊基异吲哚啉-1-酮(109-5)(230mg,0.77mmol)，碳酸钾(320mg,2.3mmol)和碘乙烷(181mg,1.16mmol)加入到乙腈(8.0mL)中，升温至60℃反应3小时。反应完全后将反应液过滤，滤液减压浓缩。残余物用正相色谱柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)，收集产品浓缩得5-溴-6-乙氧基-2-新戊基异吲哚啉-1-酮(109-6)(142mg,收率：56％)。
LCMS:Rt:2.141min；MS m/z(ESI):326.0,328.0[M+H]+。
化合物109-7：
室温下将5-溴-6-乙氧基-2-新戊基异吲哚啉-1-酮(109-6)(142mg，0.44mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(16mg，0.02mmol)和醋酸钾(128mg，1.31mmol)加入到无水乙醇(10mL)中，CO置换3次，加热至70℃反应3小时。反应完全后冷却至室温，将反应液减压浓缩，加入饱和食盐水(30mL)，然后用乙酸乙酯(30mL)萃取两次，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物经正相色谱柱(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化，得到6-乙氧基-2-新戊基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(109-7)(130mg,收率：92％)。
LCMS:Rt:1.889min；MS m/z(ESI):320.1[M+H]+。
化合物109-8：
室温下将6-乙氧基-2-新戊基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(109-7)(130mg，0.4mmol)加入到甲醇(3mL)和水(3mL)的混合溶剂中，然后加入氢氧化锂一水合物(51.2mg，1.22mmol)中，加热至50℃，反应2小时。反应完全后，将反应体系降温至0℃，用1mol/L的盐酸水溶液调节反应液的pH至5.0，后用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到目标中间体6-乙氧基-2-新戊基-1-氧代异吲哚-5-羧酸(109-8)(100mg,收率：86％)。
LCMS:Rt:1.523min；MS m/z(ESI):292.1[M+H]+。
化合物109-9：
室温下将6-乙氧基-2-新戊基-1-氧代异吲哚-5-羧酸(109-8)(100mg,0.34mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(260mg,0.68mmol)和N,N-二乙基乙胺(138.4mg,1.37mmol)加入到超干N,N-二甲基甲酰胺(5.0mL)，反应15分钟，然后加入(S)-3-((R)-2-氨基-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(120mg,0.41mmol)，室温反应2小时。反应完全后加入水(30mL)，然后用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。有机相合并，用饱和食盐水(50mL)洗涤3次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物用正相色谱柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)，收集产品浓缩得(S)-3-((R)-2-(6-乙氧基-2-新戊基-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(109-9)(120mg)。
LCMS:Rt:2.029min；MS m/z(ESI):566.3[M+H]+。
化合物109：
在0℃下，将(S)-3-((R)-2-(6-乙氧基-2-新戊基-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(109-9)(120mg，0.21mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，滴加三氟乙酸溶液(1mL)，反应1小时。反应完全后减压浓缩，残余物用高效液相制备色谱法(洗脱剂及梯度同实施例1)纯化，得到目标化合物6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-2-新戊基-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物109)(79.73mg,收率:75％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ7.99(s,1H),7.43(s,1H),7.31-7.21(m,4H),4.59(s,2H),4.49-4.36(m,2H),4.28-4.21(m,3H),3.74-3.59(m,3H),3.42(s,2H),3.29-3.17(m,2H),1.41(t,J＝7Hz,3H),1.02(s,9H).
LCMS:Rt:0.992min；MS m/z(ESI):466.3[M+H]+。
实施例24、2-(苄氧基)-6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺(化合物110)的制备
化合物110-2：
室温下将钠(1.96g，85.4mmol)缓慢加入乙醇(100mL)，溶解后加入1-溴-5-氟-2-甲基-4-硝基苯(10.0g，42.7mmol)，常温反应2小时。反应完成后，用1mol/L盐酸调节pH值为6，加入水溶解反应液中的盐，过滤，干燥，得1-溴-5-乙氧基-2-甲基-4-硝基苯(110-2)粗品(11.0g)。
化合物110-3：
室温下将1-溴-5-乙氧基-2-甲基-4-硝基苯(110-2)(6.0g，23.2mmol)，醋酸钾(6.8g，69.6mmol)溶于乙醇(80mL)中，加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(847.9mg，1.16mmol)，CO氛围下，70℃反应16小时。反应完毕后过滤除去不溶物，反应液浓缩，硅胶柱正相纯化(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)，收集产品浓缩得5-乙氧基-2-甲基-4-硝基苯甲酸乙酯(110-3)(3.0g)。
化合物110-4：
室温下将5-乙氧基-2-甲基-4-硝基苯甲酸乙酯(110-3)(3.00g，11.9mmol)加入甲醇(20mL)，溶解后加入钯碳(220mg，0.238mmol)反应1小时，TLC检查反应完全。过滤不溶物，反应液浓缩得到4-氨基-5-乙氧基-2-甲基苯甲酸乙酯(2.0g)。
化合物110-5：
在室温下，将4-氨基-5-乙氧基-2-甲基苯甲酸乙酯(110-4)(1.90g，8.12mmol)用6mol/L盐酸(50mL)溶解后，加入亚硝酸钠(673mg，9.71mmol)与碘化钾(13.47g，81.21mmol)常温反应16小时，TLC检查反应完全后，用碳酸钠调pH为碱性，用乙酸乙酯(40mL)萃取2次，氯化钠溶液(30mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥。过滤。滤液浓缩后用硅胶柱正相纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)，收集产品浓缩得5-乙氧基-4-碘-2-甲基苯甲酸乙酯(110-5)(2.33g)。
化合物110-6：
在室温下，将5-乙氧基-4-碘-2-甲基苯甲酸乙酯(110-5)(2.33g，6.69mmol)，N-溴代琥珀酰亚胺(2.37g，13.4mmol)，偶氮二异丁腈(0.22g，1.34mmol)用四氯化碳(25mL)溶解后，N2保护，80℃反应48小时，TLC检测反应完毕后，直接浓缩得到产品2-(溴甲基)-5-乙氧基-4-碘苯甲酸乙酯(110-6)(4.4g)。
化合物110-7：
在室温下，将2-(溴甲基)-5-乙氧基-4-碘苯甲酸乙酯(110-6)(2g，4.84mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶解后，加入邻苄基羟胺(0.6mL，4.84mmol),N,N-二异丙基乙胺(1.6mL，9.68mmol)，40℃反应3小时，反应完全后，加水稀释，水相用乙酸乙酯(30mL)萃取2次，合并有机相用氯化钠溶液(30mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥。滤液浓缩后硅胶柱正相纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)，收集产品浓缩得2-(((苄氧基)氨基)甲基)-5-乙氧基-4-碘苯甲酸乙酯(110-7)(1.51g)。
LCMS:Rt:2.146min；MS m/z(ESI):455.9[M+H]+。
化合物110-8：
在室温下，将2-(((苄氧基)氨基)甲基)-5-乙氧基-4-碘苯甲酸乙酯(110-7)(1.40g，3.07mmol)加入甲醇(15mL)溶解后，加入碳酸钾(1.31g，9.23mmol)，80℃反应16小时，反应完全后，过滤除去不溶物，滤液浓缩正相纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)。收集产品浓缩得2-(苄氧基)-6-乙氧基-5-碘异吲哚啉-1-酮(110-8)(580mg)。
LCMS:Rt:1.820min；MS m/z(ESI):409.9[M+H]+。
化合物110-9：
在室温下，将2-(苄氧基)-6-乙氧基-5-碘异吲哚啉-1-酮(110-8)(580mg，1.41mmol)，醋酸钾(418mg，4.25mmol)溶于乙醇(5mL)中，加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(51.3mg，0.07mmol)，CO氛围下70℃反应6小时。反应完成后，过滤，滤液浓缩后用硅胶柱正相纯化(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)，收集产品浓缩得2-(苄氧基)-6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(110-9)(98mg)。
LCMS:Rt:1.522min；MS m/z(ESI):356.1[M+H]+。
化合物110-10：
在室温下，将2-(苄氧基)-6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(110-9)(98mg，0.28mmol)加入甲醇(2mL)，水(2mL)溶解后加入氢氧化锂一水合物(46.4mg，1.1mmol)常温反应1小时，反应完全后，加水稀释，水相用乙酸乙酯(30mL)萃取2次，合并有机相，用氯化钠溶液(30mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥。过滤后滤液浓缩，得2-(苄氧基)-6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸(110-10)(92mg)。
LCMS:Rt:1.458min；MS m/z(ESI):328.0[M+H]+。
化合物110-11：
在室温下，将2-(苄氧基)-6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸(110-10)(92mg，0.28mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，溶解后加入(S)-3-((R)-2-氨基-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(90.5mg，0.31mmol)，2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(129.5mg，0.42mmol)和三乙胺(113.12mg，1.12mmol)。常温反应1小时，反应完全后，加水稀释，水相用乙酸乙酯(30mL)萃取2次，合并有机相，用氯化钠溶液(30mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥后过滤。滤液浓缩后用硅胶正相纯化(石油醚:乙酸乙酯＝1:2)。收集产品，浓缩得(S)-3-((R)-2-(2-(苄氧基)-6-乙氧基-1-氧基异吲哚啉-5-甲酰胺基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(110-11)(157mg)。
LCMS:Rt:1.989min；MS m/z(ESI):602.2[M+H]+。
化合物110：
在室温下，将(S)-3-((R)-2-(2-(苄氧基)-6-乙氧基-1-氧基异吲哚啉-5-甲酰胺基)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(110-11)(157mg，0.26mmol)溶于二氯甲烷(5mL)，加入三氟乙酸(3mL)，常温反应1小时，反应完毕后加水稀释用碳酸钠溶液调节pH值为8，用二氯甲烷(5mL)萃取2次，合并有机相用氯化钠溶液(5mL)洗涤2次。有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液浓缩，加入甲醇(3mL)析出固体，打浆1小时，抽滤，所得固体旋干得到目标化合物2-(苄氧基)-6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺(化合物110)(80mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.46(t,J＝5.4Hz,1H),7.92(s,1H),7.54–7.36(m,6H),7.09(d,J＝3.2Hz,3H),7.09(d,J＝5.2Hz,1H),5.10(s,2H),5.05(d,J＝5.6Hz,1H),4.51(s,2H),4.25-3.95(m,2H),3.94-3.83(m,2H),3.69-3.59(m,2H),2.80(d,J＝3.6Hz,2H),2.63(d,J＝5.6Hz,1H),2.42-2.32(m,2H),1.37(t,J＝6.8Hz,3H).
LCMS:Rt:0.986min；MS m/z(ESI):502.2[M+H]+。
实施例25、6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物25)的制备
化合物25-2：
室温下将6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(3-3)(500mg，2mmol)加入到超干N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，然后分批加入钠氢(60％)(80mg，2mmol)，室温搅拌1小时。再加入4-(溴甲基)四氢-2H-吡喃(3.59g，20mmol)，室温反应2小时。反应完全后，将反应液冷却至室温，反应完全后加入饱和食盐水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。粗品用正相色谱柱(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝1:2)纯化，得到中间体6-乙氧基-1-氧代-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)异吲哚啉-5-羧酸乙酯(25-2)(150mg)。
LCMS:Rt:1.189min；MS m/z(ESI):348.3[M+H]+。
其余步骤参考实施例5步骤2至步骤4，将化合物6-1替换为化合物25-2，得到目标化合物6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)异吲哚啉-5-甲酰胺(化合物25)盐酸盐。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ8.02(s,1H),7.44(s,1H),7.32-7.23(m,4H),4.50-4.37(m,4H),4.28-4.21(m,3H),3.95-3.92(m,2H),3.75-3.60(m,4H),3.52(d,J＝7.2Hz,1H),3.44-3.36(m,2H),3.28-3.15(m,2H),2.15-2.02(m,1H),1.63-1.54(m,2H),1.45-1.29(m,5H).
LCMS:Rt:1.300min；MS m/z(ESI):494.4[M+H]。
实施例26、6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-2-((1-甲基哌啶-4-基)甲基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物26)的制备
化合物26-2：
室温下将6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(3-3)(200mg，0.8mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，然后再加入氢化钠(60％)(32mg,0.8mmol)，反应0.5小时，再加入4-(溴甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.2g,8mmol)，室温反应6小时。反应完全后，将反应液冷却至室温，缓慢滴加水(10mL)淬灭，用乙酸乙酯(10mL)萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。粗品用薄层制备板(石油醚:乙酸乙酯＝1:2)纯化，得到目标中间体2-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)甲基)-6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(26-2)(90mg)。
LCMS:Rt:1.717min；MS m/z(ESI):391.1[M-tBu]。
化合物26-3：
室温下将2-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)甲基)-6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(26-2)(260mg，0.58mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，滴加三氟乙酸(1mL)，反应2小时，反应完成后直接将反应液减压浓缩得到目标中间体6-乙氧基-1-氧代-2-(哌啶-4-基甲基)异吲哚啉-5-羧酸乙酯(26-3)三氟乙酸盐(280mg)。
LCMS:Rt:0.764min；MS m/z(ESI):347.1[M+H]+。
化合物26-4：
室温下将6-乙氧基-1-氧代-2-(哌啶-4-基甲基)异吲哚啉-5-羧酸乙酯(26-3)三氟乙酸盐(110mg，0.32mmol)溶于甲醇(2mL)和乙酸(0.5mL)混合溶剂中，加多聚甲醛(20mg，0.64mmol)和氰基硼氢化钠(100mg，1.59mmol)，室温反应2小时，反应完全后加水(10mL)，乙酸乙酯(10mL)萃取两遍，有机相浓缩得6-乙氧基-2-((1-甲基哌啶-4-基)甲基)-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(26-4)(90mg)。
LCMS:Rt:0.772min；MS m/z(ESI):361.1[M+H]+。
其余步骤参考实施例5步骤2至步骤4，将化合物6-1替换为化合物26-4，得到目标化合物6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-2-((1-甲基哌啶-4-基)甲基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物26)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ7.92(s,1H),7.33(s,1H),7.18-7.13(m,4H),4.44-4.40(m,2H),4.38-4.32(m,2H),4.19-4.12(m,3H),3.66-3.41(m,7H),3.14-3.08(m,2H),2.93-2.87(m,2H),2.75(s,3H),1.89-1.84(m,2H),1.53-1.47(m,3H),1.32(t,3H).
LCMS:Rt:0.382min；MS m/z(ESI):507.2[M+H]+。
实施例27、2-((1-乙酰基哌啶-4-基)甲基)-6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物27)的制备
化合物27-2：
室温下将6-乙氧基-1-氧代-2-(哌啶-4-基甲基)异吲哚啉-5-羧酸乙酯(26-3)三氟乙酸盐(110mg，0.32mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，滴加醋酸酐(46mg，0.45mmol)和三乙胺(114mg，1.13mmol)。室温反应2小时，反应完全后加水(10mL)，用二氯甲烷(10mL)萃取两遍，有机相浓缩得产物2-((1-乙酰基哌啶-4-基)甲基)-6-乙氧基-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸乙酯(27-2)(140mg)。
其余步骤参考实施例5步骤2至步骤4，将化合物6-1替换为化合物27-2，得到目标化合物2-((1-乙酰基哌啶-4-基)甲基)-6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物27)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.84(d,J＝10.0Hz,1H),9.08-9.06(m,1H),8.52(t,J＝5.7Hz,1H),7.88(s,1H),7.30(s,1H),7.28-7.19(m,4H),4.44(s,2H),4.40-4.05(m,7H),3.59-3.50(m,3H),3.46-3.35(m,3H),3.12(d,J＝6.3Hz,2H),2.97(t,J＝12.0Hz,1H),1.97(s,3H),1.57(t,J＝13.3Hz,2H),1.30(t,J＝6.9Hz,3H),1.24(s,1H),1.13-1.11(m,11.9Hz,1H),1.00-0.97(m,1H).
LCMS:Rt:0.758min；MS m/z(ESI):535.7[M+H]+。
实施例28、2-(((1s,4S)-2-氧杂双环[2.1.1]己烷-1-基)甲基)-6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺(化合物111)的制备
化合物111-2：
室温下将3-亚甲基环丁烷-1-羧酸(4g，35.7mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(60mL)中，氮气保护，0℃下滴加碘乙烷(6.6g，42.8mmol)，室温下反应16小时。反应完成后，0℃下将反应液缓慢倒入1mol/L的盐酸(200mL)中，用甲基叔丁基醚(200mL)萃取两次，有机相用水(50mL)洗2次，饱和氯化钠溶液(100mL)洗3次，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得3-亚甲基环丁烷-1-羧酸乙酯(111-2)(4.1g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ4.81-4.77(m,2H),4.08(q,J＝7.1Hz,2H),3.19-3.09(m,1H),2.92-2.80(m,4H),1.18(t,J＝7.1Hz,3H).
化合物111-3：
0℃下将四氢铝锂(2.2g,58mmol)加到四氢呋喃(70mL)中，将3-亚甲基环丁烷-1-羧酸乙酯(111-2)(4.1g,29mmol)溶于四氢呋喃(15mL)滴加到反应体系中，室温反应4小时，反应完成后，0℃下滴加饱和氯化铵溶液至大量固体析出，加乙腈(200mL)溶解，过滤，滤液用无水硫酸钠干燥、浓缩得(3-亚甲基环丁基)甲醇(111-3)(2.77g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ4.75-4.69(m,2H),4.55(t,J＝5.3Hz,1H),3.39(t,J＝5.7Hz,2H),2.69-2.56(m,2H),2.41-2.26(m,3H).
化合物111-4：
室温下将(3-亚甲基环丁基)甲醇(111-3)(2.77g，28.26mmol)、碳酸氢钠(3.64g，43.39mmol)溶于甲基叔丁基醚(MTBE)(60mL)和水(3mL)中，0℃下加碘(8.57g，33.91mmol)，室温下反应16小时，反应完成后，0℃下将反应液倒入饱和亚硫酸钠溶液(300mL)中，加乙酸乙酯(300mL)萃取两次，有机相用饱和食盐水(50mL)洗3次，无水硫酸钠干燥后过滤。滤液浓缩后，粗品用正向硅胶柱纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯＝10:1)得(1S,4S)-1-(碘甲基)-2-氧杂双环[2.1.1]己烷(111-4)(3g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ3.66(s,2H),3.54(s,2H),2.80(t,J＝3.1Hz,1H),1.74(m,2H),1.35(dd,J＝4.4,1.8Hz,2H).
其余步骤参考实施例5(化合物6)的合成方法，不同的是将实施例5第一步中的4-氟溴苄替换为化合物111-4，得到化合物2-(((1s,4S)-2-氧杂双环[2.1.1]己烷-1-基)甲基)-6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代异吲哚啉-5-甲酰胺(化合物111)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ8.05(s,1H),7.44(s,1H),7.13-7.09(m,3H),7.03-7.05(m,1H),4.61(s,2H),4.26(q,J＝6.8Hz,2H),4.03(d,J＝4.0Hz,2H),3.94(s,2H),3.89-3.85(m,1H),3.78-3.73(m,3H),3.61-3.56(m,1H),3.02-2.97(m,1H),2.91-2.89(m,3H),1.87-1.85(m,2H),1.49-1.44(m,5H).
LCMS:Rt:1.355min；MS m/z(ESI):492.3[M+H]。
实施例29、6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2-(吡啶-2-基甲基)异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物112)
化合物112的合成参考实施例5，不同的是将实施例5第一步中的4-氟溴苄替换为2-(溴甲基)吡啶氢溴酸盐，得到目标化合物6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2-(吡啶-2-基甲基)异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物112)。
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.78(d,J＝5.6Hz,1H),8.59-8.51(m,1H),8.05(s,1H),7.99-7.95(m,2H),7.51(s,1H),7.33-7.26(m,3H),7.25-7.19(m,1H),5.19(s,2H),4.64(s,2H),4.43(q,J＝15.7Hz,2H),4.32-4.21(m,3H),3.76-3.59(m,3H),3.28-3.15(m,2H),1.42(t,J＝7.0Hz,3H).
LCMS:Rt:1.355min；MS m/z(ESI):487.2[M+H]+。
实施例30、6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧-2-(吡啶-4-甲基)异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物113)
化合物113的合成参考实施例5，不同的是将实施例5第一步中的4-氟溴苄替换为4-(溴甲基)吡啶氢溴酸盐，得到目标化合物6-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧-2-(吡啶-4-甲基)异吲哚啉-5-甲酰胺盐酸盐(化合物113)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)：δ8.81(d,J＝6.5Hz,2H),8.04(s,1H),7.99(d,J＝6.5Hz,2H),7.52(s,1H),7.34-7.17(m,4H),5.14(s,2H),4.59(s,2H),4.42(t,J＝16.5Hz,2H),4.27(q,J＝6.9Hz,3H),3.79-3.59(m,3H),3.28-3.06(m,2H),1.43(t,J＝6.9Hz,3H).
LCMS:Rt:0.583min；MS m/z(ESI):487.4[M+H]+。
实施例31、2-苄基-8-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[c]氮杂-7-甲酰胺盐酸盐(化合物114)
化合物114-2：
4-(4-甲氧基苯基)丁酸(9.7g,49.94mmol)溶于乙腈(100mL)，降温至0℃后分批加入N-溴代丁二酰亚胺(9.1g,52.43mmol)，自然恢复至室温搅拌反应12小时。反应完全后用硫代硫酸钠饱和冰水溶液(150mL)淬灭，加入饱和食盐水(300mL)，用乙酸乙酯(200mL)萃取两次，合并有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩得到目标中间体4-(3-溴-4-甲氧基苯基)丁酸(114-2)(13.5g)。
LCMS:Rt:1.604min；MS m/z(ESI):273.0,275.0[M+H]+.
化合物114-3：
室温下，将4-(3-溴-4-甲氧基苯基)丁酸(114-2)(13.5g,49.5mmol)加到伊顿试剂(30mL)中，加热至90℃搅拌反应2小时。反应完全后，将反应液倒入冰水(150ml)中，用乙酸乙酯(150mL)萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯:石油醚＝1:5)得到目标中间体6-溴-7-甲氧基-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(114-3)(12.5g)。
LCMS:Rt:1.808min；MS m/z(ESI):254.9,256.9[M+H]+。
化合物114-4：
6-溴-7-甲氧基-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(114-3)(900mg，3.52mmol)，盐酸羟胺(292mg，4.23mmol)和无水乙酸钠(529mg，7.05mmol)加到无水乙醇(15mL)中，加热至80℃搅拌反应2小时。反应完全后，加入乙醇(50mL)将反应稀释，趁热过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯:石油醚＝1:5)得到目标中间体6-溴-7-甲氧基-3,4-二氢萘-1(2H)-酮肟(114-4)(800mg)
LCMS:Rt:1.510min；MS m/z(ESI):269.9,272.0[M+H]+。
化合物114-5：
6-溴-7-甲氧基-3,4-二氢萘-1(2H)-酮肟(114-4)(800mg，2.96mmol)溶于氯化亚砜(6mL)中，50℃搅拌反应3小时。反应完全后将反应液减压浓缩，向残余物中加入乙酸乙酯(100mL),用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯:石油醚＝1:1)得到目标中间体7-溴-8-甲氧基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[c]氮杂-1-酮(114-5)(320mg)。
LCMS:Rt:1.727min；MS m/z(ESI):270.0,272.0[M+H]+。
化合物114-6：
7-溴-8-甲氧基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[c]氮杂-1-酮(114-5)(900mg，2.50mmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，氮气保护下0℃加入氢化钠(60％，200mg，5.00mmol),然后缓慢滴加溴苄(641mg，3.75mmol),恢复至室温搅拌反应2小时。反应完全后，将反应体系倒入冰水(100mL)中，用乙酸乙酯(100mL)萃取两次，合并有机相并用饱和食盐水洗涤两次，用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯:石油醚＝1:4)得到目标中间体2-苄基-7-溴-8-甲氧基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[c]氮杂/>-1-酮(114-6)(800mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ7.39-7.26(m,7H),4.77(s,2H),3.93(s,3H),3.19(t,J＝2.8Hz,2H),2.64(t,J＝7.2Hz,2H),1.79-1.72(m,2H).
化合物114-7：
2-苄基-7-溴-8-甲氧基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[c]氮杂-1-酮(114-6)(750mg，2.08mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，反应瓶用氮气置换三次，降温至-10℃，缓慢滴加三溴化硼二氯甲烷溶液(2M，5mL)，加完恢复至室温搅拌反应3小时。反应完全后将反应液逐滴加到乙醇中淬灭，减压浓缩除去溶剂，残余物用饱和碳酸氢钠溶液(150mL)洗涤，用二氯甲烷(100mL)萃取两次，有机相合并浓缩得到目标中间体2-苄基-7-溴-8-羟基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[c]氮杂/>-1-酮(114-7)(700mg)。/>
化合物114-8：
2-苄基-7-溴-8-羟基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[c]氮杂-1-酮(114-7)(700mg，2.02mmol)，碘乙烷(947mg，6.06mmol)和碳酸铯(1.99g，6.06mmol)加入到乙腈(15mL)中，反应液在氮气氛围下60℃搅拌反应12小时。反应完全后趁热过滤，收集滤液后减压浓缩，残余物用正相色谱柱(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝4:1)纯化，得到目标中间体2-苄基-7-溴-8-乙氧基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[c]氮杂/>-1-酮(114-8)(730mg)。
化合物114-9：
2-苄基-7-溴-8-乙氧基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[c]氮杂-1-酮(114-8)(680mg，1.82mmol)溶于无水乙醇(15mL)中，加入乙酸钾(534mg，5.45mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(133mg，0.18mmol),反应瓶用一氧化碳气体置换三次，在一氧化碳环境下70℃搅拌反应6小时。反应完全后将反应液减压浓缩，残余物用正相色谱柱(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝4:1)纯化，得到目标中间体2-苄基-8-乙氧基-1-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[c]氮杂/>-7-羧酸乙酯(114-9)(500mg)。
LCMS:Rt:1.797min；MS m/z(ESI):368.2[M+H]+。
化合物114-10：
2-苄基-8-乙氧基-1-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[c]氮杂-7-羧酸乙酯(114-9)(300mg，0.817mmol)溶于甲醇(2mL)，四氢呋喃(2mL)和水(2mL)中，然后加入氢氧化锂一水合物(343mg,8.17mmol)，35℃搅拌反应1小时。反应完全后，将反应液减压浓缩除去甲醇和四氢呋喃，残余物加水(50ml)，用盐酸(1mol/L)调节pH值到4-5，用乙酸乙酯(100mL)萃取两次，有机相合并后用饱和食盐水洗涤一次，用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩后得到目标中间体2-苄基-8-乙氧基-1-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[c]氮杂/>-7-羧酸(114-10)(160mg)。
LCMS:Rt:1.313min；MS m/z(ESI):340.1[M+H]+。
化合物114-11：
室温下将2-苄基-8-乙氧基-1-氧基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[c]氮杂-7-羧酸(114-10)(160mg,0.47mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)，然后加入(S)-3-((R)-2-氨基-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(151mg，0.52mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(357mg，0.94mmol)和N,N-二异丙基乙胺(121mg，0.94mmol)。室温搅拌反应30分钟。反应完全后加入饱和食盐水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL)萃取两次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物用正相色谱柱(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，得到目标中间体(S)-3-((R)-2-(2-苄基-8-乙氧基-1-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[c]氮杂/>-7-甲酰胺)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(114-11)(110mg)。
LCMS:Rt:2.093min；MS m/z(ESI):614.3[M+H]+。
化合物114：
(S)-3-((R)-2-(2-苄基-8-乙氧基-1-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[c]氮杂-7-甲酰胺)-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(114-11)(110mg,0.18mmol)加入到氯化氢二氧六环(3mL,4mol/L)溶液中，反应液在室温下搅拌1小时。反应完全后减压浓缩，残余物用甲醇洗涤，过滤，收集固体，干燥得到目标化合物2-苄基-8-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[c]氮杂-7-甲酰胺盐酸盐(化合物114)(34.91mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ7.72(s,1H),7.42-7.22(m,10H),4.78(s,2H),4.44-4.40(m,2H),4.26-4.21(m,3H),3.70-3.61(m,3H),3.30-3.29(m,1H),3.25-3.20(m,3H),2.68(t,J＝7.0Hz,2H),1.83-1.79(m,2H),1.42(t,J＝7.0Hz,3H).
LCMS:Rt:1.049min；MS m/z(ESI):514.2[M+H]+。
实施例32、8-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2-苯乙基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[c]氮杂-7-甲酰胺盐酸盐(化合物115)的制备
化合物115盐酸盐的合成参考实施例31，不同的是将实施例31第5步中的溴苄替换为溴代苯乙烷，得到目标产物8-乙氧基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-1-氧代-2-苯乙基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[c]氮杂-7-甲酰胺盐酸盐(化合物115)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ7.71(s,1H),7.30-7.25(m,7H),7.23-7.19(m,3H),4.49-4.36(m,2H),4.25-4.19(m,3H),3.84(t,J＝7.2Hz,2H),3.72-3.58(m,3H),3.26-3.13(m,4H),2.99(t,J＝7.6Hz,2H),2.61(t,J＝6.8Hz,2H),1.92-1.87(m,2H),1.42(t,J＝6.8Hz,3H).
LCMS:Rt:1.094min；MS m/z(ESI):528.3[M+H]+。
实施例33、5-苄基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-4-羰基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺盐酸盐(化合物116)的制备
化合物116-2：
室温下将2-溴-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮(50.0mg，0.22mmol)加入到超干N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)，0℃下加入钠化氢(17.0mg，0.43mmol)室温反应0.5小时。然后加入苄溴(57.0mg，0.33mmol)室温继续反应1.5小时。反应完全后加入饱和食盐水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。粗品经Prep-TLC(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化，得到目标中间体5-苄基2-溴-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮(116-2)(44mg)。
LCMS:Rt:1.678min；MS m/z(ESI):322.0,324.0[M+H]+。
化合物116-3：
室温下将5-苄基2-溴-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮(116-2)(44mg,0.137mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(5.0mg，0.007mmol)和醋酸钾(40mg，0.41mmol)加入到无水乙醇(5.0mL)中，CO置换3次，加热至70℃反应16.0小时。反应完全后冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩，得到目标中间体5-苄基-4-氧代-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯(116-3)(粗品43mg)。
LCMS:Rt:1.600min；MS m/z(ESI):316.1[M+H]+。
化合物116-4：
室温下将5-苄基-4-氧代-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯(116-3)(43mg，0.137mmol)加入到甲醇(2.0mL)和水(2.0mL)的混合溶液中，然后加入氢氧化锂一水合物(58.0mg，1.37mmol)中，50℃反应2.0小时。反应完全后，将反应体系降温至0℃，用1mol/L的盐酸水溶液调节反应液的pH至5.0，用乙酸乙酯(30mL)萃取2次。有机相合并后用饱和食盐水洗涤1次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到目标中间体5-苄基-4-氧代-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸(116-4)(39mg)。
LCMS:Rt:1.204min；MS m/z(ESI):288.0[M+H]+。
化合物116-5：
室温下将5-苄基-4-氧代-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸(116-4)(39mg,0.136mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(103.0mg,0.272mmol)和N,N-二异丙基乙胺(70mg,0.544mmol)加入到超干N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)，然后加入(S)-3-((R)-2-氨基-1-羟乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(55.0mg,0.19mmol)，室温反应2.0小时。反应完全后加入饱和食盐水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物用Prep-TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:2)纯化，得到中间体(S)-3-((R)-2-(5-苯甲基-4-羰基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺)-1-羟基乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(116-5)(71mg)。
LCMS:Rt:1.737min；MS m/z(ESI):562.3[M+H]。
化合物116：
在0℃下向中间体(S)-3-((R)-2-(5-苯甲基-4-羰基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺)-1-羟基乙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(116-5)(96mg)的二氯甲烷(3.0mL)溶液中加入三氟乙酸(1.5mL)，室温反应1小时。反应完全后减压浓缩，残余物用高效液相制备色谱法(洗脱剂及梯度同实施例1)纯化，得到目标化合物5-苄基-N-((R)-2-羟基-2-((S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-4-羰基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺盐酸盐(化合物116)(25.91mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ7.92(s,1H),7.36-7.31(m,4H),7.31-7.26(m,1H),7.13-7.08(m,3H),7.04-7.02(m,1H),4.72(s,2H),4.07-4.02(m,2H),3.91-3.86(m,1H),3.64-3.59(m,3H),3.54-3.49(m,1H),3.08(t,J＝7.6Hz,2H),3.08-2.95(m,1H),2.94-2.86(m,2H).
LCMS:Rt:1.324min；MS m/z(ESI):462.2[M+H]+。
参考上述实施例5、实施例15、实施例16、实施例17和实施例33，本发明还合成了如下化合物：
/>
/>
/>
生物学活性及相关性质测试例
以下测试例中的化合物均根据本申请上述实施例的方法制备获得，测试例化合物可以是游离碱或其盐酸盐形式，根据上文实施例制得的产物具体形式确定。
测试例1：PRMT5酶学活性抑制实验
材料：PRMT5/MEP50蛋白购于BPS bioscience公司(美国)；Histone H4 Peptide底物购于生工生物工程(上海)股份有限公司；Anti-Histone H4(symmetric di methyl R3)antibody-ChIP Grade购于艾博抗公司(美国)；S-(5-Adenosyl)-L-methionine chloridedihydrochloride购于西格玛公司(美国)；384孔板、AlphaScreen Streptavidin Donorbeads和AlphaScreen Protein A Acceptor beads购于珀金埃尔默仪器有限公司(美国)。
酶学活性检测：利用Echo将化合物打入384孔板中，使终浓度为0-1000nM(起始浓度1000nM，3倍稀释，10个点)，DMSO含量为0.5％。每孔加入10μL 2X PRMT5/MEP50溶液，常温孵育30分钟。每孔加入10μL 2X PRMT5/MEP50底物溶液启动反应，常温孵育60分钟。准备含AlphaScreen Protein A Acceptor beads和Histone H4(symmetric dimethyl R3)抗体的6X检测试剂，每孔加入5μL，常温孵育60分钟。准备含AlphaScreen Streptavidin Donorbeads的6X检测试剂，每孔加入5μL，常温孵育60分钟。Envision检测信号值。测试结果见表1。
测试例2：化合物对Z-138细胞增殖的抑制活性实验
材料与细胞：Z-138细胞购于ATCC(美国)；IMDM培养基和青霉素-链霉素购于西格玛公司(美国)；马血清购于Hyclone公司(美国)；96孔板购于康宁公司(美国)；Cell-TiterGlo试剂购于普洛麦格公司(美国)。
细胞培养：Z-138细胞用含10％马血清+1％青霉素-链霉素的IMDM培养液于37℃、5％CO2条件下培养。处于对数生长期细胞方可用于实验。
细胞增殖活性检测：利用Cell-Titer Glo试剂检测化合物对Z-138细胞的增殖抑制活性。调整细胞浓度，每孔180μL接种96孔板(500/孔)，置于37℃、5％CO2条件下平衡10-15分钟。每孔加入20μL含化合物的培养液，使终浓度达到0-300nM(起始浓度300nM，3倍稀释，10个点)，DMSO含量为0.1％。细胞板置于37℃、5％CO2条件下孵育8天。其中第四天换液：缓慢吸去100μL上清，并补充100μL含有化合物的新鲜培养液，保持化合物浓度不变。通过Cell-Titer Glo试剂检测细胞活性。测试结果见表1。
测试例3：化合物对SDMA的影响
材料与细胞：Z-138细胞购于ATCC(美国)；IMDM培养基和青霉素-链霉素购于西格玛公司(美国)；马血清购于Hyclone公司(美国)；Hoechst抗体购于invitrogen公司(美国)；Alexa Fluor 488goat anti-rabbit IgG抗体购于Santa公司；Anti-dimethyl-Argininesymmetric(SYM11)抗体购于Merck公司(美国)。
细胞培养：Z-138细胞用含10％马血清+1％青霉素-链霉素的IMDM培养液于37℃、5％CO2条件下培养。处于对数生长期细胞方可用于实验。
免疫荧光检测：利用免疫荧光检测化合物对Z-138细胞中SDMA的影响。调整细胞浓度为1*105/mL，每孔40μL接种384孔板(4000/孔)，置于37℃、5％CO2条件下平衡10-15分钟。利用Echo将化合物打入384孔板中，使终浓度为0-300nM(起始浓度300nM，3倍稀释，10个点)，DMSO含量为0.1％。细胞板置于37℃、5％CO2条件下孵育2天。每孔加入40μL 8％多聚甲醛，常温孵育30分钟。弃上清，PBS洗板，每孔加入40μL 0.5％PBST，常温孵育60分钟。弃上清，0.05％PBST洗板，每孔加入40μL封闭液，常温孵育60分钟。弃上清，每孔加入20μL一抗，4℃过夜。弃上清，0.05％PBST洗板，每孔加入20μL二抗，常温孵育60分钟。弃上清，0.05％PBST洗板，ImageXpress Nano检测荧光强度。测试结果见表1。
表1
注：“-”表示未测试。
以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (11)

1.式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐：
其中，R1选自
R2、R3、R4、R5独立地选自H、卤素、CN、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基；
m选自0、1、2、3或4；
p选自0、1或2；
W选自化学键或任选被Ra2取代的CH2、任选被Ra2取代的OCH2或任选被Ra2取代的CH2CH2；
L选自O、S、NH或者化学键；
R6选自任选被Ra3取代的以下基团：C1-C6烷基、苯基、萘基、5-10元杂芳基、C3-C6环烷基或3-6元杂环基；
R7、R8、R9、R10独立地选自H、甲基或乙基；
R11选自氢或C1-C6烷基；
Ra2选自卤素、CN或C1-C6烷基；
Ra3选自卤素、CN、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基酰基或卤代C1-C6烷基。
2.根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，W选自化学键、CH2或CH2CH2，所述CH2或CH2CH2任选被Ra2取代，其中Ra2如权利要求1中所定义。
3.根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R6选自任选被Ra3取代的以下基团：苯基、吡唑基、吡啶基、 异丙基或甲基。
4.根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R7、R8、R9、R10独立地选自H。
5.根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，L独立地选自O。
6.根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述式(I)化合物或其药学上可接受的盐选自式(II)化合物或其药学上可接受的盐：
其中R1、R2、R3、R4、R5和m如权利要求1中所定义。
7.根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述式(I)化合物或其药学上可接受的盐选自式(III)化合物或其药学上可接受的盐：
其中R1、R2、R3、R4、R5和m如权利要求1中所定义。
8.化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，其中化合物选自如下结构之一：
9.化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，其中化合物选自如下结构之一：
10.一种药物组合物，所述组合物包含权利要求1至9任一项的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂。
11.权利要求1至9任一项的化合物或其药学上可接受的盐或者权利要求10所述药物组合物在制备预防或者治疗PRMT5相关性疾病的药物中的用途。
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