CN117460737A - 杂芳环化合物、其制备方法及用途 - Google Patents

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CN117460737A CN202280033205.2A CN202280033205A CN117460737A CN 117460737 A CN117460737 A CN 117460737A CN 202280033205 A CN202280033205 A CN 202280033205A CN 117460737 A CN117460737 A CN 117460737A
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张新龙
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邰正福
周俊鹏
田强
宋宏梅
葛均友
王晶翼
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Sichuan Kelun Biotech Biopharmaceutical Co Ltd
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Abstract

Description

杂芳环化合物、其制备方法及用途 技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一类杂芳环化合物、其制备方法及其用途。
背景技术
RAS是具有GTP酶活性的鸟嘌呤核苷酸结合蛋白，具有细胞膜内侧锚定功能。RAS蛋白能够在GDP结合的非活性状态和GTP结合的活性状态之间转换，影响下游Raf、PI3K和RalGDS等多种信号通路，调控蛋白质合成、基因转录、细胞生长、分化、凋亡和迁移等。
RAS突变会导致下游信号通路的持续性激活，促进肿瘤的发生发展，所有肿瘤类型中RAS突变均主要发生在KRAS(85％)，且发生在KRAS上12位甘氨酸突变为天冬氨酸(G12D)的频率最高(34.2％)。在KRAS突变的肿瘤细胞中，KRAS的GTP酶活性下降，持续维持在活性状态。KRAS突变与肺癌、胰腺癌和结直肠癌的发生有着密切的关系。
KRAS G12D小分子抑制剂的开发尚处于刚起步阶段。WO2020173935公开了一类RAS抑制剂，其利用分子胶原理，诱导KRAS G12D形成二聚体，阻断KRAS与下游蛋白的相互作用。此外，WO2021041671公开了一类新的KRAS G12D抑制剂，但未披露其具体作用机制。
蛋白水解靶向嵌合体(Proteolysis-Targeting Chimeras，PROTAC)是一种双功能分子，其结构包括三个部分：(1)与靶蛋白底物结合的部分；(2)与E3泛素连接酶结合的部分；和(3)连接前两部分的链。PROTAC可以分别识别靶蛋白和E3泛素连接酶，将靶蛋白与E3泛素连接酶的距离拉近，通过诱导招募E3泛素连接酶至靶蛋白表面，引发泛素化过程并诱导靶蛋白降解。PROTAC分子具有广泛的药理活性、较高的靶点选择性、可用于难成药靶蛋白降解、降解效力强以及在低浓度就可保持催化降解作用等优点。
目前尚无明确地以KRAS G12D为靶点的PROTAC分子。本领域急需开发结构新颖、生物活性好的KRAS G12D PROTAC分子。
发明概述
本发明提供可用作靶向KRAS G12D蛋白的降解剂和/或抑制剂的化合物。本发明的化合物属于PROTAC，其一端可以与靶蛋白结合，而另一端的高亲和力VHL配体能使靶蛋白募集到E3泛素连接酶，导致KRAS G12D蛋白的泛素化和随后的降解。本发明的化合物可以用于治疗和/或预防由靶蛋白的聚集和/或过度活化引起的癌症或病症。
一方面，本发明提供化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，所述化合物具有式(I)的结构：
其中：
为单键或双键；
当X 1与X 2之间的 为单键时，X 1选自C(R 1) 2和C(O)；且X 2选自N和CR 1；
当X 1与X 2之间的 为双键时，X 1选自CR 1和N；且X 2为C；
当X 3与X 4之间的 为单键时，X 3和X 4各自独立地选自C(R 1) 2、NR 8和C(O)；
当X 3与X 4之间的 为双键时，X 3和X 4各自独立地选自CR 1和N；
每个R 1独立地选自氢、卤素、C 1-6烷基、C 1-6烯基、C 3-6环烷基、C 1-6卤代烷基、-O-C 1-6烷基、-O-C 1-6卤代烷基和-O-C 3-6环烷基；或者同一碳原子上的两个R 1与它们共同连接的碳原子形成羰基、C 3-6环烷基或3-6元杂环基；
R 8独立地选自氢、C 1-3烷基、C 3-6环烷基和C 1-3卤代烷基；
R 2选自C 6-10芳基或5-10元杂芳基，所述芳基和杂芳基各自任选地被一个或多个R 3取代；
当存在时，每个R 3独立地选自卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 1-6卤代烷基、-C 1-6烷基-OH、-O-C 1-6烷基、C 3-6环烷基、3-10元杂环基和5-10元杂芳基，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基的取代基取代；
L为-L 1-L 2-L 3-L 4-L 5-L 6-；
L 1选自-O-、-S-、-NR 1a-、C 1-6亚烷基、C 3-6亚环烷基和3-10元亚杂环基，所述亚烷基、亚环烷基和亚杂环基各自任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基的取代基取代；
L 2为共价键，或者选自-O-、-NR 2a-、C 1-6亚烷基、-O-C 1-6亚烷基、C 1-6亚烷基-O-、C 3-6亚环烷基和3-10元亚杂环基，所述亚烷基、亚环烷基和亚杂环基各自任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基的取代基取代；
L 3为共价键，或者选自-O-、-NR 3a-、C 1-6亚烷基、-O-C 1-6亚烷基、C 1-6亚烷基-O-、C 3-6亚环烷基和3-10元亚杂环基，所述亚烷基、亚环烷基和亚杂环基各自任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基的取代基取代；
L 4为共价键，或者选自-O-、-NR 4a-、C 1-6亚烷基、-O-C 1-6亚烷基、C 1-6亚烷基-O-、C 3-6亚 环烷基和3-10元亚杂环基，所述亚烷基、亚环烷基和亚杂环基各自任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基的取代基取代；
L 5为共价键，或者选自-O-、-NR 5a-、C 1-6亚烷基、-O-C 1-6亚烷基-、C 1-6亚烷基-O-、C 3-6亚环烷基和3-10元亚杂环基，所述亚烷基、亚环烷基和亚杂环基各自任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基的取代基取代；
L 6选自-O-、-S-、-NR 6a-、C 1-6亚烷基、-O-C 1-6亚烷基-、C 1-6亚烷基-O-、C 3-6亚环烷基、-C(O)-、-C(O)-N(R 6a)-和3-10元亚杂环基，所述亚烷基、亚环烷基和亚杂环基各自任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基的取代基取代；
R 1a、R 2a、R 3a、R 4a、R 5a和R 6a各自独立地选自氢和C 1-6烷基；
M为E3泛素连接酶VHL的小分子配体，优选其结构如下式所示：
其中
A选自-NH-、-E-C(＝O)-NR 7a-、-E-NR 7a-C(＝O)-、-E-C(＝O)-和5-10元亚杂芳基，所述亚杂芳基任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基的取代基取代；
E选自C 1-6亚烷基、C 3-6亚环烷基和3-10元亚杂环基，所述亚烷基、亚环烷基和亚杂环基各自任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基的取代基取代；
R 7a选自氢和C 1-6烷基；
R 4选自氢、C 1-6烷基、C 3-6环烷基和3-12元杂环基；
R 5选自氢、C 1-6烷基、C 3-6环烷基、3-12元杂环基，所述烷基、环烷基和杂环基各自任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基的取代基取代；
R 6选自氢、卤素、羟基、C 1-6烷基、C 2-6烯基和C 2-6炔基；且
表示连接位点。
另一方面，本发明提供药物组合物，其包含预防和/或治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，以及一种或多种药学上可接受的载体。
另一方面，本发明提供药盒，其包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，或者包含本发明的药物组合物。
另一方面，本发明提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，或者本发明的药物组合物，其靶向KRAS G12D蛋白并用于降解KRAS G12D蛋白。
另一方面，本发明提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，或者本发明的药物组合物，其用于预防和/或治疗KRAS G12D介导的相关疾病。
另一方面，本发明提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物在制备用于预防和/或治疗KRAS G12D介导的相关疾病的药物中的用途。
另一方面，本发明提供预防和/或治疗KRAS G12D介导的相关疾病的方法，其包括向有此需要的个体给药预防和/或治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，或者本发明的药物组合物。
另一方面，本发明提供制备本发明的化合物的方法。
发明详述
定义
除非在下文中另有定义，本文中所用的所有技术术语和科学术语的含义意图与本领域技术人员通常所理解的相同。提及本文中使用的技术意图指在本领域中通常所理解的技术，包括那些对本领域技术人员显而易见的技术的变化或等效技术的替换。虽然相信以下术语对于本领域技术人员很好理解，但仍然阐述以下定义以更好地解释本发明。
如本文中所使用，术语“包括”、“包含”、“具有”、“含有”或“涉及”及其在本文中的其它变体形式为包含性的(inclusive)或开放式的，且不排除其它未列举的元素或方法步骤。
如本文中所使用，术语“烷基”定义为直链或支链的饱和脂肪族烃基。例如，如本文中所使用，术语“C 1-6烷基”指具有1至6个碳原子的直链或支链的基团(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基或正己基)，其任选地被一个或多个(诸如1、2或3个)适合的取代基如卤素取代。
如本文中所使用，术语“亚烷基”是指从相应的“烷基”再去掉一个氢原子所得到的二价饱和脂肪族烃基。例如，如本文中所使用，术语“C 1-6亚烷基”指具有1至6个碳原子的亚烷基，例如亚甲基(-CH 2-)、亚乙基(-CH 2CH 2-)、亚异丙基(-CH(CH 3)CH 2-)，其任选地被一个或多个(诸如1、2或3个)适合的取代基如卤素取代。
如本文中所使用，术语“烯基”是指具有一个或多个碳-碳双键的直链或支链的脂肪族烃基。例如，本文中所使用的术语“C 2-6烯基”是指具有2至6个碳原子以及一个、两个或三个(优选一个)碳-碳双键的烯基(如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-戊烯 基、3-戊烯基、4-戊烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、2-甲基-2-丙烯基或4-甲基-3-戊烯基等)，其任选地被一个或多个(如1、2或3个)合适的取代基如卤素取代。
如本文中所使用，术语“炔基”是指具有一个或多个碳-碳三键的直链或支链的脂肪族烃基。例如，如本文中所使用的术语“C 2-6炔基”是指具有2至6个碳原子以及一个、两个或三个(优选一个)碳-碳三键的炔基(如乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基或5-己炔基等)，其任选地被一个或多个(如1、2或3个)合适的取代基如卤素取代。
如本文中所使用，术语“环烷基”指饱和或部分不饱和的非芳族单环或多环(诸如双环)烃环(例如单环，诸如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基或环壬基，或双环，包括螺环、稠合或桥连系统，诸如双环[1.1.1]戊基、双环[2.2.1]庚基、双环[3.2.1]辛基或双环[5.2.0]壬基、十氢化萘基等)，其任选地被一个或多个(诸如1至3个)适合的取代基取代。例如，术语“C 3- 6环烷基”指具有3至6个成环碳原子的饱和或部分不饱和的非芳族单环或多环(诸如双环)烃环(例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基)，其任选地被一个或多个(诸如1、2或3个)适合的取代基取代，例如甲基取代的环丙基。
如本文中所使用，术语“亚环烷基”是指从相应的“环烷基”再去掉一个氢原子所得到的二价基团。
如本文中所使用，术语“卤代”或“卤素”基团定义为包括氟、氯、溴或碘。
如本文中所使用，术语“卤代烷基”是指被一个或多个(诸如1、2或3个)相同或不同的卤素原子取代的烷基。例如，术语“C 1-6卤代烷基”指具有1至6个碳原子的卤代烷基，例如-CF 3、-C 2F 5、-CHF 2、-CH 2F、-CH 2CF 3、-CH 2Cl或-CH 2CH 2CF 3。
如本文中所使用，术语“杂环基”指饱和或部分不饱和的单环或多环基团，例如其在环中具有2、3、4、5、6、7、8或9个碳原子和一个或多个(例如1个、2个、3个或4个)独立地选自N、O或S(O) t(其中t是0、1或2)的杂原子，例如3-12元杂环基、3-7元杂环基、3-6元杂环基、5-6元杂环基等。杂环基的代表性实例包括但不限于环氧乙烷基、氮丙啶基、氮杂环丁基(azetidinyl)、氧杂环丁基(oxetanyl)、四氢呋喃基、四氢吡咯烷基、六氢-1H-吡咯啉、吡咯烷酮基、咪唑烷基、吡唑烷基、四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基(dithianyl)、硫吗啉基或哌嗪基。
如本文中所使用，术语“亚杂环基”是指从相应的“杂环基”再去掉一个氢原子所得到的二价基团。
如本文中所使用，术语“芳基”或“芳环”指具有共轭π电子系统的全碳单环或稠合环多环芳族基团。例如，术语“C 6-10芳基”或“C 6-10芳环”指含有6至10个碳原子的芳族基团，诸如苯基(环)或萘基(环)。芳基任选地被1或多个(诸如1、2或3个)适合的取代基(例如卤素、-OH、-CN、-NO 2或C 1-6烷基等)取代。
如本文中所使用，术语“杂芳基”或“杂芳环”指含有至少一个选自N、O和S的杂原子的单环、双环或三环芳族环系，例如具有5、6、8、9、10、11、12、13或14个环原子，特别 是含有1、2、3、4、5、6、9或10个碳原子，并且另外在每一种情况下可为苯并稠合的。例如，杂芳基或杂芳环可选自噻吩基(环)、呋喃基(环)、吡咯基(环)、噁唑基(环)、噻唑基(环)、咪唑基(环)、吡唑基(环)、异噁唑基(环)、异噻唑基(环)、噁二唑基(环)、三唑基(环)、噻二唑基(环)等，以及它们的苯并衍生物；或吡啶基(环)、哒嗪基(环)、嘧啶基(环)、吡嗪基(环)、三嗪基(环)等，以及它们的苯并衍生物。
如本文中所使用，术语“亚杂芳基”是指从相应的“杂芳基”再去掉一个氢原子所得到的二价基团。
术语“取代”指所指定的原子上的一个或多个(例如1、2、3或4个)氢被从所指出的基团的选择代替，条件是未超过所指定的原子在当前情况下的正常原子价并且所述取代形成稳定的化合物。取代基和/或变量的组合仅仅当这种组合形成稳定的化合物时才是允许的。
如果取代基被描述为“任选地被….取代”，则取代基可(1)未被取代或(2)被取代。如果取代基的碳被描述为任选地被取代基列表中的一个或多个取代，则碳上的一个或多个氢(至存在的任何氢的程度)可单独和/或一起被独立地选择的取代基替代或未替代。如果取代基的氮被描述为任选地被取代基列表中的一个或多个取代，则氮上的一个或多个氢(至存在的任何氢的程度)可各自被独立地选择的取代基替代或未替代。
如果取代基被描述为“独立地选自”一组基团，则各取代基独立于另一者被选择。因此，各取代基可与另一(其他)取代基相同或不同。
如本文中所使用，术语“一个或多个”意指在合理条件下的1个或超过1个，例如2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
除非指明，否则如本文中所使用，取代基的连接点可来自取代基的任意适宜位置。
当取代基的键显示为穿过环中连接两个原子的键时，则这样的取代基可键连至该可取代的环中的任一成环原子。
本发明还包括所有药学上可接受的同位素标记的化合物，其与本发明的化合物相同，除了一个或多个原子被具有相同原子序数但原子质量或质量数不同于在自然界中占优势的原子质量或质量数的原子替代。适合包含入本发明的化合物中的同位素的实例包括但不限于氢的同位素(例如 2H、 3H、氘D、氚T)；碳的同位素(例如 11C、 13C及 14C)；氯的同位素(例如 37Cl)；氟的同位素(例如 18F)；碘的同位素(例如 123I及 125I)；氮的同位素(例如 13N及 15N)；氧的同位素(例如 15O、 17O及 18O)；磷的同位素(例如 32P)；及硫的同位素(例如 35S)。某些同位素标记的本发明的化合物(例如掺入放射性同位素的那些)可用于药物和/或底物组织分布研究(例如分析)中。放射性同位素氚(即 3H)及碳-14(即 14C)因易于掺入且容易检测而特别可用于该目的。用正电子发射同位素(例如 11C、 18F、 15O及 13N)进行取代可在正电子发射断层显像术(PET)研究中用于检验底物受体占据情况。被同位素标记的本发明的化合物可通过与描述于随附路线和/或实施例及制备中的那些类似的方法通过使用适当的被同位素标记的试剂代替之前采用的非标记的试剂来制备。本发明的药学上可接受的溶剂合物包括其中结晶溶剂可被同位素取代的那些，例如，D 2O、丙酮-d 6或DMSO-d 6。
术语“立体异构体”表示由于至少一个不对称中心形成的异构体。在具有一个或多个(例如1、2、3或4个)不对称中心的化合物中，其可产生外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单独的非对映异构体。特定个别分子也可以几何异构体(顺式/反式)存在。类似地，本发明的化合物可以两种或更多种处于快速平衡的结构不同的形式的混合物(通常称作互变异构体)存在。互变异构体的代表性实例包括酮-烯醇互变异构体、苯酚-酮互变异构体、亚硝基-肟互变异构体、亚胺-烯胺互变异构体等。要理解，本申请的范围涵盖所有这样的以任意比例(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％)的异构体或其混合物。
本发明涵盖本发明的化合物的所有可能的结晶形式或多晶型物，其可为单一多晶型物或多于一种多晶型物的任意比例的混合物。
还应当理解，本发明的某些化合物可以游离形式存在用于治疗，或适当时，以其药学上可接受的衍生物形式存在。在本发明中，药学上可接受的衍生物包括但不限于：药学上可接受的盐、溶剂合物、代谢物或前药，在将它们向需要其的患者给药后，能够直接或间接提供本发明的化合物或其代谢物或残余物。因此，当在本文中提及“本发明的化合物”时，也意在涵盖化合物的上述各种衍生物形式。
本发明的化合物的药学上可接受的盐包括其酸加成盐及碱加成盐。适合的酸加成盐由形成药学上可接受盐的酸来形成。适合的碱加成盐由形成药学上可接受盐的碱来形成。适合的盐的综述参见Stahl及Wermuth的“Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use”(Wiley-VCH,2002)。用于制备本发明的化合物的药学上可接受的盐的方法为本领域技术人员已知的。
本发明的化合物可以溶剂合物(优选水合物)的形式存在，其中本发明的化合物包含作为所述化合物晶格的结构要素的极性溶剂，特别是例如水、甲醇或乙醇。极性溶剂特别是水的量可以化学计量比或非化学计量比存在。
本领域技术人员会理解，由于氮需要可用的孤对电子来氧化成氧化物，因此并非所有的含氮杂环都能够形成N-氧化物；本领域技术人员会识别能够形成N-氧化物的含氮杂环。本领域技术人员还会认识到叔胺能够形成N-氧化物。用于制备杂环和叔胺的N-氧化物的合成方法是本领域技术人员熟知的，包括用过氧酸如过氧乙酸和间氯过氧苯甲酸(MCPBA)、过氧化氢、烷基过氧化氢如叔丁基过氧化氢、过硼酸钠和双环氧乙烷(dioxirane)如二甲基双环氧乙烷来氧化杂环和叔胺。这些用于制备N-氧化物的方法已在文献中得到广泛描述和综述，参见例如：T.L.Gilchrist,Comprehensive Organic Synthesis,vol.7,pp 748-750；A.R.Katritzky和A.J.Boulton,Eds.,Academic Press；以及G.W.H.Cheeseman和E.S.G.Werstiuk，Advances in Heterocyclic Chemistry,vol.22,pp 390-392,A.R.Katritzky和A.J.Boulton,Eds.,Academic Press。
在本发明的范围内还包括本发明的化合物的代谢物，即在给药本发明的化合物时体内形成的物质。这样的产物可由例如被给药的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、酶解等产生。因此，本发明包括本发明的化合物的代谢物，包括通过使本发明的化合物与 哺乳动物接触足以产生其代谢产物的时间的方法制得的化合物。
本发明在其范围内进一步包括本发明的化合物的前药，其为自身可具有较小药理学活性或无药理学活性的本发明的化合物的某些衍生物，当被给药至身体中或其上时可通过例如水解裂解转化成具有期望活性的本发明的化合物。通常这样的前药会是所述化合物的官能团衍生物，其易于在体内转化成期望的治疗活性化合物。关于前药的使用的其他信息可参见“Pro-drugs as Novel Delivery Systems”，第14卷，ACS Symposium Series(T.Higuchi及V.Stella)及“Bioreversible Carriers in Drug Design,”Pergamon Press,1987(E.B.Roche编辑，American Pharmaceutical Association)。本发明的前药可例如通过用本领域技术人员已知作为“前-部分(pro-moiety)(例如“Design of Prodrugs”，H.Bundgaard(Elsevier,1985)中所述)”的某些部分替代本发明的化合物中存在的适当官能团来制备。
本发明还涵盖含有保护基的本发明的化合物。在制备本发明的化合物的任何过程中，保护在任何有关分子上的敏感基团或反应基团可能是必需的和/或期望的，由此形成本发明的化合物的化学保护的形式。这可以通过常规的保护基实现，例如，在Protective Groups in Organic Chemistry,ed.J.F.W.McOmie,Plenum Press,1973；和T.W.Greene & P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley & Sons,1991中所述的那些保护基，这些参考文献通过援引加入本文。使用本领域已知的方法，可以在适当的后续阶段移除保护基。
术语“约”是指在所述数值的±10％范围内，优选±5％范围内，更优选±2％范围内。
化合物
本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药：
其中 X 1、X 2、X 3、X 4、R 2、L和M如上文所定义。
在本发明的一些实施方案中，上述式(I)化合物具有如式(IA)或(IB)所示的结构：
其中R 1、R 2、L和M如上文所定义，且对于非氢的R 1，n为0、1、2、3或4。
在本发明的一些实施方案中，上述式(I)化合物具有如式(IC)所示的结构：
其中R 1、R 2、L和M如上文所定义，且对于非氢的R 1，n为0、1、2、3或4。
在式(I)、式(IA)、(IB)和(IC)的化合物的一些实施方案中，每个R 1独立地选自氢和卤素。优选地，R 1为氢、氟或氯。
在式(I)、式(IA)和(IB)的化合物的一些实施方案中，每个R 1独立地选自氢和卤素。优选地，R 1为氢、氟或氯；更优选地，R 1为氢或氟。
在式(IC)的化合物的一些实施方案中，每个R 1独立地选自氢和卤素。优选地，R 1为氢、氟或氯；更优选地，R 1为氢或氟。
在式(I)、式(IA)、(IB)和(IC)的化合物的一些实施方案中，R 2为任选地被1-3个R 3取代的萘基，且R 3各自独立地选自F、Cl、Br、I、甲基、乙基、异丙基、乙炔基和羟基，优选地，R 3各自独立地选自F、Cl、乙炔基和羟基。优选地，R 2选自8-Cl-萘-1-基、3-OH-萘-1-基、8-乙炔基-7-F-3-OH-萘-1-基和8-乙炔基-7-F-萘-1-基。
在式(I)、式(IA)和(IB)的化合物的一些实施方案中，R 2为任选地被1-3个R 3取代的萘基，且R 3各自独立地选自F、Cl、Br、I、甲基、乙基、异丙基、乙炔基和羟基，优选地，R 3各自独立地选自F、Cl、乙炔基和羟基。优选地，R 2选自8-Cl-萘-1-基、3-OH-萘-1-基、8-乙炔基-7-F-3-OH-萘-1-基和8-乙炔基-7-F-萘-1-基；更优选地，R 2为8-Cl-萘-1-基或3-OH-萘-1-基。
在式(IC)的化合物的一些实施方案中，R 2为任选地被1-3个R 3取代的萘基，且R 3各自独立地选自F、Cl、Br、I、甲基、乙基、异丙基、乙炔基和羟基，优选地，R 3各自独立地选自F、Cl、乙炔基和羟基。优选地，R 2为8-Cl-萘-1-基、3-OH-萘-1-基、8-乙炔基-7-F-3-OH-萘-1-基或8-乙炔基-7-F-萘-1-基；更优选地，R 2为8-乙炔基-7-F-3-OH-萘-1-基。
在式(I)、式(IA)、(IB)和(IC)的化合物的一些实施方案中，L 1为-O-。
在式(I)、式(IA)和(IB)的化合物的一些实施方案中，L 1为-O-。
在式(IC)的化合物的一些实施方案中，L 1为-O-。
在式(I)、式(IA)、(IB)和(IC)的化合物的一些实施方案中，L 2为C 1-6亚烷基，优选为-CH 2-或-CH 2-CH 2-。
在式(I)、式(IA)和(IB)的化合物的一些实施方案中，L 2为C 1-6亚烷基，优选为-CH 2-或-CH 2-CH 2-，更优选为-CH 2-。
在式(IC)的化合物的一些实施方案中，L 2为C 1-6亚烷基，优选为-CH 2-或-CH 2-CH 2-，更优选为-CH 2-CH 2-。
在式(I)、式(IA)、(IB)和(IC)的化合物的一些实施方案中，L 3为含有一个N原子的3-6元亚杂环基，优选为含有一个N原子的5-6元亚杂环基，优选为
在式(I)、式(IA)和(IB)的化合物的一些实施方案中，L 3为含有一个N原子的3-6元亚杂环基，优选为含有一个N原子的5-6元亚杂环基，优选为 更优选为
在式(IC)的化合物的一些实施方案中，L 3为含有一个N原子的3-6元亚杂环基，优选为含有一个N原子的5-6元亚杂环基，优选为 更优选为
在式(I)、式(IA)、(IB)和(IC)的化合物的一些实施方案中，L 4和L 5各自独立地选自共价键、C 1-6亚烷基、-O-C 1-6亚烷基-和C 1-6亚烷基-O-。优选地，-L 4-L 5-为-CH 2-CH 2-CH 2-O-CH 2-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-、-CH 2-O-CH 2-或-CH 2-。
在式(I)、式(IA)和(IB)的化合物的一些实施方案中，L 4和L 5各自独立地选自共价键、C 1-6亚烷基、-O-C 1-6亚烷基-和C 1-6亚烷基-O-。优选地，-L 4-L 5-为-CH 2-CH 2-CH 2-O-CH 2-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-、-CH 2-O-CH 2-或-CH 2-。优选地，-L 4-L 5-为-CH 2-CH 2-CH 2-O-CH 2-CH 2-。
在式(IC)的化合物的一些实施方案中，L 4和L 5各自独立地选自共价键、C 1-6亚烷基、-O-C 1-6亚烷基-和C 1-6亚烷基-O-。优选地，-L 4-L 5-为-CH 2-CH 2-CH 2-O-CH 2-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-、-CH 2-O-CH 2-或-CH 2-。优选地，-L 4-L 5-为-CH 2-O-CH 2-或-CH 2-。
在式(I)、式(IA)、(IB)和(IC)的化合物的一些实施方案中，L 6为-C(O)-或-O-。
在式(I)、式(IA)和(IB)的化合物的一些实施方案中，L 6为-C(O)-或-O-，优选为-C(O)-。
在式(IC)的化合物的一些实施方案中，L 6为-C(O)-或-O-。
在式(I)、式(IA)、(IB)和(IC)的化合物的一些实施方案中，L选自
在式(I)、式(IA)、(IB)和(IC)的化合物的一些实施方案中，A为-NH-；R 4为C 1-6烷基，优选为叔丁基；且R 5和R 6均为氢。
在式(I)、式(IA)和(IB)的化合物的一些实施方案中，A为-NH-；R 4为C 1-6烷基，优选为叔丁基；且R 5和R 6均为氢。
在式(IC)的化合物的一些实施方案中，A为-NH-；R 4为C 1-6烷基，优选为叔丁基；且R 5和R 6均为氢。
在式(I)、式(IA)、(IB)和(IC)的化合物的一些实施方案中，A为-NH-；R 4为C 1-6烷基，优选为叔丁基；R 5为C 1-6烷基，优选为甲基；且R 6为氢。
在式(I)、式(IA)、(IB)和(IC)的化合物的一些实施方案中，A为5-10元亚杂芳基，优选5-6元亚杂芳基，优选 R 4为C 1-6烷基，优选为异丙基；R 5为C 1-6烷基，优选为甲基；且R 6为氢。
在式(I)、式(IA)、(IB)和(IC)的化合物的一些实施方案中，M选自如下：
本发明的上述式(I)、式(IA)、(IB)和(IC)中，所有实施方案的基团可以适宜地选择任意组合，从而得到不同的通式范围或具体方案。这些范围和方案均属于本发明。
本发明涵盖对各个实施方案进行任意组合所得的化合物。
在特别优选的实施方案中，式(I)的化合物选自：
制备方法
本发明的式(IA)的化合物可以通过如下路线I所示的方法制备：
路线1
其中
R 1、R 2、n、L和M如上文所定义；
LG 1a、LG 2a、LG 3a和X各自独立地表示离去基团，例如卤素、三氟甲磺酸酯基、硫甲基、甲基亚砜、甲基砜、甲氧基或乙氧基；
PG 1a和PG 2a各自独立地表示保护基，例如苄氧羰基(Cbz)、叔丁氧羰基(Boc)、甲基或苄基；
所述方法包括以下步骤：
1)使化合物IA-1与化合物IA-2反应以得到化合物IA-3；
2)使化合物IA-3与化合物IA-4反应以得到化合物IA-5；
3)使化合物IA-5进行脱保护反应以得到化合物IA-6；
4)使化合物IA-6与化合物IA-7进行偶联反应以得到化合物IA-8；
5)使化合物IA-8与化合物IA-9反应以得到化合物IA-10；和
6)使化合物IA-10进行脱保护反应以得到化合物IA。
上述步骤(1)的反应优选在适合的有机溶剂中并且在适合的有机碱存在下进行。所述有机溶剂可选自N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、N,N-二甲基乙酰胺、四氢呋喃、1,4-二氧六环及其任意组合，优选为N,N-二甲基乙酰胺。所述有机碱可选自N,N-二异丙基乙胺和三乙胺，优选为N,N-二异丙基乙胺。反应优选在0-80℃的温度下进行2-24小时。
上述步骤(2)的反应优选在适合的有机溶剂中并且在金属催化剂、配体和碱的存在下进行。所述金属催化剂可以是钯金属催化剂，例如选自三(二亚苄基丙酮)二钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、三苯基膦钯和醋酸钯，优选为[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯。所述配体可以是磷配体，例如选自4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽、2-二环己基膦-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯、2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯和2-二环己基膦-2′,6′-二甲氧基-1,1'-联苯，优选为4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽。所述碱可以是有机碱或无机碱，例如选自N,N-二异丙基乙胺、三乙胺、叔丁醇钠、碳酸钾、碳酸铯和碳酸钠，优选为碳酸铯。所述有机溶剂可选自N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、甲苯、乙醇、乙二醇二甲醚、水、1,4-二氧六环及其 任意组合，优选为1,4-二氧六环。反应优选在50-120℃的温度下进行2-16小时。
上述步骤(3)的脱保护反应优选在适合的有机溶剂中并且在适合的酸存在下进行。所述有机溶剂可选自乙酸乙酯、甲醇、1,4-二氧六环、二氯甲烷及其任意组合，优选为二氯甲烷。所述酸可选自盐酸、氢溴酸、对甲苯磺酸、甲磺酸和三氟乙酸，优选为三氟乙酸。反应优选在0-40℃的温度下进行2-12小时。
上述步骤(4)的偶联反应优选在适合的有机溶剂中并且在金属催化剂、配体和碱的存在下进行。所述金属催化剂可以是钯金属催化剂，例如三(二亚苄基丙酮)二钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、三苯基膦钯和醋酸钯，优选为三(二亚苄基丙酮)二钯。所述配体可以是磷配体，例如选自4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽、2-二环己基膦-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯、2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯、2-二环己基膦-2′,6′-二甲氧基-1,1'-联苯，优选为2-二环己基膦-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯。所述碱可以是有机碱或无机碱，例如选自叔丁醇钠、碳酸钾、碳酸铯和碳酸钠，优选为碳酸铯。所述有机溶剂可选自N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、甲苯、乙醇、乙二醇二甲醚、水、1,4-二氧六环及其任意组合，优选为1,4-二氧六环。反应优选在50-120℃的温度下进行2-16小时。
上述步骤(5)的反应优选在适合的有机溶剂中并且在适合的有机碱和缩合剂存在下进行。所述有机溶剂可选自二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺及其任意组合，优选为N,N-二甲基甲酰胺。所述有机碱可选自N,N-二异丙基乙胺、三乙胺、1,8-二氮杂环[5,4,0]十一碳-7-烯，优选为三乙胺。所述缩合剂可选自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、1-羟基苯并三唑、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑、二环己基碳二亚胺及其任意组合，优选为2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯。反应优选在0-60℃的温度下进行1-12小时。
上述步骤(6)的脱保护反应优选在适合的有机溶剂中并且在适合的脱保护试剂存在下进行。所述有机溶剂可选自乙酸乙酯、甲醇、乙腈、1,4-二氧六环、二氯甲烷及其任意组合，优选为二氯甲烷。所述脱保护试剂可选自盐酸、氢溴酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、三氟乙酸、三氯化铝和三甲基碘硅烷，优选为三甲基碘硅烷。反应优选在0-80℃的温度下进行1-12小时。
本发明的式(IB)的化合物可以通过如下路线2所示的方法制备：
路线2
其中
其中R 1、R 2、L和M如上文所定义；
LG b、LG 1b、LG 2b、LG 3b和LG 4b各自独立地表示离去基团，例如卤素、三氟甲磺酸酯基、硫甲基、甲基亚砜、甲基砜、硼酸、硼酸酯、三丁基锡、甲氧基或乙氧基；
PG 1b表示保护基，例如苄氧羰基(Cbz)或叔丁氧羰基(Boc)；
所述方法包括以下步骤：
1)使化合物IB-1与化合物IB-2反应以得到化合物IB-3；
2)使化合物IB-3与化合物IB-4反应以得到化合物IB-5；
3)使化合物IB-5与化合物IB-6进行偶联反应以得到化合物IB-7；
4)使化合物IB-7与化合物IB-8反应以得到化合物IB-9；和
5)使化合物IB-9进行脱保护反应以得到化合物IB。
上述步骤(1)的反应优选在适合的有机溶剂中并且在适合的有机碱存在下进行。所述有机溶剂可选自N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、N,N-二甲基乙酰胺、四氢呋喃、1,4-二氧六环及其任意组合，优选为N,N-二甲基乙酰胺。所述有机碱可选自N,N-二异丙基乙胺和三乙胺，优选为N,N-二异丙基乙胺。反应优选在-50℃至80℃的温度下进行2-24小时。
上述步骤(2)的反应优选在适合的有机溶剂中并且在适合的有机碱存在下进行。所述有机溶剂可选自乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、N,N-二甲基乙酰胺、四氢呋喃、1,4-二氧六环及其任意组合，优选为乙腈。所述有机碱可选自N,N-二异丙基乙胺和三乙胺，优选为N,N-二异丙基乙胺。反应优选在20℃-100℃的温度下进行2-48小时。
上述步骤(3)的偶联反应优选在适合的溶剂中并且在金属催化剂和碱的存在下进行。所述金属催化剂可以是钯金属催化剂，例如三(二亚苄基丙酮)二钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)、四三苯基膦钯和醋酸钯，优选为[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯或甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)。所述碱可以是有机碱或无机碱，例如选自叔丁醇钠、碳酸钾、磷酸钾、碳酸铯和碳酸钠，优选为碳酸铯或磷酸钾。所述溶剂可选自N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、甲苯、乙醇、乙二醇二甲醚、水、1,4-二氧六环及其任意组合，优选为1,4-二氧六环和水的组合。反应优选在50-120℃的温度下进行2-16小时。
上述步骤(4)的反应优选在适合的有机溶剂中并且在适合的有机碱和缩合剂存在下进行。所述有机溶剂可选自二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺及其任意组合，优选为N,N- 二甲基甲酰胺。所述有机碱可选自N,N-二异丙基乙胺、三乙胺、1,8-二氮杂环[5,4,0]十一碳-7-烯，优选为N,N-二异丙基乙胺。所述缩合剂可选自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、1-羟基苯并三唑、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑、二环己基碳二亚胺及其任意组合，优选为2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯。反应优选在0-60℃的温度下进行1-12小时。
上述步骤(5)的脱保护反应优选在适合的有机溶剂中并且在适合的脱保护试剂存在下进行。所述有机溶剂可选自乙酸乙酯、甲醇、乙腈、1,4-二氧六环、二氯甲烷及其任意组合，优选为二氯甲烷。所述脱保护试剂可选自盐酸、氢溴酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、三氟乙酸、三氯化铝和三甲基碘硅烷，优选为三甲基碘硅烷。反应优选在0-80℃的温度下进行1-12小时。
本发明的式(IB)的化合物也可以通过如下路线3所示的方法制备：
路线3
其中
其中R 1、R 2、L、L 1、L 2、L 3、L 4、L 5、L 6和M如上文所定义；
LG b、LG 1b、LG 2b和LG 4b各自独立地表示离去基团，例如卤素、三氟甲磺酸酯基、硫甲基、甲基亚砜、甲基砜、硼酸、硼酸酯、三丁基锡、甲氧基或乙氧基；
PG 1b表示保护基，例如苄氧羰基(Cbz)或叔丁氧羰基(Boc)；
所述方法包括以下步骤：
1)使化合物IB-1与化合物IB-2反应以得到化合物IB-3；
2)使化合物IB-3与化合物IB-10反应以得到化合物IB-11；
3)使化合物IB-11与化合物IB-6进行偶联反应以得到化合物IB-12；
4)使化合物IB-12进行氧化反应以得到化合物IB-13；
5)使化合物IB-13与化合物IB-14反应以得到化合物IB-15；和
6)使化合物IB-15进行脱保护反应以得到化合物IB。
上述步骤(1)的反应优选在适合的有机溶剂中并且在适合的有机碱存在下进行。所述有机溶剂可选自N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、N,N-二甲基乙酰胺、四氢呋喃、1,4-二氧六环及其任意组合，优选为N,N-二甲基乙酰胺。所述有机碱可选自N,N-二异丙基乙胺和三乙胺，优选为N,N-二异丙基乙胺。反应优选在-50℃至80℃的温度下进行2-24小时。
上述步骤(2)的反应优选在适合的有机溶剂中并且在适合的有机碱存在下进行。所述有机溶剂可选自乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、N,N-二甲基乙酰胺、四氢呋喃、1,4-二氧六环及其任意组合，优选为乙腈。所述有机碱可选自N,N-二异丙基乙胺和三乙胺，优选为N,N-二异丙基乙胺。反应优选在20℃-100℃的温度下进行2-48小时。
上述步骤(3)的偶联反应优选在适合的溶剂中并且在金属催化剂和碱的存在下进行。所述金属催化剂可以是钯金属催化剂，例如三(二亚苄基丙酮)二钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)、四三苯基膦钯和醋酸钯，优选为[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯或甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)。所述碱可以是有机碱或无机碱，例如选自叔丁醇钠、碳酸钾、磷酸钾、碳酸铯和碳酸钠，优选为碳酸铯或磷酸钾。所述溶剂可选自N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、甲苯、乙醇、乙二醇二甲醚、水、1,4-二氧六环及其任意组合，优选为1,4-二氧六环和水的组合。反应优选在50-120℃的温度下进行2-16小时。
上述步骤(4)的反应优选在适合的有机溶剂中并且在适合的氧化剂存在下进行。所述有机溶剂可选自二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺及其任意组合，优选为二氯甲烷。
所述氧化剂可选自戴斯-马丁氧化剂、2-碘酰基苯甲酸、重铬酸吡啶和氯铬酸吡啶盐，优选为戴斯-马丁氧化剂。反应优选在0-60℃的温度下进行1-16小时。
上述步骤(5)的反应优选在适合的有机溶剂中并且在适合的碱和还原剂存在下进行。所述有机溶剂可选自二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、甲醇、异丙醇及其任意组合，优选为二氯甲烷和异丙醇。所述碱可选自N,N-二异丙基乙胺、三乙胺、碳酸氢钠和三水乙酸钠，优选为三水乙酸钠。所述还原剂可选自硼氢化钠、氰基硼氢化钠、三乙酰基硼氢化钠和2-甲基吡啶硼烷，优选为2-甲基吡啶硼烷。反应优选在0-60℃的温度下进行1-12小时。
上述步骤(6)的脱保护反应优选在适合的有机溶剂中并且在适合的脱保护试剂存在下进行。所述有机溶剂可选自乙酸乙酯、甲醇、乙腈、1,4-二氧六环、二氯甲烷及其任意组合，优选为二氯甲烷。所述脱保护试剂可选自盐酸、氢溴酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、三氟乙酸、三氯化铝和三甲基碘硅烷，优选为三氟乙酸。反应优选在0-80℃的温度下进行1-12小时。
本发明的式(IC)的化合物可以通过如下路线4所示的方法制备：
路线4
其中
其中R 1、R 2、L、L 1、L 2、L 3、L 4、L 5、L 6、n和M如上文所定义；
LG c、LG 1c、LG 2c和LG 3c各自独立地表示离去基团，例如卤素、三氟甲磺酸酯基、硫甲基、甲基亚砜、甲基砜、硼酸、硼酸酯、三丁基锡、甲氧基或乙氧基；
PG 1c表示保护基，例如苄氧羰基(Cbz)或叔丁氧羰基(Boc)；
所述方法包括以下步骤：
1)使化合物IC-1与化合物IC-2反应以得到化合物IC-3；
2)使化合物IC-3与化合物IC-4反应以得到化合物IC-5；
3)使化合物IC-5与化合物IC-6进行偶联反应以得到化合物IC-7；
4)使化合物IC-7进行氧化反应以得到化合物IC-8；
5)使化合物IC-8与化合物IC-9反应以得到化合物IC-10；和
6)使化合物IC-10进行脱保护反应以得到化合物IC。
上述步骤(1)的反应优选在适合的有机溶剂中并且在适合的有机碱存在下进行。所述有机溶剂可选自N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、N,N-二甲基乙酰胺、四氢呋喃、1,4-二氧六环及其任意组合，优选为N,N-二甲基乙酰胺。所述有机碱可选自N,N-二异丙基乙胺和三乙胺，优选为N,N-二异丙基乙胺。反应优选在-50℃至80℃的温度下进行2-24小时。
上述步骤(2)的反应优选在适合的有机溶剂中并且在适合的有机碱存在下进行。所述有机溶剂可选自乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、N,N-二甲基乙酰胺、四氢呋喃、1,4-二氧六环及其任意组合，优选为乙腈。所述有机碱可选自N,N-二异丙基乙胺和三乙胺，优选为N,N-二异丙基乙胺。反应优选在20℃-100℃的温度下进行2-48小时。
上述步骤(3)的偶联反应优选在适合的溶剂中并且在金属催化剂和碱的存在下进行。所述金属催化剂可以是钯金属催化剂，例如三(二亚苄基丙酮)二钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)、四三苯基膦钯和醋酸钯，优选为[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯或甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)。所述碱可以是有机碱或无机碱，例如选自叔丁醇钠、碳酸钾、磷酸钾、碳酸铯和碳酸钠，优选为碳酸铯或磷酸钾。所述溶剂可选自N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、甲苯、乙醇、乙二醇二甲醚、水、1,4-二氧六环及其任意组合，优选为1,4-二氧六环和水的组合。反应优选在50-120℃的温度下进行2-16小时。
上述步骤(4)的反应优选在适合的有机溶剂中并且在适合的氧化剂存在下进行。所述有机溶剂可选自二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺及其任意组合，优选为二氯甲烷。
所述氧化剂可选自戴斯-马丁氧化剂、2-碘酰基苯甲酸、重铬酸吡啶和氯铬酸吡啶盐，优选为戴斯-马丁氧化剂。反应优选在0-60℃的温度下进行1-16小时。
上述步骤(5)的反应优选在适合的有机溶剂中并且在适合的碱和还原剂存在下进行。所述有机溶剂可选自二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、甲醇、异丙醇及其任意组合，优选为二氯甲烷和异丙醇。所述碱可选自N,N-二异丙基乙胺、三乙胺、碳酸氢钠和三水乙酸钠，优选为三水乙酸钠。所述还原剂可选自硼氢化钠、氰基硼氢化钠、三乙酰基硼氢化钠和2-甲基吡啶硼烷，优选为2-甲基吡啶硼烷。反应优选在0-60℃的温度下进行1-12小时。
上述步骤(6)的脱保护反应优选在适合的有机溶剂中并且在适合的脱保护试剂存在下进行。所述有机溶剂可选自乙酸乙酯、甲醇、乙腈、1,4-二氧六环、二氯甲烷及其任意组合，优选为二氯甲烷。所述脱保护试剂可选自盐酸、氢溴酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、三氟乙酸、三氯化铝和三甲基碘硅烷，优选为三氟乙酸。反应优选在0-80℃的温度下进行1-12小时。
药物组合物和药盒
本发明的另一目的在于提供一种药物组合物，其包含预防和/或治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，以及一种或多种药学上可接受的载体。
本发明的另一目的在于提供一种药盒，其包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，或者本发明的药物组合物。
本发明中“药学上可接受的载体”是指与治疗剂一同给药的稀释剂、辅剂、赋形剂或媒介物，并且其在合理的医学判断的范围内适于接触人类和/或其它动物的组织而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或与合理的益处/风险比相应的其它问题或并发症。
在本发明的药物组合物或药物制剂中可使用的药学上可接受的载体包括但不限于无菌液体，例如水和油，包括那些石油、动物、植物或合成来源的油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。
所述药物组合物可以例如是固体制剂、半固体制剂、液体制剂或气态制剂等的形式。所述固体制剂例如为片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂或栓剂等，所述液体制剂例如为溶液剂、混悬剂或注射剂。所述组合物还可以是脂质体、微球等剂型。
本发明的药物组合物可以系统地作用和/或局部地作用。为此目的，它们可以适合的途径给药，例如通过注射(如静脉内、动脉内、皮下、腹膜内、肌内注射，包括滴注)或经皮给药；或者通过口服、含服、经鼻、透粘膜、局部、以眼用制剂的形式或通过吸入给药。
本发明的化合物在药物组合物中的含量或用量可以是约0.001mg至约1000mg，适合地是0.01-800mg，优选0.05-500mg，更优选0.1-350mg，特别优选0.5-100mg。
在一些实施方案中，本发明提供制备本发明的药物组合物的方法，所述方法包括将本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药与一种或多种药学上可接受的载体组合。
治疗方法和用途
本发明的另一目的在于提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，或者本发明的药物组合物，其用于预防和/或治疗KRAS G12D介导的相关疾病。
本发明的另一目的在于提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物在制备用于预防和/或治疗KRAS G12D介导的相关疾病的药物中的用途。
本发明的另一目的在于提供预防和/或治疗KRAS G12D介导的相关疾病的方法，其包括向有此需要的个体给药预防或治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，或者本发明的药物组合物。
根据本发明的一些实施方案，所述KRAS G12D介导的相关疾病为肿瘤或癌症。
如本文中所使用的术语“有效量”是指足以实现所需预防或治疗效果的量，例如，实现减轻与待治疗疾病相关的一或多种症状的量。
可调整给药方案以提供最佳所需响应。例如，可给药单次推注，可随时间给药数个分剂量，或可如治疗情况的急需所表明而按比例减少或增加剂量。要注意，剂量值可随要减轻的病况的类型及严重性而变化，且可包括单次或多次剂量。要进一步理解，对于任何特定个体，具体的给药方案应根据个体需要及给药组合物或监督组合物的给药的人员的专业判断来随时间调整。
所给药的本发明的化合物的量会取决于所治疗的个体、病症或病况的严重性、给药的速率、化合物的处置及处方医师的判断。一般而言，有效剂量在每日每kg体重约0.0001至约50mg，例如约0.01至约10mg/kg/日(单次或分次给药)。对70kg的人而言，这会合计为约0.007mg/日至 约3500mg/日，例如约0.7mg/日至约700mg/日。在一些情况下，不高于前述范围的下限的剂量水平可以是足够的，而在其它情况下，仍可在不引起任何有害副作用的情况下采用较大剂量，条件是首先将所述较大剂量分成数个较小剂量以在一整天中给药。
如本文中所使用的术语“预防”包括抑制和延迟疾病的发作，并且不仅包括在发展疾病之前的预防，还包括在治疗后预防疾病的复发。
如本文中所使用的术语“治疗”意指逆转、减轻或清除这样的术语所应用的病症或病况或者这样的病症或病况的一或多种症状的进展。
如本文所使用的“个体”包括人或非人动物。示例性人个体包括患有疾病(例如本文所述的疾病)的人个体(称为患者)或正常个体。本发明中“非人动物”包括所有脊椎动物，例如非哺乳动物(例如鸟类、两栖动物、爬行动物)和哺乳动物，例如非人灵长类、家畜和/或驯化动物(例如绵羊、犬、猫、奶牛、猪等)。
实施例
以下结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。但是本领域技术人员会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。
实施例中未注明具体条件者，均按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
化合物的结构通过核磁共振( 1H NMR)和/或质谱(MS)确定。
1H NMR的测定仪器为JEOL Eclipse 400核磁仪，测定溶剂为氘代甲醇(CD 3OD)、氘代氯仿(CDCl 3)或六氘代二甲基亚砜(DMSO-d 6)，内标为四甲基硅烷(TMS)，化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。
MS的测定仪器为Agilent(ESI)质谱仪，生产商：Agilent，型号：Agilent 6120B。
制备高效液相色谱法条件如下：
仪器型号：Agilent 1260；色谱柱：Waters SunFire Prep C18 OBD(19mm×150mm×5.0μm)；色谱柱温：25℃；流速：20.0mL/min；检测波长：214nm；洗脱梯度：(0min：10％A，90％B；16.0min：90％A，10％B)；流动相A：乙腈；流动相B：0.05％甲酸水溶液。
薄层色谱硅胶板(TLC)使用Merck产的铝板(20×20cm)，薄层层析分离纯化采用的规格是烟台产GF 254(1mm)。
反应的监测采用薄层色谱法(TLC)或LC-MS；使用的展开剂体系包括：二氯甲烷和甲醇体系，正己烷和乙酸乙酯体系，以及石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节或者加入三乙胺等进行调节。
柱层析一般使用200～300目硅胶作为载体。洗脱剂体系包括：二氯甲烷和甲醇体系，以及石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺进行调节。
如无特殊说明，反应温度均为室温(20℃-35℃)。
实施例中所使用的试剂购自Acros Organics、Aldrich Chemical Company、特伯化学等公司。
本文中出现的缩写含义以下表所示。
缩写 含义
TLC 薄层色谱法
LC-MS 液相色谱-质谱联用
DMF N,N-二甲基甲酰胺
Pd(dppf)Cl 2 [1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯
CD 3OD 氘代甲醇
CDCl 3 氘代氯仿
DMSO-d 6 六氘代二甲基亚砜
TMS 四甲基硅烷
NMR 核磁共振
MS 质谱
s 单峰(singlet)
d 二重峰(doublet)
t 三重峰(triplet)
q 四重峰(quartet)
dd 双二重峰(double doublet)
m 多重峰(multiplet)
br 宽峰(broad)
J 偶合常数
Hz 赫兹
中间体的制备：
中间体制备例1：3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯的制备
第一步：8-苄基-3-叔丁基3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3,8-二甲酸酯的制备
将3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(5.0g,23.55mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中。在氮气保护下，加入N,N-二异丙基乙胺(9.22g,70.66mmol)。将体系冷却至0℃，向其中滴加氯甲酸苄酯(6.34g,35.33mmol)，并在25℃下搅拌4小时，然后水洗、干燥并浓缩，得到标题化合物(8.16g，收率：100％)。
MS m/z(ESI):347.2[M+H] +。
第二步：3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯的制备
将8-苄基-3-叔丁基3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3,8-二甲酸酯(8.16g,23.52mmol)溶于三氟乙酸(40mL)和二氯甲烷(80mL)中。将体系在20℃下搅拌2小时，浓缩，并加入碳酸氢钠溶液使水相pH>8。用乙酸乙酯(50mL)萃取三次、干燥有机相、浓缩并打浆(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1，体积比)12小时，然后过滤并干燥滤饼，得到标题化合物(4.6g，收率：79％)。
MS m/z(ESI):247.1[M+H] +。
中间体制备例2：(S)-3-(3-(2-(羟甲基)吡咯烷-1-基)丙氧基)丙酸乙酯的制备
第一步：3-(3-氯丙氧基)丙酸乙酯的制备
将3-氯丙醇(5.0g,52.88mmol)溶于乙腈(50mL)中，加入丙烯酸乙酯(5.82g,58.18mmol)和N-苄基-三甲基氢氧化铵水溶液(265.0mg,1.58mmol)，并将反应液在40℃下搅拌72小时。通过薄层硅胶板监控反应完全。将有机相在减压下浓缩，并通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1，体积比)，得到标题化合物(3.5g，收率：34.0％)。
MS m/z(ESI):195.1[M+H] +。
1H-NMR(400M Hz,CDCl 3):δ4.15(q,J＝7.2Hz,2H),3.71(t,J＝6.0Hz,2H),3.62(t,J＝6.4Hz,2H),3.58(t,J＝6.0Hz,2H),2.56(t,J＝6.0Hz,2H),2.03-1.97(m,2H),1.26(t,J＝7.2Hz,3H)。
第二步：(S)-3-(3-(2-(羟甲基)吡咯烷-1-基)丙氧基)丙酸乙酯的制备
将3-(3-氯丙氧基)丙酸乙酯(3.5g,18.00mmol)溶解在N,N-二甲基乙酰胺(30mL)中，加入L-脯氨醇(1.82g,18.00mmol)和四丁基碘化铵(50mg,0.14mmol)，并将反应液在50℃下搅拌16小时。将反应液减压浓缩，并通过制备高效液相色谱法纯化，得到标题化合物(1.36g，收率：29.1％)。
MS m/z(ESI):260.2[M+H]。
1H-NMR(400M Hz,CDCl 3):δ4.14(q,J＝7.2Hz,2H),3.92-3.85(m,2H),3.82-3.75(m,2H),3.69-3.65(m,2H),3.55-3.48(m,4H),3.12-2.92(m,2H),2.54(t,J＝6.4Hz,2H),2.17-2.04(m,4H),2.01-1.88(m,2H),1.26(t,J＝7.2Hz,3H)。
中间体制备例3：3-(2-(((S)-1-(3-(3-乙氧基-3-氧代丙氧基)丙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)- 5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯的制备
第一步：4-(8-((苄氧基)羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-2-氯-5,6-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-羧酸叔丁酯的制备
将2,4-二氯-5,6-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-羧酸叔丁酯(1.0g,3.29mmol)和N,N-二异 丙基乙胺(1.29g,9.87mmol)溶于DMF(10mL)中，并加入3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯(0.85g,3.29mmol)。将体系在80℃下搅拌2小时，用乙酸乙酯(30mL)稀释，然后水洗、干燥、浓缩并通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝2/1，体积比)，得到标题化合物(1.2g，收率：67％)。
MS m/z(ESI):514.2[M+H] +。
第二步：4-(8-((苄氧基)羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-2-(((S)-1-(3-(3-乙氧基-3-氧代丙氧基)丙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-羧酸叔丁酯的制备
将4-(8-((苄氧基)羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-2-氯-5,6-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-羧酸叔丁酯(1.3g,2.53mmol)和(S)-3-(3-(2-(羟甲基)吡咯烷-1-基)丙氧基)丙酸乙酯(1.31g,5.06mmol)溶于1.4-二氧六环(20mL)中，并加入碳酸铯(2.5g,7.59mmol)。氮气置换三次，然后加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(188.83mg,0.25mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(308.08mg,0.51mmol)，并在100℃下搅拌12小时。体系冷却到室温，加水(40mL)，并用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，将有机层干燥、浓缩并通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1，体积比)，得到标题化合物(1.0g，收率：53.6％)。
MS m/z(ESI):737.2[M+H] +。
第三步：3-(2-(((S)-1-(3-(3-乙氧基-3-氧代丙氧基)丙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯的制备
将4-(8-((苄氧基)羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-2-(((S)-1-(3-(3-乙氧基-3-氧代丙氧基)丙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-羧酸叔丁酯(1.0g,1.36mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，滴加三氟乙酸(10mL)，并在室温下搅拌2小时。将体系浓缩，并加入碳酸氢钠溶液使水相pH>8，然后用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，干燥有机相，浓缩，得到标题化合物(0.66g，收率：76％)。
MS m/z(ESI):637.1[M+H] +。
中间体制备例4：2-(3-(苄氧基)萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷的制备
第一步：3-苄氧基-1-溴萘的制备
将4-溴萘-2-醇(5.0g,22.19mmol)和碳酸钾(9.20g,66.57mmo)依次加入乙腈(100mL)中，并滴加溴化苄(4.22g,24.41mmol)。滴毕，将体系在80℃下搅拌1小时。体系冷却至室温，减压旋蒸除掉乙腈。将粗品溶于乙酸乙酯(150mL)中，用饱和食盐水(50mL)洗涤两次，用无水硫酸钠干燥有机相并浓缩旋干，得到标题化合物(6.7g,收率：91.58％)。
MS m/z(ESI):313.1[M+H] +。
1H-NMR(400MHz,CDCl 3):δ8.15-8.12(d,J＝8.0Hz,1H),7.71-7.69(d,J＝8.0Hz,1H),7.75- 7.32(m,8H),7.20-7.19(d,J＝2.0Hz,1H),5.17(s,2H)。
第二步：2-(3-(苄氧基)萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷的制备
氮气保护下，依次将3-苄氧基-1-溴萘(500mg,1.60mmol)、联硼酸频那醇酯(608.11mg,2.39mmol)、乙酸钾(313.37mg,3.19mmol)、Pd(dppf)Cl 2(58.41mg,79.82umol)加入甲苯(10mL)中，将体系在100℃下搅拌过夜。体系冷却至室温，通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝30/1，体积比)，得到标题化合物(531mg，收率：92.33％)。
MS m/z(ESI):361.2[M+H] +。
中间体制备例5：(S)-3-(3-(2-(羟甲基)吡咯烷基-1-基)丙氧基)丙酸叔丁酯的制备
第一步：3-(3-氯丙氧基)丙酸叔丁酯的制备
将3-氯丙醇(4.0g,42.31mmol)溶于乙腈(50mL)中，加入丙烯酸叔丁酯(5.0g,39.01mmol)和N-苄基-三甲基氢氧化铵水溶液(195.7mg,1.17mmol)，并将反应液在40℃下搅拌48小时。通过薄层硅胶板监控反应完全。将有机相在减压下浓缩，并通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝30/1，体积比)，得到标题化合物(4.0g,收率：46.5％)。
MS m/z(ESI):223.1[M+H] +。
1H-NMR(400M Hz,CDCl 3):δ3.67(t,J＝6.4Hz,2H),3.62(t,J＝6.4Hz,2H),3.57(t,J＝6.0Hz,2H),2.47(t,J＝6.4Hz,2H),2.03-1.97(m,2H),1.45(s,9H)。
第二步：(S)-3-(3--(2-(羟甲基)吡咯烷-1-基)丙氧基)丙酸叔丁酯的制备
将3-(3-氯丙氧基)丙酸叔丁酯(3.9g,17.51mmol)溶解在N,N-二甲基乙酰胺(20mL)中，加入L-脯氨醇(1.77g,17.51mmol)和四丁基碘化铵(15mg)，并将反应液在60℃下搅拌16小时。将反应液减压浓缩，并通过制备高效液相色谱法纯化(乙腈/1‰TFA体系)，得到标题化合物(1.65g,收率：76.4％)。
MS m/z(ESI):288.2[M+H] +。
1H-NMR(400M Hz,CDCl 3):δ10.14(s,1H),3.95-3.91(m,1H),3.86-3.81(m,1H),3.79-3.76(m,1H),3.69-3.63(m,2H),3.59-3.54(m,4H),3.17-3.13(m,1H),3.06-2.98(m,1H),2.47(t,J＝6.0Hz,2H),2.19-2.07(m,4H),1.95-1.89(m,2H),1.45(s,9H)。
中间体制备例6：3-(2-(((S)-1-(3-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)丙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7- 氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯的制备
第一步：4-氨基-6-氯-5-氟吡啶-3-羧酸乙酯的制备
将2-氯-3-氟-5-碘-吡啶-4-胺(3.60g,13.08mmol)、三乙胺(1.99g,19.62mmol)和Pd(dppf)Cl 2(478.59mg,654.07μmol)依次加入无水乙醇(100mL)中，并将反应体系在一氧化碳氛围下，将体系在80℃下搅拌过夜。体系冷却至室温，通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝4/1,体积比)，得到标题化合物(2.5g，收率：83.05％)。
MS m/z(ESI):219.0[M+H] +。
第二步：6-氯-5-氟-4-[(2,2,2-三氯乙酰基)氨基甲酰基氨基]吡啶-3-羧酸乙酯的制备
将4-氨基-6-氯-5-氟吡啶-3-羧酸乙酯(2.5g,10.99mmol)加入无水四氢呋喃(50mL)中，缓慢加入2,2,2-三氯乙酰基异氰酸酯(3.14g,16.49mmol)，并在25℃下搅拌15分钟。减压旋蒸除掉四氢呋喃，将粗品加入甲基叔丁基醚中，充分搅拌5分钟，抽滤，并将滤饼烘干，得到标题化合物(4.3g，收率：91.29％)。
MS m/z(ESI):405.9[M+H] +。
第三步：7-氯-8-氟-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4-二醇的制备
将6-氯-5-氟-4-[(2,2,2-三氯乙酰基)氨基甲酰基氨基]吡啶-3-羧酸乙酯(4.30g,10.04mmol)加入无水甲醇(50mL)中，滴加氨/甲醇(10mL)，并在25℃下搅拌1.5小时。减压旋蒸除掉甲醇，将粗品加入甲基叔丁基醚中，充分搅拌10分钟，抽滤，并收集滤饼，得到标题化合物(2.7g，收率：96.99％)。
MS m/z(ESI):216.0[M+H] +。
第四步：2,4,7-三氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
向冰盐浴降温的三氯氧磷(7mL)中依次滴加N,N-二异丙基乙胺(1.16g,9.01mmol)，分批缓慢加入7-氯-8-氟-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4-二醇(500mg,1.80mmol)。加毕，将反应体系在100℃下搅拌1.5小时。体系冷却至室温，减压旋蒸除掉大部分三氯氧磷，加入氯仿(10mL)并减压旋蒸共沸除去剩余的三氯氧磷，得到标题化合物(513mg，收率：98.50％)，其直接用于下一步。
MS m/z(ESI):251.9[M+H] +。
第五步：3-(2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯的制备
将2,4,7-三氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶(513mg,1.78mmol)加入二氯甲烷(15mL)中，降温至-40℃。在该温度下，加入3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯(481.06mg,1.95mmol)，再缓慢滴加N,N-二异丙基乙胺(688.44mg,5.33mmol)，滴毕，维持该温度搅拌10分钟。加入碳酸氢钠溶液(20mL)，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，并将有机层用无水硫酸钠干燥，浓缩旋干，然后通过柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝3/1,体积比)，得到标题化合物(810mg，收率：88.81％)
MS m/z(ESI):462.1[M+H] +。
第六步：3-(2-(((S)-1-(3-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)丙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯的制备
将3-(2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯(500mg,973.39μmol)、(S)-3-(3-(2-(羟甲基)吡咯烷基-1-基)丙氧基)丙酸叔丁酯(1.23g,2.92mmol)和N,N-二异丙基乙胺(629.01mg,4.87mmol)依次加入乙腈(20mL)中，将体系在80℃下搅拌20小时。体系冷却至室温，通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯)，得到标题化合物(197mg,收率：26.96％)。
MS m/z(ESI):713.3[M+H] +。
中间体制备例7：3-(2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧 酸叔丁酯的制备
采用中间体制备例6的合成路线，将第五步的反应原料3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯替换为3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯，得到标题化合物(3.5g，收率：80.5％)
MS m/z(ESI):428.2[M+H] +。
中间体制备例8：3-(7-氯-2-(2-(4-((2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)-8-氟吡 啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
第一步：4-(2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
向100mL的圆底烧瓶中，依次加入N-叔丁氧羰基-4-哌啶甲醇(3.0g，13.95mmol)、二聚醋酸铑(0.31g,0.7mmol)和二氯甲烷(30mL)，将反应混合物冷却至0℃，向其中分批次缓慢滴加重氮乙酸乙酯(2.39g,20.93mmol)。将反应混合物升温至25℃，在搅拌下反应12小时。将反应混合物倒入水中，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，用饱和食盐水(15mL)洗涤有机相2次，将所得有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，干燥，将所得残渣通过柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝9/1，体积比)，得到标题化合物(2.2g，收率：52.4％)。
MS m/z(ESI):302.2[M+H] +。
第二步：2-(4-哌啶基甲氧基)乙酸乙酯盐酸盐的制备
向100mL的圆底烧瓶中，依次加入4-(2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.2g,7.31mmol)和4M氯化氢的1,4-二氧六环溶液(10mL)，将反应混合物在25℃搅拌2小时，减压蒸除溶剂，得到标题化合物(1.73g，收率：100％)。
MS m/z(ESI):202.2[M+H] +。
第三步：2-(1-(2-羟乙基)哌啶-4-基)甲氧基)乙酸乙酯的制备
向100mL的圆底烧瓶中，依次加入2-(4-哌啶基甲氧基)乙酸乙酯盐酸盐(1.5g,6.31mmol)、碳酸钾(1.74g,12.62mmol)、乙腈(20mL)和2-碘乙醇(1.63g,9.5mmol)，用氮气置换三次，将反应混合物加热至80℃，在搅拌下反应12小时。将反应混合物冷却至室温，过滤，用少量乙酸乙酯洗涤滤渣，将所得有机相旋干，将所得残渣经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/甲醇＝10/1，体积比)，得到标题化合物(1.25g，收率：80.8％)。
MS m/z(ESI):246.1[M+H] +。
第四步：3-(7-氯-2-(2-(4-((2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
向10mL微波管中，依次加入3-(2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(200mg,0.47mmol)、2-(1-(2-羟乙基)哌啶-4-基)甲氧基)乙酸乙酯(172mg,0.71mmol)、N,N-二异丙基乙胺(242mg,1.88mmol)和1,4-二氧六环(5mL)，向反应混合物中鼓吹氮气1分钟，将所得混合物微波加热至120℃，在搅拌下反应5小时。减压蒸除溶剂，所得残渣经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1，体积比)，得到标题化合物(146mg，收率：48.9％)。
MS m/z(ESI):637.2[M+H] +。
中间体制备例9：(S)-5-(2-(羟甲基)吡咯烷-1-基)戊酸乙酯的制备
将(S)-吡咯烷-2-基甲醇(505.05mg,4.94mmol)溶解在四氢呋喃(20mL)中，并加入5-溴戊酸乙酯(1.04g,4.94mmol)和三乙胺(504.32mg,4.94mmol)，将反应混合物在70℃回流2小时。将混合物冷却至室温，过滤除去固体，将滤液蒸发至干，加水(20mL)稀释浓缩物，用二氯甲烷(10mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂，得到标题化合物(900mg，收率：79.4％)。
MS m/z(ESI):230.2[M+H] +。
中间体制备例10：(S)-6-(2-(羟甲基)吡咯烷-1-基)己酸乙酯的制备
采用中间体制备例9的合成路线，将反应原料5-溴戊酸乙酯替换为6-溴己酸乙酯，得到标题化合物(1.1g，收率：67.5％)。
MS m/z(ESI):244.2[M+H] +。
中间体制备例11：(S)-7-(2-(羟甲基)吡咯烷-1-基)庚酸乙酯的制备
采用中间体制备例9的合成路线，将反应原料5-溴戊酸乙酯替换为7-溴庚酸乙酯，得到标题化合物(850mg，收率：75.5％)。
MS m/z(ESI):258.2[M+H] +。
中间体制备例12：(2S,4R)-4-羟基-1-(3-甲基-2-(3-(哌啶-4-基甲氧基)异噁唑-5-基)丁酰基)- N-(S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
第一步：2-(3-溴异噁唑-5-基)乙醇的制备
在室温下，向3-丁炔-1-醇(28.5g,386.5mmol)和碳酸氢钾(29.0g,289.9mmol)在乙酸乙酯/水(120mL/12mL)中的搅拌溶液中逐滴添加1,1-二溴甲醛肟(20.0g,96.6mmol)在乙酸乙酯(50mL)中的溶液。将所得溶液在室温下搅拌16小时。然后用水稀释，分离有机层，用乙酸乙酯(100mL)萃取三次。用饱和食盐水(150mL)洗有机层，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1，体积比)，得到标题化合物(16.4g，收率：84.0％)。
MS m/z(ESI):192.0[M+H] +。
第二步：2-(3-溴异噁唑-5-基)乙酸的制备
将2-(3-溴异噁唑-5-基)乙醇(16.4g,85.4mmol)溶于丙酮(190mL)，在0℃下滴加琼斯试剂(70mL)，该温度下搅拌30分钟后移至室温，在室温下搅拌16小时。向反应液中加水(300mL)，用乙酸乙酯(100mL)萃取三次，用饱和食盐水(150mL)洗涤合并的有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，并减压浓缩，得到标题化合物(18g，收率：86.2％)。
MS m/z(ESI):206.0[M+H] +。
第三步：2-(3-溴异噁唑-5-基)乙酸甲酯的制备
将2-(3-溴异噁唑-5-基)乙酸(18g,87.8mmol)溶于甲醇(150mL)，滴加浓硫酸(2mL)，在70℃下搅拌2.5小时。将反应液浓缩，加入乙酸乙酯(30mL)稀释残留物，用水(30mL)洗涤，收集有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤合并的有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，并减压浓 缩。将残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝4/1,体积比)，得到标题化合物(15g，收率：78％)。
MS m/z(ESI):220.0[M+H] +。
第四步：2-(3-溴异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸的制备
将2-(3-溴异噁唑-5-基)乙酸甲酯(8.7g,39.6mmol)溶于四氢呋喃(90mL)，将温度降至0℃，然后缓慢加入叔丁醇钾(5.88g,52.59mmol)，保持低温下滴加2-碘丙烷(12.75g,75.12mmol)，用氮气置换三次后，在常温下搅拌反应16小时。将反应液浓缩，将残留物用1N盐酸溶液调节pH＝3～4，用乙酸乙酯(40mL)萃取两次，用饱和食盐水(50mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，并减压浓缩。将残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1，体积比)，得到标题化合物(4.2g，收率：42.8％)。
MS m/z(ESI):248.0[M+H] +。
第五步：2-(3-甲氧基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸的制备
将2-(3-溴异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸(3.0g,12.16mmol)溶于甲醇(40mL)，加入氢氧化钾(6.8g,120.16mmol)，升温至68℃，搅拌4小时。用1N盐酸溶液调节pH＝3～4，用乙酸乙酯(20mL)萃取两次，用无水硫酸钠干燥，浓缩。将残留物通过反相色谱柱纯化(流动相：乙腈：0.1％甲酸水溶液，0～40％)，得到标题化合物(1.2g，收率：49.6％)。
MS m/z(ESI):200.1[M+H] +。
第六步：2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸的制备
将2-(3-甲氧基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸(1g,5.0mmol)溶于乙酸(8mL)，加入氢溴酸水溶液(6mL)，加热至60℃，搅拌16小时。浓缩反应液，将残留物通过反相色谱柱纯化(流动相：乙腈：0.1％甲酸水溶液，0～40％)，得到标题化合物(0.7g，收率：75.3％)。
MS m/z(ESI):186.1[M+H] +。
第七步：2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯的制备
将2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸(700mg,3.76mmol)溶于甲醇(4mL)，滴加氯化亚砜(1.92g,16.16mmol)，在25℃下搅拌3小时。将反应液浓缩后，加入乙酸乙酯(20mL)稀释残留物，用水(10mL)洗涤，用饱和食盐水(10mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，减压浓缩，得到标题化合物(0.6g，收率：79.7％)。
MS m/z(ESI):200.1[M+H]+。
第八步：4-(5-(1-甲氧基-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)异噁唑-3-基)氧基)甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
将2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(600mg,2.86mmol)溶于DMF(1mL)，加入4-(溴甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.09g,7.15mmol)和碳酸钾(1.19g,8.58mmol)，在50℃下搅拌3小时。将反应液冷却至室温，向反应液中加水，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，用饱和食盐水(20mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，并减压浓缩。得到标题化合物(1.0g，收率：79.3％)。
MS m/z(ESI):397.2[M+H] +。
第九步：2-(3-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)甲氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸的制备
将4-(5-(1-甲氧基-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)异噁唑-3-基)氧基)甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g,1.26mmol)溶于甲醇(10mL)和水(5mL)，加入氢氧化钠(151.3mg,3.79mmol)，在室温搅拌2小时。浓缩，加水稀释，用1N盐酸溶液调pH＝3～4，用乙酸乙酯(40mL)萃取三次，用饱和食盐水(50mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，并减压浓缩，将残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1，体积比)，得到标题化合物(0.25g，收率：50.8％)。
MS m/z(ESI):383.2[M+H] +。
第十步：4-((5-(1-(2S,4R)-4-羟基-2-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)异噁唑-3-基)氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
将2-(3-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)甲氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸(115.39mg,301μmol)和(2S,4R)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(99.6mg,301μmol)溶于DMF(2mL)，降温0℃，加入N,N-二异丙基乙胺(111mg,860μmol)和2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(163mg,430μmol)。在0℃下搅拌1小时。向反应液中加水(10mL)，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，用饱和食盐水(20mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，并减压浓缩，将残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1，体积比)，得到标题化合物(100mg，收率：48.1％)。
MS m/z(ESI):696.3[M+H] +。
第十一步：(2S,4R)-4-羟基-1-(3-甲基-2-(3-(哌啶-4-基甲氧基)异噁唑-5-基)丁酰基)-N-(S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
将4-((5-(1-(2S,4R)-4-羟基-2-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)异噁唑-3-基)氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(100mg,143.71μmol)溶于二氯甲烷(2.00mL)，加入盐酸1,4-二氧六环(2.00mL)，在室温下搅拌1小时。浓缩反应液，得到标题化合物(70mg，收率：81.8％)。
MS m/z(ESI):596.3[M+H] +。
中间体制备例13：((2-氟-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)萘-1-基)乙炔基) 三异丙基硅烷的制备
向50mL单口瓶中，依次加入7-氟-8-(三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基三氟甲烷磺酸(200.00mg,421.42μmol)、联硼酸频那醇酯(214.03mg,842.84μmol)、乙酸钾(124.08mg,1.26mmol)、1,4-二氧六环(5.0mL)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(172.15 mg,210.71μmol)，用氮气置换三次，将反应混合物在104℃搅拌反应12小时。待反应液冷却至室温，向反应液中加水，用乙酸乙酯(20mL)萃取两次，用饱和食盐水(20mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，并减压浓缩。将残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚)，得到黄色固体标题化合物(54mg，收率：28.32％)。
MS m/z(ESI):453.3[M+H] +。
1H-NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.84-7.75(m,3H),7.42(dd,J＝8.0,8.0Hz,1H),7.27(d,J＝8.0Hz,1H),7.24(d,J＝4.0Hz,1H),1.42(d,J＝8.0Hz,12H),1.25(s,3H),1.18-1.14(m,18H)。
中间体制备例14：3-(8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘- 1-基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
第一步：7-溴-8-氟-1H-喹唑啉-2,4-二酮的制备
将2-氨基-4-溴-3-氟苯甲酸(2.0g,8.5mmol)和尿素(2.7g,45.1mmol)混合后加热至200℃反应3小时。冷却至室温后，加入乙酸乙酯(200mL)搅拌30分钟。过滤，收集滤饼后减压浓缩干燥，得到标题化合物(1.9g，收率：86.4％)。
MS m/z(ESI):260.0[M+H] +。
第二步：7-溴-2,4-二氯-8-氟喹唑啉的制备
将7-溴-8-氟-1H-喹唑啉-2,4-二酮(1.9g,7.3mmol)溶于N,N-二异丙基乙胺(6mL)和三氯氧磷(40mL)中，在110℃下搅拌10小时。冷却到室温后浓缩，将残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝20/1，体积比)，得到标题化合物(1.6g，收率：73.7％)。
MS m/z(ESI):297.0[M+H] +。
第三步：3-(7-溴-2-氯-8-氟-喹唑啉-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
将7-溴-2,4-二氯-8-氟喹唑啉(1.6g,5.4mmol)和3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(1.2g,5.7mmol)溶于1,4-二氧六环(30mL)中，加入三乙胺(3mL)，在50℃下搅拌反应30分钟。将反应液浓缩，加入乙酸乙酯(30mL)稀释残留物，用水(30mL)洗涤，收集有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，并减压浓缩。将残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1，体积比)，得到标题化合物(2.2g，收率：86.3％)。
MS m/z(ESI):473.0[M+H] +。
第四步：3-(7-溴-8-氟-2-(2-羟基乙氧基)喹唑啉-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
将乙二醇(328.9mg,5.3mmol)溶于DMF(5mL)中，将温度降至0℃，氮气保护下缓慢加入氢化钠(40.3mg,1.0mmol)，保持低温搅拌30分钟，加入3-(7-溴-2-氯-8-氟-喹唑啉-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(0.5g,1.0mmol)，保持低温搅拌反应3小时。将反应液倒入水(40mL)中，用乙酸乙酯(20mL)萃取两次，用饱和食盐水(20mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，并减压浓缩。将残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1/1，体积比)，得到标题化合物(230.0mg，收率：43.6％)。
MS m/z(ESI):497.0[M+H] +。
第五步：3-(8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)-2-(2-羟基乙氧基)喹唑啉-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
将3-(7-溴-8-氟-2-(2-羟基乙氧基)喹唑啉-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(220.0mg,0.44mmol)和((2-氟-6-(甲氧基甲氧基)-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼硼烷-2-基)萘-1-基)乙炔基)三异丙基硅烷(294.7mg,0.57mmol)溶于甲苯(6mL)和水(0.6mL)中，加入碳酸铯(436.7mg,1.34mmol)和甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(32.9mg,0.05mmol)后，用氮气置换3次，升温至100℃后微波搅拌反应3.5小时。直接将反应液浓缩。将残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1/1，体积比)，得到标题化合物(270.0mg，收率：75.9％)。
MS m/z(ESI):803.0[M+H] +。
第六步：3-(8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
将3-(8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)-2-(2-羟基乙氧基)喹唑啉-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(150.0mg,0.19mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入戴斯-马丁氧化剂(202.1mg,0.48mmol)，在室温下搅拌12小时。向反应液中加入饱和的硫代硫酸钠水溶液(1mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(2mL)，用乙酸乙酯(20mL)萃取两次，用饱和食盐水(20mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，并减压浓缩。将残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1/1，体积比)，得到标题化合物(130.0mg，收率：86.9％)。
MS m/z(ESI):801.0[M+H] +。
中间体制备例15：2-(哌啶-4-基甲氧基)乙酸乙酯的制备
第一步：4-((2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
将4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(4.0g,18.6mmol)溶解于二氯甲烷(40mL)中，加入二聚 醋酸铑(419.2mg,0.9mmol)后，在0℃下向反应液中滴加重氮乙酸乙酯(3.2g,28.1mmol)，用氮气置换三次后升至室温，反应16小时。将反应液倒入水(40mL)中，用二氯甲烷(20mL)萃取两次，用饱和食盐水(20mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，并减压浓缩。将残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1/9，体积比)，得到标题化合物(2.6g，收率：46.4％)。
MS m/z(ESI):302.0[M+H] +。
第二步：2-(哌啶-4-基甲氧基)乙酸乙酯的制备
将4-((2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.6g,8.6mmol)加入4M的乙酸乙酯盐酸溶液(30mL)中，在20℃下反应2小时。直接将反应液减压浓缩后，得到标题化合物的盐酸盐(1.9g，收率：95.0％)。
MS m/z(ESI):202.0[M+H] +。
合成实施例：
实施例1：(2S,4R)-1-((S)-2-(3-(3-((S)-2-(((4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-氯萘-1- 基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)丙氧基)丙酰氨基)-3,3-二甲 基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物1)的制备
第一步：3-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-(3-(3-乙氧基-3-氧代丙氧基)丙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯的制备
将3-(2-(((S)-1-(3-(3-乙氧基-3-氧代丙氧基)丙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯(329mg,0.52mmol)和1-溴-8-氯萘(188mg,0.78mmol)溶于干燥的1,4-二氧六环(5mL)中，并加入碳酸铯(674mg,2.08mmol)。在氮气保护下，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(73mg,0.078mmol)和2-二环己基膦-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(49.2mg,0.104mmol)，并将反应液在95℃下搅拌10小时。向体系中加入水 (20mL)，并用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将有机相干燥，浓缩，并通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1，体积比)，得到标题化合物(250mg，收率：60.7％)。
MS m/z(ESI):797.4[M+H] +。
第二步：3-(3-((S)-2-(((4-(8-((苄氧基)羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-氯萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)丙氧基)丙酸的制备
将3-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-(3-(3-乙氧基-3-氧代丙氧基)丙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯(223mg,0.28mmol)溶于甲醇(4mL)和水(1mL)中，加入氢氧化钠(45mg,1.12mmol)，并将反应液在30℃下搅拌4小时。浓缩反应液，加入1M的稀盐酸调至pH<5，并用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将有机相干燥并浓缩，得到标题化合物(210mg，收率：97.6％)
MS m/z(ESI):769.1[M+H] +。
第三步：3-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-(3-(3-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-3-氧代丙氧基)丙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯的制备
将3-(3-((S)-2-(((4-(8-((苄氧基)羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-氯萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)丙氧基)丙酸(100mg,0.13mmol)溶于DMF(2mL)中，加入(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(73mg,0.16mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(64.6mg,0.17mmol)和三乙胺(66mg,0.65mmol)，并在室温下搅拌1小时。将反应液滴入水(12mL)中，过滤。将滤饼用乙酸乙酯(10mL)溶解，然后干燥、过滤并浓缩，得到标题化合物(128mg，收率：83.3％)。
MS m/z(ESI):1181.2[M+H] +。
第四步：(2S,4R)-1-((S)-2-(3-(3-((S)-2-(((4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-氯萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)丙氧基)丙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
将3-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-(3-(3-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-3-氧代丙氧基)丙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯(100mg,0.085mmol)溶于二氯甲烷(4mL)和乙腈(1mL)中，加入三甲基碘硅烷(84mg,0.43mmol)，并在室温下搅拌4小时。将反应液浓缩，并通过制备高效液相色谱法纯化，得到标题化合物(15mg，收率：16.9％)。
MS m/z(ESI):1047.5[M+H] +。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ9.04(s,1H),8.65(s,1H),8.28(s,1H),7.98-7.95(m,2H),7.79(d,J＝8Hz,1H),7.64-7.57(m,2H),7.52-7.43(m,5H),7.38(d,J＝8Hz,1H),4.61(d,J＝12 Hz,1H),4.59-4.46(m,2H),4.41(s,1H),4.30-4.11(m,4H),4.09(d,J＝8Hz,1H),3.97-3.92(m,2H),3.81-3.51(m,12H),3.15-3.04(m,4H),2.91(d,J＝12Hz,1H),2.77-2.73(m,2H),2.51(s,3H),2.40-2.31(m,3H),2.22-2.07(m,1H),1.99-1.90(m,3H),1.80-1.64(m,8H),0.96(s,9H)。
实施例2：(2S,4R)-1-((S)-2-(3-(3-((S)-2-(((4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(3-羟基萘 -1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)丙氧基)丙酰氨基)-3,3-二 甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物2)的制备
采用实施例1中的合成路线，将第一步中的原料1-溴-8-氯萘替换为3-苄氧基-1-溴萘，得到目标产物(25mg，收率：42.5％)。
MS m/z(ESI):1029.4[M+H] +。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ8.95(s,1H),8.60(t,J＝8Hz,1H),8.27(s,1H),8.01-7.92(m,2H),7.67(d,J＝8Hz,1H),7.44-7.37(m,5H),7.27(t,J＝8.4Hz,1H),6.87(s,1H),6.77(s,1H),4.56(d,J＝8Hz,1H),4.45-4.41(m,2H),4.35(s,1H),4.25-4.20(m,2H),4.06(s,1H),3.96-3.91(m,3H),3.69-3.64(m,5H),3.60-3.49(m,4H),3.45-3.35(m,3H),2.89-2.84(m,3H),2.77-2.73(m,2H),2.44(s,3H),2.36-2.21(m,3H),2.22-2.13(m,1H),2.05-1.97(m,2H),1.93-1.78(m,7H),1.69-1.60(m,6H),0.92(s,9H)。
实施例3：(2S,4R)-1-((S)-2-(3-(3-((S)-2-(((4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-8-氟-7-(3-羟基 萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)丙氧基)丙酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4- 羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物3)的制备
第一步：3-(7-(3-(苄氧基)萘-1-基)-2-(((S)-1-(3-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)丙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂 双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯的制备
依次将3-(2-(((S)-1-(3-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)丙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂 双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯(150mg,199.79μmol)、2-(3-苄氧基萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(113.65mg,299.69μmol)、碳酸铯(130.19mg,399.59μmol)和Pd(dppf)Cl 2(14.62mg,19.98μmol)加入1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)中，并将反应体系在100℃下搅拌过夜。体系冷却至室温，通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯)，得到标题化合物(136mg，收率：74.71％)。
MS m/z(ESI):911.4[M+H] +。
第二步：3-(3-((S)-2-(((4-(8-((苄氧基)羰基)-3,8-二氮杂 双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(3-(苄氧基)萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)丙氧基)丙酸的制备
将3-(7-(3-(苄氧基)萘-1-基)-2-(((S)-1-(3-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)丙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂 双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯(136mg,149.28μmol)溶于二氯甲烷(5mL)中。将反应体系在冰浴中控温0℃左右，并滴加三氟乙酸(1mL)。滴毕，在25℃下搅拌2小时，并减压浓缩旋干，得到标题化合物(151mg，收率：93.40％)，其直接用于下一步。
MS m/z(ESI):855.4[M+H] +。
第三步：3-(7-(3-(苄氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(((S)-1-(3-(3-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-3-氧代丙氧基)丙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂 双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯的制备
依次将3-(3-((S)-2-(((4-(8-((苄氧基)羰基)-3,8-二氮杂 双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(3-(苄氧基)萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)丙氧基)丙酸(118mg,108.96μmol)和(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺 (56.29mg,130.75μmol)依次加入DMF(2mL)中。将反应体系在冰浴中控温0℃左右，并依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(53.86mg,141.64μmol)和N,N-二异丙基乙胺(71.82mg,555.67μmol)。加毕，将反应体系在该温度下搅拌1小时，并滴加入冰水(10mL)中。将析出的固体抽滤，并将滤饼烘干，得到标题化合物(108mg，收率：78.20％)。
MS m/z(ESI):1267.6[M+H] +。
第四步：(2S,4R)-1-((S)-2-(3-(3-((S)-2-(((4-(3,8-二氮杂 双环[3.2.1]辛烷-3-基)-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)丙氧基)丙酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
将3-(7-(3-(苄氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(((S)-1-(3-(3-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-3-氧代丙氧基)丙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶基并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂 双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯(60mg,47.34μmol)加入二氯甲烷(2mL)和乙腈(6mL)的混合溶剂中，在冰浴下滴加碘代三甲基硅烷(37.89mg,189.35μmol)。滴毕，在10℃下搅拌6小时。将反应体系用冰水淬灭，低温浓缩，并通过制备高效液相色谱法纯化，得到标题化合物(4.93mg，收率：9.08％)。
MS m/z(ESI):1043.5[M+H] +。
1H-NMR(400MHz,CD 3OD):δ9.15(s,1H),8.86(s,1H),8.41(br,1H),7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.53(d,J＝8.0Hz,1H),7.44-7.36(m,5H),7.29-7.21(m,3H),5.58(br,1H),4.79-4.72(m,3H),4.61-4.29(m,5H),4.00(s,2H),3.86-3.81(m,3H),3.76-3.56(m,5H),3.48-3.41(m,2H),3.16-3.07(m,4H),2.63-2.49(m,2H),2.44(s,3H),2.22-1.98(m,13H),0.98(s,9H)。
实施例4：(2S,4R)-1-((S)-2-(5-((S)-2-(((4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(3-羟基萘-1- 基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基吡咯烷-1-基)戊酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)- 4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物4)的制备
第一步：4-((8-(苄基氧基)羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基))-2-(S)-1-(5-乙氧基-5-氧代戊基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-羧酸叔丁酯的制备
将4-(8-((苄氧基)羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基-3-基)-2-氯-5,6-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶- 7(8H)-羧酸叔丁酯(1.26g,2.33mmol)和(S)-5-(2-(羟甲基)吡咯烷-1-基)戊酸乙酯(1.34g,4.67mmol)溶于1,4-二氧六环(20mL)中，加入碳酸铯(2.28g,7.00mmol)，用氮气置换三次，加入Pd(dppf)Cl 2(340mg,0.466mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(405mg,0.7mmol)，在100℃搅拌12小时。将反应体系冷却至室温后，用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，浓缩除去溶剂，所得剩余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1，体积比)，得到标题化合物(2.0g，收率：72.0％)。
MS m/z(ESI):707.4[M+H] +。
第二步：3-(2-(S)-1-(5-乙氧基-5-氧代戊基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯的制备
将4-((8-(苄基氧基)羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基))-2-(S)-1-(5-乙氧基-5-氧代戊基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-羧酸叔丁酯(1.0g,1.42mmol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(20mL)中，在20℃搅拌2小时。直接浓缩，得到标题化合物(0.6g，收率：69.9％)。
MS m/z(ESI):607.4[M+H] +。
第三步：3-(7-(3-(苄氧基)萘-1-基)-2-(((S)-1-(5-乙氧基-5-氧代戊基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯的制备
将3-(2-(S)-1-(5-乙氧基-5-氧代戊基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯(200.0mg,0.33mmol)和3-苄氧基-1-溴萘(155mg,0.5mmol)溶于甲苯(10mL)中，加入碳酸铯(215mg,0.66mmol)，用氮气置换三次，加入甲烷磺酸(2-二环己基膦基-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(28mg,0.033mmol)，在100℃搅拌8小时。将反应体系冷却至室温后，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，浓缩除去溶剂，所得剩余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1，体积比)，得到标题化合物(70.0mg，收率：25.6％)。
MS m/z(ESI):839.4[M+H] +。
第四步：5-((S)-2-(((4-(8-((苄氧基)羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(3-(苄氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)戊酸的制备
将3-(7-(3-(苄氧基)萘-1-基)-2-(((S)-1-(5-乙氧基-5-氧代戊基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯(70mg,0.083mmol)溶于乙醇(5mL)中，滴加氢氧化钠(16.6mg,0.415mmol)的水溶液，在25℃反应4小时。浓缩有机溶剂，用盐酸调节pH＝5，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，浓缩，得到标题化合物(60.9mg，收率：90.0％)。
MS m/z(ESI):811.4[M+H] +。
第五步：3-(7-(3-(苄基氧基)萘-1-基)-2-(S)-1-(5-(S)-1-(2S,4R)-4-羟基-2-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-5-氧代戊基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯的制备
将5-((S)-2-(((4-(8-((苄氧基)羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-7-(3-(苄氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)戊酸(60.9mg,75μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入(2S,4R)-1-(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(38.5mg,82.5μmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(37.05mg,97.5μmol)和三乙胺(37.9mg,375μmol)，25℃搅拌1小时。将反应液滴入水中，析出固体，过滤，干燥滤饼，得到标题化合物(35.0mg，收率：38.1％)。
MS m/z(ESI):1223.5[M+H] +。
第六步：(2S,4R)-1-((S)-2-(5-((S)-2-(((4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基吡咯烷-1-基)戊酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备。
将3-(7-(3-(苄基氧基)萘-1-基)-2-(S)-1-(5-(S)-1-(2S,4R)-4-羟基-2-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-5-氧代戊基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯(30mg,24.5μmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，冷却体系到0℃，滴加氢溴酸醋酸溶液(19.33mg,71.67μmol)，在0℃搅拌20分钟，弃去上清液后，用甲醇稀释，用碳酸氢钠溶液调节pH＝7-8并浓缩该溶液，残留物经制备高效液相色谱仪纯化，得到标题化合物(12mg，收率：48.8％)。
MS m/z(ESI):999.5[M+H] +。
1H-NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.84(s,1H),8.54(s,1H),8.04(d,J＝8.0Hz,1H),7.61(d,J＝8.0Hz,1H),7.44-7.42(m,2H),7.39-7.34(m,3H),7.27-7.23(m,2H),6.85-6.79(m,2H),4.63-4.47(m,6H),4.39-4.29(m,4H),4.13-4.05(m,4H),3.91-3.88(m,2H),3.80-3.72(m,4H),3.52-3.43(m,2H),3.15-3.10(m,2H),2.93(s,2H),2.44(s,3H),2.36-2.29(m,2H),2.21-2.17(m,2H),2.10-2.07(m,2H),2.04-1.93(m,6H),1.69-1.62(m,4H),1.01(s,9H)。
实施例5：(2S,4R)-1-((S)-2-(6-((S)-2-(((4-(3,8-二氮杂双环[3,2.1]辛烷-3-基)-7-(3-羟基萘-1- 基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)己酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)- 4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物5)的制备
采用实施例4中的合成路线，将第一步反应原料(S)-5-(2-(羟甲基)吡咯烷-1-基)戊酸乙酯替换为(S)-6-(2-(羟甲基)吡咯烷-1-基)己酸乙酯，得到标题化合物(20mg，收率：46.1％)。
MS m/z(ESI):1013.5[M+H] +。
1H-NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.86(s,1H),8.53(s,1H),8.05(d,J＝8.0Hz,1H),7.62(d,J＝8.0Hz,1H),7.45-7.34(m,6H),7.27-7.24(m,1H),6.86(d,J＝2.0Hz,1H),6.79(d,J＝2.0Hz,1H),4.60-4.30(m,9H),4.14-4.10(m,4H),3.89-3.75(m,5H),2.94-2.67(m,6H),2.45(s,3H),2.36-2.12(m,5H),2.09-1.89(m,8H),1.84-1.81(m,2H),1.66-1.61(m,4H),1.41-1.35(m,2H),1.00(s,9H)。
实施例6：(2S,4R)-1-((S)-2-(7-((S)-2-(((4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(3-羟基萘-1- 基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)庚酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)- 4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物6)的制备
采用实施例4的合成路线，将第一步反应原料(S)-5-(2-(羟甲基)吡咯烷-1-基)戊酸乙酯替换为(S)-7-(2-(羟甲基)吡咯烷-1-基)庚酸乙酯，得到标题化合物(24mg，收率：49.4％)。
MS m/z(ESI):1027.5[M+H] +。
1H-NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.85(s,1H),8.54(s,1H),8.05(d,J＝8.0Hz,1H),7.62(d,J＝8.0Hz,1H),7.45-7.23(m,6H),6.86-6.78(m,2H),4.61-4.31(m,9H),4.13-4.10(m,4H),3.90-3.77(m,5H),3.61-3.31(m,5H),3.20-2.60(m,6H),2.45(s,3H),2.33-1.76(m,12H),1.67-1.55(m,4H),1.45-1.31(m,4H),1.01(s,9H)。
实施例7：(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((1-(2-((4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟 -3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)乙酰胺-3,3-二甲基丁 酰基-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物7)的制备
第一步：3-(2-(2-(4-((2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基哌啶-1-基)乙氧基)-8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-(三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
向50mL的圆底烧瓶中，依次加入3-(7-氯-2-(2-(4-((2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(146mg,0.23mmol)、2-[2-氟-6-(甲氧基甲氧基)-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-萘基]乙炔基三异丙基硅烷(180mg,0.35mmol)、磷酸钾(98mg,0.46mmol)、1,4-二氧六环(5mL)和水(0.5mL)，用氮气置换三次，向其中加入甲磺酸[(二(1-金刚烷基)丁基膦基)-2-(2′-氨基-1,1′-联苯基)]钯(II)(36mg,0.05mmol)，用氮气置换三次，将反应混合物加热至100℃，在搅拌下反应12小时。冷却至室温，向其中加入水，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，用饱和食盐水(10mL)洗涤有机相三次，将所得有机相无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到标题化合物(185mg，收率：80.2％)。
MS m/z(ESI):987.5[M+H] +。
第二步：2-((1-(2-((4-(8-(叔丁氧羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)乙酸的制备
向50mL的圆底烧瓶中，依次加入3-(2-(2-(4-((2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基哌啶-1-基)乙氧基)-8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-(三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(160mg,0.16mmol)、甲醇(2mL)、水(1mL)和氢氧化锂(34mg,0.8mmol)，将反应混合物在25℃搅拌反应4小时。减压蒸除溶剂，向其中加入 水(2mL)，用1N稀盐酸调节至pH＝5-6，静置，抽滤，得到标题化合物(138mg，收率：90％)。
MS m/z(ESI):959.5[M+H] +。
第三步：3-(8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)-2-(2-(4-((2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)))氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]-辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
向50mL的圆底烧瓶中，依次加入2-(1-(2-((4-(8-(叔丁氧羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)乙酸(134mg,0.14mmol)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(68mg,0.14mmol)、N,N-二异丙基乙胺(36mg,0.28mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，将反应混合物冷却至0℃，向其中分批次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(80mg,0.21mmol)，将反应混合物升温至25℃，在搅拌下反应12小时。将反应混合物倒入水中，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，将有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤两次，将所得有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到标题化合物(166mg，收率：85.7％)。
MS m/z(ESI):1386.7[M+H] +。
第四步：3-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(2-(4-((2))-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
向50mL的圆底烧瓶中，依次加入3-(8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)-2-(2-(4-((2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)))氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]-辛烷-8-羧酸叔丁酯(166mg,0.12mmol)和二氯甲烷(2mL)，向反应溶液中加入1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(0.24mL,0.24mmol)，将反应混合物在25℃搅拌反应12小时。减压蒸除溶剂，将反应混合物倒入水中，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，将有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤两次，就所得有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到标题化合物(142mg，收率：96％)。
MS m/z(ESI):1229.6[M+H] +。
第五步：(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((1-(2-((4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)乙酰胺-3,3-二甲基丁酰基-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
向50mL的圆底烧瓶中，依次加入3-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(2-(4-((2))-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)吡啶并[4,3-d]嘧 啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(135mg,0.11mmol)和1,4-二氧六环(2mL)，向其中加入4M氯化氢的1,4-二氧六环溶液(0.2mL,0.8mmol)，将反应混合物在25℃搅拌反应12小时。减压蒸除溶剂，向其中加入水，用饱和碳酸氢钠水溶液调节至pH＝8-9，静置，抽滤，获得固体，并通过制备高效液相色谱法纯化，得到标题化合物(42mg，收率：35％)。
MS m/z(ESI):1085.5[M+H] +。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.16(s,1H),9.03(s,1H),8.99(s,1H),8.47(d,J＝7.6Hz,1H),7.97(dd,J＝9.2,6.0Hz,1H),7.48-7.27(m,7H),7.17(d,J＝2.4Hz,1H),5.15(d,J＝3.6Hz,1H),4.92-4.85(m,1H),4.45-4.27(m,7H),3.95-3.85(m,3H),3.64-3.54(m,6H),3.32(s,3H),2.96(d,J＝10.8Hz,2H),2.70-2.51(m,3H),2.45(s,3H),2.09-1.99(m,3H),1.78-1.45(m,9H),1.36-1.19(m,5H),0.93(s,9H)。
实施例8：(2S,4R)-1-(2-(3-((1-(2-(4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟 基萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰 基)-4-羟基-N-(S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物8)的制备
第一步：3-(7-氯-8-氟-2-(2-羟基乙氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
将3-(2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(200mg,457.64μmol)溶于DMF(1.00mL)中，加入碳酸铯(456.45mg,1.37mmol)和乙二醇(85.21mg,1.37mmol)，在25℃搅拌2小时。向反应液中加水，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，用饱和食盐水(20mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，减压浓缩，得到标题化合物(200mg，收率：94.3％)。
MS m/z(ESI):454.2[M+H] +。
第二步：3-(8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-(三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)-2-(2-羟 基乙氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
将3-(7-氯-8-氟-2-(2-羟基乙氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(190mg,418μmol)溶于1,4-二氧六环(10mL)和水(1mL)中，加入2-[2-氟-6-(甲氧基甲氧基)-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-萘基]乙炔基三异丙基硅烷(276.31mg,533.71μmol)、磷酸钾(227mg,1.07mmol)和甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(25.9mg,35.58μmol)，用氮气置换三次，在100℃下搅拌15小时。冷却反应液到室温，加水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，用饱和食盐水(20mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，并减压浓缩，将残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1/1，体积比)，得到标题化合物(200mg，收率：59.5％)。
MS m/z(ESI):804.4[M+H] +。
第三步：3-(8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-(三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)-2-(2-氧代乙氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
将3-(8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-(三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)-2-(2-羟基乙氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(50mg,62.2μmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，然后加入戴斯-马丁氧化剂(100mg,236.32μmol)，在25℃搅拌18小时。浓缩反应液，然后加入乙酸乙酯(30mL)稀释残留物，用水(30mL)洗涤两次，收集有机相，用饱和食盐水(150mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，并减压浓缩，得到标题化合物(30mg，收率：60.1％)。
MS m/z(ESI):802.4[M+H] +。
第四步：3-(8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)-2-(2-(4-(((5-(1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)异噁唑-3-基)氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
将3-(8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-(三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)-2-(2-氧代乙氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(22mg,27.4μmol)溶于二氯甲烷(499.77μL)和异丙醇(499.77μL)中，加入(2S,4R)-4-羟基-1-(3-甲基-2-(3-(哌啶-4-基甲氧基)异噁唑-5-基)丁酰基)-N-(S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(16.34mg,27.4μmol)、乙酸钠(10.69mg,130.30μmol)，在冰浴下搅拌15分钟后，再加入2-甲基吡啶硼烷(14.08mg,130.30μmol)，在25℃下搅拌15小时。浓缩反应液，将残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1，体积比)，得到标题化合物(20mg，收率：52.8％)。
MS m/z(ESI):1381.7[M+H] +。
第五步：3-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(4-(((5-(1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)异噁唑-3-基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
将3-(8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)-2-(2-(4-(((5-(1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)异噁唑-3-基)氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(20mg,13.75μmol)溶于二氯甲烷(1mL)，然后加入四丁基氟化铵(1M,27.50μL)，用氮气保护，在25℃下搅拌8小时。向反应液中加水(10mL)、乙酸乙酯(10mL)萃取两次，用饱和食盐水(10mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，并减压浓缩，得到标题化合物(20mg，收率：94.9％)。
MS m/z(ESI):1225.5[M+H] +。
第六步：(2S,4R)-1-(2-(3-((1-(2-(4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-(S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
将3-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(4-(((5-(1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)异噁唑-3-基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(23.53mg,16.32μmol)溶于二氯甲烷(2mL)，加入三氟乙酸(310μL)，在25℃搅拌2小时。将反应液浓缩，然后用乙酸乙酯(10mL)稀释残留物，用碳酸氢钠溶液调节至pH＝8～9，分液，用无水硫酸钠干燥有机相，浓缩，粗品通过高效液相色谱法纯化，得到标题化合物(3.89mg，收率：18.7％)。
MS m/z(ESI):1081.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ9.04(d,J＝8.0Hz,1H),8.88-8.83(m,1H),8.46(s,1H),7.85(dd,J＝16.0,8.0Hz,1H),7.45-7.28(m,6H),7.20(d,J＝4Hz,1H),5.86(d,J＝8Hz,1H),4.99(dd,J＝16.0,8.0Hz,2H),4.74-4.61(m,4H),4.57-4.49(m,1H),4.43(s,1H),3.95(s,2H),3.88-3.75(m,4H),3.69(d,J＝8.0Hz,1H),3.65-3.59(m,1H),3.37(d,J＝8.0Hz,2H),3.13(dd,J＝4.0,4.0Hz,2H),2.63-2.32(m,7H),2.22-2.17(m,1H),2.05-1.89(m,5H),1.79(d,J＝12.0Hz,3H),1.52-1.45(m,4H),1.31(d,J＝16.0Hz,4H),1.06-1.02(m,2H),0.95(t,J＝8.0Hz,2H),0.90(t,J＝8.0Hz,1H)。
实施例9：(2S,4R)-1-(2S)-2-(1-(2-(4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟萘- 1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)乙酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4- 羟基-N-(S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物9)的制备
第一步：3-(2-(4-(2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)-8-氟-7-(7-氟-8-(三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
向50mL单口瓶中，依次加入叔丁基3-(7-氯-2-(2-(4-(2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(50mg,78.48μmol)、((2-氟-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)萘-1-基)乙炔基)三异丙基硅烷(53.26mg,117.71μmol)、磷酸钾(33.27mg,156.95μmol)、1,4-二氧六环(10mL)和水(2mL)，向其中加入甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(11.43mg,15.70μmol)，用氮气置换三次，将反应混合物在100℃搅拌反应12小时。待反应液冷却至室温，向反应液中加水，用乙酸乙酯(20mL)萃取两次，用饱和食盐水(20mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，并减压浓缩。得到标题化合物(39.6mg，收率：54.43％)。
MS m/z(ESI):927.5[M+H] +。
第二步：2-(1-(2-(8-(叔丁氧羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-8-氟-7-(7-氟-8-(三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)乙酸的制备
将3-(2-(4-(2-乙氧基-2-氧乙氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)-8-氟-7-(7-氟-8-(三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(39.6mg,42.71μmol)溶于甲醇(5mL)和水(1mL)，再加入一水合氢氧化锂(8.97mg，170.84μmol)，在25℃下搅拌12小时。将反应液浓缩后，向反应液中加水，用1M HCl溶液调节至pH＝5～6，再用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，用食盐水(30mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，并减压浓 缩。将残留物通过快速柱层析色谱纯化(洗脱机：二氯甲烷/甲醇＝20/3，体积比)，得到标题化合物(18mg，收率：46.88％)。
MS m/z(ESI):899.5[M+H] +。
第三步：3-(8-氟-7-(7-氟-8-(三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)-2-(4-(2-(S)-1-(2S,4R)-4-羟基-2-(S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-氨基)-2-氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
将2-(1-(2-(8-(叔丁氧羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基-3-基)-8-氟-7-(7-氟-8-(三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)乙酸(18mg,22.02μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)，加入(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(10.59mg,22.02μmol)、三乙胺(10.13mg,100.09μmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(9.90mg,26.02μmol)，用氮气置换三次，在25℃下搅拌12小时。向反应液中加水，再用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，用食盐水(10mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，并减压浓缩。得到标题化合物(14.5mg，收率：54.63％)。
MS m/z(ESI):1325.7[M+H] +。
第四步：3-(7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(2-(S)-1-(2S,4R)-4-羟基-2-(S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)哌啶-1-基)乙氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
将3-(8-氟-7-(7-氟-8-(三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)-2-(4-(2-(S)-1-(2S,4R)-4-羟基-2-(S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-氨基)-2-氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(14.5mg,10.94μmol)溶于四氢呋喃(4mL)，降温至0℃，加入四丁基氟化铵(1M,33.94μL)，搅拌1小时。加入乙酸乙酯(10mL)稀释残留物，用水(10mL)洗涤，收集有机相，用饱和食盐水(150mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，并减压浓缩。得到标题化合物(12mg，收率：93.80％)。
MS m/z(ESI):1169.5[M+H] +。
第五步：(2S,4R)-1-(2S)-2-(1-(2-(4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)乙酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
将3-(7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(2-(S)-1-(2S,4R)-4-羟基-2-(S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)哌啶-1-基)乙氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(12mg,10.26μmol)溶于二氯甲烷(2mL)，加入三氟乙酸(310μL)，在25℃搅拌2小时。将反应液浓缩，用乙酸乙酯(10mL)稀释残留物，用碳酸氢钠溶液调节至pH＝8～9，分液，用无水硫酸钠干燥有机相，浓缩， 粗品通过高效液相色谱法纯化，得到体标题化合物(1.80mg，收率：16.41％)。
MS m/z(ESI):1069.5[M+H] +
1H-NMR(400MHz,CD 3OD)δ9.03(s,1H),8.87(d,J＝4.0Hz,1H),8.54(s,1H),8.10(dd,J＝12.0,8.0Hz,2H),7.68-7.61(m,2H),7.47-7.36(m,5H),4.98(dd,J＝16,8Hz,2H),4.70-4.49(m,8H),4.40(d,J＝24.0Hz,1H),3.98(q,J＝16.0Hz,2H),3.83(d,J＝12.0Hz,1H),3.73(t,J＝8.0Hz,5H),3.44(dd,J＝16.0,8.0Hz,3H),3.09-3.00(m,2H),2.48-2.37(m,5H),2.24-2.17(m,1H),1.97-1.77(m,8H),1.56(d,J＝8.0Hz,1H),1.49-1.45(m,4H),1.37-1.25(m,2H),1.02(s,9H)。
实施例10：(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((1-(2-((4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟 -3-羟基萘-1-基)-8-氟喹唑啉-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)- 4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物12)的制备
第一步：3-(2-(2-(4-((2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)-8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
将3-(8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(110.0mg,137.3μmol)溶于二氯甲烷(500.0μL)和异丙醇(500.0μL)中，加入2-(哌啶-4-基甲氧基)乙酸乙酯(41.4mg,206.0μmol)、三水乙酸钠(93.4mg,686.5μmol)，在冰浴下搅拌15分钟后，再加入2-甲基吡啶硼烷(73.4mg,343.5μmol)，在25℃下搅拌15小时。浓缩反应液，将残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1，体积比)，得到标题化合物(90mg，收率：66.5％)。
MS m/z(ESI):986.0[M+H] +。
第二步：2-((1-(2-((4-(8-(叔丁氧基羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-8-氟-7-(7-氟-3-(甲 氧基甲氧基)-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)乙酸的制备
将3-(2-(2-(4-((2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)-8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(90.0mg,91.3μmol)溶于甲醇(3mL)和水(0.7mL)中，加入一水合氢氧化锂(19.15mg,456.5μmol)，在25℃下搅拌2小时。向反应液中加入水(5mL)，用1M HCl的水溶液将pH调节至6后用乙酸乙酯(5mL)萃取三次，收集有机相，用饱和食盐水洗涤(5mL)一次，用无水硫酸钠干燥有机相，浓缩有机相，得到标题化合物(20mg，收率：22.9％)。
MS m/z(ESI):958.0[M+H] +。
第三步：3-(8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)-2-(2-(4-((2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)))氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)喹唑啉-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
将2-((1-(2-((4-(8-(叔丁氧基羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)乙酸(20.0mg,20.88μmol)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(11mg,25μmol)溶于DMF(2mL)，降温至0℃，加入N,N-二异丙基乙胺(10.8mg,83.5μmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(15.9mg,41.8μmol)。在25℃下搅拌3小时。向反应液中加水(10mL)，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，用饱和食盐水(20mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，并减压浓缩，将残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1，体积比)，得到标题化合物(25mg，收率：86.5％)。
MS m/z(ESI):1384.0[M+H] +。
第四步：3-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(2-(4-((2))-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)喹唑啉-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
将3-(8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)-2-(2-(4-((2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)))氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)喹唑啉-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(25mg,18.06μmol)溶于DMF(1mL)中，然后加入氟化铯(13.7mg,90.3μmol)，用氮气保护，在25℃下搅拌2小时。向反应液中加水(10mL)，有白色固体析出，过滤收集滤饼后干燥，得到标题化合物(20mg，收率：90.5％)。
MS m/z(ESI):1228.5[M+H] +。
第五步：(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((1-(2-((4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3- 羟基萘-1-基)-8-氟喹唑啉-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
将3-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(2-(4-((2))-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)喹唑啉-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(20.00mg,16.28μmol)溶于二氯甲烷(2mL)，加入三氟乙酸(200μL)，在25℃搅拌2小时。将反应液浓缩，用乙酸乙酯(10mL)稀释残留物，用碳酸氢钠溶液调节至pH＝8～9，分液，用无水硫酸钠干燥有机相，浓缩，将粗品通过高效液相色谱法纯化，得到标题化合物(1mg，收率：5.7％)。
MS m/z(ESI):1084.0[M+H] +。
1H-NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.87-8.86(m,1H),7.83-7.81(m,2H),7.43-7.30(m,7H),7.13-7.09(m,1H),5.49(s,5H),4.76-4.43(m,10H),3.96-3.48(m,7H),3.48-3.31(m,5H),2.69(s,1H),2.47-2.45(t,J＝8.0Hz,3H),2.21-1.93(m,12H),1.33-1.28(m,4H),1.02(s,9H)。
实施例11：(2S,4R)-1-(2-(3-((1-(2-((4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3- 羟基萘-1-基)-8-氟喹唑啉-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟 基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物13)的制备
第一步：3-(8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)-2-(2-(4-(((5-(1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基))氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)异噁唑-3-基)氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)喹唑啉-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
将3-(8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)-2-(2-氧代乙氧基))喹唑啉-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(55.0mg,68.7μmol)溶于二氯甲烷(500.0μL)和异丙醇(500.0μL)中，加入(2S,4R)-4-羟基-1-(3-甲基-2-(3-(哌啶-4-基甲氧基)异噁唑-5-基)丁酰基)-N-(S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(61.3mg,103.1μmol)，三 水乙酸钠(46.7mg,343.5μmol)，在冰浴下搅拌15分钟后，再加入2-甲基吡啶硼烷(36.7mg,343.5μmol)，在25℃下搅拌15小时。浓缩反应液，将残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1，体积比)，得到标题化合物(40mg，收率：42.2％)。
MS m/z(ESI):1380.0[M+H] +。
第二步：3-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(2-(4-(((5-(1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)异噁唑-3-基)氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)喹唑啉-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
将3-(8-氟-7-(7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1-基)-2-(2-(4-(((5-(1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基))氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)异噁唑-3-基)氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)喹唑啉-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(40mg,28.99μmol)溶于DMF(1mL)中，然后加入氟化铯(220mg,144.95μmol)，用氮气保护，在25℃下搅拌2小时。向反应液中加水(10mL)，有白色固体析出，过滤收集滤饼后干燥，得到标题化合物(35mg，收率：98.6％)。
MS m/z(ESI):1225.5[M+H] +。
第三步：(2S,4R)-1-(2-(3-((1-(2-((4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟喹唑啉-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
将3-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(2-(4-(((5-(1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)异噁唑-3-基)氧基)甲基)哌啶-1-基)乙氧基)喹唑啉-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(35.00mg,28.59μmol)溶于二氯甲烷(2mL)，加入三氟乙酸(200μL)，在25℃搅拌2小时。将反应液浓缩后乙酸乙酯(10mL)稀释残留物，用碳酸氢钠溶液调pH＝8～9，分液，用无水硫酸钠干燥有机相，浓缩，粗品通过高效液相色谱法纯化，得到标题化合物(14.00mg，收率：45.3％)。
MS m/z(ESI):1080.5[M+H] +。
1H-NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.87-8.84(m,1H),7.86-7.77(m,2H),7.38-7.27(m,6H),7.08(d,J＝4.0Hz,1H),5.86-5.80(m,1H),5.03-4.98(m,3H),4.66-4.44(m,10H),3.92-3.76(m,3H),3.70-3.48(m,4H),3.10(dd,J＝4.0,4.0Hz,2H),2.68(s,1H),2.46-2.37(m,6H),2.21-1.76(m,9H),1.57-1.16(m,8H),1.05-0.88(m,6H)。
生物学实施例：
试验例1：化合物与His-KRAS(G12D&Q61H)蛋白的表面等离子共振(SPR)结合试验
●试验系统和参数
蛋白：His-KRAS(G12D&Q61H)(义翘神州)；
缓冲液体系：
1)蛋白固定缓冲液：10mM HEPES,150mM NaCl,0.05％Tween-20和10μM GDP；
2)运行缓冲液A：10mM HEPES,150mM NaCl,0.05％Tween-20和10μM GDP；
3)运行缓冲液B：10mM HEPES,150mM NaCl,0.05％Tween-20，10μM GDP和1％DMSO；
化合物浓度：在运行缓冲液B中50μM～0.781μM，两倍梯度稀释，DMSO终浓度为1％；
结合解离时间：120s开/200s关；
流速：50μL/min；
仪器：Biacore T200(GE Healthcare)；
芯片：S系列NTA传感器芯片。
●试验步骤
(1)蛋白固定
1)温度设置：将仪器温度设置到25℃。
2)插入S系列NTA传感器芯片，然后执行“Prime”命令。
3)开始手动程序，设置流速为10μL/min。
4)选择流通池2，然后分别依次自动进样350mM EDTA(pH 8.0)溶液和50mM NaOH溶液(进样速度为60μL/min，进样时间为60s，各重复两次)以冲洗芯片表面。
5)芯片表面活化：选择流通池2，自动进样10mM NiCl 2，流速为4μL/min，进样时间为500s。
6)用蛋白固定缓冲液将His-KRAS(G12D&Q61H)稀释至40μg/mL，然后自动进样120μL His-KRAS(G12D&Q61H)(进样速度为4μL/min，进样时间为1150s)以将His-KRAS(G12D&Q61H)蛋白固定在流通池2表面。
7)将流速调回10μL/min，平衡芯片表面至基线基本稳定(基线下降速度<2RU/min)。
(2)样品检测
在Biacore T200控制软件中利用method模式编写程序。温度设为25℃，流速设为50μL/min。程序先进行8次运行缓冲液B进样，然后按照化合物浓度从小到大的顺序设置自动进样，使化合物流过芯片上固定的蛋白表面，与芯片结合。设置流通池1为参比通道，并且设置0浓度作为内置空白对照。每一个循环后均用50％的DMSO清洗进样针。用1％的DMSO标准曲线校正DMSO的信号值影响。
●数据处理
对化合物与蛋白的结合信号和解离信号进行实时记录，并在数据处理(Biacore T200评价软件)时扣除参比通道与内置空白对照的信号值(双扣除)。将参比通道和内置空白对照的信号值双扣除的传感图用Kinetics或者稳态Affinity(1:1)模式拟合。用K D值(K d/K a)表征化合物与蛋白的亲和力，其中K d为解离速率常数，K a为结合速率常数。
●试验结果
按照上述方法测定化合物与His-KRAS(G12D&Q61H)蛋白的亲和力，结果如表1所示：
表1.化合物与His-KRAS(G12D&Q61H)亲和力测试结果
化合物 K D(nM)
2 191
3 329
7 12
●试验结论
在化合物与His-KRAS(G12D&Q61H)的结合试验中，本发明的化合物表现出较强的亲和力。
试验例2：KRAS-G12D(鸟嘌呤-5'-三磷酸(GTP)水解酶G12D突变型)/SOS1体外蛋白结合 抑制活性试验
●试验系统和参数
KRAS-G12D/SOS1结合测定试剂盒(Cisbio)；
蛋白：Tag1-SOS1和Tag2-KRAS G12D；
标签：Anti tag1 tb 3+和Anti tag2 XL665；
缓冲液：稀释缓冲液和检测缓冲液；
激活核苷酸：GTP(Sigma)；
KRAS-G12D/SOS1结合测定试剂盒组分：Tag1-SOS1、Tag2-KRAS G12D、Anti tag1 tb 3+和Anti tag2 XL665均为1ⅹ；
GTP：10000nM；
化合物和KRAS-G12D/SOS1蛋白预孵育结合时间：室温15分钟；
蛋白与标签反应时间：4℃密封孵育3小时或延长至过夜；
酶标仪：BMG PHERAstar Fluorescence，均相时间分辨荧光(HTRF)方法，激发波长337nm，发射波长665nm和620nm。
●试验步骤
将待测化合物与Tag1-SOS1、Tag2-KRAS G12D和GTP的混合物在稀释缓冲液中室温孵育15分钟以进行蛋白结合。向反应板中加入用检测缓冲液稀释的标签，在4℃下孵育3小时或延长至过夜。将反应板放入酶标仪中，并采用HTRF法读取板中各孔的信号值。
●数据处理
以溶媒组(含1ⅹTag1-SOS1、1ⅹTag2-KRAS G12D、Anti tag1 tb 3+和Anti tag2 XL665,1％DMSO)为阴性对照、反应缓冲液组(含1ⅹTag1-SOS1、Anti Tag1 tb 3+和Anti tag2 XL665,1％DMSO)为空白对照，计算各浓度组的相对抑制活性，抑制率＝100％-(测试组-空白组)/(溶媒组-空白组)*100％。按照四参数模型拟合曲线，计算化合物的半数抑制浓度(IC 50)。
●试验结果
按照上述方法测定化合物的KRAS-G12D/SOS1体外蛋白结合抑制活性，结果如表2中所 示。
表2.KRAS-G12D/SOS1体外蛋白结合抑制活性试验结果
化合物编号 IC 50(nM)
1 410
2 61
3 153
4 32
5 49
6 43
7 13
●试验结论
在KRAS-G12D/SOS1体外蛋白结合抑制活性试验中，本发明的化合物表现出较强的抑制结合活性。
试验例3：化合物与KRAS-G12D(鸟嘌呤-5'-三磷酸(GTP)水解酶G12D突变型)/VHL体外 酶学三元复合物结合活性试验
●试验系统和参数
蛋白：
人KRAS/K-Ras(G12D&Q61H)蛋白(His标签，Sino Biological)：300nM
人VHL重组蛋白(Abnova)：300nM
标签：
抗6xHis AlphaLISA受体微珠(PerkinElmer)：20μg/mL
α-谷胱甘肽供体微球(PerkinElmer)：20μg/mL
缓冲液：AlphaLISA 10X缓冲液(PerkinElmer)
酶标仪：BMG PHERAstar Fluorescence，AlphaLISA方法，激发波长680nm，发射波长615nm
●试验步骤
将待测化合物与KRAS/K-Ras(G12D&Q61H)蛋白和人VHL重组蛋白在23℃下预孵育60分钟以结合。加入受体微珠和供体微球，并在23℃下避光孵育60分钟。将反应板放入酶标仪中，采用AlphaLISA法读取板中各孔的信号值。
●数据处理
以加入样品的孔(含不同稀释浓度的样品，KRAS/K-Ras(G12D&Q61H)蛋白、人VHL重组蛋白、抗6xHis AlphaLISA受体微珠和α-谷胱甘肽供体微球)为测试组，以溶媒组(含KRAS/K-Ras(G12D&Q61H)蛋白、人VHL重组蛋白、抗6xHis AlphaLISA受体微珠和α-谷胱甘肽供体微球,1％DMSO)为阴性对照，计算各化合物的相对激活活性，采用SigmaPlot 12.5软件四参数 方程拟合标准曲线，计算出EC 50。
试验例4：化合物对细胞中的KRAS-G12D蛋白降解试验
●试验系统和参数：
细胞：人结肠癌细胞GP2D或人转移胰腺腺癌AsPC-1细胞
蛋白定量：Pierce TM BCA蛋白检测试剂盒(Thermofisher)
蛋白电泳：电泳槽(Thermo)180V恒压电泳
蛋白转印：转印槽(BIO-RAD)300mA恒流转膜
●试验步骤
(1)化合物处理细胞
将细胞铺板于六孔板中，每孔细胞量为1.5ⅹ10 6个细胞。贴壁培养过夜，加入化合物(浓度为0.25、2.5、25μM)处理24h。
(2)样品处理
1)弃去培养基，加入2ml PBS，清洗细胞。弃去洗液，加入适量细胞裂解液(#9803)，置于冰上裂解30min，然后在4℃下以12000rpm离心10分钟，并取出上清液。
2)参考BCA试剂盒说明书，取40μL标准浓度蛋白(2mg/ml)和细胞裂解液1:1梯度稀释得到1、0.5、0.25、0.125、0.0625mg/ml的标准浓度蛋白稀释液。取10μL步骤1)所得的上清液和标准浓度蛋白稀释液分别加入到96孔板样品孔中，每孔加入200μL A与B试剂混合液(50:1)。在37℃下震荡30分钟，然后检测562nm的OD值。拟合标准浓度蛋白稀释液的标准曲线，根据曲线计算出步骤1)所得的上清液中的蛋白浓度，并通过适当地稀释，以蛋白浓度最低的上清液中的蛋白浓度为准，将其余各上清液的蛋白浓度调整至该浓度。
3)将5X SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(碧云天，P0015L)加入样品中，100℃变性蛋白10min。
(3)蛋白分离转印和显影
1)使用NuPAGE 4-12％梯度蛋白预制胶(Thermofisher，NP0336BOX)，通过180V恒压电泳分离蛋白样品。凝胶使用转印槽恒流转膜90min，并封闭于5％脱脂奶粉中。
2)使用KRAS-G12D抗体(CST，14429)和α-Tubulin抗体(CST，2125S)根据抗体说明书稀释比例稀释后分别与膜在4℃下孵育过夜，用TBST洗涤后使用山羊抗兔HRP二抗(CST，7074)参考抗体说明书稀释比例稀释后与膜在室温下孵育1h，使用TBST洗涤。
3)将膜浸泡于ECL发光液(Millipore\WBKLS0500)中，使用Bio-rad凝胶成像仪采集荧光信号。
●数据处理
利用Image J软件对结果图片进行定量，通过与不加化合物的对照组进行对比计算降解率(KRAS-G12D)，计算公式如下：
降解率(％)＝(1-(实验组KRAS-G12D强度×对照组α-Tubulin强度)/(实验组α-Tubulin强度× 对照组KRAS-G12D强度))×100％
●试验结果
按照上述方法测定化合物对细胞中KRAS-G12D蛋白降解作用，结果如表3和表4中所示。
表3.化合物对人结肠癌细胞GP2D细胞中KRAS-G12D蛋白的降解率
化合物编号 降解率(2.5μM) 降解率(25μM)
2 61.88％ 75.08％
表4.化合物对人转移胰腺腺癌AsPC-1细胞中KRAS-G12D蛋白的降解率
化合物编号 降解率(2.5μM)
7 92.06％
●试验结论
本发明的化合物对细胞中的靶蛋白表现出较强的降解活性。 试验例5：化合物的细胞增殖 抑制活性测试试验
●试验系统和步骤
AsPC-1、GP2D、Panc 04.03和AGS细胞分别使用RPMI1640+10％胎牛血清(FBS)、DMEM+10％FBS、RPMI1640+15％FBS+10μg/mL胰岛素、和Ham's F12培养基培养，置于37℃的二氧化碳培养箱中进行培养。使用96孔平底细胞培养板铺板细胞，每孔铺2000个细胞，培养过夜。次日，加入化合物稀释液。化合物稀释最高浓度100μM，4倍浓度梯度稀释9个浓度点，或化合物稀释最高浓度3μM，3倍浓度梯度稀释9个浓度点，DMSO作为对照。细胞培养液中的DMSO终浓度为1％。
化合物与AsPC-1细胞在37℃的二氧化碳培养箱中孵育7天后使用CELL 试剂(Promega公司)检测，化合物与GP2D、Panc 04.03和AGS细胞在37℃的二氧化碳培养箱中孵育6天后使用CELL 试剂(Promega公司)检测。未处理细胞基线在加入化合物当天检测。
●数据处理
化合物的抑制活性通过以下公式计算：抑制率＝100％-(测试组/溶媒组)*100％。使用SigmaPlot 12.5软件四参数模型拟合曲线，计算化合物对细胞增殖的半数抑制浓度(IC 50)。
●试验结果
按照上述方法测定化合物对KRAS G12D突变细胞的增殖抑制活性，结果如表5中所示
表5.化合物对KRAS G12D突变细胞的增殖抑制活性
●试验结论
本发明的化合物对KRAS G12D突变的细胞表现出较强的增殖抑制活性。
上述实施例不以任何方式限制本发明的范围。除本文中描述的那些外，根据前述描述，本发明的多种修改对本领域技术人员而言会是显而易见的。这样的修改也意图落入所附权利要求书的范围内。本申请中所引用的各参考文献(包括所有专利、专利申请、期刊文章、书籍及任何其它公开)均以其整体援引加入本文。

Claims (15)

  1. 化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，所述化合物具有式(I)的结构：
    其中：
    为单键或双键；
    当X 1与X 2之间的 为单键时，X 1选自C(R 1) 2和C(O)；且X 2选自N和CR 1；
    当X 1与X 2之间的 为双键时，X 1选自CR 1和N；且X 2为C；
    当X 3与X 4之间的 为单键时，X 3和X 4各自独立地选自C(R 1) 2、NR 8和C(O)；
    当X 3与X 4之间的 为双键时，X 3和X 4各自独立地选自CR 1和N；
    每个R 1独立地选自氢、卤素、C 1-6烷基、C 1-6烯基、C 3-6环烷基、C 1-6卤代烷基、-O-C 1-6烷基、-O-C 1-6卤代烷基和-O-C 3-6环烷基；或者同一碳原子上的两个R 1与它们共同连接的碳原子形成羰基、C 3-6环烷基或3-6元杂环基；
    R 8独立地选自氢、C 1-3烷基、C 3-6环烷基和C 1-3卤代烷基；
    R 2选自C 6-10芳基或5-10元杂芳基，所述芳基和杂芳基各自任选地被一个或多个R 3取代；
    当存在时，每个R 3独立地选自卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 1-6卤代烷基、-C 1-6烷基-OH、-O-C 1-6烷基、C 3-6环烷基、3-10元杂环基和5-10元杂芳基，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基的取代基取代；
    L为-L 1-L 2-L 3-L 4-L 5-L 6-；
    L 1选自-O-、-S-、-NR 1a-、C 1-6亚烷基、C 3-6亚环烷基和3-10元亚杂环基，所述亚烷基、亚环烷基和亚杂环基各自任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基的取代基取代；
    L 2为共价键，或者选自-O-、-NR 2a-、C 1-6亚烷基、-O-C 1-6亚烷基、C 1-6亚烷基-O-、C 3-6亚环烷基和3-10元亚杂环基，所述亚烷基、亚环烷基和亚杂环基各自任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基的取代基取代；
    L 3为共价键，或者选自-O-、-NR 3a-、C 1-6亚烷基、-O-C 1-6亚烷基、C 1-6亚烷基-O-、C 3-6亚环烷基和3-10元亚杂环基，所述亚烷基、亚环烷基和亚杂环基各自任选地被一个或多个选自卤素、羟基、 氰基、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基的取代基取代；
    L 4为共价键，或者选自-O-、-NR 4a-、C 1-6亚烷基、-O-C 1-6亚烷基、C 1-6亚烷基-O-、C 3-6亚环烷基和3-10元亚杂环基，所述亚烷基、亚环烷基和亚杂环基各自任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基的取代基取代；
    L 5为共价键，或者选自-O-、-NR 5a-、C 1-6亚烷基、-O-C 1-6亚烷基-、C 1-6亚烷基-O-、C 3-6亚环烷基和3-10元亚杂环基，所述亚烷基、亚环烷基和亚杂环基各自任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基的取代基取代；
    L 6选自-O-、-S-、-NR 6a-、C 1-6亚烷基、-O-C 1-6亚烷基-、C 1-6亚烷基-O-、C 3-6亚环烷基、-C(O)-、-C(O)-N(R 6a)-和3-10元亚杂环基，所述亚烷基、亚环烷基和亚杂环基各自任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基的取代基取代；
    R 1a、R 2a、R 3a、R 4a、R 5a和R 6a各自独立地选自氢和C 1-6烷基；
    M为E3泛素连接酶VHL的小分子配体，优选其结构如下式所示：
    其中
    A选自-NH-、-E-C(＝O)-NR 7a-、-E-NR 7a-C(＝O)-、-E-C(＝O)-和5-10元亚杂芳基，所述亚杂芳基任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基的取代基取代；
    E选自C 1-6亚烷基、C 3-6亚环烷基和3-10元亚杂环基，所述亚烷基、亚环烷基和亚杂环基各自任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基的取代基取代；
    R 7a选自氢和C 1-6烷基；
    R 4选自氢、C 1-6烷基、C 3-6环烷基和3-12元杂环基；
    R 5选自氢、C 1-6烷基、C 3-6环烷基、3-12元杂环基，所述烷基、环烷基和杂环基各自任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基的取代基取代；
    R 6选自氢、卤素、羟基、C 1-6烷基、C 2-6烯基和C 2-6炔基；且
    表示连接位点。
  2. 权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中所述化合物具有式(IA)、(IB)或(IC)的结构：
    其中R 1、R 2、L和M如权利要求1中所定义，且对于非氢的R 1，n为0、1、2、3或4。
  3. 权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中每个R 1独立地选自氢和卤素如氟或氯。
  4. 权利要求1-3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中R 2为任选地被1-3个R 3取代的萘基，且R 3各自独立地选自F、Cl、Br、I、甲基、乙基、异丙基、乙炔基和羟基，优选R 2为8-Cl-萘-1-基、3-OH-萘-1-基、8-乙炔基-7-F-3-OH-萘-1-基或8-乙炔基-7-F-萘-1-基。
  5. 权利要求1-4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中L 1为-O-。
  6. 权利要求1-5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中L 2为C 1-6亚烷基，优选为-CH 2-或-CH 2-CH 2-。
  7. 权利要求1-6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中L 3为含有一个N原子的3-6元亚杂环基，优选为含有一个N原子的5-6元亚杂环基，优选为
  8. 权利要求1-7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中L 4和L 5各自独立地选自共价键、C 1-6亚烷基、-O-C 1-6亚烷基-和C 1-6亚烷基-O-，优选-L 4-L 5-为-CH 2-CH 2-CH 2-O-CH 2-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-、-CH 2-O-CH 2-或-CH 2-。
  9. 权利要求1-8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中L 6为-C(O)-或-O-。
  10. 权利要求1-9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中A为-NH-；R 4为C 1-6烷基，优选为叔丁基；且R 5和R 6均为氢。
  11. 权利要求1-9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中A为5-10元亚 杂芳基，优选5-6元亚杂芳基，优选 R 4为C 1-6烷基，优选为异丙基；R 5为C 1-6烷基，优选为甲基；且R 6为氢。
  12. 权利要求1-11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中所述化合物选自：
  13. 药物组合物，其包含预防和/或治疗有效量的权利要求1-12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，以及一种或多种药学上可接受的载体。
  14. 权利要求1-12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者权利要求13所述的组合物在制备用于预防和/或治疗KRAS G12D介导的相关疾病的药物中的用途。
  15. 制备权利要求2所述的化合物的方法，其如下路线1、路线2、路线3或路线4所示：
    路线1
    其中
    R 1、R 2、n、L和M如权利要求1-9中任一项所定义；
    LG 1a、LG 2a、LG 3a和X各自独立地表示离去基团，例如卤素、三氟甲磺酸酯基、硫甲基、甲基亚砜、甲基砜、甲氧基或乙氧基；
    PG 1a和PG 2a各自独立地表示保护基，例如苄氧羰基(Cbz)、叔丁氧羰基(Boc)、甲基或苄基；
    所述方法包括以下步骤：
    (1)使化合物IA-1与化合物IA-2反应以得到化合物IA-3；
    (2)使化合物IA-3与化合物IA-4反应以得到化合物IA-5；
    (3)使化合物IA-5进行脱保护反应以得到化合物IA-6；
    (4)使化合物IA-6与化合物IA-7进行偶联反应以得到化合物IA-8；
    (5)使化合物IA-8与化合物IA-9反应以得到化合物IA-10；和
    (6)使化合物IA-10进行脱保护反应以得到化合物IA；
    路线2
    其中
    R 1、R 2、L和M如权利要求1-9中任一项所定义；
    LG b、LG 1b、LG 2b、LG 3b和LG 4b各自独立地表示离去基团，例如卤素、三氟甲磺酸酯基、硫甲基、甲基亚砜、甲基砜、硼酸、硼酸酯、三丁基锡、甲氧基或乙氧基；
    PG 1b表示保护基，例如苄氧羰基(Cbz)或叔丁氧羰基(Boc)；
    所述方法包括以下步骤：
    1)使化合物IB-1与化合物IB-2反应以得到化合物IB-3；
    2)使化合物IB-3与化合物IB-4反应以得到化合物IB-5；
    3)使化合物IB-5与化合物IB-6进行偶联反应以得到化合物IB-7；
    4)使化合物IB-7与化合物IB-8反应以得到化合物IB-9；和
    5)使化合物IB-9进行脱保护反应以得到化合物IB；
    路线3
    其中
    其中R 1、R 2、L、L 1、L 2、L 3、L 4、L 5、L 6和M如上文所定义；
    LG b、LG 1b、LG 2b和LG 4b各自独立地表示离去基团，例如卤素、三氟甲磺酸酯基、硫甲基、甲基亚砜、甲基砜、硼酸、硼酸酯、三丁基锡、甲氧基或乙氧基；
    PG 1b表示保护基，例如苄氧羰基(Cbz)或叔丁氧羰基(Boc)；
    所述方法包括以下步骤：
    1)使化合物IB-1与化合物IB-2反应以得到化合物IB-3；
    2)使化合物IB-3与化合物IB-10反应以得到化合物IB-11；
    3)使化合物IB-11与化合物IB-6进行偶联反应以得到化合物IB-12；
    4)使化合物IB-12进行氧化反应以得到化合物IB-13；
    5)使化合物IB-13与化合物IB-14反应以得到化合物IB-15；和
    6)使化合物IB-15进行脱保护反应以得到化合物IB；
    路线4
    其中
    其中R 1、R 2、L、L 1、L 2、L 3、L 4、L 5、L 6、n和M如上文所定义；
    LG c、LG 1c、LG 2c和LG 3c各自独立地表示离去基团，例如卤素、三氟甲磺酸酯基、硫甲基、甲基亚砜、甲基砜、硼酸、硼酸酯、三丁基锡、甲氧基或乙氧基；
    PG 1c表示保护基，例如苄氧羰基(Cbz)或叔丁氧羰基(Boc)；
    所述方法包括以下步骤：
    1)使化合物IC-1与化合物IC-2反应以得到化合物IC-3；
    2)使化合物IC-3与化合物IC-4反应以得到化合物IC-5；
    3)使化合物IC-5与化合物IC-6进行偶联反应以得到化合物IC-7；
    4)使化合物IC-7进行氧化反应以得到化合物IC-8；
    5)使化合物IC-8与化合物IC-9反应以得到化合物IC-10；和
    6)使化合物IC-10进行脱保护反应以得到化合物IC。
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