CN117567583B

CN117567583B - 水熊虫蛋白trid1及其编码基因在抗辐射能力增强中的应用

Info

Publication number: CN117567583B
Application number: CN202410064518.5A
Authority: CN
Inventors: 张令强; 李磊; 杨冬; 葛正平; 李亚琪
Original assignee: Academy of Military Medical Sciences AMMS of PLA
Current assignee: Academy of Military Medical Sciences AMMS of PLA
Priority date: 2024-01-17
Filing date: 2024-01-17
Publication date: 2024-04-19
Anticipated expiration: 2044-01-17
Also published as: CN117567583A

Abstract

本发明涉及基因技术领域，提供了一种水熊虫蛋白TRID1及其编码基因在抗辐射能力增强中的应用。该TRID1基因来源于河南高生熊虫，本发明证明了该基因编码蛋白TRID1在体外和细胞内均可以发生相分离；在人细胞中表达TRID1可以通过相分离促进DNA损伤修复因子Ku70在DNA双链损伤位点的募集，进而提高DNA双链损伤修复效率，从而显著提高细胞在电离辐射损伤后的存活率。

Description

水熊虫蛋白TRID1及其编码基因在抗辐射能力增强中的应用

技术领域

本发明涉及基因技术领域，具体涉及一种水熊虫特有无序蛋白TRID1及其编码基因在抗辐射能力增强中的应用。

背景技术

电离辐射会导致DNA损伤、染色体畸变等不良状况，不仅会诱发威胁受照人员生命安全的急性放射病，对非敏感器官的损伤也会导致以纤维化等为代表的病变。辐射诱导的体细胞基因损伤可引起恶变，导致癌症的发生。在没有医疗防护下，人全身暴露辐射的LD50/60（60天内致50％病人死亡的暴露剂量）约为3Gy；而6Gy辐射剂量对人几乎是致死的。

在抗辐射药物方面，现有辐射防护药物主要针对辐射导致的轻中度造血系统损伤。根据其类型可分为：以抗氧化剂、褪黑素、黄酮类、甲基黄嘌呤类生物碱等为主的天然产物，以及以含巯基以及非巯基类分子为主的合成类化合物。而针对大剂量辐射导致重要脏器损伤、慢性辐射损伤以及重离子辐射损伤防治方面，尚未有批准用于临床救治的药物。总之，现有的辐射预防/治疗药物种类较少，效果也有限。因此，如何增强人体自身抗辐射能力，是解决放射性物质辐射、核电站泄漏、空间电离辐射以及肿瘤放疗引起的生命体损伤的新途径。

水熊虫（Water Bear），又称缓步动物（Tardigrades），是一类微小的水生无脊椎动物，有记录的约有1500余种，是目前已知的地球上生命力最强的物种。多个研究表明，一些种类的水熊虫可以在1-5 kGy X射线、γ射线或重离子照射等超强辐射下存活，这种剂量是人致死剂量的几百倍甚至上千倍。但是水熊虫耐辐射特性背后的机制并不清楚，而水熊虫耐受超高剂量辐射背后的机制，具有巨大的潜在应用价值，这些抗辐射机制，如果应用于人体，有望增强人体的抗辐射能力，从而从一个全新的角度解决人类辐射损伤防护、治疗缺乏有效手段的问题。

2016年日本科学家在一种叫做变形拉氏熊虫（Ramazzottius varieornatus）的水熊虫中发现一个Dsup (damage suppressor)基因, 其蛋白表达在水熊虫细胞核内。将Dsup蛋白表达在人HEK293T细胞中后，Dsup蛋白能够通过与DNA结合，从而减轻X射线介导的人类细胞DNA损伤，提高了人类细胞的抗辐射能力。在后来的研究中，也有科学家报道Dsup蛋白是一种核小体结合蛋白，可以通过与染色质上核小体的结合而保护染色质免受羟自由基的损伤。

以上研究表明人细胞中过表达水熊虫蛋白的策略，是可以增强人细胞的抗辐射能力的。但是，国际上对水熊虫抗辐射机制的研究较少，水熊虫中是否还存在其他可以增强人体抗辐射能力的基因并不清楚。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种水熊虫无序蛋白TRID1及其编码基因在抗辐射能力增强中的应用。

为了实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种来源于河南高生熊虫的无序蛋白TRID1，其核酸序列如SEQ ID NO:1所述，其蛋白序列如SEQ ID NO:2所示。其中SEQ IDNO:2上第93-119位为Prion-like domain，即朊病毒相似结构。

本发明提供一种具有抗辐射能力的蛋白，其包含如SEQ ID NO:2上第93-119位的氨基酸序列，同时与SEQ ID NO:2具有99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%、87%、85%、83%、80%的序列相似度。

本发明提供一种具有抗辐射能力的蛋白，其包含如SEQ ID NO:2上第93-119位的氨基酸序列具有95%、90%、85%、80%、75%序列相似度的氨基酸序列，同时与SEQ ID NO:2具有99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%、87%、85%、83%、80%的序列相似度。

一种核苷酸序列，其具有与SEQ ID NO:1的99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%、87%、85%、83%、80%的序列相似度/同一性的核苷酸序列。

一种核苷酸序列，其具有编码上述具有抗辐射能力的蛋白的核苷酸序列。

一种具有抗辐射能力的蛋白，其由上述核苷酸序列及其突变体编码获得，突变体包括点突变和多个核苷酸的段突变，突变点可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个及以上突变点，多个核苷酸的突变可以是连续的2、3、4、5、6、7、8个及以上数量的连续核苷酸突变。

一种具有抗辐射能力的蛋白，如SEQ ID NO:2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由SEQ ID NO:2衍生的蛋白质。

一种重组载体，其包含上述核苷酸序列。载体可以是原核载体或真核载体。

本发明提供一种含有上述DNA分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。细胞系可以是哺乳动物细胞，具体为人U2OS细胞。

第二方面，本发明提供上述核苷酸或氨基酸序列在细胞外/细胞内相分离的应用。上述核苷酸或氨基酸序列可在细胞外/细胞内发生相分离，具体为液-液相分离。

第三方面，本发明提供上述核苷酸或氨基酸序列在增强细胞的DNA双链损伤修复效率的应用，具体的DNA双链损伤修复为同源重组修复HR或非同源末端连接NHEJ。

第四方面，本发明提供上述核苷酸或氨基酸序列可以在细胞内或细胞外促进DNA损伤修复因子Ku70募集的应用，具体为使DNA损伤修复因子Ku70在DNA双链损伤位点的募集。

第五方面，本发明提供上述核苷酸或氨基酸序列可以增强生物的抗辐射能力的应用，具体为增强X射线辐射后细胞DNA损伤修复，更具体的是，通过DNA损伤修复因子Ku70募集增强辐射后细胞DNA损伤修复。辐射包括不限于X射线、γ射线、α射线引起的辐射。所述生物包括细胞、动物、人，具体的动物为人或小鼠。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1、本发明提供了一种来自水熊虫中的TRID1蛋白及其编码基因，该基因编码DNA序列如SEQ ID No:1所示，其蛋白产物氨基酸序列如SEQ ID No:2所示。

2、该TRID1蛋白在体外和细胞内均可以发生相分离；

3、在人细胞中表达TRID1可以通过相分离促进DNA损伤修复因子Ku70在DNA双链损伤位点的募集，进而提高DNA双链损伤修复的效率，从而减轻电离辐射损伤，显著提高细胞在电离辐射损伤后的存活率。

附图说明

图1.水熊虫TRID1蛋白序列预测分析。

图2. TRID1蛋白在体外可发生相分离。

图3.TRID1蛋白在细胞内可发生相分离。

图4.在人细胞中TRID1介导的相分离可以促进DNA双链损伤修复。

图5.在人细胞中TRID1介导的相分离可以促进DNA损伤修复因子Ku70在损伤位点的募集。

图6.人细胞中表达TRID1可减轻辐射损伤并增强辐射后的细胞存活率。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

以下通过参考示范性实施例，本发明的目的和功能以及用于实现这些目的和功能的方法将得以阐明。然而，本发明并不受限于以下所公开的示范性实施例；可以通过不同形式来对其加以实现。说明书的实质仅仅是帮助相关领域技术人员综合理解本发明的具体细节。

实施例1.TRID1蛋白序列预测分析

该基因编码DNA序列如SEQ ID No:1所示，其蛋白产物氨基酸序列如SEQ ID No:2所示。TRID1蛋白含有267个氨基酸。为确证TRID1蛋白的功能，通过PLAAC网站预测蛋白Prion-like domain(PrLD)。其中PLAAC网站预测蛋白PrLD的实施步骤为：

1、打开PLAAC预测网站（http://plaac.wi.mit.edu/）；

2、输入TRID1蛋白序列,选择默认参数，点击RunAnalysis，进行预测分析，跳出分析结果；

3、根据结果绘制TRID1蛋白中PrLD分布位置示意图。

PLAAC网站PrLD预测分析发现TRID1蛋白中含有一个PrLD，位于蛋白第93-119氨基酸位置（图1），提示TRID1很有可能能够发生液-液相分离。图1中还展示了缺失PrLD区段的TRID1蛋白（TRID1-ΔPrLD）示意图。

实施例2.TRID1蛋白在体外发生液-液相分离

为验证TRID1蛋白是否能够发生相分离，我们将TRID1在大肠杆菌中诱导表达并纯化出来，进行体外相分离实验，并且通过FRAP实验、使用1,6-己二醇等方式进行验证。

一、TRID1-WT和TRID1-ΔPrLD蛋白诱导表达及纯化

具体实施步骤如下：

1、向1.5 ml EP管中加入30 µl BL21感受态细胞，将带有GST标签的TRID1-WT和TRID1-ΔPrLD原核表达质粒1 µl分别加入到感受态细胞中，混匀；

2、冰浴30分钟，42°C水浴热休克45 s，再快速置冰浴2分钟；

3、向EP管中加600 µl不含抗生素的LB培养液，混匀；

4、37°C振荡45分钟，使细菌复苏，从而表达抗性基因；

5、取该菌液100 µl接种于含50 µg/ml氨苄青霉素的平皿中，37°C培养过夜。

6、挑取单个菌落，接种于50 µg/ml氨苄青霉素的5 ml LB培养液中，37°C，220 rpm培养约6 hrs，将此菌液按1:100稀释后接种于50 µg/ml氨苄青霉素的300 ml LB培养液中，37°C，220 rpm培养约2 hrs，使OD600达到0.8-1.0，加入IPTG（终浓度1 mM），在25°C诱导6hrs；

7、收菌，4°C 4000 rpm离心15 min，按每升菌液约50 ml裂解液的比例加入裂解液（PBS含1% Triton X-100、1% β-巯基乙醇、1 mmol/L PMSF，150 mmol/L NaCl），涡旋混匀；

8、冰上超声裂解菌体至菌液大致澄清（50%，时间20 min，开10 s、关10 s）；

9、将菌液转移至离心管中，4℃离心机13650 rpm离心10 min，收集上清于15 ml离心管中；

10、加入适量平衡后的glutathione Sepharose 4B beads（碧云天），4℃混悬仪上孵育4 hrs；

11、加入10 ml裂解液，4°C 混悬仪上孵育5 min，500 g，5min离心，弃上清；

12、重复步骤11 4次。最后一次清洗，将glutathione Sepharose 4B beads转移至1.5 ml EP管中，并使用胰岛素注射器吸干残余裂解液后加入100 μl的GST酶切buffer(50mM Tris-HCl， 50 or 150 mM NaCl， 1 mM EDTA， 1 mM DTT，pH 7.5)，然后再加入5 μlPrescission Protease，在4℃混悬仪上孵育16 hrs或过夜；

13、4℃离心机3000 rpm离心5 min中，收集上清，可于-80℃冰箱短暂保存；

14、超滤。将收集的上清加入超滤管（截留量3K），4°C离心机进行超滤，最收集超滤好的蛋白溶液至新的1.5 ml EP管中；

15、SDS-PAGE电泳检测蛋白纯度，Bradford法检测蛋白浓度。

16、将纯化好的TRID1-WT和TRID1-ΔPrLD蛋白置于冰上备用。

二、TRID1-WT和TRID1-ΔPrLD蛋白体外相分离实验

具体实施步骤为：

1、根据蛋白浓度，取适量TRID1-WT和TRID1-ΔPrLD蛋白加入到不同盐浓度的缓冲液中（50 mM Tris-HCl，pH 7.4，50、150或300 mM NaCl）。

2、取2 μl混合溶液滴加在共聚焦小皿中，在室温使用共聚焦显微镜进行观察，拍摄。

3、在室温使用共聚焦显微镜进行观察以及即时拍摄或在20 min内以1min的间隔进行时间推移拍摄。

4、在混合溶液中加入5%的1,6-己二醇，反应10 min后使用共聚焦显微镜进行观察，拍摄。

三、TRID1-WT蛋白体外相分离FRAP实验

具体实施步骤为：

1、根据蛋白浓度，取适量TRID1-WT蛋白加入到不同盐浓度的缓冲液中（50 mMTris-HCl，pH 7.4，50、150或300 mM NaCl）。

2、取2 μl混合溶液滴加在共聚焦小皿中，在室温使用共聚焦显微镜进行观察，在液滴中央选取目标区域ROIs；

3、对ROIs，使用405nm激光用100%激光功率，进行光漂白15s；

4、使用共聚焦显微镜，在漂白后在5min内中以15s的间隔，拍摄获取时间推移图像。

5、使用Nikon NIS Elements AR（Advanced Research）软件（v4.40.00）量化相分离液滴的荧光强度。

6、分析实验数据。

实验获得了高纯度的TRID1-WT和TRID1-ΔPrLD蛋白。体外相分离实验证明TRID1蛋白能够形成液滴（图2a）,随着氯化钠浓度升高到300 mM,液滴消失。同时，我们还观察到液滴随时间相互融合（图2b），此外FRAP实验证明TRID1蛋白形成的液滴在荧光漂白后能够恢复（图2c）。在50 mM氯化钠浓度下，TRID1-WT可以形成液滴（图2a，2d）,但是TRID1-ΔPrLD却不能，TRID1-ΔPrLD蛋白形成了无定型聚集体（图2d）。随着氯化钠浓度的升高，在150 mM氯化钠浓度下，TRID1-WT和TRID1-ΔPrLD均可以形成液滴，但是TRID1-ΔPrLD形成的液滴无论在大小和数量上都少于TRID1-WT（图2d）。表明PrLD结构域对TRID1的相分离是至关重要。

1,6-己二醇（1,6-Hex）是一种能够通过破坏弱的疏水相互作用使得相分离液滴溶解的化学小分子，它是目前唯一的能同时破坏多种相的工具，常用于在相分离实验中验证生成的液滴是否存在相分离。在添加1,6-己二醇后，观察到TRID1-WT和TRID1-ΔPrLD蛋白形成的液滴消失（图2e）。综上结果证实TRID1蛋白能够发生相分离，并且其相分离能力依赖于PrLD结构域，因为缺失了PrLD结构域的TRID1不发生相分离。

实施例3.TRID1在人细胞中的表达及体内相分离实验

人体内不存在TRID1基因，为了进一步验证水熊虫TRID1能否在细胞内发生相分离，将TRID1的真核表达质粒（野生型及TRID1-ΔPrLD）稳定表达在人U2OS细胞中。

其中TRID1-WT和TRID1-ΔPrLD的真核表达质粒构建实施步骤为：

1、挑取水熊虫，用RNA提取试剂盒（Direct-zol RNA kit，Zymo Research)提取水熊虫RNA；

2、用反转录试剂盒（First Strand cDNA Synthesis Kit，TOYOBO）制备cDNA;

3、设计引物，分别进行TRID1-WT和TRID1-ΔPrLD片段PCR扩增（GoldenStar T6Super PCR Mix，TSINGKE）；

4、载体质粒pLVX-IRES-puro用EcoR1和BamH1 （New England Biolabs）进行酶切线性化；

5、TRID1-WT和TRID1-ΔPrLD片段，及pLVX-IRES-puro酶切产物，跑DNA胶，回收PCR片段；

6、利用Gibson Assembly方法将PCR片段和线性化载体进行重组连接；

7、连接产物做转化，涂细菌平板，挑单克隆，测序，获得构建成功的表达载体。

其中Western blot实验实施步骤为：

1、细胞裂解液样品制备：

a. 吸干培养板中的细胞培养液，PBS轻轻摇晃洗2次；

b. 吸干PBS洗液，加入细胞裂解液，加入等体积的的2×loading buffer，混匀将细胞完全裂解后转移到EP管，沸水中煮15 min后备用；

2、SDS-PAGE电泳（12%浓度SDS-PAGE胶）分离蛋白，先80V电压跑30 min后140 V电压跑至溴酚蓝至底部1cm停止电泳；

3、尼龙膜（也称NC膜，9 cm/6 cm）和滤纸浸泡入电转缓冲液几分钟；

4、按照滤纸-膜-胶-滤纸的顺序将夹板放入电转槽中，150 mA冰上电转2 h；

5、断开电源，取出夹板，将NC膜切出目的条带，TBST洗1次后封闭；

6、TBST-5%脱脂奶粉封闭液封闭，室温封闭1 hr；

7、封闭后一抗4 ℃过夜，回收一抗，TBST洗膜3次，每次10 min，加入二抗，室温孵育1 hr，TBST洗膜3次，每次10 min；

8、显色反应：ECL发光试剂A/B液等体积混合后加到NC膜上，反应3 min后吸去发光液，于暗室中曝光，观察western blot结果。

结果显示，TRID1-WT和TRID1-ΔPrLD蛋白在U2OS细胞中表达成功（图3a）。

细胞内相分离实验实施步骤为：

1、在培养有表达带GFP标签的TRID1-WT或TRID1-ΔPrLD蛋白的U2OS细胞中，加入1μl Hoechst溶液，混匀，37℃培养15 min。

2、在37℃条件下使用共聚焦显微镜进行观察及即时拍摄或在20 min内以1min的间隔进行时间推移拍摄

3、在混合溶液中加入5%的1,6-己二醇，反应10 min后使用共聚焦显微镜进行观察，拍摄。

TRID1-WT蛋白细胞内相分离FRAP实验的实施步骤为：

2、在37℃条件下使用共聚焦显微镜进行观察，在液滴中央选取目标区域ROIs；

3、对ROIs，使用405nm激光用100%激光功率，进行光漂白15s；

6、分析实验数据。

结果显示，TRID1-WT可以在细胞内形成液滴，TRID1-ΔPrLD不能（图3b）。此外FRAP实验证明TRID1蛋白在细胞内形成的液滴在荧光漂白后能够恢复（图3c），在添加1,6-己二醇后，观察到TRID1-WT蛋白形成的液滴消失。综上结果证实TRID1蛋白在细胞内能够发生液-液相分离。

实施例4.人细胞中表达TRID1可增强细胞的DNA双链损伤修复效率

为进一步检测人细胞中表达TRID1能否促进DNA损伤修复，我们利用2种报告系统，检测了表达TRID1对2种主要的DNA双链损伤修复途径同源重组修复HR和非同源末端连接NHEJ的修复效率进行检测。

HR、NHEJ修复效率检测实验的实施步骤为：

1、将表达TRID1-WT或TRID1-ΔPrLD蛋白的细胞铺六孔板；

2、次日按照图中所示转染相应质粒；

3、转染后40 hrs，吸去培养基，PBS洗细胞，胰酶消化细胞，收取细胞；

4、PBS洗2次；

5、500 μl PBS重悬后过300目尼龙网，将细胞虑至流式管；

6、用FACSCalibur流式分析仪进行检测；

7、用FlowJo软件进行数据分析，作图。

结果显示，TRID1-WT以剂量依赖的方式促进HR和NHEJ修复，TRID1-ΔPrLD效果很弱（图4）。

实施例5.人细胞中表达TRID1可以促进DNA损伤修复因子Ku70在DNA双链损伤位点的募集

为进一步探究TRID1促进HR和NHEJ修复的机制，我们利用激光微照射实验实时检测表达TRID1对参与DNA双链损伤早期修复的重要因子在DNA损伤位点的募集的影响。

具体实施步骤为：

1、将表达TRID1-WT或TRID1-ΔPrLD蛋白的细胞铺六孔板;

2、次日按照图中所示转染mCherry-Ku70质粒；

3、次日将细胞铺在共聚焦显微镜专用小皿中；

4、24 hrs后加入1 μl Hoechst溶液，混匀，37℃培养15 min。

5、用Nikon A1R显微镜405 nm激光（100%激光功率）局部照射细胞核15s，造成细胞内局部DNA损伤。然后用Nikon A1R荧光显微镜实时观测细胞内mCherry-Ku70的动态变化。隔30秒观测记录一次，共5分钟。在观测过程中，细胞培养皿放置于37°C加热器中，并持续通有5% CO2，而且保持一定的湿度。

6、获取的图像用Image J进行分析，作图。

结果显示，TRID1-WT促进Ku70在损伤位点的募集，TRID1-ΔPrLD无效果（图5）。

实施例6.人细胞中表达TRID1可增强细胞的抗辐射能力

为了进一步验证人细胞中表达TRID1能否增强细胞的抗辐射能力，我们利用免疫荧光实验检测了X射线辐射后细胞DNA的损伤情况。利用克隆形成实验检测X射线辐射后细胞存活率。具体实施步骤如下：

一、免疫荧光实验

1、使用生物学X射线辐照仪X RAD-160对培养在confocal小皿中的细胞进行2Gy的X射线照射；

2、X射线照射1hr后，吸去培养基，用预冷PBS洗2遍，吸干液体，使用4%多聚甲醛室温固定细胞10 min；

3、PBS清洗3遍，每次5min；

4、加入含有0.2% Triton X-100的PBS室温通透10 min；

5、PBS清洗3遍，每次5min；

6、使用含有0.8% BSA的PBS在4℃湿盒中封闭细胞30min；

7、然后使用anti-Flag（MBL，1：:1000）、anti-γH2AX（Cell SignalingTechnology,1:500）4℃孵育过夜；

8、PBS清洗5遍，每次5min；

9、次日使用Alexa Fluor 488抗小鼠IgG（Origene，1:100）、Alexa Fluor 594抗小鼠IgG（Origene，1:100）和DAPI（Solarbio，1:100）室温孵育1hr；

10、PBS清洗5遍，每次5min；

11、共聚焦显微镜（NIKON A1R）观察荧光信号，拍照；

12、使用ImageJ软件进行细胞foci计数；

13、统计分析。

二、克隆形成实验

1、将处于对数生长期的细胞胰酶消化后，完全培养基（基础培养基+10%胎牛血清）重悬成细胞悬液，并计数；

2、细胞接种于6孔板培养板中，各实验组接种400个细胞/孔;

3、次日进行3Gy的X射线照射；

4、继续培养到14天或绝大多数单个克隆中细胞数大于50为止，中途每隔3天进行换液并观察细胞状态；

5、克隆完成后，在显微镜下对细胞进行拍照，然后PBS洗涤1次，每孔加入1 mL 4%多聚甲醛固定15 min，PBS洗涤1次；

6、每孔加入结晶紫染液1ml，染细胞10-20 min；

7、PBS 洗涤细胞数次，晾干，数码相机拍照（分别对整个六孔板及每个孔进行单独拍照），计数，统计分析。

γH2AX免疫荧光实验结果表明人细胞过表达TRID1-WT可以减轻辐射所致DNA损伤，进一步，克隆形成实验表明人细胞中过表达TRID1-WT可以增加细胞在辐射后的存活率（图6）。RvDsup是已知的具有保护细胞免受辐射损伤的作用水熊虫蛋白^[1-4]，在此作为阳性对照。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种蛋白，其特征在于，所述蛋白为：

由序列表中SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的蛋白质。

2.一种编码权利要求1所述蛋白的DNA分子。

3.如权利要求2所述的DNA分子，其特征在于：

所述DNA分子是编码区为序列表中的SEQ ID NO:1所示的DNA分子。

4.一种重组载体，其特征在于，其包含如权利要求2或3所述的DNA分子。

5.如权利要求4所述的重组载体，其特征在于，载体为原核载体或真核载体。

6.一种表达盒，其特征在于，其包含权利要求2或3所述的DNA分子或权利要求4或5所述的重组载体。

7.一种细胞，其特征在于，其包含权利要求2或3所述的DNA分子，或权利要求4或5所述的重组载体，或权利要求6所述的表达盒。

8.如权利要求2或3所述的DNA分子在制备抗辐射能力增强药物中的应用。