CN117545777A - Il-23r特异性抗原结合剂和其用途 - Google Patents

Il-23r特异性抗原结合剂和其用途 Download PDF

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M·德拉罗萨
D·芬纳德
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Abstract

IL23R过表达已被描述为参与自身免疫疾病和慢性炎症的发生和维持的致病性炎症细胞的共同特征。本公开涉及针对I L‑23R的新型抗原结合剂、包含所述抗原结合剂的组合物以及所述抗原结合剂的用途。本公开还涉及包含所述抗原结合剂的融合蛋白，例如嵌合抗原受体。

Description

IL-23R特异性抗原结合剂和其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2021年6月25日提交的美国专利申请63/214,950和欧洲专利申请EP21181801.8的优先权。两个优先权申请的公开内容均以引用的方式整体并入本文中。
序列表
本申请含有序列表，所述序列表已以ASCII格式以电子方式提交并且特此以引用的方式整体并入。所述ASCII副本创建于2022年6月24日，命名为025297_WO038_SL.txt并且大小为48,578字节。
发明背景
白细胞介素-23(IL-23)是IL-12细胞因子家族的成员，由两个亚基p19和p40构成。IL-23受体(IL-23R)由IL-23Rα亚基与IL-12Rβ1亚基复合而成，IL-12Rβ1亚基是IL-12受体的常见亚基并与酪氨酸激酶2(Tyk2)相互作用。
IL-23R主要在免疫细胞，特别是T细胞(例如Th17和γδT细胞)、巨噬细胞、树突状细胞和NK细胞上表达(Duvallet等人,Ann Med.(2011)43(7):503-11)。IL-23/IL-23R信号传导途径已被描述为对于促进分泌IL-17的免疫细胞(特别是CD4+Th17细胞和γδT细胞)的增殖和分化至关重要。IL23R过表达已被描述为参与自身免疫疾病和慢性炎症的发生和维持的致病性炎症细胞的共同特征。IL-23R的细胞表面表达是由IL-23暴露诱导的，并且取决于炎症水平。
发明概述
本文的发明人基于在炎症部位过表达的IL-23R的结合，开发了一种在炎症部位激活免疫细胞的新型工具。更具体地，发明人在本文中公开了能够结合于IL-23R的新型抗体。确切地说，发明人在本文中公开了能够以高亲和力结合于IL-23R的新型抗体。有利地，已发现本发明的IL-23R结合抗体能够结合于人类和小鼠IL-23R两者。将所述抗体的抗原结合部分包含于免疫细胞的细胞表面上表达的嵌合抗原受体(CAR)中允许在结合于IL-23R后在炎症位点激活这些细胞。本发明人公开了所述抗原结合部分的稳定信号传导和低背景激活。不受理论束缚，本发明人假设本公开的CAR的优点可能部分在于其能够在表达它的免疫细胞(例如T细胞)中引起较少的基底信号传导(tonic signaling)，从而提高细胞的治疗潜力。因此，这些工程化免疫细胞将成为治疗自身免疫和/或炎症性疾病或病症的有价值的治疗工具。
在一个方面，本公开提供一种分离的抗IL-23受体(IL-23R)抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或片段的重链可变区(VH)包含分别包含SEQ ID NO:1-3的互补决定区(HCDR)1-3；或具有与SEQ ID NO:1-3之一共有至少约90％同一性的氨基酸序列的任何CDR；并且抗体或片段的轻链可变区(VL)包含分别包含SEQ ID NO:4-6的互补决定区(LCDR)1-3；或具有与SEQ ID NO:4-6之一共有至少约90％同一性的氨基酸序列的任何CDR。在一个方面，本公开提供一种分离的抗IL-23受体(IL-23R)抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或片段的重链可变区(VH)包含互补决定区(HCDR)1-3，其具有分别与SEQ ID NO:1-3之一共有至少约90％同一性的氨基酸序列；并且抗体或片段的轻链可变区(VL)包含互补决定区(LCDR)1-3，其具有分别与SEQ ID NO:4-6之一共有至少约90％同一性的氨基酸序列。在一个方面，本公开提供一种分离的抗IL-23受体(IL-23R)抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或片段的重链可变区(VH)包含分别包含SEQ ID NO:1-3的互补决定区(HCDR)1-3；并且抗体或片段的轻链可变区(VL)包含分别包含SEQ ID NO:4-6的互补决定区(LCDR)1-3。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段能够结合小鼠和人类IL-23R。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段能够以小于40nM的EC50结合于人类IL-23Rα亚基。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段能够以小于60nM的EC50结合于小鼠IL-23Rα亚基。在一些实施方案中，所述VH包含SEQ ID NO:7或与其至少约90％同一的氨基酸序列，并且所述VL包含SEQ ID NO:8或与其至少约90％同一的任何氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH包含SEQ ID NO:7，并且所述VL包含SEQ ID NO:8。在某些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段是包含SEQ ID NO:15或与其至少约95％同一的任何氨基酸序列的scFv。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段是包含SEQ ID NO:15的scFv。
本公开还提供了嵌合抗原受体(CAR)，其含有包含本文所述的抗IL-23R抗体或其抗原结合片段的胞外域；跨膜域；和包含胞内信号传导域的细胞质域。在一些实施方案中，CAR进一步包含前导序列。在一些实施方案中，胞外域含有包含SEQ ID NO:15的scFv。在一些实施方案中，胞内信号传导域包含人类CD28共刺激信号传导域(例如包含SEQ ID NO:32或与其至少约90％同一的氨基酸序列)，和/或人类CD3ζ域(例如包含SEQ ID NO:30或与其至少约90％同一的氨基酸序列)。在一些实施方案中，跨膜域来源于人类CD8(例如包含SEQID NO:22或与其至少约90％同一的氨基酸序列)。在某些实施方案中，CAR包含所述胞外域、所述跨膜域和/或所述胞内信号传导域。在一些实施方案中，前导序列包含来源于CD8前导序列的氨基酸序列，任选地包含SEQ ID NO:40或与其至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，前导序列包含来源于CD25前导序列的氨基酸序列，任选地包含SEQ ID NO:58或与其至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一的氨基酸序列。在特定实施方案中，CAR包含抗IL-23R scFv(例如包含SEQ ID NO:15)、来源于人类CD8的铰链域(例如包含SEQ ID NO:20)、来源于人类CD8的跨膜域(例如包含SEQ IDNO:22)、包含人类CD28共刺激信号传导域的胞内信号传导域(例如包含SEQ ID NO:32)、以及人类CD3ζ域(例如包含SEQ ID NO:30)。CAR还可包含标签和/或前导序列。在特定实施方案中，CAR包含抗IL-23R scFv(例如包含SEQ ID NO:15)、来源于人类CD8的铰链域(例如包含SEQ ID NO:20)、来源于人类CD8的跨膜域(例如包含SEQ ID NO:22)、包含人类CD28共刺激信号传导域的胞内信号传导域(例如包含SEQ ID NO:32)、以及人类CD3ζ域(例如包含SEQID NO:30)、以及来源于CD8的前导序列(例如包含SEQ ID NO:40)。在特定实施方案中，CAR包含抗IL-23R scFv(例如包含SEQ ID NO:15)、来源于人类CD8的铰链域(例如包含SEQ IDNO:20)、来源于人类CD8的跨膜域(例如包含SEQ ID NO:22)、包含人类CD28共刺激信号传导域的胞内信号传导域(例如包含SEQ ID NO:32)、以及人类CD3ζ域(例如包含SEQ ID NO:30)、以及来源于CD25的前导序列(例如包含SEQ ID NO:58)。
在一个方面，本公开提供了编码本文所述的抗体或抗原结合片段、或本文所述的CAR的核酸分子。本公开还提供了包含所述核酸分子的载体(例如表达载体)。此外，本公开提供了包含本文所述的所述核酸分子或载体的细胞。此外，本公开提供了包含本文所述的所述核酸分子或载体的免疫细胞。
本公开还提供了包含本文所述的细胞的组合物。本公开还提供了包含本文所述的免疫细胞的组合物。还提供了本文所述的细胞或细胞群，其用作药物。还提供了本文所述的免疫细胞或免疫细胞群，其用作药物。在一些实施方案中，细胞或免疫细胞群用于治疗有需要的受试者的由表达IL-23R的细胞介导的疾病或病症。在一些实施方案中，免疫细胞或免疫细胞群用于治疗有需要的受试者的由表达IL-23R的细胞介导的疾病或病症。本公开还提供了用于治疗有需要的受试者的病症或疾病的方法，其中所述方法包括向所述患者施用本文所述的细胞或本文所述的细胞群。本公开还提供了用于治疗有需要的受试者的病症或疾病的方法，其中所述方法包括向所述患者施用本文所述的免疫细胞或本文所述的免疫细胞群。所述疾病或病症可以是有需要的受试者的由表达IL-23R的细胞介导的疾病或病症。所述疾病或病症可以是自身免疫或炎症性疾病或病症。在某些实施方案中，所述疾病或病症是自身免疫或炎症性疾病或病症。所述疾病或病症可选自例如炎症性肠病(例如，克罗恩氏病(Crohn’s disease)或溃疡性结肠炎)、狼疮(例如全身性红斑狼疮)、关节炎(例如类风湿性关节炎或幼年特发性关节炎)、干燥综合征(Sjogren’s syndrome)、全身性关节炎、多发性硬化症、强直性脊柱炎、1型糖尿病、自身免疫性甲状腺病症、重症肌无力、银屑病、银屑病性关节炎、皮肤病和葡萄膜炎。在特定实施方案中，所述疾病是克罗恩氏病。
附图说明
图1代表本公开的抗IL-23R嵌合抗原受体(CAR)构建体(CAR#2)的示意图。抗IL23RCAR包含针对人类/小鼠(hm)IL-23R(αIL-23R；IL23RLamS4-G3)的scFv、铰链域(CD8接头)、来源于人类CD8的跨膜域(CD8 TM)、来源于人类CD28(CD28)和CD3ζ(CD3ζ或CD3Z)的胞内信号传导域。CAR构建体进一步包含GFP编码序列和HA标签编码序列。将此构建体与同样来源于靶向IL-23R的scFv 14-11-D07的CAR#1构建体进行比较。
图2A和2B是监测未转导细胞和在第一个扩增周期结束时用CAR#2或CAR#1转导的细胞的调节性T细胞(Treg)表型的图。Treg细胞用针对人类CD4、CD25、CD127和CTLA-4的抗体进行标记。为了检测FOXP3和Helios转录因子，进行核内标记(图2A)。Helios和FOXP3也在CAR接合11天后进行了评估(图2B)。误差线代表三个独立实验的平均值±SEM，总共包括五个Treg供体。
图3是显示在不存在激活(无Act)或通过CAR(通过添加IL-23R包被的珠粒；IL-23R)或通过TCR(通过用抗CD3和抗CD28包被的珠粒；3/28)刺激24小时后，来自三个独立实验、总共包括五个Treg供体的的Treg激活状态(通过CD69表达测量，对GFP表达进行门控)的图。
图4是显示表达CAR#2的Treg细胞表现出有效的CAR介导的抑制活性的图的组合。通过使用流式细胞术测量常规细胞(Tconv)的增殖来评估在不存在任何激活的情况下(虚线)或在IL23R诱导的CAR激活后(黑色曲线)或在TCR诱导的激活后(灰色曲线)由IL-23R-CAR介导的接触依赖性抑制。误差线代表三个独立实验的平均值±SEM，总共包括四个Treg供体。
图5代表本公开的抗IL-23R嵌合抗原受体(CAR)构建体的小鼠型式(mCAR#2b)的示意图。此小鼠型式包含针对人类/小鼠IL-23R的scFv(αIL-23R；IL23RLamS4-G3，其具有人类/小鼠交叉反应性)、来源于小鼠铰链的CD8跨膜域(mCD8 TM)、来源于小鼠CD28(mCD28)和小鼠CD3ζ(mCD3Z)的胞内域。将此构建体与以下各者进行比较：小鼠CAR#2a(mCAR#2a)，其对应于mCAR#2b，但具有小鼠CD28跨膜域(mCD28 TM)；和小鼠CAR#1(mCAR#1)，其来源于已公布的靶向IL-23R的scFv(14-11-D07)。
图6描绘了显示葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的炎症性肠病(IBD)的短模型的设计的示意图(图A)；以及显示肠系膜淋巴结(左)、结肠(中)和脾脏(右)中CTLA-4阳性Treg细胞的测量结果的一组图(图B)。
图7描绘了显示DSS诱导的IBD功效模型的设计的示意图(图A)；以及显示接受对照治疗(盐水)、未转导的Treg细胞(“Poly Treg”)或CAR-Treg细胞(“CAR#2b Treg”)的三组小鼠的疾病活动指数的测量结果的图(图B)。
图8描绘了显示CAR#2、CAR#3、CAR#4、CAR#5、CAR#6和CAR#7的一致转导效率(约40-50％)的图。结果是来自9个不同Treg供体的平均值±SEM。
图9描绘了显示CAR#2、CAR#3、CAR#4、CAR#5、CAR#6和CAR#7的CAR-Treg的一致的存活率和扩增倍数的图。结果是来自9个不同Treg供体的平均值±SEM。
图10描绘了显示CAR#2、CAR#3、CAR#4、CAR#5、CAR#6和CAR#7的CAR-Treg的激活的图。CAR#3在CAR激活后显示出最低的激活背景和最高的信噪比。如下地评估CAR Treg的激活：通过流式细胞术，通过经由使用抗CD3/抗CD28包被的珠粒(灰色)的TCR或经由使用IL-23R包被的珠粒或在细胞表面表达低水平IL-23R的Jurkat(Jurkat 572)或在细胞表面表达高水平IL-23R的Jurkat(Jurkat 573)的CAR诱导激活后24小时测量CAR Treg细胞表面处的CD69表达。结果是6个Treg供体的平均值±SEM。双向Anova和Sidak的多重比较检验。*＝0.05**＝0.01***＝0.001以及****＝0.0001。
图11描绘了显示CAR#2、CAR#3、CAR#4、CAR#5、CAR#6和CAR#7的CAR介导的抑制活性的图。通过流式细胞术通过测量共培养3天后Tconv增殖的抑制来评估CAR Treg介导的抑制。经由使用抗CD3/抗CD28包被的珠粒(黑色圆)的TCR或经由使用IL-23R包被的珠粒(黑色方块)或在细胞表面表达高水平(Jurkat 573，灰色方块)或低水平(Jurkat 572，白色方块)的IL-23R的2个Jurkat细胞系的CAR，在共培养前24小时激活CAR Treg。结果是4个独立实验(包括6个Treg供体)的平均值±SEM。双向Anova和Sidak的多重比较检验。*＝0.05**＝0.01。
图12显示CAR#2和CAR#3的CAR介导的抑制活性的曲线下面积(AUC)。AUC计算突显当Treg与在细胞表面表达高水平IL-23R的Jurkat(Jurkat 573)接合时，仅CAR#3显示出相同的CAR介导的抑制，而当CAR Treg与表达低水平的Jurkat(Jurkat 572)接合时，CAR介导的抑制较低。此示例性结果支持使用CAR#3减少脱靶效应。
图13描绘显示Treg表型的表型稳定性的图。通过流式细胞术测量主要Treg标志物(CD4、CD25、CD127、FoxP3、Helios和CTLA-4)。结果是9个不同的Treg供体的平均值±SEM。
图14描绘CAR#1和CAR#2与小鼠和人类IL23R结合的亲和力(EC50)结果。
图15显示用不同表达盒(PGK或EF1a启动子，+/-WPRE Mut6)产生的4种不同构建体(CAR#8、CAR#9、CAR#10和CAR#11)。
图16描绘显示使用本公开的各种CAR构建体的scFv信号传导的稳定性的图。
具体实施方式
定义
在本公开中，下列术语具有如下含义：
“约”当指可测量值(例如量、持续时间等)时，意在涵盖指定值的±20％或在一些情况下±10％、或在一些情况下±5％、或在一些情况下±1％、或在一些情况下±0.1％的变化，因为这样的变化适合于执行所公开的方法。
“亲和力”用于定义抗体-抗原复合物的强度。亲和力测量抗体上表位与抗原结合位点之间相互作用的强度。其可由亲和常数Ka或解离常数KD表示。当KD≤1μM，优选≤100nM或≤10nM时，抗体被称为与抗原特异性结合。KD可例如通过表面等离子体共振(SPR)(BIAcoreTM)或生物层干涉法来测量，例如使用来自IBISTechnologies的IBIS MX96 SPR系统、来自Bio-Rad的ProteOnTM XPR36SPR系统、或来自ForteBio的OctetTM系统。
如本文所用，“抗体”或“免疫球蛋白”是指包含通过二硫键互连的两条重链和两条轻链的四聚体。每条轻链由轻链可变域或区(VL)和轻链恒定区(CL)构成，并且可以是卡巴(κ)轻链或兰布达(λ)轻链。每条重链由重链可变域或区(VH)和重链恒定区(CH)构成。根据CH的氨基酸序列，抗体可分为不同的同种型：IgA、IgD、IgE、IgG或IgM。IgG和IgA同种型进一步分为亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。VH和VL配对形成单个抗原结合位点。在一个实施方案中，本公开的抗IL-23R抗体是IgG抗体。
如本文所用，“抗原结合片段”是指抗体的部分或区域或衍生物，其包含比完整抗体更少的氨基酸残基，但仍能够结合于整个抗体的抗原(例如IL-23R)。抗原结合片段涵盖但不限于单链抗体、Fv(例如scFv)、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab)'2、Fd、去岩藻糖基化抗体、双抗体、三抗体和四抗体。
“嵌合抗原受体”或“CAR”是指蛋白质，例如融合蛋白，当其在免疫细胞中表达时，为细胞提供针对靶配体的特异性并产生胞内信号。在一些实施方案中，CAR包含一组包括二聚化开关的多肽，所述二聚化开关在二聚化分子存在时可将多肽彼此偶联，例如可将配体结合域与胞内信号传导域偶联。在一个实施方案中，CAR在N末端包含任选的前导序列，其中前导序列在嵌合抗原受体细胞加工和定位至细胞膜的过程中被裂解。
“互补决定区”或“CDR”是指在重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)内发现的非连续抗原结合位点。给定CDR的精确氨基酸序列边界可使用许多众所周知的方案中的任一者来确定，包括Kabat等人,“Sequences of Proteins of Immunological Interest,”第5版(1991)Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(“Kabat”编号系统)、Al-Lazikani等人,JMB(1997)273:927-948(“Chothia”编号方案)或其组合。最近，已经开发并广泛采用了通用编号系统，即ImMunoGeneTics(IMGT)Information(Lefranc等人,Nucleic Acids Res.(1999)27:209-212)。在一个实施方案中，本文中的CDR边界是根据Kabat等人(1991)的定义。
“共刺激分子”是指T细胞上的同源结合配偶体，其与共刺激配体特异性结合，从而介导T细胞的共刺激反应，例如但不限于增殖。共刺激分子是除抗原受体或其配体之外的细胞表面分子，所述分子有助于有效的免疫反应。共刺激信号传导域可以是共刺激分子的胞内部分。共刺激分子可在以下蛋白质家族中表示：TNF受体蛋白、免疫球蛋白样蛋白、细胞因子受体、整合素、信号淋巴细胞激活分子(SLAM蛋白)和激活NK细胞受体。
“表位”是指位于抗体或其抗原结合片段所结合的一种或多种蛋白质上的氨基酸的特定排列。表位通常由诸如氨基酸或糖侧链的分子的化学活性表面基团组成，并且具有特定三维结构特征以及特定电荷特征。表位可以是线性的(或连续的)或构象的，即，涉及抗原的不同区域中的两个或更多个氨基酸序列，所述氨基酸序列不一定是连续的。
“表达载体”是指包含重组多核苷酸的载体，所述重组多核苷酸包含与待表达的核苷酸序列可操作地连接的表达控制序列。表达载体包含足够的用于表达的顺式作用元件；用于表达的其它元件可由宿主细胞或在体外表达系统中提供。表达载体包括本领域已知的所有那些，包括并有重组多核苷酸的粘粒、质粒(例如裸露的或包含在脂质体中)和病毒(例如慢病毒、逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)。
“Fc域”、“Fc部分”和“Fc区”是指抗体重链的C末端片段，例如人类γ重链的约氨基酸(aa)230至约氨基酸450或其在其它类型的抗体重链中的对应序列(例如人类抗体的α、δ、ε和μ)或其天然存在的同种异型。
“Fv”是含有完全抗原识别和抗原结合位点的最小抗体片段。此片段由紧密非共价结合的一个重链和一个轻链可变区域的二聚体组成。这两个域的折叠产生六个高变环(H链和L链各三个环)，其有助于抗原结合的氨基酸残基并赋予抗体抗原结合特异性。然而，即便是单一可变域(或是仅包含对抗原具有特异性的三个CDR的Fv的一半)也具有识别并结合抗原的能力，尽管其亲合力低于完整的结合位点。
当本文使用“同一性”或“同一”来描述两个或更多个氨基酸序列之间或两个或更多个核酸序列之间的关系时，是指所比较的序列之间的序列相关性程度。“同一性”测量具有由特定数学模型或计算机程序(即“算法”)处理的间隙比对(如果有)的两个或多个序列中较小者之间的相同匹配的百分比。相关氨基酸序列或核酸序列的同一性可通过已知方法容易地计算。此类方法包括但不限于以下各者中描述的方法：Lesk A.M.(1988).Computational molecular biology:Sources and methods for sequenceanalysis.New York,NY:Oxford University Press；Smith D.W.(1993).Biocomputing:Informatics and genome projects.San Diego,CA:Academic Press；Griffin A.M.和Griffin H.G.(1994).Computer analysis of sequence data,第1部分.Totowa,NJ:Humana Press；von Heijne G.(1987).Sequence analysis in molecular biology:treasure trove or trivial pursuit.San Diego,CA:Academic press；Gribskov M.R.和Devereux J.(1991).Sequence analysis primer.New York,NY:Stockton Press；Carrillo等人,SIAM J Appl Math.(1988)48(5):1073-82。用于确定同一性的优选方法被设计为给出所测试序列之间的最大匹配。确定同一性的方法描述于公开可用的计算机程序中。用于确定两个序列之间的同一性的优选计算机程序方法包括GCG程序包，包括GAP(Genetics Computer Group,University of Wisconsin,Madison,WI；Devereux等人,Nucleic Acids Res.(1984)12(1Pt 1):387-95)、BLASTP、BLASTN和FASTA(Altschul等人,JMol Biol.(1990)215(3):403-10)。BLASTX程序可从美国国家生物技术信息中心(NCBI)和其它来源公开获得(BLAST Manual,Altschul等人NCB/NLM/NIH Bethesda,Md.20894)。众所周知的Smith Waterman算法也可用于确定同一性。
如本文所用，“胞内信号传导域”是指分子的胞内部分。胞内信号传导域产生促进含有嵌合受体的细胞的免疫效应功能的信号。嵌合受体-T细胞中的免疫效应功能的实例可包括溶细胞活性、抑制活性、调节活性和辅助活性，包括细胞因子的分泌。
“受试者”旨在包括其中可引发免疫反应的活生物体(例如哺乳动物、人类)。在一个实施方案中，受试者可以是“患者”，即温血动物，更优选人类，其正在等待接受或正在接受医疗护理或曾经/正在/将是医疗程序的对象，或监测目标疾病或病况，例如炎症性或自身免疫病况的发展。在一个实施方案中，受试者是成年人(例如18岁以上的受试者)。在另一实施方案中，受试者是儿童(例如18岁以下的受试者)。在一个实施方案中，受试者是男性。在另一实施方案中，受试者是女性。在一个实施方案中，受试者患有、优选被诊断患有自身免疫和/或炎症性疾病或病症。在一个实施方案中，受试者有患自身免疫和/或炎症性疾病或病症的风险。风险因素的实例包括但不限于遗传倾向或自身免疫和/或炎症性疾病或病症的家族史。
“单链Fv”，也缩写为“sFv”或“scFv”，是指包含至少一个包含轻链可变区的抗体片段和至少一个包含重链可变区的抗体片段的融合蛋白，其中轻链和重链可变区例如通过合成接头，例如短的柔性多肽接头连续连接，并且能够表达为单链多肽，并且其中scFv保留其所源自的完整抗体的特异性。除非另有说明，否则如本文所用，scFv可以任一顺序具有VL和VH可变区，例如，相对于多肽的N末端和C末端，scFv可包含VL-接头-VH或可包含VH-接头-VL。在一个实施方案中，本公开的抗原结合片段是单链Fv(scFv)。
“治疗有效量”是指本文所述的抗体的水平或量，其目的是在不对靶标造成显著的负面或不利副作用的情况下：(1)延迟或预防疾病、病症或病况的发作；(2)减缓或停止疾病、病症或病况的一种或多种症状的进展、加重或恶化；(3)改善疾病、病症或病况的症状；(4)降低疾病、病症或病况的严重程度或发生率；或(5)治愈疾病、病症或病况。可在疾病、病症或病况发作之前施用治疗有效量以起到防治或预防作用。或者或另外，可在疾病、病症或病况开始后施用治疗有效量以起到治疗作用。
“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”或“减轻”是指治疗性治疗和防治性或预防性措施，其中目标是预防或减缓(减轻)目标病理状况或病症。需要治疗的人包括已经患有所述病症的人以及易于患有所述病症的人或需要预防所述病症的人。在一个实施方案中，如果在接受治疗量的根据本公开的抗体或细胞后，受试者表现出以下中的至少一者，则受试者的疾病或病症被成功“治疗”：致病细胞数量或百分比的减少；与待治疗的疾病或病症相关的一种或多种症状在一定程度上得到缓解；降低发病率和死亡率；以及生活质量问题的改善。用于评估疾病的成功治疗和改善的以上参数可通过医生熟悉的常规程序容易地测量。
“ζ”或者“ζ链”、“CD3-ζ”或“TCR-ζ”被定义为由GenBank登录号BAG36664.1提供的蛋白质，或来自非人类物种，例如小鼠、啮齿动物、猴、猿等的等效残基，并且“ζ刺激域”或者“CD3-ζ刺激域”或“TCR-ζ刺激域”被定义为来自ζ链的细胞质域的氨基酸残基或其功能衍生物，其足以在功能上传递T细胞激活所需的初始信号。
在一个实施方案中，ζ的胞质域包含GenBank登录号BAG36664.1的残基52至164，或来自非人类物种，例如小鼠、啮齿动物、猴、猿等的等效残基，所述等效残基是其功能直系同源物。
I.抗体和抗原结合片段
本公开首先涉及分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合于至少一种IL-23R(例如IL-23Rα亚基)。
如本文所用，“分离的抗体”意指基本上不含具有不同抗原特异性的其它抗体的抗体(例如，特异性结合IL-23R的分离的抗体基本上不含特异性结合除IL-23R以外的抗原的抗体)。然而，特异性结合IL-23R的分离的抗体可能与其它抗原(例如来自其它物种的IL-23R分子)具有交叉反应性。此外，分离的抗体可基本上不含其它细胞物质和/或化学物质，特别是会干扰抗体的治疗用途的那些，包括但不限于酶、激素和其它蛋白质或非蛋白质组分。本文中的分离的抗体可以是IgG抗体，例如IgG1、IgG2或IgG4抗体。
I.1抗原特异性和亲和力
在一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段识别并能够结合于细胞表面上表达的IL-23R。
在另一实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段识别并能够结合于可溶性IL-23R(即，非膜结合)。
有利地，已发现本公开的IL-23R结合抗体或抗原结合片段能够结合于人类和小鼠IL-23R两者，特别是以高亲和力结合(图14)。这种交叉反应性有利于将小鼠临床前研究的结果外推至药物审批过程的人体临床研究。
在一个实施方案中，本公开的抗体或抗原结合片段，例如根据本发明的scFv能够结合小鼠和人类IL-23R两者(图14)。因此，scFv与小鼠和人类IL-23R的交叉反应性是一个有利的特征。
在一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段识别并结合于人类IL-23Rα亚基。优选地，本公开的抗体或其抗原结合片段以高亲和力结合于人类IL-23Rα亚基(图14)。人类IL-23Rα亚基是由包含11个外显子的2.8kb长mRNA编码的蛋白质(Genbank登录号：NM_144701)。
在一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段识别并能够结合于IL-23R变体，例如人类IL-23R的变体。
在一个实施方案中，IL-23R的变体是指修饰的IL-23R，其中与原始(野生型)IL-23R相比，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个氨基酸被删除、添加或取代。
人类IL-23R的剪接变体先前已被鉴定(Kan等人,Genes and Immunity(2008)9(7):631-639)。具体地，已经描述了IL-23R的24种不同同种型：同种型_v1(由具有Genbank登录号AM990313的mRNA编码)、同种型_v2(由具有Genbank登录号AM990314的mRNA编码)、同种型_v3(由具有Genbank登录号AM990315的mRNA编码)、同种型_v4(由具有Genbank登录号AM990316的mRNA编码)、同种型_v5(由具有Genbank登录号AM990317的mRNA编码)、同种型_v6(由具有Genbank登录号AM990318的mRNA编码)、同种型_v7(由具有Genbank登录号AM990319的mRNA编码)、同种型_v8(由具有Genbank登录号AM990320的mRNA编码)、同种型_v9(由具有Genbank登录号AM990321的mRNA编码)、同种型_v10(由具有Genbank登录号AM990322的mRNA编码)、同种型_v11(由具有Genbank登录号AM990323的mRNA编码)、同种型_v12(由具有Genbank登录号AM990324的mRNA编码)、同种型_v13(由具有Genbank登录号AM990325的mRNA编码)、同种型_v14(由具有Genbank登录号AM990324的mRNA编码)、同种型_v14(由具有Genbank登录号AM990326的mRNA)、同种型_v15(由具有Genbank登录号AM990327的mRNA编码)、同种型_v16(由具有Genbank登录号AM990328的mRNA编码)、同种型_v17(由具有Genbank登录号AM990329的mRNA编码)、同种型_v18(由具有Genbank登录号AM990330的mRNA编码)、同种型_v19(由具有Genbank登录号AM990331的mRNA编码)、同种型_v20(由具有Genbank登录号AM990332的mRNA编码)、同种型_v21(由具有Genbank登录号AM990333的mRNA编码)、同种型_v22(由具有Genbank登录号AM990334的mRNA编码)、同种型_v23(由具有Genbank登录号AM990335的mRNA编码)和同种型_v24(由具有Genbank登录号AM990336的mRNA编码)。
因此，在一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段识别并能够结合于选自包含以下的组的人类IL-23R的剪接变体：同种型_v1、同种型_v2、同种型_v3、同种型_v4、同种型_v5、同种型_v6、同种型_v7、同种型_v8、同种型_v9、同种型_v10、同种型_v11、同种型_v12、同种型_v13、同种型_v14、同种型_v15、同种型_v16、同种型_v17、同种型_v18、同种型_v19、同种型_v20、同种型_v21、同种型_v22、同种型_v23和同种型_v24。
此外，人类IL-23R的α亚基中的单核苷酸多态性先前已被描述(Kan等人,同上；和Sivanesan等人,J Biol Chem.(2016)291(16):8673-85)。
在一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段识别并能够结合于α亚基中包含单核苷酸多态性(SNP)的人类IL-23R变体，其中所述SNP选自包括R381Q、G149R、V362I和其组合的组。
在一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段识别并结合于小鼠IL-23Rα亚基。优选地，本公开的抗体或其抗原结合片段以高亲和力结合于小鼠IL-23Rα亚基(图14)。小鼠IL-23Rα亚基是由包含11个外显子的2.5kb长mRNA编码的蛋白质(Genbank登录号：NM_144548)。
先前已鉴定出小鼠IL-23R的剪接变体。具体地，已经描述了7种不同的IL-23R同种型：同种型1(Uniprot Q5VWK5-1；NM_144701.3)、同种型2(Uniprot Q5VWK5-2；XP_005270573)、同种型3(Uniprot Q5VWK5-3)、同种型4(Uniprot Q5VWK5-4)和同种型5(Uniprot Q5VWK5-5)(Zhang等人,Immunogenetics 57:934-943(2006))，以及同种型6(Uniprot Q5VWK5-6；XP_005270574)和同种型7(Uniprot Q5VWK5-7)(Genome Res.14:2121-2127(2004))。在一些实施方案中，本公开的抗IL23R抗体或其抗原结合片段结合于同种型1-7中的一者或多者。在一些实施方案中，本公开的抗IL23R抗体或抗原结合片段结合于同种型1和同种型3中的至少一者。在一些实施方案中，本公开的抗IL23R抗体或抗原结合片段结合于同种型4和同种型6中的至少一者。
I.2.1CDR序列
在一个实施方案中，CDR是根据Kabat CDR定义系统确定的。
在一个实施方案中，本公开的抗体或抗原结合片段的重链包含以下重链CDR(HCDR)中的至少一者、优选至少两者、更优选全部三者：
HCDR1：SSNYYWG(SEQ ID NO:1)
HCDR2：GSIYYSGNTYYNPSL(SEQ ID NO:2)
HCDR3：REWSPYESEGFDY(SEQ ID NO:3)
在一个特定实施方案中，本公开的抗体或抗原结合片段包含全部SEQ ID NO:1-3。在一个实施方案中，与SEQ ID NO:1-3相比，HCDR1、HCDR2和/或HCDR3中的任一者可分别包含1、2、3个或更多个氨基酸修饰(例如取代)。在一个实施方案中，HCDR1、HCDR2和/或HCDR3中的任一者具有分别与SEQ ID NO:1-3共有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本公开的抗体或抗原结合片段的轻链包含以下轻链CDR(LCDR)中的至少一者、优选至少两者、更优选全部三者：
LCDR1：TGSSSNIGAGYDVH(SEQ ID NO:4)
LCDR2：GNNNRPS(SEQ ID NO:5)
LCDR3：QSYDTGLSAW(SEQ ID NO:6)
在一个特定实施方案中，本公开的抗体或抗原结合片段包含全部SEQ ID NO:4-6。在一个实施方案中，与SEQ ID NO:4-6相比，LCDR1、LCDR2和/或LCDR3中的任一者可分别包含1、2、3、4、5个或更多个氨基酸修饰(例如取代)。在一个实施方案中，LCDR1、LCDR2和/或LCDR3中的任一者具有分别与SEQ ID NO:4-6共有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列。
在本公开的抗体或抗原结合片段的一个实施方案中，其HCDR 1-3中的至少一者、优选至少两者、更优选全部三者分别包含SEQ ID NO:1-3；其LCDR 1-3中的至少一者、优选至少两者、更优选全部三者分别包含SEQ ID NO:4-6。
在一个实施方案中，本公开的抗体或抗原结合片段包含分别具有SEQ ID NO:1-6的序列的HCDR 1-3和LCDR 1-3。
在本公开的抗体或抗体结合片段的一个实施方案中，HCDR1、HCDR2和/或HCDR3中的任一者具有分别与SEQ ID NO:1-3共有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列；并且LCDR1、LCDR2和/或LCDR3中的任一者具有分别与SEQ ID NO:4-6共有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列。
I.2.2VH和VL序列
在一个实施方案中，本公开的抗体或抗原结合片段具有包含SEQ ID NO:7或由其组成的VH氨基酸序列。
在一个实施方案中，VH氨基酸序列包含具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个氨基酸修饰(例如取代)的SEQ ID NO:7或由其组成。
在一个实施方案中，VH氨基酸序列包含上文所述的HCDR(例如SEQ ID NO:1-3)并且与SEQ ID NO:7共有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性。
在一个实施方案中，本公开的抗体或抗原结合片段具有包含SEQ ID NO:8或由其组成的VL氨基酸序列。
在一个实施方案中，VL氨基酸序列包含具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个氨基酸修饰(例如取代)的SEQ ID NO:8或由其组成。
在一个实施方案中，VL氨基酸序列包含上文所述的LCDR(例如SEQ ID NO:4-6)并且与SEQ ID NO:8共有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性。
在一个实施方案中，VH包含SEQ ID NO:7或由其组成，和/或VL包含SEQ ID NO:8或由其组成，其中具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个氨基酸修饰(例如取代)。
在一个实施方案中，VH和VL包含上文所述的CDR(例如SEQ ID NO:1-6)并且分别与SEQ ID NO:7和8共有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性。
在一个实施方案中，氨基酸修饰可以是插入、缺失或取代。在一个实施方案中，氨基酸修饰不显著影响含有所述修饰的抗体或其抗原结合片段的结合特征。特定可变区和CDR序列可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个氨基酸插入、缺失和/或取代。
在一个实施方案中，氨基酸修饰是优选用保守氨基酸进行的取代。保守氨基酸是具有与原始氨基酸的物理化学特性相似的侧链的氨基酸。具有相似侧链的氨基酸残基家族已在本领域中定义。这些家族包括如下的氨基酸：具有碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸)、β-支链侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，本公开的抗体或抗原结合片段的CDR和/或可变区内的一个或多个氨基酸残基可被来自相同侧链家族的其它氨基酸残基取代，并且修饰的抗体或抗原结合片段可使用本文所述的测定法测试保留的功能(例如与IL-23R的结合)。在另一实施方案中，本公开的抗体或抗原结合片段的CDR和/或可变区内的一串氨基酸可用侧链家族成员的顺序和/或组成不同的结构相似的串替代。
在一个实施方案中，本公开的抗体或抗原结合片段包含：
-VH，其包含至少一个(优选三个)本文定义的HCDR，并且包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:7或与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列；和
-VL，其包含至少一个(优选三个)本文定义的LCDR，并且包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:8或与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:7或由其组成的VH；和包含SEQ ID NO:8或由其组成的VL。
I.2.3接头
在一个实施方案中，本公开的抗原结合片段包含连接其VH和VL的接头。在一个实施方案中，抗原结合片段从N末端到C末端包含VL、接头和VH。在另一实施方案中，抗原结合片段从N末端到C末端包含VH、接头和VL。
在一个实施方案中，接头是长度范围为例如2至20或2至15个氨基酸的肽接头。
例如，甘氨酸-丝氨酸双联体提供特别合适的接头(GS接头)。在一个实施方案中，所述接头是GS接头。GS接头的实例包括但不限于GS接头、G2S接头(例如GGS和(GGS)2)、G3S接头和G4S接头。
G3S接头包含氨基酸序列(Gly-Gly-Gly-Ser)n或(GGGS)n(SEQ ID NO:9)，其中n是等于或大于1的正整数(例如，n＝1、n＝2、n＝3、n＝4、n＝5、n＝6、n＝7、n＝8、n＝9或n＝10)。G3S接头的实例包括但不限于GGGSGGGSGGGSGGGS(SEQ ID NO:10)。
G4S接头的实例包括但不限于对应于GGGGS(SEQ ID NO:11)的(Gly4-Ser)；对应于GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:12)的(Gly4-Ser)2；对应于GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:13)的(Gly4-Ser)3；和对应于GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:14)的(Gly4-Ser)4。在一个实施方案中，接头是(G4S)3接头(SEQ ID NO:13)。
I.2.4抗体和片段的类型
在一个实施方案中，根据本公开的抗体或其抗原结合片段是人源化抗体。
在一个实施方案中，根据本公开的抗体或其抗原结合片段是抗体的抗原结合片段，例如单链抗体、Fv、Fab、Fab’、Fab'-SH、F(ab)'2、Fd、去岩藻糖基化抗体、双抗体、三抗体或四抗体。
在一个实施方案中，根据本公开的抗体或其抗原结合片段以高亲和力结合于人类IL-23Rα亚基。在一个实施方案中，根据本公开的抗体或其抗原结合片段包含如本文定义的CDR并且以高亲和力结合于人类IL-23Rα亚基。
在一个实施方案中，根据本公开的抗体或其抗原结合片段以高亲和力结合于小鼠IL-23Rα亚基。在一个实施方案中，根据本公开的抗体或其抗原结合片段包含如本文定义的CDR并且以高亲和力结合于小鼠IL-23Rα亚基。
在一个实施方案中，根据本公开的抗体或其抗原结合片段能够以小于200nM、100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM或30nM，特别是小于100nM，特别是小于40nM的EC50结合于人类IL-23Rα亚基。在一个实施方案中，根据本公开的抗体或其抗原结合片段能够以小于200nM、100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM或30nM，特别是小于100nM，特别是小于60nM的EC50结合于小鼠IL-23Rα亚基。
在一个实施方案中，根据本公开的抗体或其抗原结合片段能够与人类和小鼠IL-23R交叉反应。在一个实施方案中，根据本公开的抗体或其抗原结合片段包含如本文定义的CDR并且能够与人类和小鼠IL-23R交叉反应。
I.2.5scFv全序列
在一个实施方案中，本公开的抗原结合片段是包含本文定义的CDR的scFv并且包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:15或与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，scFv以高亲和力结合于人类IL-23Rα亚基。在一个实施方案中，scFv包含如本文定义的CDR并且以高亲和力结合于人类IL-23Rα亚基。在一个实施方案中，scFv包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:15或与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列，并且以高亲和力结合于人类IL-23Rα亚基。
在一个实施方案中，scFv以高亲和力结合于小鼠IL-23Rα亚基。在一个实施方案中，scFv包含如本文定义的CDR并且以高亲和力结合于小鼠IL-23Rα亚基。在一个实施方案中，scFv包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:15或与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列，并且以高亲和力结合于小鼠IL-23Rα亚基。
在一个实施方案中，根据本公开的scFv能够以小于200nM、100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM或30nM，特别是小于100nM，特别是小于40nM的EC50结合于人类IL-23Rα亚基。在一个实施方案中，根据本公开的scFv能够以小于200nM、100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM或30nM，特别是小于100nM，特别是小于60nM的EC50结合于小鼠IL-23Rα亚基。
在一个实施方案中，scFv能够与人类和小鼠IL-23R交叉反应。在一个实施方案中，scFv包含如本文定义的CDR并且能够与人类和小鼠IL-23R交叉反应。在一个实施方案中，scFv包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:15或与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列，并且结合于人类和小鼠IL-23R两者。
I.3核酸
本公开的另一个目标是编码本公开的分离的抗IL-23R抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。
如本文所用，“分离的核酸”意指与天然序列天然伴随的其它基因组DNA序列以及蛋白质或复合物，诸如核糖体和聚合酶基本上分离的核酸。所述术语涵盖已从其天然存在的环境中移出的核酸序列，并且包括重组或克隆的DNA分离物和化学合成的类似物或通过异源系统生物合成的类似物。基本上纯的核酸包括核酸的分离形式。这是指最初分离的核酸，并且不排除后来人为添加至分离的核酸中的基因或序列。
在一个实施方案中，核酸编码本公开的抗体或抗原结合片段的至少VH或VL。在一个实施方案中，核酸编码本公开的抗体或抗原结合片段的重链或轻链的可变区和恒定区。在一个实施方案中，核酸编码抗体或抗原结合片段的重链和轻链。
在一个实施方案中，本文的核酸包含编码本公开的抗体或抗原结合片段的VH的核苷酸序列或由其组成，其中所述核苷酸序列是SEQ ID NO:16或与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的核苷酸序列。
在一个实施方案中，本文的核酸包含编码本公开的抗体或抗原结合片段的VL的序列或由其组成，其中所述核苷酸序列是SEQ ID NO:17或与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的核苷酸序列。
在一个实施方案中，本文的核酸包含编码本公开的抗体或抗原结合片段的VH和VL的核苷酸序列。在另一实施方案中，本文的核酸包含SEQ ID NO:16和17。
在一个实施方案中，本文的核酸还包含VL与VH编码序列之间的接头核苷酸序列。在另一实施方案中，接头核苷酸序列包含SEQ ID NO:18或由其组成。
在一个实施方案中，本文的核酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:19或与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的核苷酸序列。
I.4.抗体和抗原结合片段的生产
本公开还提供了用于表达本公开的抗体或其抗原结合片段的载体以及使用所述载体产生抗体或抗原结合片段的方法。
一般来说，合适的载体含有在至少一种宿主生物体中具有功能的复制起点、启动子序列、方便的限制性内切核酸酶位点、一种或多种选择标志物、以及任选的增强子。
用于哺乳动物细胞表达载体的启动子和增强子的实例包括但不限于SV40的早期启动子和增强子、莫洛尼小鼠白血病病毒的LTR启动子和增强子、以及免疫球蛋白H链的启动子和增强子。关于转录调节序列的其它实例，另外参见下文第II节。
本公开的另一个目标是一种产生和纯化本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段的方法。在一个实施方案中，所述方法包括：
-将包含抗体或抗原结合片段的表达盒的表达载体体外或离体引入至感受态宿主细胞(例如哺乳动物细胞，诸如CHO细胞和NS0细胞)中；
-在适合表达抗体或其抗原结合片段的条件下体外或离体培养转化的宿主细胞；
-任选地选择表达和/或分泌所述抗体或抗原结合片段的细胞；和
-从细胞培养物中回收表达的抗体或抗原结合片段，以及
-任选地纯化回收的抗体或抗原结合片段。
纯化蛋白质、特别是抗体或抗原结合片段的方法是本领域众所周知的，并且包括但不限于蛋白质A-琼脂糖凝胶、凝胶电泳和色谱(例如亲和色谱，诸如蛋白质L琼脂糖上的亲和色谱)。
II.融合蛋白
本公开还涉及包含本公开的抗体或其抗原结合片段的融合蛋白。在一个实施方案中，所述融合蛋白是嵌合抗原受体(CAR)。
II.1CAR
本公开的一个目标是对至少一种IL-23R具有特异性的CAR。CAR可包含(i)包含本文所述的抗IL-23R抗原结合片段的胞外结合域，(ii)任选的胞外铰链域，(iii)跨膜域，(iv)胞内信号传导域，和(v)任选的标签和/或前导序列。在一个实施方案中，CAR包含一种或多种多肽，例如两种多肽。
II.1.1.胞外结合域
在一个实施方案中，CAR的胞外结合域包含本公开的抗原结合片段或由其组成。在一个实施方案中，所述抗原结合片段包含分别具有SEQ ID NO:1-3的HCDR1-3中的至少一者；和/或分别具有SEQ ID NO:4-6的LCDR1-3中的至少一者。在另一实施方案中，CAR的胞外结合域中的抗原结合片段包含分别具有SEQ ID NO:1-6的序列的HCDR1-3和LCDR1-3。在一个实施方案中，CAR的胞外结合域包含抗原结合片段，所述抗原结合片段包含VH，所述VH具有SEQ ID NO:7的序列，或与SEQ ID NO:7具有至少约70％、优选至少约75％、80％、85％、90％、95％或更高同一性的序列；和VL，所述VL具有SEQ ID NO:8的序列，或与SEQ ID NO:8具有至少约70％、优选至少约75％、80％、85％、90％、95％或更高同一性的序列。
在一个实施方案中，CAR的胞外结合域包含具有VH与VL之间的肽接头的抗IL-23RscFv或由其组成，其中所述肽接头包含SEQ ID NO:13或与其具有至少约90％、95％或更高同一性的序列。
在一个实施方案中，CAR的胞外结合域包含抗IL-23R scFv或由其组成，所述scFv包含SEQ ID NO:15或与其具有至少约90％、95％或更高同一性的序列。
II.1.2.铰链域
在一个实施方案中，胞外IL-23R结合域通过铰链域连接至跨膜域。
在一个实施方案中，铰链域包含约2至约100个氨基酸，例如约2至约75个氨基酸或由其组成。
在一个实施方案中，铰链域是长度在例如2至20或2至15个氨基酸范围内的肽接头，如本文所述。
在一个实施方案中，铰链域包含以下或由以下组成：来源于CD8铰链的氨基酸序列(例如SEQ ID NO:20)或与SEQ ID NO:20具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，铰链域是由SEQ ID NO:21或与SEQ ID NO:21具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的核苷酸序列编码的CD8铰链。
II.1.3.跨膜域
可用于本公开的CAR的跨膜域的实例包括但不限于以下各者的跨膜域：T细胞受体(TCR)的α链或β链；或CD28、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154、KIRDS2、OX40、CD2、CD27、LFA-1(CDl la、CD18)、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、GITR、CD40、BAFFR、HVEM(LIGHTR)、SLAMF7、NKp80(KLRFl)、CD160、CD19、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Ra、ITGA1、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、PD1、ITGAX、CDl1c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、TNFR2、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRT AM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CDIOO(SEMA4D)、SLAMF6(NTB-A、Lyl08)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、PAG/Cbp、NKp44、NKp30、NKp46、NKG2D和NKG2C。
在一个实施方案中，跨膜域包含以下或由以下组成：来源于CD8跨膜域的氨基酸序列(例如SEQ ID NO:22)或与SEQ ID NO:22具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，跨膜域是由SEQ ID NO:23或与SEQ ID NO:23具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的核苷酸序列编码的CD8跨膜域。
在另一实施方案中，跨膜域包含以下或由以下组成：来源于CD28跨膜域的氨基酸序列(例如SEQ ID NO:24)或与SEQ ID NO:24具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，跨膜域是由SEQ ID NO:25或与SEQ ID NO:25具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的核苷酸序列编码的CD28跨膜域。
在另一实施方案中，跨膜域包含以下或由以下组成：来源于4-1BB(CD137)跨膜域的氨基酸序列(例如SEQ ID NO:26)或与SEQ ID NO:26具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，跨膜域是由SEQ ID NO:27或与SEQID NO:27具有至少约95％(例如96％、97％、98％或99％)同一性的核苷酸序列编码的4-1BB跨膜域。
在另一实施方案中，跨膜域包含以下或由以下组成：来源于TNFR2跨膜域的氨基酸序列(例如SEQ ID NO:28)或与SEQ ID NO:28具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，跨膜域是由SEQ ID NO:29或与SEQ ID NO:29具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的核苷酸序列编码的TNFR2跨膜域。
在一个实施方案中，跨膜域可以是完全人工的并且可包含例如主要疏水性氨基酸，例如缬氨酸和亮氨酸。
II.1.4.胞内信号传导域
在一个实施方案中，本公开的CAR的胞内信号传导域可包含其所源自的分子的整个胞内部分或整个天然胞内信号传导域，或其功能片段或衍生物。
在一个实施方案中，胞内信号传导域包含T细胞一级信号传导域(或来源于其的序列)和任选的T细胞共刺激分子的一个或多个胞内域(或来源于其的序列)。
在一个实施方案中，胞内信号传导域包含一级信号传导域或由其组成。
在一个实施方案中，胞内信号传导域包含T细胞共刺激分子的一个或多个胞内域或由其组成。在一个实施方案中，胞内信号传导域由T细胞共刺激分子的一个或多个胞内域组成。
在另一实施方案中，胞内信号传导域包含至少一个共刺激域和一级信号传导域或由其组成。
在另一实施方案中，胞内信号传导域包含至少两个共刺激域和一级信号传导域或由其组成。
在一个实施方案中，T细胞一级信号传导域包含CD3ζ的功能性信号传导域或由其组成。
在一个实施方案中，T细胞一级信号传导域包含或由其组成：SEQ ID NO:30的CD3ζ胞内域的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:30具有至少约95％(例如96％、97％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，CD3ζ一级信号传导域包含具有SEQ ID NO:30的至少一个、两个或三个修饰(但不超过20个、10个或5个修饰)的氨基酸序列或由其组成。
在一个实施方案中，CD3ζ一级信号传导域由SEQ ID NO:31或与SEQ ID NO:31具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的核苷酸序列编码。
以刺激方式起作用的T细胞一级信号传导域可包含称为基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAMS)的信号传导基序。在一个实施方案中，T细胞一级信号传导域包含修饰的ITAM域，例如突变的ITAM域，其与天然ITAM域相比具有改变的(例如增加或减少的)活性。在一个实施方案中，一级信号传导域包含修饰的含有ITAM的一级胞内信号传导域，例如优化的和/或截短的含有ITAM的一级胞内信号传导域。在一个实施方案中，一级信号传导域包含一个、两个、三个、四个或更多个ITAM基序。
在一个实施方案中，本公开的CAR的胞内信号传导域包含与一个或多个共刺激信号传导域组合的T细胞一级信号传导域(例如CD3ζ信号传导域)。
共刺激信号传导域可来源于T细胞共刺激分子或免疫细胞上表达的其它细胞表面分子的胞内域。共刺激信号域的实例可以是来源于以下各者的胞内域的那些域：CD28、CD27、4-1BB(CD137)、MHC I类分子、BTLA、Toll配体受体、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS(CD278)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、与CD83特异性结合的配体、CDS、ICAM-1、GITR、ARHR、BAFFR、HVEM(LIGHTR)、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD160(BY55)、CD19、CD19a、CD4、CD8α、CD8β、IL2ra、IL6Ra、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、IL-13RA1/RA2、IL-33R(IL1RL1)、IL-10RA/RB、IL-4R、IL-5R(CSF2RB)、IL-21R、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a/CD18、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、ITGB7、NKG2D、NKG2C、CTLA-4(CD152)、CD95、TNFR1(CD120a/TNFRSF1A)、TNFR2(CD120b/TNFRSF1B)、TGFbR1/2/3、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Lyl08)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、共同γ链、与CD83特异性结合的配体、NKp44、NKp30、NKp46、NKG2D和其任何组合。
在本公开的一个实施方案中，本公开的CAR包含选自包含CD28、TNFR2、4-1BB、ICOS、CD27、OX40、CTLA4和PD-1的组的T细胞共刺激分子的至少一个胞内域。
在一个实施方案中，T细胞共刺激信号传导域包含以下或由其以下组成：来源于CD28胞内域的氨基酸序列(例如SEQ ID NO:32)或与SEQ ID NO:32具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，T细胞共刺激信号传导域包含以下或由以下组成：对SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少1个、2个或3个修饰，但不超过20个、10个或5个修饰的氨基酸序列。在一个实施方案中，T细胞共刺激信号传导域由SEQ ID NO:33或与SEQ ID NO:33具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的核苷酸序列编码。
在一个实施方案中，T细胞共刺激信号传导域包含以下或由其以下组成：来源于4-1BB胞内域的氨基酸序列(例如SEQ ID NO:34)或与SEQ ID NO:34具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，T细胞共刺激信号传导域包含以下或由以下组成：对SEQ ID NO:34的氨基酸序列具有至少1个、2个或3个修饰，但不超过20个、10个或5个修饰的氨基酸序列。在一个实施方案中，T细胞共刺激信号传导域由SEQ ID NO:35或与SEQ ID NO:35具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的核苷酸序列编码。
在一个实施方案中，T细胞共刺激信号传导域包含以下或由其以下组成：来源于CD27胞内域的氨基酸序列(例如SEQ ID NO:36)或与SEQ ID NO:36具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，T细胞共刺激信号传导域包含以下或由以下组成：对SEQ ID NO:36的氨基酸序列具有至少1个、2个或3个修饰，但不超过20个、10个或5个修饰的氨基酸序列。在一个实施方案中，T细胞共刺激信号传导域由SEQ ID NO:37或与SEQ ID NO:37具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的核苷酸序列编码。
在一个实施方案中，T细胞共刺激信号传导域包含以下或由其以下组成：来源于TNFR2胞内域的氨基酸序列(例如SEQ ID NO:38)或与SEQ ID NO:38具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，T细胞共刺激信号传导域包含以下或由以下组成：对SEQ ID NO:38的氨基酸序列具有至少1个、2个或3个修饰，但不超过20个、10个或5个修饰的氨基酸序列。在一个实施方案中，T细胞共刺激信号传导域由SEQ ID NO:39或与SEQ ID NO:39具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的核苷酸序列编码。
在一个实施方案中，本公开的CAR的胞内信号传导域包含：
-SEQ ID NO:32的CD28胞内域的氨基酸序列或与SEQ ID NO:32具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的氨基酸序列；和
-SEQ ID NO:30的CD3ζ胞内域的氨基酸序列或与SEQ ID NO:30具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本公开的CAR的胞内信号传导域包含可以随机顺序或以指定顺序彼此连接的至少两个不同的域(例如一级信号传导域和T细胞共刺激分子的至少一个胞内域)。
任选地，肽接头可用于连接不同的信号传导域。在一个实施方案中，使用甘氨酸-丝氨酸双联体(GS)作为合适的接头。在一个实施方案中，使用单一氨基酸，例如丙氨酸(A)或甘氨酸(G)作为接头。肽接头的其它实例描述于上文第I节中。
在一个实施方案中，本公开的CAR的胞内信号传导域包含两个或更多个(例如2、3、4、5或更多个)共刺激信号传导域。在一个实施方案中，两个或更多个共刺激信号传导域被肽接头，例如本文所述的肽接头分开。
在一个实施方案中，本公开的CAR的胞内信号传导域包含CD3ζ的一级信号传导域(例如SEQ ID NO:30)和CD28的共刺激信号传导域(例如SEQ ID NO:32)。
II.1.5.前导序列
在一个实施方案中，本公开的CAR还包含位于IL-23R特异性胞外结合域的N末端的前导序列。前导序列可允许CAR蛋白从高尔基复合体分泌后在细胞表面表达。
本公开的CAR的合适的前导序列包括CD8前导序列、CD25前导序列或Igk前导序列。
前导序列的非限制性实例是可包含SEQ ID NO:40或由其组成的CD8的前导序列。在一个实施方案中，前导序列包含以下或由以下组成：来源于CD8前导序列的氨基酸序列(例如SEQ ID NO:40)或与SEQ ID NO:40具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。优选地，前导序列由SEQ ID NO:40组成。
在一个实施方案中，编码前导序列的核苷酸序列包含以下或由以下组成：编码CD8前导序列的核苷酸序列(例如SEQ ID NO:41)或与SEQ ID NO:41具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的核苷酸序列。优选地，前导序列由由SEQ ID NO:41组成的序列编码。
前导序列的非限制性实例是可包含SEQ ID NO:58或由其组成的CD25的前导序列。在一个实施方案中，前导序列包含以下或由以下组成：来源于CD25前导序列的氨基酸序列(例如SEQ ID NO:58)或与SEQ ID NO:58具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。优选地，前导序列由SEQ ID NO:58组成。
在一个实施方案中，编码前导序列的核苷酸序列包含以下或由以下组成：编码CD25前导序列的核苷酸序列(例如SEQ ID NO:59)或与SEQ ID NO:59具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的核苷酸序列。优选地，前导序列由由SEQ ID NO:59组成的序列编码。
II.1.6.标签
在一个实施方案中，CAR还包含用于例如体内质量控制、富集和跟踪的标签。所述标签可位于CAR的N末端或C末端，或位于CAR多肽内部。标签的实例包括但不限于血凝素标签、聚精氨酸标签、聚组氨酸标签、Myc标签、Strep标签、S-标签、HAT标签、3xFlag标签、钙调蛋白结合肽标签、SBP标签、几丁质结合域标签、GST标签、麦芽糖结合蛋白标签、荧光蛋白标签、T7标签、V5标签和Xpress标签。
在一个实施方案中，本公开的CAR包含HA标签(SEQ ID NO:42)。在一个实施方案中，标签由SEQ ID NO:43或与SEQ ID NO:43具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的核苷酸序列编码。
II.1.7.示例性CAR
根据一个实施方案，本公开的CAR包含IL-23R结合域(例如包含SEQ ID NO:15或由其组成的域)、任选的胞外铰链域、跨膜域、T细胞共刺激分子的单个胞内域和T细胞一级信号传导域。优选地，本公开的CAR还包含前导序列。
在一个实施方案中，本公开的CAR包含IL-23R结合域(例如SEQ ID NO:15)；CD8的跨膜域(例如SEQ ID NO:22)；CD28的胞内域(例如SEQ ID NO:32)；和CD3ζ一级信号传导域(例如SEQ ID NO:30)。在一个实施方案中，本公开的CAR进一步包含前导序列。
在一个实施方案中，本公开的CAR包含IL-23R结合域(例如SEQ ID NO:15)；CD8的铰链域(例如SEQ ID NO:20)；CD8的跨膜域(例如SEQ ID NO:22)；CD28的胞内域(例如SEQID NO:32)；和CD3ζ一级信号传导域(例如SEQ ID NO:30)。
在一个实施方案中，本公开的CAR包含IL-23R结合域(例如SEQ ID NO:15)；CD8的铰链域(例如SEQ ID NO:20)；CD8的跨膜域(例如SEQ ID NO:22)；CD28的胞内域(例如SEQID NO:32)；CD3ζ一级信号传导域(例如SEQ ID NO:30)；和前导序列。在一个实施方案中，前导序列包含SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:60或SEQ ID NO:62或由其组成。优选地，前导序列包含SEQ ID NO:40或SEQ ID NO:58或由其组成。更优选地，前导序列包含SEQID NO:58或由其组成。
在一个实施方案中，本公开的CAR包含抗IL-23R scFv(例如包含SEQ ID NO:15或由其组成的scFv)、CD8的铰链区、人类CD8的跨膜域、人类CD28的胞内域和人类CD3ζ的胞内域。在一个实施方案中，本公开的CAR进一步包含前导序列。
在一个实施方案中，所述CAR包含SEQ ID NO:44或与SEQ ID NO:44具有至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一性的氨基酸序列或由其组成。
本公开的CAR是一种新的并且具有交叉反应性的CAR，其能够结合小鼠和人类IL-23R(实施例3和图14)。在这些示例性结果中，本公开的CAR在人类与小鼠IL23R同源物之间表现出相似的结合概况。在这些示例性结果中，本公开的CAR#2证明人类IL23R与小鼠IL23R之间的结合亲和力有约1.4倍的差异，而CAR#1证明人类IL23R与小鼠IL23R之间的结合亲和力有约3倍的差异。这些示例性结果表明，与CAR#1相比，本公开的CAR#2以更相似的亲和力结合于人类和小鼠IL23R。这种相似性指示，在小鼠临床前模型中使用CAR#2可能更能代表其与人类IL23R的相互作用。
有利地，本公开的CAR显示出抗原结合部分的稳定信号传导和低背景激活(实施例4和图16)。
II.1.8.小鼠CAR
本公开还提供小鼠CAR，其包含IL-23R结合域(例如包含SEQ ID NO:15或由其组成的域)、任选的胞外铰链域、跨膜域、T细胞共刺激分子的单个胞内域和T细胞一级信号传导域。
在一个实施方案中，本公开的小鼠CAR包含IL-23R结合域(例如SEQ ID NO:15)；小鼠CD8的跨膜域(例如SEQ ID NO:50)或小鼠CD28的跨膜域(例如SEQ ID NO:52)；小鼠CD28的胞内域(例如SEQ ID NO:54)；和小鼠CD3ζ一级信号传导域(例如SEQ ID NO:56)。在某些实施方案中，小鼠CAR还可包含小鼠CD8(例如SEQ ID NO:46)或小鼠CD28(例如SEQ ID NO:48)的铰链域。考虑具有上述域的任何组合的小鼠CAR。
II.2.编码CAR的核酸
本公开还涉及编码本文所述的CAR的核酸序列。此类核酸序列的实例是SEQ IDNO:45或其简并或密码子优化型式。
II.3.用于表达CAR的载体
本公开的另一个目标是包含编码本文中的CAR的核酸的表达载体。
在一个实施方案中，编码CAR的核酸是DNA。在一个实施方案中，编码CAR的核酸是RNA。可用于本公开的载体的实例包括但不限于DNA载体、RNA载体、质粒、附加体、病毒载体(例如动物病毒)。
在一个实施方案中，表达载体可包含调节元件，例如启动子、增强子和转录终止子，以引起或指导其上的转基因(例如CAR)在宿主细胞中的表达。载体还可包含一种或多种选择标志物。
用于动物细胞表达载体的启动子和增强子的实例包括但不限于SV40的早期启动子和增强子、莫洛尼小鼠白血病病毒的LTR启动子和增强子、免疫球蛋白H链的启动子和增强子等。合适的组成型启动子的其它实例包括但不限于立即早期巨细胞病毒(CMV)启动子序列、延伸因子lα(EF-lα)启动子、磷酸甘油酸激酶(PGK)启动子、FOXP3源性启动子、猿猴病毒40(SV40)早期启动子、小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)启动子、人类免疫缺陷病毒(HIV)长末端重复(LTR)启动子、MoMuLV启动子、禽白血病病毒启动子、爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr virus)立即早期启动子、劳斯肉瘤病毒启动子以及人类基因启动子，例如肌动蛋白启动子、肌球蛋白启动子、血红蛋白启动子和肌酸激酶启动子。
合适的诱导型启动子的实例包括但不限于金属硫氨酸启动子、糖皮质激素启动子、黄体酮启动子、cumate启动子和四环素启动子。
合适的双向启动子的实例包括但不限于以引用的方式并入本文中的LuigiNaldini的美国专利第8,501,464号描述的启动子，所述专利公开了双向启动子，其包含i)来源于巨细胞病毒(CMV)或小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)基因组的第一最小启动子序列和ii)来源于动物基因的全有效启动子序列。
合适的载体的实例包括但不限于pAGE107、pAGE103、pHSG274、pKCR、pSG1βd2-4等。
质粒的实例包括但不限于包含复制起点的复制质粒或整合质粒，例如pUC、pcDNA、pBR等。
已经开发了许多基于病毒的系统用于将基因转移至哺乳动物细胞中。病毒载体的实例包括但不限于腺病毒载体、逆转录病毒载体、慢病毒载体、疱疹病毒载体和腺相关病毒(AAV)载体。
逆转录病毒可为基因递送系统提供便利的平台。可使用本领域已知的技术将选定的基因插入载体中并包装在逆转录病毒颗粒中。接着可分离重组病毒并将其体内或离体递送至受试者的细胞。许多逆转录病毒系统是本领域已知的。
在一些实施方案中，使用腺病毒载体。许多腺病毒载体是本领域已知的。
在一个实施方案中，使用慢病毒载体。
在一个实施方案中，使用AAV载体。如本文所用，术语“AAV”涵盖所有血清型和变体(天然存在的形式和工程化形式两者)。例如，所述术语涵盖AAV 1型(AAV-1)、AAV 2型(AAV-2)、AAV 3型(AAV-3)、AAV 4型(AAV-4)、AAV 5型(AAV-5)、AAV 6型(AAV-6)、AAV 7型(AAV-7)、AAV 8型(AAV-8)和AAV 9型(AAV-9)。在一个实施方案中，载体是AAV6载体。在一个实施方案中，AAV是假型AAV，例如具有AAV6衣壳和来源于另一种AAV血清型的重组基因组(例如具有来自AAV2的ITR)的AAV。
重组病毒可通过本领域已知的技术产生，例如通过转染包装细胞或通过用辅助质粒或病毒瞬时转染。病毒包装细胞的典型实例包括PA317细胞、PsiCRIP细胞、GPenv+细胞、293细胞、293T细胞等。用于产生此类复制缺陷型重组病毒的详细方案可在本领域中找到。昆虫细胞也可用于产生重组病毒，例如重组AAV。
II.4.表达CAR的细胞
本公开还涉及免疫细胞和经工程化以在细胞表面上表达本文所述的CAR的免疫细胞群。
在一个实施方案中，免疫细胞是T细胞，例如调节性T细胞(Treg)、CD8+T细胞、CD4+T细胞或NK T细胞。
在一个实施方案中，免疫细胞是肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。
本公开还涉及分离的和/或基本上纯化的免疫细胞群，优选T细胞群，其包含经工程化以在细胞表面上表达本文所述的CAR的免疫细胞或由其组成。
在一个实施方案中，免疫细胞，优选T细胞对于在其表面上表达被CAR识别的IL-23R的细胞具有抑制性。
在一个实施方案中，免疫细胞，优选T细胞对于在其表面上表达被CAR识别的IL-23R的细胞具有细胞毒性。
在一个实施方案中，免疫细胞群，优选T细胞群包含Treg细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞和/或NK T细胞或由其组成。
在一个实施方案中，本公开的T细胞是Treg细胞。
在一个实施方案中，本公开的细胞群中的Treg细胞全部表达本文所述的CAR，并且因此可被定义为CAR单特异性的(即，所有Treg细胞识别相同的抗原(IL-23R))。在一个实施方案中，Treg细胞群是TCR单特异性的(即，所有Treg细胞用其TCR识别相同的抗原)。在另一实施方案中，Treg细胞群是TCR多特异性的(即，Treg细胞可用其TCR识别不同的抗原)。
在一个实施方案中，当由T(例如Treg)细胞表达时，本公开的CAR赋予T细胞与在细胞表面上表达IL-23R的细胞结合并通过与IL-23R结合而被激活的能力。
表达IL-23R的细胞的实例包括但不限于Th17细胞、αβT细胞、嗜中性粒细胞、γδT细胞、NK细胞、NK T细胞、树突状细胞和巨噬细胞。
因此，本公开的免疫细胞群(例如本公开的T(例如Treg)细胞群)可被定义为重定向免疫细胞群。如本文所用，术语“重定向”是指携带本文所述的CAR的免疫细胞，所述CAR赋予免疫细胞结合于配体并被配体激活的能力，所述配体与免疫细胞具有或将具有特异性或被激活的配体不同。
在一个实施方案中，本公开的Treg细胞没有细胞毒性。在另一实施方案中，本公开的Treg细胞有细胞毒性。
在一个实施方案中，本公开的Treg细胞可选自CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞、Tr1细胞、分泌TGF-β的Th3细胞、调节性NK T细胞、调节性γδT细胞、调节性CD8+T细胞和双负调节性T细胞。
在一个实施方案中，免疫细胞是CD4+Treg细胞。在一个实施方案中，Treg是胸腺源性Treg或适应性或诱导性Treg。在一个实施方案中，Treg细胞是CD4+FOXP3+Treg细胞，或CD4+FOXP3-调节性T细胞(Tr1细胞)。
在一个实施方案中，免疫细胞是CD8+Treg细胞。在一个实施方案中，CD8+Treg细胞选自由以下组成的组：CD8+CD28-Treg细胞、CD8+CD103+Treg细胞、CD8+FOXP3+Treg细胞、CD8+CD122+Treg细胞和其任何组合。在一个实施方案中，调节细胞是INFγ+IL10+IL34+CD8+CD45RC低Treg细胞。
在一个实施方案中，本公开的免疫细胞是人类Treg细胞。
在一个实施方案中，免疫细胞(例如T或Treg细胞)来源于干细胞，例如诱导多能干细胞(iPSC)。
如本文所用，术语“诱导多能干细胞”或“iPSC”是指通过去分化或重编程来源于非多能细胞(例如成体体细胞)的多能干细胞。特别地，iPSC可通过将一组特定的多能性相关基因(重编程因子)引入至细胞中来获得。重编程因子可以是例如转录因子Oct4(Pou5f1)、Sox2、c-Myc和Klf4。
在一个实施方案中，Treg细胞具有以下表型：CD4+CD25+，例如CD4+CD25+CD127-和CD4+CD25+CD127-CD45RA+。在一个实施方案中，Treg细胞具有以下表型：CD4+CD25+，例如CD4+CD25+CD127低和CD4+CD25+CD127低CD45RA+。在一个实施方案中，Treg细胞具有以下表型：CD4+CD25+，例如CD4+CD25+CD127低/-和CD4+CD25+CD127低/-CD45RA+。在一个实施方案中，Treg细胞具有以下表型：FOXP3+CD4+CD25+，例如FOXP3+CD4+CD25+CD127-和FOXP3+CD4+CD25+CD127-CD45RA+。在一个实施方案中，Treg细胞具有以下表型：FOXP3+CD4+CD25+，例如FOXP3+CD4+CD25+CD127低和FOXP3+CD4+CD25+CD127低CD45RA+。在一个实施方案中，Treg细胞具有以下表型：FOXP3+CD4+CD25+，例如FOXP3+CD4+CD25+CD127低/-和FOXP3+CD4+CD25+CD127低/-CD45RA+。
在一个实施方案中，Treg细胞具有以下表型：CD4+CD25高，例如CD4+CD25高CD127-和CD4+CD25高CD127-CD45RA+。在一个实施方案中，Treg细胞具有以下表型：CD4+CD25高，例如CD4+CD25高CD127低和CD4+CD25高CD127低CD45RA+。在一个实施方案中，Treg细胞具有以下表型：CD4+CD25高，例如CD4+CD25高CD127低/-和CD4+CD25高CD127低/-CD45RA+。在一个实施方案中，Treg细胞具有以下表型：FOXP3+CD4+CD25高，例如FOXP3+CD4+CD25高CD127-和FOXP3+CD4+CD25高CD127-CD45RA+。在一个实施方案中，Treg细胞具有以下表型：FOXP3+CD4+CD25高，例如FOXP3+CD4+CD25高CD127低和FOXP3+CD4+CD25高CD127低CD45RA+。在一个实施方案中，Treg细胞具有以下表型：FOXP3+CD4+CD25高，例如FOXP3+CD4+CD25高CD127低/-和FOXP3+CD4+CD25高CD127低/-CD45RA+。
在一个实施方案中，Treg细胞具有稳定的FOXP3表达，其与FOXP3基因座的内含子1内的保守区，Treg特异性去甲基化区(TSDR)处的选择性去甲基化和/或低甲基化相关。
分子的表达水平可通过流式细胞术、免疫荧光或图像分析来测定。为了检测胞内蛋白质，可在流式细胞术分析之前对细胞进行固定和透化。
在一个实施方案中，细胞群中分子的表达水平由表达所述分子的细胞群的细胞(即，对所述分子呈“+”的细胞)的百分比来指示。表达所述分子的细胞的百分比可通过FACS来测量。感兴趣的细胞标志物的表达水平可通过将来自用对特异于此标志物的荧光标记抗体染色的细胞群的细胞的中值荧光强度(MFI)与来自用具有不相关特异性但具有相同同种型、相同荧光探针且源自相同物种的荧光标记抗体染色的相同细胞群的细胞(称为同种型对照)的荧光强度(FI)进行比较来确定。来自用特异于此标志物的荧光标记抗体染色的群体并且显示出与用同种型对照染色的细胞相当的MFI或更低的MFI的细胞不表达此标志物，且接着被指定为(-)或阴性。来自用特异于此标志物的荧光标记抗体染色的群体并且显示出优于用同种型对照染色的细胞的MFI值的细胞表达此标志物，且接着被指定为(+)或阳性。
术语“表达”(即，“阳性”或“+”)和“不表达”(即，“阴性”或“-”)是指感兴趣的细胞标志物的表达水平，因为“+”对应的细胞标志物表达水平为高或中等，也称为“+/-”，并且“-”对应的细胞标志物表达水平为空。术语“低”或“lo”或“lo/-”或“低/-”是指感兴趣的细胞标志物的表达水平，因为与作为整体分析的细胞群中的细胞标志物的表达水平相比，所述细胞标志物的表达水平较低。更具体地，术语“Io”是指以比一个或多个其它不同细胞群低的水平表达细胞标志物的独特细胞群。术语“高”或“hi”或“亮”是指感兴趣的细胞标志物的表达水平，因为与作为整体分析的细胞群中的细胞标志物的表达水平相比，所述细胞标志物的表达水平较高。一般来说，染色强度前2％、3％、4％或5％的细胞被指定为“hi”，而属于群体上半部分的细胞被归类为“+”。荧光强度低于50％的细胞被指定为“lo”细胞，并且低于5％的细胞被指定为“-”细胞。
有利地，除了表现出良好的激活(高信号与背景比)和良好的抑制活性之外，还发现表达本公开的CAR的免疫细胞具有低基底信号传导(图3和图10)。
本文使用的术语“基底信号传导”是指不依赖于抗原的激活背景。用于测量基底信号传导的方法是本领域技术人员众所周知的，并且包括但不限于测量表达CAR的细胞的代谢活性，在不存在被受体识别的抗原刺激的情况下测量细胞激活的一种或多种指标，测量与细胞老化或细胞衰老相关的一种或多种表型变化，确定在不存在抗原刺激的情况下的细胞周期进展；并测量与未修饰细胞的大小相比，表达受体的细胞的大小。
与未转导的Treg细胞相比，监测CAR Treg细胞的CD69自发表达可确定基底信号强度。
如本文所证明，表达本发明的所述CAR构建体的工程化T细胞和工程化Treg细胞呈现低基底信号传导，并且在CAR接合后，工程化Treg细胞显示出对T效应细胞增殖的高效抑制活性，从而证明了这些Treg细胞用于细胞疗法的优势。
在一个实施方案中，本公开的CAR当由Treg细胞表达时，允许与针对IL-23R的其它CAR构建体相比减少所述Treg细胞的激活背景。
另外，已发现当表达CAR的细胞参与高水平的IL-23R表达时，与参与低水平的IL-23R表达时相比，表达本公开的CAR的免疫细胞具有更强的抑制活性(图12)。因此，预期本公开的CAR将减少脱靶活性。
在一个实施方案中，本公开的CAR当由Treg细胞表达时，允许与针对IL-23R的其它CAR构建体相比减少所述Treg细胞的脱靶活性。
III.组合物、药物组合物、药物
本公开的另一个目标是一种组合物，其包含以下、基本上由以下组成或以下其组成：至少一种如本文所述的结合于IL-23R的抗体或所述抗体的至少一个抗原结合片段，或至少一种编码根据本公开的抗体或所述抗体的抗原结合片段的核酸或载体。
本公开的另一个目标是一种组合物，其包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：包含根据本公开的CAR的至少一种免疫细胞或至少一种免疫细胞群。
在一个实施方案中，所述组合物是药物组合物并且还包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
因此，本公开的另一个目标是一种药物组合物，其包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：包含根据本公开的CAR的至少一种免疫细胞或至少一种免疫细胞群，以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
如本文所用，关于组合物，“基本上由......组成”意指至少一种抗体或其抗原结合片段、核酸或表达载体、或至少一种免疫细胞或免疫细胞群是所述组合物中唯一的治疗剂或具有生物活性的药剂。
术语“药学上可接受的赋形剂”是指溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、缓冲剂、等渗剂、稳定剂、防腐剂、吸收延迟剂等。当施用于诸如人类的受试者时，所述赋形剂不会产生有害反应、过敏反应或其它不良反应。
可用于本公开的组合物中的药学上可接受的赋形剂的实例包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(例如人血清白蛋白)、缓冲剂(例如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质(例如氯化钠、硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾和锌盐)以及聚乙二醇。
在一个实施方案中，根据本公开的药物组合物包含药学上适合注射的媒剂。这些可以是例如等渗的无菌盐溶液(包含例如磷酸一钠或磷酸二钠；氯化钠、氯化钾、氯化钙或氯化镁；或这些盐的混合物)；或干燥(例如冷冻干燥)组合物，其在添加合适的载体(例如无菌水或生理盐水)后允许构成注射溶液。
本公开的另一个目标是一种药物，其包含以下、基本上由以下组成或以下其组成：至少一种如本文所述的结合于IL-23R的抗体或所述抗体的至少一个抗原结合片段，或至少一种编码根据本公开的抗体或所述抗体的抗原结合片段的核酸或载体。
本公开的另一个目标是一种药物，其包含表达本公开的CAR的免疫细胞群体、基本上由其组成、或由其组成。
IV.施用途径
在一个实施方案中，根据本公开的组合物、药物组合物或药物在肠胃外、通过吸入喷雾、经直肠、经鼻或通过植入储库施用。
在一个实施方案中，组合物、药物组合物或药物通过注射施用，包括但不限于皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。
适于注射的形式的实例包括但不限于溶液，例如无菌水溶液、凝胶、分散液、乳液、悬浮液、适用于在使用前添加液体后制备溶液或悬浮液的固体形式(例如粉末)、脂质体形式等。
V.剂量
在一个实施方案中，根据本公开的分离的抗体或其抗原结合片段、核酸、表达载体、免疫细胞或免疫细胞群、组合物、药物组合物或药物将以治疗有效量施用于有需要的受试者。
然而，应理解，治疗有效量和给药频率将由主治医师在合理的医学判断范围内决定。对于任何特定患者的具体治疗有效剂量水平将取决于多种因素，包括所治疗的疾病和疾病的严重程度；所使用的分离的抗体或其抗原结合片段、核酸、表达载体或免疫细胞的活性；受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所用具体治疗剂的施用时间、施用途径和排泄率；治疗的持续时间；与所用具体治疗剂组合或同时使用的药物；以及医学领域众所周知的类似因素。例如，化合物的起始剂量水平低于需要实现所需的治疗效果并逐渐增加剂量直至实现所需效果的剂量水平完全在本领域技术范围之内。每次治疗所需的总剂量可通过多剂量或单剂量施用。
在一个实施方案中，受试者(例如人类)接受本公开的免疫细胞或免疫细胞群的单次施用。
在一个实施方案中，受试者(例如人类)接受本公开的免疫细胞或免疫细胞群的至少两次施用。
在一个实施方案中，每周一次、每月一次或每年一次向受试者施用免疫细胞群。
在一个实施方案中，施用于受试者的免疫细胞的数量范围为约102至约109、约103至约108、约104至约107、或约105至约106。
在一个实施方案中，将免疫细胞与至少一种其它活性剂组合施用于有需要的受试者。在一个实施方案中，所述活性剂是可用于治疗IL-23R相关疾病或病症的药剂。其它活性剂的实例包括但不限于糖皮质激素(包括但不限于地塞米松(dexamethasone)、泼尼松(prednisone)、泼尼松龙(prednisolone)、甲泼尼龙(methylprednisolone)、倍他米松(betamethasone)、贝多米松(bedomethasone)、替索可托(tixocortol)、曲安西龙(triamcinolone)、氢化可的松(hydrocortisone)、布地奈德(budesonide)或氟氢可的松(fludrocortisone))、人类细胞因子的抗体或拮抗剂或生长因子(例如抗-TNF，例如英夫利昔单抗(infliximab)、阿达木单抗(adalimumab)、赛妥珠单抗(certolizumab)、依那西普(etanercept)；抗IL1、抗IL-6、抗IL-12、抗IL-17和抗IL-23(例如布雷库单抗(brazikumab)、古塞库单抗(guselkumab)、米吉珠单抗(mirikizumab)、瑞莎珠单抗(risankizumab))、抗IL-12/IL-23(例如优特克单抗(ustekinumab))；或IL-1受体拮抗剂类似物(例如阿那白滞素(anakinra))、针对细胞表面分子的抗体(例如抗α4整联蛋白)(例如那他珠单抗(natalizumab))、抗整联蛋白β7(例如依曲珠单抗(etrolizumab))、抗α4-β7整联蛋白(例如维多珠单抗(vedolizumab))、抗CD2、抗CD3(例如维珠单抗)、抗CCR9、抗LFA1或抗ICAM1)；JAK抑制剂(例如非戈替尼(filgotinib)、乌帕替尼(upadacitinib))、S1PR调节剂(例如伊曲莫德(etrasimod)、奥扎莫德(ozanimod))、5氨基水杨酸和其类似物(例如美沙拉嗪、柳氮磺胺吡啶、奥沙拉嗪或巴柳氮)；益生菌(例如布拉酵母菌(Saccharomycesboulardii))、抗生素(例如甲硝唑氨苄西林、环丙沙星、RHB-104)、免疫调节剂(例如他克莫司(tacrolimus)、环孢素、甲氨蝶呤、沙利度胺(thalidomide)、来氟米特(leflunomide)和嘌呤类似物(例如硫唑嘌呤和6-巯基嘌呤)以及干细胞疗法(例如达瓦特塞(darvadstrocel))。
在一个实施方案中，施用本公开的免疫细胞或群体允许减少受试者接受的所述至少一种其它活性剂的量。
根据一个实施方案，至少一种免疫细胞群在施用至少一种其它活性剂之前、与其同时或在其之后施用。
VI.治疗用途
本公开还涉及结合于本文所述的IL-23R的至少一种分离的抗体或所述抗体的至少一种抗原结合片段，其用作药物或用于治疗有需要的受试者的疾病、病症或症状。
本公开涉及至少一种如本文所述的核酸或载体，其用作药物或用于治疗有需要的受试者的疾病、病症或症状。
本公开还涉及用于治疗有需要的受试者的疾病、病症或症状的方法，所述方法包括向受试者施用本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段、核酸或载体、或组合物、药物组合物、或药物。
在一个实施方案中，根据本公开的分离的抗体或其抗原结合片段、或者核酸或载体可用于治疗有需要的受试者的由表达IL-23R的细胞介导的疾病或病症(本文中也称为IL-23R相关疾病或病症)。
本公开的另一个目标是用于治疗有需要的受试者的由表达IL-23R的细胞介导的疾病或病症的细胞治疗方法，其中所述方法包括向受试者施用本文所述的免疫细胞，例如本文所述的Treg细胞。
在一个实施方案中，待施用的免疫细胞是自体细胞；换句话说，细胞疗法是自体细胞疗法。如本文所用，术语“自体”是指源自同一个体的任何材料，随后将所述材料重新引入至该个体。
在一个实施方案中，细胞疗法是异源细胞疗法。如本文所用，术语“异源”是指并非来源于待治疗的受试者而是来源于外部来源的任何材料，例如诱导多能干细胞(iPSC)或尸体来源的细胞。
在一个实施方案中，细胞疗法是异种的。如本文所用，术语“异种”是指来源于与材料所引入至的受试者不同物种的受试者的任何材料。
在另一实施方案中，待施用的免疫细胞是同种异体细胞；换句话说，细胞疗法是同种异体细胞疗法。如本文所用，术语“同种异体”是指来源于与材料所引入至的受试者相同物种的不同受试者的任何材料。当一个或多个基因座处的基因不相同时，两个或多个受试者被称为彼此同种异体。在另一实施方案中，免疫细胞来源于健康人类供体。
在一些实施方案中，本发明的遗传修饰的免疫细胞可以是同种异体免疫细胞。在这种情况下，可对细胞进行工程化以减少宿主对细胞的排斥(移植物排斥)和/或细胞对宿主的潜在攻击(移植物抗宿主病)。举例来说，细胞可被工程化以具有以下一者或多者的无效基因型：(i)T细胞受体(TCRα链或β链)；(ii)多态性主要组织相容性复合体(MHC)I类或II类分子(例如HLA-A、HLA-B或HLA-C；HLA-DP、HLA-DM、HLA-DOA、HLA-DOB、HLA-DQ或HLA-DR；或β2-微球蛋白(B2M))；(iii)与抗原加工相关的转运蛋白(例如TAP-1或TAP-2)；(iv)II类MHC反式激活因子(CIITA)；(v)次要组织相容性抗原(MiHA；例如HA-1/A2、HA-2、HA-3、HA-8、HB-1H或HB-1Y)；以及(vi)其任何组合。同种异体工程细胞还可表达不变的HLA或CD47以保护工程化Treg细胞免受宿主排斥。这些进一步的遗传修饰可通过本领域已知的基因编辑技术来进行。
经过进一步编辑的同种异体细胞特别有用，因为其可用于多个患者而不会出现相容性问题。因此同种异体细胞可被称为“通用”并且可“现成地”使用。“通用”细胞的使用大大提高了所采用细胞疗法的效率并降低了成本。
在某些实施方案中，同种异体免疫细胞可被工程化以使其在表面上不表达任何功能性TCR、被工程化以使其不表达包含功能性TCR的一个或多个亚基、或被工程化以使其在表面上产生非常少的功能性TCR。例如，可对本文所述的免疫细胞进行工程化，使得TCR分子的细胞表面表达下调。或者，T细胞可表达显著受损的TCR，例如通过表达TCR的一个或多个亚基的突变或截短形式。术语“显著受损的TCR”意指此TCR不会在宿主中引发不良免疫反应。
在某些实施方案中，同种异体免疫细胞可被工程化，使得其在表面上不表达功能性HLA。例如，可对本文所述的免疫细胞进行工程化，使得HLA(例如HLA 1类和/或HLA II类和/或非经典HLA分子)的细胞表面表达下调。
在某些实施方案中，T细胞可缺乏功能性TCR和功能性HLA，例如I类HLA和/或II类HLA。
缺乏功能性TCR和/或HLA表达的修饰的免疫细胞可通过任何合适的方法获得，包括敲除或敲低TCR和/或HLA的一个或多个亚基。例如，Treg细胞可包括使用以下各者对TCR和/或HLA的敲低：siRNA、shRNA、成簇规则间隔短回文重复序列(CRISPR)转录激活子样效应核酸酶(TALEN)、锌指核酸内切酶(ZFN)、大范围核酸酶(mn，也称为归巢核酸内切酶)或megaTAL(将TAL效应子与mn裂解域组合)。
在一些实施方案中，将编码本文所述的CAR的核酸插入免疫细胞基因组中的特定基因座处，例如待删除基因的基因座处。在一些实施方案中，将编码本文所述的CAR的核酸插入TCR和/或HLA基因座内，从而引起TCR和/或HLA表达的抑制。
本公开的另一个目标是用于治疗有需要的受试者的IL-23R相关疾病或病症的方法，其中所述方法包括向受试者施用至少一种本文所述的CAR，或至少一种编码本文所述的CAR的核酸或载体。在一个实施方案中，所述方法是基因治疗方法。
VII.IL-23R相关疾病
在一个实施方案中，IL-23R相关疾病或病症是促炎细胞介导的疾病或病症、Th17介导的疾病或病症或γδT介导的疾病或病症。
在一个实施方案中，表达IL-23R的细胞介导的疾病是自身免疫疾病或病症和/或炎症性疾病或病症。
IL-23R相关疾病的实例包括但不限于自身免疫疾病或病症、炎症性疾病或病症、过敏性疾病或病症以及癌症。
在一个实施方案中，所述表达IL-23R的细胞介导的疾病或病症选自炎症性肠病(例如克罗恩氏病和溃疡性结肠炎)、狼疮(例如全身性红斑狼疮)、关节炎(例如类风湿性关节炎和幼年特发性关节炎)、干燥综合征、全身性硬化症、强直性脊柱炎、1型糖尿病、自身免疫性甲状腺疾病、多发性硬化症、重症肌无力、银屑病性关节炎、皮肤病(例如银屑病和特应性皮炎)或葡萄膜炎。
在一个实施方案中，表达IL-23R的细胞介导的疾病或病症是克罗恩氏病。
VIII.制品
本公开的另一个目标是含有可用于治疗由表达IL-23R的细胞介导的疾病或病症的材料的制品。
所述制品可包括容器和在所述容器上或与所述容器相关联的标签或包装说明书。合适的容器包括例如袋子、瓶子、小瓶、注射器、小袋等。容器可由诸如玻璃或塑料的多种材料形成。
制品、标签或包装说明书还可包含用于向患者施用本公开的Treg细胞群的说明材料。
本公开提供了包含至少一种本公开的免疫细胞群的试剂盒。“试剂盒”意指包含至少一种本公开的Treg细胞群的任何制品(例如包装或容器)。试剂盒还可含有使用说明书。
除非本文另有定义，否则与本公开关联使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下文描述了示例性方法和材料，尽管与本文所述的方法和材料类似或等同的方法和材料也可用于本公开的实践或测试。如有冲突，则以本说明书(包括定义)为准。一般来说，本文所述的与心脏病学、医学、医药化学、细胞生物学、分子关联使用的术语和技术是本领域熟知和常用的那些。此外，除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数并且复数术语应包括单数。在整个本说明书和实施方案中，词语“具有(have)”和“包含(comprise)”或变化形式如“具有(has)”、“具有(having)”、“包含(comprises)”或“包含(comprising)”将被理解成意指包括所述的整数或整数组，但不排除任何其它整数或整数组。本文提及的所有出版物和其它参考文献均以引用的方式整体并入。尽管本文引用了许多文献，但此引用并不构成对这些文献中的任何文献构成本领域公知常识的一部分的承认。
如本文所用，应用于一个或多个感兴趣值的术语“大约”或“约”是指与规定的参考值类似的值。在某些实施方案中，所述术语是指在任一方向(大于或小于上)落入规定参考值的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更小的范围内的值，除非另有说明或从上下文中明显看出。
为了更好地理解本公开，列出了以下实施例。这些实施例仅用于说明目的，并且不被解释为以任何形式限制本公开的范围。
实施例
本公开通过以下实施例进一步说明。
实施例1：IL-23R-CAR主要候选药物的鉴定
材料和方法
PBMC分离
健康献血者的血液由Etablissementdu Sang(EFS)收集。采血后第二天，通过Ficoll梯度离心从血沉棕黄层中分离出外周血单核细胞(PBMC)，从而去除血液制品中不需要的部分，例如粒细胞、血小板和剩余的红细胞污染物。接着，如下分离感兴趣的细胞群：
FOXP3 Treg和CD4+CD25-常规T细胞分离
按照制造商说明书，使用人类CD4+CD127低CD25+调节性T细胞分离试剂盒(#18063；StemCell)分离CD4+CD25+CD127低Treg。简而言之，首先使用EasySepTMReleasableRapidSpheresTM通过无柱、免疫磁性阳性选择从400-500×106个PBMC中分离CD25+细胞。接着，从EasySepTM分离的CD25+细胞中去除结合的磁性颗粒，并针对不需要的非Treg进行清除。最终分离的级分含有高度纯化的CD4+CD127低CD25+细胞，所述细胞表达高水平的FOXP3，并立即用于下游应用。CD4+CD25-常规T细胞通过从试剂盒#18063(StemCell)中选择用于分离CD4+CD25-反应T细胞的可选方案来分离；与Treg并行用于功能研究。
分离的Treg的激活和培养
分离的Treg细胞被激活并培养9天。简而言之，在第0天，将Treg细胞(0.5×106)培养至24孔板(Costar)中，其中具有含人类转铁蛋白(OZYME)的Xvivo15无血清培养基，并补充有1000U/ml IL-2(Euromedex)加上100nM雷帕霉素(Sigma-Aldrich)。接着，使用LifeTechnology的(每孔0.5×106个珠粒)进行CD3/CD28激活。在第2、4和7天，用补充有1000U/ml IL-2的新鲜培养基喂养细胞。最后，在第9天，细胞被回收、计数并重新激活。
慢病毒载体的制备和滴定
使用经典的4质粒慢病毒系统产生表达CAR的慢病毒载体(LV)。简而言之，用表达CAR的转移载体、表达HIV-1 Gag/pol(pMDLg/pRRE)、HIV-1 Rev(pRSV.Rev)和VSV-G糖蛋白(pMD2.G)的质粒(Didier Trono,EPFL,Switzerland)转染HEK293T细胞(Lenti-X，Ozyme)。转染后24小时，收获病毒上清液，通过离心浓缩，等分并在-80℃下冷冻以长期储存。用连续稀释的病毒上清液转导Jurkat T细胞系后获得以每毫升转导单位(TU/ml)表示的感染滴度，并在4天后通过监测GFP表达来评估转导效率。
转导方案
Treg在用嵌合受体激活后2天进行转导(参见图1中的CAR构建体的示意图)。简而言之，通过向每孔装载2至5×106个转导单位(TU)/ml来进行转导。在37℃下6小时后，通过冲洗去除病毒颗粒。接着将板在37℃、5％ CO2下培育。转导后五天，分析转导效率：(i)通过分析流式细胞术中GFP阳性细胞的百分比来测量基因转移效率和(ii)通过分析流式细胞术中的血凝素A(HA)标签表达或蛋白质-L染色来测量在细胞表面处表达CAR的转导细胞的百分比。
用于转导的CAR构建体
设计了由CD8跨膜(TM)和CD28胞内域与CD3ζ胞内域串联构成并与针对IL-23R的scFv相关的IL-23R CAR。本研究中使用的构建体在图1中列出并描述。
转导的Treg的表型分析
在培养的第9天，使用表1中列出的标志物通过流式细胞术来分析Treg表型。
表1.用于Treg免疫表型分析的材料和试剂
试剂 制造商 参考
CD4 VioGreen Miltenyi 130-096-900
Helios eF450(HamIgG) eBioscience 48-9883-42
CD25PE Miltenyi 130-109-020
CD152(CTLA-4)PECy7(mIgG2a) Biolegend 369614
FOXP3 AF647(mIgG1) BD 560045
CD127-APC-Vio770 Miltenyi 130-109-438
CAR的激活测定
在培养的第9天进行激活测定。简而言之，将0.05×106个Treg如下地接种于96孔U型底板中：单独接种，或在抗CD3/抗CD28包被的珠粒(以1:1Treg与珠粒的比率)存在下，或在IL-23R包被的珠粒(以1:1Treg与珠粒的比率)存在下，最终体积为200μL。在37℃、5％CO2下放置24小时后，对细胞进行CD4和CD69染色，且接着使用流式细胞术进行分析。与未转导的Treg细胞相比，监测CAR Treg细胞中的CD69自发表达使我们能够确定基底信号传导强度。
T细胞增殖的抑制测定
抑制测定在培养第9天进行。简而言之，将Treg回收、计数并通过使用抗CD3/抗CD28包被的珠粒(以1:1Treg与珠粒的比率)的TCR，或通过CAR IL-23R包被的珠粒(以1:1Treg与珠粒的比率)激活，或保持不激活以评估其自发抑制活性。同时，将同种异体Tconv解冻，用Dye 450染色，并用抗CD3/抗CD28包被的珠粒(以3:1Tconv与珠粒的比率)激活。第二天，在与未激活或激活的Treg(未转导或转导)共培养之前，将珠粒从Tconv中取出。第3天，收获细胞，并通过流式细胞术通过测定染料450稀释度来评估Tconv的增殖。Tconv增殖抑制百分比计算如下：
动物
本研究中描述的所有程序均经过当地伦理委员会(CIEPAL)的审查和批准。实验针对8周龄雌性LY5.1小鼠进行。小鼠以六只为一组，每只小鼠都有独特的标识。在以下受控条件下将动物饲养于通风笼中(II型(16×19×35cm，占地面积＝500cm2))：(i)室温(22±2℃)，(ii)湿度测定(55±10％)，(iii)光周期(12:12小时光暗周期，上午7点:下午7点)，以及(iv)可随意获取水和食物(参考文献2018,Harlan France)。在实验开始前，使小鼠适应环境五天。
DSS诱发的急性结肠炎
在第0天至第5天(D0-D5)期间，向8周龄雌性LY5.1小鼠施用DSS(葡聚糖硫酸钠，40kDa，MP Biomedicals)。DSS(两种不同浓度)添加至每两天新鲜更换的饮用水中(随意)。在恢复期间(D5至D15)提供不含DSS的淡水。第5天，通过尾静脉注射从10周龄C57BL/6J小鼠的脾脏中分离出300万个CAR阳性Treg。用于转导小鼠Treg的CAR描述于图5中。每天根据四个参数对小鼠进行评分：体重减轻、粪便稠度、血液存在和收集粪便的时间，如下表2中所示。
表2.用于疾病活动指数的参数
收集粪便用于炎症标志物分析。第15天，通过颈椎脱臼处死小鼠并收集器官用于离体分析。
离体分析
组织消化
●在PBS中清洗结肠以去除粪便内容物，接着在37℃下在PBS 5mM EDTA中培育30分钟。将结肠在37℃下在含有2mg/mL胶原酶D和20μg/mL DNA酶的RPMI培养基中消化30分钟。接着将结肠通过细胞过滤器捣碎以获得单细胞悬浮液。接着洗涤细胞并重悬于3mLPBS-2％ FCS中，并涂铺200μL以进行抗体染色。
●通过细胞滤网将脾脏和肠系膜淋巴结捣碎以获得单细胞悬浮液。用1mL红细胞裂解缓冲液裂解红细胞2分钟。接着将细胞洗涤并分别重悬于5mL和1mL PBS-2％ FCS中，并涂铺200μL以进行抗体染色。
ELISA检测小鼠粪便中的脂质运载蛋白
每天收集粪便并在-20℃下冷冻。将粪便样品重悬于1mL 0.1％PBS Tween中，并以4000rpm离心20分钟。收获上清液并根据制造商说明书使用DuoSet ELISA MouseLipocalin-2/NGAL(DY1857-05)以1/1000铺板用于脂质运载蛋白检测。
多色流式细胞术分析
对器官中的细胞亚群染色以进行流式细胞术分析，如下所示：
表3.用于器官细胞亚群流式细胞术分析的材料和试剂
结果
细胞表面的转导效率和CAR表达
通过GFP阳性细胞的百分比评估转导效率，并使用重组蛋白-L、免疫球蛋白κ轻链结合蛋白或针对HA标签的抗体来监测CAR表达。表4中提供了转导效率百分比和在细胞表面处表达CAR的转导细胞百分比的结果。两种构建体均在细胞表面表达了超过95％的CAR。此外，代表每个细胞的CAR数量的平均荧光强度(MFI)是相似的。
表4.转导效率和CAR表达
在存在新的抗IL23R CAR#2的情况下观察到稳定的Treg表型
一般来说，工程化T细胞的主要挑战是确保维持所需的表型，尤其是因为已经证明CAR的高表达与非所需抗原非依赖性CAR激活有关(Frigault等人,Cancer ImmunolResearch(2015)3(4):356-67)。为了评估Treg表型在扩增和CAR接合过程中是否发生改变，对一组与Treg身份相关的标志物进行了分析。在FOXP3+Treg上评估了Helios和FOXP3表达以及与Treg表型相关的其它标志物的维持情况。IL-23R CAR-Treg在扩增后与第9天时维持FOXP3和Helios的高表达(图2A)，并且保持稳定直到使用IL-23R包被的珠粒接合CAR后11天(图2B)。
新的scFv源性CAR维持CAR特异性激活
与CAR构建体对照(CAR#1)相比，CAR#2构建体可降低Treg细胞的激活背景。如图3中所示，与导致60％ CD69+细胞的CAR#1相比，在不存在激活的情况下，CAR#2的CD69+IL-23RCAR-Treg细胞的百分比低得多。另外，使用抗CD3/抗CD28包被的珠粒激活IL-23R CAR-Treg细胞在CAR#2的情况下使CD69+细胞增加6.41倍，而在CAR#1的情况下仅增加1.52倍。
最后，使用IL-23R包被的珠粒的IL-23R CAR-Treg细胞激活在CAR#2的情况下增加3.6倍，而在CAR#1情况下仅增加1.33倍。这些结果显示了表达包含本公开的scFv的CAR构建体的Treg细胞优异的CAR介导的激活。
CAR#2表现出有效的CAR介导的抑制活性
对于CAR#2，与含有对照scFv的IL-23R CAR构建体(CAR#1)相比，我们观察到CAR特异性触发抑制活性(图4)。事实上，如图4中所示，表达CAR#1的Treg细胞的自发抑制活性(无Act条件)太强而无法突出特定的TCR或CAR介导的抑制活性。相比之下，在TCR接合后或在使用IL-23R配体激活CAR#2后，刺激表达CAR#2的Treg细胞允许有效的抑制活性。这些结果突出了本公开的scFv的优越性。
在DSS诱导的IBD小鼠模型中，具有新的scFv源性CAR的Treg在体内被激活并降低疾病活动指数
用图5中所述的不同构建体转导小鼠Treg细胞。已构建了包含新scFv(与人类和小鼠交叉反应)的小鼠CAR#2CD28(mCAR#2)的两种型式：(1)mCAR#2a，其包含与mCAR#1(小鼠CD28TM)相同的TM域；和(2)mCAR#2b，其包含小鼠CD8的TM域(与人类构建体CAR#2更相似)。
将用来源于对照scFv(mCAR#1)或本公开的scFv(mCAR#2a和2b)的小鼠CAR构建体转导的非转导(NT)或IL-23R-CAR小鼠Treg注射至短葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的炎症性肠病(IBD)小鼠模型中(图6A)。此模型是为了测量注射细胞的原位激活而开发的，并且是目标参与模型而不是功效模型。如图6B中所示，在体内结肠、肠系膜淋巴结和脾脏中发现了包含本公开的scFv(mCAR#2)的IL-23R CAR Treg。使用流式细胞术通过Treg上CTLA-4的表达来测量，在炎症部位(结肠和肠系膜淋巴结中)，这些Treg明显比未转导的细胞更活跃。有趣的是，mCAR#2b(包含与CD28胞内信号域相关的CD8 TM)仅在发炎器官(结肠和肠系膜淋巴结)中表现出显著激活，而在非发炎器官(脾脏)中则未被显著激活。
在DSS诱导的IBD功效模型中测试Treg后(图7A)，mCAR#2显示诱导疾病活动指数的显著降低(图7B)。
讨论
鉴定了CAR#2，一种IL-23R-CAR主要候选物(LamS4G3)。CAR#2是第2代CAR，由通过大型文库筛选鉴定出的抗IL-23R-scFv构成，所述筛选获得了超过100个与CD8TM/CD28/CD3z融合的潜在命中。此CAR显示出针对IL-23R的高度特异性，具有不可检测的基底信号传导，以及体外特定的CAR依赖性抑制活性。
实施例2：在人类Treg中体外选择优化的IL-23R CAR构建体
从实施例1中鉴定的CAR#2开始，通过改变启动子、前导序列、铰链长度和密码子优化进行了一些优化。从32个构建体的矩阵中选出6种不同的优化构建体，并在临床就绪的骨干中生产(不含HA标签和GFP)。
在本实施例中，基于若干参数(包括存活率、扩增倍数、Treg表型稳定性、CAR介导的激活和CAR介导的抑制)对那些不同的构建体进行了比较。
材料和方法
表达IL-23R的Jurkat细胞系的产生
Jurkat IL23R细胞系是通过嘌呤霉素选择性慢病毒载体在Jurkat细胞中过表达IL23R产生的。慢病毒载体在Jurkat细胞中产生并转导。
呈递rhuIL-23R的人工APC的产生
遵循制造商说明书，使用Dynabeads抗体偶联试剂盒(Life technology，ThermoFisher，目录号14311D)将Dynabeads(M-270Epoxy；ThermoFisher Scientific)与重组人类IL-23R Fc嵌合蛋白(R&D，目录号1400-IR-050)偶联。
PBMC和调节性T细胞分离
Treg和Tconv是从EFS(Marseille)的健康志愿者血液的血沉棕黄层中新鲜分离的。简而言之，献血后的第二天，通过Ficoll梯度离心从血沉棕黄层中分离外周血单核细胞(PBMC)。遵循以下程序分离CD4+/CD25+/CD127低nTreg细胞：使用EasySepTM ReleasableRapidSpheresTM通过无柱免疫磁性阳性选择分离CD25+细胞。接着，从EasySepTM分离的CD25+细胞中去除结合的磁性颗粒，并针对不需要的非Treg进行清除。最终分离的级分含有高度纯化的CD4+CD127低CD25+细胞，其表达高水平的FOXP3。
转导
本研究中使用的结构描述于表5中。
表5.抗IL-23R嵌合抗原受体(CAR)构建体
转导在24孔板中进行。简而言之，在分离和激活后第2天，从每孔中移除2/3的培养基，并且每孔添加2-5×10E6TU/ml的每种构建体。在37℃下6小时后，每孔添加2/3的新鲜培养基，并且将每孔均质化，回收至管中并离心。移除上清液，将每个沉淀物重悬于补充有1000U/ml IL-2的新鲜培养基中，然后接种至新板中。转导后4-5天，通过以流式细胞术分析IgG*阳性细胞的百分比来测量功效。
在培养的第9天，遵循STF-TRB-01-E009 V02程序来分析Treg表型。用于此分析的标志物列于更新的表6中。
表6.用于Treg免疫表型分析的标志物
激活测定
在培养的第10天，进行激活测定。简而言之，将0.05×10^6个CAR-Treg如下地接种于PL96 U型底部：单独接种，或在抗CD28/抗CD3包被的珠粒(1:1Treg与珠粒的比率)的存在下，或在IL-23R包被的珠粒(1:1Treg与珠粒的比率)存在下，或在细胞表面表达低水平(Jurkat 572)或高水平IL-23R(Jurkat 573)的Jurkat存在下，最终体积为200μl。在37℃、5％ CO2下放置24小时后，对细胞进行CD4和CD69染色，且接着以流式细胞术进行分析。
抑制测定
在第10天进行抑制测定，将CAR-Treg收获、计数并通过使用抗CD28/抗CD3包被的珠粒(以2:1Treg与珠粒的比率)的TCR，或通过使用IL-23R包被的珠粒(以1:1Treg与珠粒的比率)或在细胞表面表达低水平(Jurkat 572)或高水平(Jurkat 573)IL-23R的Jurkat细胞系的CAR激活，或保持未激活以根据功能活动评估其基础。同时，将同种异体Tconv解冻，用Dye 450染色，并用抗CD28/抗CD3包被的珠粒(以3:1Tconv与珠粒的比率)激活。第二天，在与未激活或激活的Treg共培养之前，将珠粒从Tconv中取出。共培养3天后，以流式细胞术分析Tconv的增殖。
结果
相似的转导效率
所选的CAR涵盖从低到高的CAR表达水平，没有可检测的背景/基底信号传导，并且涵盖不同的生物元件(信号肽/密码子/接头/WPRE)。所述研究中使用的构建体是在临床就绪的骨干中生成和生产的(不含HA标签和GFP)。在使用抗IgG抗体测量IgG阳性细胞的百分比的流式细胞术中评估转导效率，并通过IgG染色的平均荧光强度(MFI)评估细胞表面的CAR表达水平(图8)。不同构建体的转导率在40-50％之间。
不同的优化构建体在第一个培养周期后突显了相同的存活率和扩增倍数。
还评估了不同变化对CAR-Treg在培养中的行为的影响。无论变化如何，用不同构建体转导的Treg在第9天显示出相同的存活率水平(图9，左侧)和扩增倍数(图9，右侧)。
CAR#3在CAR激活后显示出最低的激活背景和最高的信噪比。
评估了不同优化对CAR-Treg激活的影响(图10)。CAR#3、CAR#4、CAR#5、CAR#6和CAR#7的CAR介导的激活概况接近于非优化构建体(CAR#2)的概况。然而，CAR#3的激活背景略低于CAR#2，突显了最佳信号与噪声。
显著的CAR介导的抑制
测量了CAR构建体的CAR介导的抑制活性(图11)。使用人工APC(IL-23R包被的珠粒；bIL-23R)或低表达(Jurkat 572)或高表达(Jurkat 573)Jurkat细胞系诱导CAR接合。作为阳性对照，我们使用多克隆激活(抗CD3/抗CD28包被的珠粒；珠粒CD3/28)。自发抑制是在没有任何激活(无)的情况下测量的。与激活数据一样，CAR#3、CAR#4、CAR#5、CAR#6和CAR#7的概况接近于非优化构建体CAR#2的概况。当使用人工APC(图11A和11B)或高表达IL-23RJurkat细胞系(图11A)接合CAR时，所有构建体均能够介导稳健的CAR介导的抑制活性。所有构建体均突显非常低的自发抑制活性。
计算CAR#2和CAR#3的曲线下面积(图12)。AUC计算突显当Treg与在细胞表面表达高水平IL-23R的Jurkat结合时，CAR#3显示出与CAR#2相同的CAR介导的抑制(Jurkat 573)。然而，当CAR Treg与表达低水平的Jurkat(Jurkat 572)结合时，CAR#3显示出比CAR#2更低的CAR介导的抑制。此概况应减少脱靶效应。
Treg稳定性-所有构建体均显示出良好的Treg表型稳定性
可塑性是Treg的一个充分描述的特征。Treg身份的主要标志物是CD4、CD25、CTLA-4、FoxP3和Helios。为了测量CAR Treg的表型稳定性，在第一个扩增周期结束时(第9天)通过流式细胞术分析这些标志物的表达(图13)。使用不同的CAR后，未观察到主要Treg标志物发生改变。
讨论
不同构建体之间的差异非常微小，突显了标准CAR#2足够强大以承担不同的变化。
然而，CAR#3构建体基于以下参数脱颖而出：
-比CAR#2更低的基底信号，导致更高的信号与噪声(图10)
-当Treg与在细胞表面表达高水平IL-23R的Jurkat接合时，CAR介导的抑制与CAR#2相同，而当CAR Treg与表达低水平IL-23R的Jurkat接合时，CAR介导的抑制低于CAR#2(图12)。此应减少脱靶。
实施例3：IL23R-CAR：scFv(LamS4G3)亲和力表征
材料和方法
所指示的scFV在哺乳动物293t细胞中产生、纯化并生物素化。接着将生物素化的scFv与小鼠或人类IL23Ra包被的珠粒一起在25℃下在PBS中培育30分钟。冷洗涤后，通过与APC标记的链霉亲和素一起培育并在流式细胞仪上分析样品来检测结合的IL23R结合scFV。EC50是根据每个条件的中值荧光强度计算的。通过Graphpad Prism进行计算、曲线拟合和EC50计算。
结果
结合实验显示与人类IL23R的高亲和力结合，EC50为37.6nM，以及与小鼠IL23Ra几乎相似的亲和力，EC50为53.1nM。相比之下，也具有交叉反应性的参考scFv导致与人类IL23R的4.4Nm的更高亲和力结合以及与小鼠IL23R的13.1nM的更显著差异(图14)。
在这些示例性结果中，本公开的CAR在人类与小鼠IL23R同源物之间表现出相似的结合概况。在这些示例性结果中，本公开的CAR#2证明人类IL23R与小鼠IL23R之间的结合亲和力有约1.4倍的差异，而CAR#1证明人类IL23R与小鼠IL23R之间的结合亲和力有约3倍的差异。这些示例性结果表明，与CAR#1相比，本公开的CAR#2以更相似的亲和力结合于人类和小鼠IL23R。这种相似性指示，在小鼠临床前模型中使用CAR#2可能更能代表其与人类IL23R的相互作用。
实施例4：scFv信号传导的稳定性
材料和方法
用不同的表达盒(PGK或EF1a启动子，+/-WPRE Mut6)产生四(4)个不同的构建体，并通过慢病毒转导将其转导至原代人类Treg中(图15)。
结果
所选的IL-23R scFv在原代Treg细胞中的相似表达水平下表现出稳定的信号传导和低背景(图16)。
表达增加与细胞表面处的CAR积累增加相关。虽然表达水平变化5倍，但与未修饰的对照细胞(CAR基底信号传导图中的水平深灰色线)相比，未观察到背景差异(图16)。另外，所有CAR表达条件对CAR依赖性激活以及用CD3/CD28珠粒控制激活反应同样强烈(图16)。
序列表
序列表
<110> 桑格摩生物治疗股份有限公司(SANGAMO THERAPEUTICS, INC.)
<120> IL-23R特异性抗原结合剂和其用途
<130> 025297.WO038
<140> US 63/214,950
<141> 2021-06-25
<140> EP 21181801.8
<141> 2021-06-25
<160> 58
<170> PatentIn第3.5版
<210> 1
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /附注=“人工序列的描述：合成肽”
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> /附注=“人工序列的描述：合成肽”
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<223> /附注=“人工序列的描述：合成肽”
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Thr Ser Ser
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<221> 来源
<223> /附注=“关于取代和优选实施例的详细描述，参见所提交的说明书”
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1
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<221> 来源
<223> /附注=“人工序列的描述：合成肽”
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<223> /附注=“人工序列的描述：合成肽”
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Gly Gly Gly Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> /附注=“人工序列的描述：合成多肽”
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<223> /附注=“人工序列的描述：合成多核苷酸”
<400> 16
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acgtgcaccg tgagcggcgg cagcatcacc agcagcaact actactgggg ctggatacga 120
cagccccctg gaaagggcct agagtggatc ggcagcatct actacagcgg caacacctac 180
tacaacccca gcctgaagag cagagtcacc atcagcgtgg acaccagcaa gaaccagttc 240
agcctgaagc tgagcagcgt gaccgccgcc gacacagctg tttactattg tgccagagag 300
tggagcccct acgagagcga gggcttcgac tactggggcc aggggaccct ggtgaccgtt 360
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /附注=“人工序列的描述：合成多核苷酸”
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caggccgagg acgaggccga ctactactgt cagagctacg acaccggcct gagcgcctgg 300
gtttttggtg gaggcacaaa actgacagtg ctg 333
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /附注=“人工序列的描述：合成寡核苷酸”
<400> 18
ggaggcggag gttctggcgg cggaggaagt ggtggcggag gctca 45
<210> 19
<211> 744
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /附注=“人工序列的描述：合成多核苷酸”
<400> 19
cagagcgtgc tgacacagcc tccatctgtt tctggcgccc ctggccagag agtgaccatc 60
tcttgtactg gcagcagctc caacattgga gccggctatg acgtgcactg gtaccagcag 120
ctgcctggca cagcccctaa actgctgatc tacggcaaca acaacagacc cagcggcgtg 180
cccgacagat tttctggctc caagagcggc acaagcgcca gcctggctat tactggactg 240
caggccgagg acgaggccga ctactactgt cagagctacg acaccggcct gagcgcctgg 300
gtttttggtg gaggcacaaa actgacagtg ctgggaggcg gaggttctgg cggcggagga 360
agtggtggcg gaggctcaca gctgcagcta caggagagcg gccccggcct ggtgaaacct 420
tctgagaccc tgagcctgac gtgcaccgtg agcggcggca gcatcaccag cagcaactac 480
tactggggct ggatacgaca gccccctgga aagggcctag agtggatcgg cagcatctac 540
tacagcggca acacctacta caaccccagc ctgaagagca gagtcaccat cagcgtggac 600
accagcaaga accagttcag cctgaagctg agcagcgtga ccgccgccga cacagctgtt 660
tactattgtg ccagagagtg gagcccctac gagagcgagg gcttcgacta ctggggccag 720
gggaccctgg tgaccgtttc ttct 744
<210> 20
<211> 45
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 20
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
1 5 10 15
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
20 25 30
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
35 40 45
<210> 21
<211> 135
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 21
acaacaacac ctgctcctcg gcctcctaca ccagctccta caattgccag ccagccactg 60
tctctgaggc ccgaagcttg caggcctgct gctggcggag ccgtgcatac aagaggactg 120
gatttcgcct gcgac 135
<210> 22
<211> 24
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 22
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys
20
<210> 23
<211> 72
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 23
atctacatct gggcacctct ggctggaacc tgtggcgtgc tgctgctgag cctggtcatc 60
accctgtatt gc 72
<210> 24
<211> 27
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 24
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25
<210> 25
<211> 81
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 25
ttttgggtgc tggtggtggt tggtggagtc ctggcttgct atagcttgct agtaacagtg 60
gcctttatta ttttctgggt g 81
<210> 26
<211> 27
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 26
Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu
1 5 10 15
Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val
20 25
<210> 27
<211> 81
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 27
atcatctcct tctttcttgc gctgacctcg actgcgttgc tcttcctgct gttcttcctc 60
acgctccgtt tctctgttgt t 81
<210> 28
<211> 30
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 28
Phe Ala Leu Pro Val Gly Leu Ile Val Gly Val Thr Ala Leu Gly Leu
1 5 10 15
Leu Ile Ile Gly Val Val Asn Cys Val Ile Met Thr Gln Val
20 25 30
<210> 29
<211> 90
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 29
ttcgctcttc cagttggact gattgtgggt gtgacagcct tgggtctact aataatagga 60
gtggtgaact gtgtcatcat gacccaggtg 90
<210> 30
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 30
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 31
<211> 336
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 31
agagtgaagt tcagcagatc cgccgacgct cctgcctatc agcagggcca aaaccagctc 60
tacaacgagc tgaacctggg gagaagagaa gagtacgacg tgctggacaa gcggagaggc 120
agagatcctg aaatgggcgg caagcccaga cggaagaatc ctcaagaggg cctgtataat 180
gagctacaga aagacaagat ggcagaggcc tacagcgaga tcggaatgaa gggcgagcgc 240
agaagaggca agggacacga tggactgtac cagggcctga gcaccgccac caaggatacc 300
tatgatgccc tgcacatgca ggccctgcct ccaaga 336
<210> 32
<211> 41
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 32
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 33
<211> 123
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 33
cggagcaaga gaagcagact gctgcacagc gactacatga acatgacccc tagacggccc 60
ggacctacca gaaagcacta ccagccttac gctcctccta gagacttcgc cgcctacaga 120
tcc 123
<210> 34
<211> 42
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 34
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 35
<211> 126
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 35
aaacggggca gaaagaaact cctgtatata ttcaaacaac catttatgag accagtacaa 60
actactcaag aggaagatgg ctgtagctgc cgatttccag aagaagaaga aggaggatgt 120
gaactg 126
<210> 36
<211> 48
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 36
Gln Arg Arg Lys Tyr Arg Ser Asn Lys Gly Glu Ser Pro Val Glu Pro
1 5 10 15
Ala Glu Pro Cys Arg Tyr Ser Cys Pro Arg Glu Glu Glu Gly Ser Thr
20 25 30
Ile Pro Ile Gln Glu Asp Tyr Arg Lys Pro Glu Pro Ala Cys Ser Pro
35 40 45
<210> 37
<211> 144
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 37
caacgaagga aatatagatc aaacaaagga gaaagtcctg tggagcctgc agagccttgt 60
cgttacagct gccccaggga ggaggagggc agcaccatcc ccatccagga ggattaccga 120
aaaccggagc ctgcctgctc cccc 144
<210> 38
<211> 174
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 38
Lys Lys Lys Pro Leu Cys Leu Gln Arg Glu Ala Lys Val Pro His Leu
1 5 10 15
Pro Ala Asp Lys Ala Arg Gly Thr Gln Gly Pro Glu Gln Gln His Leu
20 25 30
Leu Ile Thr Ala Pro Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu Glu Ser Ser Ala
35 40 45
Ser Ala Leu Asp Arg Arg Ala Pro Thr Arg Asn Gln Pro Gln Ala Pro
50 55 60
Gly Val Glu Ala Ser Gly Ala Gly Glu Ala Arg Ala Ser Thr Gly Ser
65 70 75 80
Ser Asp Ser Ser Pro Gly Gly His Gly Thr Gln Val Asn Val Thr Cys
85 90 95
Ile Val Asn Val Cys Ser Ser Ser Asp His Ser Ser Gln Cys Ser Ser
100 105 110
Gln Ala Ser Ser Thr Met Gly Asp Thr Asp Ser Ser Pro Ser Glu Ser
115 120 125
Pro Lys Asp Glu Gln Val Pro Phe Ser Lys Glu Glu Cys Ala Phe Arg
130 135 140
Ser Gln Leu Glu Thr Pro Glu Thr Leu Leu Gly Ser Thr Glu Glu Lys
145 150 155 160
Pro Leu Pro Leu Gly Val Pro Asp Ala Gly Met Lys Pro Ser
165 170
<210> 39
<211> 522
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 39
aaaaagaagc ccttgtgcct gcagagagaa gccaaggtgc ctcacttgcc tgcagataag 60
gccaggggta cacagggtcc cgagcagcag cacctcctga tcacagcgcc gagctccagc 120
agcagctccc tggagagctc ggccagtgcg ctagacagaa gggcccccac tcggaaccag 180
ccacaggcac caggcgtgga ggcgagtggg gctggggagg cgagggcaag caccgggagc 240
tcagattctt cccctggtgg tcatggcacc caggtcaatg tcacctgtat cgtgaacgtc 300
tgtagcagct ctgaccacag ctcacagtgc tcctcccaag cctcgtccac aatgggagac 360
acagattcca gcccctcgga gtccccgaag gacgagcaag tacccttctc caaggaggaa 420
tgtgcctttc ggtcacagct ggagacgcca gagaccctgc tggggagcac cgaagagaag 480
cccctgcccc ttggagtgcc tgatgctggg atgaagccca gt 522
<210> 40
<211> 21
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 40
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro
20
<210> 41
<211> 63
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 41
atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttcttca tgccgccaga 60
cca 63
<210> 42
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /附注=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 42
Ser Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala Ser
1 5 10
<210> 43
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /附注=“人工序列的描述：合成寡核苷酸”
<400> 43
tcttacccct acgatgtgcc tgattatgca tct 33
<210> 44
<211> 470
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /附注=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 44
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gly Asn Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Thr Gly
85 90 95
Leu Ser Ala Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Leu
115 120 125
Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Thr Ser Ser Asn Tyr
145 150 155 160
Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
165 170 175
Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
180 185 190
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
195 200 205
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
210 215 220
Arg Glu Trp Ser Pro Tyr Glu Ser Glu Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro
245 250 255
Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro
260 265 270
Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu
275 280 285
Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys
290 295 300
Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Arg Ser Lys
305 310 315 320
Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg
325 330 335
Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp
340 345 350
Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala
355 360 365
Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu
370 375 380
Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp
385 390 395 400
Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu
405 410 415
Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile
420 425 430
Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr
435 440 445
Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met
450 455 460
Gln Ala Leu Pro Pro Arg
465 470
<210> 45
<211> 1410
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /附注=“人工序列的描述：合成多核苷酸”
<400> 45
cagagcgtgc tgacacagcc tccatctgtt tctggcgccc ctggccagag agtgaccatc 60
tcttgtactg gcagcagctc caacattgga gccggctatg acgtgcactg gtaccagcag 120
ctgcctggca cagcccctaa actgctgatc tacggcaaca acaacagacc cagcggcgtg 180
cccgacagat tttctggctc caagagcggc acaagcgcca gcctggctat tactggactg 240
caggccgagg acgaggccga ctactactgt cagagctacg acaccggcct gagcgcctgg 300
gtttttggtg gaggcacaaa actgacagtg ctgggaggcg gaggttctgg cggcggagga 360
agtggtggcg gaggctcaca gctgcagcta caggagagcg gccccggcct ggtgaaacct 420
tctgagaccc tgagcctgac gtgcaccgtg agcggcggca gcatcaccag cagcaactac 480
tactggggct ggatacgaca gccccctgga aagggcctag agtggatcgg cagcatctac 540
tacagcggca acacctacta caaccccagc ctgaagagca gagtcaccat cagcgtggac 600
accagcaaga accagttcag cctgaagctg agcagcgtga ccgccgccga cacagctgtt 660
tactattgtg ccagagagtg gagcccctac gagagcgagg gcttcgacta ctggggccag 720
gggaccctgg tgaccgtttc ttctacaaca acacctgctc ctcggcctcc tacaccagct 780
cctacaattg ccagccagcc actgtctctg aggcccgaag cttgcaggcc tgctgctggc 840
ggagccgtgc atacaagagg actggatttc gcctgcgaca tctacatctg ggcacctctg 900
gctggaacct gtggcgtgct gctgctgagc ctggtcatca ccctgtattg ccggagcaag 960
agaagcagac tgctgcacag cgactacatg aacatgaccc ctagacggcc cggacctacc 1020
agaaagcact accagcctta cgctcctcct agagacttcg ccgcctacag atccagagtg 1080
aagttcagca gatccgccga cgctcctgcc tatcagcagg gccaaaacca gctctacaac 1140
gagctgaacc tggggagaag agaagagtac gacgtgctgg acaagcggag aggcagagat 1200
cctgaaatgg gcggcaagcc cagacggaag aatcctcaag agggcctgta taatgagcta 1260
cagaaagaca agatggcaga ggcctacagc gagatcggaa tgaagggcga gcgcagaaga 1320
ggcaagggac acgatggact gtaccagggc ctgagcaccg ccaccaagga tacctatgat 1380
gccctgcaca tgcaggccct gcctccaaga 1410
<210> 46
<211> 43
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus sp.)
<400> 46
Thr Thr Thr Lys Pro Val Leu Arg Thr Pro Ser Pro Val His Pro Thr
1 5 10 15
Gly Thr Ser Gln Pro Gln Arg Pro Glu Asp Cys Arg Pro Arg Gly Ser
20 25 30
Val Lys Gly Thr Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
35 40
<210> 47
<211> 129
<212> DNA
<213> 小家鼠(Mus sp.)
<400> 47
actactacca agccagtgct gcgaactccc tcacctgtgc accctaccgg gacatctcag 60
ccccagagac cagaagattg tcggccccgt ggctcagtga aggggaccgg attggacttc 120
gcctgtgat 129
<210> 48
<211> 36
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus sp.)
<400> 48
Ile Glu Phe Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Arg Ser Asn
1 5 10 15
Gly Thr Ile Ile His Ile Lys Glu Lys His Leu Cys His Thr Gln Ser
20 25 30
Ser Pro Lys Leu
35
<210> 49
<211> 108
<212> DNA
<213> 小家鼠(Mus sp.)
<400> 49
atcgagttca tgtaccctcc accttacctg gacaacgaga gaagcaacgg caccatcatc 60
cacatcaaag agaagcacct ctgtcacacc cagagcagcc ccaagctg 108
<210> 50
<211> 26
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus sp.)
<400> 50
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Ile Cys Val Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Leu Ile Ile Thr Leu Ile Cys Tyr Thr
20 25
<210> 51
<211> 78
<212> DNA
<213> 小家鼠(Mus sp.)
<400> 51
atttacatct gggcaccctt ggccggaatc tgcgtggccc ttctgctgtc cttgatcatc 60
actctcatct gctacaca 78
<210> 52
<211> 27
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus sp.)
<400> 52
Phe Trp Ala Leu Val Val Val Ala Gly Val Leu Phe Cys Tyr Gly Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Val Ala Leu Cys Val Ile Trp Thr
20 25
<210> 53
<211> 81
<212> DNA
<213> 小家鼠(Mus sp.)
<400> 53
ttttgggctc ttgtggtggt ggctggcgtg ctgttttgtt acggcctgct ggtcacagtg 60
gccctgtgtg tgatttggac c 81
<210> 54
<211> 41
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus sp.)
<400> 54
Asn Ser Arg Arg Asn Arg Gly Gly Gln Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Leu Thr Arg Lys Pro Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Ala Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Pro
35 40
<210> 55
<211> 123
<212> DNA
<213> 小家鼠(Mus sp.)
<400> 55
aacagcagaa gaaacagagg cggacagagc gactacatga acatgacccc tagacggcct 60
ggcctgacaa gaaagcccta ccagccttac gctcccgcca gagatttcgc cgcctacaga 120
cct 123
<210> 56
<211> 113
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus sp.)
<400> 56
Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn Leu Gln Asp
1 5 10 15
Pro Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn Ala Leu Gln
50 55 60
Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr Lys Gly Glu
65 70 75 80
Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr
85 90 95
Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Thr Leu Ala Pro
100 105 110
Arg
<210> 57
<211> 342
<212> DNA
<213> 小家鼠(Mus sp.)
<400> 57
agagccaagt tcagcagatc cgccgaaaca gccgccaact tgcaagatcc taaccagctg 60
tacaacgagc tgaacctggg gagaagagaa gagtacgacg tgctggaaaa gaagagggcc 120
agagatccag agatgggcgg caagcagcag agaagaagaa accctcaaga gggcgtgtac 180
aacgctctgc aaaaagacaa gatggccgag gcctacagcg agatcggaac taagggcgaa 240
cgcagaagag gcaagggcca cgatggactg taccagggcc tgagcacagc caccaaggac 300
acatacgatg ccctgcacat gcagacactg gcccctagat ag 342
<210> 58
<211> 21
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 58
Met Asp Ser Tyr Leu Leu Met Trp Gly Leu Leu Thr Phe Ile Met Val
1 5 10 15
Pro Gly Cys Gln Ala
20
<210> 59
<211> 63
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 59
atggattcat acctgctgat gtggggactg ctcacgttca tcatggtgcc tggctgccag 60
gca 63
<210> 60
<211> 20
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 60
Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly
20
<210> 61
<211> 60
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 61
atggaaaccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga 60
<210> 62
<211> 1188
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 62
cgtgaggctc cggtgcccgt cagtgggcag agcgcacatc gcccacagtc cccgagaagt 60
tggggggagg ggtcggcaat tgaaccggtg cctagagaag gtggcgcggg gtaaactggg 120
aaagtgatgt cgtgtactgg ctccgccttt ttcccgaggg tgggggagaa ccgtatataa 180
gtgcagtagt cgccgtgaac gttctttttc gcaacgggtt tgccgccaga acacaggtaa 240
gtgccgtgtg tggttcccgc gggcctggcc tctttacggg ttatggccct tgcgtgcctt 300
gaattacttc cacgcccctg gctgcagtac gtgattcttg atcccgagct tcgggttgga 360
agtgggtggg agagttcgag gccttgcgct taaggagccc cttcgcctcg tgcttgagtt 420
gaggcctggc ctgggcgctg gggccgccgc gtgcgaatct ggtggcacct tcgcgcctgt 480
ctcgctgctt tcgataagtc tctagccatt taaaattttt gatgacctgc tgcgacgctt 540
tttttctggc aagatagtct tgtaaatgcg ggccaagatc tgcacactgg tatttcggtt 600
tttggggccg cgggcggcga cggggcccgt gcgtcccagc gcacatgttc ggcgaggcgg 660
ggcctgcgag cgcggccacc gagaatcgga cgggggtagt ctcaagctgg ccggcctgct 720
ctggtgcctg gcctcgcgcc gccgtgtatc gccccgccct gggcggcaag gctggcccgg 780
tcggcaccag ttgcgtgagc ggaaagatgg ccgcttcccg gccctgctgc agggagctca 840
aaatggagga cgcggcgctc gggagagcgg gcgggtgagt cacccacaca aaggaaaagg 900
gcctttccgt cctcagccgt cgcttcatgt gactccacgg agtaccgggc gccgtccagg 960
cacctcgatt agttctcgag cttttggagt acgtcgtctt taggttgggg ggaggggttt 1020
tatgcgatgg agtttcccca cactgagtgg gtggagactg aagttaggcc agcttggcac 1080
ttgatgtaat tctccttgga atttgccctt tttgagtttg gatcttggtt cattctcaag 1140
cctcagacag tggttcaaag tttttttctt ccatttcagg tgtcgtga 1188
<210> 63
<211> 516
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 63
tccacggggt tggggttgcg ccttttccaa ggcagccctg ggtttgcgca gggacgcggc 60
tgctctgggc gtggttccgg gaaacgcagc ggcgccgacc ctgggtctcg cacattcttc 120
acgtccgttc gcagcgtcac ccggatcttc gccgctaccc ttgtgggccc cccggcgacg 180
cttcctgctc cgcccctaag tcgggaaggt tccttgcggt tcgcggcgtg ccggacgtga 240
caaacggaag ccgcacgtct cactagtacc ctcgcagacg gacagcgcca gggagcaatg 300
gcagcgcgcc gaccgcgatg ggctgtggcc aatagcggct gctcagcagg gcgcgccgag 360
agcagcggcc gggaaggggc ggtgcgggag gcggggtgtg gggcggtagt gtgggccctg 420
ttcctgcccg cgcggtgttc cgcattctgc aagcctccgg agcgcacgtc ggcagtcggc 480
tccctcgttg accgaatcac cgacctctct ccccag 516
<210> 64
<211> 765
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /附注=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 64
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Ser Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala Ser
20 25 30
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
35 40 45
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
50 55 60
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
65 70 75 80
Leu Ile Tyr Gly Asn Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
85 90 95
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu
100 105 110
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Thr Gly
115 120 125
Leu Ser Ala Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Leu
145 150 155 160
Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu
165 170 175
Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Thr Ser Ser Asn Tyr
180 185 190
Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
195 200 205
Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
210 215 220
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
225 230 235 240
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
245 250 255
Arg Glu Trp Ser Pro Tyr Glu Ser Glu Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
260 265 270
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro
275 280 285
Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro
290 295 300
Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu
305 310 315 320
Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys
325 330 335
Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Arg Ser Lys
340 345 350
Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg
355 360 365
Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp
370 375 380
Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala
385 390 395 400
Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu
405 410 415
Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp
420 425 430
Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu
435 440 445
Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile
450 455 460
Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr
465 470 475 480
Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met
485 490 495
Gln Ala Leu Pro Pro Arg Ala Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser
500 505 510
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val
515 520 525
Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly Val Val Pro Ile Leu Val Glu
530 535 540
Leu Asp Gly Asp Val Asn Gly His Lys Phe Ser Val Ser Gly Glu Gly
545 550 555 560
Glu Gly Asp Ala Thr Tyr Gly Lys Leu Thr Leu Lys Phe Ile Cys Thr
565 570 575
Thr Gly Lys Leu Pro Val Pro Trp Pro Thr Leu Val Thr Thr Leu Thr
580 585 590
Tyr Gly Val Gln Cys Phe Ser Arg Tyr Pro Asp His Met Lys Gln His
595 600 605
Asp Phe Phe Lys Ser Ala Met Pro Glu Gly Tyr Val Gln Glu Arg Thr
610 615 620
Ile Phe Phe Lys Asp Asp Gly Asn Tyr Lys Thr Arg Ala Glu Val Lys
625 630 635 640
Phe Glu Gly Asp Thr Leu Val Asn Arg Ile Glu Leu Lys Gly Ile Asp
645 650 655
Phe Lys Glu Asp Gly Asn Ile Leu Gly His Lys Leu Glu Tyr Asn Tyr
660 665 670
Asn Ser His Asn Val Tyr Ile Met Ala Asp Lys Gln Lys Asn Gly Ile
675 680 685
Lys Val Asn Phe Lys Ile Arg His Asn Ile Glu Asp Gly Ser Val Gln
690 695 700
Leu Ala Asp His Tyr Gln Gln Asn Thr Pro Ile Gly Asp Gly Pro Val
705 710 715 720
Leu Leu Pro Asp Asn His Tyr Leu Ser Thr Gln Ser Ala Leu Ser Lys
725 730 735
Asp Pro Asn Glu Lys Arg Asp His Met Val Leu Leu Glu Phe Val Thr
740 745 750
Ala Ala Gly Ile Thr Leu Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys
755 760 765
<210> 65
<211> 2298
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /附注=“人工序列的描述：合成多核苷酸”
<400> 65
atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttcttca tgccgccaga 60
ccatcttacc cctacgatgt gcctgattat gcatctcaga gcgtgctgac acagcctcca 120
tctgtttctg gcgcccctgg ccagagagtg accatctctt gtactggcag cagctccaac 180
attggagccg gctatgacgt gcactggtac cagcagctgc ctggcacagc ccctaaactg 240
ctgatctacg gcaacaacaa cagacccagc ggcgtgcccg acagattttc tggctccaag 300
agcggcacaa gcgccagcct ggctattact ggactgcagg ccgaggacga ggccgactac 360
tactgtcaga gctacgacac cggcctgagc gcctgggttt ttggtggagg cacaaaactg 420
acagtgctgg gaggcggagg ttctggcggc ggaggaagtg gtggcggagg ctcacagctg 480
cagctacagg agagcggccc cggcctggtg aaaccttctg agaccctgag cctgacgtgc 540
accgtgagcg gcggcagcat caccagcagc aactactact ggggctggat acgacagccc 600
cctggaaagg gcctagagtg gatcggcagc atctactaca gcggcaacac ctactacaac 660
cccagcctga agagcagagt caccatcagc gtggacacca gcaagaacca gttcagcctg 720
aagctgagca gcgtgaccgc cgccgacaca gctgtttact attgtgccag agagtggagc 780
ccctacgaga gcgagggctt cgactactgg ggccagggga ccctggtgac cgtttcttct 840
acaacaacac ctgctcctcg gcctcctaca ccagctccta caattgccag ccagccactg 900
tctctgaggc ccgaagcttg caggcctgct gctggcggag ccgtgcatac aagaggactg 960
gatttcgcct gcgacatcta catctgggca cctctggctg gaacctgtgg cgtgctgctg 1020
ctgagcctgg tcatcaccct gtattgccgg agcaagagaa gcagactgct gcacagcgac 1080
tacatgaaca tgacccctag acggcccgga cctaccagaa agcactacca gccttacgct 1140
cctcctagag acttcgccgc ctacagatcc agagtgaagt tcagcagatc cgccgacgct 1200
cctgcctatc agcagggcca aaaccagctc tacaacgagc tgaacctggg gagaagagaa 1260
gagtacgacg tgctggacaa gcggagaggc agagatcctg aaatgggcgg caagcccaga 1320
cggaagaatc ctcaagaggg cctgtataat gagctacaga aagacaagat ggcagaggcc 1380
tacagcgaga tcggaatgaa gggcgagcgc agaagaggca agggacacga tggactgtac 1440
cagggcctga gcaccgccac caaggatacc tatgatgccc tgcacatgca ggccctgcct 1500
ccaagagcta gcggaagcgg agctactaac ttcagcctgc tgaagcaggc tggagacgtg 1560
gaggagaacc ctggacctat ggtgagcaag ggcgaggagc tgttcaccgg ggtggtgccc 1620
atcctggtcg agctggacgg cgacgtaaac ggccacaagt tcagcgtgtc cggcgagggc 1680
gagggcgatg ccacctacgg caagctgacc ctgaagttca tctgcaccac cggcaagctg 1740
cccgtgccct ggcccaccct cgtgaccacc ctgacctacg gcgtgcagtg cttcagccgc 1800
taccccgacc acatgaagca gcacgacttc ttcaagtccg ccatgcccga aggctacgtc 1860
caggagcgca ccatcttctt caaggacgac ggcaactaca agacccgcgc cgaggtgaag 1920
ttcgagggcg acaccctggt gaaccgcatc gagctgaagg gcatcgactt caaggaggac 1980
ggcaacatcc tggggcacaa gctggagtac aactacaaca gccacaacgt ctatatcatg 2040
gccgacaagc agaagaacgg catcaaggtg aacttcaaga tccgccacaa catcgaggac 2100
ggcagcgtgc agctcgccga ccactaccag cagaacaccc ccatcggcga cggccccgtg 2160
ctgctgcccg acaaccacta cctgagcacc cagtccgccc tgagcaaaga ccccaacgag 2220
aagcgcgatc acatggtcct gctggagttc gtgaccgccg ccgggatcac tctcggcatg 2280
gacgagctgt acaagtaa 2298
<210> 66
<211> 744
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /附注=“人工序列的描述：合成多核苷酸”
<400> 66
caatctgtcc tgacccagcc accctctgtt agtggagcac ctggacagag agtgaccatc 60
agttgtactg ggagcagctc caacattgga gccggctatg acgtccactg gtaccagcag 120
cttccaggca ctgctcccaa actcctgatc tacggcaaca acaatcgacc aagtggggtc 180
ccagacaggt tcagtggttc caaatctggg acatcagcat ctctggccat tacaggcctc 240
caggctgaag atgaagcaga ctactactgc cagtcatatg acacagggct ctctgcatgg 300
gtgtttggtg gagggacaaa gctgactgtg ctgggaggcg gaggttctgg cggcggagga 360
agtggtggcg gaggctcaca gctgcagttg caggagtctg ggcctggact tgtcaaaccc 420
tctgaaacac tgtcactgac ttgcacagtc tctggaggaa gcatcacctc ttcaaactac 480
tactggggct ggatcagaca gccaccaggg aagggcctgg agtggattgg aagcatctac 540
tacagcggga acacttacta caatccctct ctgaaatcaa gggtcaccat cagtgtggac 600
acctccaaga accagttctc actcaagctg agctcagtga cagctgcaga cactgctgtt 660
tattattgtg caagagagtg gagcccctac gagtctgaag gctttgacta ctggggccaa 720
ggcactcttg tgaccgtgtc cagc 744
<210> 67
<211> 135
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 67
accactactc ctgctcctcg gcctcctaca ccagctccta ctatagccag tcagccactg 60
agcctgaggc ctgaggcctg tagaccagca gctggcgggg ctgttcatac aagaggcctg 120
gattttgcct gtgac 135
<210> 68
<211> 72
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
cription of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 68
atctacatat gggcacctct tgctggtaca tgtggagtgc tgctgctgag cttggtcatc 60
accctctact gc 72
<210> 69
<211> 336
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 69
agagtgaagt tctcaagaag tgccgacgcc ccagcctatc agcaaggcca gaaccagctg 60
tataatgaat tgaacctggg aaggagggag gaatatgatg ttctggacaa gaggagaggc 120
agggaccctg aaatgggcgg gaaaccacga agaaagaacc cccaggaagg actttacaat 180
gagctccaga aagacaagat ggctgaagcc tattctgaga tcggcatgaa gggagagcgc 240
agaagaggca aagggcacga cggcctgtat caagggctct ccacagctac caaagacacc 300
tatgatgctc tgcacatgca ggctctgcct ccccgc 336
<210> 70
<211> 123
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 70
cggagcaaaa gaagcagact cctccattct gactacatga atatgacacc caggagacca 60
ggaccaacaa ggaagcacta ccaaccttat gctcctcctc gggattttgc cgcctataga 120
tcc 123
<210> 71
<211> 744
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /附注=“人工序列的描述：合成多核苷酸”
<400> 71
cagagtgtgc tcacacaacc tccatctgtt tctggtgctc ctgggcagag agtcaccatc 60
tcttgtactg ggtcgtcctc caatattgga gctggctatg atgtccactg gtatcaacag 120
ctgcctggga cagcccctaa actcctcatc tatggcaaca ataacaggcc cagtggtgtg 180
cctgacagat tttctgggtc caagtcaggc acaagtgcct cattggctat tactggactg 240
caggctgagg atgaggcaga ctactactgt cagtcatatg acactggcct aagtgcctgg 300
gtttttggtg gaggcacaaa actgacagtc ctgggaggtg gaggttctgg cggtggaggg 360
agtggtggcg gaggctcaca acttcagcta caagagagtg gccctgggct tgtgaaacct 420
tctgagaccc tctctctgac gtgcacagtg tctggaggaa gcatcaccag tagtaactac 480
tactggggct ggatacgaca gccccctgga aaggggctag agtggattgg cagcatctat 540
tattcaggca acacgtatta taatcccagc ctcaagagca gagtcaccat ctctgtggac 600
acgtcaaaga accagttctc tctaaagctg tccagtgtga ctgctgcaga cacagctgtt 660
tactattgtg ccagagaatg gtctccttat gagagtgagg gctttgacta ctggggacag 720
ggaaccctgg tgacagtctc ttct 744
<210> 72
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /附注=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 72
Gly Gly Ser Gly Gly Ser
1 5

Claims (31)

1.一种分离的抗IL-23受体(IL-23R)抗体或其抗原结合片段，其中
所述抗体或片段的重链可变区(VH)包含分别包含SEQ ID NO:1-3的互补决定区(HCDR)1-3；或具有与SEQ ID NO:1-3之一共有至少约90％同一性的氨基酸序列的任何HCDR；并且
所述抗体或片段的轻链可变区(VL)包含分别包含SEQ ID NO:4-6的互补决定区(LCDR)1-3；或具有与SEQ ID NO:4-6之一共有至少约90％同一性的氨基酸序列的任何LCDR。
2.一种分离的抗IL-23受体(IL-23R)抗体或其抗原结合片段，其中
所述抗体或片段的重链可变区(VH)包含分别包含SEQ ID NO:1-3的互补决定区(HCDR)1-3；并且
所述抗体或片段的轻链可变区(VL)包含分别包含SEQ ID NO:4-6的互补决定区(LCDR)1-3。
3.根据权利要求1所述的分离的抗IL-23R抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段能够结合小鼠和人类IL-23R。
4.根据权利要求1或3所述的分离的抗IL-23R抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段能够以小于40nM的EC50结合于人类IL-23Rα亚基。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的分离的抗IL-23R抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段能够以小于60nM的EC50结合于小鼠IL-23Rα亚基。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的分离的抗IL-23R抗体或其抗原结合片段，其中
所述VH包含SEQ ID NO:7或与其至少约90％同一的氨基酸序列，并且
所述VL包含SEQ ID NO:8或与其至少约90％同一的任何氨基酸序列。
7.根据权利要求6所述的分离的抗IL-23R抗体或其抗原结合片段，其中
所述VH包含SEQ ID NO:7，并且
所述VL包含SEQ ID NO:8。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的分离的抗IL-23R抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是包含SEQ ID NO:15或与其至少约95％同一的任何氨基酸序列的scFv。
9.根据权利要求8所述的分离的抗IL-23R抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是包含SEQ ID NO:15的scFv。
10.一种嵌合抗原受体(CAR)，所述CAR包含：
(i)胞外域，所述胞外域包含根据权利要求1至9中任一项所述的抗IL-23R抗体或其抗原结合片段；
(ii)跨膜域；和
(iii)细胞质域，所述细胞质域包含胞内信号传导域。
11.根据权利要求10所述的CAR，所述CAR还包含前导序列。
12.根据权利要求10或11所述的CAR，其中所述胞外域含有包含SEQ ID NO:15的scFv。
13.根据权利要求10至12中任一项所述的CAR，其中所述胞内信号传导域包含
人类CD28共刺激信号传导域，所述域任选地包含SEQ ID NO:32或与其至少约90％同一的氨基酸序列，和/或
人类CD3ζ域，所述域任选地包含SEQ ID NO:30或与其至少约90％同一的氨基酸序列。
14.根据权利要求10至13中任一项所述的CAR，其中所述跨膜域来源于人类CD8，任选地包含SEQ ID NO:22或与其至少约90％同一的氨基酸序列。
15.根据权利要求10至14中任一项所述的CAR，其中所述前导序列包含来源于CD8前导序列的氨基酸序列，任选地包含SEQ ID NO:40或与其至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一的氨基酸序列。
16.根据权利要求10至14中任一项所述的CAR，其中所述前导序列包含来源于CD25前导序列的氨基酸序列，任选地包含SEQ ID NO:58或与其至少约95％(例如约96％、97％、98％或99％)同一的氨基酸序列。
17.一种嵌合抗原受体(CAR)，所述CAR包含：
(i)抗IL-23R scFv，所述scFv任选地包含SEQ ID NO:15，
(ii)来源于人类CD8的铰链域，所述铰链域任选地包含SEQ ID NO:20，
(iii)来源于人类CD8的跨膜域，所述跨膜域任选地包含SEQ ID NO:22，
(iv)胞内信号传导域，所述胞内信号传导域包含任选地包含SEQ ID NO:32的人类CD28共刺激信号传导域，和任选地包含SEQ ID NO:30的人类CD3ζ域，以及
(v)任选的标签和/或前导序列。
18.一种嵌合抗原受体(CAR)，所述CAR包含：
(i)抗IL-23R scFv，所述scFv任选地包含SEQ ID NO:15，
(ii)来源于人类CD8的铰链域，所述铰链域任选地包含SEQ ID NO:20，
(iii)来源于人类CD8的跨膜域，所述跨膜域任选地包含SEQ ID NO:22，
(iv)胞内信号传导域，所述胞内信号传导域包含任选地包含SEQ ID NO:32的人类CD28共刺激信号传导域，和任选地包含SEQ ID NO:30的人类CD3ζ域，以及
(v)来源于CD8的前导序列，所述前导序列任选地包含SEQ ID NO:40。
19.一种嵌合抗原受体(CAR)，所述CAR包含：
(i)抗IL-23R scFv，所述scFv任选地包含SEQ ID NO:15，
(ii)来源于人类CD8的铰链域，所述铰链域任选地包含SEQ ID NO:20，
(iii)来源于人类CD8的跨膜域，所述跨膜域任选地包含SEQ ID NO:22，
(iv)胞内信号传导域，所述胞内信号传导域包含任选地包含SEQ ID NO:32的人类CD28共刺激信号传导域，和任选地包含SEQ ID NO:30的人类CD3ζ域，以及
(v)来源于CD25的前导序列，所述前导序列任选地包含SEQ ID NO:58。
20.一种核酸分子，所述核酸分子编码根据权利要求1至9中任一项所述的抗体或抗原结合片段，或根据权利要求10至19中任一项所述的CAR。
21.一种载体，所述载体包含根据权利要求20所述的核酸分子。
22.一种免疫细胞，所述免疫细胞表达根据权利要求10至19中任一项所述的CAR，或包含根据权利要求20所述的核酸分子或根据权利要求21所述的载体。
23.一种细胞，所述细胞包含根据权利要求20所述的核酸分子或权利要求21所述的载体。
24.根据权利要求23所述的细胞，其中所述细胞是免疫细胞。
25.一种组合物，所述组合物包含根据权利要求22所述的免疫细胞或根据权利要求23或权利要求24所述的细胞。
26.根据权利要求22所述的免疫细胞、根据权利要求22所述的免疫细胞群、根据权利要求23或权利要求24所述的细胞、或根据权利要求23或权利要求24所述的细胞群，其用作药物。
27.根据权利要求22所述的免疫细胞、根据权利要求22所述的免疫细胞群、根据权利要求23或权利要求24所述的细胞、或根据权利要求23或权利要求24所述的细胞群，其用于治疗有需要的受试者的由表达IL-23R的细胞介导的疾病或病症，任选地其中所述疾病或病症是自身免疫或炎症性疾病或病症。
28.根据权利要求27所述使用的免疫细胞或细胞，其中所述疾病或病症选自由以下组成的组：炎症性肠病(任选地克罗恩氏病或溃疡性结肠炎)、狼疮(任选地全身性红斑狼疮)、关节炎(任选地类风湿性关节炎或幼年特发性关节炎)、干燥综合征、全身性硬化症、多发性硬化症、强直性脊柱炎、1型糖尿病、自身免疫性甲状腺病症、重症肌无力、银屑病、银屑病性关节炎、皮肤病和葡萄膜炎，进一步任选地，其中所述疾病是克罗恩氏病。
29.一种用于治疗有需要的受试者的病症或疾病的方法，其中所述方法包括向所述患者施用根据权利要求22所述的免疫细胞、根据权利要求22所述的免疫细胞群、根据权利要求23或权利要求24所述的细胞、或根据权利要求23或权利要求24所述的细胞群。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述疾病或病症由所述有需要的受试者中表达IL-23R的细胞介导，任选地其中所述疾病或病症是自身免疫或炎症性疾病或病症。
31.根据权利要求29或权利要求30所述的方法，其中所述疾病或病症选自由以下组成的组：炎症性肠病(任选地克罗恩氏病或溃疡性结肠炎)、狼疮(任选地全身性红斑狼疮)、关节炎(任选地类风湿性关节炎或幼年特发性关节炎)、干燥综合征、全身性硬化症、多发性硬化症、强直性脊柱炎、1型糖尿病、自身免疫性甲状腺病症、重症肌无力、银屑病、银屑病性关节炎、皮肤病和葡萄膜炎，进一步任选地，其中所述疾病是克罗恩氏病。
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