CN117618530A - 一种治疗或缓解肺炎的药物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种治疗或缓解肺炎的药物及其用途，所述药物包含多肽，所述多肽可作为活性成分，也可添加药学上可接受的活性成分、其他辅料或辅助性成分，有效作用于肺炎，特别是由铜绿假单胞菌感染引起的肺部疾病。本发明还公开了该多肽在制备治疗或缓解肺炎的药物中的用途，尤其对铜绿假单胞菌引起的肺炎具有较好的治疗效果。与现有技术相比，本发明所述多肽及其药物具有安全性高、无生物毒性、无刺激、无激素的效果，可有效治疗或缓解由铜绿假单胞菌引起的肺炎，无耐药性。

Description

一种治疗或缓解肺炎的药物及其用途

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种治疗或缓解肺炎的药物及其用途。

背景技术

铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)，因其生长过程中能产生绿色水溶性色素，使脓液呈现绿色，故俗称绿脓杆菌，为单鞭毛革兰阴性小杆菌，属于专性需氧菌，对干燥、紫外线、消毒剂等理化因素有极强的抵抗力，在潮湿环境中能长期生存，是一种广泛存在的条件致病菌(张改玲.儿童铜绿假单胞菌肺炎临床特点分析[D].郑州大学,2014.)。该菌广泛分布于自然界如土壤、水、动植物及人体皮肤、呼吸道、肠道等部位，在医院的潮湿环境中普遍存在，是引起医院感染最常见的革兰阴性杆菌之一。

铜绿假单胞菌的致病特点是引起继发感染，多发生在机体抵抗力降低下的病人，如大面积烧伤，长期使用免疫抑制剂、肿瘤、低蛋白血症患者等。铜绿假单胞菌引起的感染可发生在人体任何部位，常引起各种急、慢性感染，临床上常见的有皮肤和皮下组织感染，中耳炎、脑膜炎、呼吸道感染、尿道感染、败血症等，可引起社区获得性肺炎、医院获得性肺炎(特别是呼吸机相关性肺炎)及囊性纤维化患者中的下呼吸道感染，具有较高的死亡率。

社区获得性肺炎(community acquired pneumonia,CAP)是指在院外由细菌、病毒等多种病原体引起的肺炎，其中以细菌性肺炎患者最为多见，其中铜绿假单胞菌是CAP的主要病原微生物(李小惠,徐学军,张建辉,朱君娜,段素霞.社区获得性肺炎患者病原微生物特征[J].中国微生态学杂志,2019,31(06):699-702.)，患者常表现为咳嗽、咳痰及胸部疼痛等症状，严重者可导致神志障碍，威胁患者生命(张月玲,马涛,庞世超,郭改玲,邱奎.社区获得性肺炎病原菌感染类型及耐药性分析[J].临床医学,2020,40(11):44-46.)。

其中，医院获得性肺炎(Hospital acquired pneumonia,HAP)是常见的医院获得性感染之一。医院获得性肺炎指入院前无感染指征，于住院48h后发生肺炎的患者。患者感染HAP不仅会增加住院天数、消耗大量住院费用，严重时甚至会引发呼吸衰竭，若不及时采取合理的措施进行干预可能导致患者病情加重甚至死亡(陈夏容,黄丹丹,邱秀兰,翁月萍,林丽玲,吴逸海,曾秀玉,张华平.医院获得性肺炎患者多重耐药菌易感因素分析[J].中外医学研究,2021,19(29):190-194.)。医院获得性肺炎因其传播性强、易加重患者病情及疾病负担等特点，发病率居高不下，近年来引起了临床与预防界学者的广泛关注，已成为临床及医院感染控制最为棘手的难题之一(黄芳,陈兴峰,王燕萍.医院获得性肺炎的流行病学特点及预防措施研究[J].中华医院感染学杂志,2018,28(13):2053-2055.)。

据统计约有15％的住院死亡患者与医院获得性肺炎有直接关系(汤琳民,楼娟花,胡瑱臻.ICU医院获得性肺炎感染病原菌耐药性及危险因素分析[J].实用药物与临床,2016,19(03):367-370.)。Quartin等人对2004—2010年共1184例医院获得性肺炎患者进行致病菌统计发现，排在首位的是铜绿假单胞菌(Quartin A A,Scerpella E G,SailajaPuttagunta,et al.A comparison of microbiology and demographics among patientswith healthcare-associated,hospital-acquired,and ventilator-associatedpneumonia:a retrospective analysis of 1184patients from a large,internationalstudy[J].BMC Infectious Diseases,2013,13.)。

铜绿假单胞菌可形成生物膜，加上其固有的获得性耐药机制而被称为超级细菌，并对替加环素、厄他培南等多种抗生素表现为天然耐药(孙康,李王平,潘蕾,金发光.医院获得性铜绿假单胞菌肺炎危险因素分析[J].中华肺部疾病杂志(电子版),2022,15(02):166-170.)，对于铜绿假单胞菌引起的感染主要靠药物治疗，而近些年由于广谱抗生素大量使用，铜绿假单胞菌多药耐药问题越来越严重，大量的耐药菌株的产生，进一步加剧了铜绿假单胞菌对患者的威胁。研究表明，铜绿假单胞菌对常用抗菌药物特别是对亚胺培南的使用耐药率接近90％，对替加环素的耐药率＞70％，提示铜绿假单胞菌对常用抗菌药物已经明显耐药。

现有的用于治疗铜绿假单胞菌感染的药物包括硫酸妥布霉素和头孢他啶，其中硫酸妥布霉素是一种氨基糖甙类的抗生素，适用于各种革兰阴性杆菌和铜绿假单胞菌所致的感染，可鞘内注射给药，最常见的副作用是头晕、头痛、精神错乱、恶心和皮疹，严重药物不良反应包括耳毒性、神经病变和肾毒性(Reyhanoglu G,Reddivari AKR.Tobramycin.In:StatPearls.StatPearls Publishing,Treasure Island(FL)；2021.PMID:31869159.)；头孢他啶可能引起食欲减退、恶心、呕吐、腹痛、腹泻等，长期用药可能发生菌群失调，二重感染，同时这两种药物还会出现耐药性。

综上所述，及时、高效、安全、合理的选用抗菌药物是治疗铜绿假单胞菌感染引起的疾病的关键。故研发一款对铜绿假单胞菌有较好杀菌作用且无耐药性，无不良反应的药物制剂以在治疗由铜绿假单胞菌感染引起的疾病中发挥治疗作用迫在眉睫。

抗菌肽是一类碱性多肽，一般由12～50个左右氨基酸组成，具有广谱抗菌性，对细菌、真菌、病毒、寄生虫和肿瘤细胞有抑制或杀灭作用，可促进伤口愈合过程。此外，抗菌肽还能作为免疫效应活化分子，调节机体免疫系统的功能，增强机体清除病原体的能力，中和细菌内毒素LPS，降低炎性细胞因子的释放，减缓炎症反应引起的组织损伤。传统抗生素虽抗菌效果明显，但抗菌机理大多通过阻碍细菌细胞壁的合成、抑制蛋白质的合成、影响核酸、叶酸的代谢等来进行抗微生物，微生物很容易通过基因突变来改变代谢途径，进而对抗生素产生耐药性。相对于抗生素，抗菌肽在耐药性方面具有不可比拟的优点，抗菌肽可通过与微生物细胞膜作用，形成孔洞，影响细胞内外渗透压，进而使细胞死亡。由于微生物的细胞膜结构是经亿万年进化而来，其结构不会在短时间内做出较大改变，所以，抗菌肽的这种抗菌机理不易使细菌产生耐药性。因此，抗菌肽作为抗微生物成分受到越来越多的青睐。

已有报道公开了抗菌肽对铜绿假单胞菌的杀菌作用，如申请号CN201910940256.3公开了抗菌肽AA230、DPK-060或LL-37均对铜绿假单胞菌有抗菌作用；专利号CN201811429969.5公开了抗菌肽对铜绿假单胞菌具有抑菌效果，但是抗菌肽对铜绿假单胞菌的体外实验具有较好的杀菌效果，并不代表其在体内对由铜绿假单胞菌引起的疾病就必然有治疗作用。

如mBMAP-28在体外对铜绿假单胞菌具有较好的杀菌作用，但其对铜绿假单胞菌感染的小鼠无保护作用(Benincasa M,Skerlavaj B,Gennaro R,et al.In vitro and invivo antimicrobial activity of twoα-helical cathelicidin peptides and oftheir synthetic analogs[J].Peptides,2003,24(11):1723-1731.)；如D-BMAP-18抗菌肽在体外对铜绿假单胞菌具有活性，但在铜绿假单胞菌肺感染小鼠模型中失去活性(MarioM,Arianna P,Margherita D,et al.D-BMAP18 Antimicrobial Peptide Is Active Invitro,Resists to Pulmonary Proteases but Loses Its Activity in a Murine Modelof Pseudomonas aeruginosa Lung Infection[J].Frontiers in Chemistry,2017,5.)；又如BMAP-27(1-18)在体外对铜绿假单胞菌有抗菌活性，但当在铜绿假单胞菌的急性肺部感染小鼠模型中进行测试时，BMAP-27(1-18)没有显示出任何疗效(Mardirossian M,Pompilio A,Crocetta V,et al.In vitro and in vivo evaluation of BMAP-derivedpeptides for the treatment of cystic fibrosis-related pulmonary infections[J].Amino Acids,2016,48(9):1-8.)；再如dG3KL和dTNS18肽树枝状大分子具有良好的体外抗菌活性且无体内毒性，但两种肽都不能保护G.mellonella幼虫免受铜绿假单胞菌引起的全身感染，可能是由于肽的稳定性不足(Arianna,Pompilio,Cristina,et al.Peptidedendrimers as"lead compounds"for the treatment of chronic lung infections byPseudomonas aeruginosa in cystic fibrosis patients:in vitro and in vivostudies.[J].Infection&Drug Resistance,2018.)。

申请人在研究中惊讶的发现了本发明所述多肽，该多肽为一种抗菌肽，在对铜绿假单胞菌感染引起的肺炎的体外实验和体内实验都具有较好的效果，故其可用于制备抗铜绿假单胞菌的多肽药物，具有极大的应用和研究前景。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的一个目的在于提供一种多肽在制备治疗或缓解肺炎药物中的用途；本发明的另一个目的在于提供一种含多肽的药物在制备治疗或缓解肺炎药物中的用途，所述多肽的氨基酸序列为MGRFKRFRKKFKKLFKKLS，所述肺炎由铜绿假单胞菌引起。

特别的，所述药物还包括药学上可接受的活性成分、其他辅料或辅助性成分。

优选的，所述药学上可接受的活性成分可以是对铜绿假单胞菌引起的肺炎有治疗作用的化合物。

优选的，所述肺炎包括社区获得性肺炎和医院获得性肺炎。

优选的，所述药物制备成药学上可接受的剂型，所述剂型包括溶液剂。

特别的，所述溶液剂中的溶剂为生理盐水。

特别的，所述治疗或缓解症状的指标包括肺组织病变的程度降低或恢复原状。

综上所述，本发明提供了一种治疗或缓解肺炎的药物及其用途，同时，提供了一种以所述多肽为活性成分，添加药学上可接受的活性成分、其他辅料或辅助性成分而制成的含多肽的药物在治疗或缓解铜绿假单胞菌感染性肺炎的用途。本发明所述多肽可有效改善铜绿假单胞菌感染大鼠肺炎的症状，具有明显的治疗作用，在低剂量下即可起效，与现有技术相比，本发明所述的多肽或含多肽的药物对铜绿假单胞菌感染引起的肺炎的作用效果比现有市场上在售的硫酸妥布霉素注射液、注射用头孢他啶的治疗效果好，并且本发明所述多肽不产生耐药性，可广泛治疗或缓解由铜绿假单胞菌感染引起的肺炎的症状，具有广阔的应用前景。

具体实施方式

本发明的一个目的在于提供一种多肽在制备治疗或缓解肺炎药物中的用途；本发明的另一个目的在于提供一种含多肽的药物在制备治疗或缓解肺炎药物中的用途，所述多肽的氨基酸序列为MGRFKRFRKKFKKLFKKLS，所述肺炎由铜绿假单胞菌引起。

特别的，所述药物还包括药学上可接受的活性成分、其他辅料或辅助性成分。

优选的，所述药学上可接受的活性成分可以是对铜绿假单胞菌引起的肺炎有治疗作用的化合物。

优选的，所述肺炎包括社区获得性肺炎和医院获得性肺炎。

优选的，所述药物制备成药学上可接受的剂型，所述剂型包括溶液剂。

特别的，所述溶液剂中的溶剂为生理盐水。

特别的，所述治疗或缓解症状的指标包括肺组织病变的程度降低或恢复原状。

关于药学上可接受的辅料不一一例举，本领域普通技术人员可根据所掌握的公知常识进行具体选择。

本发明的药物可以通过本领域已知的任何合适的方法制备，可根据剂型要求进行删减或调整。

本领域技术人员可以根据所需要制备的剂型，按照本领域该剂型的一般技术常识和要求，选择合适的辅料，在多肽的基础的上，加入适当的辅料和添加剂，并按照常规的制剂技术来制备。

本领域技术人员可按常规方法确定适于某种情况的优选剂量。另外，这些药物的一天的给药量可以根据给药对象的症状、年龄、体重、性别、治疗时间、治疗效果、给药方法等适当变更，只要可以抑制铜绿假单胞菌且产生的副作用在可允许的范围内就无特别限制。该制剂不限于一天给药一次，可以分多次给药。

优选的，本发明所述药物的适用对象包括但不限于人。

优选的，本发明所述药物的适用对象包括非人动物。

优选的，非人动物包括但不限于哺乳动物(如牛、马、羊、猪、小鼠等)、家禽动物(如鸡、鸭、鹅等)、伴侣动物(如猫和犬等)。

最佳的给予途径将受多种因素的影响，这些因素包括活性分子的物理化学性质、临床表现的紧急性、以及活性分子的血浆浓度与所希望的治疗效果之间的关系。

本发明所采用的术语“治疗或缓解”指得到期望的药理或生理效应。该效应可以是部分或完全治愈疾病、病症、症状。因此，“治疗或缓解”涵盖了对哺乳动物尤其是人类的疾病的任何治疗，包括：(a)防止病理状态在个体中出现，所述个体可能有产生病理状态的倾向但还没有诊断出来具有这种病理状态，即：对可能有倾向产生病理状态但还没有经历或显示出所述状态的症状的受治者而言，使其体内不会产生病理状态的临床症状；(b)抑制，即：阻止或减轻病理状态或其临床症状的发展；或者(c)解除与病理状态有关联的症状。就本发明的目的而言，包括但不限于症状缓解、疾病程度降低、疾病状态稳定(即不恶化)、疾病进展延迟或减缓、疾病状态改善或缓和以及缓解(无论部分或总体)，而无论可检测或不可检测。需要治疗的对象(例如人)因此可以是已罹患所关注疾病或病症的对象。术语“治疗或缓解”包括相对于不存在治疗来说抑制或降低病理状态或症状之严重度的提高，且不一定意在表示相关疾病、病症或病状的完全停止。

如本发明上下文所采用的术语“药物”、“含多肽的药物”、“制剂”未特别说明，可以互换使用，指的是包含本发明所述多肽的制品。

“药学上可接受的活性成分、其他辅料或辅助性成分”指无毒固态、半固态或液态填充剂、稀释剂、佐剂、包裹材料或其他制剂辅料、载体，所用载体可与相应的给药形式相适应，可使用本领域技术人员所知晓的载体配成固体、半固体、液体、持续释放或延迟释释放等任一一种或几种的组合形式制剂。

本发明中所述多肽可通过化学合成，也可以通过基因工程技术表达、分离纯化得到(具体方法可参见Sambrook et al.，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，ColdSpring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，2001)。

若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，实施例中，加入的各试剂等除特别说明外，均为市售。

本部分实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。

实施例1多肽对铜绿假单胞菌感染性肺炎的动物体内治疗效果本次研究在前期开展的模型探索和预实验基础上，采用气管滴注铜绿假单胞菌诱导大鼠肺炎模型，经口鼻吸入给予不同浓度的多肽吸入溶液，通过观察给药后肺功能、动脉血气、白细胞分类计数、肺脏指数、细菌计数等指标的变化，考察多肽吸入溶液对铜绿假单胞菌诱导大鼠中到重度感染性肺炎的治疗作用。

从体外抗菌谱、临床一线用药、有文献动物实验阳性药的具体使用、物质性质、是否已有吸入制剂获批、制剂采购的难易程度等多方面考虑，最终选择硫酸妥布霉素、头孢他啶为阳性对照品。

硫酸妥布霉素注射液，批号：210318，规格：2mL：80mg(8万单位)，有效期至：2023年03月17日。生产单位：安徽联谊药业股份有限公司。

注射用头孢他啶，批号：K210401，规格：0.5g/瓶，有效期至：2023年03月。生产单位：国药集团致君(深圳)制药有限公司。

多肽溶液：浅黄色澄清液，1000mg/10mL，含量为103.5％，批号：SP202111002，有效期：2023.11.11。

动物：SD大鼠，SPF级，6-8周龄，体重：140-170g。

对多肽进行最低抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration，MIC)测定，结果表明多肽溶液对铜绿假单胞菌的MIC为25ug/mL。

选取SD大鼠208只，SPF级，实验使用SD大鼠184只，雌雄各半，适应期结束，随机分为7组，分别为正常对照组、模型对照组、硫酸妥布霉素注射液组、注射用头孢他啶组、多肽吸入溶液低、中及高剂量组(0.05％、0.1％、0.25％)，每组22只，雌雄各半。

1.1模型建立

24只正常对照组动物不做造模处理，184只大鼠均采用气管滴注2.5×10⁸CFU/mL铜绿假单胞菌诱导大鼠肺炎模型。具体造模方法如下：大鼠感染前，用乙醚吸入麻醉，动物仰卧解剖板上呈30～45°角倾斜位置，用1mL的注射器吸取铜绿假单胞菌0.5mL，连接穿刺长针，耳镜下暴露大鼠气管，注入气管内，抽出插管后，实验动物仍旧保持原倾斜位置约10s，使残留感染悬液，由于重力的作用流入支气管和肺泡内而引起感染，诱导大鼠肺炎模型。

1.2动物分组与给药

造模后24h，10雄23雌动物死亡，根据死亡情况选取呼吸急促、自主活动减少等症状明显的SD大鼠132只，体重150.7～189.9g，按体重及性别随机分为6组，分别为模型对照组、硫酸妥布霉素注射液组、注射用头孢他啶组、多肽吸入溶液低、中及高剂量组(按净含量计0.05％、0.1％、0.25％，以0.9％氯化钠注射液配制，折算后目标给药剂量分别为0.35、0.55、1.39mg/kg)，每组22只动物，另设正常对照组22只，雌雄各半。各组动物经口鼻吸入给予相应浓度的多肽吸入溶液，连续吸入30min，正常对照组和模型对照组分别经口鼻吸入给予等时长的pH＝4.0的0.9％氯化钠注射液。硫酸妥布霉素注射液组动物按10mL/kg肌内注射给予2.7mg/mL的硫酸妥布霉素注射液，注射用头孢他啶组动物按10mL/kg肌肉注射给予54mg/mL的注射用头孢他啶溶液。每天1次，连续给药7天。每天对各组动物进行一般临床观察(包括呼吸、自主活动、精神状态等)，分别于给药后D3及D7各组选取10只、12只动物(雌雄各半)腹腔注射60mg/kg舒泰50麻醉后进行肺功能、血气分析、肺指数、肺泡灌洗液白细胞及中性粒细胞，并取肺脏进行菌落计数检查。

1.3剂量设计

根据多肽吸入溶液(0.1％、0.25％、0.75％)对铜绿假单胞菌感染大鼠肺炎模型的影响预试验，结果显示按0.1％、0.25％、0.75％的多肽吸入溶液经口鼻吸入给药后，低、中及高剂量(0.1％、0.25％、0.75％，雾化后对应的剂量分别为0.43、1.06、2.43mg/kg)后均能明显降低动物死亡率，且能显著减轻肺组织病变程度。因此本次试验设置多肽吸入溶液3个给药剂量，对应受试物配制浓度分别为0.05％、0.1％、0.25％，折算后目标给药剂量分别为0.35、0.55、1.39mg/kg，每天给药1次，30min/次，连续给药7天。

硫酸妥布霉素注射液，每日剂量3～5mg/kg。本次研究以等效剂量的1倍作为硫酸妥布霉素注射液组的给药剂量。

注射用头孢他啶，对于中重度感染成人每日剂量按6g计。本次研究以等效剂量的1倍作为注射用头孢他啶组的给药剂量。

1.4检测指标

1.4.1一般临床观察

一般临床观察详见表1。

表1试验观测指标、内容和时间

1.4.2肺功能检测

分别于给药后D3及D7各组选取10只、12只动物(雌雄各半)腹腔注射60mg/kg舒泰50麻醉，于气管上作倒“T”型开口，进行气管插管，用PFT肺功能检测系统检测肺功能吸气峰值流速(PIF)、呼气峰值流速(PEF)、肺顺应性(Cypn)、气道阻力(Penh)、潮气量(VT)、用力肺活量(FVC)指标。

1.4.3动脉血气

分别于给药后D3及D7各组选取10只、12只动物检测肺功能后腹主动脉采血，测量血氧分压(PaO₂)、二氧化碳分压(PaCO₂)及pH值。

1.4.4肺脏指数

分别于给药后D3及D7各组选取10只、12只动物解剖取肺脏后称重，按肺指数(mg/g)＝肺湿重(mg)/体质量(g)，计算肺指数。

1.4.5白细胞计数和中性粒细胞

分别于给药后D3及D7各组选取10只、12只动物大鼠放血安乐死，结扎右肺中下叶，用0.9％氯化钠注射液6mL，自气管开口处注入右肺上叶，行肺泡灌洗，并收集肺泡灌洗液，采用兽用五分类血细胞分析仪检测肺泡灌洗液白细胞计数和中性粒细胞。

1.4.6肺组织细菌计数

分别于给药后D3及D7各组选取10只、12只动物取右侧肺脏中下叶进行组织匀浆，采用培养基进行细菌培养并计数。取采集好的样本，进行10倍、100倍比例稀释：10^-1和10^-2。无菌条件下分别吸取原液、10^-1和10^-2三个稀释度的菌液0.1mL，均匀涂布到溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基上，每个稀释度重复2个平板，平放恒温箱上30min左右，使菌液渗入培养基表层内，然后倒置平板于37℃恒温箱中培养24h，细菌计数参考《中国药典》微生物计数法。根据细菌计数结果，原液中大部分动物肺组织细菌不可计，而采用100倍比例稀释后大部分检测不到细菌，故本次细菌计数采用10倍比例稀释数据进行统计。

1.4.7统计与分析

试验数据进行统计学分析，统计所用软件为SPSS22.0。统计结果以α＝0.05为检验界限，其中P≤0.05表示有统计学意义，P≤0.01表示所检验的差别有非常显著性意义。

1.5试验结果

1.5.1一般临床观察

造模后动物出现竖毛，自主活动减少，呼吸急促，并肺部伴有少量湿罗音；给药后各组动物仍出现自主活动减少，竖毛，部分动物伴有呼吸急促，但未听及湿罗音。

1.5.2对肺功能的影响

如表2、表3所示，与正常对照组比较，模型对照组给药后D3用力肺活量(FVC)显著减少(P≤0.01)，给药后D7呼气峰值流速(PEF)、肺顺应性(Cypn)、气道阻力(Penh)、潮气量(VT)、用力肺活量(FVC)均显著减少(P≤0.05或P≤0.01)；与模型对照组比较，硫酸妥布霉素注射液组给药后D7吸气峰值流速(PIF)显著增加(P≤0.05)；多肽吸入溶液低剂量组给药后D7吸气峰值流速(PIF)、呼气峰值流速(PEF)、用力肺活量(FVC)均显著增加(P≤0.05)，多肽吸入溶液中剂量组给药后D7呼气峰值流速(PEF)、气道阻力(Penh)、用力肺活量(FVC)均显著增加(P≤0.01)，多肽吸入溶液高剂量组给药后D7吸气峰值流速(PIF)、呼气峰值流速(PEF)、气道阻力(Penh)、用力肺活量(FVC)均显著增加(P≤0.05或P≤0.01)。

表2多肽吸入溶液对铜绿假单胞菌感染大鼠D3肺功能的影响

表3多肽吸入溶液对铜绿假单胞菌感染大鼠D7肺功能的影响

1.5.3对动脉血气的影响分析

如表4、表5所示，与正常对照组比较，模型对照组给药后D7二氧化碳分压和pH值均显著增加(P≤0.01)，给药后D3、D7氧分压显著减少(P≤0.05或P≤0.01)；与模型对照组比较，硫酸妥布霉素注射液组给药后D3二氧化碳分压显著减少(P≤0.05)，注射用头孢他啶组和多肽吸入溶液中剂量组给药后D7二氧化碳分压均显著增加(P≤0.05或P≤0.01)，硫酸妥布霉素注射液组、注射用头孢他啶组、多肽吸入溶液低、中及高剂量组给药后D7氧分压均显著增加(P≤0.05或P≤0.01)，硫酸妥布霉素注射液组、注射用头孢他啶组、多肽吸入溶液低、中及高剂量组给药后D3、D7pH值均显著减少(P≤0.05或P≤0.01)。

表4多肽吸入溶液对铜绿假单胞菌感染大鼠血气的影响

表5多肽吸入溶液对铜绿假单胞菌感染大鼠血中pH的影响

1.5.4对肺指数的影响

如表6所示，与正常对照组比较，模型对照组给药后D3、D7肺指数均显著增加(P≤0.01)；与模型对照组比较，多肽吸入溶液高剂量组给药后D7肺指数显著减少(P≤0.05)，其余各组肺指数均无统计学差异。

表6多肽吸入溶液对铜绿假单胞菌感染大鼠的肺指数的影响

1.5.5对肺泡灌洗液白细胞的影响

如表7所示，与正常对照组比较，模型对照组给药后D3、D7白细胞(WBC)均显著增加(P≤0.01)，给药后D3中性粒细胞(Neu)显著增加(P≤0.01)；与模型对照组比较，硫酸妥布霉素注射液组、注射用头孢他啶组、多肽吸入溶液低、中及高剂量组给药后D7白细胞(WBC)均显著减少(P≤0.05或P≤0.01)，多肽吸入溶液中及高剂量组给药后D7中性粒细胞(Neu)均显著增加(P≤0.05或P≤0.01)。

表7多肽吸入溶液对铜绿假单胞菌感染大鼠白细胞的影响

1.5.6肺组织菌落计数的影响

如表8所示，与正常对照组比较，给药后D3、D7模型对照组肺组织菌落计数显著增加(P≤0.01)；与模型对照组比较，给药后D3注射用头孢他啶组和多肽吸入溶液高剂量组肺组织菌落计数均显著减少(P≤0.01)，给药后D7注射用头孢他啶组、硫酸妥布霉素注射液组、多肽吸入溶液中、高剂量组肺组织菌落计数均显著减少(P≤0.05或P≤0.01)。

表8多肽吸入溶液对铜绿假单胞菌感染大鼠肺组织菌落计数的影响

1.6实验小结

肺指数是衡量大鼠肺炎发生与否的最直接指标，本研究实验结果显示，肺指数因感染铜绿假单胞菌而持续增高。肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)的白细胞与外周血白细胞协同反映炎症机体的炎症感染免疫应答水平，BALF中白细胞尤其反映呼吸道渗出的炎症状况。结果显示气管注射铜绿假单胞菌后模型大鼠BALF白细胞即处于持续增多状态，提示模型大鼠呼吸道处于感染状态。模型大鼠经口鼻吸入不同浓度的多肽吸入溶液后，多肽吸入溶液高剂量能显著减少模型大鼠肺指数，给药后D7硫酸妥布霉素注射液、注射用头孢他啶、多肽吸入溶液低、中及高剂量均能显著减少模型大鼠WBC水平。提示多肽吸入溶液经口鼻局部吸入能减轻肺部感染程度。

血气分析是应用血气分析仪，通过测定血液的pH和溶解在血液中的气体(主要指CO₂、O₂)，是检查机体呼吸功能与酸碱平衡状态的一种手段，它能直接反映肺换气功能及其酸碱平衡状态，并通过肺功能检测仪检查其肺功能通气情况。因此本次研究对绿脓杆菌感染大鼠后进行血气分析和肺功能检查，观察模型大鼠血气中pH、PaCO₂、PaO₂及肺功能指标变化，并经药物干预后观察其变化情况。结果显示模型对照组动物PaCO₂和pH值显著增加，PaO₂显著减少，另肺功能PEF、VT、Cypn、FVC、FEV₂₀₀均显著减少，多肽吸入溶液低、中及高剂量均能显著增加模型大鼠氧分压，多肽吸入溶液低、中及高剂量均能显著减少模型大鼠pH值，多肽吸入溶液低、中及高剂量均能增加模型大鼠PIF、PEF、FVC、FEV₂₀₀，表明多肽吸入溶液能明显改善模型大鼠血气和肺功能通气异常情况。

由此可见，多肽吸入溶液能显著减少模型大鼠肺指数、WBC及血中pH值，能显著增加模型大鼠血中氧分压，并能显著抑制肺组织中铜绿假单胞菌生长，同时改善模型大鼠肺功能通气受限，提示多肽吸入溶液对铜绿假单胞菌感染大鼠肺炎具有明显治疗作用，且起效剂量为低剂量(0.35mg/kg)，且多肽吸入溶液口鼻雾化吸入给药在改善肺组织病变方面的药效起效时间优于市售硫酸妥布霉素注射液、注射用头孢他啶，具有明显临床优势。

而本发明所述多肽为19个氨基酸组成，降解产物为天然氨基酸，不产生药物残留，同时，由于多肽的杀菌机理是其携带强大的正电荷吸附到菌体表面，使胞壁局部电位骤变形成高电位差，最终击穿胞壁形成穿孔，多肽分子积累到一定数量时，进一步扩大已经形成的孔洞，破坏细胞膜的完整性，从而使胞内物质外流，菌体死亡，其独特的杀菌机理决定了多肽不易产生耐药性，在治疗或缓解由铜绿假单胞菌引起的肺炎中具有广阔的临床应用前景。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (12)

1.一种多肽在制备治疗或缓解肺炎药物中的用途，其特征在于所述多肽的氨基酸序列为MGRFKRFRKKFKKLFKKLS，所述肺炎由铜绿假单胞菌引起。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述药物还包括药学上可接受的活性成分、其他辅料或辅助性成分。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于所述药学上可接受的活性成分可以是一种或更多种对铜绿假单胞菌引起的肺炎有治疗作用的化合物。

4.根据权利要求1-3任一所述的用途，其特征在于所述肺炎包括社区获得性肺炎和医院获得性肺炎。

5.根据权利要求1-3任一所述的用途，其特征在于所述药物制备成药学上可接受的剂型，所述剂型包括溶液剂。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于所述溶液剂中的溶剂为生理盐水。

7.一种含多肽的药物在制备治疗或缓解肺炎药物中的用途，其特征在于所述多肽的氨基酸序列为MGRFKRFRKKFKKLFKKLS，所述肺炎由铜绿假单胞菌引起。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于所述药物还包括药学上可接受的活性成分、其他辅料或辅助性成分。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于所述药学上可接受的活性成分可以是一种或更多种对铜绿假单胞菌引起的肺炎有治疗作用的化合物。

10.根据权利要求7-9任一所述的用途，其特征在于所述肺炎包括社区获得性肺炎和医院获得性肺炎。

11.根据权利要求7-9任一所述的用途，其特征在于所述药物制备成药学上可接受的剂型，所述剂型包括溶液剂。

12.根据权利要求11所述的用途，其特征在于所述溶液剂中的溶剂为生理盐水。