CN117618320A - 具有清洁皮肤功能的外泌体制剂及其制备方法 - Google Patents

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CN117618320A CN202311660973.3A CN202311660973A CN117618320A CN 117618320 A CN117618320 A CN 117618320A CN 202311660973 A CN202311660973 A CN 202311660973A CN 117618320 A CN117618320 A CN 117618320A
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金波
王兴刚
严光平
王赢可
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Shenzhen DJ Innovation Industry Co Ltd
Original Assignee
Shenzhen DJ Innovation Industry Co Ltd
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Abstract

本发明公开了具有清洁皮肤功能的外泌体制剂及其制备方法,所述外泌体制剂按重量份记包括以下组分:鼠李糖脂10~20份、载药纳米脂质体1~3份、脂肪干细胞外泌体1~2份、桦树汁3~5份、尿囊素0.5~1份、羟乙基纤维素0.2~1份、甘油5~10份和去离子水66~81.5份。本发明通过鼠李糖脂与胚胎干细胞外泌体结合的外泌体制剂替换掉现有技术存在的脂肪酸皂、阳离子化聚半乳甘露聚糖、聚乙二醇、和二元醇的清洁制品,实现皮肤清洁功能,使得清洁后使肌肤具有光滑、湿润感、而且从泡沫与肌肤接触时的感觉良好。

Description

具有清洁皮肤功能的外泌体制剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种具有清洁皮肤功能的外泌体制剂及其制备方法,属于化妆制品技术领域。
背景技术
胚胎干细胞是一种高度未分化的细胞,它能够在体外培养时无限增殖,并且具有高度的自我更新和多向分化的潜能。胚胎干细胞可以分化为所有类型的细胞,是基因治疗最为理想的靶细胞。由于这些优良特性,胚胎干细胞被称为“种子细胞”,为临床的组织器官移植提高大量的原料。但是由于胚胎干细胞在临床应用中受到免疫排斥和伦理道德等方面的约束,限制了其在临床上的应用,因此,科学家们正在寻找一些其他途径代替胚胎干细胞发挥相关的治疗效果。
外泌体通常被认为是由细胞内部多囊泡体向内出芽所产生的微囊泡,在多囊泡体与细胞膜融合时,将其内部的微囊泡释放至细胞膜外,形成外泌体。外泌体的直径约为40-100nm,其内部富含细胞内具有生物活性的信号分子,包括DNA、RNA、microRNA及蛋白质等。所有的培养的细胞类型都可以分泌外泌体,包括干细胞、内皮细胞、免疫细胞等,外泌体也天然存在于体液中,包括乳液、尿液、血液、唾液等。被释放至细胞外的外泌体可以通过不同的途径进入靶细胞内,发挥其生物学功能。第一,与细胞分泌的可溶性旁分泌因子类似,外泌体可以通过与靶细胞膜表面受体结合,触发靶细胞内的信号转导通路,并进一步调节靶细胞内的生物学过程;第二,外泌体可以被靶细胞内在化,这一过程依赖于网格蛋白介导的内吞作用、脂筏介导的内吞作用及胞饮作用等;第三,外泌体可以通过与靶细胞膜融合,直接将外泌体内携带的活性物质递送到靶细胞内。外泌体介导了细胞间的通讯,它的功能取决于它所来源的细胞类型,参与肿瘤的迁移、机体免疫应答、细胞分化、细胞迁移等方面。
中国专利CN109069392B公开一种液体皮肤清洁剂,其含有脂肪酸皂、阳离子化聚半乳甘露聚糖、聚乙二醇、和二元醇,所述脂肪酸皂的中和率为90mol%以上且99mol%以下,所述阳离子化聚半乳甘露聚糖相对于所述液体皮肤清洁剂总量的含有比为0.05质量%以上,所述聚乙二醇的重均分子量Mw为200万以上,所述二元醇相对于所述阳离子化聚半乳甘露聚糖的质量比即二元醇的质量/阳离子化聚半乳甘露聚糖的质量为20以上,所述阳离子化聚半乳甘露聚糖的N含有率为0.2%以上且3.0%以下。
作为皮肤清洁产品,希望是在清洁后使肌肤具有光滑、湿润感、而且从泡沫与肌肤接触时的感觉良好考虑泡沫细且浓密的皮肤清洁产品,鼠李糖脂是由假单胞菌或伯克氏菌类产生的一种生物代谢性质的生物表面活性剂,同时也是一种研究时间最长、应用技术最为成熟的一种生物表面活性剂,无毒性,能100%生物降解。
发明内容
本发明的目的在于,克服现有技术存在的技术缺陷,提出具有清洁皮肤功能的外泌体制剂及其制备方法,通过鼠李糖脂与胚胎干细胞外泌体结合的外泌体制剂替换掉现有技术存在的脂肪酸皂、阳离子化聚半乳甘露聚糖、聚乙二醇、和二元醇的清洁制品,实现皮肤清洁功能,使得清洁后使肌肤具有光滑、湿润感、而且从泡沫与肌肤接触时的感觉良好。
本发明具体采用如下技术方案:具有清洁皮肤功能的外泌体制剂,其特征在于,所述外泌体制剂按重量份记包括以下组分:鼠李糖脂10~20份、载药纳米脂质体1~3份、脂肪干细胞外泌体1~2份、桦树汁3~5份、尿囊素0.5~1份、羟乙基纤维素0.2~1份、甘油5~10份和去离子水66~81.5份;
所述载药纳米脂质体由以下组分按质量比组成:质量比为65~70份:20份:10~15份的蛋黄磷脂酰胆碱、胆固醇和药物组合物,所述药物组合物由如下组分组成:木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油;所述药物组合物中木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油的质量比为3~5:1~3:1~3:1~5:1~3。
作为一种较佳的实施例,所述脂肪干细胞外泌体的制备方法包括如下步骤:
步骤1、获得脂肪干细胞:取脂肪组织用PBS缓冲液冲洗3次后剪碎获得1mm3的碎块,加入0.1%胶原蛋白酶I和0.25%胰酶消化30~45min,然后静置分层后吸取上层脂肪细胞液,将所得脂肪细胞液加入等体积DMEM-F12培养基,10%胎牛血清终止消化,300×g离心10min,弃上清,在细胞沉淀中加入20mL无血清细胞培养基,37℃,5%CO2恒温培养48h后换液,之后每5天换液,观察到梭形细胞长出,细胞融合度达到70~80%时即可冻存得到脂肪干细胞;
所述脂肪组织取自健康人体抽脂术后的脂肪组织;
步骤2、脂肪干细胞的培养:配制诱导培养基,所述诱导培养基以低糖DMEM培养基为基础,添加了如下含量的诱导剂:重组白蛋白50μg/mL、重组表皮生长因子20μg/mL、维生素C 20μg/mL、尼克酰胺8μg/mL、丙酮酸钠12μg/mL、成纤维细胞生长因子30μg/mL、IBMX 0.5μg/mL、维甲酸0.5μg/mL;
将步骤1获得的脂肪干细胞接种于诱导培养基中进行培养,接种量为50%,培养条件为37℃,5%CO2恒温培养48h,吸除培养基,加入低糖DMEM培养基培养48h后收集上清液;
步骤3、收集脂肪干细胞外泌体:将步骤2收集得到的上清液300×g离心10min,收集上清,将所得上清10000×g高速离心30min,收集上清,将所得上清14000×g超速离心90min,收集沉淀得到外泌体,用PBS缓冲液洗涤沉淀并重悬,14000×g超速离心90min,收集沉淀,生理盐水重悬沉淀,冻存于-80℃备用。
作为一种较佳的实施例,所述外泌体制剂由以下组分组成,按重量份计为:鼠李糖脂10份、脂肪干细胞外泌体1份、载药纳米脂质体1份、桦树汁5份、尿囊素1份、羟乙基纤维素0.5份、甘油10份和去离子水70份。
作为一种较佳的实施例,所述外泌体制剂由以下组分组成,按重量份计为:鼠李糖脂15份、脂肪干细胞外泌体1份、载药纳米脂质体2份、桦树汁5份、尿囊素1份、羟乙基纤维素0.5份、甘油10份和去离子水70份。
作为一种较佳的实施例,所述外泌体制剂由以下组分组成,按重量份计为:鼠李糖脂20份、脂肪干细胞外泌体1份、载药纳米脂质体1份、桦树汁5份、尿囊素1份、羟乙基纤维素0.5份、甘油10份和去离子水70份。
作为一种较佳的实施例,所述脂肪干细胞外泌体粒径为20~200nm。
本发明还提出一种具有清洁皮肤功能的外泌体制剂的制备方法,包括如下步骤:
步骤一、制备脂肪干细胞外泌体:
步骤二、制备载药纳米脂质体:根据配方将蛋黄磷脂酰胆碱、胆固醇、木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油溶于无水乙醇,所有组分完全溶解后减压旋干获得脂膜,将所得脂膜再次用无水乙醇溶解并再次旋干得到二次脂膜,将所得二次脂膜用DEPC生理盐水溶解水化,对水化体系进行超声处理,使脂质体充分均匀分散在水化体系中,然后用聚碳酸酯膜对水化体系进行过膜挤出得到载药纳米脂质体;
步骤三、制备外泌体制剂:将步骤一提取得到的脂肪干细胞外泌体、步骤二制备的载药纳米脂质体、尿囊素与甘油混合均匀得到体系1,将羟乙基纤维素和鼠李糖脂溶于去离子水中得到体系2,再将体系1、体系2与桦树汁混合均匀得到鼠李糖脂精华液。
作为一种较佳的实施例,步骤二所述超声处理条件为300W超声处理15min。
作为一种较佳的实施例,步骤二所述用聚碳酸酯膜对水化体系进行过膜挤出是用孔径为200nm的聚碳酸酯膜对水化体系进行过膜挤出,反复挤出3~5次后,再用孔径为100nm的聚碳酸酯膜对体系进行过膜挤出,反复挤出2~3次后,得到粒径为100~150nm的载药纳米脂质体。
本发明所达到的有益效果:第一,本发明针对如何解决通过鼠李糖脂与胚胎干细胞外泌体结合的外泌体制剂替换掉现有技术存在的脂肪酸皂、阳离子化聚半乳甘露聚糖、聚乙二醇、和二元醇的清洁制品,实现皮肤清洁功能,使得清洁后使肌肤具有光滑、湿润感、而且从泡沫与肌肤接触时的感觉良好的技术需求,提出具有清洁皮肤功能的外泌体制剂及其制备方法,鼠李糖脂精华液的作用机理是通过鼠李糖脂与脂肪干细胞外泌体的结合来提高包裹大分子的脂肪干细胞外泌体的渗透性,一方面在脂肪干细胞外泌体作用下促进皮肤快速吸收、利用皮肤修复注入的营养物质,起到消肿作用;另一方面在少量的载药纳米脂质体所载药物作用下起到消炎镇痛、抗敏抑菌的功效,使得皮肤表面清洁。同时,面膜精华液中还复配了桦树汁、尿囊素等成分,辅以保湿补水、促进细胞生长、加速伤口愈合的作用,从整体上解决了通过鼠李糖脂与胚胎干细胞外泌体结合的外泌体制剂替换掉现有技术存在的脂肪酸皂、阳离子化聚半乳甘露聚糖、聚乙二醇、和二元醇的清洁制品,实现皮肤清洁功能,使得清洁后使肌肤具有光滑、湿润感、而且从泡沫与肌肤接触时的感觉良好的技术需求。第二,本发明的具有清洁皮肤功能的外泌体制剂各组分相复配,起到协同增效的作用,能使皮肤表层快速恢复,尽早实现皮肤修复效果,同时各组分温和无刺激,安全无毒副作用。第三,本发明制备方法得到的脂肪干细胞外泌体和载药纳米脂质体均为纳米级粒径,鼠李糖脂精华液在皮肤表层修复过程中易于被细胞吸收利用,其中脂肪干细胞外泌体纯度高,活性状态稳定,经冻干再水化后仍保持膜完整性,外泌体蛋白测得量恒定,通过鼠李糖脂与脂肪干细胞外泌体的结合来提高包裹大分子的脂肪干细胞外泌体的渗透性。
具体实施方式
下面对本发明作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案,而不能以此来限制本发明的保护范围。
实施例1:本发明提出具有清洁皮肤功能的外泌体制剂,所述外泌体制剂按重量份记包括以下组分:鼠李糖脂10~20份、载药纳米脂质体1份、脂肪干细胞外泌体1份、桦树汁3份、尿囊素1份、羟乙基纤维素1份、甘油5份和去离子水80份;
所述载药纳米脂质体由以下组分按质量比组成:质量比为65~70份:20份:10~15份的蛋黄磷脂酰胆碱、胆固醇和药物组合物,所述药物组合物由如下组分组成:木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油;所述药物组合物中木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油的质量比为3~5:1~3:1~3:1~5:1~3。
作为一种较佳的实施例,所述脂肪干细胞外泌体的制备方法包括如下步骤:
步骤1、获得脂肪干细胞:取脂肪组织用PBS缓冲液冲洗3次后剪碎获得1mm3的碎块,加入0.1%胶原蛋白酶I和0.25%胰酶消化30~45min,然后静置分层后吸取上层脂肪细胞液,将所得脂肪细胞液加入等体积DMEM-F12培养基,10%胎牛血清终止消化,300×g离心10min,弃上清,在细胞沉淀中加入20mL无血清细胞培养基,37℃,5%CO2恒温培养48h后换液,之后每5天换液,观察到梭形细胞长出,细胞融合度达到70~80%时即可冻存得到脂肪干细胞;
所述脂肪组织取自健康人体抽脂术后的脂肪组织;
步骤2、脂肪干细胞的培养:配制诱导培养基,所述诱导培养基以低糖DMEM培养基为基础,添加了如下含量的诱导剂:重组白蛋白50μg/mL、重组表皮生长因子20μg/mL、维生素C 20μg/mL、尼克酰胺8μg/mL、丙酮酸钠12μg/mL、成纤维细胞生长因子30μg/mL、IBMX 0.5μg/mL、维甲酸0.5μg/mL;
将步骤1获得的脂肪干细胞接种于诱导培养基中进行培养,接种量为50%,培养条件为37℃,5%CO2恒温培养48h,吸除培养基,加入低糖DMEM培养基培养48h后收集上清液;
步骤3、收集脂肪干细胞外泌体:将步骤2收集得到的上清液300×g离心10min,收集上清,将所得上清10000×g高速离心30min,收集上清,将所得上清14000×g超速离心90min,收集沉淀得到外泌体,用PBS缓冲液洗涤沉淀并重悬,14000×g超速离心90min,收集沉淀,生理盐水重悬沉淀,冻存于-80℃备用。
实施例2:外泌体制剂由以下组分组成,按重量份计为:鼠李糖脂10份、脂肪干细胞外泌体1份、载药纳米脂质体2份、桦树汁3份、尿囊素1份、羟乙基纤维素1份、甘油5份和去离子水80份。
实施例3:所述外泌体制剂由以下组分组成,按重量份计为:鼠李糖脂10份、脂肪干细胞外泌体1份、载药纳米脂质体3份、桦树汁3份、尿囊素1份、羟乙基纤维素1份、甘油5份和去离子水80份。
实施例4:所述外泌体制剂由以下组分组成,按重量份计为:鼠李糖脂15份、脂肪干细胞外泌体1份、载药纳米脂质体1份、桦树汁3份、尿囊素1份、羟乙基纤维素1份、甘油5份和去离子水80份。
实施例5:外泌体制剂由以下组分组成,按重量份计为:鼠李糖脂15份、脂肪干细胞外泌体1份、载药纳米脂质体2份、桦树汁3份、尿囊素1份、羟乙基纤维素1份、甘油5份和去离子水80份。
实施例6:所述外泌体制剂由以下组分组成,按重量份计为:鼠李糖脂15份、脂肪干细胞外泌体1份、载药纳米脂质体3份、桦树汁3份、尿囊素1份、羟乙基纤维素1份、甘油5份和去离子水80份。
实施例7:所述外泌体制剂由以下组分组成,按重量份计为:鼠李糖脂20份、脂肪干细胞外泌体1份、载药纳米脂质体1份、桦树汁3份、尿囊素1份、羟乙基纤维素1份、甘油5份和去离子水80份。
实施例8:所述外泌体制剂由以下组分组成,按重量份计为:鼠李糖脂20份、脂肪干细胞外泌体1份、载药纳米脂质体1份、桦树汁3份、尿囊素1份、羟乙基纤维素1份、甘油5份和去离子水80份。
实施例9:所述外泌体制剂由以下组分组成,按重量份计为:鼠李糖脂20份、脂肪干细胞外泌体1份、载药纳米脂质体1份、桦树汁3份、尿囊素1份、羟乙基纤维素1份、甘油5份和去离子水80份。
作为一种较佳的实施例,所述脂肪干细胞外泌体粒径为20~200nm。
本发明还提出一种具有清洁皮肤功能的外泌体制剂的制备方法,包括如下步骤:
步骤一、制备脂肪干细胞外泌体:
步骤二、制备载药纳米脂质体:根据配方将蛋黄磷脂酰胆碱、胆固醇、木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油溶于无水乙醇,所有组分完全溶解后减压旋干获得脂膜,将所得脂膜再次用无水乙醇溶解并再次旋干得到二次脂膜,将所得二次脂膜用DEPC生理盐水溶解水化,对水化体系进行超声处理,使脂质体充分均匀分散在水化体系中,然后用聚碳酸酯膜对水化体系进行过膜挤出得到载药纳米脂质体;
步骤三、制备外泌体制剂:将步骤一提取得到的脂肪干细胞外泌体、步骤二制备的载药纳米脂质体、尿囊素与甘油混合均匀得到体系1,将羟乙基纤维素和鼠李糖脂溶于去离子水中得到体系2,再将体系1、体系2与桦树汁混合均匀得到鼠李糖脂精华液。
作为一种较佳的实施例,步骤二所述超声处理条件为300W超声处理15min。
作为一种较佳的实施例,步骤二所述用聚碳酸酯膜对水化体系进行过膜挤出是用孔径为200nm的聚碳酸酯膜对水化体系进行过膜挤出,反复挤出3~5次后,再用孔径为100nm的聚碳酸酯膜对体系进行过膜挤出,反复挤出2~3次后,得到粒径为100~150nm的载药纳米脂质体。
本领域内的技术人员应明白,本申请的实施例可提供为方法、系统、或计算机程序产品。因此,本申请可采用完全硬件实施例、完全软件实施例、或结合软件和硬件方面的实施例的形式。而且,本申请可采用在一个或多个其中包含有计算机可用程序代码的计算机可用存储介质(包括但不限于磁盘存储器、CD-ROM、光学存储器等)上实施的计算机程序产品的形式。
最后应当说明的是:以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制,尽管参照上述实施例对本发明进行了详细的说明,所属领域的普通技术人员应当理解:依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者等同替换,而未脱离本发明精神和范围的任何修改或者等同替换,其均应涵盖在本发明的权利要求保护范围之内。

Claims (9)

1.具有清洁皮肤功能的外泌体制剂,其特征在于,所述外泌体制剂按重量份记包括以下组分:鼠李糖脂10~20份、载药纳米脂质体1~3份、脂肪干细胞外泌体1~2份、桦树汁3~5份、尿囊素0.5~1份、羟乙基纤维素0.2~1份、甘油5~10份和去离子水66~81.5份;
所述载药纳米脂质体由以下组分按质量比组成:质量比为65~70份:20份:10~15份的蛋黄磷脂酰胆碱、胆固醇和药物组合物,所述药物组合物由如下组分组成:木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油;所述药物组合物中木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油的质量比为3~5:1~3:1~3:1~5:1~3。
2.根据权利要求1所述的具有清洁皮肤功能的外泌体制剂,其特征在于,所述脂肪干细胞外泌体的制备方法包括如下步骤:
步骤1、获得脂肪干细胞:取脂肪组织用PBS缓冲液冲洗3次后剪碎获得1mm3的碎块,加入0.1%胶原蛋白酶I和0.25%胰酶消化30~45min,然后静置分层后吸取上层脂肪细胞液,将所得脂肪细胞液加入等体积DMEM-F12培养基,10%胎牛血清终止消化,300×g离心10min,弃上清,在细胞沉淀中加入20mL无血清细胞培养基,37℃,5%CO2恒温培养48h后换液,之后每5天换液,观察到梭形细胞长出,细胞融合度达到70~80%时即可冻存得到脂肪干细胞;
所述脂肪组织取自健康人体抽脂术后的脂肪组织;
步骤2、脂肪干细胞的培养:配制诱导培养基,所述诱导培养基以低糖DMEM培养基为基础,添加了如下含量的诱导剂:重组白蛋白50μg/mL、重组表皮生长因子20μg/mL、维生素C20μg/mL、尼克酰胺8μg/mL、丙酮酸钠12μg/mL、成纤维细胞生长因子30μg/mL、IBMX 0.5μg/mL、维甲酸0.5μg/mL;
将步骤1获得的脂肪干细胞接种于诱导培养基中进行培养,接种量为50%,培养条件为37℃,5%CO2恒温培养48h,吸除培养基,加入低糖DMEM培养基培养48h后收集上清液;
步骤3、收集脂肪干细胞外泌体:将步骤2收集得到的上清液300×g离心10min,收集上清,将所得上清10000×g高速离心30min,收集上清,将所得上清14000×g超速离心90min,收集沉淀得到外泌体,用PBS缓冲液洗涤沉淀并重悬,14000×g超速离心90min,收集沉淀,生理盐水重悬沉淀,冻存于-80℃备用。
3.根据权利要求1所述的具有清洁皮肤功能的外泌体制剂,其特征在于,所述外泌体制剂由以下组分组成,按重量份计为:鼠李糖脂10份、脂肪干细胞外泌体1份、载药纳米脂质体1份、桦树汁5份、尿囊素1份、羟乙基纤维素0.5份、甘油10份和去离子水70份。
4.根据权利要求1所述的具有清洁皮肤功能的外泌体制剂,其特征在于,所述外泌体制剂由以下组分组成,按重量份计为:鼠李糖脂15份、脂肪干细胞外泌体1份、载药纳米脂质体2份、桦树汁5份、尿囊素1份、羟乙基纤维素0.5份、甘油10份和去离子水70份。
5.根据权利要求1所述的具有清洁皮肤功能的外泌体制剂,其特征在于,所述外泌体制剂由以下组分组成,按重量份计为:鼠李糖脂20份、脂肪干细胞外泌体1份、载药纳米脂质体1份、桦树汁5份、尿囊素1份、羟乙基纤维素0.5份、甘油10份和去离子水70份。
6.根据权利要求1所述的具有清洁皮肤功能的外泌体制剂,其特征在于,所述脂肪干细胞外泌体粒径为20~200nm。
7.一种如权利要求1-6任一项所述的具有清洁皮肤功能的外泌体制剂的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤一、制备脂肪干细胞外泌体:
步骤二、制备载药纳米脂质体:根据配方将蛋黄磷脂酰胆碱、胆固醇、木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油溶于无水乙醇,所有组分完全溶解后减压旋干获得脂膜,将所得脂膜再次用无水乙醇溶解并再次旋干得到二次脂膜,将所得二次脂膜用DEPC生理盐水溶解水化,对水化体系进行超声处理,使脂质体充分均匀分散在水化体系中,然后用聚碳酸酯膜对水化体系进行过膜挤出得到载药纳米脂质体;
步骤三、制备外泌体制剂:将步骤一提取得到的脂肪干细胞外泌体、步骤二制备的载药纳米脂质体、尿囊素与甘油混合均匀得到体系1,将羟乙基纤维素和鼠李糖脂溶于去离子水中得到体系2,再将体系1、体系2与桦树汁混合均匀得到鼠李糖脂精华液。
8.根据权利要求7所述的具有清洁皮肤功能的外泌体制剂的制备方法,其特征在于,步骤二所述超声处理条件为300W超声处理15min。
9.根据权利要求8所述的具有清洁皮肤功能的外泌体制剂的制备方法,其特征在于,步骤二所述用聚碳酸酯膜对水化体系进行过膜挤出是用孔径为200nm的聚碳酸酯膜对水化体系进行过膜挤出,反复挤出3~5次后,再用孔径为100nm的聚碳酸酯膜对体系进行过膜挤出,反复挤出2~3次后,得到粒径为100~150nm的载药纳米脂质体。
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