CN117582557B - 脱矿骨纤维及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及骨科材料技术领域，公开了一种脱矿骨纤维及其制备方法。所述脱矿骨纤维的制备方法，包括下述步骤：（1）水洗皮质骨；（2）酸性脱矿液清洗皮质骨，所述酸性脱矿液，包括下述质量百分比含量的原料：0.5‑3%盐酸、4‑15wt%氯化钠、0.02‑0.2%活性抗氧化剂，所述活性抗氧化剂为N‑乙酰半胱氨酸和L‑抗坏血酸中的至少一种；（3）水洗皮质骨；（4）粉碎皮质骨，水洗；（5）冷冻干燥。本发明的脱矿骨纤维制备方法迅速有效地去除无机成分，同时保留胶原纤维完整性，确保高质量和生物相容性。其细小均匀的骨纤维适合微创手术和组织工程应用，能与血液或骨髓混合用于骨缺损部位，提高骨修复效率。

Description

脱矿骨纤维及其制备方法
技术领域
本发明涉及骨科材料技术领域，尤其涉及脱矿骨纤维及其制备方法。
背景技术
在医学领域，尤其是骨科手术和再生医学中，修复大的骨缺损是一项持续的挑战。当受伤或手术导致的骨缺损超出了自然愈合的范围时，需要引入骨替代材料或填充材料以辅助骨愈合。其中，脱矿骨纤维因其出色的骨诱导能力，已成为一种备受青睐的骨诱导填充材料。
传统的脱矿方法主要采用盐酸对骨组织进行处理，以移除其无机成分。特别是对于皮质骨，常需5-7天的处理时间才能完全去除骨骼中的矿物质。然而，长时间的脱矿处理不仅耗时，还可能导致胶原结构的水解，降低材料的机械性能。因此，使用传统方法处理的脱矿骨材料在物理性质上往往呈现出橡胶样状态，使得后续的加工变得困难。这种情况下，常需采用刮刀等工具将处理后的皮质骨削成纤维状，但这样的方法效率低下且难以控制纤维的形态和尺寸。
因此，存在一个迫切的需求，即开发一种新的、高效的脱矿方法，旨在保持胶原纤维的完整性，同时缩短处理时间，提高脱矿效率。
此外，为了满足微创手术的需求，也需要得到能够进行注射的填充材料。当前的方法中，因为脱矿骨材料的物理性质不佳，很难将其直接转化为适合微创手术的注射型填充材料。
骨材料的孔隙结构对于细胞迁移、血管形成以及新骨形成至关重要。孔隙不仅为细胞提供了定植的空间，还为营养物质的交换和新骨组织的生长提供了途径。因此，开发一种具有良好孔隙结构的骨材料，对于加快骨愈合和提高修复效果具有重要意义。
发明内容
有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种新的、高效的骨纤维制备方法，能够在短时间内完成脱矿，得到细小、均匀的骨纤维，使其更加适应微创手术和组织工程的需求，并且具有良好的细胞存活率。
一种脱矿骨纤维的制备方法，包括下述步骤：
（1）水洗皮质骨；
（2）酸性脱矿液清洗皮质骨，所述酸性脱矿液包括下述原料：0.5-3wt%盐酸、4-15wt%氯化钠、0.02-0.2wt%活性抗氧化剂，所述活性抗氧化剂为N-乙酰半胱氨酸和L-抗坏血酸中的至少一种；
（3）水洗皮质骨；
（4）粉碎皮质骨，水洗；
（5）冷冻干燥。
优选地，所述步骤（2）为将皮质骨20-40℃在酸性脱矿液中浸泡24-48小时。
优选地，所述步骤（2）中酸性脱矿液的质量为皮质骨的10-20倍。
优选地，所述步骤（3）为水洗皮质骨，再用PBS缓冲液清洗，调整pH值7.0-7.5。
优选地，步骤（4）为将皮质骨粉碎，用异丙醇清洗，再用水清洗。
优选地，步骤（4）中将皮质骨研磨粉碎得到长度4-10mm，直径0.05-0.25mm的骨纤维。
优选地，所述步骤（5）为-20℃到-30℃、真空压力50-100pa、冷冻干燥10-20小时。
优选地，所述活性抗氧化剂为N-乙酰半胱氨酸和L-抗坏血酸按质量比(1-2):(1-2)组成。
本发明还提供了一种脱矿骨纤维，采用上述方法制备而成。
本发明还提供了一种脱矿骨纤维的应用，所述脱矿骨纤维与血液、骨髓组织混合后，用于直接填充或注射到骨缺损部位。
本发明的脱矿骨纤维制备方法，能够在短时间内完成脱矿处理，获得细小且均匀的骨纤维。通过使用特定配比的盐酸和氯化钠溶液，本方法能够更加有效地去除骨组织中的无机成分，同时保持胶原纤维的完整性。此外，经过精细控制的浸泡、清洗和冷冻干燥步骤确保了骨纤维的高质量和良好的生物相容性。制备出的脱矿骨纤维适用于微创手术和组织工程，能够与血液或骨髓组织混合后直接填充或注射到骨缺损部位，显著提升了骨修复的效率和效果。
附图说明
为了更直观地展示本发明或现有技术的技术内容，接下来会简要介绍相关的附图。需要指出的是，这些附图只代表本发明的部分实施例。对于该领域的技术人员，在不涉及创新努力的情况下，也可以依据这些附图得到更多的图解。
图1为本发明实施例3所制备的骨纤维的实物照片。
具体实施方式
为了更为深入和全面地理解本发明，将在下文中详细地描述本发明的优选执行方式以及其包含的具体实例。这种详细的描述有助于揭示发明的核心思想和工作原理，从而使其应用和推广更为顺利。在描述和解释本发明时，采用了一系列的技术和科学术语。为了避免任何误解或混淆，明确指出，除非特别标注或定义，这些术语的含义应当与本发明所在领域的技术专家或研究者的通常理解保持一致。这意味着，在此采用的定义并不试图改变或扭曲这些术语的公认含义。然而，任何一个领域的术语都可能存在多种解释或定义。在某些情况下，不同的文献、研究或应用中，同一术语可能会有不同的解释。为了避免这种情况给本发明的理解和应用带来困扰，在此特别声明：如果文中的术语定义与其他来源或标准存在矛盾，应以本说明书中给出的定义为准。希望通过这种详尽和明确的描述方式，使得本发明的每一个细节和方面都能被准确地传达和理解。
一种脱矿骨纤维的制备方法，包括下述步骤：
（1）水洗皮质骨；
该步骤的主要目的是为了去除骨组织表面的各种杂质，如血液、软组织残余、细胞碎片等，以确保后续处理过程的效果和质量。具体操作上，首先将采集的皮质骨放入水中，通过温和的搅动或轻柔摇晃来帮助松散并清除附着在骨表面的有机物和杂质，也可以采用超声水洗。在这一过程中，水流也起到了冲刷作用，有助于进一步去除骨组织中的血液和其他溶解性物质。为了提高清洁效果，可以多次更换清水，直到洗涤液保持清澈，从而确保骨材料的表面和内部孔隙得到充分的清洁。这一步骤虽然简单，但对于去除可能影响脱矿效率和最终产品质量的有机杂质至关重要，是后续脱矿和纤维化过程顺利进行的基础。
（2）20-40℃，将皮质骨在酸性脱矿液中搅拌浸泡24-48小时，所述酸性脱矿液为0.5-3wt%盐酸、4-15wt%氯化钠、0.02-0.2wt%活性抗氧化剂的水溶液；所述酸性脱矿液的质量为皮质骨的10-20倍；
在本发明中，使用酸性脱矿液处理皮质骨的步骤是实现脱矿骨纤维制备的关键环节。这一步骤的核心目的是通过化学方式有效地移除骨组织中的无机矿物质成分，主要是钙盐，从而使骨材料在结构上更加丰富于胶原蛋白，为后续的纤维化处理和临床应用奠定基础。具体操作中，首先将清洁过的皮质骨浸泡在含有0.5-3wt%盐酸、4-15wt%氯化钠、0.02-0.2wt%活性抗氧化剂的水溶液中，温度控制在20-40℃之间，时间持续24-48小时。在这个过程中，盐酸的作用是溶解骨中的钙盐和其他无机成分，从而脱除骨的矿化部分。与此同时，氯化钠的加入则在于帮助维持骨组织中胶原纤维的结构完整性，防止其在脱矿过程中受到破坏。氯化钠的浓度和盐酸的浓度共同起到了促进脱矿效率和保护胶原纤维的双重作用。这一步骤对于后续的物理处理和骨纤维的生物活性都至关重要，因为只有当骨材料中的无机成分被充分移除，纤维状结构才能得以形成，且能够为细胞提供更为有利的支撑和增长环境。
本发明中的酸性脱矿液采用盐酸和氯化钠的混合溶液，其各自作用协同贡献于脱矿骨纤维的制备，显著提升细胞存活率。盐酸在此过程中发挥着关键作用，其脱矿能力主要体现在有效溶解骨组织中的钙和磷等无机盐。这一过程是脱矿的核心，去除无机成分后，骨纤维富含胶原蛋白，为细胞提供了有利的生长环境。同时，盐酸通过调控处理环境的pH值，保护胶原蛋白免受过度水解，维持其稳定性，这对于保持骨纤维的生物活性和细胞相容性至关重要。
氯化钠的加入则进一步强化了这一过程。其胶原盐析作用减少了胶原的水解，有助于保存骨组织的有机成分，特别是对于细胞附着和增殖至关重要的胶原蛋白。此外，氯化钠优化骨组织的孔隙结构，提高了无机盐的溶出速度，同时为细胞迁移和生长提供了更多空间，从而促进了新骨形成。这种改善孔隙结构的作用，不仅加速了脱矿过程，还有助于保持骨纤维的结构完整性，使其更接近原始骨的结构，提高生物相容性。
在本发明中，盐酸和氯化钠的共同使用不仅提高了脱矿效率，而且通过维持胶原蛋白的稳定性和改善孔隙结构，共同创造了有利于细胞生长和存活的环境。这种协同作用优化了脱矿骨纤维的品质，为骨修复和再生医学应用提供了有力的支持，特别是在提高细胞存活率方面，展现了其重要的生物学价值。
（3）先用水洗皮质骨，再用PBS缓冲液清洗，调整pH值至7.0-7.5；
在本发明的制备过程中，二次清洗是为了彻底去除在酸性脱矿步骤中可能残留的酸性物质和其他溶解物质，确保脱矿骨纤维的纯净性和生物安全性。这一步骤的执行具体如下：在完成酸性脱矿液的浸泡处理后，将皮质骨首先用清水清洗，目的是去除其表面和内部结构中可能残留的盐酸和氯化钠等物质。水洗可以有效地减少酸性残留物，避免对后续细胞培养或植入体产生不良影响。随后，使用PBS（磷酸盐缓冲液）对皮质骨进行进一步的清洗，这不仅可以进一步清除残余的酸性物质，还有助于调整骨材料的pH值。PBS的使用是基于其良好的缓冲能力，能够稳定pH值，为细胞提供一个适宜的生长环境。
（4）将皮质骨研磨粉碎得到长度4-10mm、直径0.05-0.25mm的骨纤维，用异丙醇清洗，再用水清洗；
在本发明的研磨粉碎与异丙醇清洗步骤中，目的在于将经过脱矿处理的骨材料加工成适用于临床医疗应用的细小、均匀的骨纤维。随后，使用异丙醇对研磨后的骨纤维进行深度清洗，目的是移除骨材料中可能残留的脂肪和其他有机物质。异丙醇作为一种有效的有机溶剂，能够溶解骨材料中的油脂成分，从而进一步净化骨纤维。此外，异丙醇清洗还有助于去除潜在的微生物污染，提高材料的生物安全性。最后的水洗步骤旨在清除异丙醇及其溶解的有机物质，确保骨纤维的纯净度和适用性。
（5）-20℃到-30℃、真空压力50-100pa、冷冻干燥10-20小时。
这一过程利用了低温条件下水分子的直接升华特性，即水分子从固态直接转变为气态而不经历液态阶段，从而实现高效的水分去除。冷冻干燥过程中，骨纤维中的水分迅速蒸发，而其余成分则得以保持原有的结构和特性。此过程通常持续10至20小时，以确保骨纤维内部的水分被完全去除。冷冻干燥后的骨纤维具有较低的水分含量，这不仅有助于提高其稳定性和耐久性，还能减少微生物生长的风险，从而延长其有效使用期。此外，干燥过程中保持的低温环境有助于保护骨纤维中的生物活性物质，如生长因子和胶原蛋白，使其在医疗应用中发挥更好的效果。
本发明的脱矿骨纤维用血液、骨髓组织浸润揉合后直接使用或装入注射器注射到特定部位。
进一步，通过实验得出，采用优化调整后的酸性脱矿液可以提升产品性能。
具体的，一种酸性脱矿液，包括下述原料：0.5-3wt%盐酸、4-15wt%氯化钠、0.02-0.2wt%活性抗氧化剂，所述活性抗氧化剂为N-乙酰半胱氨酸和L-抗坏血酸中的至少一种。优选地，所述活性抗氧化剂为N-乙酰半胱氨酸和L-抗坏血酸按质量比(1-2):(1-2)组成。
在骨材料经历酸性脱矿处理时，N-乙酰半胱氨酸（NAC）和L-抗坏血酸（维生素C）作为抗氧化剂，帮助减少由酸性环境引起的氧化应激。这一阶段，它们保护骨组织中的有机成分，尤其是胶原蛋白免受氧化损害。即使在多次洗涤后被去除，这些抗氧化剂在脱矿阶段提供的保护作用对最终的骨纤维产品的质量有长远影响。通过保护骨纤维中的有机成分，它们间接地提高了细胞的存活率和骨纤维的生物相容性。
本发明的骨纤维制备方法在传统技术的基础上实现了显著的改进，其主要优势包括：
（1）提高脱矿效率：本发明采用优化的酸性脱矿液，结合精确的温度和时间控制，大幅缩短了脱矿所需时间。传统方法通常需要数周甚至更长时间才能完成脱矿，而本发明的方法仅需短短两天即可实现骨纤维的脱矿处理。这一显著提高的效率，不仅节约了时间和资源，还加快了整个生产流程，使得骨纤维制备更加高效和经济。
（2）得到细小、孔隙丰富的骨纤维：本发明经过特定的处理和清洗步骤，能够生产出细小且具有丰富孔隙的骨纤维。这些纤维的大小和结构使其能够与血液或骨髓组织有效地浸润和揉合，为细胞和血管的长入提供了必要的空间和环境。与传统骨修复材料相比，本发明的骨纤维具有更好的生物相容性和生物活性，有利于促进骨再生和修复。
（3）得到高细胞存活率的骨纤维：本发明采用特定浓度的盐酸和氯化钠配制的脱矿液，这不仅有效去除骨纤维中的无机成分，保留了丰富的胶原蛋白等有机成分，而且维持了脱矿过程中骨纤维的结构完整性。这样的处理有助于提供一个适宜的生长基质，促进细胞附着和增殖。
（4）便于微创手术的应用：本发明制得的骨纤维可以方便地装入注射器内，从而适用于微创手术。这一特点大大简化了骨缺损填充和修复手术的操作，减少了患者的创伤和术后恢复时间。特别是在口腔、颌面及其他需要精细操作的骨修复手术中，这种易于操作和精准投放的特性极大地提高了手术的成功率和安全性。
总的来说，这是一个有效、高效的制备脱矿骨纤维的新方法，具有实用价值和应用前景。
所述皮质骨的来源选自人、非人灵长类动物、鱼、禽鸟、牛、猪、马、羊、狗、骡、鸡、鸭、鹅中的一种或几种。下述实施例和对比例均选用猪来源的皮质骨。
实施例1
一种脱矿骨纤维的制备方法，包括下述步骤：
（1）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨；
（2）30℃，将皮质骨在酸性脱矿液中100转/分钟搅拌浸泡36小时，所述酸性脱矿液为0.1wt%N-乙酰半胱氨酸、2wt%盐酸和10wt%氯化钠的水溶液；所述酸性脱矿液的质量为皮质骨的15倍；
（3）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨，再用皮质骨10倍重量的PBS缓冲液清洗，调整pH值至7.0；
（4）用研砵将皮质骨反复研磨，当样品细度达到长度4-10mm、直径0.05-0.25mm后，每次用皮质骨5倍重量的异丙醇超声清洗3次，再每次用皮质骨5倍重量的水超声清洗3次；
（5）-25℃、真空压力80pa、冷冻干燥12小时，包装并辐照灭菌，得到所述脱矿骨纤维。
实施例2
一种脱矿骨纤维的制备方法，包括下述步骤：
（1）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨；
（2）30℃，将皮质骨在酸性脱矿液中100转/分钟搅拌浸泡36小时，所述酸性脱矿液为0.1wt%L-抗坏血酸、2wt%盐酸和10wt%氯化钠的水溶液；所述酸性脱矿液的质量为皮质骨的15倍；
（3）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨，再用皮质骨10倍重量的PBS缓冲液清洗，调整pH值至7.0；
（4）用研砵将皮质骨反复研磨，当样品细度达到长度4-10mm、直径0.05-0.25mm后，每次用皮质骨5倍重量的异丙醇超声清洗3次，再每次用皮质骨5倍重量的水超声清洗3次；
（5）-25℃、真空压力80pa、冷冻干燥12小时，包装并辐照灭菌，得到所述脱矿骨纤维。
实施例3
一种脱矿骨纤维的制备方法，包括下述步骤：
（1）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨；
（2）30℃，将皮质骨在酸性脱矿液中100转/分钟搅拌浸泡36小时，所述酸性脱矿液为0.04wt%N-乙酰半胱氨酸、0.06wt%L-抗坏血酸、2wt%盐酸和10wt%氯化钠的水溶液；所述酸性脱矿液的质量为皮质骨的15倍；
（3）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨，再用皮质骨10倍重量的PBS缓冲液清洗，调整pH值至7.0；
（4）用研砵将皮质骨反复研磨，当样品细度达到长度4-10mm、直径0.05-0.25mm后，每次用皮质骨5倍重量的异丙醇超声清洗3次，再每次用皮质骨5倍重量的水超声清洗3次；
（5）-25℃、真空压力80pa、冷冻干燥12小时，包装并辐照灭菌，得到所述脱矿骨纤维。
图1为本实施例3所制备的骨纤维的实物照片。
对比例1
一种脱矿骨纤维的制备方法，包括下述步骤：
（1）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨；
（2）30℃，将皮质骨在酸性脱矿液中100转/分钟搅拌浸泡36小时，所述酸性脱矿液为2wt%盐酸水溶液；所述酸性脱矿液的质量为皮质骨的15倍；
（3）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨，再用皮质骨10倍重量的PBS缓冲液清洗，调整pH值至7.0；
（4）用研砵将皮质骨反复研磨，当样品细度达到长度4-10mm、直径0.05-0.25mm后，每次用皮质骨5倍重量的异丙醇超声清洗3次，再每次用皮质骨5倍重量的水超声清洗3次；
（5）-25℃、真空压力80pa、冷冻干燥12小时，包装并辐照灭菌，得到所述脱矿骨纤维。
对比例2
一种脱矿骨纤维的制备方法，包括下述步骤：
（1）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨；
（2）30℃，将皮质骨在脱矿液中100转/分钟搅拌浸泡36小时，所述脱矿液为10wt%氯化钠的水溶液；所述脱矿液的质量为皮质骨的15倍；
（3）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨，再用皮质骨10倍重量的PBS缓冲液清洗，调整pH值至7.0；
（4）用研砵将皮质骨反复研磨，当样品细度达到长度4-10mm、直径0.05-0.25mm后，每次用皮质骨5倍重量的异丙醇超声清洗3次，再每次用皮质骨5倍重量的水超声清洗3次；
（5）-25℃、真空压力80pa、冷冻干燥12小时，包装并辐照灭菌，得到所述脱矿骨纤维。
对比例3
一种脱矿骨纤维的制备方法，包括下述步骤：
（1）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨；
（2）30℃，将皮质骨在酸性脱矿液中100转/分钟搅拌浸泡36小时，所述酸性脱矿液为2wt%硝酸和10wt%氯化钠的水溶液；所述酸性脱矿液的质量为皮质骨的15倍；
（3）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨，再用皮质骨10倍重量的PBS缓冲液清洗，调整pH值至7.0；
（4）用研砵将皮质骨反复研磨，当样品细度达到长度4-10mm、直径0.05-0.25mm后，每次用皮质骨5倍重量的异丙醇超声清洗3次，再每次用皮质骨5倍重量的水超声清洗3次；
（5）-25℃、真空压力80pa、冷冻干燥12小时，包装并辐照灭菌，得到所述脱矿骨纤维。
对比例4
一种脱矿骨纤维的制备方法，包括下述步骤：
（1）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨；
（2）30℃，将皮质骨在酸性脱矿液中100转/分钟搅拌浸泡36小时，所述酸性脱矿液为2wt%硫酸和10wt%氯化钠的水溶液；所述酸性脱矿液的质量为皮质骨的15倍；
（3）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨，再用皮质骨10倍重量的PBS缓冲液清洗，调整pH值至7.0；
（4）用研砵将皮质骨反复研磨，当样品细度达到长度4-10mm、直径0.05-0.25mm后，每次用皮质骨5倍重量的异丙醇超声清洗3次，再每次用皮质骨5倍重量的水超声清洗3次；
（5）-25℃、真空压力80pa、冷冻干燥12小时，包装并辐照灭菌，得到所述脱矿骨纤维。
对比例5
一种脱矿骨纤维的制备方法，包括下述步骤：
（1）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨；
（2）30℃，将皮质骨在其15重量倍的水中100转/分钟搅拌浸泡36小时；
（3）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨，再用皮质骨10倍重量的PBS缓冲液清洗，调整pH值至7.0；
（4）用研砵将皮质骨反复研磨，当样品细度达到长度4-10mm、直径0.05-0.25mm后，每次用皮质骨5倍重量的异丙醇超声清洗3次，再每次用皮质骨5倍重量的水超声清洗3次；
（5）-25℃、真空压力80pa、冷冻干燥12小时，包装并辐照灭菌，得到所述脱矿骨纤维。
对比例6
一种脱矿骨纤维的制备方法，包括下述步骤：
（1）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨；
（2）30℃，将皮质骨在酸性脱矿液中100转/分钟搅拌浸泡36小时，所述酸性脱矿液为0.5wt%盐酸和15wt%氯化钠的水溶液；所述酸性脱矿液的质量为皮质骨的15倍；
（3）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨，再用皮质骨10倍重量的PBS缓冲液清洗，调整pH值至7.0；
（4）用研砵将皮质骨反复研磨，当样品细度达到长度4-10mm、直径0.05-0.25mm后，每次用皮质骨5倍重量的异丙醇超声清洗3次，再每次用皮质骨5倍重量的水超声清洗3次；
（5）-25℃、真空压力80pa、冷冻干燥12小时，包装并辐照灭菌，得到所述脱矿骨纤维。
对比例7
一种脱矿骨纤维的制备方法，包括下述步骤：
（1）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨；
（2）30℃，将皮质骨在酸性脱矿液中100转/分钟搅拌浸泡36小时，所述酸性脱矿液为3wt%盐酸和4wt%氯化钠的水溶液；所述酸性脱矿液的质量为皮质骨的15倍；
（3）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨，再用皮质骨10倍重量的PBS缓冲液清洗，调整pH值至7.0；
（4）用研砵将皮质骨反复研磨，当样品细度达到长度4-10mm、直径0.05-0.25mm后，每次用皮质骨5倍重量的异丙醇超声清洗3次，再每次用皮质骨5倍重量的水超声清洗3次；
（5）-25℃、真空压力80pa、冷冻干燥12小时，包装并辐照灭菌，得到所述脱矿骨纤维。
对比例8
一种脱矿骨纤维的制备方法，包括下述步骤：
（1）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨；
（2）30℃，将皮质骨在酸性脱矿液中100转/分钟搅拌浸泡36小时，所述酸性脱矿液为2wt%盐酸和10wt%氯化钠的水溶液；所述酸性脱矿液的质量为皮质骨的15倍；
（3）用皮质骨10倍重量的水超声清洗皮质骨，再用皮质骨10倍重量的PBS缓冲液清洗，调整pH值至7.0；
（4）用研砵将皮质骨反复研磨，当样品细度达到长度4-10mm、直径0.05-0.25mm后，每次用皮质骨5倍重量的异丙醇超声清洗3次，再每次用皮质骨5倍重量的水超声清洗3次；
（5）-25℃、真空压力80pa、冷冻干燥12小时，包装并辐照灭菌，得到所述脱矿骨纤维。
测试例1：
首先将MC3T3细胞（小鼠成骨前体细胞）在含20%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素的RPMI-1640培养基中培养，调整细胞密度至4×105细胞/ml；接着，准备1%（w/v）浓度的脱矿骨纤维液，并将其与细胞悬液均匀混合，分装至24孔培养板中，每孔500µl，然后在37℃、5%CO2的条件下培养48小时；之后，使用FITC标记的α-Tubulin染色细胞骨架，DAPI染色细胞核，分别进行1小时和5-10分钟的染色处理，并使用PBS轻轻洗涤3次，每次5分钟；最后，利用荧光显微镜观察并拍照记录，按照存活与死亡细胞的标准，通过显微镜下计数法计算细胞存活率，测试结果见表1，以评估脱矿骨纤维对MC3T3细胞生长和存活的影响。
这一实验证明了本发明在生物医学应用中的生物相容性和细胞促进作用，特别是在骨组织工程中的潜在应用。
表1：细胞存活率测试表
在对比例8与对比例1的结果中，可以明显看到，在酸性脱矿液中添加氯化钠对产品性能的综合提升有着显著影响。对比例8采用的酸性脱矿液中含有氯化钠，这不仅加速了骨组织中无机盐的溶出，还有助于维持胶原蛋白的结构完整性，从而提高了骨纤维的生物相容性和细胞促进作用。相比之下，对比例1中没有添加氯化钠，导致脱矿效率较低，且骨纤维的结构完整性和生物活性不如对比例8。
在比较对比例8与对比例3-4的结果时，明显可以看出不同种类的酸对于产品性能产生了截然不同的影响，其中盐酸的效果最为显著。对比例8采用的盐酸在脱矿过程中能够有效地溶解骨组织中的无机盐成分，尤其是钙和磷，从而有效提升了脱矿骨纤维的质量和生物相容性。相比之下，对比例3-4中使用的其他酸，如硝酸和硫酸，在脱矿效率和保持骨纤维结构完整性方面的效果并不理想。因此，盐酸的使用不仅提高了脱矿效率，也保持了脱矿骨纤维的生物活性和细胞相容性。
在比较对比例8与实施例1-3的结果时，我们可以看到活性抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸和L-抗坏血酸在酸性脱矿液中的加入对产品性能产生了显著的积极影响。这些抗氧化剂在脱矿过程中有效地保护了骨纤维中的有机成分，尤其是胶原蛋白，减少了其氧化和降解。这种保护作用直接影响了细胞的存活率和骨纤维的生物相容性，从而提高了材料的综合性能。
比较实施例3与实施例1-2，可见N-乙酰半胱氨酸和L-抗坏血酸的协同作用可以进一步提高生物材料的生物相容性和促进细胞活性。
测试例2:
为了评估本发明的骨纤维效果，我们采用《胶原型牙科骨填充材料动物试验研究方案》，选择比格犬作为动物模型。手术过程包括在比格犬的颌骨区域制备特定尺寸的骨缺损，并移植本发明的产品到缺损部位，随后一期闭合处理。术后管理涉及每日伤口观察、连续5天的抗生素和镇痛药注射，以及创口的碘伏消毒，并记录动物的一般健康状况。进行的检查包括大体病理学检查（特别注意手术部位的愈合情况），组织病理学检查（包括HE染色和免疫组化分析，评估炎症程度等），影像学检查（CT和Micro-CT扫描，重建三维模型，评价骨愈合情况），以及硬组织切片分析（使用VG染色和天狼星红染色观察胶原纤维增生）。具体的测试结果将在表2中呈现。
表2：骨缺损修复效果测试表
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书所限定的保护范围为准。

Claims (8)

1.一种脱矿骨纤维的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：
（1）水洗皮质骨；
（2）酸性脱矿液清洗皮质骨，所述酸性脱矿液包括下述原料：0.5-3wt%盐酸、4-15wt%氯化钠、0.02-0.2wt%活性抗氧化剂，所述活性抗氧化剂为N-乙酰半胱氨酸和L-抗坏血酸中的至少一种；
（3）水洗皮质骨；
（4）粉碎皮质骨，水洗；
（5）冷冻干燥。
2.根据权利要求1所述的脱矿骨纤维的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）为将皮质骨20-40℃在酸性脱矿液中浸泡24-48小时。
3.根据权利要求1所述的脱矿骨纤维的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中酸性脱矿液的质量为皮质骨的10-20倍。
4.根据权利要求1所述的脱矿骨纤维的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）为水洗皮质骨，再用PBS缓冲液清洗，调整pH值7.0-7.5。
5.根据权利要求1所述的脱矿骨纤维的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）为将皮质骨粉碎，用异丙醇清洗，再用水清洗。
6.根据权利要求5所述的脱矿骨纤维的制备方法，其特征在于，步骤（4）中将皮质骨研磨粉碎得到长度4-10mm，直径0.05-0.25mm的骨纤维。
7.根据权利要求1-6任一项所述的脱矿骨纤维的制备方法，其特征在于，所述活性抗氧化剂为N-乙酰半胱氨酸和L-抗坏血酸按质量比(1-2):(1-2)组成。
8.一种脱矿骨纤维，其特征在于，采用权利要求1-7任一项所述方法制备而成。
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Citations (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1504241A (zh) * 2002-12-04 2004-06-16 曹谊林 以异种或异体骨基质明胶为支架构建的组织工程人工皮肤
CN103834464A (zh) * 2014-03-05 2014-06-04 青岛金海源食品有限公司 一种从鳕鱼骨中提取ω-3多不饱和脂肪酸及骨胶原蛋白和活性钙的方法
CN103998070A (zh) * 2011-09-29 2014-08-20 Cg生物技术有限公司 纤维状脱钙骨基质的制备方法
CN103990181A (zh) * 2014-05-26 2014-08-20 中国人民解放军第四军医大学 一种具有诱导活性微载体-细胞复合物的制备方法及其应用
CN104877154A (zh) * 2015-05-21 2015-09-02 浙江海洋学院 制备肌原纤维蛋白-壳聚糖纳米微球复合膜的方法
CN105153478A (zh) * 2015-07-09 2015-12-16 浙江海洋学院 采用甲壳类动物制备复合膜的方法
CN109470541A (zh) * 2017-09-07 2019-03-15 武汉宏强医疗器械有限公司 一种骨组织脱钙液及其配制方法
US11007305B1 (en) * 2016-04-11 2021-05-18 Theracell, Inc. Bone grafts with controlled release calcium
CN112920291A (zh) * 2021-04-07 2021-06-08 上海海洋大学 鱿鱼扇形骨β-壳聚糖及其制备方法和应用
CN112999420A (zh) * 2021-02-26 2021-06-22 山西奥瑞生物材料有限公司 一种用于骨科填充的可塑形的骨海绵及制备方法
CN113444143A (zh) * 2020-03-24 2021-09-28 中国科学院理化技术研究所 一种驼骨抗氧化多肽及其制备方法和应用
CN113520900A (zh) * 2021-04-13 2021-10-22 甘肃天际生物科技有限公司 一种低致敏、抗衰老的牦牛胶原蛋白组合物及应用
CN114401697A (zh) * 2019-09-11 2022-04-26 华沙整形外科股份有限公司 脱矿质骨基质纤维、其制备和使用方法
WO2022155590A1 (en) * 2021-01-18 2022-07-21 Advanced Biologics, Llc Bioactive implants and methods of making
CN116234450A (zh) * 2020-05-15 2023-06-06 Eaf公司 婴儿配制品
CN116413106A (zh) * 2023-04-14 2023-07-11 海南苏生生物科技有限公司 一种骨组织脱钙组合物及制备方法
CN117357634A (zh) * 2023-10-12 2024-01-09 郑州原子高科医药有限公司 一种蛋白注射液及其制备方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107802890A (zh) * 2010-01-14 2018-03-16 奥加诺吉尼西斯公司 生物工程化组织构建物及其制备和使用方法
WO2014028621A1 (en) * 2012-08-14 2014-02-20 Abbott Laboratories Methods and compositions useful for improving bone and joint health
WO2023014587A1 (en) * 2021-08-02 2023-02-09 Seaspine, Inc. Method of demineralizing bone with an ionic solution

Patent Citations (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1504241A (zh) * 2002-12-04 2004-06-16 曹谊林 以异种或异体骨基质明胶为支架构建的组织工程人工皮肤
CN103998070A (zh) * 2011-09-29 2014-08-20 Cg生物技术有限公司 纤维状脱钙骨基质的制备方法
CN103834464A (zh) * 2014-03-05 2014-06-04 青岛金海源食品有限公司 一种从鳕鱼骨中提取ω-3多不饱和脂肪酸及骨胶原蛋白和活性钙的方法
CN103990181A (zh) * 2014-05-26 2014-08-20 中国人民解放军第四军医大学 一种具有诱导活性微载体-细胞复合物的制备方法及其应用
CN104877154A (zh) * 2015-05-21 2015-09-02 浙江海洋学院 制备肌原纤维蛋白-壳聚糖纳米微球复合膜的方法
CN105153478A (zh) * 2015-07-09 2015-12-16 浙江海洋学院 采用甲壳类动物制备复合膜的方法
US11007305B1 (en) * 2016-04-11 2021-05-18 Theracell, Inc. Bone grafts with controlled release calcium
CN109470541A (zh) * 2017-09-07 2019-03-15 武汉宏强医疗器械有限公司 一种骨组织脱钙液及其配制方法
CN114401697A (zh) * 2019-09-11 2022-04-26 华沙整形外科股份有限公司 脱矿质骨基质纤维、其制备和使用方法
CN113444143A (zh) * 2020-03-24 2021-09-28 中国科学院理化技术研究所 一种驼骨抗氧化多肽及其制备方法和应用
CN116234450A (zh) * 2020-05-15 2023-06-06 Eaf公司 婴儿配制品
WO2022155590A1 (en) * 2021-01-18 2022-07-21 Advanced Biologics, Llc Bioactive implants and methods of making
CN112999420A (zh) * 2021-02-26 2021-06-22 山西奥瑞生物材料有限公司 一种用于骨科填充的可塑形的骨海绵及制备方法
CN112920291A (zh) * 2021-04-07 2021-06-08 上海海洋大学 鱿鱼扇形骨β-壳聚糖及其制备方法和应用
CN113520900A (zh) * 2021-04-13 2021-10-22 甘肃天际生物科技有限公司 一种低致敏、抗衰老的牦牛胶原蛋白组合物及应用
CN116413106A (zh) * 2023-04-14 2023-07-11 海南苏生生物科技有限公司 一种骨组织脱钙组合物及制备方法
CN117357634A (zh) * 2023-10-12 2024-01-09 郑州原子高科医药有限公司 一种蛋白注射液及其制备方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
An Ion-exchange Bone Demineralization Method for Improved Time, Expense, and Tissue Preservation;Emma Narotzky et al;Journal of Histochemistry & Cytochemistry;20200814;607– 620 *
N-acetyl cysteine as an osteogenesis-enhancing molecule for bone regeneration;Masahiro Yamada et al;Biomaterials;20130524;6147-6156 *
Von Ebner氏脱钙液利用超声微波技术在骨组织脱钙中的研究与分析;曹留炳;中国当代医药;20091228;155-156 *
鹿骨胶水解物抗氧化活性及对H2O2损伤PC12细胞保护作用的研究;郭冰洁;安徽农业科学;20190411;193-196 *

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