CN117597113A - 用于治疗自身免疫、同种免疫、炎性和线粒体疾患的组合物及其用途 - Google Patents

Abstract

本文提供了用于治疗自身免疫、同种免疫、炎性和线粒体疾患的组合物和方法。具体而言，本公开提供了一种治疗受试者的同种免疫、自身免疫、炎性或线粒体疾患的方法，所述方法包括施用钙调磷酸酶抑制剂和细胞色素p450抑制剂，其中所述钙调磷酸酶抑制剂包括环孢菌素、他克莫司、吡美莫司或其类似物或衍生物。进一步公开了可用于所述方法的细胞色素p450抑制剂。

Description

用于治疗自身免疫、同种免疫、炎性和线粒体疾患的组合物及 其用途

相关申请的交叉引用

本申请要求2021年5月21日提交的美国临时申请号63/191,835和2021年9月2日提交的美国临时申请号63/240,217的优先权，这些美国临时申请中的每一篇以引用方式整体并入。

技术领域

本公开提供了用于以下中的一者或多者的方法和组合物：治疗、预防和/或减轻与白细胞水平的升高相关的自身免疫和炎性疾患，抑制磷酸酶钙调磷酸酶(calcineurin)，抑制淋巴因子和白介素释放，减少炎症，减少同种免疫应答，减少自身免疫应答，和/或治疗、预防和/或减轻与线粒体功能障碍相关的疾患。本公开还提供了施用钙调磷酸酶抑制剂(例如环孢菌素)与细胞色素p450酶抑制剂(例如伊曲康唑或利托那韦)的组合以减轻自身免疫、同种免疫、炎性和/或线粒体疾患，预防自身免疫、同种免疫、炎性和/或线粒体疾患的发作，或者减缓自身免疫、同种免疫、炎性和/或线粒体疾患的发展的方法。在一些实施方案中，本文所述的方法和组合物可用于减轻、减缓与以下相关的自身免疫、同种免疫和炎性疾患，或者预防与以下相关的自身免疫、同种免疫和炎性疾患的发作：移植排斥、银屑病、荨麻疹、多发性硬化症、类风湿性关节炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、狼疮、肾病综合征、皮炎、水疱性病症、葡萄膜炎、结缔组织病症、特发性血小板减少性紫癜、阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、肌萎缩性侧索硬化症和/或肌营养不良。

背景技术

钙调磷酸酶抑制剂用作多种同种免疫、自身免疫和炎性疾患的治疗。它们还已经通过它们对线粒体通量的作用显示出作为与线粒体功能障碍相关的疾患的治疗的前景[Fournier等人]。然而，它们的使用受到与它们相关的副作用的频率以及患者需要服用它们的剂量的频率的限制[Azzi等人]。

发明内容

钙调磷酸酶抑制剂通常用作用于与免疫系统有关的疾患的治疗，包括例如用于银屑病的环孢菌素[Ellis等人]或用于预防肝移植排斥的他克莫司[Haddad等人]。然而，这些治疗受到与钙调磷酸酶抑制剂相关的副作用以及患者需要服用它们的剂量的频率的限制。例如，环孢菌素与肾毒性相关并且必须每天服用两次[Schiff等人]，而他克莫司与糖尿病相关并且也必须每天服用两次[van Hoof等人]。因此，需要可以减轻这些不希望的疾患的新的钙调磷酸酶抑制剂制剂。

钙调磷酸酶抑制剂经由细胞色素p450酶被代谢。不受理论所束缚，本公开涵盖这样的见解：当与钙调磷酸酶抑制剂同时施用时，细胞色素p450抑制剂可以导致钙调磷酸酶抑制剂在身体内的半衰期更长以及钙调磷酸酶抑制剂在血流中的水平下降速率更慢[Dresser等人]。

在一个方面，本公开提供了一种用于减轻自身免疫、同种免疫、炎性疾患和线粒体疾患的方法，所述方法包括向受试者或生物样品施用钙调磷酸酶抑制剂或其药学上可接受的盐以及细胞色素p450抑制剂或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，自身免疫、同种免疫或炎性疾患与淋巴因子或白介素水平升高相关。在一些实施方案中，线粒体疾患与线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore，MPTP)相关。

在另一方面，本公开提供了一种预防与钙调磷酸酶抑制剂的代谢相关的副作用的方法，所述方法包括使钙调磷酸酶与钙调磷酸酶抑制剂或其药学上可接受的盐接触；以及使细胞色素p450与细胞色素p450抑制剂或其药学上可接受的盐接触。

在一些实施方案中，钙调磷酸酶抑制剂选自由环孢菌素、他克莫司和吡美莫司以及它们的类似物或衍生物组成的组。在一些实施方案中，钙调磷酸酶抑制剂是环孢菌素。

在一些实施方案中，钙调磷酸酶抑制剂以约1.5mg/kg体重/天的剂量经口施用。

在一些实施方案中，细胞色素p450抑制剂是胺碘酮、氯喹、西咪替丁、氯米帕明、苯海拉明、氟西汀、氟奋乃静、氟哌啶醇、帕罗西汀、奋乃静、普罗帕酮、丙氧芬、奎纳克林、奎尼丁、舍曲林、特比萘芬、硫利达嗪、胺碘酮、安普那韦、克拉霉素、达那唑、地拉韦啶、地尔硫卓、依法韦仑、红霉素、炔雌醇、氟康唑、氟伏沙明、葡萄柚汁、茚地那韦、伊曲康唑、酮康唑、奈法唑酮、奈非那韦、奎宁、利托那韦、沙奎那韦、赛诺菌素(Synercid)、醋竹桃霉素、维拉帕米或扎鲁司特。在一些实施方案中，细胞色素p450抑制剂是利托那韦。在一些实施方案中，细胞色素p450抑制剂是伊曲康唑。

在一些实施方案中，细胞色素p450抑制剂以约2mg/kg/天的剂量施用。

在某些方面，本公开提供了一种治疗自身免疫、同种免疫、炎性或线粒体疾患的方法，所述方法包括鉴定经历那些疾患中的一种或多种疾患的受试者；向所述受试者施用钙调磷酸酶抑制剂或其药学上可接受的盐；以及细胞色素p450抑制剂或其药学上可接受的盐。

附图说明

图1是示出在有和没有伊曲康唑的情况下环孢菌素随时间推移的肝清除率的图表。

具体实施方式

A.钙调磷酸酶抑制剂

钙调磷酸酶抑制剂广泛用于自身免疫、同种免疫和炎性疾患。例如，环孢菌素被用于预防器官移植排斥(一种同种免疫疾患)，以及被用于治疗慢性特发性荨麻疹(一种炎性疾患)。不受理论所束缚，应当理解，钙调磷酸酶抑制剂能够治疗这些疾患的机制是将与淋巴细胞中的细胞溶质蛋白cyclophin结合，从而抑制钙调磷酸酶-磷酸酶途径中的钙调磷酸酶。这降低了T细胞(一种重要类型的白细胞)的活性。这也可以在很大程度上对免疫系统具有下调作用[Reynolds等人]。

钙调磷酸酶抑制剂也已经被用于治疗与线粒体功能障碍相关的疾患。例如，环孢菌素已经被用于治疗肌营养不良(一种与线粒体功能障碍相关的疾患)[Hicks等人]。不受理论所束缚，应当理解，钙调磷酸酶抑制剂治疗线粒体疾患的机制是通过抑制MPTP，增加线粒体的存活性[Halestrap等人]。

不幸的是，高水平的钙调磷酸酶抑制剂也可能导致副作用。例如，发现大于250ng/mL的环孢菌素血液浓度可以导致在严重溃疡性结肠炎中长期的副作用，包括高血压和肾毒性[Pham等人]。然而，这可能难以维持，因为环孢菌素的血液浓度在给药后的前2小时内达到峰值(spike)，然后在给药后的4小时内迅速下降[Gomez等人]。在用其他钙调磷酸酶抑制剂的情况下发现了类似的结果。

先前已经发现，如果在细胞色素p450抑制剂(例如伊曲康唑)之后某一时间给予钙调磷酸酶抑制剂(例如环孢菌素)，则环孢菌素的给药方案可以延长至高达4小时。然而，人们认为将环孢菌素的给药方案延长至每日一次方案的唯一方式是通过将钙调磷酸酶抑制剂和细胞色素p450抑制剂与可乐共施用[Wimberley等人]。

此外，先前人们认为改善钙调磷酸酶抑制剂的药代动力学线性的唯一方式是通过改变钙调磷酸酶抑制剂的配方，诸如称为Neoral的环孢菌素微乳液配方[Mueller等人]。

本公开涵盖这样的见解：如果与钙调磷酸酶抑制剂同时或几乎同时给予，则细胞色素p450抑制剂可以允许血流中钙调磷酸酶的浓度更持久且在给药的前4小时内浓度下降较不显著。钙调磷酸酶抑制剂被细胞色素p450代谢，并且细胞色素p450与活性药物的组合的抑制导致更长的药物半衰期。

本公开还涵盖这样的见解：将细胞色素p450抑制剂同时或几乎同时地与钙调磷酸酶抑制剂组合施用将允许每日给药一次，从而改善患者顺应性。

本公开还涵盖这样的见解：将细胞色素p450抑制剂同时或几乎同时地与钙调磷酸酶抑制剂组合施用将降低患者之间的药代动力学变异性，从而使得更容易实现目标血液水平。

本发明要求保护的方法和组合物减轻多种炎性、同种免疫、自身免疫和/或线粒体疾患。

本公开涵盖这样的见解：钙调磷酸酶的抑制和细胞色素p450的抑制的组合可以减轻在一些实施方案中与高淋巴细胞水平相关的炎症、同种免疫和自身免疫。本公开还涵盖这样的见解：钙调磷酸酶的抑制和细胞色素p450的抑制的组合可以减轻线粒体功能障碍。

B.组合物

在某些方面，本文所述的方法包括包含通过本文所述的方法鉴定为活性成分的化合物的药物组合物和药物的制造和用途。还包括药物组合物它们本身。

在一个或多个实施方案中，钙调磷酸酶抑制剂选自由环孢菌素、他克莫司和吡美莫司以及它们的类似物或衍生物组成的组。在一些实施方案中，钙调磷酸酶抑制剂是环孢菌素。

在一个或多个实施方案中，细胞色素p450抑制剂是胺碘酮、氯喹、西咪替丁、氯米帕明、苯海拉明、氟西汀、氟奋乃静、氟哌啶醇、帕罗西汀、奋乃静、普罗帕酮、丙氧芬、奎纳克林、奎尼丁、利托那韦、舍曲林、特比萘芬、硫利达嗪、胺碘酮、安普那韦、克拉霉素、达那唑、地拉韦啶、地尔硫卓、依法韦仑、红霉素、炔雌醇、氟康唑、氟伏沙明、葡萄柚汁、茚地那韦、伊曲康唑、酮康唑、奈法唑酮、奈非那韦、奎宁、利托那韦、沙奎那韦、赛诺菌素、醋竹桃霉素、维拉帕米或扎鲁司特。在一些实施方案中，细胞色素p450抑制剂是利托那韦。在一些实施方案中，细胞色素p450抑制剂是伊曲康唑。

在一些实施方案中，本文公开的组合物包含用于治疗同种免疫、自身免疫和炎性疾患的其他化合物、药物和/或剂。例如，在一些情况下，本文公开的组合物可以与一种或多种(例如，一种、两种、三种、四种、五种或少于十种)化合物组合。

在一些情况下，本文公开的组合物被配制成用作药物组合物或用于在药物组合物中使用。此类组合物被配制成或调适成经由任何途径(例如食品和药物管理局(FDA)批准的任何途径)施用给受试者。示例性方法在FDA的CDER数据标准手册版本号004(其可在fda.give/cder/dsm/DRG/drg00301.htm获得)中进行了描述。本文所述的药物组合物可以被配制用于经口、肠胃外或经皮递送。本公开的化合物还可以与其他药物药剂组合。

在一些方面，本公开提供了包括一种或多种组合物的试剂盒，该组合物包含环孢菌素和/或利托那韦和/或伊曲康唑(在单独的组合物中或在单一组合物中)。该试剂盒还可以包括给医师和/或患者的说明书、注射器、针头、盒子、瓶子、小瓶等。

在一些情况下，本文所述的方法包括施用有效量的一种或多种如上文所述的组合物，该组合物包含钙调磷酸酶抑制剂和细胞色素p450抑制剂(作为单一组合物的一部分，或作为单独的组合物)。如本文所用的术语“有效量”和“有效治疗”是指在一段时间(包括急性或慢性施用和周期性或连续施用)内一种或多种药物在其施用范围内有效地引起预期效果或生理结果的量或浓度。

在一些情况下，组合物包含钙调磷酸酶抑制剂(例如环孢菌素)、细胞色素p450抑制剂(例如利托那韦)和药学上可接受的载剂、佐剂和/或媒介物。在一些情况下，本文所述的组合物还包含有效实现疾病或疾病症状的调节的量的一种或多种另外的治疗剂。

术语“药学上可接受的载剂或佐剂”是指可以与本公开的化合物一起施用给患者并且当以足以递送治疗量的化合物的剂量施用时不破坏本公开的化合物的药理学活性并且是无毒的载剂或佐剂。如本文所用，语言“药学上可接受的载剂”包括与药物施用相容的盐水、溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。

组合物通常被配制成与其预期的施用途径相容。施用途径的实例包括肠胃外，例如静脉内、皮内、皮下、经口(例如，吸入)、经皮(局部)、经粘膜和直肠施用。

组合物可以呈用于吸入和/或经鼻施用的溶液或粉末形式。此类组合物可以根据本领域已知的技术使用合适的分散剂或润湿剂(例如，吐温80)和助悬剂配制。无菌可注射制备物也可为在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或混悬液，例如为在1,3-丁二醇中的溶液。在可采用的可接受的媒介物和溶剂中有甘露醇、水、林格氏(Ringer)溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的不挥发性油常规地用作溶剂或混悬介质。出于这个目的，可以采用包括合成单甘油酯或二甘油酯的任何温和不挥发性油。脂肪酸(诸如油酸及其甘油酯衍生物)可用于注射剂的制备，天然的药学上可接受的油，诸如橄榄油或蓖麻油(尤其是处于它们的聚氧乙烯化形式)也可用于注射剂的制备。这些油溶液或悬浮液还可以含有长链醇稀释剂或分散剂，或羧甲基纤维素或通常用于配制药学上可接受的剂型(诸如乳剂和/或混悬剂)的类似分散剂。其他常用的表面活性剂诸如吐温或司盘(Span)和/或常用于制造药学上可接受的固体、液体或其他剂型的其他类似乳化剂或生物利用度增强剂也可以用于配制目的。

组合物可以以任何经口可接受的剂型经口施用，该剂型包括但不限于胶囊、片剂、乳液和水性混悬液、分散体和溶液。在经口使用的片剂的情况下，常用的载剂包括乳糖和玉米淀粉。还通常添加润滑剂如硬脂酸镁。对于以胶囊形式经口施用，有用的稀释剂包括乳糖和干的玉米淀粉。当经口施用水性混悬液和/或乳液时，活性成分可以混悬在或溶解在与乳化剂和/或助悬剂组合的油相中。如果需要，可以添加某些甜味剂和/或调味剂和/或着色剂。

可替代地或另外，药物组合物可以通过鼻气雾剂或吸入施用。根据药物配制领域中熟知的技术制备此类组合物，并且可采用苄醇或其他合适的防腐剂、增强生物利用率的吸收促进剂、碳氟化合物和/或本领域已知的其他增溶或分散剂将此类组合物制备成在盐水中的溶液。

在一些实施方案中，本公开提供了用于施用包含钙调磷酸酶抑制剂(例如环孢菌素)的组合物和包含细胞色素p450抑制剂(例如伊曲康唑)的组合物的方法，所述组合物各自包含本文在以下方法中公开的药物组合物(以下表示为‘X’)：用作治疗本文所公开的一种或多种疾病或疾患(例如，炎症，在以下实施例中称为‘Y’)的药物的物质X。物质X在制造用于治疗Y的药物中的用途；和用于治疗Y的物质X。

在一些情况下，本文所公开的治疗组合物可以被配制用于在美国销售，进口到美国和/或从美国出口。

该药物组合物可以与施用说明书一起包含在容器、包装或分配器中。

C.剂量

在一些实施方案中，治疗自身免疫、同种免疫或炎性疾患的方法包括施用钙调磷酸酶抑制剂和细胞色素p450抑制剂。

在一些实施方案中，钙调磷酸酶抑制剂和细胞色素p450抑制剂同期地(contemporaneously)施用。

在一些实施方案中，钙调磷酸酶抑制剂和细胞色素p450抑制剂依序地施用。

在本公开的一些方面，钙调磷酸酶抑制剂和细胞色素p450抑制剂单独施用(即，分开的剂型)。

在一些实施方案中，以约0.1mg/kg体重/天、约0.5mg/kg体重/天、约1mg/kg体重/天、约2mg/kg体重/天或约4mg/kg体重/天的量施用钙调磷酸酶抑制剂。在一些实施方案中，以5mg/天、10mg/天、20mg/天或40mg/天的量施用细胞色素p450抑制剂。该化合物可以分开或一起施用，包括作为治疗方案的一部分。

在本公开的一些方面，钙调磷酸酶抑制剂是环孢菌素并且细胞色素p450抑制剂是利托那韦。在本公开的一些方面，钙调磷酸酶抑制剂是环孢菌素并且细胞色素p450抑制剂是伊曲康唑。在一些方面，环孢菌素和利托那韦单独施用(即，分开的剂型)。在一些方面，环孢菌素和伊曲康唑单独施用(即，分开的剂型)。在一些实施方案中，以0.1mg/kg体重/天、约0.5mg/kg体重/天、约1mg/kg体重/天、约2mg/kg体重/天或约4mg/kg体重/天的量施用环孢菌素。在一些实施方案中，以约0.1mg/kg体重/天、约0.5mg/kg体重/天、约1mg/kg体重/天、约2mg/kg体重/天或约4mg/kg体重/天的量施用利托那韦。在一些实施方案中，以约0.1mg/kg体重/天、约0.5mg/kg体重/天、约1mg/kg体重/天、约2mg/kg体重/天或约4mg/kg体重/天的量施用伊曲康唑。该化合物可以分开或一起施用，包括作为治疗方案的一部分。

本公开还提供了给药方案，使得钙调磷酸酶抑制剂和细胞色素p450抑制剂作为单一日剂量在每日基础、每周基础或一些其他基础上分开或一起施用。此外，患者可以在数周、数月或数年内接受特定剂量。例如，1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1年、2年、3年、4年、5年等。

本公开还提供了给药方案，使得钙调磷酸酶抑制剂是环孢菌素并且细胞色素p450抑制剂是利托那韦或伊曲康唑。环孢菌素和利托那韦或伊曲康唑作为单一日剂量在每日基础、每周基础或一些其他基础上分开或一起施用。此外，患者可以在数周、数月或数年内接受特定剂量。例如，1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1年、2年、3年、4年、5年等。

D.治疗方法

本文所述的方法包括用于治疗与淋巴细胞水平的升高相关的病症(例如器官移植排斥)或线粒体功能障碍(例如肌营养不良)的方法。通常，所述方法包括将治疗有效量的钙调磷酸酶抑制剂(例如环孢菌素)与如本文所述的细胞色素p450抑制剂(例如伊曲康唑)的组合施用给需要此种治疗或已被确定需要此种治疗的受试者(例如，哺乳动物受试者，例如人类受试者)。

在一些情况下，方法可以包括选择患有或曾患有疾患或疾病的人类受试者。在一些情况下，合适的受试者包括例如如下的受试者，所述受试者患有或曾患有疾患或疾病但已经使该疾病或其方面消退、呈现出疾疾患状减少(例如，相对于患有相同疾患或疾病的其他受试者(例如，大多数受试者))，以及/或者在该疾患或疾病下存活延长的时间段(例如，相对于患有相同疾患或疾病的其他受试者(例如，大多数受试者))，例如，处于无症状状态(例如，相对于患有相同的疾患或疾病的其他受试者(例如，大多数受试者))。

本文所公开的方法可以应用于广泛的物种，例如人、非人灵长类(例如猴)、马、牛、猪、绵羊、鹿、麋鹿、山羊、狗、猫、兔、豚鼠、仓鼠、大鼠和小鼠。

如应用于经分离的细胞的术语“处理(treat/treating/treatment)”包括使细胞经受任何种类的过程或条件或对细胞进行任何种类的操作或程序。如应用于受试者的术语“治疗(treating)”是指对个体提供医学或外科关注、护理或管理。该个体通常患病或受损伤或者相对于群体的普通成员患病的风险增加，并且需要此种关注、护理或管理。

在一些实施方案中，术语“治疗(treating/treatment)”是指向受试者施用有效量的组合物，例如包含钙调磷酸酶抑制剂的组合物和包含细胞色素p450抑制剂的组合物，使得该受试者具有疾病的至少一种症状的减少或疾病的改善，例如有益或期望的临床结果。出于本公开的目的，有益或期望的临床结果包括但不限于一种或多种症状的减轻、疾病程度的减弱、疾病状态的稳定(即，不恶化)、疾病进展的延迟或减缓、疾病状态的改善或缓和，以及缓解(部分或全部)，无论是可检测到的或不可检测到的。治疗可以是指与未接受治疗时的预期存活相比延长存活。因此，本领域技术人员认识到，治疗可以改善疾病状态，但可以不是疾病的完全治愈。在一些实施方案中，治疗可以是预防性治疗，其中向处于发展如本文所公开的炎症的风险的受试者施用如本文所公开的组合物。在一些实施方案中，如果疾病的进展减少或停止，则治疗是“有效的”。

如本文所用的术语“受试者”是指任何动物。在一些情况下，受试者是哺乳动物。在一些情况下，如本文所用，术语“受试者”是指人(例如，男人、女人或儿童)。

在一些情况下，受试者选择可以包括从受试者(例如，候选受试者)获得样品并测试样品以获得受试者适于选择的指示。在一些情况下，受试者可以例如由健康护理专业人员确认或鉴定为已经患有或患有疾患或疾病。在一些情况下，对疾患或疾病的阳性免疫应答可以从患者记录、家族史和/或检测阳性免疫应答的指示来表现出来。在一些情况下，在受试者选择中可以包括多方。例如，第一方可以从候选者获得样品，而第二方可以测试该样品。在一些情况下，受试者可以由执业医师(例如，普通执业医师)选择和/或推荐。在一些情况下，受试者选择可以包括从所选受试者获得样品并储存样品和/或使用本文所公开的方法。样品可以包括例如细胞或细胞群。

在一些情况下，治疗方法可以包括单次施用、多次施用和根据需要重复施用以预防或治疗受试者所患的疾病或疾患。在一些情况下，治疗方法可以包括在治疗之前、在治疗期间和/或在治疗之后评估受试者的疾病水平。在一些情况下，治疗可以持续直到检测到受试者中疾病水平的降低。

如本文所用的术语“施用(administer/administering/administration)”是指植入、吸收、摄取、注射或吸入本发明的药物，无论其形式如何。在一些情况下，一种或多种本文所公开的化合物可以局部(例如，经鼻)和/或经口施用于受试者。例如，本文的方法包括施用有效量的化合物或化合物组合物以实现期望的或所陈述的效果。用于任何特定患者的具体剂量和治疗方案将取决于多种因素，包括：所用的具体化合物的活性，年龄，体重，一般健康状态，性别，饮食，施用时间，排泄率，药物组合，疾病、疾患或症状的严重程度和病程，患者对疾病、疾患或症状的处置，以及治疗医师的判断。

施用后，可以评价受试者以检测、评估或确定其疾病水平。在一些情况下，治疗可以持续直到检测到受试者的疾病水平的变化(例如，降低)。

在改善患者疾患(例如，受试者的疾病水平的变化(例如，降低))后，如果需要，可以施用本公开的化合物、组合物或组合的维持剂量。随后，施用的剂量或频率或两者可以根据症状降低到保持改善的状况的水平。然而，一旦疾病症状有任何复发，患者可能需要长期的间歇治疗。

E.定义

神经变性是指导致神经细胞进行性死亡的任何疾患。

线粒体疾患是指由线粒体功能障碍引起的任何疾患。

抑制剂(inhibitory agent)：如本文所用，术语“抑制剂”是指其存在、水平或程度与靶标的水平或活性降低相关的实体、条件或事件。在一些实施方案中，抑制剂可以直接起作用(在这种情况下，其直接对其靶标施加其影响，例如通过与靶标结合)；在一些实施方案中，抑制剂可以间接起作用(在这种情况下，其通过与靶标的调节剂相互作用和/或以其他方式改变靶标的调节剂来施加其影响，使得靶标的水平和/或活性降低)。在一些实施方案中，抑制剂是其存在或水平与相对于特定参考水平或活性(例如，在诸如存在已知抑制剂或不存在所讨论的抑制剂等适当的参考条件下观察到的)降低的目标水平或活性相关的抑制剂。

如本文所用的抑制剂是指抑制剂，而抑制是指抑制剂的活性。

调节：调节是指改变、增强或减少细胞器或细胞的活性。

拮抗剂：本领域技术人员将理解，如本文所用的术语“拮抗剂”可以用于指其存在、水平、程度、类型或形式与另一种剂(即，被抑制的剂或靶标)的水平或活性降低相关的剂、条件或事件。通常，拮抗剂可以是或包括任何化学类别的剂，包括例如小分子、多肽、核酸、碳水化合物、脂质、金属和/或显示出相关抑制活性的任何其他实体。在一些实施方案中，拮抗剂可以是直接的(在这种情况下，其直接对其靶标施加影响)；在一些实施方案中，拮抗剂可以是间接的(在这种情况下，其通过除与其靶标结合以外的方式施加其影响；例如，通过与靶标的调节剂相互作用，使得靶标的水平或活性发生改变)。

激动剂：本领域技术人员将理解，术语“激动剂”可以用于指其存在、水平、程度、类型或形式与另一种剂(即，被激动的剂或靶剂)的水平或活性增加相关的剂、条件或事件。通常，激动剂可以是或包括任何化学类别的剂，包括例如小分子、多肽、核酸、碳水化合物、脂质、金属和/或显示出相关激活活性的任何其他实体。在一些实施方案中，激动剂可以是直接的(在这种情况下，其直接对其靶标施加影响)；在一些实施方案中，激动剂可以是间接的(在这种情况下，其通过除与其靶标结合以外的方式施加其影响；例如，通过与靶标的调节剂相互作用，使得靶标的水平或活性发生改变)。

施用：如本文所用，术语“施用”通常是指向受试者或系统施加或递送。阅读本公开的本领域普通技术人员将理解，例如，多种途径可用于施用组合物；例如，一些组合物可以通过一种或多种途径(诸如眼部、经口、肠胃外、局部等)施用。在一些特定的实施方案中，施用可以是支气管(例如，通过支气管滴注)、经颊、真皮(其可以是或包括例如局部至真皮、真皮内、真皮间、经皮等中的一种或多种)、肠内、动脉内、真皮内、胃内、髓内、肌内、鼻内、腹膜内、鞘内、静脉内、心室内、在特定的器官内(例如，肝内)、粘膜、经鼻、经口、直肠、皮下、舌下、局部、气管(例如，通过气管内滴注)、阴道、玻璃体等。此外，在一些实施方案中，本公开描述了行为疗法的施用，例如经由与咨询师(例如治疗师)和/或与如本文所述的装置或计算系统的交互(interaction)。在一些实施方案中，施用可以涉及作为间歇性(例如，在时间上分开的多个剂量)和/或周期性(例如，被相同的时间段分开的各个剂量)给药的给药、施加或交互。在一些实施方案中，施用可涉及连续给药(例如，灌注)、施加或交互至少选定的时间段。

环孢菌素是具有下面的结构的化学化合物

利托那韦是具有下面的结构的化学化合物：

约：当在本文中在提及值时被使用时，术语“约”是指在上下文中与所提及的值相似的值。通常，熟悉上下文的本领域技术人员将会理解在该上下文中“约”所涵盖的相关变化程度。例如，在一些实施方案中，术语“约”可涵盖在参考值的25％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更小范围内的值范围。

药学上可接受的盐：术语“一种药学上可接受的盐”或“多种药学上可接受的盐”是指由药学上有活性的化合物的酸性和碱性基团形成的盐。例示性的盐包括但不限于硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐(gentisinate)、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐(glucaronate)、糖二酸盐(saccharate)、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐(即1,1′-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐))盐。

除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语均具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。本文描述了用于本公开的方法和材料；也可以使用本领域已知的其他合适的方法和材料。所述材料、方法和实例仅是说明性的而不是旨在限制。本文提及的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库条目和其他参考文献以引用方式整体并入。在冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。

本公开的其他特征和优点将从以下详细描述和附图以及从权利要求书中显而易见。

在以下实施例中进一步描述本公开，所述实施例不限制权利要求中所描述的本公开的范围。

例示

在以下实施例中进一步描述本公开，所述实施例不限制权利要求中所描述的本公开的范围。

F.实施例1

1.材料和方法

如本文所述在IONTOX LLC公司在肝细胞药物-药物相互作用模型中测试了化合物。

环孢菌素购自Tokyo Chemical Industry(TCI)(目录号C2408，批号4244-NO)。

伊曲康唑购自Cayman Chemical Company(目录号13288，批号0464242-56)。

原代人肝细胞获自Sekisui XenoTech(目录号H1500.H15Q，批号HC3-38)。

用来自Seisui-XenoTech的Optithaw肝细胞培养基(目录号K8000，批号20-1-0532)解冻原代人肝细胞。培养基是用于初始接种的Optiplate(目录号K8200，批号21-1-0100)和用于培养的OptiCulture(目录号K8300，批号21-1-0102)。注意，来自原代肝细胞的OptiThaw、OptiPlate和Opticulture培养基是专有的。

二甲亚砜购自Sigma-Aldrich(目录号D2650-100ML，批号RNBF5782)。

2.细胞内ATP

根据制造商的说明书，在37℃、5％ CO2下运行24小时之后，通过监测细胞内ATP(Promega CellTiter Glo，目录号G7572，批号0000482080)来测量细胞内ATP。(注意：孵育后，检查板的孔中溶解度问题的证据)。在暴露期后，除去培养基，并且将50μL新鲜培养基加50μL裂解试剂(含有荧光素酶)添加到细胞中，并将板振摇10分钟。此缓冲液释放细胞内ATP并保存它。裂解缓冲液还含有用于测定的其他试剂。将保存的裂解物(100μL)转移到不透明的多孔板中，用萤光素处理，萤光素在ATP、Mg2+、氧气的存在下，萤光素酶形成产生发光信号的氧化萤光素(图10.1)(所有这些反应物都处在裂解缓冲液中并用箔覆盖以减少光)。信号越高，细胞越健康。发光信号高度稳定，因此读取时间不是问题。使用BioTek Synergy H4读板器以发光模式读取测定发光。

3.LC-MS/MS

将样品在含有0.1％甲酸的50％乙腈中以1:50稀释并涡旋混合。使用与WatersTQ-S三重四极质谱仪一致的Waters Acquity UPLC进行环孢菌素A的LC-MS分析。反相分离使用Waters BEH Phenyl柱1.7μM 2.1mm x 50mm，和用于流动相A的含0.1％甲酸的水，和用于流动相B的含0.1％甲酸的乙腈。梯度洗脱为初始5％，1分钟时95％ B，3分钟时95％ B和3.1分钟时5％ B。柱温为55℃，流速为0.4mL/min，并且进样5uL。使用具有20eV碰撞能量的1202.9->1202.9跃迁以MRM模式进行环孢菌素A的质谱分析。数据使用Waters TargetLynx应用管理器处理并输出到Excel进行报告。

本研究使用2D培养的人原代肝细胞。获得肝细胞并将其接种到用胶原预包被的24孔板中。使这些培养物在含有地塞米松的培养基中生长以延长代谢能力。测试CYP3A4抑制剂伊曲康唑对环孢菌素的肝清除率的影响。将报告的IC50浓度(5μM)的在甲醇中的环孢菌素A的等分试样添加到板中并在室温下在通风橱中干燥。然后将环孢菌素再溶解于培养基+0.2％ DMSO中并在37℃、5％ CO2下孵育1小时。将此混合物添加到培养物中的肝细胞中。将细胞在37℃下孵育240分钟，并且在0、30、60、120、180和240分钟时收集样品，并且通过LC-MS/MS针对环胞菌素A的存在分析该样品。240分钟后监测细胞内ATP。作为比较，将细胞与伊曲康唑(2.2μM)一起孵育10分钟，然后在培养基中添加环孢菌素A(5μM)。作为CYP3A4代谢控制的对照，将咪达唑仑(在甲醇中)在板上在室温下在通风橱中干燥，然后在37℃、5％ CO2下溶解在培养基(目标浓度10μM)中1小时。将培养基混合物添加到细胞中并在37℃下孵育240分钟，并且在0、30、60、120、180和240分钟时收集样品，并且通过LC-MS/MS针对咪达唑仑、1-羟基咪达唑仑和4-羟基咪达唑仑的存在分析该样品。

在肝细胞药物-药物相互作用模型中将环孢菌素A和伊曲康唑以组合进行测试。选择肝细胞药物-药物相互作用模型是因为它与体内药物清除率的相关性。

环孢菌素A和伊曲康唑的组合使用导致在肝清除率研究的前180分钟内持续的环孢菌素浓度为初始环孢菌素浓度的56.67％，在180分钟时比单独的环孢菌素浓度有36.6％的统计学显著改善(p<0.05)(图1、表1)。240分钟时的环孢菌素A测量提供了与180分钟相比环孢菌素浓度显著增加的奇怪结果。不受理论所束缚，此结果被理解为是由于溶解度问题，并且数据被排除。

CYP3A4抑制剂伊曲康唑和环孢菌素的几乎同时施用所提供的环孢菌素清除率的显著降低是真正令人惊讶的，并且突出了此方法作为允许对炎性、自身免疫、同种免疫或线粒体疾患进行每日一次环孢菌素给药的方式的潜力。这种施用避免了当单独施用环孢菌素时所见的环孢菌素浓度的快速下降。

表1

G.实施例2

1.材料和方法

如本文所述在递增剂量研究中测试了化合物。

获得经修饰的环孢菌素(Neoral)和利托那韦。

筛选36只猫以纳入递增剂量研究。纳入标准为年龄3-6岁且体重为4-7kg。排除标准为在详细的医疗和手术史以及完整的体格检查后任何临床显著(以研究者的观点看)的急性或慢性疾病的证据；以及基于基因分型的细胞色素P450 3A4-代谢物质的不良代谢。

入院后，受试者将被分为3个队列：队列1、队列2和队列3。每个受试者将仅参与一个队列。每个队列将含有12只猫。

队列1将在第1天接受24mg环孢菌素的经口剂量以及与5.5mg利托那韦的单一经口剂量共同施用的1.2mg环孢菌素的单一经口剂量。

队列2将在第1天接受24mg环孢菌素的经口剂量以及与10mg利托那韦的单一经口剂量共同施用的1.2mg环孢菌素的单一经口剂量。

队列3将在第1天接受24mg环孢菌素的经口剂量以及与20mg利托那韦的单一经口剂量共同施用的1.2mg环孢菌素的单一经口剂量。

在环孢菌素的经口剂量以及共同施用的环孢菌素和利托那韦的经口剂量后0、2、4、8、12和24小时对每个队列进行取样。

2.结果

将为每个样品确定全血环孢菌素浓度。此外，对于每个样品，在适当时，将使用非房室分析估计全血PK参数：Cmax、tmax、kel、t1/2、AUC0-last、AUC0-inf、CL/F和Vz/F。此外，将测量血浆利托那韦浓度以确认其在第4天给药之后的存在。

将计算所有相关PK参数的描述性统计值：n、平均值、标准偏差、最小值、中值、最大值、几何平均值和变异系数。

使用对剂量未校正的参数的自然对数，用受试者作为随机效应以及天数作为固定效应，使用方差分析(ANOVA)模型，在第1天与第4天之间比较PK参数—Cmax、AUC0-last、AUC0-inf。使用对数转换数据和双侧t检验程序，对于所有三个参数，构建在第4天到第1天的环孢菌素几何平均比率(GMR)的置信区间(CI)(90％)。GMR和90％CI将被指数化回到原始标度。将从GMR和CI评价利托那韦的共同施用对环孢菌素的影响。

此分析将显示出适于每日一次给药方案的环孢菌素半衰期延长和药代动力学可变性降低两者的统计学显著影响。

H.参考文献

1.Foumier，N.，G.Ducet，and A.Crevat.″Action of cyclosporine onmitochondrial calcium fluxes.″Journal of bioenergetics and biomembranes 19.3(1987)：297-303.

2.Jamil R.Azzi，Mohamed H.Sayegh，Samir G.Mallat，CalcineurinInhibitors：40 Years Later，Can’t Live Without...，The Journal of ImmunologyDecember 15，2013，191(12)5785-5791；DOI：10.4049/jimmunol.1390055

3.Jeffrey Schiff，Edward Cole and Marcelo Cantarovich，TherapeuticMonitoring of Calcineurin Inhibitors for the Nephrologist，CJASN March 2007，2(2)374-384；DOI：https：//doi.org/10.2215/CJN.03791106

4.van Hooff，Johannes P.；Christiaans，Maarten H.L.；van Duijnhoven，EllyM.Tacrolimus and Posttransplant Diabetes Mellitus in Renal Transplantation，Transplantation：June 15th，2005-Volume 79-Issue 11-p 1465-1469 doi：10.1097/01.TP.0000157870.21957.E5

5.Ellis CN，Gorsulowsky DC，Hamilton TA，et al.Cyclosporine ImprovesPsoriasis in a Double-blind Study.JAMA.1986；256(22)：3110-3116.doi：10.1001/jama.1986.03380220076026

6.Haddad E，McAiister V，Renouf E，Malthaner R，Kjaer MS，GluudLL.Cyclospofin versus tacrolimus for liver transplanted patients.CochraneDatabase of Systematic Reviews 2006，Issue

4.Art.No.：CD005161.DOI：10.1002/14651858.CD005161.pub2.Accessed 20 May2021.

7.Niwa，Toshiro，et al.”Effect of cyclosporine and tacrolimus oncytochrome p450 activities in human liver microsomes.″Yakugaku Zasshi 127.1，2007：209-216.

8.Dresser，G.K.，Spence，J.D.&Bailey，D.G.Pharmacokinetic-PharmacodynamicConsequences and Clinical Relevance of Cytochrome P450 3A4 Inhibition.ClinPharmacokinet 38，41-57，2000.https：//doi.org/10.2165/00003088-200038010-00003

9.Reynolds，N.J.and Al-Daraji，W.I.，Calcineurin inhibitors andsirolimus：mechanisms of action and applications in dermatology.Clinical andExperimental Dermatology，(2002)，27：555-561.https：//doi.org/10.1046/j.1365- 2230.2002.01148.x

10.Hicks，Debbie，et al.″Cyclosporine A treatment for Ullrichcongenital muscular dystrophy：a cellular study of mitochondrial dysfunctionand its rescue.”Brain 132.1(2009)：147-155.

11.Halestrap，A P et al.“Cyclosporin A binding to mitochondrialcyclophilin inhibits the permeability transition pore and protects heartsfrom ischaemia/reperfusion injury.”Molecular and cellular biochemistryvol.174，1-2(1997)：167-72.

12.Pham CQ，Efros CB，Berardi RR.Cyclosporine for Severe UlcerativeColitis.Annals of Pharmacotherapy.2006；40(1)：96-101.doi：10.1345/aph.1G374

13.Gomez，D.Y.，Wacher，V.J.，Tomlanovich，S.J.，Hebert，M.F.and Benet，L.Z.，The effects of ketoconazole on the intestinal metabolism and bioavailabilityof cyclosporine.Clinical Pharmacology&Therapeutics，1995，58：15-19.https：// doi.org/10.1016/0009-9236(95)90067-5

14.Wimberley，S.，Haug Iii，M.，Shermock，K，Qu，A.，Maurer，J.，Mehta，A.，Schilz，R.and Gordon，S.(2001)，Enhanced cyclosporine-itraconazole interactionwith cola in lung transplant recipients.Clin Transplantation，15：116-122.https：//dol.org/10.1034/j.1399-0012.2001.150206.x

15.Mueiler，E.A.，Kovarik，J.M.，van Bree，J.B.et al.Improved DoseLinearity of Cyclosporine Pharmacokinetics from a MicroemulsionFormulation.Pharrn Res 11，301-304(1994).https：//doi.org/10.1023/A：1018923912135

Claims (22)

1.一种治疗受试者的同种免疫、自身免疫、炎性或线粒体疾患的方法，所述方法包括：施用钙调磷酸酶抑制剂和细胞色素p450抑制剂。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述钙调磷酸酶抑制剂和所述细胞色素p450抑制剂同期地施用。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述钙调磷酸酶抑制剂和所述细胞色素p450抑制剂几乎同期但依序地施用。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述钙调磷酸酶抑制剂选自：环孢菌素、他克莫司、吡美莫司以及它们的类似物或衍生物。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述细胞色素p450抑制剂选自：胺碘酮、氯喹、西咪替丁、氯米帕明、苯海拉明、氟西汀、氟奋乃静、氟哌啶醇、帕罗西汀、奋乃静、普罗帕酮、丙氧芬、奎纳克林、奎尼丁、利托那韦、舍曲林、特比萘芬、硫利达嗪、胺碘酮、安普那韦、克拉霉素、达那唑、地拉韦啶、地尔硫卓、依法韦仑、红霉素、炔雌醇、氟康唑、氟伏沙明、葡萄柚汁、茚地那韦、伊曲康唑、酮康唑、奈法唑酮、奈非那韦、奎宁、利托那韦、沙奎那韦、赛诺菌素、醋竹桃霉素、维拉帕米、扎鲁司特以及它们的类似物或衍生物。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述钙调磷酸酶抑制剂是环孢菌素。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述细胞色素p450抑制剂是利托那韦。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述细胞色素p450抑制剂是伊曲康唑。

9.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述钙调磷酸酶抑制剂以0.1mg/kg体重/天、约0.2mg/kg体重/天、约0.3mg/kg体重/天、约0.4mg/kg体重/天、约0.5mg/kg体重/天、约1.0mg/kg体重/天、约2.0mg/kg体重/天或约4.0mg/kg体重/天的量施用。

10.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述细胞色素p450抑制剂以0.1mg/kg体重/天、约0.2mg/kg体重/天、约0.3mg/kg体重/天、约0.4mg/kg体重/天、约0.5mg/kg体重/天、约1.0mg/kg体重/天、约2.0mg/kg体重/天或约4.0mg/kg体重/天的量施用。

11.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述自身免疫、同种免疫或炎性疾患与淋巴细胞水平的升高相关。

12.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述线粒体疾患与线粒体通透性转换孔相关。

13.如权利要求10所述的方法，其中所述自身免疫、同种免疫或炎性疾患是器官移植排斥、银屑病、荨麻疹、炎性肠病、溃疡性结肠炎、狼疮性肾炎或多发性硬化症。

14.如权利要求11所述的方法，其中所述线粒体疾患是帕金森病、阿尔茨海默病、亨廷顿病、肌萎缩性侧索硬化症或肌营养不良。

15.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述钙调磷酸酶抑制剂作为经口剂型施用。

16.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述细胞色素p450抑制剂作为经口剂型施用。

17.一种介导受试者中与淋巴细胞水平的升高相关的疾病、病症或疾患的方法，所述方法包括施用钙调磷酸酶抑制剂和细胞色素p450抑制剂。

18.一种介导受试者中与线粒体通透性转换孔相关的疾病、病症或疾患的方法，所述方法包括施用钙调磷酸酶抑制剂和细胞色素p450抑制剂。

19.如权利要求14所述的方法，其中所述钙调磷酸酶抑制剂和所述细胞色素p450抑制剂同期地施用。

20.如权利要求14或15所述的方法，其中所述钙调磷酸酶抑制剂和所述细胞色素p450抑制剂几乎同期但依序地施用。

21.如权利要求16-19中任一项所述的方法，其中所述钙调磷酸酶抑制剂选自：环孢菌素、他克莫司和吡美莫司以及它们的类似物或衍生物，或它们的药学上可接受的盐。

22.如权利要求16-19中任一项所述的方法，其中所述细胞色素p450抑制剂选自：胺碘酮、氯喹、西咪替丁、氯米帕明、苯海拉明、氟西汀、氟奋乃静、氟哌啶醇、帕罗西汀、奋乃静、普罗帕酮、丙氧芬、奎纳克林、奎尼丁、利托那韦、舍曲林、特比萘芬、硫利达嗪、胺碘酮、安普那韦、克拉霉素、达那唑、地拉韦啶、地尔硫卓、依法韦仑、红霉素、炔雌醇、氟康唑、氟伏沙明、葡萄柚汁、茚地那韦、伊曲康唑、酮康唑、奈法唑酮、奈非那韦、奎宁、利托那韦、沙奎那韦、赛诺菌素、醋竹桃霉素、维拉帕米或扎鲁司特以及它们的类似物或衍生物，或它们的药学上可接受的盐。