CN117434266A - 一种肺癌标志物及其应用、肺癌的检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物学检测技术领域，具体涉及一种肺癌标志物及其应用，所述肺癌标志物为LBR蛋白及其编码mRNA。本发明提供了一种操作简单、成本低、准确性高、无创伤的应用于检测的肺癌检测的生物标志物。本发明研究发现应用ELISA、化学发光、免疫荧光等方法进行LBR蛋白、分子杂交等方法对LBR mRNA的检测，可以比较准确地将肺癌患者和健康人、以及良性肺病患者鉴别开来，并可以用于肺癌患者的疗效评估及复发监测。本发明进一步提供了一种方便、快捷、有效的肺癌的检测试剂盒，可以用于肺癌的辅助诊断、疗效评估和复发监测。
Description
技术领域
本发明属于生物学检测技术领域，具体涉及一种肺癌标志物及其应用，还涉及一种包括该肺癌标志物的肺癌的检测试剂盒。
背景技术
在全球范围内，肺癌是全球肿瘤发病率和死亡率最高的癌种，也是导致癌症相关死亡的主要原因之一。肺癌的发病率和死亡率在不同国家和地区之间存在差异。发达国家通常有更高的发病率，而发展中国家的发病率也在上升。肺癌是我国30年来发生率增长最快的恶性肿瘤，全国肺癌发病率(粗率)为57.3/10万，其中男性和女性分别为73.9/10万和39.8/10万。城市地区的肺癌发病率为59.7/10万，农村地区为54.2/10万；城市和农村地区的肺癌发病率均位列恶性肿瘤的第一位。我国肺癌负担存在发病率高、死亡率高、五年生存率低的“二高一低”特点。因此肺癌的早期筛查与早期诊断已成为延长患者生存期、挽救患者生命的关键。
早期发现和早期治疗可以显著提高肺癌患者的生存率。然而，由于肺癌通常在晚期才被发现，许多患者的预后仍然不佳。肺癌主要分为非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)，非小细胞肺癌约占肺癌的85％。小细胞肺癌和非小细胞肺癌的增殖和扩增情况完全不同，治疗上的措施也是不同的。目前，肺癌的检测手段主要包括术中病理、影像学检查、实验室检查等，其中病理组织学检查是肺癌诊断的金标准，但取材困难，不利于疗效评估和复发监测；影像学检查有其显著优势，一项长达十年的大样本早期肺癌研究显示，通过每年的低剂量胸部CT筛查，可发现85％的Ⅰ期肺癌，且筛查后进行手术切除的Ⅰ期肺癌患者10年生存率为92％。且美、日、德国家已有相关研究表示，低剂量胸部CT可降低患者接受的放射剂量，同时对肺结节检出也有较高的敏感性，可作为肺癌筛查和早期诊断的工具，但通量低，便捷性差，且假阳性率高。实验室检查最大的优势是高效便捷，但传统的肿瘤标志物敏感性和特异性都不高，在早期诊断肺癌上效能有限，但在疗效评估和复发监测方面优势显著。新型肿瘤标志物，肿瘤相关抗原自身抗体、循环肿瘤细胞(CTC)、表观遗传学、ctDNA、外泌体等，可以早期发现及诊断肺癌。其中液体活检技术简单快捷、创伤性小、可重复性，是用于筛选和早期诊断、疗效评估和复发监测肺癌的首选方法。
因此，迫切需要开发基于肺癌标志物的肺癌筛查、早期诊断和治疗监测技术，为其精准医疗提供全面指导。
发明内容
鉴于此，本发明的目的在于提供一种肺癌标志物及其应用，还涉及一种包括该肺癌标志物的肺癌的检测试剂盒。
为实现上述目的，本发明所采取的解决方案如下：
第一个方面，本发明提供一种肺癌标志物，所述肺癌标志物为LBR蛋白及其编码mRNA，在细胞外泌体膜上、外泌体膜内或游离于血浆中的生物样品中高表达。
优选地，所述生物样品包括肺癌患者的血浆、血清、口腔痰液、肺泡灌洗液、胸腔积液以及从它们中分离的外泌体。
第二个方面，本发明还提供一种如上所述的肺癌标志物在制备用于肺癌检测的产品中的应用。
优选地，所述产品包括诊断试剂盒、诊断芯片、定量PCR(qPCR)设备、护理现场测试(POCT)设备和测序仪中的任意一种。
优选地，所述应用包括肺癌的辅助诊断、疗效评估和复发监测。
第三个方面，本发明还提供一种肺癌的检测试剂盒，所述肺癌的检测试剂盒基于酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光、流式细胞术、免疫荧光、免疫组化和分子杂交中的任意一种检测体系。
优选地，所述肺癌的检测试剂盒包括表达于细胞外泌体膜上、外泌体膜内或游离于血浆中的生物样品中的LBR蛋白及其编码mRNA的检测抗体、CD9或CD63或CD81外泌体特征性捕获抗体和融合外泌体的阳离子纳米颗粒。
优选地，所述生物样品包括肺癌患者的血浆、血清、口腔痰液、肺泡灌洗液、胸腔积液以及从它们中分离的外泌体。
优选地，所述融合外泌体的阳离子纳米颗粒包括有荧光素标记的特异性DNA探针，所述特异性DNA探针靶向肺癌标志物LBR蛋白及其编码mRNA。
优选地，所述特异性DNA探针的5’端茎和环与靶基因完全互补，3’端茎与5’端茎部分互补，5’端和3’端分别用荧光基团和淬灭基团修饰，环上部分碱基用锁核酸修饰。
优选地，所述特异性DNA探针具有如SEQ ID No.1～3所示的核苷酸序列，所述SEQIDNo.1所示的核苷酸序列的碱基修饰方式为：第1位碱基被6FAM修饰，第11、14、17、20位碱基被LNA修饰和第30位碱基被BHQ1修饰；所述SEQ ID No.2所示的核苷酸序列的碱基修饰方式为：第1位碱基被6FAM修饰，第11、14、17、20位碱基被LNA修饰和第32位碱基被BHQ1修饰；所述SEQ ID No.3所示的核苷酸序列的碱基修饰方式为：第1位碱基被6FAM修饰，第11、14、17、20位碱基被LNA修饰和第32位碱基被BHQ1修饰。
优选地，所述LBR蛋白及其编码mRNA的检测抗体可以由吖啶酯、HRP、ALP、FITC、AF488和AF633中的一种或几种化合物修饰。
现有技术相比，本发明的有益效果在于：
本发明提供了一种肺癌标志物，所述肺癌标志物为LBR蛋白及其编码mRNA，本发明还提供了上述肺癌标志物在制备用于肺癌检测的产品中的应用。本发明提供了一种操作简单、成本低、准确性高、无创伤的应用于检测的肺癌检测的生物标志物。本发明研究发现应用ELISA、化学发光、免疫荧光等方法进行LBR蛋白、分子杂交等方法对LBR mRNA的检测，可以比较准确地将肺癌患者和健康人、以及良性肺病患者鉴别开来，并可以用于肺癌患者的疗效评估及复发监测。在此背景下进一步提供一种方便、快捷、有效的肺癌的检测试剂盒，可以用于肺癌的辅助诊断、疗效评估和复发监测。
附图说明
图1为本发明涉及的膜蛋白LBR生存曲线图。
图2为本发明涉及的外泌体膜蛋白LBR示意图。
图3为本发明涉及的外泌体原位捕获与检测RNA与膜蛋白示意图。
图4为本发明涉及的ELISA检测原理图。
图5为本发明涉及的化学发光检测原理图。
图6为本发明实施例1的检测结果图。
图7为本发明实施例2的检测结果图。
图8为本发明实施例3的检测结果图。
图9为本发明实施例4、5的检测结果图。
具体实施方式
本发明提供一种肺癌标志物，所述肺癌标志物为LBR蛋白及其编码mRNA，在细胞外泌体膜上、外泌体膜内或游离于血浆中的生物样品中高表达。
其中，所述生物样品包括肺癌患者的血浆、血清、口腔痰液、肺泡灌洗液、胸腔积液以及从它们中分离的外泌体。
本发明还提供一种肺癌的检测试剂盒，所述肺癌的检测试剂盒包括表达于细胞外泌体膜上、外泌体膜内或游离于血浆中的生物样品中的LBR蛋白及其编码mRNA的检测抗体、CD9或CD63或CD81外泌体特征性捕获抗体和融合外泌体的阳离子纳米颗粒。
其中，所述生物样品包括肺癌患者的血浆、血清、口腔痰液、肺泡灌洗液、胸腔积液以及从它们中分离的外泌体。
在本发明中，外泌体(exosome)是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡，直径大约30-150nm，具有脂质双层膜结构，能很好地保护其包被的物质。这种微小膜泡中含有宿主细胞来源的特异的蛋白、脂质和核酸，能作为信号分子传递给其他细胞，是细胞之间通讯的重要媒介，可使受体细胞发生多种生物功能的改变。据报道，这种外逸性介导的细胞间通讯影响了癌症的几个特征，包括调节免疫反应、重编程基质细胞、重建细胞外基质结构，甚至赋予癌细胞耐药特性。不同细胞分泌的外泌体组份和含量不同，本发明选择性地将特定的致癌分子装入外泌体中，通过在肺癌和远端微环境的不同细胞之间转移生物活性分子参与癌症进展和转移。
外泌体原位捕获孔板或芯片技术是一种全新的外泌体原位捕获与检测技术(如图3所示)，尤以检测外泌体中的mRNA和microRNA见长。其以涂附了生物分子膜的活化玻璃为载体，包被能特异识别疾病相关microRNA或mRNA靶标的分子信标(自行设计)的阳离子脂质纳米颗粒，其与带负电荷的外泌体融合后，分子信标与靶标结合而产生荧光信号，被全内反射荧光(TIRFM，total internal reflection fluorescence microscope)显微镜检测，信号强度与相应靶标含量成正比，从而判断病程或锁定病原体。由于TIRFM成像具有超微，对荧光信号超敏感的特性，使得外泌体捕获孔板或芯片结合TIRFM成像技术，可以实现对外泌体这种纳米级囊泡的直接成像及其内含物的半定量检测。外泌体原位捕获与检测示意图，如图2所示。外泌体捕获孔板或芯片可制作成24、48、96、384孔多种规格，每孔可包被单一或3种荧光素标记通的分子信标，将多个肺癌标志物基因检测道集成在一张捕获孔板或芯片上，具有显著优势。由于外泌体在各种体液样品中大量存在，且其中富含肺癌细胞来源的特异性核酸，因此可以通过分离外泌体，运用高度灵敏的外泌体捕获孔板或芯片检测技术加以鉴定。
生物信息分析、靶标筛选：对于选择纤层蛋白B受体(Lamin B Receptor,LBR)这个指标，我们是从TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库中获得了非小细胞肺癌(NSCLC)的基因表达数据和相应的检测信息，鉴定了肿瘤和正常组织中异常表达的基因，并进行了一系列生物信息学分析，以探讨这些基因的表达和动态监测价值。共获得300个异常表达的基因，包括59个下调和241个上调的基因，功能富集分析表明，差异表达的基因主要与mRNA代谢过程、RNA加工、RNA修饰、翻译调控，TGF-β信号通路和Toll样受体信号通路等有关。TCGA数据库的分析表明LBR在原发性肿瘤中高表达，并且使用来自TCGA数据库的数据生成的Kaplan-Meier生存曲线(图1)表明，高LBR表达患者的生存概率明显低于LBR低表达患者。因此，LBR通过分析被确定为动态监测相关的中心基因，并被用于构建预测模型。LBR对NSCLC动态监测有预测价值，在检测决策和个体化治疗中有潜在应用价值。
通过生物学功能研究表明，LBR是内核膜上特有的最重要的蛋白之一，它能将核纤层和异染色质锚定在内核膜上。LBR是一个跨内核膜的蛋白，亲水性N端位于核质中，由Tudor结构域、富含丝氨酸精氨酸RS域、和球状GD结构域构成。Tudor域和RS域与异染色质结合，敲除Tudor或RS域会降低与异染色质的结合。LBR基因的突变与常染色体隐性骨骼发育不良有关。LBR对胆固醇代谢至关重要，其敲除可诱导细胞衰老，产生衰老相关分泌表型。外泌体可以把LBR从肿瘤细胞的内核膜，释放到肿瘤细胞外，转移到人体其它部位，可能被其它正常的细胞吞噬，从而形成肿瘤细胞-正常细胞之间的物质交换，导致正常细胞内LBR表达升高，可能引发肿瘤转移。EVs含有的内核膜蛋白LBR，可能与ESCRT-III介导的内核膜出芽相关。因此，LBR蛋白是潜在的肺癌标志物。LBR蛋白作为肺癌患者的检测靶标，我们从LBR的生物学功能研究、生物信息分析、靶标筛选、样本实验验证、实验图像信号采集、数据统计分析等方面开展工作，在整个过程基础完善、验证结果稳定、一致的基础上提出本发明，具体实施方式如下：
本发明实施例1～4分别设置了实验组8个和对照组8个人血浆样本，从中分离外泌体。通过非标记定量蛋白质组学技术高通量筛选，发现LBR在肺癌患者血浆外泌体中高表达，并且通过定量PCR、WB和生物芯片加以验证，最终确定将LBR作为一种外泌体肺部肿瘤标志物，再进行样本实验验证，取得与前期的生物信息学分析、靶标筛选结果一致的结论。
本发明提供的一种肺癌的检测试剂盒，所述肺癌的检测试剂盒是基于酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光、流式细胞术、免疫荧光、免疫组化和分子杂交中的任意一种检测体系。
如图4所示为本发明运用ELISA技术检测外泌体膜蛋白LBR在肺癌肿瘤生物样品中的表达。酶联免疫吸附实验(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)是将抗原或抗体结合在固相载体表面，利用抗原抗体的特异性结合以及抗体或者抗原上标记的酶，催化特定底物发生显色反应，实现目标物检测的免疫分析方法，可测至皮摩尔(pmol)级别。
如图5所示为本发明运用化学发光技术检测外泌体膜蛋白LBR在肺癌肿瘤生物样品中的表达。化学发光免疫分析技术(Chemical lighting immunology assay，CLIA)原理与ELISA相近，只是底物成分不同，检测抗体通常也是被标记上酶或直接标记发光物质，这些标记的抗体能够与待检测物质中的抗原结合，形成抗原-抗体复合物，然后加入化学发光底物后，触发化学反应使底物产生光信号，实现检测。
以下结合具体实施例，对本发明的技术方案做进一步的描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。
实施例1：运用ELISA技术，外泌体膜蛋白LBR在肺癌检测中的应用
包括如下步骤：
1.1.取出生物素和亲和素等包被的生物芯片(孔板)，PBS清洗1次；
1.2.盖板或贴封板膜，400转/分,室温孵育30min；
1.3.去除溶液，使用PBS清洗3个程序，最后一次甩板或拍板；
1.4.取1μL CD9捕获抗体，加至399μL 1X PBS中，涡旋混匀；
1.5.每孔加入100μL捕获抗体稀释液，贴封板膜，4℃包板过夜；
1.6.去除溶液，使用PBS清洗3个程序；
1.7.加300μL 5％BSA的PBS，室温封闭2小时(盖板或贴封板膜)；
1.8.去除溶液，使用PBS清洗3个程序；
1.9.每孔加入100μL样品、阴、阳性对照，贴封板膜，37℃孵育60min；
1.10.去除溶液，使用PBS清洗3个程序；
1.11.取1μL LBR-HRP检测抗体，加至999μL 5％BSA的PBS中，混匀；
1.12.每孔加入100μL检测抗体稀释液，贴封板膜，37℃孵育60min；
1.13.用350μL 1X PBST洗板3次(每次洗液浸泡30sec后弃净)，最后一次甩板或拍板；
1.14.每孔加50μL TMB显色液，室温避光孵育15min；
1.15.适时每孔加50μL终止液(移液器吸取)，震板10sec，酶标仪450/620nm读板。
实施例2：运用化学发光技术，外泌体膜蛋白LBR在肺癌检测中的应用
包括如下步骤：
2.1.取出生物素和亲和素等包被的生物芯片(孔板)，PBS清洗1次；
2.2.盖板或贴封板膜，400转/分，室温孵育30min；
2.3.去除溶液，使用PBS清洗3个程序；
2.4.取1μL CD9捕获抗体，加至399μL1X PBS中，涡旋混匀；
2.5.每孔加入100μL捕获抗体稀释液，贴封板膜，4℃包板过夜；
2.6.去除溶液，使用PBS清洗3个程序；
2.7.加300μL 5％BSA的PBS，室温封闭2小时(盖板或贴封板膜)；
2.8.去除溶液，使用PBS清洗3个程序；
2.9.每孔加入100μL样品、阴、阳性对照，贴封板膜，37℃孵育60min；
2.10.去除溶液，使用PBS清洗3个程序；
2.11.取1μL LBR-HRP检测抗体，加至999μL5％BSA的PBS中，混匀；
2.12.每孔加入100μL检测抗体稀释液，贴封板膜，37℃孵育60min；
2.13.用350μL 1X PBST洗板3次(每次洗液浸泡30sec后弃净)，最后一次甩板或拍板；
2.14.每孔加100μL化学发光液，震板5sec，室温避光孵育5min；
2.15.化学发光仪读板。
实施例3：运用免疫荧光技术，外泌体膜蛋白LBR在肺癌检测中的应用
包括如下步骤：
3.1.取出生物素和亲和素等包被的生物芯片(孔板)，PBS清洗1次；
3.2.盖板或贴封板膜，400转/分,室温孵育30min；
3.3.去除溶液，使用PBS清洗3个程序；
3.4.取1μL CD63捕获抗体，加至399μL 1X PBS中，涡旋混匀；
3.5.每孔加入100μL捕获抗体稀释液，贴封板膜，4℃包板过夜；
3.6.去除溶液，使用PBS清洗3个程序；
3.7.加300μL 5％BSA的PBS，室温封闭2小时(盖板或贴封板膜)；
3.8.去除溶液，使用PBS清洗3个程序；
3.9.每孔加入100μL样品、阴、阳性对照，贴封板膜，37℃孵育60min；
3.10.去除溶液，使用PBS清洗3个程序；
3.11.取1μL LBR-FITC检测抗体，加至999μL 5％BSA的PBS中，混匀；
3.12.每孔加入100μL检测抗体稀释液，贴封板膜，37℃孵育60min；
3.13.用350μL 1X PBST洗板3次(每次洗液浸泡30sec后弃净)，最后一次甩板或拍板；3.14.荧光显微镜成像。
实施例4：特异性RNA分子信标设计
设计检测靶基因的特异性分子信标，对于外泌体捕获孔板检测特异性核酸至关重要。为此，结合靶向基因的特征，本发明设计了特殊茎环结构的分子信标，5’端茎和环与靶基因完全互补，3’端茎与5’端茎部分互补，5’端和3’端分别用荧光基团和淬灭基团修饰，环上部分碱基用锁核酸修饰，特异性分子信标具体序列如表1所示。所述SEQ ID No.1所示序列其碱基修饰方式为：第1位碱基6FAM修饰，第11、14、17、20位碱基LNA修饰和第30位碱基BHQ1修饰；所述SEQ ID No.2所示序列其碱基修饰方式为：第1位碱基6FAM修饰，第11、14、17、20位碱基LNA修饰和第32位碱基BHQ1修饰；所述SEQ ID No.3所示序列其碱基修饰方式为：第1位碱基6FAM修饰，第11、14、17、20位碱基LNA修饰和第32位碱基BHQ1修饰。
表1
本发明设计的特异性分子信标最大程度地提高了分子信标与靶基因结合的特异性，同时降低了反应的背景荧光强度。分子信标合成后，为了验证其与相应靶基因结合的特异性和最佳工作温度，设计了如下表2，根据最高信噪比选取最佳分子信标及其工作温度。同一工作温度下，分子信标和模板结合的信噪比最高的即为最佳分子信标；不同的分子信标工作温度下，信噪比最高的，即为分子信标最佳工作温度。
表2
*采用荧光读板机读取其荧光强度。**采用TIRFM显微镜检测其荧光强度。
实施例5：运用分子杂交技术，外泌体膜内LBR mRNA在肺癌检测中的应用
包括如下步骤：
5.1.取出生物素和亲和素等包被的生物芯片(孔板)，PBS清洗1次；
5.2.盖板或贴封板膜，400转/分，室温孵育30min；
5.3.去除溶液，使用PBS清洗3个程序；
5.4.取1μL CD63捕获抗体，加至399μL1X PBS中，涡旋混匀；
5.5.每孔加入100μL捕获抗体稀释液，贴封板膜，4℃包板过夜；
5.6.去除溶液，使用PBS清洗3个程序；
5.7.加300μL 5％BSA的PBS，室温封闭2小时(盖板或贴封板膜)；
5.8.去除溶液，使用PBS清洗3个程序；
5.9.每孔加入100μL样品、阴、阳性对照，贴封板膜，37℃孵育60min；
5.10.去除溶液，使用PBS清洗3个程序；
5.11.每孔加入100μL阳离子脂质复合纳米颗粒(内含检测LBR mRNA的特异性DNA探针)，42℃孵育1小时；
5.12.用1×PBS洗板3次后，用TIRFM显微镜采集荧光图片；
5.13.用DXimageV1软件分析图片，自动设置cut-off值，自动判读待测样品结果。
检测结果：
如图6、图7、图8、图9所示，在ELISA、化学发光和免疫荧光TIRFM的各个技术平台的试验中，LBR的血浆外泌体膜蛋白和mRNA的数值表达，肺癌患者都高于健康对照组，说明肺癌患者的血浆外泌体膜蛋白LBR及外泌体中LBR的mRNA的表达量，均显著升高，可将肺癌患者和健康人鉴别开来。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (12)
1.一种肺癌标志物，其特征在于，所述肺癌标志物为LBR蛋白及其编码mRNA，在细胞外泌体膜上、外泌体膜内或游离于血浆中的生物样品中高表达。
2.根据权利要求1所述的肺癌标志物，其特征在于，所述生物样品包括肺癌患者的血浆、血清、口腔痰液、肺泡灌洗液、胸腔积液以及从它们中分离的外泌体。
3.一种如权利要求1或2所述的肺癌标志物在制备用于肺癌检测的产品中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品包括诊断试剂盒、诊断芯片、定量PCR(qPCR)设备、护理现场测试(POCT)设备和测序仪中的任意一种。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用包括肺癌的辅助诊断、疗效评估和复发监测。
6.一种肺癌的检测试剂盒，其特征在于，所述肺癌的检测试剂盒基于酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光、流式细胞术、免疫荧光、免疫组化和分子杂交中的任意一种检测体系。
7.根据权利要求6所述的肺癌的检测试剂盒，其特征在于，所述肺癌的检测试剂盒包括表达于细胞外泌体膜上、外泌体膜内或游离于血浆中的生物样品中的LBR蛋白及其编码mRNA的检测抗体、CD9或CD63或CD81外泌体特征性捕获抗体和融合外泌体的阳离子纳米颗粒。
8.根据权利要求7所述的肺癌的检测试剂盒，其特征在于，所述生物样品包括肺癌患者的血浆、血清、口腔痰液、肺泡灌洗液、胸腔积液以及从它们中分离的外泌体。
9.根据权利要求7所述的肺癌的检测试剂盒，其特征在于，所述融合外泌体的阳离子纳米颗粒包括有荧光素标记的特异性DNA探针，所述特异性DNA探针靶向肺癌标志物LBR蛋白及其编码mRNA。
10.根据权利要求9所述的肺癌的检测试剂盒，其特征在于，所述特异性DNA探针的5’端茎和环与靶基因完全互补，3’端茎与5’端茎部分互补，5’端和3’端分别用荧光基团和淬灭基团修饰，环上部分碱基用锁核酸修饰。
11.根据权利要求9或10所述的肺癌的检测试剂盒，其特征在于，所述特异性DNA探针具有如SEQ ID No.1～3所示的核苷酸序列，所述SEQ ID No.1所示的核苷酸序列的碱基修饰方式为：第1位碱基被6FAM修饰，第11、14、17、20位碱基被LNA修饰和第30位碱基被BHQ1修饰；所述SEQ ID No.2所示的核苷酸序列的碱基修饰方式为：第1位碱基被6FAM修饰，第11、14、17、20位碱基被LNA修饰和第32位碱基被BHQ1修饰；所述SEQ ID No.3所示的核苷酸序列的碱基修饰方式为：第1位碱基被6FAM修饰，第11、14、17、20位碱基被LNA修饰和第32位碱基被BHQ1修饰。
12.根据权利要求7所述的肺癌的检测试剂盒，其特征在于，所述LBR蛋白及其编码mRNA的检测抗体可以由吖啶酯、HRP、ALP、FITC、AF488和AF633中的一种或几种化合物修饰。
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| CN202311462410.3A CN117434266A (zh) | 2023-11-06 | 2023-11-06 | 一种肺癌标志物及其应用、肺癌的检测试剂盒 |
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| CN117434266A true CN117434266A (zh) | 2024-01-23 |
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Family Applications (1)
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2023
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