CN117462587A - 复合植物提取物及其应用、皮肤外用制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种复合植物提取物及其应用、皮肤外用制剂。该复合植物提取物的原料组合物包括以下重量份数的各组分：槲寄生1～5份，紫藤1～5份。本发明的槲寄生和紫藤的植物提取物能够抑制组胺的释放，从而减少炎症及感染的发生；本发明的植物提取物协同配合，与单独的各植物相比，本发明的植物提取物的组胺抑制效果显著提高；本发明的植物提取物采用纯天然植物作为原料，副作用低，安全性高；本发明所使用的植物原料，在我国有广泛种植，资源易得，价格便宜，成本低。
Description
技术领域
本发明提供一种复合植物提取物及其应用、皮肤外用制剂。
背景技术
组胺(histamine)是一种自体活性物质，它以无活性结合型存在于肥大细胞和嗜碱性粒细胞的颗粒中。在体内组胺由组氨酸经组氨酸脱羧酶(histidine decarboxylase，HDC)脱羧基而成，具有多种生物活性作用，包括过敏反应，炎性反应等。组胺是一种重要的化学介质，由多种细胞生成，包括肥大细胞，嗜碱性粒细胞，嗜铬细胞，血小板，树突状细胞，以及T细胞等，其功能影响机体的多种生理机能，包括细胞增殖，分化，造血过程，胚胎发育，组织再生，以及伤口愈合。在不同的微生物源性感染中，组胺广泛存在于各种炎症以及感染性疾病中，主要调控宿主免疫反应，具有正、负双向的调控作用。最新研究发现，组胺是免疫反应中重要的调控者。
目前针对组胺引起的疾病，化学药还占有大部分市场，但副作用较多，如苯海拉明、扑尔敏等由于分子量小，脂溶性大，易透过血脑屏障进入脑组织，产生嗜睡、镇静、幻觉等中枢抑制作用，以及潜在的致畸作用。中成药虽然暂时缺乏如同化学药那样的大品牌，但由于药物安全性高，公众对中医的信任度较高，存在一定市场潜力，而市场上缺少中成药相关的疗效显著的产品。我国植被丰富，从中发现或创造出具有抗组胺功效的组合物，具有重要意义及广阔的开发前景。
发明内容
本发明为了解决现有技术中抑制组胺的化学药副作用多、不宜长期使用等缺陷，从而提供了一种复合植物提取物及其应用、皮肤外用制剂。本发明的复合植物提取物剂可以有效抑制组胺的释放，进而减少炎症及感染，且副作用低。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供了一种复合植物提取物，包括以下重量份数的各原料组分：槲寄生1～5份，紫藤1～5份；
所述复合植物提取物的制备方法包括：将所述槲寄生和所述紫藤混合后进行水提，水提液中加入絮凝剂后，陈化，得到复合植物提取物。
本发明中，所述槲寄生重量份数较佳地为2～4份，所述紫藤重量份数较佳地为2～4份。
本发明中，所述复合植物提取物的原料组合物较佳地包括以下质量份数的各组分：槲寄生1份，紫藤5份。
其中，所述复合植物提取物的原料组合物较佳地包括以下质量份数的各组分：槲寄生5份，紫藤1份。
其中，所述复合植物提取物的原料组合物较佳地包括以下质量份数的各组分：槲寄生2份，紫藤3份。
本发明中，所述复合植物提取物的制备方法可包括以下步骤：
步骤(1)：将槲寄生和紫藤混合，进行水提，过滤，得滤液；
步骤(2)：在所得滤液加入絮凝剂搅拌，陈化，过滤，即得。
其中，所述步骤(1)中，所述水的加入重量较佳地为药材重量的6～12倍。
其中，所述步骤(1)中，所述水提方式较佳地为外循环提取；所述提取温度较佳地为60～95℃，例如60℃、80℃或95℃；提取时间较佳地为1～3小时，例如1小时。
其中，所述步骤(1)中，过滤操可为本领域常规操作，例如纱布过滤。
其中，所述步骤(2)中，所述絮凝剂为本领域常规絮凝剂，较佳地为有机絮凝剂；所述有机絮凝剂较佳地为壳聚糖、壳聚糖-丙烯酰胺接枝共聚物、海藻酸钠、瓜尔胶或天然黄原胶。
其中，所述步骤(2)中，所述絮凝剂溶液较佳地为絮凝剂溶于溶剂中所形成的溶液，例如壳聚糖溶解于稀醋酸溶液中所形成的溶液。
其中，所述步骤(2)中，所述絮凝剂的质量较佳地为所述滤液质量的0.1～5％，例如0.1％。
其中，所述步骤(2)中，所述陈化温度较佳地为2～8℃，例如4℃；所述陈化时间较佳地为1～3天，例如1天、2天或3天。
其中，所述步骤(2)的过滤操可为本领域常规过滤的操作，较佳地为硅藻土过滤。
其中，所述步骤(2)中，所述过滤后得滤液B，还包括向所述滤液B中添加溶剂的步骤。
其中，所述溶剂为本领域常规的可以使小分子成分溶解在滤液中的物质，较佳地为丁二醇、二丙二醇、甘油、丙二醇和甲基丙二醇中的一种或多种。
其中，所述溶剂的质量较佳地为所述滤液B质量的3～15％；更佳地为5％。
其中，向所述滤液B中加入溶剂后，还可包括补水至药材量8～12倍、灭菌、加入防腐剂的步骤；所述8～12倍是指补水的重量占药材重量的倍数。
其中，所述灭菌较佳地采用高温灭菌；所述高温灭菌温度范围为90～100℃。
其中，所述防腐剂较佳地为1,2-己二醇、对羟基苯乙酮、辛甘醇和辛酰羟肟酸中的一种或多种。
其中，所述防腐剂的质量较佳地为补水至药材量8～12倍后溶液质量的0.7～10％，例如0.7％、1％或10％。
本发明还提供了一种前述复合植物提取物作为抑制组胺的成分在皮肤外用制剂中的应用。
本发明还提供了一种皮肤外用制剂，所述皮肤外用制剂包括前述复合植物提取物。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
本发明的槲寄生和紫藤的植物提取物能够抑制组胺的释放，从而减少炎症及感染的发生；本发明的植物提取物协同配合，与单独的各植物相比，本发明的植物提取物的组胺抑制效果显著提高。
本发明的植物提取物采用纯天然植物作为原料，副作用低，安全性高。
本发明所使用的植物原料，在我国有广泛种植，资源易得，价格便宜，成本低。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
下述实施例及对比例中所用的槲寄生取自桑寄生科植物槲寄生(Viscumcoloratum(Komar.)Nakai)的干燥带叶茎枝；紫藤取自豆科植物紫藤(Wisteriasinensis Sweet)的茎或茎皮；金银花取自忍冬科忍冬属植物忍冬(Lonicera japonicaThunb)及同属植物干燥花蕾或带初开的花。
实施例1
(1)将1份槲寄生和5份紫藤混合，加入药材量6倍水，95℃外循环提取1小时，纱布过滤，得滤液A；
(2)滤液A中加入0.1％絮凝剂，其中，絮凝剂为1％壳聚糖溶解在的2％的醋酸溶液中所形成的溶液，0.1％是指絮凝剂加入质量占滤液A质量的百分比，搅拌均匀，4℃陈化3天，铺硅藻土过滤，得滤液B；
(3)滤液B中加入5％的丁二醇，5％是指丁二醇的加入质量占滤液B质量的百分比，补水至药材量10倍，得初提液；
(4)初提液灭菌，冷却，加入质量是初提液质量0.5％的1,2-己二醇和0.5％的对羟基苯乙酮，出料过滤，得提取液。
实施例2
(1)将5份槲寄生和1份紫藤混合，加入药材量12倍水，60℃外循环提取1小时，纱布过滤，得滤液A；
(2)滤液A中加入5％絮凝剂，絮凝剂同实施例1，搅拌均匀，4℃陈化1天，铺硅藻土过滤，得滤液B；
(3)滤液B中加入5％二丙二醇，补水至药材量10倍，得初提液；
(4)灭菌，冷却，加入质量是初提液质量5％的1,2-己二醇和5％的对羟基苯乙酮，出料过滤，得提取液。
实施例3
(1)将2份槲寄生和3份紫藤混合，加入药材量10倍水，80℃外循环提取1小时，纱布过滤，得滤液A；
(2)滤液A加入3％絮凝剂，絮凝剂同实施例1，搅拌均匀，4℃陈化2天，铺硅藻土过滤，得滤液B；
(3)滤液B中加入5％甘油和丙二醇，5％是指甘油、丙二醇两者的总质量占滤液B质量的百分比，补水至药材量10倍，得初提液；
(4)初提液灭菌，冷却，加入质量是初提液质量0.5％的1,2-己二醇和0.2％的辛甘醇，出料过滤，得提取液。
对比例1
(1)将1份槲寄生和10份紫藤混合，加入药材量4倍水，50℃外循环提取1小时，纱布过滤，得滤液A；
(2)滤液A中加入0.05％絮凝剂，絮凝剂同实施例1，搅拌均匀，4℃陈化0.5天，铺硅藻土过滤，得滤液B；
(3)滤液B中加入5％丁二醇，补水至药材量10倍，得初提液；
(4)初提液灭菌，冷却，加入质量是初提液质量的0.5％1,2-己二醇和0.5％的对羟基苯乙酮，出料过滤，得提取液。
对比例2
(1)将10份槲寄生和1份紫藤混合，加入药材量15倍水，100℃外循环提取1小时，纱布过滤，得滤液A；
(2)滤液A中加入8％絮凝剂，絮凝剂同实施例1，搅拌均匀，4℃陈化5天，铺硅藻土过滤，得滤液B；
(3)滤液B中加入5％丁二醇，补水至药材量10倍，得初提液；
(4)初提液灭菌，冷却，加入质量是初提液质量0.5％的1,2-己二醇和0.5％的对羟基苯乙酮，出料过滤，得提取液。
对比例3
(1)取槲寄生，加入药材量6倍水，95℃外循环提取1小时，纱布过滤，得滤液A；
(2)滤液A中加入0.1％絮凝剂，絮凝剂同实施例1，搅拌均匀，4℃陈化3天，铺硅藻土过滤，得滤液B；
(3)滤液B中加入5％丁二醇，补水至药材量10倍，得初提液；
(4)初提液灭菌，冷却，加入质量是初提液质量0.5％的1,2-己二醇和0.5％的对羟基苯乙酮，出料过滤，得提取液。
对比例4
(1)取紫藤，加入药材量6倍水，95℃外循环提取1小时，纱布过滤，得滤液A；
(2)滤液A中加入0.1％絮凝剂，絮凝剂同实施例1，搅拌均匀，4℃陈化3天，铺硅藻土过滤，得滤液B；
(3)滤液B中加入5％丁二醇，补水至药材量10倍，得初提液；
(4)初提液灭菌，冷却，加入质量是初提液质量0.5％的1,2-己二醇和0.5％的对羟基苯乙酮，出料过滤，得提取液。
对比例5
(1)取1份槲寄生和5份紫藤，加入药材量6倍水，煎煮1小时，纱布过滤，得滤液；
(2)滤液中加入5％丁二醇，补水至药材量10倍，得初提液；
(3)初提液灭菌，冷却，加入质量是初提液质量0.5％的1,2-己二醇和0.5％的对羟基苯乙酮，出料过滤，得提取液。
对比例6
(1)将2份槲寄生和3份金银花混合，加入药材量6倍水，95℃外循环提取1小时，纱布过滤，得滤液A；
(2)滤液A中加入0.1％絮凝剂，絮凝剂同实施例1，搅拌均匀，4℃陈化3天，铺硅藻土过滤，得滤液B；
(3)滤液B中加入5％丁二醇，补水至药材量10倍，得初提液；
(4)初提液灭菌，冷却，加入质量是初提液质量0.5％的1,2-己二醇和0.5％的对羟基苯乙酮，出料过滤，得提取液。
对比例7
(1)将2份金银花和3份紫藤混合，加入药材量6倍水，95℃外循环提取1小时，纱布过滤，得滤液A；
(2)滤液A中加入0.1％絮凝剂，絮凝剂同实施例1，搅拌均匀，4℃陈化3天，铺硅藻土过滤，得滤液B；
(3)滤液B中加入5％丁二醇，补水至药材量10倍，得初提液；
(4)初提液灭菌，冷却，加入质量是初提液质量0.5％的1,2-己二醇和0.5％的对羟基苯乙酮，出料过滤，得提取液。
表1为上述实施例和对比例得工艺对比表。
表1工艺对比表
效果实施例1
将每个实施例和对比例制备的终产品均分成4份(每份50g密闭装于透明PETE小瓶中)，分别放置于4℃冰箱、48℃恒温培养箱、常温避光和常温光照条件下，分别于第7天、第14天、第21天和1个月下进行样品的外观、气味、颜色的比较和观察。表2为稳定性测试表。
表2稳定性测试表
效果实施例2肥大细胞组胺释放量的测定1.实验材料
PB85肥大细胞(中国科学院细胞库)、RPMI1640培养基(Gibco)、胎牛血清(Gibco)、Trypsin-EDTA(0.25％)phenol red(Gibco)、CCK8检测试剂盒(碧云天)、(ELISA)Histamine(HA)(Cloud-Clone Corp.)、C48/80化合物(SIGMA)。
2.实验仪器
移液器(eppendorf)、CO2培养箱、超净工作台、高压灭菌锅、高速离心机、冰箱、酶标仪。
3.实验方法
3.1细胞培养
P815肥大细胞采用1640完全培养基(1640基础培养基，10％胎牛血清，1％双抗，37℃、5％CO2细胞培养箱，P815半悬浮生长，细胞密度达70％-80％，用细胞刮刀使细胞脱离培养瓶，按照1：3传代，常规培养2-3天后，取对数生长期细胞进行实验。
3.2细胞毒性试验
实验分组：空白对照组、模型组(C48/80)、实验组(不同药物)。
P815细胞在含有10％FBS的RPMI-1640培养基中，置于37℃、5％CO2培养箱中培养，待细胞融合至80％进行细胞传代接种，用细胞刮刀使细胞脱离培养瓶，将细胞接种在96孔板中，每孔细胞约5×103个，培养24小时后，样品组加入浓度为1％的若干样品，设置对照组(无样品有细胞孔)、空白孔(无样品无细胞孔)和样品空白孔(有样品无细胞孔)，每孔设置3个复孔。培养24小时后，每孔加入20μL CCK-8溶液，继续培养4小时后，用酶标仪测450nm处各孔吸光度。
细胞活力(％)＝(样品OD值-样品空白组OD值)/(对照组OD值-空白组OD值)
3.3肥大细胞组胺释放量测定
实验分组：空白对照组、模型组(C48/80)、实验组(不同药物)。
P815细胞在含有10％FBS的RPMI-1640培养基中，置于37℃、5％CO2培养箱中培养，待细胞融合至80％进行细胞传代接种，用细胞刮刀使细胞脱离培养瓶，制备密度为5×105个/ml细胞悬液，按每孔2ml/孔将细胞接种在6孔板中，培养24小时后，每孔加入1ml质量浓度为0.002％的实施例1～3、对比例1～7的提取液后，在37℃、5％CO2培养箱中孵育30min，加入C48/80刺激15min后将其放在冰水中终止处理10min。取上清用高速离心机在4℃、10000rpm条件下离心5min。
细胞组胺释放量测量按组胺ELISA试剂盒检测说明书操作，组胺量以组胺标准曲线为基准计算。
3.4统计学分析
试验结果的OD值数据均以平均数±标准差(x±s)表示，釆用t检验进行统计学分析，采用双尾检验，显著性水平α＝0.05。
3.5实验结果
3.5.1样品对P815细胞的细胞活力影响的试验结果
表3为实施例和对比例得到的提取物对P815肥大细胞存活率的影响，根据表3可知，实施例和对比例的提取液对P815细胞活力均无影响。
表3
3.5.2样品对P815肥大细胞释放组胺的影响
表4所示为实施例和对比例得到的提取物对P815肥大细胞组胺释放率的影响，根据表4可知，所有实施例抑制组胺效果均优于对比例。
表4
| 组胺释放率(％) | |
| 空白组 | 40.7 |
| 模型组 | 115.7 |
| 实施例1 | 18.5 |
| 实施例2 | 19 |
| 实施例3 | 17.6 |
| 对比例1 | 35.8 |
| 对比例2 | 34.4 |
| 对比例3 | 32.2 |
| 对比例4 | 30.7 |
| 对比例5 | 27.5 |
| 对比例6 | 25.3 |
| 对比例7 | 27.5 |
Claims (10)
1.一种复合植物提取物，其特征在于，包括以下重量份数的各原料组分：槲寄生1～5份，紫藤1～5份；
所述复合植物提取物的制备方法包括：将所述槲寄生和所述紫藤混合后进行水提，水提液中加入絮凝剂后，陈化，得到复合植物提取物。
2.如权利要求1所述的复合植物提取物，其特征在于，所述槲寄生重量份数为2～4份，所述紫藤重量份数为2～4份。
3.如权利要求1所述的复合植物提取物，其特征在于，所述植物提取物的原料组合物包括以下质量份数的各组分：槲寄生1份，紫藤5份；
或者，所述植物提取物的原料组合物包括以下质量份数的各组分：槲寄生5份，紫藤1份；
或者，所述植物提取物的原料组合物包括以下质量份数的各组分：槲寄生2份，紫藤3份。
4.如权利要求1所述的复合植物提取物，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
步骤(1)：将槲寄生和紫藤混合，进行水提，过滤，得滤液A；
步骤(2)：在所得滤液A加入絮凝剂搅拌，陈化，过滤，即得。
5.如权利要求4所述的复合植物提取物，其特征在于，所述步骤(1)中，所述水的加入重量为药材重量的6～12倍；
和/或，所述步骤(1)中的水提方式为外循环提取；所述提取的温度较佳地为60～95℃；所述提取的时间较佳地为1～3小时；
和/或，所述步骤(1)中，所述过滤采用纱布过滤。
6.如权利要求4所述的复合植物提取物，其特征在于，所述步骤(2)中，所述絮凝剂为有机絮凝剂；所述有机絮凝剂较佳地为壳聚糖、壳聚糖-丙烯酰胺接枝共聚物、海藻酸钠、瓜尔胶或天然黄原胶；
和/或，所述步骤(2)中，所述絮凝剂的质量为所述滤液质量的0.1～5％；
和/或，所述步骤(2)中，所述陈化温度为2～8℃；所述陈化时间为1～3天；
和/或，所述步骤(2)中，所述过滤采用硅藻土过滤。
7.如权利要求4所述的复合植物提取物，其特征在于，所述步骤(2)中，所述过滤后得滤液B，还包括向所述滤液B中添加溶剂的步骤；
所述溶剂较佳地为丁二醇、二丙二醇、甘油、丙二醇和甲基丙二醇中的一种或多种；
所述溶剂的质量较佳地为所述滤液B质量的3～15％；更佳地为5％。
8.如权利要求7所述的复合植物提取物，其特征在于，向所述滤液B中加入溶剂后，还包括补水至药材量8～12倍、灭菌、加入防腐剂的步骤；
所述灭菌较佳地采用高温灭菌；所述高温灭菌温度范围较佳地为90～100℃；
所述防腐剂较佳地为1,2-己二醇、对羟基苯乙酮、辛甘醇和辛酰羟肟酸中的一种或多种；
所述防腐剂的质量较佳地为补水至药材量8～12倍后溶液质量的0.7～10％。
9.一种权利要求1～8任一项所述复合植物提取物作为抑制组胺的成分在皮肤外用制剂中的应用。
10.一种皮肤外用制剂，其特征在于，所述皮肤外用制剂包括权利要求1～8任一项所述的复合植物提取物。
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- 2023-10-30 CN CN202311420628.2A patent/CN117462587A/zh active Pending
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