CN117561256A - 一种联苯类衍生物抑制剂的晶型及其制备方法 - Google Patents

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CN117561256A CN202280045197.3A CN202280045197A CN117561256A CN 117561256 A CN117561256 A CN 117561256A CN 202280045197 A CN202280045197 A CN 202280045197A CN 117561256 A CN117561256 A CN 117561256A
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詹小兰
呙临松
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Abstract

通式(I)化合物的晶型、制备方法和含有治疗有效量的该晶型的药物组合物以及其作为PD‑1/PD‑L1抑制剂在治疗癌症、感染性疾病、自身免疫性疾病中的应用。

Description

一种联苯类衍生物抑制剂的晶型及其制备方法 技术领域
本发明属于药物化学技术领域，具体涉及一种联苯类衍生物抑制剂的晶型及制备方法和应用。
背景技术
免疫系统在控制癌症等多种疾病中发挥重要的作用。然而，肿瘤细胞会通过各种途径逃避免疫攻击或者抑制免疫系统的激活。阻断免疫抑制检查点的信号传递，如程序性细胞死亡受体1(programmed cell death protein 1,PD-1)被证明是一种有潜力的治疗方式。
PD-1为CD28超家族成员，是免疫细胞特别是细胞毒T细胞表面的免疫抑制性受体。PD-1具有两个配体PD-L1和PD-L2，其中PD-L1，细胞程序性死亡受体-配体1，在多种细胞中均有表达，如巨噬细胞和树突状细胞，并在肿瘤细胞上普遍高表达。PD-L1通过与PD-1结合发挥免疫抑制作用并使肿瘤细胞逃避T细胞的杀伤，抑制T细胞的激活和相应细胞因子的产生，减弱感染性免疫和肿瘤免疫，促进感染性疾病以及肿瘤的进展。使用PD-L1抑制剂如抗体或小分子抑制剂可解除PD-L1的免疫抑制作用，促进肿瘤被免疫清除，从而达到治疗肿瘤的效果。
PD-1/PD-L1是近年来肿瘤免疫疗法研究的热点，其单抗药物应答之广度、深度和持久性均十分罕见，目前临床上已有多个PD-1/PD-L1单抗药物上市，并取得的巨大的成功。PD-L1抑制剂可用于治疗包括非小细胞肺癌、肝癌、胃癌、肠癌、肾癌等几乎所有重大癌症，具有巨大的临床应用价值。
PD-L1抑制剂从大分子到小分子正成为一种新的研发趋势和热点，小分子抑制剂从给药方式到生产成本都具有许多天然优势，具有取代抗体大分子的潜力，目前包括BMS和Incyte等公司在内的国外药企均在积极进行PD-L1小分子抑制剂的开发。
BMS公司开发的口服小分子抑制剂目前处于临床前研究阶段，已连续发表数篇专利，Incyte公司开发的小分子抑制剂INCB086550已处于一期临床研究阶段，Aurigene/Curis公司开发的小分子抑制剂CA-170已处于临床二期研究阶段。
国际申请WO2015034820、WO2015160641、WO2014151634、WO2017066227、WO2017070089、WO2017106634、WO2017112730、WO2017192961、WO2017222976、WO2018013789、WO2018044783、WO2018119224、WO2018119236、WO2018119263、WO2018119266和WO2018119286等多篇专利报道了PD-1或PD-L1小分子化合物抑制剂。此外，国际申请WO2014151634、WO2011161699、WO2012168944、WO2013132317、WO2013144704、 WO2015033299、WO2015033301、WO2015033303和WO2015036927报道了大环类和肽类化合物PD-1或PD-L1抑制剂。然而，对PD-1/PD-L1通路更有效、更好的药代特性和成药性的PD-L1小分子抑制剂仍然存在极大需求。
PD-L1小分子抑制剂作为药物在医药行业具有良好的应用前景，首先，PD-L1小分子抑制剂可口服给药，具有比抗体药物静脉给药顺应性更强的优势，同时可避免抗体在体内长期驻留造成的结肠炎等严重副作用。其次，PD-L1小分子抑制剂具有结合PD-L1并使之内吞的独特作用机制，在临床上可能展示出和抗体不同的功效。最后，PD-L1小分子抑制剂生产和质量控制成本更低，具有远低于大分子药物成本的价格优势，且和PD-L1抗体抑制剂一样可应用于多种重大肿瘤，具有巨大的市场潜力。
江苏豪森药业集团有限公司的专利申请(申请号：PCT/CN2020/141307)中公开了一系列含联苯类衍生物抑制剂的结构，在后续的研发中，为了使产物易于处理、过滤、干燥，便于储存、产品长期稳定、生物利用度高等，本发明对上述物质的晶型进行了全面的研究，致力于得到最适合的晶型。
发明内容
专利申请PCT/CN2020/141307所涉及的所有内容均以引证的方式添加到本发明中。
本发明的目的在于提供一种通式(I)所示的化合物的晶型，其结构如下：
其中：
L选自键、
环A选自4-8元杂环基；优选4元、7元或8元杂环基；
更优选如下基团：
R 1选自氢、氘、卤素、羟基、氰基、羧基、醛基、氧代基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 3-8环烷基、-(CH 2) nR a、-(CH 2) nOR a、-OC(O)R a、-C(O)R a、-C(O)OR a、-C(O)NR aR b、-(CH 2) nNR aC(O)R b或-SO 2R a，其中所述的C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基和C 3-8环烷基，任选进一步被氘、卤素、羟基、氰基或C 1-6烷基中的一个或多个取代基所取代；
R a和R b各自独立地选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、羧基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基或C 3-8环烷基，其中所述的C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基和C 3-8环烷基，任选进一步被氘、卤素、羟基、氰基或C 1-6烷基中的一个或多个取代基所取代；
n为0、1或2；且
x为0、1或2。
在本发明的优选方案中，所述化合物的结构如通式(II)所示：
其中：
M为O、-NR 2或-CR 3R 4；
R 2选自氢、氘、醛基、C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1-3卤代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3羟烷基、C 3-6环烷基、-(CH 2) nR a、-(CH 2) nOR a、-OC(O)R a、-C(O)R a、-C(O)OR a、-C(O)NR aR b、-(CH 2) nNR aC(O)R b或-SO 2R a；
R 3和R 4各自独立地选自氢、氘、卤素、羟基、氰基、羧基、醛基、氧代基、C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1-3卤代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3羟烷基、C 3-6环烷基、-(CH 2) nR a、-(CH 2) nOR a、-OC(O)R a、-C(O)R a、-C(O)OR a、-C(O)NR aR b、-(CH 2) nNR aC(O)R b或-SO 2R a，其中所述的C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1-3卤代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3羟烷基和C 3-6环烷基，任选进一步被氘、卤素、羟基、氰基或C 1-3烷基中的一个或多个取代基所取代；
R a和R b各自独立地选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、羧基、C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1-3卤代烷基或C 3-6环烷基，其中所述的C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1-3卤代烷基和C 3-6环烷基，任选进一步被氘、卤素、羟基、氰基或C 1-3烷基中的一个或多个取代基所取代；
n为0、1或2。
在本发明的优选方案中，所述化合物的晶型，为以下化合物的晶型：
N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((噁丁环-3-基氨基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯 基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((3-氟吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
1-((6-(2,2'-二氯-3'-(1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-碳杂草酰氨基<乙二酰氨基>)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)吖丁啶-3-基乙酸酯；
N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(3'-(5-((2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(3'-(5-((5-氧杂-2-氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((6-羰基-2,5-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((3-羟基吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((3-羟基-3-甲基吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
1-((6-(2,2'-二氯-3'-(1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)吖丁啶-3-羧酸；
(S)-1-((6-(2,2'-二氯-3'-(1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-碳杂草酰氨基<乙二酰氨基>)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)吖丁啶-2-羧酸；
(S)-N-(2,2'-二氯-3'-(5-((2-(羟甲基)吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((3-羟基-3-(羟甲基)吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(3'-(5-((3-乙酰氨基吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(3'-(5-((3-(乙酰氨基甲基)吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((3-(氰基甲基)吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((3-(二甲基氨基甲酰)吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2- 基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((3-(甲基氨基甲酰)吖丁啶-1-基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-异丁酰-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-(环丙羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((6-丙酰-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((6-(2,2,2-三氟乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-(2,2-二氟乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-(2-氰基乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((6-(甲磺酰)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-甲酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(3'-(5-((7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-异丁酰-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡 啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；或
N-(3'-(5-((6-乙酰氨基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺。
在本发明的优选方案中，所述晶型为化合物N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的晶型。
在本发明的优选方案中，提供化合物N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的晶型A～D，其中：
晶型A：
所述晶型A的X-射线粉末衍射图谱在2θ为7.8±0.2°处具有衍射峰；或者在14.1±0.2°处具有衍射峰；或者在15.3±0.2°处具有衍射峰；或者在19.5±0.2°处具有衍射峰；或者在12.0±0.2°处具有衍射峰；或者在12.4±0.2°处具有衍射峰；或者在13.2±0.2°处具有衍射峰；或者在14.6±0.2°处具有衍射峰；或者在21.2±0.2°处具有衍射峰；或者在22.0±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
或，晶型B：
所述晶型B的X-射线粉末衍射图谱在2θ为4.2±0.2°处具有衍射峰；或者在12.2±0.2°处具有衍射峰；或者在12.6±0.2°处具有衍射峰；或者在16.5±0.2°处具有衍射峰；或者在16.8±0.2°处具有衍射峰；或者在18.4±0.2°处具有衍射峰；或者在18.9±0.2°处具有衍射峰；或者在21.1±0.2°处具有衍射峰；或者在22.2±0.2°处具有衍射峰；或者在22.4±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
或，晶型C：
所述晶型C的X-射线粉末衍射图谱在2θ为11.4±0.2°处具有衍射峰；或者在12.5±0.2°处具有衍射峰；或者在21.1±0.2°处具有衍射峰；或者在23.0±0.2°处具有衍射峰；或者在26.1±0.2°处具有衍射峰；或者在26.6±0.2°处具有衍射峰；或者在13.0±0.2°处具有衍射峰；或者在14.0±0.2°处具有衍射峰；或者在14.7±0.2°处具有衍射峰；或者在15.8±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
或，晶型D：
所述晶型D的X-射线粉末衍射图谱在2θ为9.5±0.2°处具有衍射峰；或者在 10.4±0.2°处具有衍射峰；或者在14.5±0.2°处具有衍射峰；或者在19.9±0.2°处具有衍射峰；或者在20.8±0.2°处具有衍射峰；或者在24.8±0.2°处具有衍射峰；或者在11.7±0.2°处具有衍射峰；或者在13.3±0.2°处具有衍射峰；或者在17.2±0.2°处具有衍射峰；或者在23.8±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处。
在本发明进一步优选的方案中，所述晶型A的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为7.8±0.2°、14.1±0.2°、15.3±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含19.5±0.2°、12.0±0.2°、12.4±0.2°、13.2±0.2°、14.6±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；
或，所述晶型B的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为4.2±0.2°、12.2±0.2°、12.6±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含16.5±0.2°、16.8±0.2°、18.4±0.2°、18.9±0.2°、21.1±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；
或，所述晶型C的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为11.4±0.2°、12.5±0.2°、21.1±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含23.0±0.2°、26.1±0.2°、26.6±0.2°、13.0±0.2°、14.0±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；
或，所述晶型D的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为9.5±0.2°、10.4±0.2°、14.5±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含19.9±0.2°、20.8±0.2°、24.8±0.2°、11.7±0.2°、13.3±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条。
在本发明进一步优选的方案中，所述晶型A的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为21.2±0.2°、22.0±0.2°、22.6±0.2°、25.0±0.2°、28.3±0.2°、16.7±0.2°或24.5±0.2°处中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
或，所述晶型B的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为22.2±0.2°、22.4±0.2°、22.9±0.2°、23.6±0.2°、26.6±0.2°、13.8±0.2°或14.5±0.2°处中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
或，所述晶型C的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为14.7±0.2°、15.8±0.2°、18.0±0.2°、19.8±0.2°、23.6±0.2°、9.1±0.2°或16.7±0.2°处中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
或，所述晶型D的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为17.2±0.2°、23.8±0.2°、25.5±0.2°、27.1±0.2°、15.3±0.2°、15.8±0.2°或21.4±0.2°处中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处。
在本发明的优选方案中，所述晶型A的X-射线粉末衍射图谱任选包含位于2θ为7.8±0.2°、14.1±0.2°、15.3±0.2°、19.5±0.2°、12.0±0.2°、12.4±0.2°、13.2±0.2°、14.6±0.2°、21.2±0.2°、22.0±0.2°、22.6±0.2°、25.0±0.2°、28.3±0.2°、16.7±0.2°或24.5±0.2°处中的一处或多处衍射峰，
优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
或，所述晶型B的X-射线粉末衍射图谱任选包含位于2θ为4.2±0.2°、12.2±0.2°、12.6±0.2°、16.5±0.2°、16.8±0.2°、18.4±0.2°、18.9±0.2°、21.1±0.2°、22.2±0.2°、22.4±0.2°、22.9±0.2°、23.6±0.2°、26.6±0.2°、13.8±0.2°或14.5±0.2°处中的一处或多处衍射峰，
优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；例如，所述晶型B的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：
或，所述晶型C的X-射线粉末衍射图谱任选包含位于2θ为11.4±0.2°、12.5±0.2°、21.1±0.2°、23.0±0.2°、26.1±0.2°、26.6±0.2°、13.0±0.2°、14.0±0.2°、14.7±0.2°、15.8±0.2°、18.0±0.2°、19.8±0.2°、23.6±0.2°、9.1±0.2°或16.7±0.2°处中的一处或多处衍射峰，
优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
或，所述晶型D的X-射线粉末衍射图谱任选包含位于2θ为9.5±0.2°、10.4±0.2°、14.5±0.2°、19.9±0.2°、20.8±0.2°、24.8±0.2°、11.7±0.2°、13.3±0.2°、17.2±0.2°、23.8±0.2°、25.5±0.2°、27.1±0.2°、15.3±0.2°、15.8±0.2°或21.4±0.2°处中的一处或多处衍射峰，
优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰。
在本发明进一步优选的实施方式中，所述晶型为N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的晶型B；
所述晶型B的X-射线粉末衍射图谱在4.0±0.2°处具有衍射峰；或者在12.0±0.2°处具有衍射峰；或者在12.4±0.2°处具有衍射峰；或者在16.4±0.2°处具有衍射峰；或者在16.6±0.2°处具有衍射峰；或者在18.2±0.2°处具有衍射峰；或者在18.7±0.2°处具有衍射峰；或者在20.9±0.2°处具有衍射峰；或者在22.0±0.2°处具有衍射峰；或者在22.3±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
优选地，所述晶型B的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为4.0±0.2°、12.0±0.2°、12.4±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含16.4±0.2°、16.6±0.2°、18.2±0.2°、18.7±0.2°、20.9±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；
更优选地，所述晶型B的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为22.0±0.2°、22.3±0.2°、22.7±0.2°、23.5±0.2°、26.5±0.2°、13.6±0.2°或14.3±0.2°处中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
进一步优选地，所述晶型B的X-射线粉末衍射图谱任选包含位于2θ为4.0±0.2°、12.0±0.2°、12.4±0.2°、16.4±0.2°、16.6±0.2°、18.2±0.2°、18.7±0.2°、20.9±0.2°、22.0±0.2°、22.3±0.2°、22.7±0.2°、23.5±0.2°、26.5±0.2°、13.6±0.2°或14.3±0.2°处中的一处或多处衍射峰，优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
更进一步优选地，所述晶型B的X-射线粉末衍射图谱如图10所示。
在本发明进一步优选的实施方式中，实施例4化合物N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的晶型A，使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表1所示。
表1实施例4化合物自由碱晶型A的XRPD射线衍射数据
序号 2θ(±0.2°) d值 峰高 比例(I％) 面积 比例(I％)
1 7.77 11.369 402 100 5356 50.4
2 9.376 9.4242 52 12.9 383 3.6
3 12.008 7.3645 167 41.5 1780 16.7
4 12.436 7.1118 139 34.6 1486 14
5 13.227 6.6883 96 23.9 908 8.5
6 14.072 6.2885 260 64.7 2787 26.2
7 14.602 6.0615 142 35.3 1557 14.6
8 15.129 5.8512 204 50.7 4224 39.7
9 15.314 5.7812 294 73.1 6121 57.5
10 16.001 5.5342 71 17.7 729 6.9
11 16.673 5.3128 129 32.1 3174 29.8
12 17.179 5.1573 101 25.1 2249 21.1
13 18.09 4.8997 109 27.1 1242 11.7
14 18.857 4.7021 59 14.7 453 4.3
15 19.469 4.5556 364 90.5 10637 100
16 19.915 4.4546 221 55 7220 67.9
17 20.548 4.3189 63 15.7 441 4.1
18 21.195 4.1883 162 40.3 1886 17.7
19 22.023 4.0327 210 52.2 3313 31.1
20 22.59 3.9329 197 49 4152 39
21 23.463 3.7885 62 15.4 1329 12.5
22 23.929 3.7157 56 13.9 1012 9.5
23 24.455 3.6369 114 28.4 1449 13.6
24 25.025 3.5553 196 48.8 2703 25.4
25 25.813 3.4486 68 16.9 2399 22.6
26 26.037 3.4195 90 22.4 3027 28.5
27 26.342 3.3806 117 29.1 3186 30
28 28.324 3.1483 151 37.6 2465 23.2
29 29.361 3.0394 45 11.2 533 5
30 30.784 2.9021 78 19.4 936 8.8
31 31.531 2.835 51 12.7 1252 11.8
32 31.712 2.8193 49 12.2 967 9.1
33 33.171 2.6986 44 10.9 956 9
本发明实施例4化合物N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的晶型A，其X-射线粉末衍射图谱基本如图1所示；其DSC图谱基本如图2所示。
在本发明进一步优选的实施方式中，实施例4化合物N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的晶型B，使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表2所示。
表2实施例4化合物自由碱晶型B的XRPD射线衍射数据
序号 2θ(±0.2°) d值 峰高 比例(I％) 面积 比例(I％)
1 4.183 21.1072 661 49.7 7032 63.7
2 8.72 10.1324 135 10.2 929 8.4
3 9.751 9.063 89 6.7 588 5.3
4 11.806 7.49 251 18.9 1590 14.4
5 12.151 7.2779 547 41.1 4697 42.6
6 12.555 7.0445 1330 100 10814 98
7 13.79 6.4164 214 16.1 1909 17.3
8 14.481 6.1116 296 22.3 1919 17.4
9 14.972 5.9125 395 29.7 3397 30.8
10 15.276 5.7953 89 6.7 886 8
11 16.036 5.5224 245 18.4 2562 23.2
12 16.508 5.3655 716 53.8 6274 56.8
13 16.789 5.2762 836 62.9 6189 56.1
14 17.505 5.062 436 32.8 4211 38.2
15 17.983 4.9285 263 19.8 2057 18.6
16 18.392 4.8199 619 46.5 4128 37.4
17 18.897 4.6922 587 44.1 5138 46.6
18 19.465 4.5565 131 9.8 668 6.1
19 20.459 4.3373 445 33.5 4943 44.8
20 21.067 4.2136 551 41.4 6021 54.6
21 21.638 4.1036 133 10 725 6.6
22 22.182 4.0043 821 61.7 9458 85.7
23 22.426 3.9611 825 62 8192 74.2
24 22.897 3.8808 619 46.5 4771 43.2
25 23.647 3.7594 1327 99.8 11037 100
26 24.596 3.6165 286 21.5 3996 36.2
27 24.8 3.5872 327 24.6 4222 38.3
28 25.21 3.5297 204 15.3 8241 74.7
29 25.45 3.4969 437 32.9 6137 55.6
30 26.647 3.3426 644 48.4 7731 70
31 27.414 3.2507 57 4.3 744 6.7
32 27.862 3.1995 64 4.8 765 6.9
33 28.549 3.124 94 7.1 989 9
34 28.977 3.0788 142 10.7 1472 13.3
35 29.46 3.0294 124 9.3 1726 15.6
36 29.989 2.9772 102 7.7 1689 15.3
37 30.603 2.9188 92 6.9 796 7.2
38 31.288 2.8565 69 5.2 667 6
39 32.241 2.7742 85 6.4 1035 9.4
40 32.989 2.713 135 10.2 1656 15
41 34.408 2.6043 65 4.9 490 4.4
42 35.057 2.5576 107 8 1434 13
43 35.499 2.5267 81 6.1 866 7.8
44 36.316 2.4717 47 3.5 1139 10.3
45 36.588 2.4539 65 4.9 1134 10.3
46 38.182 2.3551 58 4.4 1042 9.4
47 38.479 2.3376 50 3.8 1046 9.5
本发明实施例4化合物N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的晶型B，其X-射线粉末衍射图谱基本如图3所示；其DSC图谱基本如图4所示。
在本发明进一步优选的实施方式中，实施例4化合物N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的晶型C，使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表3所示。
表3实施例4化合物自由碱晶型C的XRPD射线衍射数据
序号 2θ(±0.2°) d值 峰高 比例(I％) 面积 比例(I％)
1 7.568 11.6717 82 17.5 940 8.4
2 7.932 11.1372 84 17.9 1149 10.3
3 9.065 9.7472 73 15.6 248 2.2
4 11.401 7.7551 391 83.5 4992 44.8
5 12.497 7.0769 358 76.5 3066 27.5
6 13.003 6.803 170 36.3 4646 41.7
7 13.304 6.6494 66 14.1 1985 17.8
8 13.953 6.3416 117 25 837 7.5
9 14.338 6.1722 110 23.5 2735 24.6
10 14.664 6.0357 234 50 6319 56.7
11 14.968 5.914 114 24.4 3567 32
12 15.817 5.5985 151 32.3 2591 23.3
13 16.301 5.4333 61 13 1062 9.5
14 16.729 5.2952 76 16.2 715 6.4
15 18.031 4.9156 150 32.1 4005 36
16 18.499 4.7923 70 15 1925 17.3
17 19.815 4.4769 217 46.4 6556 58.9
18 20.257 4.3802 100 21.4 4623 41.5
19 20.685 4.2904 80 17.1 1414 12.7
20 21.131 4.201 231 49.4 2787 25
21 22.956 3.8709 468 100 9964 89.5
22 23.638 3.7607 147 31.4 1490 13.4
23 24.537 3.625 73 15.6 445 4
24 26.117 3.4092 347 74.1 11139 100
25 26.644 3.3428 279 59.6 6990 62.8
26 27.517 3.2388 90 19.2 1972 17.7
27 27.907 3.1944 84 17.9 2138 19.2
28 29.323 3.0433 86 18.4 2341 21
29 29.604 3.0151 94 20.1 3453 31
30 31.286 2.8567 101 21.6 1735 15.6
31 32.282 2.7708 58 12.4 656 5.9
32 33.01 2.7113 54 11.5 1199 10.8
33 33.379 2.6822 63 13.5 1569 14.1
34 35.448 2.5302 56 12 965 8.7
本发明实施例4化合物N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的晶型C，其X-射线粉末衍射图谱基本如图5所示；其DSC图谱基本如图6所示。
在本发明进一步优选的实施方式中，实施例4化合物N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的晶型D，使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表4所示。
表4实施例4化合物自由碱晶型D的XRPD射线衍射数据
序号 2θ(±0.2°) d值 峰高 比例(I％) 面积 比例(I％)
1 6.019 14.6715 66 9.7 130 1.7
2 8.768 10.0771 61 9 458 5.8
3 9.454 9.3472 681 100 7847 100
4 10.427 8.4771 305 44.8 3340 42.6
5 11.664 7.5809 167 24.5 2227 28.4
6 13.265 6.6688 134 19.7 2254 28.7
7 13.754 6.4332 72 10.6 1141 14.5
8 14.458 6.1213 331 48.6 4509 57.5
9 15.317 5.7798 101 14.8 1330 16.9
10 15.842 5.5896 100 14.7 1242 15.8
11 17.216 5.1464 128 18.8 1753 22.3
12 18.371 4.8255 58 8.5 961 12.2
13 19.061 4.6522 50 7.3 655 8.3
14 19.935 4.4501 296 43.5 4467 56.9
15 20.807 4.2656 225 33 2615 33.3
16 21.436 4.1419 108 15.9 3669 46.8
17 22.002 4.0366 62 9.1 1352 17.2
18 22.772 3.9018 63 9.3 458 5.8
19 23.365 3.8041 92 13.5 1406 17.9
20 23.785 3.7378 189 27.8 2366 30.2
21 24.801 3.5869 331 48.6 5486 69.9
22 25.488 3.4918 197 28.9 2555 32.6
23 26.163 3.4033 107 15.7 1740 22.2
24 27.116 3.2858 171 25.1 2779 35.4
25 27.54 3.2361 78 11.5 1149 14.6
26 28.815 3.0958 105 15.4 1684 21.5
27 29.711 3.0044 72 10.6 1476 18.8
28 31.86 2.8065 51 7.5 986 12.6
本发明实施例4化合物N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的晶型D，其X-射线粉末衍射图谱基本如图7所示；其DSC图谱基本如图8所示。
在本发明进一步优选的方案中，实施例4化合物N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的晶型A、晶型B、晶型C和晶型D的X-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置与图1、图3、图5和图7对应位置衍射峰的2θ误差为±0.2°～±0.5°，优选±0.2°～±0.3°， 最优选±0.2°；
本发明所述的误差是指由于实验过程中制样技术水平差异、操作的规范性、样品制样的厚度、使用不同的样品架等实验误差因素导致的不同批次样品的X-射线粉末衍射图谱中的衍射峰位置产生一定程度的整体漂移，对于本领域技术人员来说由于实验误差导致的衍射峰位置整体漂移都是可以预料得到的，下表5、6、7与8是四个不同批次晶型B的X-射线特征衍射峰数据表，其X-射线粉末衍射图谱基本如图9、10、11和12所示：
表5自由碱晶型B批次一的XRPD射线衍射数据
序号 2θ(±0.2°) d值 峰高 比例(％)
1 3.747 23.56285 1352 78.7
2 3.901 22.63199 1719 100
3 7.629 11.57830 519 30.2
4 8.437 10.47153 386 22.5
5 9.475 9.32649 317 18.5
6 11.560 7.64863 478 27.8
7 11.882 7.44194 736 42.8
8 12.289 7.19681 1237 72.0
9 12.924 6.84464 275 16.0
10 13.537 6.53589 392 22.8
11 13.853 6.38736 319 18.6
12 14.221 6.22316 408 23.7
13 14.732 6.01183 511 29.7
14 15.051 5.88149 450 26.2
15 15.765 5.61679 452 26.3
16 16.241 5.45319 1017 59.2
17 16.512 5.36450 780 45.4
18 17.233 5.14154 485 28.2
19 17.715 5.00261 413 24.0
20 18.131 4.88878 651 37.9
21 18.628 4.75956 712 41.4
22 18.858 4.70189 318 18.5
23 19.223 4.61353 361 21.0
24 19.462 4.55738 337 19.6
25 20.197 4.39312 558 32.5
26 20.799 4.26734 683 39.8
27 21.373 4.15405 316 14.8
28 21.915 4.05251 1258 73.2
29 22.159 4.00833 956 55.6
30 22.629 3.92629 724 42.1
31 23.400 3.79849 1406 81.8
32 24.351 3.65233 485 28.2
33 24.529 3.62625 588 34.2
34 25.178 3.53414 647 37.7
35 26.396 3.37379 811 47.2
36 27.160 3.28059 253 14.7
37 28.237 3.15790 311 18.1
38 28.725 3.10535 326 19.0
39 29.205 3.05537 251 14.6
40 29.736 3.00205 262 15.2
41 30.353 2.94237 232 13.5
42 31.018 2.88058 240 14.0
43 31.564 2.83221 309 18.0
44 31.999 2.79474 239 13.9
45 32.717 2.73498 260 15.1
46 34.077 2.62890 179 10.4
47 34.807 2.57539 213 12.4
43 35.223 2.54595 183 10.6
45 36.345 2.46984 207 12.1
46 45.309 1.99988 209 12.2
表6自由碱晶型B批次二的XRPD射线衍射数据
序号 2θ(±0.2°) d值 峰高 比例(％)
1 3.615 24.42025 299 12.4
2 4.054 21.77935 1512 62.6
3 8.122 1087675 259 10.7
4 8.579 10.29915 452 18.7
5 9.596 9.20978 358 14.8
6 11.678 7.57165 584 24.2
7 12.012 7.36204 1037 42.9
8 12.412 7.12541 2417 100
9 13.634 6.48963 576 23.8
10 14.111 6.27104 277 11.5
11 14.335 6.17361 585 24.2
12 14.839 5.96524 728 30.1
13 15.161 5.83903 338 14.0
14 15.878 5.57711 503 20.8
15 16.028 5.52531 382 15.8
16 16.368 5.41122 1082 44.8
17 16.634 5.32542 1256 52.0
18 17.254 5.13529 589 24.4
19 17.370 5.10125 733 30.3
20 17.828 4.97132 594 24.6
21 18.237 4.86058 910 37.6
22 18.732 4.73323 986 40.8
23 18.960 4.67679 366 15.1
24 19.301 4.59510 330 13.7
25 20.303 4.37051 841 34.8
26 20.459 4.33757 419 17.3
27 20.758 4.27576 609 25.2
28 20.908 4.24530 848 35.1
29 21.492 4.13133 318 13.2
30 22.020 4.03347 1254 51.9
31 22.266 3.98946 1136 47.0
32 22.742 3.90691 964 39.9
33 23.504 3.78195 1676 69.3
34 24.225 3.67096 310 12.8
35 24.438 3.63945 578 23.9
36 24.645 3.60935 591 24.5
37 24.913 3.57124 475 19.7
38 25.289 3.51888 722 29.9
39 25.985 3.42624 272 11.3
40 26.498 3.36100 924 38.2
41 27.129 3.28436 227 9.4
42 27.290 3.26535 241 10.0
43 27.699 3.21798 263 10.9
44 28.825 3.09483 370 15.3
45 29.301 3.04565 284 11.8
46 29.820 2.99374 278 11.5
47 30.455 2.93281 260 10.8
43 31.094 2.87392 221 9.1
45 32.056 2.78983 253 10.5
46 32.803 2.72804 303 12.5
41 34.233 2.61728 205 8.5
42 34.838 2.57321 233 9.6
43 35.340 2.53775 215 8.9
44 36.116 2.48499 193 8.0
45 36.410 2.46564 198 8.2
46 37.211 2.41434 223 9.2
47 47.088 1.92839 156 6.5
48 47.968 1.89503 178 7.4
49 50.010 1.82236 147 6.1
50 52.269 1.74879 129 5.3
表7自由碱晶型B批次三的XRPD射线衍射数据
序号 2θ(±0.2°) d值 峰高 比例(％)
1 3.609 24.46559 278 8.5
2 3.973 22.22094 3267 100
3 8.057 10.96421 359 11.0
4 8.487 10.41019 643 19.7
5 9.503 9.29963 434 13.3
6 11.590 7.62896 1008 30.9
7 11.918 7.41996 1234 37.8
8 12.314 7.18224 1913 58.6
9 13.532 6.53834 474 14.5
10 14.235 6.21676 495 15.2
11 14.741 6.00453 692 21.2
12 15.072 5.87330 321 9.8
13 15.779 5.61191 451 13.8
14 15.938 5.55628 324 9.9
15 16.267 5.44458 1962 60.1
16 16.535 5.35684 1065 32.6
17 17.163 5.16231 619 18.9
18 17.267 5.13157 696 21.3
19 17.735 4.99715 707 21.6
20 18.158 4.88172 1059 32.4
21 18.642 4.75584 1102 33.7
22 18.858 4.70208 320 9.8
23 19.210 4.61654 384 11.8
24 20.207 4.39098 747 22.9
25 20.394 4.35109 705 21.6
26 20.656 4.29652 634 19.4
27 20.828 4.26145 1696 51.9
28 21.394 4.15003 345 10.6
29 21.933 4.04917 2037 62.4
30 22.179 4.00487 1312 40.2
31 22.650 3.92267 985 30.1
32 23.425 3.79453 3155 96.6
33 24.335 3.65474 581 17.8
34 24.559 3.62188 887 27.2
35 24.811 3.58558 521 15.9
36 25.028 3.55511 571 17.5
37 25.206 3.53039 832 25.5
38 25.834 3.44597 318 9.7
39 25.905 3.43668 307 9.4
40 26.142 3.40596 495 15.2
41 26.432 3.36936 1892 57.9
42 27.178 3.27845 224 6.9
43 27.615 3.22765 225 6.9
44 28.217 3.16014 241 7.4
45 28.748 3.10293 451 13.8
46 29.250 3.05084 279 8.5
47 29.742 3.00146 343 10.5
43 30.385 2.93936 330 10.1
45 31.029 2.87986 242 7.4
46 31.991 2.79534 270 8.3
40 32.732 2.73374 303 9.3
41 34.141 2.62413 207 6.3
42 34.819 2.57451 309 9.5
43 35.239 2.54479 212 6.5
44 36.085 2.48706 230 7.0
45 37.001 2.42756 199 6.1
46 43.099 2.09716 210 6.4
表8自由碱晶型B批次四的XRPD射线衍射数据
序号 2θ(±0.2°) d值 峰高 比例(％)
1 4.039 21.85707 4791 100.0
2 8.119 10.88105 394 8.2
3 8.568 10.31235 559 11.7
4 9.389 9.41164 250 5.2
5 9.586 9.21882 389 8.1
6 11.668 7.57792 1027 21.4
7 12.000 7.36954 1379 28.8
8 12.389 7.13883 1423 29.7
9 13.618 6.49735 350 7.3
10 14.319 6.18062 386 8.1
11 14.808 5.97763 562 11.7
12 15.156 5.84107 323 6.7
13 15.855 5058502 414 8.6
14 16.345 5.41865 2925 61.1
15 16.612 5.33228 945 19.7
16 17.251 5.13629 526 11.0
17 17.348 5.10782 576 12.0
18 17.611 5.03194 287 6.0
19 17.819 4.97368 699 14.6
20 18.253 4.85634 1090 22.8
21 18.719 4.73653 985 20.6
22 18.925 4.68554 299 6.2
23 19.286 4.59849 367 7.7
24 20.293 4.37259 668 13.9
25 20.479 4.33337 1029 21.5
26 20.721 4.28329 501 10.5
27 20.913 4.24429 1762 36.8
28 21.473 4.13486 351 7.3
29 22.021 4.03328 3101 64.7
30 22.259 3.99059 1347 28.1
31 22.728 3.90930 858 17.9
32 23.509 3.78124 3548 74.1
33 24.410 3.64369 601 12.5
34 24.639 3.61030 1310 27.3
35 24.886 3.57502 548 11.4
36 25.103 3.54463 604 12.6
37 25.287 3.51915 875 18.3
38 25.624 3.47370 263 5.5
39 25.918 3.43491 349 7.3
40 26.243 3.39309 452 9.4
41 26.520 3.35829 2132 44.5
42 27.247 3.27038 237 4.9
43 27.697 3.21825 193 4.0
44 28.319 3.14897 288 6.0
45 28.387 3.14152 300 6.3
46 28.842 3.09305 508 10.6
47 29.837 2.99207 476 9.9
48 30.461 2.93223 340 7.1
49 31.118 2.87176 300 6.3
50 32.086 2.78733 316 6.6
51 32.807 2.72767 320 6.7
52 33.077 2.70606 191 4.0
53 33.509 2.67215 167 3.5
54 34.018 2.63333 205 4.3
55 34.234 2.61721 237 4.9
56 34.911 2.56800 311 6.5
57 35.780 2.50754 164 3.4
58 36.151 2.48271 199 4.2
59 36.434 2.46405 278 5.8
60 37.082 2.42247 233 4.9
61 38.668 2.32669 168 3.5
62 40.966 2.20128 151 3.2
63 46.748 1.94163 162 3.4
64 51.301 1.77946 175 3.7
通过对表5～8任一表的数据和表2数据对比可知，对应衍射峰的位置都产生了不同程度的漂移，例如表2中2θ为4.183°的峰，其在表5、6、7、8中对应的2θ分别为3.901°(漂移程度为0.282°)、4.054°(漂移程度为0.129°)、3.973°(漂移程度为0.210°)、4.039°(漂移程度为0.144°)；或例如表2中2θ为16.789°的峰，其在表5、6、7、8中对应的2θ分别为16.512°(漂移程度为0.277°)、16.634°(漂移程度为0.155°)、16.535°(漂移程度为0.254°)、16.612°(漂移程度为0.177 °)；或例如表2中2θ为22.182°的峰，其在表5、6、7、8中对应的2θ分别为21.915 °(漂移程度为0.267°)、22.020°(漂移程度为0.162°)、21.933°(漂移程度为0.249°)、22.021°(漂移程度为0.161°)；
尽管表5～8中与表2中对应衍射峰的位置有0.3°以内的漂移，但这些化合物皆是化合物N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的晶型B。
在本发明进一步优选的方案中，所述晶型为无水物。
在本发明进一步优选的方案中，所述晶型为水合物，水的个数为0.2-3，优选0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3，更优选0.5、1、2或3。
在本发明进一步优选的方案中，上述化合物晶型的制备方法，具体包括如下步骤：
1)称取适量的自由碱，用良性溶剂在一定温度下溶解，温度优选0～50℃；
2)任选地，向以上所得溶液中加入反溶剂，搅拌至固体析出；
3)任选地，搅拌、降温析晶得到目标产物；
其中：
所述的良性溶剂选自甲醇、丙酮、甲酸乙酯、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、88％丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、苯、甲苯、异丙醇、正丁醇、异丁 醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、正丙醇、叔丁醇、2-丁酮或3-戊酮中的一种或多种；优选甲酸乙酯、异丙醇或无水乙醇中的一种或多种；
所述的反溶剂选自庚烷、环己烷、正己烷、正戊烷、水、甲基叔丁基醚、甲苯或异丙醚中的一种或多种；优选乙酸乙酯、甲基叔丁基醚或环己烷中的一种或多种。
在本发明进一步优选的方案中，上述化合物晶型的制备方法，具体包括如下步骤：
1)称取适量的自由碱或其晶型，用不良溶剂在一定温度下打浆，温度优选0～50℃；
其中：
所述的不良溶剂选自庚烷、环己烷、正己烷、正戊烷、水、甲基叔丁基醚、甲苯或异丙醚中的一种或多种；优选乙酸乙酯、甲基叔丁基醚或环己烷中的一种或多种。
本发明的目的还在于提供一种药物组合物，其含有治疗有效量的上述任一化合物的晶型，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明的目的还在于提供了上述任一化合物的晶型或上述药物组合物在制备PD-1/PD-L1抑制剂药物中的应用。
本发明的目的还在于提供了上述任一化合物的晶型或上述药物组合物在制备治疗疾病选自癌症、感染性疾病、自身免疫性疾病药物中的应用；其中所述的癌症选自皮肤癌、肺癌、泌尿系肿瘤、血液肿瘤、乳腺癌、胶质瘤、消化系统肿瘤、生殖系统肿瘤、淋巴瘤、神经系统肿瘤、脑瘤、头颈癌；所述的感染性疾病选自细菌感染、病毒感染；所述的自身免疫性疾病选自器官特异性自身免疫病、系统性自身免疫病，其中，所述的器官特异性自身免疫病包括慢性淋巴细胞性甲状腺炎、甲状腺功能亢进、胰岛素依赖型糖尿病、重症肌无力、溃疡性结肠炎、恶性贫血伴慢性萎缩性胃炎、肺出血肾炎综合征、原发性胆汁性肝硬化、多发性脑脊髓硬化症、急性特发性多神经炎，所述的系统性自身免疫病包括类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、系统性血管炎、硬皮病、天疱疮、皮肌炎、混合性结缔组织病、自身免疫性溶血性贫血。
附图说明
图1为自由碱晶型A的XRPD图示。
图2为自由碱晶型A的DSC图示。
图3为自由碱晶型B的XRPD图示。
图4为自由碱晶型B的DSC图示。
图5为自由碱晶型C的XRPD图示。
图6为自由碱晶型C的DSC图示。
图7为自由碱晶型D的XRPD图示。
图8为自由碱晶型D的DSC图示。
图9为自由碱晶型B批次一的XRPD图示。
图10为自由碱晶型B批次二的XRPD图示。
图11为自由碱晶型B批次三的XRPD图示。
图12为自由碱晶型B批次四的XRPD图示。
术语解释
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至8个碳原子的烷基，更优选1至6个碳原子的烷基，最更优选1至3个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基，本发明优选甲基、乙基、异丙基、叔丁基、卤代烷基、氘代烷基、烷氧基取代的烷基和羟基取代的烷基。
术语“亚烷基”是指烷基的一个氢原子进一步被取代，例如：“亚甲基”指-CH 2-、“亚乙基”指-(CH 2) 2-、“亚丙基”指-(CH 2) 3-、“亚丁基”指-(CH 2) 4-等。术语“烯基”指 由至少由两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上定义的烷基，例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3-丁烯基等。烯基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至10个碳原子，更优选包含3至8个碳原子，进一步优选包含3至6个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基，优选环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。环烷基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O) m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；更优选包含3至10个环原子；进一步优选包含3至8个环原子。单环杂环基的非限制性实例包括噁嗪喃酮基、吡嗪酮基、吡啶酮基、吡咯烷基、四氢吡咯基、四氢吡咯酮基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、氧杂环己烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢咪唑基、二氢呋喃基、二氢吡唑基、二氢吡咯基、哌啶基、哌啶酮基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基、四氢吡喃基和吡喃基等；优选噁嗪喃酮基、吡嗪酮基、吡啶酮基、吡咯烷基、四氢吡咯基、四氢吡咯酮基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡唑烷基、吗啉基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、四氢吡喃基和吡喃基；更优选噁嗪喃酮基、四氢呋喃基、异噁唑烷酮基、四氢吡咯基、四氢吡咯酮基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、哌啶基、哌啶酮基和四氢吡喃基。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基；其中涉及到的螺环、稠环和桥环的杂环基任选与其他基团通过单键相连接，或者通过环上的任意两个或者两个以上的原子与其他环烷基、杂环基、芳基和杂芳基进一步并环连接。
所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实例包括：
杂环基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，更优选6至8元，例如苯基和萘基。更优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：
芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元，更优选5至8元，最优选为5元或6元，例如咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、吡咯基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、哒嗪基或吡嗪基等；优选三唑基、噻吩基、噻唑基、吡啶基、咪唑基、吡唑基、哒嗪基、吡嗪基或嘧啶基；更优选吡啶基、咪唑基、吡唑基、哒嗪基、吡嗪基或嘧啶基。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：
杂芳基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基)，其中烷基的定义如上所述，优选含有1至8个碳原子的烷基，更优选1至6个碳原子的烷基，最更优选1至3个碳原子的烷基。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
“卤代烷基”指被一个或多个卤素取代的烷基，其中烷基如上所定义。
“卤代烷氧基”指被一个或多个卤素取代的烷氧基，其中烷氧基如上所定义。
“羟烷基”指被羟基取代的烷基，其中烷基如上所定义。
“卤代烷基”指被一个或多个卤素取代的烷基，其中烷基如上所定义。
“卤代烷氧基”指被一个或多个卤素取代的烷氧基，其中烷氧基如上所定义。
“羟烷基”指被羟基取代的烷基，其中烷基如上所定义。
“羟基”指-OH基团。
“卤素”指氟、氯、溴或碘。
“氨基”指-NH 2。
“氰基”指-CN。
“硝基”指-NO 2。
“羧基”指-C(O)OH。
“THF”指四氢呋喃。
“EtOAc”指乙酸乙酯。
“MeOH”指甲醇。
“DMF”指N、N-二甲基甲酰胺。
“TFA”指三氟乙酸。
“MeCN”指乙晴。
“DMA”指N,N-二甲基乙酰胺。
“Et 2O”指乙醚。
“DCE”指1,2二氯乙烷。
“DIPEA”指N，N-二异丙基乙胺。
“NBS”指N-溴代琥珀酰亚胺。
“NIS”指N-碘代丁二酰亚胺。
“Cbz-Cl”指氯甲酸苄酯。
“Pd 2(dba) 3”指三(二亚苄基丙酮)二钯。
“Dppf”指1,1’-双二苯基膦二茂铁。
“HATU”指2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯。
“KHMDS”指六甲基二硅基胺基钾。
“LiHMDS”指双三甲基硅基胺基锂。
“MeLi”指甲基锂。
“n-BuLi”指正丁基锂。
“NaBH(OAc) 3”指三乙酰氧基硼氢化钠。
“t-BuONO”指叔丁基亚硝酸酯。
“EA”指乙酸乙酯。
“PE”指石油醚。
“DCM”指二氯甲烷。
“STAB”指三乙酰氧基硼氢化钠。
“Pd(dcypf)Cl 2”指二氯[1,1'-双(二环己基磷)二茂铁]钯。
“X选自A、B、或C”、“X选自A、B和C”、“X为A、B或C”、“X为A、B和C”等不同用语均表达了相同的意义，即表示X可以是A、B、C中的任意一种或几种。
本发明所述的氢原子均可被其同位素氘所取代，本发明涉及的实施例化合物中的任一氢原子也均可被氘原子取代。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
具体实施方式
以下结合实施例进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。
实施例
本发明的化合物结构是通过核磁共振(NMR)或/和液质联用色谱(LC-MS)来确定的。NMR化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d 6)，氘代甲醇(CD 3OD)和氘代氯仿(CDCl 3)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
液质联用色谱LC-MS的测定用Agilent 1200 Infinity Series质谱仪。HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18 150×4.6mm色谱柱)和Waters 2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C18 150×4.6mm色谱柱)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，TLC采用的规格是0.15mm～0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。
在无特殊说明的情况下，本发明的所有反应均在连续的磁力搅拌下，在干燥氮气或氩气氛下进行，溶剂为干燥溶剂，反应温度单位为摄氏度。
实施例1
N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((噁丁环-3-基氨基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
第一步：6-(3-溴-2-氯苯基)-2-甲氧基尼古丁醛的制备
6-氯-2-甲氧基尼古丁醛(400mg,2.34mmol)、(3-溴-2-氯苯基)硼酸(600mg, 2.57mmol)，Pd(PPh 3) 4(266mg,0.23mmol)和碳酸钾(646mg,4.68mmol)溶于二氧六环(20mL)和水(2mL)的混合溶剂中，抽换气，氮气保护后，加热至95℃搅拌过夜。反应完全后，将反应液冷却，过滤，滤液浓缩后，残留物经快速硅胶柱层析(PE:EA＝4:1)分离得到标题化合物(600mg,78％)。
MS m/z(ESI):326.7[M+H] +.
第二步：6-(2-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)苯基)-2-甲氧基尼古丁醛的制备
将6-(3-溴-2-氯苯基)-2-甲氧基尼古丁醛(600mg,1.83mmol)，片呐醇联硼酸酯(607mg,2.39mol)，Pd(dppf)Cl 2DCM络合物(149mg,0.18mmol)和乙酸钾(538mg,5.49mmol)溶于二氧六环(17mL)中，抽换气，氮气保护，于95℃加热搅拌过夜。反应完全后，将反应液冷却，浓缩。残留物经快速硅胶柱层析(PE:EA＝3:1)分离得到标题化合物(600mg,87％)。
MS m/z(ESI):375.7[M+H] +.
第三步：N-(2,2'-二氯-3'-(5-甲酰基-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
将N-(3-溴-2-氯苯基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺(170mg,0.444mmol)，6-(2-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)苯基)-2-甲氧基尼古丁醛(216mg,0.577mol),Pd(dppf)Cl 2DCM络合物(73mg,0.09mmol)和碳酸铯(360mg,1.11mmol)溶于二氧六环(10mL)和水(2mL)的中混合溶剂中，抽换气，氮气保护，于95℃加热搅拌过夜。反应完全后，将反应液冷却，浓缩。残留物经反相分离得到标题化合物(200mg,82％)。
MS m/z(ESI):550.7[M+H] +.
第四步：N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((噁丁环-3-基氨基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
将N-(2,2'-二氯-3'-(5-甲酰基-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺(100mg,0.181mmol)和噁丁环-3-胺(52mg,0.726mmol)溶解于甲醇(3mL)中，加入4滴乙酸后，于室温下搅拌3小时。加入氰基硼氢化钠(22mg,0.362mmol)后，继续于室温搅拌过夜。反应完全后，将反应液浓缩，残留物经过反相纯化得到标题化合物(10.3mg,9％)。
MS m/z(ESI):607.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.91(s,1H),8.35(d,J＝8.3Hz,1H),7.79(d,J＝7.5Hz,1H),7.67(d,J＝7.6Hz,1H),7.51(dt,J＝25.0,7.7Hz,2H),7.41(d,J＝7.6Hz,1H),7.26(d,J＝7.5Hz,1H),7.18(d,J＝7.6Hz,1H),4.59(t,J＝6.5Hz,2H),4.32(t,J＝6.2Hz,2H),3.91(d,J＝8.4Hz,7H),3.63(s,2H),3.37(s,2H),2.69(s,4H),2.38(s,3H).
实施例2
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((3-氟吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
将N-(2,2'-二氯-3'-(5-甲酰基-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺(55.1mg,0.1mmol)和3-氟吖丁啶盐酸(33.3mg,0.3mmol)溶解于甲醇(3mL)中，加入DIPEA中和后，加入3滴乙酸，于室温下搅拌3小时。加入氰基硼氢化钠(18.6mg,0.3mmol)后，继续于室温搅拌过夜。反应完全后，将反应液浓缩，残留物经过反相纯化得到标题化合物(14mg,23％)。
MS m/z(ESI):609.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.91(s,1H),8.35(d,J＝8.4Hz,1H),7.69(dd,J＝12.5,7.5Hz,2H),7.51(dt,J＝23.9,7.9Hz,2H),7.41(d,J＝7.6Hz,1H),7.27(d,J＝7.5Hz,1H),7.18(d,J＝7.6Hz,1H),5.27(d,J＝7.3Hz,1H),5.12(d,J＝7.1Hz, 1H),3.94–3.85(m,5H),3.66(d,J＝8.0Hz,4H),3.39(s,2H),3.30–3.22(m,1H),3.20(s,1H),2.70(s,4H),2.39(s,3H).
实施例3
1-((6-(2,2'-二氯-3'-(1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-碳杂草酰氨基<乙二酰氨基>)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)吖丁啶-3-基乙酸酯
将N-(2,2'-二氯-3'-(5-甲酰基-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺(73mg,0.106mmol)和吖丁啶-3-基乙酸酯三氟乙酸盐(61mg,0.266mmol)溶解于甲醇(4mL)中，加入DIPEA中和后，加入4滴乙酸，于室温下搅拌3小时。加入氰基硼氢化钠(16mg,0.266mmol)后，继续于室温搅拌过夜。反应完全后，将反应液浓缩，残留物经过快速硅胶柱层析(DCM:MeOH＝10:1)纯化得到粗产品后，经过反相纯化得到标题化合物(9.9mg,15％)。
MS m/z(ESI):649.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.91(s,1H),8.38–8.31(m,1H),7.74–7.64(m,2H),7.54(t,J＝7.6Hz,1H),7.48(t,J＝7.9Hz,1H),7.41(dd,J＝7.5,1.7Hz,1H),7.26(d,J＝7.5Hz,1H),7.18(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),4.96(t,J＝5.8Hz,1H),3.91(d,J＝3.9Hz,6H),3.70–3.60(m,4H),3.37(s,2H),3.11(dd,J＝8.5,5.4Hz,2H),2.69(s,4H),2.38(s,3H),2.03(s,3H).
实施例4
N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
将N-(2,2'-二氯-3'-(5-甲酰基-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺(115mg,0.208mmol)和1-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)乙烷-1-酮盐酸(110mg,0.625mmol)溶解于甲醇(4mL)中，加入DIPEA中和后，加入8滴乙酸，于室温下搅拌3小时。加入氰基硼氢化钠(38.8mg,0.625mmol)后，继续于室温搅拌过夜。反应完全后，将反应液浓缩，残留物经过反相纯化得到标题化合物(23.4mg,17％)。
MS m/z(ESI):674.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.91(s,1H),8.34(dd,J＝8.3,1.5Hz,1H),7.75-7.64(m,2H),7.52(dt,J＝24.3,7.8Hz,2H),7.41(dd,J＝7.6,1.7Hz,1H),7.28(d,J＝7.4Hz,1H),7.18(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),4.19(s,2H),3.91(d,J＝4.1Hz,7H),3.53(d,J＝65.9Hz,9H),2.74(d,J＝20.1Hz,4H),2.43(s,3H),1.72(s,3H).
实施例5
N-(3'-(5-((2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
将N-(2,2'-二氯-3'-(5-甲酰基-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺(50mg,0.091mmol)和2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷(27mg,0.272mmol)溶解于甲醇(3mL)中，加入2滴乙酸，于室温下搅拌2小时。加入氰基硼氢化钠(14mg,0.227mmol)后，继续于室温搅拌过夜。反应完全后，将反应液浓缩，残留物经过反相纯化得到标题化合物(10mg,18％)。
MS m/z(ESI):633.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.91(s,1H),8.35(d,J＝8.2Hz,1H),7.67(t,J＝5.8Hz,2H),7.51(dt,J＝23.1,7.8Hz,2H),7.40(d,J＝7.5Hz,1H),7.25(d,J＝7.5 Hz,1H),7.18(d,J＝7.7Hz,1H),4.62(s,4H),3.90(s,6H),3.51(s,2H),3.38(d,J＝6.6Hz,6H),2.69(s,4H),2.38(s,3H).
实施例6
N-(3'-(5-((5-氧杂-2-氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
将N-(2,2'-二氯-3'-(5-甲酰基-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺(76mg,0.134mmol)和5-氧杂-2-氮杂螺[3.4]辛烷盐酸盐(31mg,0.206mmol)溶解于甲醇(4mL)中，加入DIPEA中和后，加入4滴乙酸，于室温下搅拌2小时。加入氰基硼氢化钠(17mg,0.274mmol)后，继续于室温搅拌过夜。反应完全后，将反应液浓缩，残留物经过反相纯化得到标题化合物(6.9mg,8％)。
MS m/z(ESI):647.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.91(s,1H),8.35(d,J＝8.2Hz,1H),7.69(dd,J＝15.2,7.6Hz,2H),7.51(dt,J＝23.6,7.8Hz,2H),7.40(d,J＝7.5Hz,1H),7.26(d,J＝7.5Hz,1H),7.18(d,J＝7.6Hz,1H),3.90(s,6H),3.67(t,J＝6.8Hz,2H),3.59(s,2H),3.37(s,4H),3.09(d,J＝6.9Hz,2H),2.69(s,4H),2.38(s,3H),2.04(t,J＝7.2Hz,2H),1.82(q,J＝6.7Hz,2H).
实施例7
N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((6-羰基-2,5-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((6-羰基-2,5-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰 胺的制备参照实施例1。
MS m/z(ESI):660.2[M+H] +.
实施例8
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((3-羟基吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
将N-(2,2'-二氯-3'-(5-甲酰基-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺(30mg,0.055mmol)和吖丁啶-3-醇盐酸盐(24mg,0.217mmol)溶解于甲醇(3mL)中，加入DIPEA中和后，加入3滴乙酸，于室温下搅拌3小时。加入氰基硼氢化钠(6.7mg,0.109mmol)后，继续于室温搅拌过夜。反应完全后，将反应液浓缩，残留物经过反相纯化得到标题化合物(5.3mg,16％)。
MS m/z(ESI):607.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.91(s,1H),8.35(d,J＝8.3Hz,1H),7.68(t,J＝7.1Hz,2H),7.51(dt,J＝23.4,7.8Hz,2H),7.40(d,J＝7.8Hz,1H),7.26(d,J＝7.5Hz,1H),7.18(d,J＝7.7Hz,1H),5.33(s,1H),4.26–4.18(m,1H),3.90(d,J＝3.1Hz,5H),3.58(d,J＝11.1Hz,4H),3.37(s,2H),2.84(t,J＝6.7Hz,2H),2.69(s,4H),2.38(s,3H),2.05–1.97(m,1H).
实施例9
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((3-羟基-3-甲基吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
将N-(2,2'-二氯-3'-(5-甲酰基-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺(30mg,0.055mmol)和3-甲基吖丁啶-3-醇盐酸(27mg,0.218mmol)溶解于甲醇(3mL)中，加入DIPEA中和后，加入3滴乙酸，于室温下搅拌3小时。加入氰基硼氢化钠(6.8mg,0.109mmol)后，继续于室温搅拌过夜。反应完全后，将反应液浓缩，残留物经过反相纯化得到标题化合物(6.4mg,19％)。
MS m/z(ESI):621.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.91(s,1H),8.35(d,J＝8.4Hz,1H),7.69(t,J＝9.3Hz,2H),7.51(dt,J＝23.5,7.8Hz,2H),7.40(d,J＝7.6Hz,1H),7.27(d,J＝7.4Hz,1H),7.18(d,J＝7.7Hz,1H),3.93–3.86(m,6H),3.59(s,2H),3.37(s,2H),3.29(d,J＝6.6Hz,2H),2.97(d,J＝6.6Hz,2H),2.69(s,4H),2.39(d,J＝3.4Hz,3H),1.39(s,3H).
实施例10
1-((6-(2,2'-二氯-3'-(1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)吖丁啶-3-羧酸
1-((6-(2,2'-二氯-3'-(1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)吖丁啶-3-羧酸的制备参照实施例1。
MS m/z(ESI):635.2[M+H] +.
实施例11
(S)-1-((6-(2,2'-二氯-3'-(1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-碳杂草酰氨基<乙二酰氨基>)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)吖丁啶-2-羧酸
将(2S)-吖丁啶-2-羧酸(11.02mg,109.00μmol)加到N-(2,2'-二氯-3'-(5-甲酰基-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺(50mg,90.84μmol)的AcOH(10.00μL)、DMF(0.5mL)和MeOH(0.5mL)的混合溶液中，室温搅拌2小时，再加入氰基硼氢化钠(95.83mg,454.19μmol)，室温搅拌16小时。反应液用prep-HPLC分离纯化得到标题化合物为白色固体
(16.5mg,26％)。
MS m/z(ESI):635.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.90(s,1H),8.35(dd,J＝8.3,1.6Hz,1H),7.79(d,J＝7.5Hz,1H),7.68(dd,J＝7.7,1.7Hz,1H),7.54(t,J＝7.6Hz,1H),7.48(t,J＝8.0Hz,1H),7.41(dd,J＝7.6,1.7Hz,1H),7.28(d,J＝7.5Hz,1H),7.18(d,J＝7.6Hz,1H),3.94-3.87(m,8H),3.76-3.70(m,1H),3.44-3.41(m,1H),3.37(s,2H),3.13-3.08(m,1H),2.71-2.64(m,4H),2.39(s,3H),2.26-2.16(m,2H).
实施例12
(S)-N-(2,2'-二氯-3'-(5-((2-(羟甲基)吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
-20℃下将氯甲酸异丁酯(3.01mg,22.01μmol)的THF(0.1mL)溶液滴加到(S)-1-((6-(2,2'-二氯-3'-(1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-碳杂草酰氨基<乙二酰氨基>)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)吖丁啶-2-羧酸甲酸盐(10mg,14.67μmol)和DIPEA(6.64mg,51.35μmol)的THF(2mL)溶液中，在此温度下反应10分钟，然后加入NaBH 4(0.83mg,22.01μmol)的水(0.5mL)溶液，缓慢升至室温搅拌1小时。反应液用prep-HPLC分离纯化得到标题化合物为灰白色固体(2.3mg,23％)。
MS m/z(ESI):621.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.90(s,1H),8.35(dd,J＝8.3,1.6Hz,1H),7.75(d,J＝7.5Hz,1H),7.67(dd,J＝7.7,1.8Hz,1H),7.54(t,J＝7.6Hz,1H),7.48 (t,J＝7.9Hz,1H),7.40(dd,J＝7.5,1.7Hz,1H),7.25(d,J＝7.5Hz,1H),7.18(d,J＝7.5Hz,1H),3.91(s,3H),3.90(s,3H),3.79-3.74(m,1H),3.53-3.47(m,1H),3.41-3.30(s,7H),2.81-2.75(m,1H),2.72-2.63(s,4H),2.38(s,3H),2.00-1.80(m,2H).
实施例13
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((3-羟基-3-(羟甲基)吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((3-羟基-3-(羟甲基)吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的制备参照实施例11。
MS m/z(ESI):637.2[M+H] +.
实施例14
N-(3'-(5-((3-乙酰氨基吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
将DIPEA(140.88mg,1.09mmol,189.86μL)加到N-(2,2'-二氯-3'-(5-甲酰基-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺(400mg,726.70μmol)和N-(氮杂环丁烷-3-基)乙酰胺盐酸盐(164.17mg,1.09mmol)的二氯乙烷(5mL)溶液中，室温搅拌1小时，再加入醋酸硼氢化钠(462.18mg,2.18mmol)，室温搅拌2小时。反应液用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)淬灭，用DCM(20mL)提取，有机层减压浓缩，残余物用prep-HPLC分离纯化得标题化合物为白色固体(259mg,51％)。
MS m/z(ESI):648.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.90(s,1H),8.38-8.29(m,2H),7.71(d,J＝ 7.5Hz,1H),7.68(dd,J＝7.7,1.8Hz,1H),7.54(t,J＝7.6Hz,1H),7.48(t,J＝7.9Hz,1H),7.40(dd,J＝7.6,1.7Hz,1H),7.27(d,J＝7.5Hz,1H),7.18(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),4.30(q,J＝6.9Hz,1H),3.91(s,3H),3.90(s,3H),3.62-3.56(m,4H),3.39(s,2H),3.00-2.93(m,2H),2.75-2.64(m,4H),2.40(s,3H),1.80(s,3H).
实施例15
N-(3'-(5-((3-(乙酰氨基甲基)吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
第一步：叔-丁基((1-((6-(2,2'-二氯-3'-(1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-碳杂草酰氨基<乙二酰氨基>)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)吖丁啶-3-基)甲基)氨基甲酸酯的制备
将DIPEA(35.22mg,272.51μmol,47.47μL)加到N-(2,2'-二氯-3'-(5-甲酰基-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺(100mg,181.67μmol)和3-BOC-氨甲基氮杂环丁烷盐酸盐(60.69mg,272.51μmol)的二氯乙烷(2mL)溶液中，室温搅拌0.5小时，再加入醋酸硼氢化钠(191.67mg,908.37μmol)，室温搅拌16小时。反应液用DCM(20mL)稀释，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)洗涤，有机层减压浓缩，得标题化合物为棕色油状物(75mg,58％)。
MS m/z(ESI):720.2[M+H] +.
第二步：N-(3'-(5-((3-(氨基甲基)吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
室温下将TFA(0.3mL)加到叔-丁基((1-((6-(2,2'-二氯-3'-(1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-碳杂草酰氨基<乙二酰氨基>)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)吖丁啶-3-基)甲基)氨基甲酸酯(75mg,104.07μmol) 的DCM(0.7mL)溶液中，室温搅拌2小时。反应液减压浓缩，残余物用DCM(10mL)稀释，再减压浓缩，残余物在碳酸氢钠水溶液(5mL)和DCM(10mL)中分液，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得标题化合物为棕色油状物(60mg,93％)。
MS m/z(ESI):620.2[M+H] +.
第三步：N-(3'-(5-((3-(乙酰氨基甲基)吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
-20℃下将乙酰氯(11.38mg,145.03μmol,10.35μL)的DCM(0.1mL)溶液滴加到N-(3'-(5-((3-(氨基甲基)吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺(60mg,96.69μmol)、DIPEA(37.49mg,290.06μmol,50.52μL)的DCM(1mL)溶液中，升至室温反应10分钟。反应液减压浓缩，残余物用prep-HPLC分离纯化得标题化合物为白色固体(8.1mg,11％)。
MS m/z(ESI):662.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.90(s,1H),8.35(d,J＝8.2Hz,1H),7.91(s,1H),7.72-7.64(m,2H),7.54(t,J＝7.6Hz,1H),7.48(t,J＝7.9Hz,1H),7.40(dd,J＝7.6,1.7Hz,1H),7.26(d,J＝7.5Hz,1H),7.18(d,J＝7.6Hz,1H),3.91(s,3H),3.90(s,3H),3.54(s,2H),3.37(s,2H),3.29(s,2H),3.24(d,J＝6.4Hz,2H),2.94(t,J＝6.4Hz,2H),2.73-2.64(q,4H),2.38(s,3H),2.35-2.30(m,1H),1.79(s,3H).
实施例16
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((3-(氰基甲基)吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
将DIPEA(9.39mg,72.67μmol,12.66μL)加到N-(2,2'-二氯-3'-(5-甲酰基-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡 啶-2-甲酰胺(20mg,36.33μmol)和2-(氮杂环丁烷-3-基)乙腈盐酸盐(9.64mg,72.67μmol)的二氯乙烷(0.5mL)溶液中，室温搅拌0.5小时，再加入醋酸硼氢化钠(38.33mg,181.67μmol)，室温搅拌1小时。反应液用DCM(10mL)稀释，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)洗涤，有机层减压浓缩，残余物用prep-HPLC分离纯化得标题化合物为白色固体(18.6mg,76％)。
MS m/z(ESI):630.2[M+H] +.
实施例17
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((3-(二甲基氨基甲酰)吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
将DIPEA(28.18mg,218.01μmol,37.97μL)加到N-(2,2'-二氯-3'-(5-甲酰基-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺(60mg,109.00μmol)和N,N-二甲基氮杂环丁烷-3-甲酰胺盐酸盐(27.94mg,218.01μmol)的二氯乙烷(2mL)溶液中，室温搅拌0.5小时，再加入醋酸硼氢化钠(34.50mg,163.51μmol)，室温搅拌0.5小时。反应液用DCM(10mL)稀释，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)洗涤，有机层减压浓缩，残余物用prep-HPLC分离纯化得标题化合物为白色固体(28.3mg,36％)。
MS m/z(ESI):662.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.83(s,1H),8.28(dd,J＝8.2,1.5Hz,1H),7.66-7.57(m,2H),7.47(t,J＝7.6Hz,1H),7.41(t,J＝8.0Hz,1H),7.33(dd,J＝7.6,1.7Hz,1H),7.19(d,J＝7.4Hz,1H),7.11(dd,J＝7.6,1.5Hz,1H),3.84(s,3H),3.83(s,3H),3.47(s,2H),3.47-3.41(m,3H),3.31(s,2H),3.16(t,J＝3.6Hz,2H),2.76(s,3H),2.74(s,3H),2.67-2.58(m,4H),2.32(s,3H).
实施例18
N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((3-(甲基氨基甲酰)吖丁啶-1-基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((3-(甲基氨基甲酰)吖丁啶-1-基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的制备参照实施例11。
MS m/z(ESI):648.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.90(s,1H),8.35(dd,J＝8.3,1.5Hz,1H),7.80-7.74(m,1H),7.73-7.64(m,2H),7.54(t,J＝7.6Hz,1H),7.48(t,J＝7.9Hz,1H),7.40(dd,J＝7.6,1.7Hz,1H),7.26(d,J＝7.5Hz,1H),7.18(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),3.91(s,3H),3.90(s,3H),3.54(s,2H),3.46-3.40(m,2H),3.36(s,2H),3.24-3.17(m,2H),3.18-3.10(m,1H),2.74-2.66(m,4H),2.58(d,J＝4.6Hz,3H),2.38(s,3H).
实施例19
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的制备参照实施例11。
MS m/z(ESI):647.2[M+H] +.
实施例20
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-异丁酰-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
第一步：叔-丁基6-((6-(2,2'-二氯-3'-(1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-碳杂草酰氨基<乙二酰氨基>)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸酯的制备
将N-(2,2'-二氯-3'-(5-甲酰基-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺(195mg,354μmol)和2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(117mg,590μmol)的二氯乙烷(2mL)溶液于室温搅拌0.5小时，再加入醋酸硼氢化钠(226mg,1.06mmol)，室温搅拌0.5小时。反应液用DCM(20mL)稀释，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)洗涤，有机层减压浓缩，硅胶柱层析分离纯化，得标题化合物为棕色油状物(125mg,48％)。
MS m/z(ESI):732.2[M+H] +.
第二步：N-(3'-(5-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
室温下将TFA(0.5mL)加到叔-丁基6-((6-(2,2'-二氯-3'-(1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-碳杂草酰氨基<乙二酰氨基>)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸酯(157mg,214μmol)的DCM(2mL)溶液中，室温搅拌1小时。反应液减压浓缩，残余物用DCM(10mL)稀释，再减压浓缩，残余物在碳酸氢钠水溶液(5mL)和DCM(10mL)中分液，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得标题化合物为棕色油状物(116mg,86％)。
MS m/z(ESI):632.2[M+H] +.
第三步：N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-异丁酰-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
0℃下将异丁酰氯(8mg,75.9μmol)的DCM(0.1mL)溶液滴加到N-(3'-(5-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺(40mg,63.3 μmol)、DIPEA(24mg,190μmol)的DCM(1mL)溶液中，0℃反应1小时。反应液减压浓缩，残余物用prep-HPLC分离纯化得标题化合物为白色固体(7.8mg,17％)。
MS m/z(ESI):702.2[M+H] +.
实施例21
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-(环丙羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-(环丙羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的制备参照实施例20。
MS m/z(ESI):700.2[M+H] +.
实施例22
N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((6-丙酰-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
0℃下将丙酰氯(5.48mg,59.28μmol,5.17μL)的DCM(0.1mL)溶液滴加到N-(3'-(5-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺(25mg,39.52μmol)、DIPEA(25.54mg,197.60μmol,34.42μL)的DCM(1mL)溶液中，室温反应0.5小时。反应液减压浓缩，残余物用prep-HPLC分离纯化得标题化合物为白色固体(8.9mg,31％)。
MS m/z(ESI):688.2[M+H] +.
实施例23
N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((6-(2,2,2-三氟乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((6-(2,2,2-三氟乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的制备参照实施例20。
MS m/z(ESI):728.2[M+H] +.
实施例24
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-(2,2-二氟乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-(2,2-二氟乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的制备参照实施例20。
MS m/z(ESI):710.2[M+H] +.
实施例25
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-(2-氰基乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-(2-氰基乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的制备参照实施例20。
MS m/z(ESI):699.2[M+H] +.
实施例26
N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((6-(甲磺酰)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((6-(甲磺酰)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的制备参照实施例20。
MS m/z(ESI):710.2[M+H] +.
实施例27
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-甲酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-甲酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的制备参照实施例20。
MS m/z(ESI):660.2[M+H] +.
实施例28
N-(3'-(5-((7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
N-(3'-(5-((7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-
基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的制备参照实施例1。
MS m/z(ESI):702.2[M+H]+.
实施例29
N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的制备参照实施例1。
MS m/z(ESI):688.2[M+H] +.
实施例30
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-异丁酰-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-异丁酰-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的制备参照实施例1。
MS m/z(ESI):716.2[M+H] +.
实施例31
N-(3'-(5-((6-乙酰氨基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
N-(3'-(5-((6-乙酰氨基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的制备参照实施例1。
MS m/z(ESI):688.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.90(s,1H),8.35(dd,J＝8.3,1.6Hz,1H),8.03(d,J＝7.5Hz,1H),7.72-7.65(m,2H),7.54(t,J＝7.7Hz,1H),7.48(t,J＝8.0Hz,1H),7.40(dd,J＝7.6,1.7Hz,1H),7.25(d,J＝7.5Hz,1H),7.18(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),4.08-3.97(m,1H),3.93-3.88(m,6H),3.52(s,2H),3.37(s,2H),3.27(s,2H),3.16(s,2H),2.71-2.64(m,4H),2.43-2.32(m,5H),2.01-1.94(m,2H),1.74(s,3H).
生物学测试评价
以下结合测试例进一步描述解释本发明，但这些实施例并非意味着限制本发明的范围。
测试例1本发明化合物对人PD-1/PD-L1结合抑制作用的测定
实验目的：该测试例的目的是测量化合物对人PD-1/PD-L1结合抑制的活性。
实验仪器：离心机(5810R)购自Eppendorf公司，移液器购自Eppendorf或Rainin公司，酶标仪购自美国BioTek公司，型号为H1MFD全功能酶标仪。
实验试剂：Binding Domain diluent buffer购自Cisbio公司，货号为62DLBDDF；MAb Anti-6HIS Eu cryptate Gold购自Cisbio公司，货号为61HI2KLA；PAb Anti Human IgG-XL665购自Cisbio公司，货号为61HFCXLB；PD-L1-His蛋白购自Abcam公司，货号为ab167713；PD-1-Fc蛋白购自R&D公司，货号为1086-PD；Detection buffer购自Cisbio公司，货号为62SDBRDD；384孔板购自PerkinElmer公司，货号为6007290。
实验方法：为了测试化合物对人PD-1/PD-L1结合的抑制活性，本实验采用时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)的方法测试化合物对人PD-1/PD-L1结合的抑制作用，并得出化合物对人PD-1/PD-L1结合抑制活性的半数抑制浓度IC 50。
具体实验操作如下：
本实验在384孔板中进行，总反应体系为20μL，将化合物使用实验缓冲液Binding Domain diluent buffer(Cisbio#62DLBDDF)稀释成不同的浓度(10μM或1μM起始，3倍稀释，11个剂量)，将PD-L1-His蛋白(19～238氨基酸)(Abcam#ab167713)用实验缓冲液稀释为10nM，将PD-1-Fc蛋白(25～167氨基酸)(R&D#1086-PD)用实验缓冲液稀释为20nM，将化合物、PD-L1蛋白以及PD-1蛋白分别加入到384孔板中，总体积为10μL，放入离心机1000rpm离心1分钟混合均匀，室温孵育反应60分钟，每孔加入10μL使用HTRF Detection buffer稀释的MAb Anti-6HIS Eu cryptate Gold(Cisbio#61HI2KLA)以及PAb Anti Human IgG-XL665(Cisbio#61HFCXLB)混合溶液，放入离心机1000rpm离心1分钟混合均匀，室温反应3小时或者4℃反应过夜，放入酶标仪(BioTek Synergy H1)进行读数，激发波长为340nm，发射波长为620nm及665nm。
实验数据处理方法：
计算620nm及665nm下荧光读数的比值(665nm/620nm)，并计算抑制率，将化合物浓度以及抑制率使用Graphpad Prism软件进行非线性回归拟合，得出IC 50值，如下表9所示。
表9化合物对人PD-1/PD-L1结合的IC 50值
实验结论：本发明的实施例化合物在PD-1/PD-L1抑制试验中，显示出良好结合抑制活性。
测试例2本发明化合物诱导肿瘤细胞表面PD-L1蛋白内吞活性的测定
实验目的：该测试例的目的是测试化合物诱导肿瘤细胞表面PD-L1内吞的活性。
实验仪器：离心机(5702R)购自Eppendorf公司，移液器购自Eppendorf或Rainin公司，流式细胞仪购自Beckman Coulter，型号为DxFlex。
实验试剂：PE Mouse Anti-Human CD274抗体购自BD Pharmingen公司，货号为557924；BSA购自Sigma公司，货号为B2064-100G；PBS购自Gibco公司，货号为10010049；24孔板购自Corning公司，货号为3526。
实验方法：为了测试化合物诱导PD-L1内吞的活性，本实验通过用荧光标记的抗PD-L1抗体检测肿瘤细胞表面PD-L1的变化程度来测试化合物诱导PD-L1内吞的活性，并得出化合物诱导PD-L1蛋白内吞活性的IC 50。
具体实验操作如下：
收集高表达hPD-L1的小鼠结肠癌细胞MC38-hPDL1，调节成合适的密度铺于24孔板，放入37℃，5％CO 2培养箱贴壁过夜。将化合物使用培养基配制成不同的浓度后加入到24孔板中，并设置溶媒对照孔，放入37℃，5％CO 2培养箱中孵育16小时后取出24孔板，收集板内不同处理的MC38-hPDL1细胞，使用FACS buffer(含0.5％BSA的PBS)洗涤一遍后，用FACS buffer将细胞配制成合适的密度，加入PE Mouse Anti-Human CD274抗体(BD Pharmingen#557924)，室温摇床避光孵育30分钟，将细胞使用FACS buffer洗涤两次后，使用100μL PBS重悬，使用流式细胞仪检测细胞表面的荧光信号，设置同型对照为阴性对照。
实验数据处理方法：
用不同处理组的荧光信号计算化合物的内吞率，并将化合物浓度以及内吞率使用GraphPad Prism软件进行非线性回归拟合，得出IC 50值，如表10所示。
表10化合物在肿瘤细胞表面PD-L1的最大内吞率及IC 50值
实施例编号 MC38最大内吞率 MC38IC 50(nM)
1 95％ 1.2
2 95％ 1.2
3 97％ 0.4
4 97％ 0.4
5 96％ 0.4
6 96％ 0.7
7 97％ 1.0
8 95％ 1.0
9 97％ 1.2
10 98％ 3.1
11 93％ NA
12 94％ NA
13 97％ 0.9
14 96％ 0.6
15 97％ NA
16 97％ NA
17 95％ NA
18 96％ NA
19 97％ 0.7
20 96％ 0.7
21 95％ 1.1
22 97％ 0.4
23 96％ NA
24 97％ 0.8
25 97％ NA
26 97％ 0.3
27 96％ NA
28 96％ NA
29 96％ NA
30 96％ NA
31 97％ NA
实验结论：本发明所示的化合物能够很好的诱导肿瘤细胞表面PD-L1的内吞。
测试例3本发明化合物对CHO-PDL1/Jurkat-PD1细胞通路的抑制作用
实验目的：该测试例的目的是测试化合物对CHO-PDL1/Jurkat-PD1细胞通路的抑制作用。
实验仪器：离心机(5810R)购自Eppendorf公司，移液器购自Eppendorf或Rainin公司，酶标仪购自美国BioTek公司，型号为H1MFD全功能酶标仪。
实验试剂：CHO-PDL1细胞及NFAT-luc2/PD1 Jurkat细胞来源于Promega公司，货号为J1252；RPMI 1640购自Gibco公司，货号为22400089；FBS购自Gibco公司，货号为10091148；One-Glo试剂购自Promega公司，货号为E6120；96孔板购自Corning公司，货号为3610。
实验方法：本实验中包含两株稳转细胞株，稳转了PD-L1的CHO-K1细胞以及稳转了PD-1以及NFAT荧光素酶报告基因的Jurkat细胞，化合物与两株细 胞共孵育后，由于其对PD-1/PD-L1通路的抑制作用使Jurkat细胞的激活程度发生变化，从而使Jurkat细胞中下游的报告基因NFAT水平发生变化，通过检测荧光素酶的信号值来表征NFAT的水平，以此表征测试化合物对CHO-PDL1/Jurkat-PD1通路的抑制作用。
具体实验操作如下：
培养CHO-PDL1细胞(Promega,#J1252)至合适的细胞密度，消化后使用完全培养基重悬为合适密度的细胞悬液，每孔100μL铺于96孔板(Corning,#3610)，放入37℃，5％CO 2培养箱贴壁培养过夜，使用分析培养基(RPMI 1640+2％FBS,RPMI 1640货号为Gibco,#22400089，FBS货号为Gibco,#10091148)配制不同浓度的化合物溶液，收集NFAT-luc2/PD1 Jurkat细胞(Promega,#J1252)，使用分析培养基重悬为合适的细胞密度。吸去CHO-PDL1细胞培养板的上清，加入40μL配制好的化合物溶液以及40μL重悬的NFAT-luc2/PD1 Jurkat细胞，放入37℃，5％CO 2培养箱孵育6小时，取出细胞板，每孔加入40μL One-Glo试剂(Promega,#E6120)，振荡混匀后室温避光孵育10分钟，放入酶标仪中使用发光程序读取细胞板的发光值。
实验数据处理方法：
根据化合物浓度以及发光信号值拟合EC 50值，并计算每个化合物相对于未加药组信号值的最大诱导倍数，具体如表11所示。
表11化合物对CHO-PDL1/Jurkat-PD1细胞EC 50及化合物相对于未加药组信号值的最大诱导倍数
实验结论：本发明的实施例化合物在对CHO-PDL1/Jurkat-PD1细胞通路的抑制试验中，显示出较好的抑制活性。
测试例4发明化合物结合提升PD-L1蛋白稳定性(熔解温度)的测定
实验目的：测试化合物提升PD-L1蛋白稳定性，使蛋白熔解温度上升的能力。
实验仪器：定量PCR仪(Quantstudio6 Flex)购自Life公司，移液器购自Eppendorf或Rainin公司。
实验试剂：Protein Thermal Shift TM Dye Kit购自Thermofisher公司，货号为4461146；PD-L1蛋白购自Acro Biosystems公司，货号为PD1-H5229；HEPES,1M Buffer Solution购自Thermofisher公司，货号为15630080；NaCl购自国药集团化学试剂有限公司，货号为10019318。
实验方法：本实验通过thermal shift方法测试化合物结合前后PD-L1蛋白熔解温度(Tm)的变化程度来表征化合物提升PD-L1蛋白稳定性的能力从而表现化合物与PD-L1蛋白的结合能力。
具体实验操作如下：
配制含10μM HEPES、SYPRO Orange和150mM NaCl的溶液作为实验缓冲液，并加入终浓度为2μM的人PD-L1蛋白。将以上反应混合物分装到8联排PCR管中，每管19.5μL，分别加入0.5μL的测试化合物或者DMSO，则总反应体系为20μL，化合物终浓度为10μM，并设置2.5％DMSO为溶媒对照。将PCR管放入PCR仪中，选取melt curve功能检测不同处理组中PD-L1蛋白的熔解温度(从25℃加热至95℃,0.03℃/s)。
实验数据处理方法：
将PCR仪实验数据文件导入至thermal shift软件，得出每个处理组的熔解温度(Tm)，并减去DMSO溶媒对照组的Tm，得到熔解温度的变化值(ΔTm)，如下表所示：
表12化合物的熔解温度的变化值
实施例编号 ΔTm(℃)
1 17.9
2 15.8
3 14.8
4 16.5
5 16.2
6 15.6
7 17.1
8 13.9
9 18.1
10 16.7
11 10.3
12 13.9
13 13.5
14 20.6
15 15.0
16 16.3
17 21.0
18 16.7
19 20.9
20 21.4
21 21.1
22 16.5
23 19.5
24 14.0
25 11.7
26 14.0
27 12.3
28 13.2
29 14.5
30 12.4
31 15.6
实验结论：
通过以上方案得出本发明所示的化合物对提升PD-L1蛋白熔解温度的试验中显示提升PD-L1蛋白稳定性的能力。
测试例5本发明化合物对NFAT-luc2/PD1 Jurkat细胞以及MC38-hPDL1细胞的体外细胞毒性作用
实验目的：测试化合物对NFAT-luc2/PD1 Jurkat细胞以及MC38-hPDL1细胞的体外细胞毒性作用。
实验仪器：离心机(5810R)购自Eppendorf公司，移液器购自Eppendorf或Rainin公司，酶标仪购自美国BioTek公司，型号为H1MFD全功能酶标仪。
实验试剂：RPMI 1640购自Gibco公司，货号为22400089；FBS购自Gibco公司，货号为10091148；PBS购自Gibco公司，货号为10010049；Cell Titer-Glo购自Promega公司，货号为G7573；细胞培养板购自Corning公司，货号为3610。
实验方法：
培养细胞至合适的融合度时，收集细胞，使用完全培养基将细胞调整为合适的细胞浓度，将细胞悬液铺于96孔板，每孔90μL，放入37℃，5％CO 2培养箱贴壁过夜，使用DMSO以及培养基配制不同浓度的化合物溶液，设置溶媒对照，将化合物溶液加入到96孔板中，每孔10μL，放入37℃，5％CO 2培养箱中继续培养72h后，加入CellTiter-Glo溶液，振荡混合均匀后，避光孵育10分钟，用BioTek Synergy H1酶标仪进行读数。
实验数据处理方法：
使用发光信号值计算抑制率，将浓度以及抑制率使用Graphpad Prism软件进行非线性回归曲线拟合，得到IC 50值，如下表所示：
表13化合物的体外细胞毒性作用
实验结论：
通过以上结果可知，本发明所示的化合物对NFAT-luc2/PD1 Jurkat以及MC38-hPDL1细胞的毒性作用较弱。
测试例6Balb/C小鼠药代动力学测定
1.研究目的：
以Balb/C小鼠为受试动物，研究以下化合物实施例，在5mg/kg剂量下口服给药在小鼠体内血浆的药代动力学行为。
2.试验方案
2.1试验药品：
本发明实施例，自制。
2.2试验动物：
Balb/C Mouse 6只/实施例，雄性，上海杰思捷实验动物有限公司，动物生产许可证号(SCXK(沪)2013-0006 N0.311620400001794)。
2.3药物配制：
0.5％HPMC(1％Tween 80)，超声溶解，配制为澄清溶液或均一混悬液。
2.3给药：
Balb/C小鼠，雄性；禁食一夜后分别p.o.，剂量为5mg/kg，给药体积10mL/kg。
2.4样品采集：
小鼠给药前和给药后，在0、0.5、1、2、4、6、8和24小时，采用眼眶采血0.1mL，置于EDTA-K 2试管中，4℃6000rpm离心6min分离血浆，于-80℃保存。
2.5样品处理：
1)血浆样品40μL加入160μL乙腈沉淀,混合后3500×g离心5～20分钟。
2)取处理后上清溶液100μL进行LC/MS/MS分析待测化合物的浓度。2.6液相分析
●液相条件：Shimadzu LC-20AD泵
●质谱条件:AB Sciex API 4000质谱仪
●色谱柱：phenomenex Gemiu 5μm C18 50×4.6mm
●移动相：A液为0.1％甲酸水溶液，B液为乙腈
●流速：0.8mL/min
●洗脱时间：0-4.0分钟，洗脱液如下：
3.试验结果与分析
药代动力学主要参数用WinNonlin 8.2计算得到，小鼠药代实验结果见下表：
表14小鼠药代实验结果
4.实验结论：
从表中小鼠药代实验结果可以看出，本发明实施例化合物表现出良好的代谢 性质，暴露量AUC和最大血药浓度C max都表现良好。
测试例7荷瘤裸鼠血浆和肿瘤的药代动力学测定
1.研究目的：
以荷瘤裸鼠为受试动物，研究以下化合物实施例，在30mg/kg剂量下口服给药在荷瘤裸鼠体内血浆和肿瘤的药代动力学行为。
2.试验方案
2.1试验药品：
本发明实施例，自制。
2.2试验动物：
荷瘤裸鼠21只/实施例，雌性，上海必凯实验动物有限公司，动物生产许可证号(SCXK(沪)2013-0006 N0.311620400001794)。
2.3药物配制：
0.5％HPMC(1％Tween 80)，超声溶解，配制为澄清溶液或均一混悬液。
2.4给药：
荷瘤裸鼠，雌性；禁食一夜后分别p.o.，剂量为30mg/kg，给药体积10mL/kg。
2.5样品采集：
荷瘤裸鼠给药前和给药后，在0、1、2、4、6、8、16和24小时，采用眼眶采血0.1mL，置于EDTA-K 2试管中，4℃6000rpm离心6min分离血浆，解剖后取肿瘤组织称重，于-80℃保存。
2.6样品处理：
1)肿瘤组织按1：3加入甲醇水匀浆后离心取上清，肿瘤匀浆液上清和血浆样品均取40μL加入160μL乙腈沉淀，混合后3500×g离心5～20分钟。
2)取处理后上清溶液100μL进行LC/MS/MS分析待测化合物的浓度。
2.7液相分析
●液相条件：Shimadzu LC-20AD泵
●质谱条件:AB Sciex API 4000质谱仪
●色谱柱：phenomenex Gemiu 5μm C18 50×4.6mm
●移动相：A液为0.1％甲酸水溶液，B液为乙腈
●流速：0.8mL/min
●洗脱时间：0-4.0分钟，洗脱液如下：
3.试验结果与分析
药代动力学主要参数用WinNonlin 8.2计算得到，荷瘤裸鼠药代实验结果见下表：
表15本发明实施例化合物在荷瘤裸鼠体内血浆/肿瘤中的浓度结果
4.实验结论：
以上数据显示：本发明实施例化合物在小鼠肿瘤内的药物浓度高于血液药物浓度。
测试例8血浆蛋白结合率实验
1.实验目的：
本实验方法的目的是检测实施例化合物在血浆中的血浆蛋白结合情况。
2.实验仪器及材料：
超高效液相串联质谱联用联用仪，冷冻离心机，涡旋仪，电热恒温振荡水槽，移液器，连续加液器、96孔板、组织匀浆机(组织样品分析时使用)、加入内标的乙腈溶液、空白基质(血浆、尿液或组织匀浆液等)
3.实验步骤：
3.1准备血浆
于室温或37℃水浴解冻冷冻的血浆，3500rpm离心5min，取上清。
3.2配制反应终止液
用含有内标的乙腈做终止液，储存在2-8℃冰箱。
3.3配制化合物工作液
化合物的工作液配制：用DMSO稀释储备液至终浓度1mM。
3.4配制血浆溶液
取2.5μL化合物工作液加入到497.5μL空白血浆中，终浓度为5μM，震荡混匀。
3.5平衡透析
1)准备平衡透析装置，将检测膜装置放入平衡透析96孔板中；
2)在膜内加入200μL配制好的血浆溶液，n＝2；
3)另取5μL血浆溶液，用45μL相同种属的空白血浆稀释10倍后，加入200μL含有内标的乙腈终止液，储存于-20℃冰箱；
4)在膜外加入350μL透析液(100mM磷酸缓冲液)；
5)将透析板密封好，放入37℃水浴锅内孵育5小时；
6)透析结束后，自膜内样品孔分别取出5μL，用45μL相同种属的空白血浆稀释10倍；自膜外样品孔分别取出50μL透析液，加入200μL有内标的乙腈终止液；
7)样品离心后取上清液；
8)LC-MS分析。
4.色谱条件：
仪器：岛津LC-30AD；
色谱柱： C18(50*4.6mm，5μm粒径)；
流动相：A：0.1％甲酸溶液，B：甲醇；
冲洗梯度：0.2～1.6min 5％A到95％A，3.0～3.1min 95％A到5％A；
运行时间：4.0min。
5.质谱条件：
仪器：API5500型液相色谱质谱联用仪，美国AB Sciex公司；
离子源：电喷雾离子化源(ESI)；
干燥气体：N 2，温度500℃；
电喷雾电压：5000V；
检测方式：正离子检测；
扫描方式：选择反应监测(MRM)方式。
6.实验结果：如表16所示：
表16实施例化合物血浆蛋白结合率结果
7.实验结论：
以上数据显示：本发明实施例化合物显示出高血浆蛋白结合率。
测试例9 MC38-hPDL1移植瘤模型上对肿瘤的抑制实验
1.实验目的：
评价受试化合物对MC38-hPDL1细胞C57小鼠皮下移植瘤的抗肿瘤活性。
2.实验仪器与试剂：
2.1仪器：
超净工作台(BSC-1300II A2，上海博讯实业有限公司医疗设备厂)；
CO 2培养箱(311，Thermo)；
离心机(Centrifuge 5720R，Eppendorf)；
全自动细胞计数仪(Countess II，Life)；
移液器(10-20μL，Eppendorf)；
显微镜(TS100，尼康)；
游标卡尺(500-196，日本三丰)；
细胞培养瓶(T25/T75/T225，Corning)。
2.2试剂：
DMEM(11995-065，Gibco)；
胎牛血清(FBS)(10099-141，Gibco)；
磷酸盐缓冲液(PBS)(10010-023，Gibco)。
2.3受试化合物：
本发明实施例化合物，自制。
3.实验操作：
从细胞库中取出MC38-hPDL1细胞，复苏后加入DMEM培养基中(DMEM+10％FBS)置于CO 2培养箱中培养(培养箱温度为37℃，CO 2浓度为5％)，待细胞数量扩增到体内接种所需数量时，收集MC38-hPDL1细胞。用全自动细胞计数仪计数，根据计数结果用PBS重悬细胞，制成细胞悬液(密度1×10 6/mL)，置于冰盒中待用。
使用6-8周龄雌性C57小鼠，体重约为18-22克。小鼠饲养于SPF级动物房中，单笼饲养，每笼4-5只小鼠。所有的笼子、垫料和水在使用前进行高温消毒，所有动物均可自由饮食、饮水。实验开始前用一次性大小鼠通用耳标标记C57小鼠，接种前用75％酒精消毒接种部位皮肤，每只小鼠在右后背皮下接种0.1mL(含1*10 5个细胞)MC38-hPDL1细胞。当肿瘤体积达到40-180mm 3时开始分组给药，每组8只。各受试化合物每天口服给药2次、持续14天。每周测量肿瘤体积、称量小鼠体重各2次，并计算肿瘤TGI(％)。
4.数据处理：
肿瘤体积(mm 3)，计算公式为：V＝0.5*D*d*d，其中D和d分别是肿瘤的长径和短径。
TGI(％)的计算：
当肿瘤无消退时，TGI(％)＝[(1-(某处理组给药结束时平均瘤体积－该处理组开始给药时平均瘤体积))/(溶剂对照组治疗结束时平均瘤体积－溶剂对照组开始治疗时平均瘤体积)]×100％；
当肿瘤有消退时，TGI(％)＝[1-(某处理组给药结束时平均瘤体积－该处理组开始给药时平均瘤体积)/该处理组开始给药时平均瘤体积]×100％。
5.实验结果：
试验结果如下表17：
表17化合物对移植瘤小鼠药效参数
备注：括号中的数据表示，该实施例对应Vehicle QD x 2w组(即对照组)相应时间的肿瘤体积
6.试验结论
以上数据显示：本发明实施例化合物对MC38-hPDL1细胞C57小鼠皮下移植瘤具有较强的抑制作用。
测试例10实施例4化合物SD大鼠重复灌胃14天毒性试验
1.实验目的
本研究的目的是考察实施例4化合物重复灌胃给予SD大鼠14天后可能出现的毒性反应。
2.实验材料和仪器
2.1供试品
供试品：N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺(实施例4化合物)
2.2溶媒
名称：含1％(v/v)Tween 80的0.5％(w/v)HPMC K4M水溶液
2.3动物信息
种属&品系：SD大鼠
动物等级：SPF级
动物数量和性别：8雄8雌/组
2.4仪器
2120系列血液分析仪，Sysmex CS-2000i全自动凝血分析仪，TBA-120FR全自动生化分析仪。
3.实验方法
重复灌胃给予SD大鼠实施例4化合物，每天给药1次，连续给药14天，定期对大鼠临床观察、体重、耗食量、临床病理、毒代动力学、大体及组织病理学等指标进行检测，考察大鼠连续给药实施例4化合物14天后可能出现的毒性反应及代谢情况。
4.试验数据
4.1濒死/死亡
15、50、100mg/kg给药剂量组未见动物死亡/濒死。
4.2毒代动力学
在15、50、100mg/kg剂量下，动物体内实施例4化合物的平均暴露量(AUC last)均随剂量增加而增大；动物体内暴露量增大的比率基本接近于剂量增加的比率；雌雄动物实施例4化合物的暴露量无明显性别差异。重复给药14天与首次给药相比，各剂量组动物体内实施例4化合物未见明显蓄积。
4.3临床观察
100mg/kg剂量组1/5雄性动物偶见软便，15、50mg/kg剂量组未见异常。
4.4体重及食量
100mg/kg剂量组W1和W2体重增长减缓、食量降低，50mg/kg剂量组雌性动物W2体重增长减缓；15mg/kg剂量组未见异常。
4.5血细胞计数和凝血功能
100mg/kg剂量组Neut、FIB升高；15和50mg/kg剂量组雌性动物FIB升高。
4.6血液生化
100mg/kg剂量组Alb降低；15、50mg/kg剂量组未见异常。
4.7病理
15、50、100mg/kg剂量组动物大体观察未见异常，未进行组织病理学检查。
5.实验结论
实施例4化合物以15、50、100mg/kg的剂量重复灌胃给予SD大鼠，每天 给药1次，连续给药14天，最大耐受剂量(MTD)为100mg/kg。
化合物的晶型研究
本领域普通技术人员所熟知的是，上述实施例化合物被证明对CHO-PDL1/Jurkat-PD1细胞通路有较好的抑制活性，其晶型往往会具有同样的药理药效活性。在此基础上，发明人进一步研究了相应化合物晶型的理化性质，但下述具体晶型的制备与表征并不代表对本发明保护范围范围的限定，本领域普通技术人员可以以本发明为基础，通过常规的析晶手段获得本发明化合物更多的晶体，这些晶体均为本发明所保护的方案。具体如下：
1.实验仪器
1.1物理化学检测仪器的一些参数
1.2仪器和液相分析条件
2.实施例4化合物自由碱晶型A～D的制备
2.1自由碱晶型A的制备
加入粗产品DCM浓缩液与异丙醇(5V)，控制温度40-45℃继续浓缩至1-2V。重复该操作一次。补加异丙醇至5-6V，保持温度40-45℃搅拌10-20min。保持温度35-45℃热过滤，异丙醇(1-2V)漂洗。控制温度40-45℃，浓缩滤液至5V，搅拌10-30min，体系澄清。缓慢降至15-20℃，降温时间约1-2小时(自然降温亦可)。控制该温度搅拌16-20小时，能观察到有固体逐渐析出。过滤，异丙醇(1-2V)漂洗滤饼，得浅棕色固体。油泵抽干得到产品固体。得到的固体检测XRPD为晶型A。经检测分析，其有如图1所示的XRPD图及如图2所示的DSC图。
2.2自由碱晶型B的制备
加入粗产品DCM浓缩液(28g起始物料反应而得)与无水乙醇(5V)，控制温度40-45℃继续浓缩至1-2V。重复该操作一次。补加无水乙醇至5-6V，保持温度40-45℃搅拌10-20min。保持温度35-45℃热过滤，无水乙醇(1-2V)漂洗。控制温度40-45℃，浓缩滤液至3V，搅拌10-30min，体系基本澄清；控制温度40-45℃，滴加甲基叔丁基醚(112ml，4V)(备注：滴加速度不可过快，否则易形成油状物)约半小时滴加完毕。保温20-30min；缓慢降至15-20℃，降温时间约1-2小时(自然降温亦可)。控制该温度搅拌16-20小时，能观察到有固体逐渐析出。过滤，以MTBE：EtOH＝2：1(1-2V)漂洗滤饼，得浅棕色固体。得到的固体检测XRPD为晶型B。经检测分析，其有如图3所示的XRPD图及如图4所示的DSC图。
2.3自由碱晶型C的制备
称量约50mg的游离碱B，加入1mL甲酸乙酯室温溶清，在室温下加入1mL环己烷混浊成油，室温搅拌至固体析出。最后固体快速离心，去除上清液，40℃真空干燥，得到的固体检测XRPD为晶型C。经检测分析，其有如图5所示的XRPD图及如图6所示的DSC图。
2.4自由碱晶型D的制备
称量约10mg的游离碱晶型C，加入0.1mL乙酸乙酯于40℃下打浆2小时，然后室温打浆12小时，最后得到的固体检测XRPD为晶型D。经检测分析，其有如图7所示的XRPD图及如图8所示的DSC图。
3.稳定晶型确认实验
3.1实验目的：
通过晶型打浆实验稳定性考察实验找到实施例4化合物比较稳定的晶型。
3.2实验方案：
选择有一定溶解度的有机溶剂、水，将不同晶型悬浮于溶剂体系中，一定温度下搅拌打浆最后将固体处理，测定固体的XRPD并进行比较。
3.3实验结果：
称取自由碱晶型A约20mg样品，加入0.1mL溶剂，于室温打浆。具体结果如下表18所示。
表18自由碱稳定晶型确认实验结果
实验结论：从DSC数据中可知，晶型B为最稳定晶型。
4.固体稳定性实验
4.1实验目的：
考察实施例4化合物自由碱晶型B在高温(60℃)，室温高湿(RH＝92.5％)及高温高湿(50℃，RH＝75％)三个条件下，化合物的物理化学稳定性，为晶型筛选与化合物贮存提供依据。
4.2实验方案：
实验中称取约5mg自由碱晶型B于20mL的小瓶中，分别置于高温(60℃)，室温高湿(RH＝92.5％)及高温高湿(50℃，RH＝75％)三个条件下，5天、10天、20天、30天取样，用HPLC外标法测定含量，并采用色谱峰面积归一化法计算有关物质的变化。
4.3实验结果：
实施例4化合物游离碱晶型B固体稳定性实验结果如下表19所示：
表19自由碱晶型B固体稳定性实验结果
实验结论：自由碱晶型B在高温高湿条件下稳定性很好，且最大单杂增加小于0.1％。
5.引湿性实验
5.1实验目的
考察实施例4化合物自由碱晶型B在不同相对湿度条件下的引湿性，为化合物晶型筛选与贮存提供依据。
5.2实验方案：
将化合物自由碱晶型B置不同相对湿度的饱和水蒸气中，使化合物与水蒸气达到动态平衡，并计算平衡后化合物吸湿增重的百分数。
5.3实验结果：
自由碱晶型B在RH80％条件下吸湿增重约0.815％，略有引湿性。经0-95％相对湿度条件下吸湿与解吸湿循环1次，自由碱晶型B的XRPD谱图未发生改变，即晶型B未转晶。
6.不同介质中溶解度实验
6.1实验目的
比较实施例4化合物自由碱晶型B在pH 1～pH 8缓冲液、水、人工模拟胃液(SGF)、禁食人工模拟肠液(FaSSIF)及非禁食人工模拟肠液(FeSSIF)等媒介中溶解度大小，为可成药性评估提供依据。
6.2实验方案：
将约2mg自由碱晶型B混悬到不同介质中2小时，用HPLC，外标法测定化合物37℃下的热力学溶解度。
6.3实验结果：
不同介质中溶解度实验结果如下表20所示：
表20自由碱晶型B不同介质中溶解度实验结果
溶解度/介质 溶解度(mg/mL)
pH1 >1.640
pH2 >1.052
pH3 0.200
pH4 0.286
pH5 >1.375
pH6 0.236
pH7 0.040
pH8 0.000
FaSSIF 0.635
FeSSIF >1.217
FaSSGF >1.298
H 2O 0.000
实验结论：自由碱晶型B在整个胃肠道包含的pH范围及环境下均具有很好的溶解度。

Claims (16)

  1. 通式(I)所示化合物的晶型，化合物结构如下：
    其中：
    L选自键、
    环A选自4-8元杂环基；优选4元、7元或8元杂环基；
    更优选如下基团：
    R 1独立地选自选自氢、氘、卤素、羟基、氰基、羧基、醛基、氧代基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 3-8环烷基、-(CH 2) nR a、-(CH 2) nOR a、-OC(O)R a、-C(O)R a、-C(O)OR a、-C(O)NR aR b、-(CH 2) nNR aC(O)R b或-SO 2R a，其中所述的C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基和C 3-8环烷基，任选进一步被氘、卤素、羟基、氰基或C 1-6烷基中的一个或多个取代基所取代；
    R a和R b各自独立地选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、羧基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基或C 3-8环烷基，其中所述的C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基和C 3-8环烷基，任选进一步被氘、卤素、羟基、氰基或C 1-6烷基中的一个或多个取代基所取代；
    n为0、1或2；且
    x为0、1或2。
  2. 根据权利要求1所述化合物的晶型，所述化合物的结构如通式(II)所示：
    其中：
    M为O、-NR 2或-CR 3R 4；
    R 2选自氢、氘、醛基、C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1-3卤代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3羟烷基、C 3-6环烷基、-(CH 2) nR a、-(CH 2) nOR a、-OC(O)R a、-C(O)R a、-C(O)OR a、-C(O)NR aR b、-(CH 2) nNR aC(O)R b或-SO 2R a；
    R 3和R 4各自独立地选自氢、氘、卤素、羟基、氰基、羧基、醛基、氧代基、C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1-3卤代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3羟烷基、C 3-6环烷基、-(CH 2) nR a、-(CH 2) nOR a、-OC(O)R a、-C(O)R a、-C(O)OR a、-C(O)NR aR b、-(CH 2) nNR aC(O)R b或-SO 2R a，其中所述的C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1-3卤代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3羟烷基和C 3-6环烷基，任选进一步被氘、卤素、羟基、氰基或C 1-3烷基中的一个或多个取代基所取代；
    R a和R b各自独立地选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、羧基、C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1-3卤代烷基或C 3-6环烷基，其中所述的C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1-3卤代烷基和C 3-6环烷基，任选进一步被氘、卤素、羟基、氰基或C 1-3烷基中的一个或多个取代基所取代；
    n为0、1或2。
  3. 根据权利要求1或2所述化合物的晶型，所述化合物为：
    N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((噁丁环-3-基氨基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(2,2'-二氯-3'-(5-((3-氟吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    1-((6-(2,2'-二氯-3'-(1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-碳杂草酰氨基<乙二酰氨基>)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)吖丁啶-3-基乙酸酯；
    N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(3'-(5-((2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(3'-(5-((5-氧杂-2-氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二 氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((6-羰基-2,5-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(2,2'-二氯-3'-(5-((3-羟基吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(2,2'-二氯-3'-(5-((3-羟基-3-甲基吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    1-((6-(2,2'-二氯-3'-(1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)吖丁啶-3-羧酸；
    (S)-1-((6-(2,2'-二氯-3'-(1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-碳杂草酰氨基<乙二酰氨基>)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)吖丁啶-2-羧酸；
    (S)-N-(2,2'-二氯-3'-(5-((2-(羟甲基)吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(2,2'-二氯-3'-(5-((3-羟基-3-(羟甲基)吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(3'-(5-((3-乙酰氨基吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(3'-(5-((3-(乙酰氨基甲基)吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(2,2'-二氯-3'-(5-((3-(氰基甲基)吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(2,2'-二氯-3'-(5-((3-(二甲基氨基甲酰)吖丁啶-1-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((3-(甲基氨基甲酰)吖丁啶-1-基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-异丁酰-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-(环丙羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((6-丙酰-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)吡啶 -2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((6-(2,2,2-三氟乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-(2,2-二氟乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-(2-氰基乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-5-((6-(甲磺酰)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-甲酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(3'-(5-((7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺
    N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；
    N-(2,2'-二氯-3'-(5-((6-异丁酰-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺；或
    N-(3'-(5-((6-乙酰氨基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺。
  4. 根据权利要求1-3任一项所述化合物的晶型，其特征在于，所述晶型为N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的晶型A～D；
    所述晶型A的X-射线粉末衍射图谱在2θ为7.8±0.2°处具有衍射峰；或者在14.1±0.2°处具有衍射峰；或者在15.3±0.2°处具有衍射峰；或者在19.5±0.2°处具 有衍射峰；或者在12.0±0.2°处具有衍射峰；或者在12.4±0.2°处具有衍射峰；或者在13.2±0.2°处具有衍射峰；或者在14.6±0.2°处具有衍射峰；或者在21.2±0.2°处具有衍射峰；或者在22.0±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
    所述晶型B的X-射线粉末衍射图谱在2θ为4.2±0.2°处具有衍射峰；或者在12.2±0.2°处具有衍射峰；或者在12.6±0.2°处具有衍射峰；或者在16.5±0.2°处具有衍射峰；或者在16.8±0.2°处具有衍射峰；或者在18.4±0.2°处具有衍射峰；或者在18.9±0.2°处具有衍射峰；或者在21.1±0.2°处具有衍射峰；或者在22.2±0.2°处具有衍射峰；或者在22.4±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
    所述晶型C的X-射线粉末衍射图谱在2θ为11.4±0.2°处具有衍射峰；或者在12.5±0.2°处具有衍射峰；或者在21.1±0.2°处具有衍射峰；或者在23.0±0.2°处具有衍射峰；或者在26.1±0.2°处具有衍射峰；或者在26.6±0.2°处具有衍射峰；或者在13.0±0.2°处具有衍射峰；或者在14.0±0.2°处具有衍射峰；或者在14.7±0.2°处具有衍射峰；或者在15.8±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
    所述晶型D的X-射线粉末衍射图谱在2θ为9.5±0.2°处具有衍射峰；或者在10.4±0.2°处具有衍射峰；或者在14.5±0.2°处具有衍射峰；或者在19.9±0.2°处具有衍射峰；或者在20.8±0.2°处具有衍射峰；或者在24.8±0.2°处具有衍射峰；或者在11.7±0.2°处具有衍射峰；或者在13.3±0.2°处具有衍射峰；或者在17.2±0.2°处具有衍射峰；或者在23.8±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处。
  5. 根据权利要求4所述化合物的晶型，其特征在于，
    晶型A的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为7.8±0.2°、14.1±0.2°、15.3±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含19.5±0.2°、12.0±0.2°、12.4±0.2°、13.2±0.2°、14.6±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；
    晶型B的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为4.2±0.2°、12.2±0.2°、12.6±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含16.5±0.2°、16.8±0.2°、18.4±0.2°、18.9±0.2°、21.1±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；
    晶型C的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为11.4±0.2°、12.5±0.2°、21.1±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含23.0±0.2°、26.1±0.2°、26.6±0.2°、13.0±0.2°、14.0±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；
    晶型D的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为9.5±0.2°、10.4±0.2°、14.5±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含19.9±0.2°、20.8±0.2°、24.8±0.2°、11.7±0.2°、13.3±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条。
  6. 根据权利要求5所述化合物的晶型，其特征在于，
    晶型A的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为21.2±0.2°、22.0±0.2°、22.6±0.2°、25.0±0.2°、28.3±0.2°、16.7±0.2°或24.5±0.2°处中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
    晶型B的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为22.2±0.2°、22.4±0.2°、22.9±0.2°、23.6±0.2°、26.6±0.2°、13.8±0.2°或14.5±0.2°处中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
    晶型C的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为14.7±0.2°、15.8±0.2°、18.0±0.2°、19.8±0.2°、23.6±0.2°、9.1±0.2°或16.7±0.2°处中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
    晶型D的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为17.2±0.2°、23.8±0.2°、25.5±0.2°、27.1±0.2°、15.3±0.2°、15.8±0.2°或21.4±0.2°处中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处。
  7. 根据权利要求4所述化合物的晶型，其特征在于，
    晶型A的X-射线粉末衍射图谱任选包含位于2θ为7.8±0.2°、14.1±0.2°、15.3±0.2°、19.5±0.2°、12.0±0.2°、12.4±0.2°、13.2±0.2°、14.6±0.2°、21.2±0.2°、22.0±0.2°、22.6±0.2°、25.0±0.2°、28.3±0.2°、16.7±0.2°或24.5±0.2°处中的一处或多处衍射峰，
    优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
    晶型B的X-射线粉末衍射图谱任选包含位于2θ为4.2±0.2°、12.2±0.2°、12.6±0.2°、16.5±0.2°、16.8±0.2°、18.4±0.2°、18.9±0.2°、21.1±0.2°、22.2±0.2°、22.4±0.2°、22.9±0.2°、23.6±0.2°、26.6±0.2°、13.8±0.2°或14.5±0.2°处中的一处或 多处衍射峰，
    优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
    晶型C的X-射线粉末衍射图谱任选包含位于2θ为11.4±0.2°、12.5±0.2°、21.1±0.2°、23.0±0.2°、26.1±0.2°、26.6±0.2°、13.0±0.2°、14.0±0.2°、14.7±0.2°、15.8±0.2°、18.0±0.2°、19.8±0.2°、23.6±0.2°、9.1±0.2°或16.7±0.2°处中的一处或多处衍射峰，
    优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
    晶型D的X-射线粉末衍射图谱任选包含位于2θ为9.5±0.2°、10.4±0.2°、14.5±0.2°、19.9±0.2°、20.8±0.2°、24.8±0.2°、11.7±0.2°、13.3±0.2°、17.2±0.2°、23.8±0.2°、25.5±0.2°、27.1±0.2°、15.3±0.2°、15.8±0.2°或21.4±0.2°处中的一处或多处衍射峰，
    优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰。
  8. 根据权利要求4-7中任一项所述化合物的晶型，其特征在于，
    晶型A具有如图1所示的X-射线粉末衍射图谱，或者具有如图2所示的DSC图谱；
    晶型B具有如图3所示的X-射线粉末衍射图谱，或者具有如图4所示的DSC图谱；
    晶型C具有如图5所示的X-射线粉末衍射图谱，或者具有如图6所示的DSC图谱；
    晶型D具有如图7所示的X-射线粉末衍射图谱，或者具有如图8所示的DSC图谱。
  9. 根据权利要求1-3任一项所述化合物的晶型，其特征在于，所述晶型为N-(3'-(5-((6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺的晶型B；
    所述晶型B的X-射线粉末衍射图谱在4.0±0.2°处具有衍射峰；或者在12.0±0.2°处具有衍射峰；或者在12.4±0.2°处具有衍射峰；或者在16.4±0.2°处具有衍射峰；或者在16.6±0.2°处具有衍射峰；或者在18.2±0.2°处具有衍射峰；或者在18.7±0.2°处具有衍射峰；或者在20.9±0.2°处具有衍射峰；或者在22.0±0.2°处具有衍射峰；或者在22.3±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
    优选地，所述晶型B的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为4.0±0.2°、12.0±0.2°、12.4±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包 含三条；任选的，进一步还可以包含16.4±0.2°、16.6±0.2°、18.2±0.2°、18.7±0.2°、20.9±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；
    更优选地，所述晶型B的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为22.0±0.2°、22.3±0.2°、22.7±0.2°、23.5±0.2°、26.5±0.2°、13.6±0.2°或14.3±0.2°处中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
    进一步优选地，所述晶型B的X-射线粉末衍射图谱任选包含位于2θ为4.0±0.2°、12.0±0.2°、12.4±0.2°、16.4±0.2°、16.6±0.2°、18.2±0.2°、18.7±0.2°、20.9±0.2°、22.0±0.2°、22.3±0.2°、22.7±0.2°、23.5±0.2°、26.5±0.2°、13.6±0.2°或14.3±0.2°处中的一处或多处衍射峰，优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
    更进一步优选地，所述晶型B的X-射线粉末衍射图谱如图10所示。
  10. 根据权利要求4-9任一项所述化合物的晶型，其特征在于，
    晶型A、晶型B、晶型C和晶型D的X-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置与图1、图3、图5和图7对应位置衍射峰的2θ误差为±0.2°～±0.5°；优选±0.2°～±0.3°；最优选±0.2°。
  11. 根据权利要求1-10任意一项所述化合物的晶型，其特征在于，晶型为无水物。
  12. 根据权利要求1-11任意一项述化合物的晶型，其特征在于，晶型为水合物，水的个数为0.2-3；优选0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3；更优选0.5、1、2或3。
  13. 一种制备权利要求1-12任意一项所述化合物晶型的方法，具体包括如下步骤：
    1)称取适量的自由碱，用良性溶剂在一定温度下溶解，温度优选0～50℃；
    2)任选地，向以上所得溶液中加入反溶剂，搅拌至固体析出；
    3)任选地，搅拌，降温析晶得到目标产物；
    或
    1)称取适量的自由碱或其晶型，用不良溶剂在一定温度下打浆，温度优选0～50℃；
    其中：
    所述的良性溶剂选自甲醇、丙酮、甲酸乙酯、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、88％ 丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、苯、甲苯、异丙醇、正丁醇、异丁醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、正丙醇、叔丁醇、2-丁酮或3-戊酮中的一种或多种；优选甲酸乙酯、异丙醇或无水乙醇中的一种或多种；
    所述的反溶剂选自庚烷、环己烷、正己烷、正戊烷、水、乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、甲苯或异丙醚中的一种或多种；优选乙酸乙酯、甲基叔丁基醚或环己烷中的一种或多种；
    所述的不良溶剂选自庚烷、环己烷、正己烷、正戊烷、水、乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、甲苯或异丙醚中的一种或多种；优选乙酸乙酯、甲基叔丁基醚或环己烷中的一种或多种。
  14. 一种药物组合物，其含有治疗有效量的权利要求1-12任一项所述化合物的晶型，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
  15. 权利要求1-12任一项所述化合物的晶型或权利要求14所述的药物组合物在制备PD-1/PD-L1抑制剂药物中的应用。
  16. 权利要求1-12任一项所述化合物的晶型或权利要求14所述的药物组合物在制备治疗疾病选自癌症、感染性疾病、自身免疫性疾病药物中的应用；其中所述的癌症选自皮肤癌、肺癌、泌尿系肿瘤、血液肿瘤、乳腺癌、胶质瘤、消化系统肿瘤、生殖系统肿瘤、淋巴瘤、神经系统肿瘤、脑瘤、头颈癌；所述的感染性疾病选自细菌感染或病毒感染；所述的自身免疫性疾病选自器官特异性自身免疫病或系统性自身免疫病，其中，所述的器官特异性自身免疫病包括慢性淋巴细胞性甲状腺炎、甲状腺功能亢进、胰岛素依赖型糖尿病、重症肌无力、溃疡性结肠炎、恶性贫血伴慢性萎缩性胃炎、肺出血肾炎综合征、原发性胆汁性肝硬化、多发性脑脊髓硬化症或急性特发性多神经炎，所述的系统性自身免疫病包括类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、系统性血管炎、硬皮病、天疱疮、皮肌炎、混合性结缔组织病或自身免疫性溶血性贫血。
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