CN117607311B - 一种盐酸贝那普利对映异构体的检测方法 - Google Patents

一种盐酸贝那普利对映异构体的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种盐酸贝那普利对映异构体的检测方法，涉及药物分析检测技术领域。本发明采用纤维素衍生物涂敷型手性色谱柱，以硫酸铵‑磷酸缓冲液（缓冲液中硫酸铵的浓度为10~30mmol/L，40~60v/v%）‑乙腈（20~40v/v%）‑异丙醇为流动相，流动相中盐浓度低，能够显著降低系统堵塞风险；本发明采用的流动相中有机相与色谱柱填料相匹配，显著延长了色谱柱使用寿命。而且，本发明采用反相色谱法结合手性色谱柱对盐酸贝那普利中对映异构体（RR‑异构体，杂质A）的含量进行检测分析，能够实现杂质A与盐酸贝那普利快速、有效分离，分离度大，检测结果准确度高、精确度高、灵敏度高，操作简便快捷，适宜推广应用。

Description

一种盐酸贝那普利对映异构体的检测方法
技术领域
本发明涉及药物分析检测技术领域，具体涉及一种盐酸贝那普利对映异构体的检测方法。
背景技术
盐酸贝那普利是Cba-Geigy公司开发的一种不含巯基的竞争性血管紧张素转化酶（ACE）抑制剂，化学名为(1'S,3S)-3-{[1'-(乙氧羰基)-3'-苯丙基]-氨基}-2,3,4,5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮䓬-1-乙酸单盐酸盐。盐酸贝那普利分子中有两个手性中心，有4个光学异构体，其中，SS-异构体的药物活性最强，是SR-异构体的30倍，是RS-异构体的160倍，而RR-异构体（杂质A）即使在3×10-5mol/L也无活性。通过对原料药中杂质A的研究，以及对制剂生产过程中杂质的产生、转化或清除过程研究，了解药品质量风险的过程，为优化、确认处方、工艺、包装、贮藏条件提供支持性信息，并据此建立杂质A的控制策略—揭示产品的质量，了解产品的质量风险，实现对杂质A全过程风险管理。因此检测盐酸贝那普利中杂质A的含量对于控制盐酸贝那普利的质量具有重要的意义。
美国药典（USP）以及英国药典（BP）公开了一种盐酸贝那普利中杂质A的高效液相色谱检测方法，采用球形硅胶表面固定α1酸糖蛋白固定相的色谱柱，以磷酸盐缓冲溶液（pH值=6.0，磷酸二氢钾浓度为71mmol/L，磷酸氢二钠七水合物浓度为10mmol/L）和甲醇（体积比为80:20）的混合溶液为流动相，以流动相为稀释剂。然而，上述检测方法使用的流动相中盐浓度高会堵塞色谱柱，且其色谱柱填料与有机相比例不匹配会对色谱柱造成极大的损坏，导致色谱柱基本是一次性的，色谱柱使用寿命短。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种盐酸贝那普利对映异构体的检测方法。本发明提供的检测方法采用纤维素衍生物涂敷型手性色谱柱，采用的流动相的盐浓度低，流动相中有机相与色谱柱填料相匹配，色谱柱使用寿命长。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种盐酸贝那普利对映异构体的检测方法，包括以下步骤：
将待测盐酸贝那普利样品溶解于乙腈水溶液中，得到待测样品液；
将所述待测样品液进行反相色谱检测，记录色谱图，得到待测盐酸贝那普利样品中对映异构体的含量检测结果；
所述反相色谱检测的色谱柱为纤维素衍生物涂敷型手性色谱柱，流动相为硫酸铵-磷酸缓冲液、乙腈和异丙醇的混合溶液，所述硫酸铵-磷酸缓冲液中硫酸铵的浓度为10~30mmol/L；所述流动相中硫酸铵-磷酸缓冲液的体积分数为40~60%，乙腈的体积分数为20~40%；
所述对映异构体包括RR-异构体。
优选的，所述待测样品液中盐酸贝那普利的浓度为0.5~2mg/mL。
优选的，所述乙腈水溶液中乙腈的体积分数为30~50%。
优选的，所述硫酸铵-磷酸缓冲液的pH值为3~3.4。
优选的，所述反相色谱检测的洗脱方式为等度洗脱。
优选的，所述反相色谱检测的流动相流速为0.3~0.7mL/min。
优选的，所述反相色谱检测的柱温为10~35℃。
优选的，所述反相色谱检测的检测波长为235~245nm。
优选的，所述反相色谱检测的进样体积为5~20μL。
优选的，所述待测盐酸贝那普利样品包括盐酸贝那普利原料药。
本发明采用纤维素衍生物涂敷型手性色谱柱，以硫酸铵-磷酸缓冲液（缓冲液中硫酸铵的浓度为10~30mmol/L，40~60v/v%）-乙腈（20~40v/v%）-异丙醇为流动相，流动相中盐浓度低，能够显著降低系统堵塞风险；本发明采用的流动相中有机相与色谱柱填料性质相匹配，显著延长了色谱柱使用寿命，色谱柱无需再生，使用寿命在两年以上。而且，本发明采用反相色谱法结合手性色谱柱对盐酸贝那普利中对映异构体（RR-异构体，杂质A）的含量进行检测分析，能够实现杂质A与盐酸贝那普利快速、有效分离，分离度大，检测结果准确度高、精确度高、灵敏度高，操作简便快捷，适宜推广应用。
系统适用性验证结果：系统适用性溶液色谱图中，杂质A峰和盐酸贝那普利峰分离度为4.29，5针对照溶液盐酸贝那普利峰面积RSD为1.4%，系统适用性和进样精密度满足要求。
专属性验证结果：空白溶液和其他杂质不干扰杂质A和盐酸贝那普利检测，专属性满足要求。
定量限与检测限：检测限溶液中，主峰（盐酸贝那普利）的S/N在4.22~5.33之间，杂质A的S/N在5.34~5.99之间，均不小于3，检测限满足要求，定量限溶液中主峰的S/N在10.56~18.06之间；杂质A的S/N在12.60~21.26之间，均不小于10；6针定量限溶液中主峰峰面积RSD=3.7%，杂质A峰面积RSD=3.8%，均不小于15.0%。检测限和定量限满足要求。
线性与范围实验结果：盐酸贝那普利在20~200%（0.2066~2.0659μg/mL）范围内，线性方程为y=24.6912x+0.3949，相关系数r为0.9998，≥0.990；截距为1.5%，≤20%；残差平方和为0.5，线性关系良好。杂质A在20~200%（0.2036~2.0364μg/mL）范围内，线性方程为y=25.0223x+0.3598，相关系数r为0.9998，≥0.990；截距为1.4%，≤20%；残差平方和为0.6，线性关系良好。
精密度验证结果：样品1的6份重复性溶液中杂质A含量的RSD为5.5%；样品2的6份重复性溶液中杂质A含量的RSD为5.3%，重复性满足要求。样品1的6份中间精密度溶液中杂质A含量的RSD为0.0%;样品2的6份中间精密度溶液中杂质A含量的RSD为4.2%。样品1的12份样品溶液中，杂质A含量的RSD为5.1%；样品2的12份样品溶液中，杂质A含量的RSD为4.6%，中间精密度满足要求。
准确度验证结果：样品1中杂质A各浓度水平回收率在91.02~99.20%之间，RSD为3.4%；样品2中杂质A各浓度水平回收率在90.79~98.09%之间，RSD为2.4%，准确度满足要求。
溶液稳定性验证结果：样品1对照溶液在室温37h内，主峰峰面积与0h比较，比值在95.61~99.33%之间。样品2对照溶液在室温37h内，主峰峰面积与0h比较，比值在100.00~102.57%之间，溶液稳定。样品1供试品溶液在室温37h内，杂质A峰面积与0h比较，比值在99.34~103.73%之间。样品2供试品溶液在室温37h内，杂质A峰面积与0h比较，比值在96.33~102.71%之间，溶液稳定。
附图说明
图1为系统适用性溶液的色谱图；
图2为盐酸贝那普利定位溶液色谱图；
图3为杂质A定位溶液色谱图；
图4为杂质B定位溶液色谱图；
图5为杂质C定位溶液色谱图；
图6为杂质D定位溶液色谱图；
图7为杂质E定位溶液色谱图；
图8为杂质F定位溶液色谱图；
图9为杂质G定位溶液色谱图；
图10为杂质A线性曲线图；
图11为盐酸贝那普利的线性曲线图。
具体实施方式
本发明提供了一种盐酸贝那普利对映异构体的检测方法，包括以下步骤：
将待测盐酸贝那普利样品溶解于乙腈水溶液中，得到待测样品液；
将所述待测样品液进行反相色谱检测，记录色谱图，得到待测盐酸贝那普利样品中对映异构体的含量检测结果；
所述反相色谱检测的色谱柱为纤维素衍生物涂敷型手性色谱柱，流动相为硫酸铵-磷酸缓冲液、乙腈和异丙醇的混合溶液，所述硫酸铵-磷酸缓冲液中硫酸铵的浓度为10~30mmol/L；所述流动相中硫酸铵-磷酸缓冲液的体积分数为40~60%，乙腈的体积分数为20~40%；
所述对映异构体包括RR-异构体。
若无特殊说明，本发明使用的材料和设备均为本领域市售商品。
本发明将待测盐酸贝那普利样品溶解于乙腈水溶液中，得到待测样品液。
在本发明中，所述待测盐酸贝那普利样品优选包括盐酸贝那普利原料药和/或盐酸贝那普利制剂。
在本发明中，所述乙腈水溶液中乙腈的体积分数优选为30~50%，更优选为34~45%，进一步优选为40%。
在本发明中，所述待测样品液中盐酸贝那普利的浓度优选为0.5~2mg/mL，更优选为1~1.5mg/mL，进一步优选为1mg/mL。
得到待测样品液后，本发明将所述待测样品液进行反相色谱检测，记录色谱图，得到待测盐酸贝那普利样品中对映异构体的含量检测结果。
在本发明中，所述反相色谱检测的检测条件包括：色谱柱为纤维素衍生物涂敷型手性色谱柱；柱温优选为10~35℃，更优选为15~30℃，进一步优选为20~25℃；洗脱方式为等度洗脱，流动相为硫酸铵-磷酸缓冲液、乙腈和异丙醇的混合溶液，所述硫酸铵-磷酸缓冲液中硫酸铵的浓度为10~30mmol/L，优选为15~25mmol/L，更优选为20mmol/L，所述硫酸铵-磷酸缓冲液的pH值优选为3~3.4，更优选为3.1~3.3，进一步优选为3.2，所述流动相中硫酸铵-磷酸缓冲液的体积分数为40~60%，优选为45~55%，更优选为50%，所述流动相中乙腈的体积分数为20~40%，优选为25~35%，更优选为30%；流动相流速优选为0.3~0.7mL/min，更优选为0.4~0.6mL/min，进一步优选为0.5mL/min；检测波长优选为235~245nm，更优选为240nm；进样体积优选为5~20μL，更优选为10~15μL。
在本发明中，所述硫酸铵-磷酸缓冲液的配制方法优选包括以下步骤：将硫酸铵溶解于水中，磷酸调节pH值至3~3.4。
在本发明中，所述对映异构体包括RR-异构体。
在本发明中，所述待测盐酸贝那普利样品中对映异构体的含量=对映异构体的峰面积/色谱图中所有峰的总面积×100%。
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对盐酸贝那普利对映异构体的检测方法进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
以下实施例中，主要仪器如表1所示，对照品信息如表2所示，试剂如表3所示。
表1 主要仪器
表2 对照品
表3 试剂
色谱条件如下：仪器为高效液相色谱仪；色谱柱为Chiralcel OD-R（4.6mm×250mm，10μm）；检测波长为240nm；柱温为25℃；流速为0.5mL/min；进样量为10μL；洗脱方式为等度洗脱；流动相为20mM硫酸铵-磷酸缓冲液（pH值=3.2）：乙腈：异丙醇体积比=50:30:20；运行时间为20min。
溶液配制如下。
溶剂：40v/v%乙腈-水溶液。
杂质A对照品储备液：精密称取杂质A对照品1mg，置于10mL容量瓶中，加溶剂溶解并定容，得到100μ/mL的杂质A对照品储备液。
供试品溶液：准确称取盐酸贝那普利原料药10mg，置于10mL容量瓶中，加溶剂溶解并定容，得到1mg/mL的供试品溶液。
对照溶液：精密移取供试品溶液100μL，置于100mL容量瓶中，加溶剂定容，得到1μg/mL的对照溶液。
系统适用性溶液：称取盐酸贝那普利原料药10mg，置于10mL容量瓶中，再移取杂质A对照储备液100μL，置于同一容量瓶中，加溶剂溶解并定容，得到盐酸贝那普利浓度为1mg/mL、杂质A浓度为1μg/mL的系统适用性溶液。
为证明本发明提供的分析方法的科学性及合理性，拟对此方法按照《中国药典》(2020年版第四部9101药品质量标准分析方法验证指导原则）进行方法学验证，验证项目包括系统适用性、定量限及检测限、准确度、线性、精密度、溶液稳定性及耐用性。
待测盐酸贝那普利样品中对映异构体的含量=对映异构体的峰面积/色谱图中所有峰的总面积×100%。
实施例1
系统适用性验证（含进样精密度）
空白溶液：溶剂（40v/v%乙腈-水溶液）。
杂质A对照品储备液：精密称取杂质A对照品1.039mg，置于10mL容量瓶中，加溶剂溶解并定容，摇匀。
供试品溶液：称取盐酸贝那普利原料药（批号：PBPL200704S， 江苏慧聚）10.39mg，置于10mL容量瓶中，加溶剂溶解并定容，摇匀。
对照溶液：移取供试品溶液0.1mL，置于100mL容量瓶中，加溶剂定容，摇匀。
系统适用性溶液：称取盐酸贝那普利对照品25.52mg，置于25mL容量瓶中，移取杂质A对照储备液0.25mL，置于同一容量瓶中，加溶剂溶解并定容，摇匀。
将各溶液进行反相色谱检测，记录色谱图，系统适用性验证结果见表4和图1，图1为系统适用性溶液的色谱图。
表4 系统适用性验证结果
接受标准：系统适用性溶液色谱图中，杂质A峰和主峰（盐酸贝那普利）分离度应不小于1.2。对照溶液连续进样5针，主峰峰面积RSD≤3.0%。
结论：系统适用性溶液色谱图中，杂质A峰和盐酸贝那普利峰分离度为4.29，5针对照溶液盐酸贝那普利峰面积RSD为1.4%，系统适用性和进样精密度满足要求。
实施例2
专属性验证
空白溶液：溶剂。
杂质A对照品储备液：实施例1中的杂质A对照品储备液。
杂质B对照品储备液：称取杂质B对照品1.152mg，置于5mL容量瓶中，加入甲醇1mL，超声溶解，再用甲醇定容，摇匀。
杂质C对照品储备液：称取杂质C对照品1.274mg，置于5mL容量瓶中，加入DMSO1mL，超声溶解，再用甲醇定容，摇匀。
杂质D对照品储备液：称取杂质D对照品1.043mg，置于5mL容量瓶中，加入甲醇1mL，超声溶解，再用甲醇定容，摇匀。
杂质E对照品储备液：称取杂质E对照品1.114mg，置于5mL容量瓶中，加入甲醇1mL，超声溶解，再用甲醇定容，摇匀。
杂质F对照品储备液：称取杂质F对照品1.091mg，置于5mL容量瓶中，加入甲醇1mL，超声溶解，再用甲醇定容，摇匀。
杂质G对照品储备液：称取杂质G对照品1.064mg，置于5mL容量瓶中，加入甲醇1mL，超声溶解，再用甲醇定容，摇匀。
杂质A定位溶液：移取杂质A对照品储备液2.5mL，置于25mL容量瓶中，加溶剂定容，摇匀。
杂质B定位溶液：移取杂质B对照品储备液0.5mL，置于10mL容量瓶中，加溶剂定容，摇匀。
杂质C定位溶液：移取杂质C对照品储备液0.5mL，置于10mL容量瓶中，加溶剂定容，摇匀。
杂质D定位溶液：移取杂质D对照品储备液0.5mL，置于10mL容量瓶中，加溶剂定容，摇匀。
杂质E定位溶液：移取杂质E对照品储备液0.5mL，置于10mL容量瓶中，加溶剂定容，摇匀。
杂质F定位溶液：移取杂质F对照品储备液0.5mL，置于10mL容量瓶中，加溶剂定容，摇匀。
杂质G定位溶液：移取杂质G对照品储备液0.5mL，置于10mL容量瓶中，加溶剂定容，摇匀。
盐酸贝那普利对照品储备液：称取盐酸贝那普利对照品1.035mg，置于10mL容量瓶中，加溶剂溶解并定容，摇匀。
盐酸贝那普利定位溶液：移取盐酸贝那普利对照品储备液1mL，置于10mL容量瓶中，加溶剂定容，摇匀。
将空白溶液和各溶液进行反相色谱检测，记录色谱图，专属性验证结果如表5~表6和图2~图9所示，其中，图2为盐酸贝那普利定位溶液色谱图，图3为杂质A定位溶液色谱图，图4为杂质B定位溶液色谱图，图5为杂质C定位溶液色谱图，图6为杂质D定位溶液色谱图，图7为杂质E定位溶液色谱图，图8为杂质F定位溶液色谱图，图9为杂质G定位溶液色谱图。
表5 各定位溶液的色谱峰信息
表6 专属性验证结果
接受标准：空白溶液和其他杂质不干扰杂质A和盐酸贝那普利检测。
结论：空白溶液和其他杂质不干扰杂质A和盐酸贝那普利检测，专属性满足要求。
实施例3
定量限与检测限
空白溶液：溶剂。
杂质A对照品储备液：实施例1中的杂质A对照品储备液。
盐酸贝那普利对照品储备液：实施例2中的盐酸贝那普利对照品储备液。
定量限储备液：移取杂质A和盐酸贝那普利对照品储备液各2.0mL，置于20mL容量瓶中，加溶剂定容，摇匀。
定量限溶液：移取定量限储备液1.0mL，置50mL容量瓶中，加溶剂定容，摇匀。
检测限溶液：移取定量限溶液3.0mL，置于10mL容量瓶中，加溶剂定容，摇匀。
将定量限溶液和检测限溶液进行反相色谱检测，记录色谱图，定量限与检测限结果见表7~表8。
表7 杂质A定量限和检测限实验结果
表8 盐酸贝那普利定量限和检测限实验结果
接受标准：检测限溶液中主峰和杂质A峰的S/N≥3；定量限溶液中主峰和杂质A峰的S/N≥10，6针定量限溶液中主峰和杂质A峰面积的RSD≤15%。
结论：检测限溶液中，主峰（盐酸贝那普利）的S/N在4.22~5.33之间，杂质A的S/N在5.34~5.99之间，均不小于3，检测限满足要求，定量限溶液中主峰的S/N在10.56~18.06之间；杂质A的S/N在12.60~21.26之间，均不小于10；6针定量限溶液中主峰峰面积RSD=3.7%，杂质A峰面积RSD=3.8%，均不小于15.0%。检测限和定量限满足要求。
实施例4
线性和范围
空白溶液：溶剂。
线性母液：实施例3中的定量限储备液。
200%线性溶液：移取线性母液5mL，置于25mL容量瓶中，加溶剂定容。
150%线性溶液：移取线性母液1.5mL，置10mL容量瓶中，加溶剂定容。
100%线性溶液：移取200%线性溶液5mL，置10mL容量瓶中，用溶剂定容。
50%线性溶液：移取200%线性溶液2.5mL，置10mL容量瓶中，用溶剂定容。
30%线性溶液：移取200%线性溶液1.5mL，置于10mL容量瓶中，用溶剂定容。
定量限溶液：实施例3中的定量限溶液。
将各溶液进行反相色谱检测，记录色谱图，线性和范围结果见表9~表11和图10~图11，其中，图10为杂质A线性曲线，图11为盐酸贝那普利的线性曲线。
表9 杂质A线性实验结果
表10 盐酸贝那普利线性实验结果
表11 校正因子实验结果
接受标准：线性相关系数r≥0.990；截距绝对值不大于限度浓度溶液峰面积的20%；报告残差平方和。
结论：盐酸贝那普利在20~200%（0.2066~2.0659μg/mL）范围内，线性方程为y=24.6912x+0.3949，相关系数r为0.9998，≥0.990；截距为1.5%，≤20%；残差平方和为0.5，线性关系良好。
杂质A在20~200%（0.2036~2.0364μg/mL）范围内，线性方程为y=25.0223x+0.3598，相关系数r为0.9998，≥0.990；截距为1.4%，≤20%；残差平方和为0.6，线性关系良好。
根据校正因子选择计算方法，校正因子在0.9~1.1之间采用自身对照法，校正因子在0.2~5.0之间采用加校正因子的自身对照法，校正因子<0.2、>5.0采用外标法。本发明的校正因子在0.9~1.1之间，拟定校正因子为1.0。
实施例5
精密度验证
1、重复性验证
空白溶液：溶剂。
杂质A母液：实施例2中的杂质A定位溶液。
称取盐酸贝那普利原料药10mg，置于10mL容量瓶中，加入杂质A母液1.0mL，加溶剂定容，摇匀。平行配制6份。
样品1的重复性自身对照溶液：精密移取样品1的供试品溶液100μL，置于100mL容量瓶中，加溶剂定容，得到盐酸贝那普利浓度均为1μg/mL的样品1的重复性自身对照溶液。
样品2的重复性自身对照溶液：精密移取样品2的供试品溶液100μL，置于100mL容量瓶中，加溶剂定容，得到盐酸贝那普利浓度均为1μg/mL的样品2的重复性自身对照溶液。
将重复性自身对照溶液进行反相色谱检测，记录色谱图，重复性验证结果见表12~表13和表16。
表12 样品1的重复性验证结果
表13 样品2的重复性验证结果
接受标准：6份重复性溶液中杂质A含量的RSD≤6.0%。
结论：样品1的6份重复性溶液中杂质A含量的RSD为5.5%；样品2的6份重复性溶液中杂质A含量的RSD为5.3%，重复性满足要求。
2、中间精密度验证
由另一名分析人员照重复性验证配制6份供试品溶液和自身对照溶液。
将各溶液进行反相色谱检测，记录色谱图，中间精密度验证结果见表14~表16。
表14 样品1的中间精密度验证结果
表15 样品1的中间精密度验证结果
表16 样品1和样品2的重复性和中间精密度验证结果统计
接受标准：6份中间精密度溶液中杂质A含量的RSD≤6.0%，12份样品溶液（6份重复性溶液，6份中间精密度溶液）中杂质A含量的RSD≤6.0%。
结论：样品1的6份中间精密度溶液中杂质A含量的RSD为0.0%;样品2的6份中间精密度溶液中杂质A含量的RSD为4.2%。
样品1的12份样品溶液中，杂质A含量的RSD为5.1%；样品2的12份样品溶液中，杂质A含量的RSD为4.6%，中间精密度满足要求。
实施例6
准确度验证
空白溶液：溶剂。
100%线性溶液：实施例4中的100%线性溶液。
回收率母液：同实施例2中的杂质A定位溶液。
未加标供试品溶液：称取盐酸贝那普利原料药（样品1或样品2）10mg，置于10mL容量瓶中，加溶剂溶解并定容，摇匀。
未加标对照溶液：精密移取未加标供试品溶液100μL，置于100mL容量瓶中，加溶剂定容，摇匀。
50%回收率供试品溶液：称取盐酸贝那普利原料药10mg，置于10mL容量瓶中，加入回收率母液0.5mL，加溶剂定容，摇匀。平行配制3份。
50%回收率自身对照溶液：精密移取对应供试品（样品1或样品2）溶液100μL，置于100mL容量瓶中，加溶剂定容，摇匀。
100%回收率供试品溶液：称取盐酸贝那普利原料药10mg，置10mL容量瓶中，加入回收率母液1.0mL，加溶剂定容，摇匀。平行配制3份。
100%回收率自身对照溶液：精密移取对应供试品溶液100μL，置于100mL容量瓶中，加溶剂定容，制成每1mL中含盐酸贝那普利1μg的溶液。
150%回收率供试品溶液：称取盐酸贝那普利原料药10mg，置10mL容量瓶中，加入回收率母液1.5mL，加溶剂定容，摇匀。平行配制3份。
150%回收率自身对照溶液：精密移取对应供试品溶液100μL，置于100mL容量瓶中，加溶剂定容，摇匀。
将各未加标供试品溶液和回收率供试品溶液进行反相色谱检测，记录色谱图，结果见表17~表19。
表17 未加标供试品溶液测定结果
表18 样品1中杂质A准确度测定结果
表19 样品2中杂质A准确度测定结果
接受标准：50%、100%、150%各浓度水平样品的回收率均为90~108%之间；9份回收率数据的RSD≤6.0%。
结论：样品1中杂质A各浓度水平回收率在91.02~99.20%之间，RSD为3.4%；样品2中杂质A各浓度水平回收率在90.79~98.09%之间，RSD为2.4%，准确度满足要求。
实施例7
溶液稳定性
空白溶液：溶剂。
样品1供试品溶液：实施例5重复性验证中样品1的重复性溶液-1。
样品1自身对照溶液：实施例5重复性验证中样品1的自身对照溶液-1。
样品2供试品溶液：实施例5重复性验证中样品2的重复性溶液-1。
样品2自身对照溶液：实施例5重复性验证中样品2的自身对照溶液-1。
将各溶液在室温条件下分别0h、8h、12.5h、26h、32.5h和37h后分别进行反相色谱检测，记录色谱图，结果见表20~表23。
表20 样品1自身对照溶液稳定性实验结果
表21 样品2自身对照溶液稳定性实验结果
表22 样品1供试品溶液稳定性实验结果
表23 样品2供试品溶液稳定性实验结果
接受标准：对照溶液中，各时间点主峰峰面积与0h比较，比值应为90~108%范围内。供试品溶液中，各时间点杂质A的峰面积与0h比较，比值应为90~108%范围内。
结论：样品1对照溶液在室温37h内，主峰峰面积与0h比较，比值在95.61~99.33%之间。样品2对照溶液在室温37h内，主峰峰面积与0h比较，比值在100.00~102.57%之间，溶液稳定。样品1供试品溶液在室温37h内，杂质A峰面积与0h比较，比值在99.34~103.73%之间。样品2供试品溶液在室温37h内，杂质A峰面积与0h比较，比值在96.33~102.71%之间，溶液稳定。
实施例8
耐用性验证
表24 色谱条件变动的参数
空白溶液：溶剂。
系统适用性溶液：同系统适用性中的系统适用性溶液。
杂质A母液：实施例2中的杂质A定位溶液。
供试品溶液：按照采用实施例5重复性验证中的重复性溶液的配制方法配制。
自身对照溶液：按照采用实施例5重复性验证中的自身对照溶液的配制方法配制。
分别采用表24所示的色谱条件对各溶液进行反相色谱检测，记录色谱图，结果见表25。
表25 耐用性实验结果
接受标准：系统适用性溶液中，杂质A峰和盐酸贝那普利峰分离度不小于1.2；色谱条件变化后，各条件下检出杂质A含量RSD≤6.0%。
结论：各个变动的色谱条件下，杂质A峰和盐酸贝那普利峰最小分离度为4.05，均不小于1.2；各个变动的色谱条件下，样品1杂质A含量的RSD为0.0%；样品2杂质A含量的RSD为3.4%，耐用性满足要求。
综上所述，本发明提供的检测方法，盐酸贝那普利中杂质A分析方法各验证项目均满足可接受标准，适宜推广应用。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本发明实施例在不经创造性劳动前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

Claims (9)

1.一种盐酸贝那普利对映异构体的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
将待测盐酸贝那普利样品溶解于乙腈水溶液中，得到待测样品液；
将所述待测样品液进行反相色谱检测，记录色谱图，得到待测盐酸贝那普利样品中对映异构体的含量检测结果；
所述反相色谱检测的色谱柱为纤维素衍生物涂敷型手性色谱柱，流动相为硫酸铵-磷酸缓冲液、乙腈和异丙醇的混合溶液，所述硫酸铵-磷酸缓冲液中硫酸铵的浓度为10~30mmol/L；所述流动相中硫酸铵-磷酸缓冲液的体积分数为40~60%，乙腈的体积分数为20~40%；检测波长为235~245nm；
所述对映异构体包括RR-异构体。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述待测样品液中盐酸贝那普利的浓度为0.5~2mg/mL。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述乙腈水溶液中乙腈的体积分数为30~50%。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述硫酸铵-磷酸缓冲液的pH值为3~3.4。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述反相色谱检测的洗脱方式为等度洗脱。
6.根据权利要求1或5所述的检测方法，其特征在于，所述反相色谱检测的流动相流速为0.3~0.7mL/min。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述反相色谱检测的柱温为10~35℃。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述反相色谱检测的进样体积为5~20μL。
9.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述待测盐酸贝那普利样品中对映异构体的含量=对映异构体的峰面积/色谱图中所有峰的总面积×100%。
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