CN117440757A - 农业园艺用杀虫组合物及农业园艺害虫的防除方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种农业园艺用杀虫组合物或使用该农业园艺用杀虫组合物的农业园艺害虫的防除方法，其中，所述农业园艺用杀虫组合物含有来自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的杀虫蛋白以及嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐。

Description

农业园艺用杀虫组合物及农业园艺害虫的防除方法

技术领域

本发明涉及一种农业园艺用杀虫组合物及农业园艺害虫的防除方法。

背景技术

含有苏云金芽孢杆菌培养物的制剂(以下称为“BT剂”)作为微生物农药被广泛用于农业害虫和卫生害虫的防除(防治)。一般来说，使用化学合成农药时，为了避免在作物上残留，必须在收获作物之前放置一段时间。另一方面，BT剂容易在土壤中分解，可以在临收获前用于作物。另外，BT剂与化学合成农药相比，对害虫种类显示出特异性的效果，因此能够不危害有用昆虫而只防除目标害虫种类。根据以上理由，BT剂不用担心环境污染和对人体有害的物质残留在作物上，在推进减少农药、环境保护型农业上被利用(非专利文献1)。

苏云金芽孢杆菌是广泛生活在土壤中的革兰氏阳性菌，在孢子形成期在菌体内产生含有被称为晶体的结晶性杀虫蛋白(以下简称为“杀虫蛋白”)的颗粒。已知该杀虫蛋白在昆虫的肠内被蛋白酶活化，对昆虫显示杀虫活性。另外，苏云金芽孢杆菌因其亚种的不同而产生不同的杀虫蛋白(杀虫性蛋白)，这些杀虫蛋白的杀虫活性不同。例如已知，kurstaki亚种和aizawai亚种对鳞翅目和双翅目昆虫显示活性，israelensis亚种对双翅目昆虫显示活性，另外，tenebrionis亚种和japonensis buibui亚种对鞘翅目昆虫显示活性(非专利文献2)。

目前，杀虫蛋白被鉴定分类为Cry1～Cry73的400种以上。对于苏云金芽孢杆菌来说，一种菌株不一定产生一种杀虫蛋白，例如，苏云金芽孢杆菌的HD-1菌株产生三种杀虫蛋白：Cry1A(a)、Cry1A(b)和Cry1A(c)。

杀虫蛋白以分子量为基准，大致分为130kDa型和70kDa型这两种。130kDa型包括对鳞翅目有活性的Cry1A、对双翅目有活性的Cry4A和Cry4B、对鞘翅目有活性的Cry8C、对线虫目有活性的Cry5等。另一方面，在70kDa型中，包括对鳞翅目和双翅目两者都显示活性的Cry2，对双翅目显示活性的Cry11A和Cry11B，对鞘翅目显示活性的Cry3B等(非专利文献3)。

到目前为止，正在开发和销售有多种利用上述杀虫蛋白的特性的BT剂。但是，在栽培现场，要求使用与化学合成农药同样具有经济且有效的稳定性和速效性的BT剂的防除方法。为了增强BT剂的杀虫活性，至今为止采取了各种各样的方法，其中之一是混合协合剂(Synergist)的方法。作为混合协合剂(Synergist)的方法，可举出：混合不同杀虫蛋白的方法，例如，混合Cry1A(a)和Cry1A(c)的方法(非专利文献4)、混合Cry1A(a)和Cry1C的方法(非专利文献5)、将Cry1A或Cry2与营养型细胞时分泌的杀虫蛋白Vip3Aa混合的方法(非专利文献6、非专利文献7)。另外，作为混合协合剂(Synergist)的方法，有将杀虫蛋白与芽孢杆菌属的芽孢混合的方法(非专利文献8、非专利文献9)、将杀虫蛋白与蜡状芽孢杆菌(B.cereus)等产生的zwittermicinA混合的方法(专利文献1)等。

已知上述zwittermicinA是由蜡状芽孢杆菌或苏云金芽孢杆菌产生的低分子且水溶性的抗生素(非专利文献10)，抑制植物病原性丝状菌和一部分细菌的生长(非专利文献11)。Manker等人(专利文献2)报道了zwittermicinA单独不显示杀虫活性，但通过与苏云金芽孢杆菌混合，增强苏云金芽孢杆菌的活性。

另外，Fernandez等人报道了除了杀虫蛋白之外，产生zwittermicinA的苏云金芽孢杆菌与以往的苏云金芽孢杆菌相比具有更高的杀虫活性(专利文献3)。

另外，在另一文献(专利文献4)中，报道了与zwittermicinA不同的另一种增强苏云金芽孢杆菌的杀虫活性的物质，但其结构尚未确定。

以BT剂为对象的害虫种类大多为鳞翅目害虫，其中，斜纹夜蛾(Spodoptera litura)和棉铃虫(Helicoverpa armigera)是非常广食性的，危害很多蔬菜类、田地作物，成为带来严重危害的重要害虫。斜纹夜蛾广泛分布在亚洲，在日本国内，人们曾认为，除非气候变暖，否则它无法在田里过冬。然而，由于近年来供暖设施数量的增加和气候变暖等，斜纹夜蛾的繁殖地一直在向北移动，其繁殖面积也在扩大。在斜纹夜蛾所属的夜蛾(Spodoptera)属中，作为农业害虫包括很多重要的种类，例如，包括甜菜夜蛾(S.exigua)、淡剑灰翅夜蛾(S.depravata)、草地贪夜蛾(S.frugiperda)等。

嘌呤霉素(4-N-D-丙氨酰-2,4-二氨基-2,4-二脱氧阿拉伯糖)由链霉菌(Streptomyces)属细菌或芽孢杆菌属细菌产生，作为对灰霉病、菌核病、白粉病等有效的药剂而广为人知。嘌呤霉素是在1971年Hata等人从链霉菌属(Streptomyces sp.)F-1028菌株的培养滤液中分离出来的(非专利文献12)，之后在1973年Omura等人报道了其对豆类的灰霉病、菌核病、黄瓜的白粉病有效果(非专利文献13)。嘌呤霉素的结构在1974年由OMura等人确定(非专利文献14)。之后，通过独立的3个研究小组实现了全部合成(非专利文献15～24)，确认了下述式所示的嘌呤霉素的结构。

[化1]

另外，关于天然来源的嘌呤霉素，除了上述的链霉菌属(Streptomyces sp.)之外，还报道了蜡状芽孢杆菌的特定菌株产生嘌呤霉素(专利文献5)。此外，在1989年报道了枯草芽孢杆菌的特定的芽孢杆菌(B.subtilis)菌株产生嘌呤霉素(专利文献6)。

已知卡那霉素水解物(3-氨基-3-脱氧-D-吡喃葡萄糖)由蜡状芽孢杆菌或产氨基糖苷芽孢杆菌(B.aminoglucosidicus)产生。卡那霉素水解物是1958年由Cron等人分离出的卡那霉素的酸水解产物，确认其结构由下述式表示(非专利文献25)。此后，在1996年Milner等人报道了卡那霉素水解物对灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、链格孢菌(Alternaria alternata)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的效果(非专利文献26)。

[化2]

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特表平8-501798号公报

专利文献2：日本特表2001-516201号公报

专利文献3：WO2020/102592公报

专利文献4：美国专利6635245公报

专利文献5：日本特开昭54-157896号公报

专利文献6：日本特开平2-209803号公报

专利文献7：WO2018/029775公报

非专利文献

非专利文献1：Plant Biotechnology Journal.，9，283-300(2011)

非专利文献2：Microbiological Reviews.，June，242-255(1989)

非专利文献3：Toxins.，6，3296-3325(2014)

非专利文献4：Appl.Environ.Microbiol.，Feb，583-586(1996)

非专利文献5：Letters in Applied Microbiology.，40，460-465(2005)

非专利文献6：PLoS ONE 9(10):e107196.doi:10.1371/journal.pone.0107196(2014)

非专利文献7：Appl.Biochem.Biotechnol.，July；188(3)，798-809(2019).

非专利文献8：Appl.Environ.Microbiol.，Feb，564-569(1996)

非专利文献9：Appl.Environ.Microbiol.，Apr，1385-1389(1998)

非专利文献10：Tetrahedron Lett.，35(16)，2499-2502(1994)

非专利文献11：Curr.Microbiol.，37，6-11(1998)

非专利文献12：J.Antibiotics.，24:900-901(1971)

非专利文献13：Agric.Biol.Chem.，37，2805-2812(1973)

非专利文献14：J.Chem.Soc.Perkin Trans.，1，1627-1631(1974)

非专利文献15：Tetrahedron Lett.，16，1853-1856(1975)

非专利文献16：Tetrahedron Lett.，17，379-382(1976)

非专利文献17：Chem.Lett.，5，201-202(1976)

非专利文献18：Carbohydr.Res.，60，75-84(1978)

非专利文献19：Carbohydr.Res.，72，261-266(1979)

非专利文献20：B.Chem.Soc.Jpn.，51，951-952(1978)

非专利文献21：Carbohydr.Res.，51，10-12(1976)

非专利文献22：Agric.Biol.Chem.，42，153-158(1978)

非专利文献23：Carbohydr.Res.，52，137-149(1976)

非专利文献24：J.Carbohydr.Chem.，7，605-616(1988)

非专利文献25：J.Antibiotics，Ser.A.，11(2):73(1958)

非专利文献26：Appl.Environ.Microbiol.，62(8)，3061-3065(1996)

非专利文献27：J.Am.Chem.Soc.，83，8，1882-1885(1961)

非专利文献28：Angew.Chem.Int.Ed.，5(11)，967-967(1966)

非专利文献29：J.Bacteriol.，94(2)，485(1967)

非专利文献30：Appl.Environ.Microbiol.，64(12)，4782-4788(1998)

非专利文献31：Pest Manag Sci.，73，2419-2428(2017)

非专利文献32：Appl.Environ.Microbiol.，Dec，4404-4412(1994)

非专利文献33：Appl.Environ.Microbiol.，July，3966-3977(2005)

发明内容

发明要解决的课题

上述BT剂与化学农药相比，由于紫外线的影响和在植物叶面上的附着不均等，效果的稳定性和速效性有时变差，希望开发出防除效果更优异的BT剂。

在这样的情况下，本发明人等为了生产出杀虫效果高的生物制剂而进行了深入研究，结果发现，通过将嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐与杀虫蛋白混合，具有显著增强杀虫蛋白的杀虫活性的效果。

迄今为止，没有关于嘌呤霉素和卡那霉素水解物的杀虫活性的报道，嘌呤霉素和卡那霉素水解物作为杀虫蛋白的杀虫活性增强因子的功能完全不为人知。

作为含有嘌呤霉素的农业园艺用组合物，报道了含有嘌呤霉素和表面活性蛋白类作为有效成分的农业园艺用杀菌组合物(专利文献7)。在专利文献7中，确认了该组合物具有杀菌作用，但未提及杀虫作用。

本发明的目的在于，提供一种杀虫效果高且对环境友好的新的农业园艺用杀虫组合物及农业园艺害虫的防除方法。

解决课题的手段

本发明人等详细研究了以往的杀菌性化合物的效果，发现嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐显著增强了杀虫蛋白的杀虫活性，显示出极其有用的杀虫活性。由此，完成了本发明的农业园艺用杀虫组合物，其能够比以往的BT剂更有效地防除危害很多蔬菜类、田地作物而带来严重危害的害虫，特别是鳞翅目害虫。

作为其实施方式，本发明包含以下例示的发明。

[1]一种农业园艺用杀虫组合物，其含有：来自苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)的杀虫蛋白，以及嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物(kanosamine)或其盐。

[2]如[1]所述的农业园艺用杀虫组合物，其中，所述杀虫蛋白含有Cry1A或Cry1C。

[3]如[1]或[2]所述的农业园艺用杀虫组合物，其包含含有所述杀虫蛋白的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)培养干燥物。

[4]如[1]～[3]任一项所述的农业园艺用杀虫组合物，其含有产生所述嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的菌的培养干燥物。

[5]如[1]～[4]任一项所述的农业园艺用杀虫组合物，其还含有0.1～10质量％的氯化钙。

[6]如[1]～[5]任一项所述的农业园艺用杀虫组合物，其用于使用所述嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的含量为0.1ppm～100ppm的液体施用于植物。

[7]如[1]～[6]任一项所述的农业园艺用杀虫组合物，其用于使用所述杀虫蛋白的含量为0.1ppm～500ppm的液体施用于植物。

[8]如[1]～[7]任一项所述的农业园艺用杀虫组合物，其含有嘌呤霉素盐酸盐。

[9]如[1]～[8]任一项所述的农业园艺用杀虫组合物，其含有盐酸卡那霉素水解物。

[10]一种农业园艺害虫的防除方法，其包括以下工序：

将来自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的杀虫蛋白施用于植物的工序(a)，和

将嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐与所述杀虫蛋白同时地连续或分别施用于植物的工序(b)。

[11]一种农业园艺害虫的防除方法，其包括将嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐施用于产生来自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的杀虫蛋白的重组植物的工序。

[12]如[10]所述的防除方法，其中，所述工序(a)或(b)的施用包括土壤混合、灌注、种子涂抹、种子浸渍或茎叶散布。

[13]如[10]或[12]所述的防除方法，其中，使用含有所述杀虫蛋白以及所述嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的农业园艺用杀虫组合物。

[1′]一种农业园艺用杀虫组合物，其含有来自苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)的杀虫蛋白，用于与嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐组合使用。

[2′]一种农业园艺用杀虫组合物，其含有嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐，用于与来自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的杀虫蛋白组合使用。

[3′]如[1′]或[2′]所述的农业园艺用杀虫组合物，其含有：

来自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的杀虫蛋白，和

嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐。

[4′]如[1′]～[3′]任一项所述的农业园艺用杀虫组合物，其中，所述杀虫蛋白含有Cry1A或Cry1C。

[5′]如[1′]～[4′]任一项所述的农业园艺用杀虫组合物，其包含含有所述杀虫蛋白的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)培养干燥物。

[6′]如[1′]～[5′]任一项所述的农业园艺用杀虫组合物，其含有产生所述嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的菌的培养干燥物。

[7′]如[1′]～[6′]任一项所述的农业园艺用杀虫组合物，其还含有0.1～10质量％的氯化钙。

[8′]如[1′]～[7′]任一项所述的农业园艺用杀虫组合物，其用于使用所述嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的含量为0.1ppm～100ppm的液体施用于植物。

[9′]如[1′]～[8′]任一项所述的农业园艺用杀虫组合物，其用于使用所述杀虫蛋白的含量为0.1ppm～500ppm的液体施用于植物。

[10′]如[1′]～[9′]任一项所述的农业园艺用杀虫组合物，其含有嘌呤霉素盐酸盐。

[11′]如[1′]～[10′]任一项所述的农业园艺用杀虫组合物，其含有盐酸卡那霉素水解物。

[1″]一种组合物的用于防除农业园艺害虫的用途，其中，所述组合物含有来自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的杀虫蛋白，其与嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐相组合。

[2″]一种组合物的用于防除农业园艺害虫的用途，其中，所述组合物含有嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐，其与来自苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)的杀虫蛋白相组合。

[3″]如[1″]或[2″]所述的用途，其中，所述组合物含有来自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的杀虫蛋白及嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐。

[4″]如[1″]～[3″]任一项所述的用途，其中，所述杀虫蛋白含有Cry1A或Cry1C。

[5″]如[1″]～[4″]任一项所述的用途，其中，所述组合物包含含有所述杀虫蛋白的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)培养干燥物。

[6″]如[1″]～[5″]任一项所述的用途，其中，所述组合物含有产生所述嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的菌的培养干燥物。

[7″]如[1″]～[6″]任一项所述的用途，其中，所述组合物还含有0.1～10质量％的氯化钙。

[8″]如[1″]～[7″]任一项所述的用途，用于使用所述嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的含量为0.1ppm～100ppm的液体施用于植物。

[9″]如[1″]～[8″]任一项所述的用途，用于使用所述杀虫蛋白的含量为0.1ppm～500ppm的液体施用于植物。

[10″]如[1″]～[9″]任一项所述的用途，其中，所述组合物含有嘌呤霉素盐酸盐。

[11″]如[1″]～[10″]任一项所述的用途，其中，所述组合物含有盐酸卡那霉素水解物。

发明效果

根据本发明的一个方面，提供一种杀虫效果高、对环境负荷小的农业园艺用杀虫组合物及农业园艺害虫的防除方法。该农业园艺用杀虫组合物对危害蔬菜类、田地作物的害虫，特别是斜纹夜蛾、棉铃虫等具有优异的杀虫活性，与以往的BT制剂单独施用的情况相比，能够以更有效的防除和少量的施用量有效地进行农业园艺害虫的防除。

具体实施方式

(农业园艺用杀虫组合物)

根据本发明的一个方面，来自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的杀虫蛋白与嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐组合使用。分别制备来自苏云金芽孢杆菌的杀虫蛋白及嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐，在施用于植物时将它们混合而制成一种组合物，也可以分别分开地施用于植物。另外，也可以事先准备、保存含有来自苏云金芽孢杆菌的杀虫蛋白及嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的组合物，将该组合物施用于植物。

在本发明的一实施方式中，用于产生组合物中使用的杀虫蛋白的苏云金芽孢杆菌可以从天然中分离，也可以从菌株保管机构等购买。作为苏云金芽孢杆菌，例如优选使用kurstaki亚种、aizawai亚种、israelensis亚种、tenebrionis亚种、或japonensis buibui亚种。此外，苏云金芽孢杆菌还可以包括其活菌体、菌芽孢、通过热或化学手段对这些进行了灭菌处理的菌体、或这些菌体的粉碎物。苏云金芽孢杆菌可以使用苏云金芽孢杆菌培养干燥物。

另外，作为含有来自苏云金芽孢杆菌的杀虫蛋白的组合物，也可以使用市售的BT制剂产品。作为市售的BT制剂产品的例子，可举出：Tune-Up(注册商标)水分散粒剂、Basilex(注册商标)可湿性粉剂、Delphin(注册商标)水分散粒剂、Zentari(注册商标)水分散粒剂、Flowback(注册商标)DF、Esmarc(注册商标)DF、Toaro(注册商标)CT可湿性粉剂、Saburina(注册商标)流动剂、Agree(注册商标)WG、Deliver(注册商标)、Javelin(注册商标)WG、Thuricide(注册商标)、Biobit(注册商标)DF、Crymax(注册商标)WDG、Dipel(注册商标)DF、Florbac(注册商标)、Foray(注册商标)48B、XenTari(注册商标)DF、CoStar(注册商标)WG、Cordalene(注册商标)、Cutlass(注册商标)、BactoSpeine(注册商标)DF、BMP1232X(注册商标)WP、Biolep(注册商标)、Lepinox Plus(注册商标)、Lipel SP、Turex(注册商标)50WG等。

在本发明的一实施方式中，杀虫蛋白只要是来自苏云金芽孢杆菌的杀虫蛋白，就没有特别限制，具体地，例如可举出：Cry1A(a)、Cry1A(b)、Cry1A(c)、Cry1C、Cry1D、Cry2A、Vip3A等。在本发明的一实施方式中，组合物可以仅包含1种杀虫蛋白或包含2种以上。在一实施方式中，杀虫蛋白可以使用由苏云金芽孢杆菌产生的杀虫蛋白。在另一实施方式中，可通过化学合成来制备杀虫蛋白。

杀虫蛋白可以通过利用苏云金芽孢杆菌等细菌的生物合成来制造。此外，杀虫蛋白可以由天然存在的属于苏云金芽孢杆菌的细菌产生，也可以由使用常规的基因工程方法制作的转化体(例如大肠杆菌、枯草杆菌、植物等)产生。予以说明，在制作这样的转化体时使用的具有编码杀虫蛋白的氨基酸序列的核苷酸序列的基因(以下有时也称为“本基因”)可以是(1)从天然存在的本基因中克隆的，也可以是(2)在从天然存在的本基因中克隆的基因的核苷酸序列中，其一部分核苷酸的缺失、置换或添加被人为引入的本基因(即，对天然存在的基因进行了变异处理(部分变异引入法、突变处理等))，还可以是(3)人工合成的。

在本发明的一实施方式中，用作增强杀虫蛋白的杀虫活性的成分的嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐可以通过如下所示的化学合成制备，也可以从具有产生这些化合物的能力的微生物的培养滤液中获得。

嘌呤霉素或其盐可以通过非专利文献13～24所述的方法通过化学合成来制造。此外，嘌呤霉素或其盐可以作为链霉菌属(Streptomyces sp.)、蜡状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等具有产生嘌呤霉素或其盐的能力的微生物的发酵产物，通过生物合成来制造，也可以使用具有产生嘌呤霉素或其盐的能力的微生物的培养菌体。

卡那霉素水解物或其盐可以通过非专利文献27、非专利文献28的方法通过化学合成来制造。此外，卡那霉素水解物或其盐可以作为蜡状芽孢杆菌、产氨基糖苷芽孢杆菌等具有产生卡那霉素水解物或其盐的能力的微生物的发酵产物，通过生物合成来制造，也可以使用具有产生卡那霉素水解物或其盐的能力的微生物的培养菌体。此外，卡那霉素水解物或其盐可以作为试剂从Sigma-Aldrich Japan有限公司购买。

在本发明的一实施方式中，可以使用嘌呤霉素的盐或卡那霉素水解物的盐。作为嘌呤霉素的盐或卡那霉素水解物的盐，没有特别限定，可举出：盐酸盐、磷酸盐、硼酸盐、甲酸盐、醋酸盐、苯甲酸盐等，优选盐酸盐和醋酸盐。

具有产生嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的能力的各个微生物的培养方法没有特别限定，可以使用在固体培养基上的静置培养、液体培养等公知的方法。可利用的培养基的种类、培养条件等只要是能使上述微生物生存并繁殖的培养基，就没有特别限制，例如除了肉提取物培养基等一般的培养基以外，还可举出：含有葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物的培养基等。另外，除了液体培养基以外，也可以使用含有琼脂的斜面培养基和平板培养基等固体培养基。

作为上述培养基的碳源，可以利用上述菌株可利用的所有种类。具体地说，除了葡萄糖、半乳糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、麦芽提取物、废糖蜜、糖稀、淀粉水解物等糖之外，还可举出：具有产生嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的能力的微生物可利用的各种合成或天然碳源。

作为上述培养基的氮源，同样可以利用以蛋白胨、肉提取物、酵母提取物、大豆粉、玉米浆等有机含氮物为代表的该菌株可利用的各种合成或天然物。

另外，根据微生物培养的常规方法，可以根据需要向上述培养基中添加食盐、磷酸盐等无机盐类，钙、镁、铁等金属盐类，维生素、氨基酸等微量营养源。

上述培养可以在振荡培养、通气培养等需氧条件下进行。培养温度优选为20～40℃，更优选为25～35℃，pH优选为5～8，更优选为6～7，培养期间优选为1～4天，更优选为2～3天。

使用嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的产生菌培养液中含有的嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐时，既可以使用该培养液本身，也可以使用培养滤液，还可以从培养滤液中纯化该物质使用。从培养液中分别纯化嘌呤霉素或其盐和卡那霉素水解物或其盐的方法没有特别限定，可以采用酸沉淀、盐析、超滤、各种色谱、电泳等公知的方法实施。

在一实施方式中，组合物可以是：1)包含化学合成的杀虫蛋白和化学合成的嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的组合物；2)包含化学合成的杀虫蛋白和生物合成的嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的组合物；3)包含化学合成的杀虫蛋白和含有嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的产生嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的微生物的培养干燥物的组合物；4)包含生物合成的杀虫蛋白和化学合成的嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的组合物；5)包含生物合成的杀虫蛋白和生物合成的嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的组合物；6)包含生物合成的杀虫蛋白和含有嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的产生嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的微生物的培养干燥物的组合物；7)包含含有杀虫蛋白的苏云金芽孢杆菌培养干燥物和化学合成的嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的组合物；8)包含含有杀虫蛋白的苏云金芽孢杆菌培养干燥物和生物合成的嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的组合物；9)包含含有杀虫蛋白的苏云金芽孢杆菌培养干燥物和含有嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的产生嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的微生物的培养干燥物的组合物；10)可同时产生杀虫蛋白以及嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的微生物的培养干燥物；11)可同时产生杀虫蛋白以及嘌呤霉素或其盐和卡那霉素水解物或其盐的微生物的培养干燥物，等。

作为苏云金芽孢杆菌的库尔斯塔克亚种(Bacillus thuringiensis subsp.kurstaki)培养干燥物和苏云金芽孢杆菌的亚鲇泽亚种类(Bacillus thuringiensis subsp.aizawai)培养干燥物中含有的杀虫蛋白，有Cry1A(a)、Cry1A(b)、Cry1A(c)、Cry1C、Cry1D、Cry2A等。在本发明的一实施方式中，可作为组合物中的活性成分的杀虫蛋白的含量取决于使用形式和稀释倍率，没有特别限定，但施用于植物的液体中的杀虫蛋白的合计含量(浓度)优选为0.1ppm～500ppm，更优选为1ppm～50ppm。

予以说明，作为杀虫蛋白的含量(浓度)的测定方法，通过Goodman等人的使用硫酸葡聚糖和聚乙二醇的沉淀分离法(非专利文献29)，从苏云金芽孢杆菌的培养干燥物中纯化杀虫蛋白组，接着，可以参考Masson等人的分析方法(非专利文献30)，使用HPLC进行分离和定量。另外，使用市售的BT制剂产品时，可以在稀释BT制剂产品的基础上，不进行纯化而参考上述Masson等人的分析方法(非专利文献30)，使用HPLC进行分离和定量，测定杀虫蛋白的含量(浓度)。

在本发明的一实施方式中，组合物中的嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的含量取决于使用形式和稀释倍率，没有特别限定，施用于植物的液体中的单独的嘌呤霉素或其盐或者单独的卡那霉素水解物或其盐的含量(浓度)优选为0.1ppm～100ppm，更优选为0.5ppm～5ppm。当嘌呤霉素或其盐与卡那霉素水解物或其盐并用时，施用于植物的液体中的嘌呤霉素或其盐与卡那霉素水解物或其盐的合计含量(浓度)优选为0.1ppm以上，更优选为0.5ppm以上。在作为产生嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的微生物的培养干燥物而得到嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的情况下，该培养干燥物中的嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的含量(浓度)可以根据Tanaka等人的分析方法(非专利文献31)使用CE-TOF-MS进行测定。然后，可以根据得到的该培养干燥物中的嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的含量(浓度)，考虑稀释率等，计算施用于植物的液体中的嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的含量(浓度)。

杀虫蛋白与嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的重量比没有特别限定，优选为1000∶1～1∶50，更优选为50∶1～1∶5。当使用嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物时，也可以使用上述重量比的数值范围。

在本发明的一实施方式中，为了改善贮存稳定性，可以使用氯化钙作为组合物的成分。组合物中的氯化钙的含量取决于使用形式和稀释倍率，没有特别限定，但在本发明的一实施方式中，相对于组合物优选为0.1～10质量％，更优选为1～5质量％。

在本发明的一实施方式中，所述组合物可不含表面活性蛋白类。表面活性蛋白类是指具有芽孢杆菌属细菌所产生的环酯肽(cyclic lipodepsipeptide)型的表面活性能力的物质，作为表面活性蛋白类，可举出：表面活性蛋白、[Ala⁴]表面活性蛋白、[Leu⁴]表面活性蛋白、[Val⁷]表面活性蛋白、[Ile⁷]表面活性蛋白等。在本申请中，“不含”是指没有特意添加特定的成分，允许该成分作为杂质含有。

在不含表面活性蛋白类的情况下，施用于植物时的液体中的表面活性蛋白类的含量可以小于1.0ppm、小于0.5ppm或小于0.1ppm。

根据本发明的一个方面，提供了一种与仅施用杀虫蛋白的情况相比具有高杀虫活性的组合物。因此，该组合物可以作为用于防除农业园艺害虫的农业园艺用杀虫组合物使用。通过使该组合物本身或其稀释液存在于根、茎、叶、种子等植物体上或其栽培土壤中，可以抑制各种农用害虫对作物的危害。

根据本发明的一个方面，所述组合物不仅可以用于鳞翅目害虫，还可以用于广泛的农业园艺害虫(例如，鞘翅目、半翅目、缨翅目、双翅目等昆虫类或线虫类、有害螨类等)的防除。特别是对于鳞翅目害虫可以优选使用。作为农业园艺害虫的例子，可举出以下的例子。

鳞翅目害虫：木蠹蛾(Cossus insularis)、茶小卷叶蛾(Adoxophyes honmai)、苹小卷蛾(Adoxophyes orana faciata)、梨小食心虫(Grapholita molesta)、茶长卷蛾(Homona magnamina)、大豆食心虫(Leguminivora glycinivorella)、银纹潜叶蛾(Lyonetia prunifoliella malinella)、茶细蛾(Caloptilia theivora)、金纹细蛾(Phyllonorycter ringoniella)、柑桔潜叶蛾(Phyllocnistis citrella)、葱菜蛾(Acrolepiopsis sapporensis)、小菜蛾(Plutella xylostella)、苹果银蛾(Argyresthia conjugella)、葡萄透翅蛾(Nokona regalis)、苹果透翅蛾(Synanthedon hector)、柿举肢蛾(Stathmopoda masinissa)、桃小食心虫(Carposina sasakii)、黄刺蛾(Monema flavescens)、二化螟(Chilo suppressalis)、稻纵卷叶螟(Cnaphalocrocis medinalis)、菜心野螟(Hellila undalis)、亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)、早熟禾拟茎草螟(Parapediasia teterrella)、地中海斑螟(Ephestia kuehniella)、大蜡螟(Galleris mellonella)、黄凤蝶(Papilio machaon hippocrates)、白粉蝶(Pieris rapae crucivora)、直纹稻弄蝶(Parnara guttata)、大造桥虫(Ascotis selenaria)、甘薯天蛾(Agrius convolvuli)、旋古毒蛾(Orgyia thyellina)、美国白蛾(Hyphantria cunea)、小地老虎(Agrotis ipsilon)、黄地老虎(Agrotis segetum)、豆银纹夜蛾(Autographa nigrisigna)、粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)、棉铃虫(Helicoverpa armigera)、烟夜蛾(Helicoverpa assulta)、甘蓝夜蛾(Mamestra brassicae)、粘虫(Mythimna separata)、稻螟蛉(Naranga aenescens)、甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)、斜纹夜蛾(Spodoptera litura)、美洲棉铃虫(Helicoverpa zea)、烟芽夜蛾(Heliothis virescens)、海灰翅夜蛾(Spodoptera littoralis)、草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)、亚热带粘虫(Spodoptera eridania)、烟草天蛾(Manduca sexta)、葡萄卷叶蛾(Endopiza viteana)、葡萄卷叶蛾(Pectinophora gossypiella)、苹果蠹蛾(Cydla pomonella)、欧洲玉米螟(Ostrinia nubilalis)、大豆尺夜蛾(Pseudoplusia includens)等。

鞘翅目：铜绿金龟子(Anomala cuprea)、大豆甲虫(Anomala rufocuprea)、日本金龟子(Popillia japonica)、甘蔗栉叩头虫(Melanotus tamsuyensis)、小圆皮蠹(Anthrenus verbasci)、茄二十八星瓢虫(Henosepilachna vigintioctopunctata)、黄粉虫(Tenebrio molitor)、赤拟谷盗(Tribolium castaneum)、星天牛(Anoplophora malasiaca)、松墨天牛(Monochamus alternatus endai)、绿豆象(Callosobruchus chinensis)、黄守瓜(Aulacophora femoralis)、黄曲条跳甲(Phyllotreta striolata)、甘薯小象甲(Cylas formicarius)、蒙栎象(Curculio sikkimensis)、稻水象甲(Lissorhoptrus oryzophilus)、玉米象(Sitophilus zeamais)、早熟禾象甲(Sphenophrus venatus vestius)、棉铃象甲(Anthonomus grandis)、梨虎(Rhynchites heros)、烟草甲虫(Lasioderma serricorne)、姬扁出尾虫(Epuraea domina)、稻负泥虫(Oulema oryzae)、苜蓿象鼻虫(Hypera postica)、马铃薯叶甲(Lepinotarsa decemlineata)、谷象(Sitophilus granarius)、十一星黄瓜甲虫(Diabrotica undecimpunctata)、西方玉米根虫(Diabrotica virgifera)、北方玉米根虫(Diabrotica barberi)、毒隐翅虫(Paederus fuscipes)等。

半翅目：葡萄叶蝉(Arboridia apicalis)、鸡体虱(Epiacanthus stramineus)、小贯小绿叶蝉(Empoasca onukii)、黑尾叶蝉(Nephotettix cincticeps)、灰飞虱(Laodelphax striatella)、褐飞虱(Nilaparvata lugens)、白背飞虱(Sogatella furcifera)、柑桔木虱(Diaphorina citri)、棉蚜(Aphis gossypii)、绣线菊蚜(Aphis spiraecola)、茄沟无网蚜(Aulacorthum solani)、甘蓝蚜(Brevicoryne brassicae)、苹果绵蚜(Eriosoma lanigerum)、桃蚜(Myzus persicae)、荷缢管蚜(Rhopalosiphum nymphaeae)、烟粉虱(Bemisia tabaci)、白粉虱(Trialeurodes vaporariorum)、康氏粉蚧(Pseudococcus comstocki)、角蜡蚧(Ceroplastes ceriferus)、红蜡蚧(Ceroplastes rubens)、条赤须盲蝽(Trigonotylus caelestialium)、梨冠网蝽(Stephanitis nashi)、日本二星蝽(Eysarcoris lewisi)、广二星蝽(Eysarcoris ventralis)、小珀蝽(Plautia crossota stali)、中稻缘蝽(Leptocorisa chinensis)、点蜂缘椿象(Riptortus clavatus)、菜蝽(Eurydema rugosa)、茶翅蝽(Halyomorpha mista)、稻绿蝽(Nezara viridula)、黄斑露尾甲(Togo hemipterus)、马铃薯叶蝉(Empoasca fabae)、柑橘粉虱(Dialeurodes citri)、吹绵蚧(Icerya purchasi)、矢尖蚧(Unaspis yanonensis)、黑刺粉虱(Aleurocanthus spiniferus)、温带臭虫(Cimex lectularius)等。

缨翅目：台湾花蓟马(Frankliniella intonsa)、西方花蓟马(Frankliniella occidentalis)、茶黄蓟马(Scirtothrips dorsalis)、棕榈蓟马(Thrips palmi)、葱蓟马(Thrips tabaci)、等。

双翅目：柑橘小实蝇(Dacus dorsalis)、瓜实蝇(Dacus cucurbitae)、地中海实蝇(Ceratitis capitata)、三叶斑潜蝇(Liriomyza trifolii)、豌豆彩潜蝇(Chromatomyia horticola)、美洲斑潜蝇(Liriomyza sativae)、灰地种蝇(Hylemya platura)、葱蝇(Delia antiqua)、苹果实蝇(Rhagoletis pomonella)、黑森瘿蚊(Mayetiola destructor)、家蝇(Musca domestica)、厩刺蝇(Stmoxys calcitrans)、羊蜱蝇(Melophagus ovinus)、纹皮蝇(Hypoderma lineatum)、牛皮蝇(Hypoderma bovis)、羊狂蝇(Oestrus ovis)、须舌蝇(Glossina palpalis)、刺舌蝇(Glossina morsitans)、毛足原蚋(Prosimulium yezoensis)、三角虻(Tabanus trigonus)、白斑蛾蚋(Telmatoscopus albipunctatus)、日本细蠓(Leptoconops nipponensis)、淡色库蚊(Culex pipiens pallens)、登革热由白线斑纹(Aedes albopicutus)、埃及伊蚊(Aedes aegypti)、中华按蚊(Anopheles hyracanus sinesis)等。

膜翅目：黄胫秋叶蜂(Apethymus kuri)、黄翅菜叶蜂(Athalia rosae japonensis)、松锈叶蜂(Neodiprion sertifer)、栗瘤蜂(Dryocosmus kuriphilus)、南美洲布氏游蚁(Eciton burchelli，Eciton schmitti)、日本弓背蚁(Camponotus japonicus)、金环胡蜂(Vespa mandarina)、公牛蚁属(Myrmecia spp.)、红火蚁类(Solenopsis spp.)、小黄家蚁(Monomorium pharaonis)等。

蜚蠊目：黑胸大蠊(Periplaneta fuliginosa)、日本大蠊(Periplaneta japonica)、德国小蠊(Blattella germanica)等。

直翅目：黄脸油葫芦(Teleogryllus emma)、非洲蝼蛄(Gryllotalpa africana)、东亚飞蝗(Locusta migratoria)、小翅稻蝗(Oxya yezoensis)、沙漠蝗虫(Schistocerca gregaria)等。

等翅目：家白蚁(Coptotermes formosanus)、黄胸散白蚁(Reticulitermes speratus)、黑翅土白蚁(Odontotermes formosanus)等。

隐翅目：猫蚤(Ctenocephalidae felis)、人蚤(Pulex irritans)、印鼠客蚤(Xenopsylla cheopis)等。

食毛目：鸡体虱(Menacanthus stramineus)、牛毛虱(Bovicola bovis)等。

虱目：牛血虱(Haematopinus eurysternus)、牛颚虱(Linognathus vituli)、水牛盲虱(Solenopotes capillatus)等。

蜱螨目：柑橘全爪螨(Panonychus citri)、苹果全爪螨(Panonychusulmi)、神泽氏叶螨(Tetranychus kanzawai)、二斑叶螨(Tetranychus urticae)等。

郁金香瘤瘿螨(Aceria tulipae)、番茄刺皮瘿螨(Aculops lycopersici)、桔刺皮节蜱(Aculops pelekassi)等瘿螨类、罗宾根螨(Rhizoglyphus robini)、似食酪螨(Tyrophagus similis)等粉螨类、侧多食跗线螨(Polyphaotarsonemus latus)等平螨类、大蜂螨(Varroa jacobsoni)等蜂螨类、微小牛蜱(Boophilus microplus)、长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)等蜱类、绵羊痒螨(Psoroptes ovis)等痒螨类、疥螨(Sarcoptes scabiei)等疥螨类等。此外，还有普通卷甲虫(Armadillidium vulgare)等甲壳类。

南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、北方根结线虫(Meloidogyne hapla)、马铃薯金线虫(Globodera rostochiensis)、大豆孢囊线虫(Heterodera glycines)、穿刺短体线虫(Prathylenchus penetrans)、伤残短体线虫(Prathylenchus vulnus)、水稻干尖线虫(Aphelenchoides besseyi)、松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)等线虫类等。

除此以外，还有福寿螺(Pomacea canaliculata)、双线蛞蝓(Incilaria bilineata)、螺蛳(Acusta despecta sieboldiana)、查科蛞蝓(Lehmannina valentiana)等软体动物等。

在本发明的一实施方式中，施用组合物的植物(作物)没有特别限制，可举出：谷类(例如，水稻、小麦、大麦、玉米、荞麦)、薯类(例如，马铃薯、红薯、芋头、山药)、豆类(例如，大豆、扁豆、红豆、豌豆)、蔬菜类(例如，瓜类、西红柿、茄子、青椒、卷心菜、白菜、萝卜、生菜、胡萝卜、大葱、洋葱、草莓、菠菜、芹菜)、果树(例如，苹果、梨、樱桃、桃子、葡萄、柿子、柑橘类、猕猴桃)、特用作物(例如，棉花、菜籽、向日葵、甜菜、甘蔗、烟草)、草坪、树木、观赏用植物(例如，玫瑰、菊花、郁金香、满天星、洋桔梗等)等。另外，在本发明的一实施方式中，组合物可同样用于通过转基因等技术转化的作物。

另外，在本发明的一实施方式中，组合物的适用量可根据上述病害虫和作物适当确定。

在本发明的一实施方式中，当使用组合物时，可将组合物直接施用于植物。另外，在本发明的一实施方式中，组合物例如可以以适用于农业园艺用杀虫剂的药剂的形式使用，所述适用于农业园艺用杀虫剂的药剂的形式例如为：颗粒剂、粉粒剂、微粒剂、液剂、水溶剂、油剂、乳剂、展膜油剂、乳胶剂、微乳胶剂、乳浊剂制剂、EW(水包油型乳剂)剂、微囊剂、可湿性粉剂、悬浊剂、悬浮剂、片剂、水分散粒剂、干悬浮剂、水可分散性颗粒、气溶胶(Aerosol)、糊剂、环糊精制剂、大型制剂、包剂、水溶性包装制剂、粉剂、熏烟剂、熏蒸剂等。另外，在本发明的一实施方式中，也可以将组合物用惰性液体或固体载体稀释，根据需要作为添加了表面活性剂、分散剂、其他辅助剂的药剂使用。作为具体的制剂例，可举出：粒剂、粉剂、可湿性粉剂、水分散粒剂、悬浮制剂、乳剂等剂型。

在本发明的一实施方式中，组合物可以根据需要含有通常用于农药制剂的添加剂。作为该添加物，可举出：固体载体、液体载体等载体、表面活性剂、粘合剂、增粘剂、增稠剂、着色剂、扩展剂、防冻剂、防结块剂、崩解剂、防分解剂、防腐剂等，除此以外，根据需要，也可以将防腐剂或植物片等用作添加成分。这些添加物可以使用1种，也可以组合使用2种以上。

作为固体载体，例如可举出：

石英、粘土、高岭石、叶蜡石、绢云母、滑石、白垩、膨润土、绿坡缕石、蒙脱石、酸性白土、沸石、天然岩石、硅藻土、方解石、大理石、浮石、海泡石、白云石等天然矿物质类；

碳酸钙、硫酸铵或其他铵盐、硫酸钠、氯化钾等无机盐类；

淀粉、纤维素、植物粉末等有机固体载体；

聚乙烯、聚丙烯、聚偏二氯乙烯等塑料载体；

此外，可举出：合成硅酸、合成硅酸盐、氧化铝、微粉化二氧化硅、硅酸盐等。它们可以单独使用，也可以组合使用2种以上。

作为液体载体，例如可举出：

大致分为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇等一元醇类，或乙二醇、二甘醇、丙二醇、己二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、甘油等多元醇类的醇类；

丙二醇醚等多元醇衍生物类；

丙酮、甲乙酮、甲基异丁基酮、二异丁基酮、环己酮、异佛尔酮等酮类；

乙醚、二烷、溶纤剂、二丙基醚、四氢呋喃等醚类；

正链烷烃、环烷烃、异链烷烃、煤油、矿物油等脂族烃类；

苯、甲苯、二甲苯、溶剂石脑油、烷基萘等芳族烃类；

二氯乙烷、氯仿、四氯化碳等卤代烃类；

乙酸乙酯、邻苯二甲酸二异丙酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二辛酯、己二酸二甲酯等酯类；

γ-丁内酯等内酯类；

二甲基甲酰胺、二乙基甲酰胺、二甲基乙酰胺、N-烷基吡咯烷等酰胺类；

乙腈等腈类；

二甲基亚砜等硫化合物类；

大豆油、菜籽油、棉籽油、蓖麻油等植物油；

水等。它们可以单独使用，也可以组合使用2种以上。

表面活性剂没有特别限制，但优选在水中胶凝化或显示溶胀性。作为表面活性剂，例如可举出：

山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯树脂酸酯、聚氧乙烯脂肪酸二酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷基酚醚、聚氧乙烯二烷基苯基醚、聚氧乙烯烷基酚甲醛缩合物、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段聚合物、烷基聚氧乙烯聚丙烯嵌段聚合物醚、聚氧乙烯烷基胺、聚氧乙烯脂肪酸酰胺、聚氧乙烯脂肪酸双苯基醚、聚亚烷基苄基苯基醚、聚氧化烯苯乙烯基苯基醚、乙炔二醇、聚氧化烯加成乙炔二醇、聚氧乙烯醚型有机硅、酯型有机硅、氟系表面活性剂、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油等非离子表面活性剂；

烷基硫酸盐、聚氧乙烯烷基醚硫酸盐、聚氧乙烯烷基苯基醚硫酸盐、烷基苯磺酸盐、木质素磺酸盐、烷基磺基琥珀酸盐、萘磺酸盐、烷基萘磺酸盐、萘磺酸甲醛缩合物的盐、烷基萘磺酸甲醛缩合物的盐、脂肪酸盐、聚羧酸盐、N-甲基脂肪酸肌氨酸盐、树脂酸盐、聚氧乙烯烷基醚磷酸盐、聚氧乙烯烷基苯基醚磷酸盐等阴离子性表面活性剂；

月桂胺盐酸盐、硬脂胺盐酸盐、油胺盐酸盐、硬脂胺醋酸盐、硬脂氨基丙胺盐酸盐、烷基三甲基氯化铵、烷基二甲基苯扎氯铵等烷基胺盐等阳离子性表面活性剂；

氨基酸型或甜菜碱型等两性表面活性剂。

这些表面活性剂可以使用1种，也可以组合使用2种以上。

作为粘合剂或增粘剂，例如可举出：羧甲基纤维素或其盐、糊精、水溶性淀粉、黄原胶、瓜尔胶、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮、阿拉伯树胶、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、聚丙烯酸钠、平均分子量6000～20000的聚乙二醇、平均分子量10万～500万的聚氧乙烯、天然磷脂(例如脑磷脂酸、卵磷脂酸等)等。

这些粘合剂或增粘剂可以使用1种，也可以组合使用2种以上。

作为增稠剂，例如可举出：

黄原胶、瓜尔胶、羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、羧乙烯基聚合物、丙烯酸系聚合物、淀粉衍生物、多糖类这样的水溶性高分子；

高纯度膨润土、白碳这样的无机微粉等。

这些增稠剂可以使用1种，也可以组合使用2种以上。

作为着色剂，例如可举出：

氧化铁、氧化钛、普鲁士蓝这样的无机颜料；

茜素染料、偶氮染料、金属酞菁染料这样的有机染料等。

这些着色剂可以使用1种，也可以组合使用2种以上。

作为扩展剂，例如可举出：

有机硅系表面活性剂、纤维素粉末、糊精、加工淀粉、聚氨基羧酸螯合化合物、交联聚乙烯吡咯烷酮、马来酸与苯乙烯酸、甲基丙烯酸的共聚物、由多元醇聚合物和二羧酸酐形成的半酯、聚苯乙烯磺酸的水溶性盐等。

这些扩展剂可以使用1种，也可以组合使用2种以上。

作为展着剂，例如可举出：

二烷基磺基琥珀酸钠、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯脂肪酸酯等各种表面活性剂；

石蜡、萜烯、聚酰胺树脂、聚丙烯酸盐、聚氧乙烯、蜡、聚乙烯基烷基醚、烷基酚甲醛缩合物、合成树脂乳胶等。

这些增稠剂可以使用1种，也可以组合使用2种以上。

作为防冻剂，例如可举出：乙二醇、二甘醇、丙二醇、甘油等多元醇类等。这些防冻剂可以使用1种，也可以组合使用2种以上。

作为防结块剂，例如可举出：淀粉、海藻酸、甘露糖、半乳糖等多糖类、聚乙烯吡咯烷酮、白碳、酯橡胶、石油树脂等。这些防结块剂可以使用1种，也可以组合使用2种以上。

作为崩解剂，例如可举出：三聚磷酸钠、己烷偏磷酸钠、硬脂酸金属盐、纤维素粉末、糊精、甲基丙烯酸酯的共聚物、聚乙烯吡咯烷酮、聚氨基羧酸螯合化合物、磺化苯乙烯-异丁烯-马来酸酐共聚物、淀粉-聚丙烯腈接枝共聚物等。这些崩解剂可以使用1种，也可以组合使用2种以上。

作为防分解剂，例如可举出：

沸石、生石灰、氧化镁这样的干燥剂；

酚系、胺系、硫系、磷酸系等抗氧化剂；

水杨酸系、二苯甲酮系等紫外线吸收剂等。

这些防分解剂可以使用1种，也可以组合使用2种以上。

作为防腐剂，例如可举出：山梨酸钾、1,2-苯并噻唑啉-3-酮等。这些防腐剂可以使用1种，也可以组合使用2种以上。

在本发明的一实施方式中，所述组合物通过含有杀虫剂、杀螨剂、杀线虫剂、杀蜗牛剂、摄食抑制剂等在英国农作物保护委员会发行的农药手册(2013年)、(日本)全国农业协同组合联合会发行的组合(Kumiai)农药总览(2018年)及(日本)全国农村教育协会发行的SHIBUYA INDEX(第17版)等中已知的成分作为共同成分，可以形成带来更大范围农业保护的多构成成分有害生物防除剂。下面示出共同成分的例子，但不限于此。

作为杀虫剂、杀螨剂、杀线虫剂、杀蜗牛剂和摄食抑制剂的例子，可举出：1,2-二氯丙烷(1,2-dichloropropane)、1,3-二氯丙烯(1,3-dichloropropene)、阿维菌素(abamectin)、乙酰甲胺磷(acephate)、灭螨醌(acequinocyl)、啶虫脒(acetamiprid)、家蝇磷(acethion)、乙酰虫腈(acetoprole)、氟丙菊酯(acrinathrin)、afidopyropen、棉铃威(alanycarb)、涕灭威(aldicarb)、烯丙菊酯(allethrin)、蒜素(allicin)、阿洛氨菌素(allosamidin)、除害威(allyxycarb)、α-氯氰菊酯(alpha-cypermethrin)、α-硫丹(alpha-endosulfan)、赛硫磷(amidithion)、磺胺螨酯(amidoflumet)、灭害威(aminocarb)、双甲脒(amitraz)、新烟碱(anabasine)、杀螨特(aramite)、特诱酮(athidathion)、印楝素(azadirachtin)、甲基吡噁磷(azamethiphos)、益棉磷(azinphos-ethyl)、保棉磷(azinphos-methyl)、三唑锡(azocyclotin)、偶氮磷(azothoate)、熏虫菊(barthrin)、benclothiaz、噁虫威(bendiocarb)、丙硫克百威(benfuracarb)、苯磷(benoxafos)、杀虫磺(bensultap)、苯螨特(benzoximate)、苯甲酸苄酯(benzylbenzoate)、高效氟氯氰菊酯(beta-cyfluthrin)、高效氯氰菊酯(beta-cypermethrin)、联苯肼酯(bifenazate)、联苯菊酯(bifenthrin)、吡氟菌酯(bifujunzhi)、乐杀螨(binapacryl)、生物烯丙菊酯(bioallethrin)、生物苄呋菊酯(bioresmethrin)、双三氟虫脲(bistrifluron)、硼砂(borax)、硼酸(boricacid)、broflanilid、溴苄呋菊酯(bromethrin)、溴苯烯磷(bromfenvinfos)、溴烯杀(bromocyclen)、溴硫磷(bromophos)、乙基溴硫磷(bromophos-ethyl)、溴螨酯(bromopropylate)、合杀威(bufencarb)、噻嗪酮(buprofezin)、畜虫威(butacarb)、特嘧硫磷(butathiofos)、丁酮砜威(butoxycarboxim)、丁酯膦(butonate)、多抗霉素复合物(polyoxinecomplex)、硫线磷(cadusafos)、石硫合剂(calciumpolysulfide)、敌敌钙(calvinphos)、毒杀芬(camphechlor)、氯灭杀威(carbanolate)、甲萘威(carbaryl)、克百威(carbofuran)、二硫化碳(Carbondisulfide)、四氯化碳(carbontetrachloride)、硫化羰(Carbonylsulfide)、三硫磷(carbophenothion)、丁硫克百威(carbosulfan)、杀螟丹(cartap)、真菌净(Carvacrol)、灭螨猛(Chinomethionat)、氯胺磷(Chloraminephosphorus)、氯虫苯甲酰胺(chlorantraniliprole)、氯丹(chlordane)、杀螨醚(chlorbenside)、灭幼脲(chlorbenzuron)、冰片丹(chlorbicyclen)、开蓬(chlordecone)、氯氧磷(chlorethoxyfos)、虫螨腈(chlorfenapyr)、杀螨醇(chlorfenethol)、杀螨酯(chlorfenson)、敌螨特(chlorfensulphide)、毒虫畏(chlorfenvinphos)、氟啶脲(chlorfluazuron)、氯甲硫磷(chlormephos)、伊托明(Chloromebuform)、灭虫脲(chloromethiuron)、氯化苦(Chloropicrin)、丙酯杀螨醇(chloropropylate)、氯辛硫磷(chlorphoxim)、氯吡唑磷(chlorprazophos)、毒死蜱(chlorpyrifos)、甲基毒死蜱(chlorpyrifos-methyl)、虫螨磷(chlorthiophos)、环虫酰肼(chromafenozide)、瓜菊酯I(cinerinI)、瓜菊酯II(cinerinII)、瓜叶菊素(cinerins)、顺式苄呋菊酯(cismethrin)、克仑吡林(clenpirin)、除线威(Cloethocarb)、四螨嗪(Clofentezine)、氯氰碘柳胺(Closantel)、噻虫胺(clothianidin)、噻唑硫磷(colophonate)、环烷酸铜(Coppernaphthenate)、油酸铜(copperoleate)、硫酸铜(Coppersulfate)、蝇毒磷(coumaphos)、畜虫磷(coumithoate)、CPMC、克罗米通(crotamiton)、巴毒磷(Crotoxyphos)、育畜磷(Crufomate)、冰晶石(Cryolite)、苯腈磷(Cyanofenphos)、杀螟腈(cyanophos)、果虫磷(cyanthoate)、溴氰虫酰胺(cyantraniliprole)、环溴虫酰胺(Cyclaniliprole)、乙氰菊酯(cycloprothrin)、腈吡螨氰(Cyenopyrafen)、丁氟螨酯(cyflumetofen)、氯氟氰菊酯(Cyfluthrin)、氯氟氰虫酰胺(cyhalodiamide)、氯氟氰菊酯(Cyhalothrin)、三环锡(cyhexatin)、螨蜱胺(Cymiazole)、氯氰菊酯(cypermethrin)、灭蝇胺(cyromazine)、畜蜱磷(cythioate)、哒幼酮(dayoutong)、棉隆(dazomet)、DBCP、氯化苦(chloropicrin)、DCIP、一甲呋喃丹(decarbofuran)、溴氰菊酯(deltamethrin)、田乐磷(demephion)、氧田乐磷(demephion-O)、硫田乐磷(demephion-S)、内吸磷(demeton)、内吸磷-S-甲基(demeton-S-methyl)、丁醚脲(diafenthiuron)、氯亚胺硫磷(dialifos)、二胺磷(diamidafos)、硅藻土(diatomaceousearth)、二嗪磷(diazinon)、异氯磷(dicapthon)、除线磷(dichlofenthion)、苯氟磺胺(dichlofluanid)、敌敌畏(dichlorvos)、dicloromezotiaz、三氯杀螨醇(dicofol)、百治磷(dicrotophos)、环虫腈(dicyclanil)、遍地克(dienochlor)、氟螨嗪(diflovidazin)、除虫脲(diflubenzuron)、四氟甲醚菊酯(dimefluthrin)、甲氟磷(dimefox)、地麦威(dimetan)、混灭威(dimethacarb)、乐果(dimethoate)、苄菊酯(dimethrin)、甲基毒虫畏(dimethylvinphos)、敌蝇威(dimetilan)、消螨酚(dinex)、消螨通(dinobuton)、二硝巴豆酸酯(dinocap)、敌菌死(dinocton)、硝戊酯(dinopenton)、丙硝酚(dinoprop)、戊硝酚(dinosam)、硝辛酯(dinosulfon)、呋虫胺(dinotefuran)、硝丁酯(dinoterbon)、苯虫醚(diofenolan)、蔬果磷(dioxabenzofos)、二氧威(dioxacarb)、敌噁磷(dioxathion)、二苯砜(diphenylsulfone)、dipymetitrone、双硫仑(disulfiram)、乙拌磷(disulfoton)、噻喃磷(dithicrofos)、D-柠檬烯(d-limonene)、DNOC、苯氧炔螨(dofenapyn)、多拉克汀(doramectin)、脱皮甾酮(ecdysterone)、埃玛菌素(emamectin)、EMPC、右旋烯炔菊酯(empenthrin)、硫丹(endosulfan)、因毒磷(endothion)、异狄氏剂(endrin)、EPN、依普菌素(eprinomectin)、甲氧苄氟菊酯单体(momfluorothrin)、氰戊菊酯(fenvalerate)、S-氰戊菊酯(esfenvalerate)、依他磷(etaphos)、乙硫苯威(ethiofencarb)、乙硫磷(ethion)、乙虫腈(ethiprole)、益硫磷(ethoate-methyl)、灭线磷(ethoprophos)、甲酸乙酯(ethylformate)、二溴乙烷(ethylenedibromide)、二氯乙烯(ethylene dichloride)、醚菊酯(etofenprox)、乙螨唑(etoxazole)、乙嘧硫磷(etrimfos)、伐灭磷(famphur)、苯线磷(fenamiphos)、抗螨唑(fenazaflor)、喹螨醚(fenazaquin)、苯丁锡(fenbutatinoxide)、皮蝇磷(fenchlorphos)、乙苯威(fenethacarb)、五氟苯菊酯(fenfluthrin)、杀螟硫磷(fenitrothion)、仲丁威(fenobucarb)、苯硫威(fenothiocarb)、fenoxacrim、苯氧威(fenoxycarb)、吡氯氰菊酯(fenpirithrin)、甲氰菊酯(fenpropathrin)、唑螨酯(fenpyroximate)、芬螨酯(fenson)、丰索磷(fensulfothion)、倍硫磷(fenthion)、氟硝二苯胺(fentrifanil)、氰戊菊酯(fenvalerate)、磷酸铁(ferricphosphate)、氟虫腈(fipronil)、flometoquin、氟啶虫酰胺(flonicamid)、嘧螨酯(fluacrypyrim)、fluazaindolizine、啶蜱脲(fluazuron)、氟虫酰胺(flubendiamide)、氟螨噻(flubenzimine)、氟氯双苯隆(flucofuron)、氟环脲(flucycloxuron)、氟氰戊菊酯(flucythrinate)、联氟螨(fluenetil)、联氟砜(fluensulfone)、嘧虫胺(flufenerim)、氟虫脲(flufenoxuron)、三氟醚菊酯(flufenprox)、丁虫腈(flufiprole)、fluhexafon、氟氯苯菊酯(flumethrin)、氟杀螨(fluorbenside)、氟吡呋喃酮(flupyradifurone)、fluralaner、氟磺酰胺(flursufamide)、氟胺氰菊酯(fluvalinate)、fluxametamide、地虫硫磷(fonofos)、伐虫脒(formetanate)、伐虫脒盐酸盐(formetanatehydrochloride)、安硫磷(formothion)、胺甲威(formparanate)、丁苯硫磷(fosmethilan)、福司吡酯(fospirate)、噻唑磷(fosthiazate)、丁硫环磷(fosthietan)、炔呋菊酯(furamethrin)、呋喃虫酰肼(furantebufenozide)、呋线威(furathiocarb)、抗虫菊(furethrin)、糠醛(furfural)、精高效氯氟氰菊酯(gamma-cyhalothrin)、苄螨醚(halfenprox)、氯虫酰肼(halofenozide)、HCH、HEOD、氯氟醚菊酯(heptafluthrin)、庚烯磷(heptenophos)、毒菌酚(hexachlorophene)、氟铃脲(hexaflumuron)、噻螨酮(hexythiazox)、HHDN、氟蚁腙(hydramethylnon)、烯虫乙酯(hydroprene)、喹啉威(hyquincarb)、imicyafos、吡虫啉(imidacloprid)、氯噻啉(imidaclothiz)、炔咪菊酯(imiprothrin)、茚虫威(indoxacarb)、IPSP、isamidofos、氯唑磷(isazofos)、碳氯灵(isobenzan)、水胺硫磷(isocarbophos)、异艾氏剂(isodrin)、异柳磷(isofenphos)、甲基异柳磷(isofenphos-methyl)、异索威(isolan)、异丙威(isoprocarb)、稻瘟灵(isoprothiolane)、异拌磷(isothioate)、噁唑磷(isoxathion)、异菌脲(iprodione)、依维霉素(ivermectin)、茉酮菊素I(jasmolinI)、茉酮菊素II(jasmolinII)、甲磺虫腙(jia huang chong zong)、碘硫磷(jodfenphos)、保幼激素I(juvenilehormone I)、保幼激素II(juvenilehormone II)、保幼激素III(juvenilehormone III)、噻吩菊酯(kadethrin)、联苯菊酯(bifenthrin)、水黄皮素(karanjin)、克来范(kelevan)、烯虫炔酯(kinoprene)、水杨酸、水杨酸甲酯、高效氯氟氰菊酯(lambda-cyhalothrin)、雷皮菌素(lepimectin)、溴苯膦(leptophos)、啶虫磷(lirimfos)、虱螨脲(lufenuron)、噻唑磷(lythidathion)、马拉硫磷(malathion)、苄丙二腈(malonoben)、麦芽糊精(maltodextrin)、苦参碱(matrine)、叠氮磷(mazidox)、灭蚜磷(mecarbam)、四甲磷(mecarphon)、灭蚜硫磷(menazon)、氯氟醚菊酯(meperfluthrin)、地胺磷(mephosfolan)、甲硫酚(mesulfen)、倍硫磷亚砜(mesulfenfos)、氰氟虫腙(metaflumizone)、四聚乙醛(metaldehyde)、威百亩(metam)、虫螨畏(methacrifos)、甲胺磷(methamidophos)、杀扑磷(methidathion)、甲硫威(methiocarb)、丁烯胺磷(methocrotophos)、灭多威(methomyl)、烯虫酯(methoprene)、甲醚菊酯(methothrin)、甲氧滴滴涕(methoxychlor)、甲氧虫酰肼(methoxyfenozide)、碘甲烷(methyliodide)、敌线酯(methylisothiocyanate)、甲氧苄氟菊酯(metofluthrin)、速灭威(metolcarb)、噁虫酮(metoxadiazone)、速灭磷(mevinphos)、兹克威(mexacarbate)、弥拜菌素(milbemectin)、丙胺氟磷(mipafox)、天蚁灵(mirex)、久效磷(monocrotophos)、甲氧苄氟菊酯单体(momfluorothrin)、茂硫磷(morphothion)、莫西菌素(moxidectin)、萘肽磷(naftalofos)、二溴磷(naled)、萘(naphthalene)、氯硝柳胺(niclosamide)、烟碱(nicotine)、氟蚁灵(nifluridide)、烯啶虫胺(nitenpyram)、硝虫噻嗪(nithiazine)、戊氰威(nitrilacarb)、氟酰脲(novaluron)、多氟脲(noviflumuron)、氧乐果(omethoate)、杀线威(oxamyl)、亚砜磷(oxydemeton-methyl)、异亚砜磷(oxydeprofos)、砜拌磷(oxydisulfoton)、氧化苦参碱(oxymatrine)、哌虫啶(paichongding)、对二氯苯(para-dichlorobenzene)、氟幼脲(penfluron)、五氯酚(pentachlorophenol)、氯菊酯(permethrin)、芬硫磷(phenkapton)、苯醚菊酯(phenothrin)、苯螨醚(phenproxide)、稻丰散(phenthoate)、甲拌磷(phorate)、伏杀硫磷(phosalone)、硫环磷(phosfolan)、亚胺硫磷(phosmet)、磷胺(phosphamidon)、对氯硫磷(phosnichlor)、膦(phosphine)、磷虫威(phosphocarb)、辛硫磷(phoxim)、甲基辛硫磷(phoxim-methyl)、嘧甲磷(pirimetaphos)、抗蚜威(pirimicarb)、嘧啶氧磷(pirimioxyphos)、乙基嘧啶磷(pirimiphos-ethyl)、甲基嘧啶磷(pirimiphos-methyl)、硫氰酸钾(potassium thiocyanate)、右旋炔丙菊酯(prallethrin)、早熟素I(precoceneI)、早熟素II(precocene II)、早熟素III(precocene III)、酰胺嘧啶磷(primidophos)、丙氯诺(proclonol)、丙溴磷(profenofos)、丙氟菊酯(profluthrin)蜱虱威(promacyl)、猛杀威(promecarb)、丙虫磷(propaphos)、炔螨特(propargite)、胺丙畏(propetamphos)、残杀威(propoxur)、乙噻唑磷(prothidathion)、丙硫磷(prothiofos)、发硫磷(prothoate)、protrifenbute、pyflubumide、吡蚜酮(pymetrozine)、吡唑硫磷(pyraclofos)、吡嗪氟虫腈(pyrafluprole)、吡菌磷(pyrazophos)、吡硫磷(pyrazothion)、反灭虫菊(pyresmethrin)、除虫菊素(pyrethrins)、哒螨灵(pyridaben)、啶虫醚(pyridalyl)、哒嗪硫磷(pyridaphenthion)、pyrifluquinazon、嘧螨醚(pyrimidifen)、哒嗪硫磷(pyrimitate)、pyriprole、吡丙醚(pyriproxyfen)、吡唑威(pyrolan)、喹硫磷(quinalphos)、甲基喹硫磷(quinalphos-methyl)、喹赛昂(quinothion)、喹硫磷(quintiofos)、碘醚柳胺(rafoxanide)、苄呋菊酯(resmethrin)、闹羊花毒素III(rhodojaponin-III)、鱼藤酮(rotenone)、鱼尼汀(ryania)、藜芦碱(sabadilla)、血根碱(sanguinarine)、八甲磷(schradan)、司拉克丁(selamectin)、氟硅菊酯(silafluofen)、硅胶(silicagel)、氟化钠(sodiumfluoride)、六氟硅酸钠(sodiumhexafluorosilicate)、硫氰酸钠(sodiumthiocyanate)、苏硫磷(sophamide)、乙基多杀菌素(spinetoram)、多杀菌素(spinosad)、螺螨酯(spirodiclofen)、螺甲螨酯(spiromesifen)、螺虫乙酯(spirotetramat)、磺苯醚隆(sulcofuron)、舒非仑(sulfiram)、氟虫胺(sulfluramid)、治螟磷(sulfotep)、氟啶虫胺腈(sulfoxaflor)、硫肟醚(sulfoxime)、硫(sulfur)、硫酰氟(sulfurylfluoride)、硫丙磷(sulprofos)、氟胺氰菊酯(tau-fluvalinate)、噻螨威(tazimcarb)、TDE、虫酰肼(tebufenozide)、吡螨胺(tebufenpyrad)、丁基嘧啶磷(tebupirimfos)、氟苯脲(teflubenzuron)、七氟菊酯(tefluthrin)、双硫磷(temephos)、TEPP、环戊烯丙菊酯(terallethrin)、特丁硫磷(terbufos)、四氯乙烷(tetrachloroethane)、杀虫畏(tetrachlorvinphos)、三氯杀螨砜(tetradifon)、胺菊酯(tetramethrin)、四氟醚菊酯(tetramethylfluthrin)、杀螨素(tetranactin)、氟氰虫酰胺(tetraniliprole)、杀螨好(tetrasul)、噻虫啉(thiacloprid)、噻虫嗪(thiamethoxam)、噻丙腈(thiapronil)、抗虫威(thiocarboxime)、杀虫环(thiocyclam)、硫双威(thiodicarb)、久效威(thiofanox)、甲基乙拌磷(thiometon)、虫线磷(thionazin)、克杀螨(thioquinox)、杀虫双(thiosultap)、tioxazafen、环线威(tirpate)、唑虫酰胺(tolfenpyrad)、溴氯氰菊酯(tralocythrin)、四溴菊酯(tralomethrin)、溴代吡咯腈(tralopyril)、四氟苯菊酯(transfluthrin)、反式苄氯菊酯(transpermethrin)、苯螨噻(triarathene)、唑蚜威(triazamate)、三唑磷(triazophos)、敌百虫(trichlorfon)、毒壤磷(trichloronat)、杀螺吗啉(trifenmorph)、三氯苯氧丙磷(trifenofos)、triflumezopyrim、杀铃脲(triflumuron)、混杀威(trimethacarb)、烯虫硫酯(triprene)、雷公藤内酯(triptolide)、蚜灭磷(vamidothion)、氟吡唑虫(vaniliprole)、硝虫硫磷(xiao chong liu lin)、XMC、二甲酚类(xylenols)、灭杀威(xylylcarb)、抑食肼(yishijing)、Zolaprofos、α-蜕皮激素(α-ecdysone)、Acynonapyr、Flupyrimin、甲氧哌啶乙酯(spiropidion)、Benzpyrimoxan、Tyclopyrazoflor、Oxazosulfyl等。这些化合物可以使用1种，也可以组合2种以上使用。

在本发明的一实施方式中，组合物还可以通过根据需要含有生根促进剂等植物生长调节剂、植物养分等肥料等至少一种生物学有效成分作为共同成分，来形成带来更大范围的农业保护的多构成成分有害生物防除剂。

根据本发明的一个方面，提供一种组合物，其含有嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐，用于施用于引入有表达来自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的杀虫蛋白的基因的植物(下文称为“BT植物”)。这里，作为BT植物的例子，例如可举出：通过在大豆、玉米、棉花、油菜中表达单独的或多个杀虫蛋白来防除害虫的KnockOut(注册商标)、NatureGard(注册商标)、Bollgard(注册商标)、Agrisure(注册商标)CB、YieldGardCorn Rootworm(注册商标)、Herculex I(注册商标)、Bollgard II(注册商标)、YieldGardPlus(注册商标)、VipCot(注册商标)、WideStrike(注册商标)、Herculex RW(注册商标)、Herculex Xtra(注册商标)等。

(农业园艺害虫的防除方法)

在本发明的一个方面，农业园艺害虫的防除方法包括：

将来自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的杀虫蛋白施用于植物的工序(a)，和

将嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐与所述来自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的杀虫蛋白同时地连续或分别施用于植物的工序(b)。

另外，在本发明的一实施方式中，防除方法既可以将来自苏云金芽孢杆菌的杀虫蛋白及嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐分别施用于植物，也可以将包含来自苏云金芽孢杆菌的杀虫蛋白及嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的农业园艺用杀虫组合物施用于植物。从杀虫效果的稳定性、速效性、降低抗性发展风险的观点出发，优选使用含有来自苏云金芽孢杆菌的杀虫蛋白及嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的农业园艺用杀虫组合物。

在本发明的一个方面，应用防除方法的植物是指野生植物、培育植物、天然存在的植物、栽培植物等植物或植物群，也包括通过引入育种法、分离育种法、杂交育种法、杂种优势育种法、突变育种法、倍性育种法、基因重组(基因导入)法、标记物辅助选拔法等育种法培育出的植物。另外，待处理的植物可以是整个植物和植物的一部分的任一种。

根据本发明的一个方面，当在防除方法中施用于植物时，可施用于植物或植物周边的区域。植物周边的区域是指土壤(播种种子的土壤)、水田、水耕栽培的水、栽培材料等。

另外，对植物的施用方法可以包括喷雾、散布、散粉、喷射、扩散、浸渍、灌注、注入、撒水(浸水)、发泡、涂布、粉衣、包衣、吹喷、熏蒸、烟熏、烟雾、涂装等，优选包括土壤混合、灌注、种子涂抹、种子浸渍或叶面散布。对这些植物的施用方法可以仅使用1种或组合使用2种以上。

为了防除农业园艺害虫，在本发明的一实施方式中，当施用组合物时，该施用可在植物的生长期和贮藏期内进行。在此，在本发明的一实施方式中，防除方法可以针对植物的一部分或全部。植物的一部分是指植物的叶、茎、干、枝、花、果体、果实、种子、根、块茎、根茎或其组合。

为了防除农业园艺害虫，在本发明的一实施方式中，可以调整处理量以使组合物成为有效但对植物不显示毒性的量来使用。在此，有效但对植物不显示毒性的量是指能够充分防除农业园艺害虫且不危害植物的量，该量可以根据防除的农业园艺害虫、适用的植物、使用的自然环境及组合物的成分，在较大的范围内变动。

在本发明的一实施方式中，在防除方法中，上述(农业园艺用杀虫组合物)的项目中记载的杀虫蛋白的种类和含量、苏云金芽孢杆菌的种类和制备方法、嘌呤霉素或其盐的种类和含量、卡那霉素水解物或其盐的种类和含量等——这些全部的构成可以分别单独或组合2种以上，同样适用。

实施例

以下列举制造例、制剂例(处方例)及试验例对本发明进行具体说明，但本发明并不限定于这些例子。

(制造例1：嘌呤霉素盐酸盐的合成)

嘌呤霉素盐酸盐的合成根据Iwabuchi等人(J.Carbohydr.Chem.，7605-616(1988))的方法进行。即，对D-阿拉伯糖(25g)依次进行1-O-苄基化、3,4-O-亚异丙基缩醛保护、2-苯甲酰化、亚异丙基缩醛脱保护、4-选择性叠氮化物取代、苯甲酰脱保护、环氧化、开环氨基化及N-Cbz保护的各工序的处理，得到4-叠氮基-2-(苄氧羰基)氨基-2,4-二脱氧-α-L-阿拉伯吡喃糖苷(4-azido-2-(benzyloxycarbonyl)amino-2,4-dideoxy-α-L-arabinopyranoside)(9.6g，经过上述9个工序后的收率：14％)。对得到的该化合物(984mg)依次进行叠氮化物选择性还原、与N-苄氧羰基-D-丙氨酸(N-Cbz-D-alanine)的缩合以及还原性脱保护的各工序的处理，得到嘌呤霉素盐酸盐(424mg，经过上述4个工序后的收率：59％)。

(制剂例1：Btk培养干燥物或Bta培养干燥物的制备)

按照以下工序制备苏云金芽孢杆菌的库尔斯塔克亚种(Bacillus thuringiensis subsp.kurstaki)培养干燥物(以下称为“Btk培养干燥物”)和苏云金芽孢杆菌的亚鲇泽亚种类(Bacillus thuringiensis subsp.aizawai)培养干燥物(以下称为“Bta培养干燥物”)。以下，将Btk培养干燥物和Bta培养干燥物统称为“Bt培养干燥物”。

通过分别从Tune-Up(注册商标)水分散粒剂(苏云金芽孢杆菌的库尔斯塔克亚种(BT菌的生芽孢及杀虫蛋白10％))(Agro Kanesho公司)和Zentari(注册商标)水分散粒剂(住友化学株式会社)中分离，得到用于制备Btk培养干燥物的菌株和用于制备Bta培养干燥物的菌株。将所得菌株分别用斜面培养基(倾斜)培养并保存在4℃。将保存后的各菌株采集一接种环，接种到普通的肉汁培养基(荣研化学株式会社)60mL中，然后使用旋转式摇床在转速180rpm、28℃的条件下，将各菌株培养1天(预培养)。将通过预培养得到的培养液60mL接种到2L的培养液(大豆来源蛋白粉4％，马铃薯淀粉2％，玉米浆1.5％，碳酸钠0.0001％，pH7.0)中，在30℃下振荡培养2天(正式培养)。将通过正式培养得到的培养液在冷冻干燥后粉碎，将得到的微粉分别作为Btk培养干燥物和Bta培养干燥物。

通过Goodman等人的使用硫酸葡聚糖和聚乙二醇的沉淀分离法(非专利文献29)纯化杀虫蛋白组，然后根据Masson等人的分析方法(非专利文献30)使用HPLC测定得到的Btk培养干燥物或Bta培养干燥物中含有的杀虫蛋白的合计比例，结果为4质量％。

(制剂例2：产生嘌呤霉素或其盐的菌的培养干燥物、或产生卡那霉素水解物或其盐的菌的培养干燥物的制备)

参考Stabb等人的方法(非专利文献32)，按照以下步骤制备产生嘌呤霉素或其盐的菌的培养干燥物、或产生卡那霉素水解物或其盐的菌的培养干燥物。

将从土壤中分离出的枯草芽孢杆菌的菌株或蜡状芽孢杆菌的菌株采集一接种环，接种到普通的肉汁培养基(荣研化学株式会社)60mL中，然后使用旋转式摇床在转速180rpm、28℃的条件下，将各菌株培养1天(预培养)。将通过预培养得到的培养液60mL接种到2L的L-Broth培养液，在转速180rpm、30℃的条件下，振荡培养3天(正式培养)。将通过正式培养得到的培养液在冷冻干燥后粉碎，将得到的微粉分别作为产生嘌呤霉素或其盐的菌的培养干燥物和产生卡那霉素水解物或其盐的菌的培养干燥物。

(制剂例3：Btk培养干燥物和嘌呤霉素盐酸盐的可湿性粉剂的制备)

在本实施例中，只要没有特别说明，表示制剂例的使用比例的“份”是指重量份。

将45份制剂例1中制备的Btk培养干燥物、5份制造例1中制备的嘌呤霉素盐酸盐、20份硅藻土、20份白碳、8份木质素磺酸钠和2份烷基萘磺酸钠混合和粉碎，由此得到Btk培养干燥物和嘌呤霉素盐酸盐的可湿性粉剂。

(制剂例4：Btk培养干燥物和盐酸卡那霉素水解物的可湿性粉剂的制备)

将45份制剂例1中制备的Btk培养干燥物、5份盐酸卡那霉素水解物(SigmaAldrich Japan联合公司制)、20份硅藻土、20份白碳、8份木质素磺酸钠及2份烷基萘磺酸钠混合和粉碎，由此得到Btk培养干燥物和盐酸卡那霉素水解物的可湿性粉剂。

[试验例1：对斜纹夜蛾3龄幼虫的效果试验]

通过在制剂例1中制备的Btk培养干燥物或Bta培养干燥物中加入蒸馏水，制备Btk培养干燥物的悬浮液或Bta干燥物的悬浮液，向该悬浮液中加入由制造例1制备的嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物(Sigma-Aldrich Japan有限公司制)至规定的浓度。配制溶液。如表1～6所示，向人工饲料(Insecta LFS(日本农产工业株式会社制)中加入得到的溶液，至Btk培养干燥物或Bta培养干燥物的含量为每1g人工饲料0.2～2mg/g、嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物的含量为每1g人工饲料2μg/g，混合。将混合有Btk培养干燥物或Bta培养干燥物与嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物的人工饲料放入培养皿(直径90mm，高度15mm)中后，将在25℃的饲养室内饲养的10只斜纹夜蛾(Spodoptera litura)3龄幼虫释放到培养皿中(一式三份)，关闭培养皿的盖，在25℃下保温5天。

然后，观察培养皿内，肉眼调查死亡的虫数，求出死亡虫数相对于饲养的虫总数的比例(杀虫率(％))(实测值)。

另外，向人工饲料中加入仅Btk培养干燥物的悬浮液、仅Bta干燥物的悬浮液、仅嘌呤霉素盐酸盐、仅盐酸卡那霉素水解物、或嘌呤霉素盐酸盐和盐酸卡那霉素水解物的组合，使其成为表1～6所示的每1g人工饲料的施用浓度，除此以外与上述例子同样操作，将10只斜纹夜蛾(Spodoptera litura)3龄幼虫释放到培养皿中(一式三份)，在25℃下保温5天。

然后，观察培养皿内，与上述例子同样地求出杀虫率(％)(实测值)。

将Btk培养干燥物或Bta培养干燥物与嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物混合处理时预想的杀虫率(％)的理论值通过Colby的计算式(E＝X+Y-(X+Y/100))求出。

在该式中，X、Y及E表示下述含义。

X：有效成分A用M ppm处理时的杀虫率(％)

Y：有效成分B用N ppm处理时的杀虫率(％)

E：有效成分A用M ppm处理、有效成分B用N ppm处理时预想的杀虫率的理论值(％)

关于Btk培养干燥物或Bta培养干燥物与嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物组合使用时的杀虫率(％)，比较理论值和实测值，判定有无协同效果。具体而言，关于杀虫率(％)，将实测值大于理论值的情况判定为“有协同效果”，将实测值与理论值相同或小于理论值的情况判定为“无协同效果”。

得到的试验结果如下述表1～6所示。

[表1]

＊施用浓度一栏的上段表示Btk培养干燥物的浓度，下段表示嘌呤霉素盐酸盐的浓度。Btk培养干燥物的施用浓度为2mg/g饲料时，Btk培养干燥物中含有的杀虫蛋白的合计含量为80μg/g饲料。

[表2]

＊施用浓度一栏的上段表示Btk培养干燥物的浓度，下段表示盐酸卡那霉素水解物的浓度。Btk培养干燥物的施用浓度为2mg/g饲料时，Btk培养干燥物中含有的杀虫蛋白的合计含量为80μg/g饲料。

[表3]

＊施用浓度一栏的上段表示Btk培养干燥物的浓度，中段表示嘌呤霉素盐酸盐的浓度，下段表示盐酸卡那霉素水解物的浓度。Btk培养干燥物的施用浓度为2mg/g饲料时，Btk培养干燥物中含有的杀虫蛋白的合计含量为80μg/g饲料。

[表4]

＊施用浓度一栏的上段表示Bta培养干燥物的浓度，下段表示嘌呤霉素盐酸盐的浓度。当Bta培养干燥物的施用浓度为0.5mg/g饲料时，Bta培养干燥物中含有的杀虫蛋白的合计含量为20μg/g饲料。

[表5]

＊施用浓度一栏的上段表示Bta培养干燥物的浓度，下段表示盐酸卡那霉素水解物的浓度。当Bta培养干燥物的施用浓度为0.5mg/g饲料时，Bta培养干燥物中含有的杀虫蛋白的合计含量为20μg/g饲料。

[表6]

＊施用浓度一栏的上段表示Bta培养干燥物的浓度，中段表示嘌呤霉素盐酸盐的浓度，下段表示盐酸卡那霉素水解物的浓度。当Bta培养干燥物的施用浓度为0.5mg/g饲料时，Bta培养干燥物中含有的杀虫蛋白的合计含量为20μg/g饲料。

如表1～6的结果所示，单独施用施用浓度为2μg/g饲料的嘌呤霉素盐酸盐或单独施用施用浓度为2μg/g饲料的盐酸卡那霉素水解物时，确认对斜纹夜蛾3龄幼虫完全没有杀虫效果。另一方面，通过将Btk培养干燥物或Bta培养干燥物与嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物组合施用，与单独施用Btk培养干燥物的情况或单独施用Bta培养干燥物的情况相比，对斜纹夜蛾3龄幼虫的杀虫率显著增加，获得了极高的杀虫效果。由以上结果可知，通过将Btk培养干燥物或Bta培养干燥物与嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物组合使用，在杀虫效果方面得到了协同效应。

[试验例2：对斜纹夜蛾的田间试验]

在本试验例中，使用了以下的供试药剂。

·BT菌制剂产品：Tune-Up(注册商标)水分散粒剂(苏云金芽孢杆菌的库尔斯塔克亚种(BT菌的生芽孢及杀虫蛋白10％))(Agro Kanesho公司)

·上述制剂例2中制备的产生嘌呤霉素或其盐的菌的培养干燥物

·上述制剂例2中制备的产生卡那霉素水解物或其盐的菌的培养干燥物

将上述BT菌制剂产品和产生嘌呤霉素或其盐的菌的培养干燥物或产生卡那霉素水解物或其盐的菌的培养干燥物混合成各自规定的浓度，用水稀释而得到稀释液。向得到的稀释液中加入展着剂(Breakthrough(注册商标)，Sankei Chemical公司)至该稀释液的重量的1/5000的重量，调制药液。如表7所示，得到的各药液中的各供试药剂的稀释倍率为2000倍或20000倍。

上述BT菌制剂产品中含有的杀虫蛋白是Cry1Aa、Cry1Ab、Cry1Ac和Cry2A。对于BT菌制剂产品的稀释倍数为2000倍的药液，根据Masson等人的分析方法(非专利文献30)，使用HPLC测定该药液中的杀虫蛋白的浓度(可作为活性成分的杀虫蛋白的合计含量(浓度))，结果为24ppm。

对于得到的药液中的产生嘌呤霉素或其盐的菌的培养干燥物、或产生卡那霉素水解物或其盐的菌的培养干燥物的稀释倍率为2000倍的药液，根据Tanaka等人的分析方法(非专利文献31)，使用CE-TOF-MS测定该药液中的嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的浓度，结果是嘌呤霉素浓度5ppm(作为嘌呤霉素)，卡那霉素水解物浓度5ppm(作为卡那霉素水解物)。由此，对于得到的药液中的产生嘌呤霉素或其盐的菌的培养干燥物、或产生卡那霉素水解物或其盐的菌的培养干燥物的稀释倍率为2000倍的药液，认为嘌呤霉素浓度为0.5ppm(作为嘌呤霉素)，卡那霉素水解物浓度为0.5ppm(作为卡那霉素水解物)。

综上，对于BT菌制剂产品的稀释倍数为2000倍、产生嘌呤霉素或其盐的菌的培养干燥物、或产生卡那霉素水解物或其盐的菌的培养干燥物的稀释倍率为2000倍的药液，该药液中的杀虫蛋白的浓度与嘌呤霉素或卡那霉素水解物的浓度比(质量比)为4.8：1。对于BT菌制剂产品的稀释倍数为2000倍、产生嘌呤霉素或其盐的菌的培养干燥物、或产生卡那霉素水解物或其盐的菌的培养干燥物的稀释倍率为20000倍的药液，该药液中的杀虫蛋白的浓度与嘌呤霉素或卡那霉素水解物的浓度比(质量比)为48：1。

另外，单独使用上述各供试药剂(BT菌制剂产品、产生嘌呤霉素或其盐的菌的培养干燥物、产生卡那霉素水解物或其盐的菌的培养干燥物)，与上述例子同样操作，用水稀释，加入展着剂，制备单独含有每种供试药剂的每种药液。

在0.72m²(1.2m×0.6m)的每个区域中，在株间间隔60cm的两行中，种植具有6～7片主叶的卷心菜(品种：彩峰)4株。种植1个月后，使用填充式喷雾器，以相当于300L/10a的量散布如上所述制备的各药液。散布5天后，调查全部叶子中自然产生的寄生虫的数量，计算修正密度指数。予以说明，修正密度指数是指考虑到散布前的害虫的密度，基于处理区域的害虫密度相对于无处理区域的害虫密度来表示防除效果的指数，根据下述式计算。修正密度指数越低，表示防除效果越好。

[数1]

得到的试验结果如表7所示。

[表7]

如表7的结果所示，对于各供试药剂对散布5天后的斜纹夜蛾幼虫的修正密度指数，在BT菌制剂产品(稀释倍率2000倍)和产生嘌呤霉素或其盐的菌的培养干燥物(稀释倍率2000倍)的混用区域为19.7，在BT菌制剂产品(稀释倍率2000倍)和产生卡那霉素水解物或其盐的菌的培养干燥物(稀释倍率2000倍)的混用区域为29.1。这些混用区域的修正密度指数与BT菌制剂产品(稀释倍率2000倍)的单用区域的修正密度指数：67.1相比极低，通过BT菌制剂产品与产生嘌呤霉素或其盐的菌的培养干燥物或产生卡那霉素水解物或其盐的菌的培养干燥物并用，确认了非常优异的协同防除效果。

另一方面，关于各供试药剂对散布5天后的斜纹夜蛾幼虫的修正密度指数，在BT菌制剂产品(稀释倍率2000倍)和产生嘌呤霉素或其盐的菌的培养干燥物(稀释倍率20000倍)的混用区域为56.6，在BT菌制剂产品(稀释倍率2000倍)和产生卡那霉素水解物或其盐的菌的培养干燥物(稀释倍率20000倍)的混用区域为58.4。这些混用区域的修正密度指数与BT菌制剂产品(稀释倍率2000倍)的单用区域的修正密度指数：67.1相比变低，确认了防除效果的提高。

如上所述可知，将稀释倍率2000倍的产生嘌呤霉素或其盐的菌的培养干燥物或产生卡那霉素水解物或其盐的菌的培养干燥物(相当于嘌呤霉素浓度或卡那霉素水解物浓度为5ppm)与BT菌制剂产品一起施用的混用区域的修正密度指数与BT菌制剂产品(稀释倍率2000倍)的单用区域的修正密度指数相比，其数值极低，可获得优异的防除效果。另外，将稀释倍率20000倍的产生嘌呤霉素或其盐的菌的培养干燥物或产生卡那霉素水解物或其盐的菌的培养干燥物(相当于嘌呤霉素浓度或卡那霉素水解物浓度为0.5ppm)与BT菌制剂产品一起施用的混用区域的修正密度指数与BT菌制剂产品(稀释倍率2000倍)的单用区域的修正密度指数相比，其数值明显低，可获得优异的防除效果。

予以说明，产生嘌呤霉素或其盐的菌的培养干燥物(稀释倍率2000倍)的单用区域及产生卡那霉素水解物或其盐的菌的培养干燥物(稀释倍率2000倍)的单用区域的修正密度指数与未处理的修正密度指数是同等的，完全没有发现对斜纹夜蛾幼虫的杀虫效果。

[试验例3：保存稳定性试验/对小菜蛾3龄幼虫的效果试验]

对于制剂例3和4中制备的含有Btk培养干燥物和嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物的可湿性粉剂，如表8和9所示，添加氯化钙(以相对于可湿性粉剂和氯化钙的合计量为1.0质量％或5.0质量％的含量添加)和/或热处理(在密封下在54℃下进行2周)，制备添加了氯化钙的可湿性粉剂、进行了热处理的可湿性粉剂。在进行了氯化钙的添加和热处理这两者的情况下，对添加了氯化钙后的可湿性粉剂进行热处理。另外，还准备了如表8和9所示那样的不添加氯化钙的可湿性粉剂、不进行热处理的可湿性粉剂。使用各可湿性粉剂，如下所示，通过叶片药液浸渍法，测定了对白菜叶上的小菜蛾3龄幼虫的杀虫活性。

将如上所述制备的各可湿性粉剂用蒸馏水稀释成稀释倍率4000倍，调制各药液。将白菜(品种：野崎2号)的主叶的第3～4片叶子切成直径30mm的圆形，将得到的圆形叶浸渍在如上所述调制的各药液20mL中30秒钟，然后在滤纸上风干。确认白菜的叶面充分干燥后，将干燥后的白菜叶在塑料培养皿(直径35mm，高10mm)内重叠2片静置，在每1个培养皿中，将5只小菜蛾3龄幼虫释放到叶片表面，在25℃、16小时明亮期/8小时黑暗期的条件下静置(1个区域，重复4次)。放虫3天后，观察培养皿内，肉眼调查死亡的虫数，求出死亡虫数相对于饲养的虫总数的比例(杀虫率(％))(实测值)。

得到的试验结果示于下述表8和9中。

[表8]

[表9]

如表8和9的结果所示，不添加氯化钙的可湿性粉剂通过热处理杀虫活性极端降低。另一方面，含有1.0或5.0质量％氯化钙的可湿性粉剂与不添加氯化钙的可湿性粉剂相比，能够抑制热处理引起的杀虫活性的降低，特别是当氯化钙的含量为5.0质量％时，其抑制效果显著。认为由于氯化钙的添加，提高了可湿性粉剂的保存稳定性。

在含有嘌呤霉素盐酸盐的可湿性粉剂和含有盐酸卡那霉素水解物的可湿性粉剂中，都确认了氯化钙提高保存稳定性的效果。54℃、2周的热处理在热力学上与室温2年的热历史相同。

由此确认，在含有Bt培养干燥物和嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物的可湿性粉剂中进一步添加氯化钙而形成的组合物是杀虫效果优异且保存稳定性优异的农业园艺用杀虫组合物。

[试验例4：对棉铃虫3龄幼虫的效果试验]

按照以下所示的步骤，通过人工饲料混入生物测定法，测定添加嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物时的各种杀虫蛋白(Cry1A(a)、Cry1A(b)或Cry1A(c)的活性。

按照非专利文献33的方法，向在大肠杆菌中表达、纯化的Cry1A(a)、Cry1A(b)或Cry1A(c)的各杀虫蛋白中加入蒸馏水，制备杀虫蛋白溶液。向得到的各杀虫蛋白溶液中以规定的浓度加入制造例1制备的嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物(Sigma-AldrichJapan有限公司制)，调制含有杀虫蛋白和嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物的溶液。向人工饲料(Insecta LFS(日本农产工业株式会社制))中加入得到的溶液并混合，如表10～13所示，使得每种杀虫蛋白的含量为每1g人工饲料0.063～8μg/g饲料、嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物的含量为每1g人工饲料10μg/g饲料，制备含有杀虫蛋白和嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物的人工饲料。另外，向人工饲料中分别单独加入上述杀虫蛋白溶液、嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物并混合，如表10～13所示，使得每种杀虫蛋白的含量为每1g人工饲料0.063～8μg/g饲料，或者嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物的含量为每1g人工饲料10μg/g饲料，制备分别单独含有杀虫蛋白、嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物的人工饲料。将这样得到的含有各物质的人工饲料或不添加这些物质的人工饲料放入培养皿(直径35mm，高度10mm)中，然后将在25℃的饲养室内饲养的棉铃虫(Helicoverpa armigera)的3龄幼虫一只一只地释放到各培养皿中(重复10次)，关闭培养皿的盖子，在25℃下保温4天。

然后，观察培养皿内，肉眼调查死亡的虫数，通过概率单位(probit)法计算LC₅₀值。然后，根据下述式，计算未添加嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物的试验区域的LC₅₀值与添加了嘌呤霉素盐酸盐及盐酸卡那霉素水解物的试验区域的LC₅₀值的比，算出由添加嘌呤霉素盐酸盐及盐酸卡那霉素水解物引起的杀虫活性的上升。

[数2]

得到的试验结果示于下述表10～13。

[表10]

[表11]

[表12]

[表13]

如表10～13的结果所示，单独施用嘌呤霉素盐酸盐或单独施用盐酸卡那霉素水解物时，完全未发现对棉铃虫3龄幼虫的杀虫效果。另一方面，通过将杀虫蛋白：Cry1A(a)、Cry1A(b)、或Cry1A(c)与嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物分别组合施用，与仅施用杀虫蛋白的情况相比，对棉铃虫3龄幼虫的LC₅₀值显著降低，获得了极高的杀虫效果。根据以上的结果可知，通过将杀虫蛋白与嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物组合施用，在杀虫效果方面可获得协同效应。

[试验例5：对斜纹夜蛾3龄幼虫的效果试验]

按照以下所示的步骤，通过人工饲料混入生物测定法，测定添加嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物时的杀虫蛋白(Cry1C)的活性。

按照非专利文献33的方法，向在大肠杆菌中表达、纯化的Cry1C中加入蒸馏水，制备Cry1C的溶液。向得到的Cry1C的溶液中以规定的浓度加入由制造例1制备的嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物(Sigma-Aldrich Japan有限公司制)，调制含有Cry1C和嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物的溶液。向人工饲料(Insecta LFS(日本农产工业株式会社制))中加入得到的溶液并混合，如表14和15所示，使得Cry1C的含量为每1g人工饲料1.25～40.0μg/g饲料、嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物的含量为每1g人工饲料10μg/g，混合，制备含有Cry1C和嘌呤霉素或卡那霉素水解物的人工饲料。另外，向人工饲料中分别单独加入上述Cry1C溶液、嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物并混合，如表14和15所示，使得各杀虫蛋白的含量为每1g人工饲料1.25～40.0μg/g饲料、或嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物的含量为每1g人工饲料10μg/g饲料，制备分别单独含有Cry1C、嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物的人工饲料。将这样得到的含有各物质的人工饲料或不添加这些物质的人工饲料放入培养皿(直径90mm，高度15mm)中，然后将在25℃的饲养室内饲养的10只斜纹夜蛾(Spodoptera litura)的3龄幼虫释放到各培养皿中(重复3次)，关闭培养皿的盖子，在25℃下保温5天。

然后，观察培养皿内，肉眼调查死亡的虫数，通过概率单位(probit)法计算LC₅₀值，根据与上述试验例4相同的计算式，计算由添加嘌呤霉素或卡那霉素水解物引起的杀虫活性的上升。

得到的试验结果示于下述表14和15。

[表14]

[表15]

如表14和15的结果所示，单独施用嘌呤霉素盐酸盐或单独施用盐酸卡那霉素水解物时，对斜纹夜蛾3龄幼虫完全无没有杀虫效果。另一方面，通过将杀虫蛋白Cry1C与嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物分别组合施用，与仅施用杀虫蛋白的情况相比，对斜纹夜蛾3龄幼虫的LC₅₀值显著降低，得到了极高的杀虫效果。由以上结果可知，通过将杀虫蛋白与嘌呤霉素盐酸盐或盐酸卡那霉素水解物组合施用，在杀虫效果方面可获得协同效应。

产业实用性

本发明的含有苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)和嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的组合物具有优异的杀虫活性，可以用作杀虫效果高、稳定性优异的有害生物防除组合物。

Claims (13)

1.农业园艺用杀虫组合物，其含有：

来自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的杀虫蛋白，和

嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐。

2.权利要求1所述的农业园艺用杀虫组合物，其中，所述杀虫蛋白含有Cry1A或Cry1C。

3.权利要求1或2所述的农业园艺用杀虫组合物，其包含含有所述杀虫蛋白的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)培养干燥物。

4.权利要求1～3任一项所述的农业园艺用杀虫组合物，其含有产生所述嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的菌的培养干燥物。

5.权利要求1～4任一项所述的农业园艺用杀虫组合物，其还含有0.1～10质量％的氯化钙。

6.权利要求1～5任一项所述的农业园艺用杀虫组合物，其用于使用所述嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的含量为0.1ppm～100ppm的液体施用于植物。

7.权利要求1～6任一项所述的农业园艺用杀虫组合物，其用于使用所述杀虫蛋白的含量为0.1ppm～500ppm的液体施用于植物。

8.权利要求1～7任一项所述的农业园艺用杀虫组合物，其含有嘌呤霉素盐酸盐。

9.权利要求1～8任一项所述的农业园艺用杀虫组合物，其含有盐酸卡那霉素水解物。

10.农业园艺害虫的防除方法，其包括以下工序：

将来自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的杀虫蛋白施用于植物的工序(a)，和

将嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐与所述杀虫蛋白同时地连续或分别施用于植物的工序(b)。

11.农业园艺害虫的防除方法，其包括将嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐施用于产生来自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的杀虫蛋白的重组植物的工序。

12.权利要求10所述的防除方法，其中，所述工序(a)或(b)的施用包括土壤混合、灌注、种子涂抹、种子浸渍或茎叶散布。

13.权利要求10或12所述的防除方法，其中，使用含有所述杀虫蛋白和所述嘌呤霉素或其盐或者卡那霉素水解物或其盐的农业园艺用杀虫组合物。