CN117551588A - 一种快速改良养殖用水的复合菌剂及其应用 - Google Patents
一种快速改良养殖用水的复合菌剂及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117551588A CN117551588A CN202311803578.6A CN202311803578A CN117551588A CN 117551588 A CN117551588 A CN 117551588A CN 202311803578 A CN202311803578 A CN 202311803578A CN 117551588 A CN117551588 A CN 117551588A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- water
- composite microbial
- scp1
- rhodococcus
- scr1
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 99
- 239000002131 composite material Substances 0.000 title claims abstract description 35
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 title claims description 17
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 title claims description 10
- 238000009360 aquaculture Methods 0.000 title claims description 9
- 244000144974 aquaculture Species 0.000 title claims description 9
- 101100365087 Arabidopsis thaliana SCRA gene Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 101710134395 Carboxy-terminal domain RNA polymerase II polypeptide A small phosphatase 1 Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 102100025483 Retinoid-inducible serine carboxypeptidase Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 101150105073 SCR1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 101100134054 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) NTG1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 27
- PUPNJSIFIXXJCH-UHFFFAOYSA-N n-(4-hydroxyphenyl)-2-(1,1,3-trioxo-1,2-benzothiazol-2-yl)acetamide Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1NC(=O)CN1S(=O)(=O)C2=CC=CC=C2C1=O PUPNJSIFIXXJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N ammonia nh3 Chemical compound N.N XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 25
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 claims abstract description 24
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 23
- 241000316848 Rhodococcus <scale insect> Species 0.000 claims abstract description 16
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims abstract description 14
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 10
- 241000187561 Rhodococcus erythropolis Species 0.000 claims abstract description 5
- 241000589774 Pseudomonas sp. Species 0.000 claims abstract description 3
- 238000013329 compounding Methods 0.000 claims abstract description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 26
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 5
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 abstract description 8
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 abstract description 8
- 230000006872 improvement Effects 0.000 abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 238000009395 breeding Methods 0.000 abstract description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 27
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 11
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000001139 pH measurement Methods 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 3
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000010865 sewage Substances 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 239000002352 surface water Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000726252 Mus musculus Cysteine-rich secretory protein 1 Proteins 0.000 description 2
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000073434 Pseudomonas sp. SCP-1 Species 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 2
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- -1 DKW vitamin Chemical class 0.000 description 1
- 241000238553 Litopenaeus vannamei Species 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N aldehydo-D-glucose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229940089206 anhydrous dextrose Drugs 0.000 description 1
- SWUIQEBPZIHZQS-UHFFFAOYSA-N calone Chemical compound O1CC(=O)COC2=CC(C)=CC=C21 SWUIQEBPZIHZQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000010840 domestic wastewater Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000008235 industrial water Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000010815 organic waste Substances 0.000 description 1
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019171 pyridoxine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011764 pyridoxine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000003883 substance clean up Methods 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
- C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F2101/00—Nature of the contaminant
- C02F2101/10—Inorganic compounds
- C02F2101/16—Nitrogen compounds, e.g. ammonia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F2101/00—Nature of the contaminant
- C02F2101/10—Inorganic compounds
- C02F2101/16—Nitrogen compounds, e.g. ammonia
- C02F2101/166—Nitrites
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F2103/00—Nature of the water, waste water, sewage or sludge to be treated
- C02F2103/20—Nature of the water, waste water, sewage or sludge to be treated from animal husbandry
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/38—Pseudomonas
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02W—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES RELATED TO WASTEWATER TREATMENT OR WASTE MANAGEMENT
- Y02W10/00—Technologies for wastewater treatment
- Y02W10/10—Biological treatment of water, waste water, or sewage
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Hydrology & Water Resources (AREA)
- Environmental & Geological Engineering (AREA)
- Water Supply & Treatment (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)
Abstract
本发明公开了一种快速改良养殖用水的复合菌剂及其应用，属于养殖行业水质改良技术领域。本发明所述复合菌剂由假单胞菌(Pseudomonas sp.)SCP1和红球菌(Rhodococcus erythropolis)SCR1按比例复配获得。所述假单胞菌SCP1的保藏编号为CCTCC NO：M20231698；所述红球菌SCR1的保藏编号为CCTCC NO：M 20231697。本发明提供的复合菌剂对于高氨氮和高亚硝酸盐含量的水质具有快速的降解作用，效果明显，获得成本低。本发明可为开发养殖业新型的水质改良复合菌剂提供理论基础和新的方向。
Description
技术领域
本发明涉及养殖行业水质改良技术领域，特别是涉及一种快速改良养殖用水的复合菌剂及其应用。
背景技术
随着我国养殖业的不断发展，对于水质的质量要求越来越高，根据当前我国对于水产养殖用水的质量要求，氨氮为最重要的水质标准评判指标，水质中的氨氮来源主要来自微生物对排放的生活废水中有机物的分解、工业用水或农业用水过度的使用化肥等。目前降解氨氮和亚硝酸盐的方法较多，如曝气增氧法，药物降解法和减少污染法等，但以上方法普遍存在过程繁琐复杂且成本较高等缺点，不适用绝大多数的养殖户。
复合菌剂处理污水是一种利用微生物对废水进行治理的技术。在养殖行业中，通过添加复合菌剂可以有效地降解和消化养殖过程中产生的有机废物和氮、磷等营养元素，减少水体内的氨氮和亚硝酸盐含量，改善水质状况。同时，利用复合菌剂处理污水，其成本相对较低，操作更加便捷。因此，探索对氨氮及亚硝酸盐等降解效率较高的微生物，对进一步开发适合养殖业的新型水质改良复合菌剂具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种快速改良养殖用水的复合菌剂及其应用，以解决上述现有技术存在的问题。本发明筛选获得的菌株SCP1和菌株SCR1能够复配，制备成复合菌剂，用于净化水样中的氨氮和亚硝酸盐，并且降解速效率高。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明提供一种微生物组合，所述微生物组合由假单胞菌(Pseudomonas sp.)SCP1和红球菌(Rhodococcus erythropolis)SCR1构成；
所述假单胞菌SCP1的保藏编号为CCTCC NO：M 20231698；
所述红球菌SCR1的保藏编号为CCTCC NO：M 20231697。
如上述的微生物组合在制备改良养殖用水的复合菌剂中的应用。
本发明还提供一种快速改良养殖用水的复合菌剂，包括所述的微生物组合。
进一步地，在所述复合菌剂中，所述假单胞菌SCP1和所述红球菌SCR1的浓度比为(5-7)：(3-5)。
进一步地，所述复合菌剂由所述假单胞菌SCP1和所述红球菌SCR1的菌液按体积比(5-7)：(3-5)复配获得；所述假单胞菌SCP1和所述红球菌SCR1的菌液浓度均为108CFU/mL。
本发明还提供所述的复合菌剂在快速改良养殖用水中的应用。
进一步地，所述改良包括降解水体中的氨氮和亚硝酸盐。
本发明还提供一种快速改良养殖用水的方法，包括将所述的复合菌剂施用于养殖用水中，使水体得到改良的步骤。
进一步地，所述复合菌剂的使用量为所述养殖用水总体积的十万分之一。
进一步地，所述改良包括降解水体中的氨氮和亚硝酸盐。
本发明公开了以下技术效果：
本发明自山东省德州市齐河县地表水水样中筛选到了1株假单胞菌SCP1和1株红球菌SCR1，经水样降解实验证实，假单胞菌SCP1和红球菌SCR1复配后，可在4天内将水样中的氨氮含量由1.2mg/L-1.5mg/L降解到0mg/L；可在6天内将水样中的亚硝酸盐含量由0.2mg/L-0.25mg/L降解到0mg/L，同时不会对水样的pH产生明显影响。
本发明将假单胞菌SCP1和红球菌SCR1按照不同配比复配成复合菌剂后，对于高氨氮和高亚硝酸盐含量的水质具有快速的降解作用，效果明显，获得成本低。本发明可为开发养殖业新型的水质改良复合菌剂提供理论基础和新的方向。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为经多次筛选获得的单菌落，其中，A为稀释10-2经富集培养的水样培养出的单菌落，B为原水样培养出的单菌落；
图2为菌株SCP1的系统发育树；
图3为菌株SCR1的系统发育树；
图4为培养0天后(刚添加完菌液)各组水样中的氨氮含量测定结果；
图5为培养2天后各组水样中的氨氮含量测定结果；
图6为培养4天后各组水样中的氨氮含量测定结果；
图7为培养0天后(刚添加完菌液)各组水样中的亚硝酸盐含量测定结果；
图8为培养2天后各组水样中的亚硝酸盐含量测定结果；
图9为培养4天后各组水样中的亚硝酸盐含量测定结果；
图10为培养0天后各组水样中的亚硝酸盐含量测定结果；
图11为培养0天后(刚添加完菌液)各组水样的pH测定结果；
图12为培养2天后各组水样的pH测定结果；
图13为培养4天后各组水样的pH测定结果；
图14为培养6天后各组水样的pH测定结果。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
实施例1菌株SCP1的分离筛选、鉴定
水样取自山东省德州市齐河县地表水，部分水样在LB液体培养基中富集培养12h时间。
1、溶液及培养基配制
10×M9溶液的配置：称取17.1gNa2HPO4·12H2O、3g KH2PO4、0.5gNaCl和1g NH4Cl，溶于蒸馏水配制成100mL溶液。
1mol/LMgSO4溶液的配置；称取12g MgSO4溶于100g蒸馏水，单独装瓶灭菌(121℃)。
1mol/L葡萄糖溶液的配制：称取36g无水葡萄糖溶于200mL的蒸馏水中，单独装瓶115℃灭菌。
M9固体培养基的配制：取50mL的10×M9溶液稀释至500mL，分装于5个300mL的锥形瓶，每个100mL；向每个锥形瓶加入1.5％的琼脂(1.5g)，灭菌后(凝固前)向每个锥形瓶添加0.2mL的1mol/LMgSO4溶液和2.5mL的1mol/L葡萄糖溶液。
在M9固体培养基溶液凝固前，向每个锥形瓶里加入0.2mL 1mol/L MgSO4溶液，加入2.5mL的1mol/L葡萄糖溶液，混合均匀，倒入培养皿(每个15mL-20mL)。
氨苄青霉素的配置：称取氨苄青霉素(MDBio)1g溶于10mL水中，用无菌滤膜在超净工作台中过滤除菌，装入离心管，放入-4℃冰箱保存。
LB富集培养基的配制：称取NaCl 1g、蛋白胨1g、酵母粉0.5g，溶于100mL蒸馏水中进行高压灭菌。
2、筛选过程
(1)稀释菌液：取4个1.5mL的离心管编号①②③④，加入900μL的已灭菌的蒸馏水，再取100μL经富集培养的水样加入到①号进行10-1稀释、再取①号100μL液体加入到②号进行10-2稀释、再取②号100μL液体加入到③号进行10-3稀释、再取③号100μL液体加入到④号进行10-4稀释。
(2)涂布：取原水样的100μL加入到固体培养基(涂两个平板)，并用涂布棒涂抹均匀，使培养基表面保持干燥。
取富集培养的水样，经10-2和10-4稀释后，分别取100μL水样加入到固体培养基(各涂两个平板)，并用涂布棒涂抹均匀，使培养基表面保持干燥。
(3)培养：将接种完成的固体培养基放入28℃的恒温培养箱进行培养，定期观察菌落的生长情况，待有菌落出现，用紫外灯进行观察，最终在经10-2稀释的富集培养水样和原水样中均观察到了带有荧光的单个圆润菌落(图1)。
(4)富集：取16个1.5mL的离心管，编号1-16号，分别加入1mL带有50μg/mL氨苄青霉素的10×M9溶液中，用移液枪带灭菌枪头挑取步骤(4)中来自富集水样的单菌落至编号Pse-F(1-8)的离心管中。用移液枪带灭菌枪头挑取步骤(4)中来自原水样的单菌落至编号pse-Y(1-8)的离心管中。
(7)培养：将pse-F(1-8)和pse-Y(1-8)共16个离心管放入到28℃的摇床150r/min培养，直至生长浑浊。
3、菌株的鉴定
将生长浑浊的菌液使用通用引物27F/1492R进行PCR扩增，扩增产物送至擎科生物进行测序。将测序成功的PCR产物，在NCBI进行比对，确定1株菌(SCP1)为假单胞菌属，并将其命名为Pseudomonas sp.SCP1，系统发育树见图2。
菌株Pseudomonas sp.SCP1于2023年09月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M 20231698。
实施例2菌株SCR1的分离筛选、鉴定
水样取自山东省德州市齐河县地表水。
1、液体培养基的配制
称取Na2S2O3·5H2O 2.5g、MgCl2·6H2O 0.2g、CaCl2·2H2O 0.1g、NH4Cl 0.1g、K2HPO40.1g和KCl 0.1g，溶于无菌水，配制成1000mL溶液，高压灭菌冷却备用。
将1mL SL-10微量元素混合溶液(HCl(25％)10mL，FeClz·4H2O 1.5g，ZnCl20.07g，MnClz·4H2O 0.1g，H3BO30.006g，CoClz·6H2O 0.19g，CuClz·2H2O 0.002g，NiClz·6H2O.024g，Na2MoO4·2H2O 0.036g，Distilled water 1000.0mL，pH 6.0)、1mL DKW维生素混合溶液(myo-Inositol 100mg/L，Nicotinic acid 1mg/L，Pyridoxine HCl 1mg/L，Thiamine HCl 10mg/L，Concentration 112mg/L)、1mL亚硒酸-钨酸盐混合溶液和30mL2.4mM的NaHCO3溶液在超净工作台中分别用无菌滤膜进行过滤除菌后加入到上述高压灭菌冷却的溶液中，配制成液体培养基。其中，亚硒酸-钨酸盐混合溶液配置方法：NaOH 0.5g，Na2SeO·5H2O 0.3mg，Na2WO4·2H2O 0.4mg，ddH2O 1L，溶解混匀，无菌滤膜过滤除菌，4℃备用。
2、筛选过程
(1)稀释菌液：将水样分别作100、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8和10-9的稀释处理；
(2)接种：将上述稀释的水样各取1mL加入到100mL的液体培养基中(接种量1％)；
(3)培养：将接种后的液体培养基放入30℃的恒温培养箱培养，转速为100rpm；14d后在显微镜下检查各种稀释液的等分液中细菌的生长情况，若出现小的针尖状菌落，并且显微镜下观察为杆状，无鞭毛，则判断为阳性富集培养基；
(4)纯化：从阳性富集培养基中，用接种环蘸取水样在富集培养的琼脂(液体培养基加入1.5％的琼脂)平板上划线，定期观察；待上述培养有小的针尖菌落长出，挑取单菌落后，并接种到添加含有Na2S2O3·5H2O(5g/L)，酚红(0.01g/L)的R2A培养基中；通过在R2A琼脂平板上反复划线使菌株得到纯化。
3、菌株的鉴定
将纯化后的菌株使用通用引物27F/1492R进行PCR扩增，扩增产物送至擎科生物进行测序。将测序成功的PCR产物，在NCBI进行比对，确定该菌株(SCR1)为红球菌属，并将其命名为Rhodococcus erythropolis SCR1，系统发育树见图3。
菌株Rhodococcus erythropolis SCR1于2023年09月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M 20231697。
实施例3净化水样实验
本实施例中所用菌株为实施例1筛选的菌株SCP1、实施例2筛选的菌株SCR1和假单胞菌模式菌株KT2440(购自中国微生物菌种保藏中心)。将上述菌株按照下述方式进行氨氮降解实验。
(1)取菌株SCP1活化的菌液1mL，进行10-4稀释。
(2)取菌株SCR1活化的菌液1mL，进行10-4稀释。
(3)分别取菌株SCP1和菌株KT2440活化的菌液各0.5mL，混合后对混合的菌液进行10-4稀释。
(4)分别取菌株SCP1和菌株SCR1活化的菌液各0.5mL，混合后对混合的菌液进行10-4稀释。
用于实验的水样取自山东省济南市南辛庄小清河高氨氮河水，将水样均分为4份，编号1～4，分别加入上述稀释后的菌液进行测试，具体见表1。
表1各组水样中菌液的添加情况
各组水样加入不同菌液后，经稀释，最终水样中菌液浓度为104CFU/mL，将各组水样放到28℃的恒温培养箱，定期观察。分别在培养的0天、2天、4天和6天后，使用湖州水沃丰生物科技有限公司生产的三合一快速检测试剂盒对水样进行氨氮含量、亚硝酸盐含量以及pH的测定，结果见图4-图14。
由图4-图6可知，刚添加完菌液后，各组水样的氨氮含量在1.2mg/L-1.5mg/L；2天后氨氮含量有所下降；4天后，SCP1+SCR1混合组，氨氮含量下降至0mg/L。
由图7-图10可知，刚添加完菌液后，各组水样的亚硝酸盐含量在0.2mg/L-0.25mg/L；2天后亚硝酸盐含量有所下降；4天后，SCP1+SCR1混合组亚硝酸盐含量变化明显；6天后，SCP1+SCR1混合组亚硝酸盐含量下降至0mg/L。
由图11-图14可知，刚添加完菌液后，各组水样的PH在7.0左右；2天后，除SCR1+KT2440混合组外，其他组略有上升；4天后，除SCR1+KT2440混合组外，其他组略微下降；6天后，各组水样pH维持在8.0左右。
综合分析，SCP1+SCR1混合组能够将水样中的氨氮含量和亚硝酸盐含量快速降解到0mg/L，且效果比其他组明显，同时，仅对水样的pH产生略微影响。因此，菌株SCP1和菌株SCR1能够复配用于净化水样中的氨氮和亚硝酸盐。
实施例4菌株复配净化养殖水体
本实施例在江苏省南通市如东县苴镇街道近海村的南美白对虾养殖基地内完成。
分别取实施例3中取菌株SCP1和菌株SCR1活化的菌液，按照表2中的体积配比配制成不同的复合菌剂。
表2复合菌剂中各菌液的配比
将配制的复合菌剂1-3按池塘池水总体积的十万分之一量分别均匀泼洒于3个试验池塘上(泼洒复合菌剂1记为1号塘，泼洒复合菌剂2记为2号塘，泼洒复合菌剂3记为3号塘)，以不泼洒复合菌剂的池塘为对照，一周后进行测试。
先在3个试验塘和对照池塘上分别取水体表面处、水表面下60cm处和底泥处的样品各1份，每份样品的取样量为500mL，检测4个池塘样品中氨氮的含量和亚硝酸盐的含量，三处样品取平均值得到各个试验塘的测试指标。结果如表3所示。
表3各个试验塘的测试指标
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Claims (10)
1.一种微生物组合，其特征在于，所述微生物组合由假单胞菌(Pseudomonas sp.)SCP1和红球菌(Rhodococcus erythropolis)SCR1构成；
所述假单胞菌SCP1的保藏编号为CCTCC NO：M 20231698；
所述红球菌SCR1的保藏编号为CCTCC NO：M 20231697。
2.如权利要求1所述的微生物组合在制备改良养殖用水的复合菌剂中的应用。
3.一种快速改良养殖用水的复合菌剂，其特征在于，包括权利要求1所述的微生物组合。
4.根据权利要求3所述的复合菌剂，其特征在于，在所述复合菌剂中，所述假单胞菌SCP1和所述红球菌SCR1的浓度比为(5-7)：(3-5)。
5.根据权利要求4所述的复合菌剂，其特征在于，所述复合菌剂由所述假单胞菌SCP1和所述红球菌SCR1的菌液按体积比(5-7)：(3-5)复配获得；所述假单胞菌SCP1和所述红球菌SCR1的菌液浓度均为108CFU/mL。
6.如权利要求3-5任一项所述的复合菌剂在快速改良养殖用水中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述改良包括降解水体中的氨氮和亚硝酸盐。
8.一种快速改良养殖用水的方法，其特征在于，包括将权利要求3-5任一项所述的复合菌剂施用于养殖用水中，使水体得到改良的步骤。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述复合菌剂的使用量为所述养殖用水总体积的十万分之一。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述改良包括降解水体中的氨氮和亚硝酸盐。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311803578.6A CN117551588B (zh) | 2023-12-26 | 2023-12-26 | 一种快速改良养殖用水的复合菌剂及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311803578.6A CN117551588B (zh) | 2023-12-26 | 2023-12-26 | 一种快速改良养殖用水的复合菌剂及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117551588A true CN117551588A (zh) | 2024-02-13 |
| CN117551588B CN117551588B (zh) | 2024-05-14 |
Family
ID=89820696
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311803578.6A Active CN117551588B (zh) | 2023-12-26 | 2023-12-26 | 一种快速改良养殖用水的复合菌剂及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117551588B (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102676432A (zh) * | 2012-05-16 | 2012-09-19 | 天津市农业生物技术研究中心 | 一种高效水体脱氮施氏假单胞菌db-33及其培养方法 |
| CN111018130A (zh) * | 2019-12-11 | 2020-04-17 | 福建大北农水产科技有限公司 | 一种水产微生态制剂及其在降低养殖水体中氨氮和亚硝酸盐的应用 |
| CN111793575A (zh) * | 2020-06-03 | 2020-10-20 | 惠州学院 | 一种复合菌剂及其在水产养殖中的应用 |
-
2023
- 2023-12-26 CN CN202311803578.6A patent/CN117551588B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102676432A (zh) * | 2012-05-16 | 2012-09-19 | 天津市农业生物技术研究中心 | 一种高效水体脱氮施氏假单胞菌db-33及其培养方法 |
| CN111018130A (zh) * | 2019-12-11 | 2020-04-17 | 福建大北农水产科技有限公司 | 一种水产微生态制剂及其在降低养殖水体中氨氮和亚硝酸盐的应用 |
| CN111793575A (zh) * | 2020-06-03 | 2020-10-20 | 惠州学院 | 一种复合菌剂及其在水产养殖中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN117551588B (zh) | 2024-05-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP3095855B1 (en) | Efficient bottom treatment bacillus, composite bottom treatment inoculant prepared using same and applications thereof | |
| CN105255782B (zh) | 对六价铬具有还原能力的纤维菌及用途 | |
| CN109971691B (zh) | 一株富硒细菌及其分离方法 | |
| CN110846254A (zh) | 用于脱氮的复合微生物菌剂及其制备方法和应用 | |
| CN114045239B (zh) | 具有二甲基乙酰胺降解能力的泛养副球菌ybh-7及应用 | |
| CN114107092B (zh) | 一株降解邻苯二甲酸酯的植物内生菌戈登氏菌l191及其应用 | |
| CN108676763B (zh) | 一种高耐锑卡氏变形杆菌dshn0704及其分离筛选方法和应用 | |
| CN107446842A (zh) | 一株枯草芽孢杆菌及其在净化水质中的应用 | |
| CN112723558B (zh) | 脱氮副球菌在用于制备降解垃圾渗滤液中氨态氮的微生物菌剂中的应用 | |
| US11124438B2 (en) | Alcaligenes faecalis for degrading ethylene oxide | |
| CN117106614B (zh) | 一株根际细菌青岛假单胞菌yim b08402和其微生物菌剂及应用 | |
| CN102321548B (zh) | 根瘤杆菌t3及其在微生物降解硫化氢中的应用 | |
| CN113980851B (zh) | 具有二甲基乙酰胺降解能力的副球菌ybh-x及应用 | |
| CN117551588B (zh) | 一种快速改良养殖用水的复合菌剂及其应用 | |
| CN112779189B (zh) | 一株土壤变形杆菌及其应用 | |
| CN113862180B (zh) | 一种恶臭假单胞菌及其在降解白酒废水中总氮的应用 | |
| CN116064307A (zh) | 一种高效解磷的伯克霍尔德氏菌菌株及其应用 | |
| US20210221720A1 (en) | Pathogenic bacteria and method for degrading ethylene oxide | |
| CN115161222A (zh) | 枯草芽孢杆菌jzxj-7菌株在降解生物胺中的应用 | |
| WO2021147260A1 (en) | Alcaligenes faecalis for degrading ethylene oxide and uses thereof | |
| CN107841476B (zh) | 砷氧化菌在三价砷污染稻田土壤定殖的应用 | |
| CN113789275A (zh) | 一株Kosakonia oryzae CH-5菌株及其应用 | |
| CN115449492B (zh) | 一株高效降解n,n-二甲基甲酰胺的耐盐芽孢杆菌及其应用 | |
| CN116590195B (zh) | 假黄单胞菌、微生物制剂以及它们的应用 | |
| CN110261267B (zh) | 一种渔用光合细菌制剂产品的检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |