CN117431179A - 一株格氏乳杆菌my4及其在制备调理肠胃和降尿酸食品药品中的应用 - Google Patents
一株格氏乳杆菌my4及其在制备调理肠胃和降尿酸食品药品中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于益生菌及其应用技术领域，具体涉及一株格氏乳杆菌MY4及其在制备调理肠胃和降尿酸食品药品中的应用。为进一步开发利用格氏乳杆菌的益生功能，本发明从中国广东省一名健康成年人的粪便样品中分离纯化得到一株格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)MY4菌株，该菌株具有优越的蛋白酶活性，具有优越的纤维素酶活性，可产生和分泌3‑羟基丁酸，可抑制黄嘌呤氧化酶活性。因此，MY4菌株具有促进对蛋白食物的消化吸收，改善蛋白过敏；促进对纤维素的吸收，改善便秘；可抗炎和改善肠道菌群；可预防和缓解高尿酸血症和痛风等多种功能，可用于调理肠胃和降尿酸等领域，具有重要的应用价值和经济价值。
Description
技术领域
本发明属于益生菌及其应用技术领域，具体涉及一株格氏乳杆菌MY4及其在制备调理肠胃和降尿酸食品药品中的应用。
背景技术
格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)，又称为加氏乳杆菌，是一种厌氧的革兰氏阳性细菌，属于乳酸菌的范畴，天然存在于胃肠道、阴道或母乳中。格氏乳杆菌能够在酸性环境中存活和繁殖，这使得它能够在食品和胃酸的环境下存活。格氏乳杆菌是乳酸菌属的一员，能够通过发酵转化碳水化合物为乳酸，从而降低环境pH值。此外，格氏乳杆菌具有良好的耐酸和耐胆盐特性，能在人和动物的肠胃中生存。
格氏乳杆菌被美国FDA定义为一般公认安全类添加剂(GRAS)状态的微生物，是可用于食品的益生菌菌种之一。格氏乳杆菌广泛地存在于人和动物的肠道，并随粪便排出。格氏乳杆菌是人体正常菌群的一部分，其作为肠道正常微生物体系的重要组成，并终生伴随宿主，对维持肠道微生态平衡有重要意义。近年来，格氏乳杆菌作为一种具有极大潜力的益生性乳杆菌已成为近年研究的热点，并且正在不断被用来制作成适用于人和动物的益生菌制剂。
研究表明，不同的格氏乳杆菌菌株具有不同的益生功能。比如：(1)格氏乳杆菌TF08-1菌株能调节脂代谢，可以降低血脂，降低动脉粥样硬化相关疾病、心血管疾病的相关指标，并能够显著降低血液粘度，从而有效地防止血液处于高黏、高凝状态，改善血液流变学，改善血管病变；减轻肝脏负担，减少脂质代谢紊乱，从而预防脂肪肝的形成。(2)格氏乳杆菌LG08可以分解大部分尿酸合成的前体物质，减少尿酸的合成；还可以分解肠道中的尿酸，并通过降低血清内毒素水平及抑制黄嘌呤氧化酶的活性，进一步抑制尿酸的生成并缓解炎症等副反应。因此，格氏乳杆菌具有分解嘌呤的能力与抑制黄嘌呤活性的能力。(3)格氏乳杆菌G098可以通过减少结肠组织的粘膜损伤、调节免疫反应、恢复肠道菌群多样性和增加肠道菌群稳定性等途径来缓解DSS引起的小鼠结肠炎。(4)格氏乳杆菌对人体有益，它在肠道内起着重要的生态平衡和保护作用。它能够通过产生乳酸和其他有益物质，调节肠道的酸碱度，抑制有害菌的生长，维持肠道的正常菌群结构。格氏乳杆菌还有助于增强免疫系统功能，改善消化和吸收，促进营养物质的代谢，预防腹泻和便秘等肠道问题。
由于格氏乳杆菌具有来源多样性，导致其具有基因多样性和功能多样性。然而，目前针对格氏乳杆菌的分离鉴定、益生特性和代谢机制的研究依然较少，这在一定程度上也影响了对格氏乳杆菌的开发利用。因此，有必要根据格氏乳杆菌的不同来源挖掘不同的益生功能，使其更好地发挥作用，如根据菌株的功能或者益生代谢产物确定其功效，明确其应用前景。综上所述，益生性格氏乳杆菌的研究及应用有很广阔的发展空间。
发明内容
为了克服上述现有技术的不足，本发明从中国广东省一名健康成年人的粪便样品中分离纯化得到一株格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)MY4菌株，该菌株具有产生和分泌3-羟基丁酸，可抑制黄嘌呤氧化酶活性等多种功能，具有重要的潜在应用价值。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：
本发明第一方面提供了一株格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)MY4菌株，所述格氏乳杆菌MY4菌株于2023年7月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCCNO:M 20231159；所述格氏乳杆菌MY4菌株的16S rDNA全序列如SEQ ID No：1所示。
本发明第二方面提供了第一方面格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)MY4菌株在产降解牛奶蛋白的蛋白酶中的应用。
经研究发现，益生菌格氏乳杆菌MY4菌株可产蛋白酶，提示格氏乳杆菌MY4菌株可用于生产蛋白酶，并通过产蛋白酶这一特性用于降解病原真菌的细胞壁，控制病害；分解堆肥中的纤维素；制备畜禽养殖饲料等领域。
本发明第三方面提供了第一方面格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)MY4菌株在产纤维素酶中的应用。
经研究发现，益生菌格氏乳杆菌MY4菌株可产纤维素酶，提示格氏乳杆菌MY4菌株可用于生产纤维素酶，并通过产纤维素酶这一特性用于促进人体对食物中蛋白质的消化吸收，提高对小肽和氨基酸的吸收，抗过敏等领域。
本发明第四方面提供了第一方面格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)MY4菌株在产3-羟基丁酸中的应用。
经研究发现，益生菌格氏乳杆菌MY4菌株可产3-羟基丁酸(3-HB)，提示格氏乳杆菌MY4菌株可用于生产3-HB，并通过产3-HB这一特性用于为身体各种活动提供能量，抗骨质疏松，预防及治疗慢性综合征，改善脑部认知功能，改善脂代谢等领域。
本发明第五方面提供了第一方面格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)MY4菌株在制备黄嘌呤氧化酶抑制剂中的应用。
经研究发现，益生菌格氏乳杆菌MY4菌株可抑制黄嘌呤氧化酶(XOD)活性，提示格氏乳杆菌MY4菌株可通过XOD活性用于抑制黄嘌呤氧化酶的活性，降低体内嘌呤，减少尿酸生成，从而控制尿酸水平，预防痛风发作。
本发明第六方面提供了一种制备蛋白酶的方法，即将第一方面所述的格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)MY4菌株接种于MRS液体培养基中，培养至稳定期后收取菌悬液，最后分离纯化菌悬液中的蛋白酶即得。
优选地，培养的条件为：37℃恒温厌氧。
优选地，先用MRS液体培养基将格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)MY4菌株培养至稳定期，再以1:20-1000的稀释倍数扩培至新的MRS液体培养基中。
当然，也可以用相同的方法，经过不同的分离纯化步骤后，用于制备纤维素酶或3-羟基丁酸。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明从中国广东省一名健康成年人的粪便样品中分离纯化得到一株格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)MY4菌株，菌株MY4具有的多种益生功效，包括具有优越的蛋白酶活性，具有优越的纤维素酶活性，可产生和分泌3-羟基丁酸，可抑制黄嘌呤氧化酶活性。因此，格氏乳杆菌MY4菌株具有促进对蛋白食物的消化吸收，改善蛋白过敏；促进对纤维素的吸收，改善便秘；可抗炎和改善肠道菌群；可预防和缓解高尿酸血症和痛风等多种功能。可见，本发明新分离得到的格氏乳杆菌MY4菌株具有多种益生功效，可用于调理肠胃和降尿酸等领域，比如，制作成调理肠胃和降尿酸药品，具有重要的应用价值和经济价值。
附图说明
图1为格氏乳杆菌MY4菌株的系统发育树；(菌株来源于NCBI的Genome数据库，其中Lactobacillus gasseri MY5为发明人同一时间段申报的另一个菌株，保藏号为CCTCC NO:M20231160)；
图2为格氏乳杆菌MY4菌株对牛奶平板的降解实验(左边，空白对照组；右边，实验组)；
图3为格氏乳杆菌MY4菌株对纤维素平板的降解实验(左边，空白对照组；右边，实验组)；
图4为格氏乳杆菌MY4菌株可以产生3-羟基丁酸；
图5为格氏乳杆菌MY4菌株可抑制XOD活性。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为可通过常规的商业途径购买得到。
下列实施例涉及的实验材料如下：
(1)格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)MY4菌株，分离自中国广东省广州市一名健康成年人(BMI＝18.8)的肠道粪便样品中，于甘油管内置于-80℃低温冷冻保藏。一般情况下，将该菌株接种于MRS固体培养基平板表面，并在37℃恒温厌氧培养箱中倒置培养24h可获得菌落，或在37℃恒温厌氧培养箱内于MRS液体培养基中振荡培养24-48h可获得发酵液。
(2)试剂盒：3-羟基丁酸(3-HB)检测试剂盒(Cloud-Clone Corp.,Cat:CEB022Ge)，黄嘌呤氧化酶活性测定试剂盒(盒子生工,Cat:AKAO006M)。
(3)MRS平板：牛肉膏10g,蛋白胨10g,酵母膏5g,柠檬酸三铵2g,乙酸钠5g,葡萄糖20g,磷酸氢二钾2g,吐温80 1mL,硫酸镁0.58g,硫酸锰0.25g,琼脂15g,ddH2O补齐至1L，调pH至6.2-6.6，121℃高压灭菌20min，配置成MRS平板。
(4)MRS液体培养基：牛肉膏10g,蛋白胨10g,酵母膏5g,柠檬酸三铵2g,乙酸钠5g,葡萄糖20g,磷酸氢二钾2g,吐温80 1mL,硫酸镁0.58g,硫酸锰0.25g,ddH2O补齐至1L，调pH至6.2-6.6，121℃高压灭菌20min，配置成MRS液体培养基。
(5)MP平板：脱脂奶粉10g,氯化钠1g,牛肉膏10g,蛋白胨10g,酵母膏5g,葡萄糖20g,柠檬酸三铵2g,乙酸钠5g,磷酸氢二钾2g,吐温80 0.5mL,硫酸镁0.58g,硫酸锰0.25g,琼脂15g,ddH2O补齐至1L，调pH至6.2-6.6，121℃高压灭菌20min，配置成MP平板。
(6)CMC平板：羧甲基纤维素钠10g,硫酸铵1.5g,硫酸锰0.3g,氯化钙0.2g,氯化钠5g,尿素0.3g,牛肉膏10g,蛋白胨10g,酵母膏5g,葡萄糖20g,柠檬酸三铵2g,乙酸钠5g,磷酸氢二钾2g,吐温80 0.5mL,硫酸镁0.58g,硫酸锰0.25g,琼脂15g,ddH2O补齐至1L，调pH至6.2-6.6，121℃高压灭菌20min，配置成CMC平板。
实施例1格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)MY4菌株的分离鉴定
格氏乳杆菌Lactobacillus gasseri MY4从中国广东省广州市一名健康成年人(BMI＝18.8)的肠道粪便样品中分离纯化得到，具体如下：
用无菌水将粪便样品反复清洗3次，置于研钵中，每100mg粪便加入500uL无菌水，彻底研磨匀浆，用移液器吸取适量研磨液，涂布于MRS平板上，室温培养3天。然后，用记号笔对分离实验平板中待划线纯化的菌落进行编号，并相应地在平板上标明菌株编号。标记后，挑取菌落接种到MRS平板上，用平板划线法纯化菌株。若此法不能将菌株分离则需要从富集平板上挑取菌落，经MRS液体培养基梯度稀释后，涂布于培养基上。最后，参考《伯杰细菌鉴定手册》(第八版)和《真菌分类鉴定手册》，首先分辨属于细菌的菌株，然后观察菌落的生长状况：生长形态、是否有菌丝、颜色是否均匀一致，菌落个体表面及边缘。初步分离得到一株纯化菌株，培养24小时后观察到菌株的菌落为圆形凸起、光滑、边缘整齐、不透明的乳白色，菌株编号为MY4。
接着，通过16S rDNA通用引物(27F：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG，1492R：TACGGCTACCTTGTTACGACTT)对分离得到的MY4菌株进行分子鉴定后，由北京百迈客生物科技有限公司对MY4菌株进行全基因组测序。将得到的16S rDNA sequence(SEQ IDNo：1)在NCBI的Genome数据库进行BLAST比对。结果显示，MY4菌株与已知的格氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri)16S rDNA序列的同源性>99％，并与同源菌株进行进化分析(图1)，确认菌株MY4是同种不同株的格氏乳杆菌。
最后，对菌株MY4进行保藏，保藏信息如下：保藏时间：2023年7月3日；保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)；保藏号：CCTCC NO:M 20231159；保藏单位地址：中国.武汉.武汉大学；分类命名：Lactobacillus gasseri。
格氏乳杆菌是可用于食品的益生菌菌株，其具有广泛的益生功效，如抗炎、抗衰老和降胆固醇等，但不同来源的菌株其功效不同，说明本发明从人体粪便分离得到的一株新的格氏乳杆菌MY4可以作为益生菌使用，并可能具有新的功效和功能。
Lactobacillus gasseri MY4 16S rDNA sequence(1437bp，SEQ ID No：1)：
GTCGAGCGAGCTTGCCTAGATGAATTTGGTGCTTGCACCAAATGAAACTAGATACAAGCGAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCAAGAGACTGGGATAACACCTGGAAACAGATGCTAATACCGGATAACAACACTAGACGCATGTCTAGAGTTTAAAAGATGGTTCTGCTATCACTCTTGGATGGACCTGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTAAGGTAACGGCTTACCAAGGCAATGATGCATAGCCGAGTTGAGAGACTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGGTTTCGGCTCGTAAAGCTCTGTTGGTAGTGAAGAAAGATAGAGGTAGTAACTGGCCTTTATTTGACGGTAATTACTTAGAAAGTCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGTGCAGGCGGTTCAATAAGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTCAACCGGAGAATTGCATCAGAAACTGTTGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGGAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGCAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTGGGAGGTTTCCGCCTCTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCAGTGCAAACCTAAGAGATTAGGTGTTCCCTTCGGGGACGCTGAGACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCATTAGTTGCCATCATTAAGTTGGGCACTCTAATGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACGGTACAACGAGAAGCGAACCTGCGAAGGTAAGCGGATCTCTGAAAGCCGTTCTCAGTTCGGACTGTAGGCTGCAACTCGCCTACACGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTCTGTAACACCCAAAGCCGGTGGGATAACCTTTATAGGAGTCAGCCGTC。
实施例2格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)MY4菌株的功能及其应用
(1)格氏乳杆菌MY4菌株可产降解牛奶蛋白的蛋白酶
使用脱脂牛奶平板培养基(MP平板)根据琼脂孔扩散试验测定格氏乳杆菌MY4分泌蛋白酶水解蛋白的能力。试验时，往实验组的MP平板中滴加3uL浓度为10Abs的格氏乳杆菌MY4菌液，对照组则滴加3uL空白MRS培养基。并在37℃恒温厌氧培养箱中倒置培养3天。结果表明，与滴加空白培养基的对照相比，MY4可以显著的降解蛋白，形成明显的降解圈(图2)，说明格氏乳杆菌MY4菌株可产降解牛奶蛋白的蛋白酶。
格氏乳杆菌MY4可产蛋白酶，其作为益生菌菌株使用可以促进人体对食物中蛋白质的消化吸收，提高对小肽和氨基酸的吸收。同时，也可用于抗过敏(改善蛋白消化不良或不吸收导致的食物过敏)。此外，也可以用于蛋白酶的提取，应用于食品工业或洗涤工业等蛋白酶领域的生产中；也可用于微生物饲料中以帮助动物消化吸收营养，提高对饲料的利用率。
(2)格氏乳杆菌MY4菌株可产纤维素酶
使用纤维素板培养基(MP平板)根据琼脂孔扩散法测定格氏乳杆菌MY4对纤维素的降解能力。试验时，往实验组的MP平板中滴加3uL浓度为10Abs的格氏乳杆菌MY4菌液，对照组则滴加3uL空白MRS培养基。并在37℃恒温厌氧培养箱中倒置培养3天后进行刚果红染色。结果表明，与滴加空白培养基的对照相比，MY4可以显著的降解纤维素，形成明显的降解圈(图3)，说明格氏乳杆菌MY4菌株可产纤维素酶。
由于格氏乳杆菌MY4可产纤维素酶，因此益生菌格氏乳杆菌MY4菌株可通过产生纤维素酶的功效发挥以下多个用途：(1)用于促进对膳食成分的消化吸收；(2)改善便秘，益生菌在肠道内分解纤维素产生一定的水分，具有软化大便的作用；(3)降低胆固醇是纤维素最重要的功效，因为可溶性纤维在被人体吸收后，能抑制人体对胆固醇的吸收，并能在肠道中与胆固醇结合，加快身体内胆固醇的代谢，防止人体因胆固醇过高而诱发高血脂，并且能降低动脉硬化与冠心病的发病率；(4)纤维素这种不甜的“糖”能够减缓血液对葡萄糖的吸收，平衡血糖浓度，促进肌肉和脂肪细胞对胰岛素的敏感性，从而预防并辅助治疗糖尿病。
此外，格氏乳杆菌MY4还可以应用于纤维素酶的发酵提取；应用于降解病原真菌的细胞壁，控制病害；应用于堆肥中纤维素的分解；应用于制备畜禽养殖饲料，如猪、鸡等单胃动物饲料，以克服其不能利用纤维素的缺陷。
(3)格氏乳杆菌MY4菌株可产生3-羟基丁酸(3-HB)
将用MRS液体培养基培养至稳定期的格氏乳杆菌MY4以1:30的稀释倍数扩培至新的MRS液体培养基中，在培养至稳定期24h时收取菌悬液，10,000×g、4℃离心10min后收取发酵后的菌体，所得菌体用buffer PBS(称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4、0.24gKH2PO4溶于800mL蒸馏水中，用HCl调节溶液至7.2，最后加蒸馏水定容至1L，即得PBS缓冲液)裂解制成菌体裂解液后，通过3-HB特定ELISA试剂盒(CEB022Ge)测定菌体裂解液的3-HB浓度。结果显示，与菌体裂解buffer PBS中不存在3-HB相比，菌株MY4的菌体裂解液中3-HB的浓度为114.28μg/mL，说明格氏乳杆菌MY4可以在稳定期产生3-羟基丁酸(图4)。
3-HB可以为身体各种活动提供能量，是潜在的能量/功能型食物，已被添加到运动员饮料中，因此益生菌格氏乳杆菌MY4可作为能量型食品的添加剂。同时，鉴于3-HB可以有效的抗骨质疏松，预防及治疗慢性综合征(高血压，酒精性脂肪肝，肠炎，肠癌)，改善脑部认知功能(提高学习记忆的能力，保护神经胶质细胞，改善阿尔兹海默症)，改善脂代谢。益生菌格氏乳杆菌MY4菌株可通过产生3-羟基丁酸的功效发挥以上多个用途。
此外，3-羟基丁酸是是机体天然产生的一种内源性小分子物质，对维持结肠直肠组织完整性具有重要作用，并且具有维持肠道健康、防止结肠疾病和消炎产能的作用。通过3-HB处理可以促进肠道有益菌增殖，缓解多发性硬化的症状，在调节菌群改善健康方面具有巨大的潜力。因此，益生菌格氏乳杆菌MY4菌株也有助于改善肠道菌群，缓解肠道炎症。
(4)格氏乳杆菌MY4菌株可抑制黄嘌呤氧化酶(XOD)活性
将用MRS液体培养基培养至稳定期的格氏乳杆菌MY4菌株以1:30的稀释倍数扩培至新的MRS液体培养基中，在培养至稳定期24h时收取菌悬液，10,000×g、4℃离心10min后收取发酵液上清，然后通过黄嘌呤氧化酶活性测定试剂盒(盒子生工,Cat:AKAO006M)测定发酵液上清中黄嘌呤氧化酶的活性。结果显示，与空白培养基MRS对黄嘌呤氧化酶活性无抑制作用相比，菌株MY4的发酵上清液对黄嘌呤氧化酶活性具有明显的抑制作用，抑制率为93.84％(*P<0.05)，说明格氏乳杆菌MY4可以在稳定期产生并分泌代谢物以抑制黄嘌呤氧化酶(XOD)的活性(图5)。
黄嘌呤氧化酶是嘌呤分解代谢过程中的关键酶，可以催化次黄嘌呤和黄嘌呤直接生成尿酸。因此当体内黄嘌呤氧化酶活性异常活跃时，会导致大量尿酸的生成，从而引发高尿酸血症或痛风。
黄嘌呤氧化酶抑制剂，如别嘌呤醇能抑制黄嘌呤氧化酶活性，阻止次黄嘌呤和黄嘌呤代谢为尿酸，从而减少尿酸生成，改善痛风和高尿酸血症。黄嘌呤氧化酶抑制剂还可以减少自由基造成的应激反应和对组织的伤害，有望在临床上用于治疗痛风及过氧化物自由导致的疾病。当前，别嘌呤醇是治疗高尿酸血症及痛风的主要药物之一，也是临床上唯一一种抑制尿酸生成的化学药物，但该药物有很多副作用，不但会引起发热，还引发过敏性皮疹腹痛、腹泻、白细胞及血小板减少和多器官受损，甚至有引起死亡的报道，安全性受到质疑。由于其对黄嘌呤氧化酶有很好的抑制作用所以一直沿用至今。因此，研究新的低毒高效的黄嘌呤氧化酶抑制剂具有十分重要的意义。
由此，益生菌格氏乳杆菌MY4菌株有望通过抑制黄嘌呤氧化酶的活性，降低体内嘌呤，减少尿酸生成，从而控制尿酸水平，预防痛风发作。
综上可知，本发明新分离的格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)MY4菌株具有的多种益生功效：(1)具有优越的蛋白酶活性；(2)具有优越的纤维素酶活性；(3)可产生和分泌3-羟基丁酸；(4)可抑制黄嘌呤氧化酶活性。可见，本发明新分离得到的格氏乳杆菌MY4菌株具有重要的应用价值和经济价值。
以上对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。
Claims (7)
1.格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)MY4菌株在产降解牛奶蛋白的蛋白酶中的应用，其特征在于，所述格氏乳杆菌MY4菌株于2023年7月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO:M 20231159；所述格氏乳杆菌MY4菌株的16S rDNA全序列如SEQ IDNo：1所示。
2.格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)MY4菌株在产纤维素酶中的应用，其特征在于，所述格氏乳杆菌MY4菌株于2023年7月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO:M 20231159；所述格氏乳杆菌MY4菌株的16S rDNA全序列如SEQ ID No：1所示。
3.格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)MY4菌株在产3-羟基丁酸中的应用，其特征在于，所述格氏乳杆菌MY4菌株于2023年7月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO:M 20231159；所述格氏乳杆菌MY4菌株的16S rDNA全序列如SEQ ID No：1所示。
4.格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)MY4菌株在制备黄嘌呤氧化酶抑制剂中的应用，其特征在于，所述格氏乳杆菌MY4菌株于2023年7月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO:M 20231159；所述格氏乳杆菌MY4菌株的16S rDNA全序列如SEQ IDNo：1所示。
5.一种制备蛋白酶的方法，其特征在于，将格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)MY4菌株接种于MRS液体培养基中，培养至稳定期后收取菌悬液，最后分离纯化菌悬液中的蛋白酶即得；所述格氏乳杆菌MY4菌株于2023年7月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO:M 20231159；所述格氏乳杆菌MY4菌株的16S rDNA全序列如SEQ IDNo：1所示。
6.根据权利要求5所述的一种制备蛋白酶的方法，其特征在于，培养的条件为：37℃恒温厌氧。
7.根据权利要求5所述的一种制备蛋白酶的方法，其特征在于，先用MRS液体培养基将格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)MY4菌株培养至稳定期，再以1:20-1000的稀释倍数扩培至新的MRS液体培养基中。
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