CN117551061A - 一种千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A及其制备方法与应用 - Google Patents

一种千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A及其制备方法与应用 Download PDF

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CN117551061A CN202311478082.6A CN202311478082A CN117551061A CN 117551061 A CN117551061 A CN 117551061A CN 202311478082 A CN202311478082 A CN 202311478082A CN 117551061 A CN117551061 A CN 117551061A
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Abstract

本发明提供一种千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A，其结构式如式(1)所示；本发明还提供了千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A的制备方法，本发明的制备方法简单、易操作、设备价格低廉、使用的溶剂环境友好、便于工业放大生产；本发明的Euplathylrin A化合物及其药物组合物能够有效促进人瘢痕成纤维细胞凋亡，适用于研制抗瘢痕增生药物。

Description

一种千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A及其制备方法 与应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别是涉及一种千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A的制备方法与应用。
背景技术
千金子二萜类化合物是一类具有潜在药理活性的天然产物，广泛存在于植物中，尤其是在大戟科植物中。这些化合物已被广泛研究，展示出许多生物活性，如抗炎、抗肿瘤、抗菌和抗寄生虫等。
现有技术中已报道了许多千金子二萜类化合物的制备方法，这些方法通常涉及从植物中提取原料，如千金子科植物的根、茎、叶或根茎，并进行提取、分离和纯化步骤。随后，通过化学合成或半合成方法对提取得到的化合物进行结构修饰，以获得目标化合物。尽管已经取得了一些进展，但现有技术在千金子二萜类化合物的制备和应用方面仍存在一些缺陷，比如：一、天然成分的获得，提取和分离方法的复杂性：大戟科植物中的千金子二萜类化合物通常存在于低浓度中，因此从植物中提取和分离这些化合物是一项具有挑战性的任务，现有的提取方法可能需要复杂的操作步骤和高成本的试剂，导致制备过程变得复杂和昂贵；二、结构修饰的难度：在现有技术中，对千金子二萜类化合物进行结构修饰通常需要进行多步的化学合成或半合成过程，这些过程可能具有低产率、低选择性和复杂的合成步骤，限制了目标化合物的产量和质量；三、生物活性的限制：尽管千金子二萜类化合物显示出多种生物活性，但在现有技术中，未报道治疗瘢痕增生的药理活性。
发明内容
鉴于以上技术问题，本发明的目的在于提供一种千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A及其制备方法与应用。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A，其结构式如式(1)所示：
本发明还提供一种如上所述的千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A的制备方法，包括以下步骤：
1)以千金子为原料，采用有机溶剂进行提取，除去溶剂，得粗提物；
2)将粗提物分散于水中，采用石油醚和乙酸乙酯分别进行萃取，得到石油醚提取物和乙酸乙酯提取物；
3)将石油醚提取物经MCI凝胶柱分离，以体积比为5:5～10:0的甲醇/水梯度洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为8:2～9:1的甲醇/水洗脱剂下的馏分Fr.VI；
4)馏分Fr.VI经硅胶柱分离，以体积比为5:1～1:5的石油醚/乙酸乙酯梯度洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为5:4～3:5的石油醚/乙酸乙酯洗脱剂下的馏分Fr.VIb；
5)馏分Fr.VIb经RP-C18柱分离，以体积比为6.5:3.5～8:2的甲醇/水梯度洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为7.5:2.5～8:2的甲醇/水洗脱剂下的馏分Fr.VIb2；
6)馏分Fr.VIb2经半制备HPLC色谱纯化，得到化合物Euplathylrin A。
本发明的一些实施方式中，步骤6)中，所述经半制备HPLC色谱纯化采用EclipseXDB-C18柱。进一步地，所述纯化采用流动相为7.5:2.5～8:2的甲醇/水。所述流动相的流速为3mL/min。
本发明还提供千金子在制备如上所述的千金子烷型二萜类化合物EuplathylrinA中的用途。
本发明还提供一种药物组合物，包括如上所述的千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体和/或赋形剂。
本发明还提供一种如上所述的千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A或如上所述的药物组合物在制备抗瘢痕增生药物中的应用。
如上所述，本发明的千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A的制备方法与应用，具有以下有益效果：
本发明以千金子为原料，首次提取获得千金子烷型二萜类化合物EuplathylrinA。
本发明的千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A的制备方法简单，易操作，设备价格低廉，使用的溶剂环境友好，便于工业放大生产。
本发明的千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A能够有效促进人瘢痕成纤维细胞凋亡，有望作为治疗瘢痕增生的潜在药物。
附图说明
图1显示为化合物Euplathylrin A提取分离流程图。
图2显示为化合物Euplathylrin A的单晶结构图。
图3显示为化合物Euplathylrin A的核磁氢谱。
图4显示为化合物Euplathylrin A的核磁碳谱。
图5显示为化合物Euplathylrin A的二维H-H COSY谱图。
图6显示为化合物Euplathylrin A的NOESY谱图。
图7显示为化合物Euplathylrin A的HSQC谱图。
图8显示为化合物Euplathylrin A的HMBC谱图。
图9显示为化合物Euplathylrin A的质谱图。
图10显示为化合物Euplathylrin A的IR谱图。
图11显示为Euplathylrin A作用下的AO/PI双染荧光显微图；其中，绿色荧光代表活细胞，红色荧光代表死细胞，橙色代表早凋细胞。
图12显示为Euplathylrin A作用下的细胞周期时相图。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
请参阅附图。需要说明的是，本实施例中所提供的图示仅以示意方式说明本发明的基本构想，遂图式中仅显示与本发明中有关的组件而非按照实际实施时的组件数目、形状及尺寸绘制，其实际实施时各组件的型态、数量及比例可为一种随意的改变，且其组件布局型态也可能更为复杂。
本发明第一方面提供一种千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A，所述千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A的结构式如式(1)所示
本发明第二方面提供一种如上所述的千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A的制备方法，包括以下步骤：
1)以千金子为原料，采用有机溶剂进行提取，除去溶剂，得粗提物；
2)将粗提物分散于水中，采用石油醚和乙酸乙酯分别进行萃取，得到石油醚提取物和乙酸乙酯提取物；
3)将石油醚提取物经MCI凝胶柱分离，以体积比为5:5～10:0的甲醇/水梯度洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为8:2～9:1的甲醇/水洗脱剂下的馏分Fr.VI；
4)馏分Fr.VI经硅胶柱分离，以体积比为5:1～1:5的石油醚/乙酸乙酯梯度洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为5:4～3:5的石油醚/乙酸乙酯洗脱剂下的馏分Fr.VIb；
5)馏分Fr.VIb经RP-C18柱分离，以体积比为6.5:3.5～8:2的甲醇/水梯度洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为7.5:2.5～8:2的甲醇/水洗脱剂下的馏分Fr.VIb2；
6)馏分Fr.VIb2经半制备HPLC色谱纯化，得到化合物Euplathylrin A。
其中，步骤1)中，所述有机溶剂为乙醇溶液。在本发明优选的实施方式中，所述有机溶剂为95％的乙醇溶液。
在本发明优选的实施方式中，步骤1)中所述提取采用渗漉提取法。
步骤1)中，所述千金子具体为大戟科植物续随子的干燥成熟种子。续随子Euphorbia lathylris L。
步骤3)中，所述梯度洗脱为用体积比的5:5、6:4、7:3、8:2、9:1、10:0的甲醇/水依次洗脱。
步骤3)中将石油醚提取物经MCI凝胶柱分离，依次采用以体积比为5:5、6:4、7:3、8:2、9:1、10:0的MeOH-H2O为洗脱剂梯度洗脱，可以收集到馏分Fr.I、Fr.II、Fr.III、Fr.IV、Fr.V和Fr.VI；其中馏分Fr.VI是在体积比为8:2、9:1的甲醇/水洗脱剂下的收集得到的。
步骤4)中，所述梯度洗脱为用体积比5:1、5:2、5:3、5:4、5:5、3:5、1:5的石油醚/乙酸乙酯依次洗脱。
步骤4)中，所述馏分Fr.VIb为体积比为5:4、5:5、3:5的石油醚/乙酸乙酯洗脱剂下的洗脱液。
步骤4)中，将馏分Fr.VI经硅胶柱分离，依次采用以体积比为5:1、5:2、5:3、5:4、5:5、3:5、1:5的石油醚/乙酸乙酯梯度洗脱，可以收集到馏分Fr.VIa、Fr.VIb和Fr.Vic；其中馏分Fr.VIb是在体积比为5:4、5:5、3:5的石油醚/乙酸乙酯洗脱剂下的收集得到的。
步骤5)中，所述梯度洗脱为用体积比6.5:3.5、7:3、7.5:2.5、8:2的甲醇/水依次洗脱。
步骤5)中，所述馏分Fr.VIb2为体积比为7.5:2.5～8:2的甲醇/水洗脱剂下的洗脱液。
步骤5)中，将馏分Fr.VIb经RP-C18柱分离，依次采用以体积比为6.5:3.5、7:3、7.5:2.5、8:2的甲醇/水梯度洗脱，可以收集到馏分Fr.VIb1和Fr.VIb2；其中馏分Fr.VIb2是在体积比为7.5:2.5～8:2的甲醇/水洗脱剂下的收集得到的；
步骤6)中，所述经半制备HPLC色谱纯化采用Eclipse XDB-C18柱。
步骤6)中，所述纯化采用流动相为7.5:2.5～8:2的MeOH/H2O，例如为7.5:2.5、7.6:2.4、7.7:2.3、7.8:2.2、7.9:2.1或8:2，流动相的流速为3mL/min。在本发明优选的实施方式中，流动相MeOH/H2O的比例为8:2。
本发明第三方面提供千金子在制备如上所述的千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A中的用途。
本发明第四方面提供一种药物组合物，包括如上所述的千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体和/或赋形剂。
本发明中，所述“药学上可接受的”是指当分子本体和组合物适当地给予动物或人时，它们不会产生不利的、过敏的或其它不良反应。
“药学上可接受的载体或赋形剂”应当与千金子烷型二萜类化合物EuplathylrinA相容，即能与其共混而不会在通常情况下大幅度降低药物组合物的效果。可作为药学上可接受的载体或赋形剂的一些物质的具体例子是糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和土豆淀粉；纤维素及其衍生物，如甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素；西黄蓍胶粉末；麦芽；明胶；滑石；固体润滑剂，如硬脂酸和硬脂酸镁；硫酸钙；植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油；多元醇，如丙二醉、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；海藻酸；乳化剂，如Tween；润湿剂，如月桂基硫酸钠；着色剂；调味剂；压片剂、稳定剂；抗氧化剂；防腐剂；无热原水；等渗盐溶液；和磷酸盐缓冲液等。这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味。
本发明中，除非特别说明，药物剂型并无特别限定，可以被制成针剂、口服液、片剂、胶囊、滴丸、喷剂等剂型，可通过常规方法进行制备。药物剂型的选择应与给药方式相匹配。
本发明第五方面提供如上所述的千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A或如上所述的药物组合物在制备抗瘢痕增生药物中的应用。
下述实施例中，除另外说明，提取用95％乙醇为工业试剂；石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇等均为分析纯，均由国药集团化学试剂有限公司购入；高效液相使用的甲醇为色谱纯，购买自Fisher Scientific公司；高效液相使用的水采用娃哈哈纯净水；高效液相色谱仪(Agilent Technologies 1260series)；半制备型高效液相色谱仪(AgilentTechnologies 1260series)；旋转蒸发仪(IKA公司)；GF254薄层层析硅胶(青岛海洋化工公司)；柱层层析硅胶(烟台江友硅胶开发有限公司)；自动接收器(上海沪西公司)。
实施例1
千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A的制备
1)以4kg千金子为原料，采用95％的乙醇进行提取(3×4L)，减压蒸馏除去溶剂，得粗提物；
2)将粗提物分散于水中，采用石油醚(3×1L)和乙酸乙酯(3×1L)分别进行萃取，得到石油醚提取物和乙酸乙酯提取物；
3)将60g石油醚提取物经MCI凝胶柱分离，以体积比为5:5～10:0的MeOH-H2O为洗脱剂梯度洗脱(梯度洗脱依次采用体积比5:5、6:4、7:3、8:2、9:1、10:0的MeOH-H2O)，得到馏分Fr.I、Fr.II、Fr.III、Fr.IV、Fr.V和Fr.VI；收集馏分Fr.VI，馏分Fr.VI为体积比为8:2、9:1的甲醇/水洗脱剂下的洗脱液；
4)馏分Fr.VI经硅胶柱分离，以体积比为5:1～1:5的石油醚/乙酸乙酯为洗脱剂梯度洗脱(梯度洗脱依次采用体积比5:1、5:2、5:3、5:4、5:5、3:5、1:5的石油醚/乙酸乙酯)，得到馏分Fr.VIa、Fr.VIb和Fr.VIc；收集馏分Fr.VIb，馏分Fr.VIb为体积比为5:5的石油醚/乙酸乙酯洗脱剂下的洗脱液；
5)馏分Fr.VIb经RP-C18柱分离，以体积比为6.5:3.5～8:2的的MeOH-H2O为洗脱剂梯度洗脱(梯度洗脱依次采用体积比6.5:3.5、7:3、7.5:2.5、8:2的甲醇/水)，得到馏分Fr.VIb1和Fr.VIb2；收集馏分Fr.VIb2，Fr.VIb2为体积比为7.5:2.5、8:2的甲醇/水洗脱剂下的洗脱液；
6)馏分Fr.VIb2经半制备HPLC色谱(Eclipse XDB-C18柱)纯化，流动相为8:2的MeOH/H2O，流速为3mL/min，得到化合物Euplathylrin A，为白色无定型粉末。如式(1)所示化合物：
式(1)化合物的结构鉴定数据如下：
Euplathylrin A,colorless crystals；mp 96-100℃；[α]25 D+70.5(c 0.3,MeOH)；UV(MeCN)λmax(logε)194(3.12)nm,222(3.42)；CD(c 1.0×10-4M,MeOH)λmax(Δε)234(Δε-2.6),306(Δε+1.8)nm；IR(KBr)νmax 2956,2923,2854,1692,1456,1021,801cm-1；1H and 13CNMR data,see Table 1；HRESIMS ion at m/z 539.2659[M+H]+(calcd for C31H39O8,539.2645)
表1化合物1的氢谱(400MHz)、碳谱(100MHz)核磁数据(CDCl3，δC in ppm,J in Hz)
式(1)化合物的分子式为C31H38O8，由附图9的HRESIMS离子在m/z 539.2659[M+H]+(计算为C31H39O8，539.2645)确定，相当于13个不饱和度。附图10的红外光谱显示了羰基的吸收带(1733cm-1)。附图3的1H NMR谱显示了六个甲基的信号[δH 2.16(3H，s)；2.06(3H，s)；1.91(3H，d，J＝1.2Hz)；1.20(3H，s)；1.09(3H，s)，和1.01(3H，d，J＝6.7Hz)]，一个烯烃质子δH 6.95(1H，d，J＝11.1Hz)，芳香族信号[δH 8.09(2H，dd，J＝7.8，1.2Hz)；7.60(2H，t，J＝7.3Hz)；7.48(2H，t，J＝7.8Hz)]和一系列的脂肪族亚甲基或甲基多胞胎。附图4的13C核磁共振谱，结合DEPT实验，发现31个碳，可归于一个酮基(δC194.1)，一个苯甲酰基(δC 165.1,130.2,129.6×2,128.5×2,131.1)，两个羰基(δC 170.8和169.2)，一个三取代的双键(δC143.8和134.9)，六个甲基，六个sp3甲基(包括两个含氧)，四个sp3亚甲基(包括一个含氧)，和三个sp3季碳(包括两个含氧)。由于13个不饱和度中的9个由一个苯甲酰基团、两个羰基、一个酮和一个双键构成，其余的不饱和度要求式(1)化合物是四环系统。由于有共同的生源关系，上述信息与lathyrane二萜类3-benzoy-15-acety-jolkinol-5’,6’-oxide(2)的信息非常相似，3-benzoy-15-acety-jolkinol-5’,6’-oxide(2)的结构式如式(2)所示：
与化合物2相比，化合物1的主要差异是由于乙酰基的额外信号[δC 170.8(C)，20.8(CH3)；δH 1.09(s)]，表明化合物1是化合物2的乙酰化衍生物。附图5～8通过对其二维核磁共振数据的详细解释，进一步确定了化合物1的平面结构。化合物1的相对构型是在NOESY实验的基础上建立的。H-11/CH3-20的关键NOESY相互作用，将Δ12(13)双键定为E配置。在NOESY光谱中，H-9/H-11的相关关系表明，二甲基环丙烷分子是顺向的。因此，H-3/CH3-16、H-3/H-4和H-9/CH2-17的NOE相关关系将H-3、H-4、H3-16和CH2-17定为α。包括化合物1的绝对构型(AC)的结构通过使用Cu Ka辐射的反常散射的单晶X射线晶体分析得到确认，如附图2。因此，Euplathylrin A的结构被确定为如式(1)所示的化合物。
实施例2
实施例1制备的千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A的抗瘢痕增生活性研究
1、原代人瘢痕成纤维细胞的分离
取新鲜的瘢痕组织，去除脂肪后，分离表皮和真皮，真皮部分剪成长条状，在含有5％双抗的DMEM中清洗2-3遍，再剪切成0.5～1.0mm3大小的组织块，转移至25cm2的培养瓶中，倒置放在5％ CO2，37℃的细胞培养箱中培养4h后，每瓶加入1mL的DMEM培养液(含1％双抗，20％的FBS)，正置在培养箱中，继续培养。此后，每隔2天换液一次，每次每瓶加入5mL的DMEM培养液(含1％双抗，10％的FBS)培养，培养5～7天，成纤维细胞可从瘢痕组织中游离出来，待其长满至培养瓶的80％时，利用成纤维细胞对胰酶的敏感性分离纯化，第2-5代细胞用于后续实验。
2、MTT法检测化合物Euplathylrin A抑制原代人瘢痕成纤维细胞增殖的活性
将原代人瘢痕成纤维细胞以5×103个/mL密度接种100μL于96孔培养板中，在37℃，5％CO2，90％ RH的条件下培养24h；实验组加入不同浓度的Euplathylrin A(浓度分别为40、20、10、7.5、5、3.75、2.5μM)，空白对照组加不含药物的培养液，阴性对照组加入100μLDMSO溶液，设置三个复孔，置于37℃，5％CO2，90％ RH的条件下培养24h；然后加入20μL的5mg/mL MTT溶液，孵育4h，平板离心，弃去上清，加入150μL DMSO溶解MTT结晶，平板振荡数分钟后，以酶联免疫检测仪在570nm波长测吸光度OD值，计算抑制率。以化合物浓度为横坐标，抑制率为纵坐标，采用GraphPad Prism 8软件计算IC50，最后拟合得到Euplathylrin A的IC50为6.33μM。
3、Euplathylrin A促人瘢痕成纤维细胞凋亡研究
采用AO/PI染色法(吖啶橙/和碘化丙锭染色法)检测加入Euplathylrin A后原代人瘢痕成纤维细胞的凋亡情况。原代人瘢痕成纤维细胞以3×104个细胞每孔的密度接种于6孔板，采用胎牛血清的DMEM培养液培养24h，弃去培养液，用PBS洗涤两次，实验组加入含不同浓度梯度Euplathylrin A(1.58、3.16、6.33、12.66μM)的无血清培养液，对照组加入350μM的积雪草苷无血清培养液，空白组加入无血清培养液，在37℃孵育培养24h。孵育结束后，弃去培养液，用PBS洗2次以充分洗涤除去培养液，加入200μM的AO和PI染料各100μL进行染色，避光室温孵育5min，吸弃染料，用PBS洗涤两次，加入200μL的PBS，在荧光显微镜200倍镜下观察拍照，结果如附图11所示，Euplathylrin A浓度为6.33μM和12.66μM时，大部分细胞发出橙色或红色荧光，说明中高浓度的人瘢痕成纤维细胞凋亡明显，且较积雪草苷凋亡明显。
4、Euplathylrin A抑制人瘢痕成纤维细胞增殖的细胞周期研究
人瘢痕成纤维细胞以3×104个细胞每孔的密度接种于6孔板，采用含血清的DMEM培养液培养24h，弃去培养液，用PBS洗涤两次，实验组加入含不同浓度梯度Euplathylrin A(1.58、3.16、6.33、12.66μM)的无血清培养液，对照组加入350μM的积雪草苷无血清培养液，空白组加入无血清培养液，在37℃孵育培养24h。孵育结束后，弃去培养液，用不含EDTA的胰酶消化细胞并收集，室温1000rpm离心5min，再用预冷的PBS悬浮细胞并计数，调整细胞浓度为1×106个/mL，取100μL细胞悬液至1.5mL离心管离心，弃去上清后加入1mL预冷的70％乙醇溶液4℃固定2h，再以1000rpm离心5min，弃去上清，加入1mL预冷的PBS溶液重悬，再次离心后加入500μL的PI染色液，室温孵育15min后在流式细胞仪上检测。结果如附图12显示，Euplathylrin A在中低浓度时将人瘢痕成纤维细胞阻滞在细胞分裂的G2/M期，在高浓度时将人瘢痕成纤维细胞阻滞在细胞分裂的S期。
综上所述，本发明以大戟科植物续随子的成熟种子千金子为原料首次提取获得千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A，且提取方法简单、易操作、设备价格低廉、使用的溶剂环境友好、便于工业放大生产，本发明的千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A能够有效促进人瘢痕成纤维细胞凋亡，有望作为治疗瘢痕增生的潜在药物。所以，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (10)

1.一种千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A，其特征在于，所述千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A的结构式如式(1)所示：
2.根据权利要求1所述的千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)以千金子为原料，采用有机溶剂进行提取，除去溶剂，得粗提物；
2)将粗提物分散于水中，采用石油醚和乙酸乙酯分别进行萃取，得到石油醚提取物和乙酸乙酯提取物；
3)将石油醚提取物经MCI凝胶柱分离，以体积比为5:5～10:0的甲醇/水梯度洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为8:2～9:1的甲醇/水洗脱剂下的馏分Fr.VI；
4)馏分Fr.VI经硅胶柱分离，以体积比为5:1～1:5的石油醚/乙酸乙酯梯度洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为5:4～3:5的石油醚/乙酸乙酯洗脱剂下的馏分Fr.VIb；
5)馏分Fr.VIb经RP-C18柱分离，以体积比为6.5:3.5～8:2的甲醇/水梯度洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为7.5:2.5～8:2的甲醇/水洗脱剂下的馏分Fr.VIb2；
6)馏分Fr.VIb2经半制备HPLC色谱纯化，得到化合物Euplathylrin A。
3.根据权利要求2所述的千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述有机溶剂为乙醇溶液。
4.根据权利要求2所述的千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A的制备方法，其特征在于，步骤3)中所述梯度洗脱为用体积比的5:5、6:4、7:3、8:2、9:1、10:0的甲醇/水依次洗脱；和/或，步骤4)中所述梯度洗脱为用体积比5:1、5:2、5:3、5:4、5:5、3:5、1:5的石油醚/乙酸乙酯依次洗脱；
和/或，步骤4)中所述馏分Fr.VIb为体积比为5:4、5:5、3:5的石油醚/乙酸乙酯洗脱剂下的洗脱液；
和/或，步骤5)中所述梯度洗脱为用体积比6.5:3.5、7:3、7.5:2.5、8:2的甲醇/水依次洗脱；和/或，步骤5)中所述馏分Fr.VIb2为体积比为7.5:2.5～8:2的甲醇/水洗脱剂下的洗脱液。
5.根据权利要求2所述的千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A的制备方法，其特征在于，步骤6)中，所述经半制备HPLC色谱纯化采用Eclipse XDB-C18柱。
6.根据权利要求2所述的千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A的制备方法，其特征在于，步骤6)中，所述纯化采用流动相为7.5:2.5～8:2的甲醇/水。
7.根据权利要求6所述的千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A的制备方法，其特征在于，所述流动相的流速为3mL/min。
8.千金子在制备如权利要求1所述的千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A中的用途。
9.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求1所述的千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体和/或赋形剂。
10.权利要求1所述的千金子烷型二萜类化合物Euplathylrin A或权利要求9所述的药物组合物在制备抗瘢痕增生药物中的应用。
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