CN117430620A - 嘧啶环类化合物、其中间体、其药物组合物及其应用 - Google Patents

嘧啶环类化合物、其中间体、其药物组合物及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN117430620A
CN117430620A CN202310911252.9A CN202310911252A CN117430620A CN 117430620 A CN117430620 A CN 117430620A CN 202310911252 A CN202310911252 A CN 202310911252A CN 117430620 A CN117430620 A CN 117430620A
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
group
formula
independently
phase
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202310911252.9A
Other languages
English (en)
Inventor
张朝欣
夏广新
马星
楼江松
李志龙
赵永新
王雪松
柯樱
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Pharmaceuticals Holding Co Ltd
Original Assignee
Shanghai Pharmaceuticals Holding Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Pharmaceuticals Holding Co Ltd filed Critical Shanghai Pharmaceuticals Holding Co Ltd
Publication of CN117430620A publication Critical patent/CN117430620A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/517—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinazoline, perimidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/553—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having at least one nitrogen and one oxygen as ring hetero atoms, e.g. loxapine, staurosporine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/05—Dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/08—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/22—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains four or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种嘧啶环类化合物、其中间体、其药物组合物及其应用。该化合物为如式I或如式II所示的化合物，或它们药学上可接受的盐。本发明的化合物对KRAS突变体具有良好的抑制作用或蛋白降解作用。

Description

嘧啶环类化合物、其中间体、其药物组合物及其应用
技术领域
本发明涉及嘧啶环类化合物、其中间体、其药物组合物及其应用。
背景技术
RAS表示一群具有189个氨基酸的密切相关的单体球状蛋白(21kDa分子量)，其与质膜相关并结合GDP或GTP。RAS充当分子开关。当RAS含有结合的GDP时，其处于静止或关闭位置且“无活性”。对细胞暴露于某些生长促进刺激物进行响应时，RAS被诱导以将其结合的GDP交换为GTP。在结合GTP的情况下，RAS被“打开”并能够与其他蛋白(其“下游靶标”)相互作用并活化所述蛋白。RAS蛋白本身具有极低的使GTP水解回GDP、由此使其本身变成关闭状态的固有能力。关闭RAS需要称为GTP酶活化蛋白(GAP)的外源性蛋白，其与RAS相互作用且极大地加速GTP转化成GDP。RAS中影响其与GAP相互作用或使GTP转化回GDP的能力的任何突变将导致蛋白活化延长，且因此传导至细胞告诉其继续生长和分裂的信号延长。由于这些信号导致细胞生长和分裂，因此过度活化的RAS信号传导可最终导致癌症。
在结构上，RAS蛋白包含负责RAS的酶促活性——鸟嘌呤核苷酸结合和水解(GTP酶反应)的G结构域。其还包含称为CAAX盒的C端延伸区，其可被转译后修饰并负责使该蛋白靶向膜。G结构域在尺寸上大约为21-25kDa并含有磷酸结合环(P-环)。P-环表示蛋白中结合核苷酸的囊袋，并且这是具有保守氨基酸残基的结构域的刚性部分，所述保守氨基酸残基为核苷酸结合和水解所必需的(甘氨酸12、苏氨酸26和赖氨酸16)。G结构域还含有所谓的开关I区(残基30-40)和开关II区(残基60-76)，其均为蛋白的动态部分，由于该动态部分在静止和负载状态之间进行转换的能力而常常被表示为“弹簧加载”机制。主要相互作用为由苏氨酸-35和甘氨酸-60与GTP的γ-磷酸所形成的氢键，其使开关1区和开关2区分别维持它们的活性构象。在水解GTP和释放磷酸盐之后，此两者松弛成无活性的GDP构象。
RAS亚家族中最值得注意的成员为HRAS、KRAS和NRAS，其主要牵涉许多类型的癌症。然而，存在许多其他成员，包括DIRAS1；DIRAS2；DIRAS3；ERAS；GEM；MRAS；NKIRAS1；NKIRAS2；NRAS；RALA；RALB；RAP1A；RAP1B；RAP2A；RAP2B；RAP2C；RASD1；RASD2；RASL10A；RASL10B；RASL11A；RASL11B；RASL12；REM1；REM2；RERG；RERGL；RRAD；RRAS和RRAS2。
RAS基因的三种主要的同种型(HRAS、NRAS或KRAS)中的任一个的突变为人类肿瘤形成中最常见的事件之一。发现所有的人类肿瘤中约30％的肿瘤在RAS基因中携有一些突变。值得注意的是，在25％-30％的肿瘤中检测到KRAS突变。相比之下，NRAS和HRAS家族成员中发生致癌突变的比率低得多(分别为8％和3％)。最常见的KRAS突变发现在P-环中的残基G12和G13处以及残基Q61处。在肿瘤相关KRAS G12突变中，KRAS G12D的突变发生概率占比最高，约40％。
基于KRAS异常激活在癌症进展中的重要性和KRAS基因突变在人类癌症中的普遍性，KRAS一直是药物开发人员关注的靶点。尽管已在这个领域中取得进展，但在本领域中仍需要改进的KRAS G12D突变蛋白抑制剂。
近年来，人们利用泛素蛋白酶体通路具有特异性降解蛋白底物的功能特点，构建出靶向泛素化蛋白降解嵌合型分子(proteolysis-targeting chimeras,PROTAC)，PROTAC是具有两个异功能的配体通过linker连接的化合物：一个配体靶向于目的蛋白(POI)，而另一个配体特异性地募集E3连接酶。当PROTAC结合E3连接酶和目的蛋白时形成了三元复合物，通过劫持E3连接酶，PROTAC使POI呈现出有利的空间位置以促进其泛素化，从而选择性地降低靶蛋白的水平。这种方法的优点是PROTAC可以催化样的多轮降解靶蛋白，这是PROTAC分子与小分子抑制剂最大的不同。
CN110684015A公开了一种靶向ALK的PROTAC分子，成功制备得到了靶向ALK的PROTAC分子，能有效靶向于目标蛋白，并降低细胞中ALK的含量，同时具有较好的体内体外抗肿瘤活性，对正常细胞毒性较低，符合高效低毒的特征。但本领域尚未报道靶向KRASG12D的PROTAC分子。
发明内容
本发明的所要解决的技术为克服现有技术中能靶向降解或抑制KRAS突变体的化合物的种类较少的缺陷，为此，提供了一种嘧啶环类化合物、其中间体、其药物组合物及其应用。本发明的化合物对KRAS突变体具有良好的抑制作用或蛋白降解作用。
本发明是通过以下方法来解决上述技术问题的。
本发明提供一种如式I或式II所示的化合物，或它们药学上可接受的盐；
其中，如式I所示的化合物中：
R1为C6～C14的芳基、被一个或多个R1-1取代的C6～C14的芳基、6～14元的杂芳基或被一个或多个R1-2取代的6～14元的杂芳基；
R1-1和R1-2各自独立地为OH、C1～C6的烷基、C3～C8环烷基、卤素、NH2、CN、-O(C＝O)NR1-aR1-b、-OP(＝O)(OR1-c)2、-O(S＝O)2-R1-d、C2～C6的炔基、C1～C6的烷氧基、被一个或多个卤素取代的C1～C6的烷基、被一个或多个卤素取代的C1～C6的烷氧基或被一个或多个R1-e取代的C3～C8环烷基；
R1-a、R1-b和R1-c各自独立地为H或C1～C6的烷基；
R1-d独立地为被一个或多个R1-d-1取代的C6～C14的芳基；R1-d-1独立地为NO2；
R1-e独立地为C1～C6的烷基；
X为N或CR2；
R2为卤素；
M为3～10元的亚杂环烷基或被一个或多个卤素取代的3～10元的亚杂环烷基；
L为以下情况中的任一种(L左端与M连接，右端与G连接)：
i：L为-L1-(C＝O)NH-，L1为具有2～9个链原子的亚杂烷基；
ii：L为-L2-L3-L4--(C＝O)NH-，其中L2为连接键或C1～C6的亚烷基，L3为5～6元的亚杂环烷基，L4为连接键或C1～C6的亚烷基；
iii：L为-L5-L6-L7-L8-，L5为C1～C6的亚烷基或具有2～9个链原子的亚杂烷基，L6为5～6元的亚杂环烷基或氧代的5～6元的亚杂环烷基，L7为连接键或C1～C6的亚烷基，L8为连接键或5～6元的亚杂环烷基；
上述连接键表示该键连接的两个基团直接相连(例如L为-L5-L6-L7-L8-，若L7为连接键时，L为-L5-L6-L8-)；
G为情形1、情形2或情形3：
情形1：G为
情形2：G为 (例如/>)、(例如)、/>
情形3：G为
当G为情形2时，L为-L5-L6-L7-L8-，R1为C6～C14的芳基、被一个或多个R1-1取代的C6～C14的芳基；
所述的亚杂环烷基、所述的亚杂烷基或所述的杂芳基中的杂原子各自独立地为氮、氧或硫中的一种或多种，杂原子的个数各自独立地为1、2、3或4个；
其中，所述如式I所示的化合物不为如下任一化合物：
如式II所示的化合物中：
X’为N、O或S；
n1’为1、2、3或4；
L’为-O-(CRL-1RL-2)n2’-*、-(CRL-3RL-4)n3’-*或 *表示与R1’相连的一端；n2’和n3’各自独立地为1、2、3或4；
RL-1、RL-2、RL-3和RL-4分别独立地为H、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、被一个或多个RL-1-1取代的C1-C6烷基或卤素；
各RL-1-1分别独立地为卤素或C1-C6烷氧基；
各R1’为被一个或多个R1-1’取代的4-10元杂环烷基；所述被一个或多个R1-1’取代的4-10元杂环烷基中4-10元杂环烷基里的杂原子独立地为N、O或S中的1、2或3种，杂原子个数为1、2或3个；
各R1-1’分别独立地为卤素、羟基、-O-C1-C6烷基、C1-C6烷基或被一个或多个R1-1-1’取代的C1-C6烷基；
各R1-1-1’分别独立地为羟基、4-10元杂环烷基或被一个或多个R1-1-1-1’取代的4-10元杂环烷基；所述的4-10元杂环烷基和所述的被一个或多个R1-1-1-1’取代的4-10元杂环烷基里的杂原子独立地为N、O或S中的1、2或3种，杂原子个数为1、2或3个；
各R1-1-1-1’分别独立地为C1-C6烷基；
R2’为H或卤素；
R3’为C6-C10芳基、5-10元杂芳基、被一个或多个R3-1’取代的C6-C10芳基或被一个或多个R3-2’取代的5-10元杂芳基，所述5-10元杂芳基和所述的“被一个或多个R3-2’取代的5-10元杂芳基”中的杂原子独立地为N、O或S中的1、2或3种，杂原子个数为1、2或3个；
各R3-1’和R3-2’分别独立地为OH、卤素、C1-C6烷基、被一个或多个R3-1-1’取代的C1-C6烷基、C2-C6炔基、3-8元环烷基、-S-C(R3-1-2’)3、-S(R3-1-3’)5、氨基、C1-C6烷基、5-10元杂芳基或-O-C1-C6烷基；
或者任一相邻的两个R3-1’与其连接的碳原子一起形成5-10元杂芳基或“被一个或多个R3-1-4’取代的5-10元杂芳基”，所述5-10元杂芳基和所述的“被一个或多个R3-1-4’取代的5-10元杂芳基”中的杂原子独立地为N、O或S中的1、2或3种，杂原子个数为1、2或3个；
各R3-1-1’分别独立地为氧代基(＝O)、OH、C1-C6烷氧基或卤素；
各R3-1-2’和R3-1-3’分别独立地为卤素；
各R3-1-4’分别独立地为C1-C6烷基；
R4’为H、OH、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、“被一个或多个R4-1’取代的C1-C6烷基”、氰基或卤素；
各R4-1’分别独立地为卤素；
R9’和R10’各自独立地为H、C1-C6烷基或卤素，
Lb为连接R1’和E的连接子；
E为E3泛素连接酶的配体。
某一实施方案中，如式I所示的化合物中：
其中，R1为C6～C14的芳基或被一个或多个R1-1取代的C6～C14的芳基；
各R1-1独立地为OH、C1～C6的烷基、C3～C8环烷基、卤素或C2～C6的炔基；
X为N或CR2；
R2为卤素；
M为3～10元的亚杂环烷基或被一个或多个卤素取代的3～10元的亚杂环烷基；
L为以下情况中的任一种(L左端与M连接，右端与G连接)：
i：L为-L1-(C＝O)NH-，L1为具有2～9个链原子的亚杂烷基；
ii：L为-L2-L3-L4--(C＝O)NH-，其中L2为连接键或C1～C6的亚烷基，L3为5～6元的亚杂环烷基，L4为连接键或C1～C6的亚烷基；
iii：L为-L5-L6-L7-L8-，L5为C1～C6的亚烷基或具有2～9个链原子的亚杂烷基，L6为5～6元的亚杂环烷基或氧代的5～6元的亚杂环烷基，L7为连接键或C1～C6的亚烷基，L8为连接键或5～6元的亚杂环烷基；
上述连接键表示该键连接的两个基团直接相连(例如L为-L5-L6-L7-L8-，若L7为连接键时，L为-L5-L6-L8-)；
G为
所述的亚杂环烷基和所述的亚杂烷基中的杂原子各自独立地为氮、氧或硫中的一种或多种，杂原子的个数独立地为1、2、3或4个；
其中，所述如式I所示的化合物不为如下任一化合物：
某一实施方案中，如式I所示的化合物中：
其中，R1为C6～C14的芳基或被一个或多个R1-1取代的C6～C14的芳基；
各R1-1独立地为OH、C1～C6的烷基、C3～C8环烷基或卤素；
X为N或CR2；
R2为卤素；
M为3～10元的亚杂环烷基或被一个或多个卤素取代的3～10元的亚杂环烷基；
L为以下情况中的任一种(L左端与M连接，右端与G连接)：
i：L为-L1-(C＝O)NH-，L1为具有2～9个链原子的亚杂烷基；
ii：L为-L2-L3-L4--(C＝O)NH-，其中L2为连接键或C1～C6的亚烷基，L3为5～6元的亚杂环烷基，L4为连接键或C1～C6的亚烷基；
iii：L为-L5-L6-L7-L8-，L5为C1～C6的亚烷基或具有2～9个链原子的亚杂烷基，L6为5～6元的亚杂环烷基或氧代的5～6元的亚杂环烷基，L7为连接键或C1～C6的亚烷基，L8为连接键或5～6元的亚杂环烷基；
上述连接键表示该键连接的两个基团直接相连(例如L为-L5-L6-L7-L8-，若L7为连接键时，L为-L5-L6-L8-)；
G为
所述的亚杂环烷基和所述的亚杂烷基中的杂原子各自独立地为氮、氧或硫中的一种或多种，杂原子的个数独立地为1、2、3或4个；
其中，所述如式I所示的化合物不为如下任一化合物：
某一实施方案中，所述如式II所示的化合物中，Lb的定义与式I所示的化合物中L的定义相同。
某一实施方案中，所述如式II所示的化合物中，E的定义与式I所示的化合物中G的定义相同。
某一实施方案中，R1中，所述的C6～C14的芳基或被一个或多个R1-1取代的C6～C14的芳基中的C6～C14的芳基可独立地为C6～C10的芳基，例如苯基或萘基，优选为萘基，例如
某一实施方案中，R1中，所述的6～14元的杂芳基或被一个或多个R1-2取代的6～14元的杂芳基中的C6～C14的杂芳基可独立地为C6～C10杂芳基，例如吡啶基、嘧啶基、吲哚基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、喹啉基、异喹啉基、苯并噻唑基、吡啶并吡唑基、苯并噻吩基，例如
某一实施方案中，R1-1、R3-1’和R3-2’中，所述的C1～C6的烷基可独立地为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基，例如乙基。
某一实施方案中，R1-1中，所述的C3～C8环烷基可为环丙基、环丁基、环戊基或环己基，例如环丙基。
某一实施方案中，R1-1、R1-1’和R3-1-1’中，所述的卤素可独立地为氟、氯、溴或碘，例如氟。
某一实施方案中，R1-1中，所述的C2～C6的炔基为乙炔基。
某一实施方案中，R2和R2’中，所述的卤素可独立地为氟、氯、溴或碘，例如氟。
某一实施方案中，R1’中，所述的被一个或多个R1-1’取代的4-10元杂环烷基中的4-10元杂环烷基可独立地为5～8元的单环杂环烷基或其中/>中，环A和环B各自独立地为3～5元的饱和杂环，所述的饱和杂环中的杂原子的种类为氮、氧或硫，杂原子的个数为1或2个；Y为C或杂原子；较佳地，环A和环B各自独立地为5元的饱和杂环，所述的5元的饱和杂环中杂原子例如为氮，杂原子的个数例如为1个，更佳地，环A和环B各自独立地为四氢吡咯环。
某一实施方案中，R3’中，所述的C6-C10芳基或被一个或多个R3-1’取代的C6-C10芳基中的C6-C10芳基可独立地为苯基或萘基，优选为萘基，例如
某一实施方案中，R3’中，所述的5-10元杂芳基或被一个或多个R3-2’取代的5-10元杂芳基中的5-10元杂芳基可独立地为吡啶基、嘧啶基、吲哚基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、喹啉基、异喹啉基、苯并噻唑基、吡啶并吡唑基、苯并噻吩基，例如
某一实施方案中，M中，所述的3～10元的亚杂环烷基或被一个或多个卤素取代的3～10元的亚杂环烷基中的3～10元的亚杂环烷基可独立地为5～8元的单环亚杂环烷基或其中/>中，环A和环B各自独立地为3～5元的饱和杂环，所述的饱和杂环中的杂原子的种类可为氮、氧或硫，杂原子的个数可为1或2个；Y为C或杂原子；表示环A或环B中任意的可连接位点与分子中的其他部分相连。
某一实施方案中，M中，当所述的3～10元的亚杂环烷基或被一个或多个卤素取代的3～10元的亚杂环烷基中的3～10元的亚杂环烷基独立地为时，环A为5元的饱和杂环，所述的5元的饱和杂环中杂原子可为N，杂原子的个数可为1个，较佳地，环A为四氢吡咯环。
某一实施方案中，M中，当所述的3～10元的亚杂环烷基或被一个或多个卤素取代的3～10元的亚杂环烷基中的3～10元的亚杂环烷基独立地为时，环B为5元的饱和杂环，所述的5元的饱和杂环中杂原子可为N，杂原子的个数可为1个，较佳地，环B为四氢吡咯环。
某一实施方案中，M中，所述的3～10元的亚杂环烷基或被一个或多个卤素取代的3～10元的亚杂环烷基中的亚杂环烷基的杂原子可独立地为N，杂原子的个数可独立地为1个。
某一实施方案中，M中，所述的3～10元的亚杂环烷基或被一个或多个卤素取代的3～10元的亚杂环烷基中的3～10元的亚杂环烷基可独立地为亚四氢吡咯基或亚六氢-1H-吡咯里嗪基，例如其中结构式中的a端与L相连。某一实施方案中，M中，所述的被一个或多个卤素取代的3～10元的亚杂环烷基中的卤素可为氟、氯、溴或碘，例如氟。
某一实施方案中，M中，所述的一个或多个卤素取代的3～10元的亚杂环烷基可为其中a端与L相连。
某一实施方案中，L1中，所述的具有2～9个链原子的亚杂烷基中的亚杂烷基可为直链亚杂烷基。
某一实施方案中，L1中，所述的具有2～9个链原子的亚杂烷基可为具有2～6个链原子的亚杂烷基，例如2个链原子的亚杂烷基、3个链原子的亚杂烷基、4个链原子的亚杂烷基、5个链原子的亚杂烷基或6个链原子的亚杂烷基。
某一实施方案中，L1中，所述的具有2～9个链原子的亚杂烷基中杂原子的种类可为氧，杂原子的个数可为1个。
某一实施方案中，L1中，所述的具有2～9个链原子的亚杂烷基可为-(CH2)n1O(CH2)n2-，n1和n2各自独立地为0、1、2或3，该基团左端与M相连，例如-(CH2)3O(CH2)2-、-(CH2)2O(CH2)2-、-(CH2)O(CH2)-、-O(CH2)-或-(CH2)1O(CH2)2-。
某一实施方案中，-L1-(C＝O)NH-为 其中结构式中的c端与G相连。
某一实施方案中，L2和L4中，所述的C1～C6的亚烷基可独立地为-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH(CH3)CH2-或-CH2CH(CH3)-，例如-CH2-或-CH2CH2-，当上述基团为L2中的基团时，其左端与M相连，当上述基团为L4中的基团时，其左端与L3相连。
某一实施方案中，L2和L4中，所述的C1～C6的亚烷基可独立地-CH2CH2CH2-，当此基团为L2中的基团时，其左端与M相连，当此基团为L4中的基团时，其左端与L3相连。
某一实施方案中，L3中，所述的5～6元的亚杂环烷基可为6元的亚杂环烷基。
某一实施方案中，L3中，所述的5～6元的亚杂环烷基中杂原子的种类可为氮，杂原子的个数可为1个。
某一实施方案中，L3中，所述的5～6元的亚杂环烷基可通过杂原子与L2或L4相连。
某一实施方案中，L3中，所述的5～6元的亚杂环烷基可为亚哌啶基，例如 其中结构式中的d端与L2相连。
某一实施方案中，-L2-L3-L4--(C＝O)NH-可为以下情况中的任一种：
①：L2为连接键，L3为5～6元的亚杂环烷基，L4为C1～C6的亚烷基；
②：L2为C1～C6的亚烷基，L3为5～6元的亚杂环烷基，L4为连接键。
较佳地，-L2-L3-L4--(C＝O)NH-为 或者-L2-L3-L4--(C＝O)NH-为/> 其中，结构式张的e端与G相连。
某一实施方案中，L5和L7中，所述的C1～C6的亚烷基可独立地为-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH(CH3)CH2-或-CH2CH(CH3)-，例如-CH2-，其中，当上述基团为L5中的基团时，其左端与M相连，当上述基团为L7中的基团时，其左端与L6相连。
某一实施方案中，L5和L7中，所述的C1～C6的亚烷基可独立地为-CH2CH2-。
某一实施方案中，L5中，所述的具有2～9个链原子的亚杂烷基中的亚杂烷基可为直链亚杂烷基。
某一实施方案中，L5中，所述的具有2～9个链原子的亚杂烷基可为具有2～4个链原子的亚杂烷基，例如具有2个链原子的亚杂烷基或3个链原子的亚杂烷基。
某一实施方案中，L5中，所述的具有2～9个链原子的亚杂烷基中的杂原子的种类可为氧，杂原子的个数可为1个。
某一实施方案中，L5中，所述的具有2～9个链原子的亚杂烷基可为-(CH2)n3O(CH2)n4-，该基团左端与M相连，n3和n4各自独立为0、1或2，进一步可为-(CH2)2O或-CH2O-。
某一实施方案中，L6中，所述的5～6元的亚杂环烷基或氧代的5～6元的亚杂环烷基中的5～6元的亚杂环烷基可独立地为6元的亚杂环烷基。
某一实施方案中，L6中，所述的5～6元的亚杂环烷基或氧代的5～6元的亚杂环烷基中的5～6元的亚杂环烷基的杂原子的种类可独立地为氮，杂原子的个数可独立地为1个或2个。
某一实施方案中，L6中，所述的5～6元的亚杂环烷基或氧代的5～6元的亚杂环烷基中的5～6元的亚杂环烷基杂原子可与L5或L7相连。
某一实施方案中，L6中，所述的5～6元的亚杂环烷基或氧代的5～6元的亚杂环烷基中的5～6元的亚杂环烷基可独立地为亚哌啶基或亚哌嗪基，例如 f端与L5相连。
某一实施方案中，L6中，所述的氧代的5～6元的亚杂环烷基可为f端与L5相连。
某一实施方案中，L8中，所述的5～6元的亚杂环烷基可为6元的亚杂环烷基。
某一实施方案中，L8中，所述的5～6元的亚杂环烷基的杂原子的种类可为氮，杂原子的个数可为2个。
某一实施方案中，L8中，所述的5～6元的亚杂环烷基的杂原子可与L7或所述的G相连。
某一实施方案中，L8中，所述的5～6元的亚杂环烷基可为亚哌嗪基，例如
某一实施方案中，-L5-L6-L7-L8-可为以下情况中的任一种：
(i)：L5为C1～C6的亚烷基，L6为5～6元的亚杂环烷基，L7和L8为连接键；
(ii)：L5为C1～C6的亚烷基，L6为5～6元的亚杂环烷基，L7为C1～C6的亚烷基，L8为5～6元的亚杂环烷基；
(iii)：L5为具有2～9个链原子的亚杂烷基，L6为氧代的5～6元的亚杂环烷基，L7和L8为连接键。
较佳地，所述的-L5-L6-L7-L8-为 或者所述的-L5-L6-L7-L8-为/> />g端与G相连。
某一实施方案中，所述的R1为
某一实施方案中，所述的R1为/>
/>
某一实施方案中，所述的X为N或CF。
某一实施方案中，M为其中结构式中的a端与L相连。
某一实施方案中，L为 其中上述结构式中的c端与G相连、e端与G相连，g端与G相连。
某一实施方案中，L为
其中上述结构式中的c端与G相连、e端与G相连，g端与G相连。
某一实施方案中，n1’为1或2。
某一实施方案中，X’为O。
某一实施方案中，R2’为F。
某一实施方案中，R4’为F。
某一实施方案中，R9’和R10’各自独立地为H。
某一实施方案中，L’为-OCH2-。
某一实施方案中，R1’为其中结构式中的a端与Lb相连。
某一实施方案中，Lb为
其中上述结构式中的c端与E相连、e端与E相连，g端与E相连。
某一实施方案中，E为/>优选
某一实施方案中，R3’为 />
/>
某一实施方案中，所述的如式I所示的化合物为以下化合物中的任一种：
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
优选：
/>
/>
/>
进一步优选：
/>
/>
/>
/>
某一实施方案中，所述如式II所示的化合物为以下化合物中的任一种；
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
优选：
进一步优选：
某一实施方案中，所述的如式I所示的化合物为以下化合物中的任一种：
的一个阻转异构体，所述阻转异构体中，的阻转构型与化合物A1的阻转构型相同，所述的化合物A1为/>在以下条件下先出峰的化合物：手性柱CHIRAL ART Cellulose-SC，3x25厘米，5微米；流动相：A相为超临界二氧化碳，B相为异丙醇/二氯甲烷(v/v＝1/1，0.1％氨甲醇溶液)；流速：100毫升/分钟；45％流动相B洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的先出峰的化合物的保留时间为2.55min；
的一个阻转异构体，所述阻转异构体中，的阻转构型与化合物A2的阻转构型相同，所述的化合物A2为在以下条件下后出峰的化合物：手性柱CHIRAL ART Cellulose-SC，3x25厘米，5微米；流动相：A相为超临界二氧化碳，B相为异丙醇/二氯甲烷(v/v＝1/1，0.1％氨甲醇溶液)；流速：100毫升/分钟；45％流动相B洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的后出峰的化合物的保留时间为4.17min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与化合物B1的阻转构型相同，所述的化合物B1为/>在以下条件下先出峰的化合物：手性柱CHIRALART Cellulose-SC，2×25厘米，5微米；流动相：A相为正己烷(0.5％，2摩尔/升氨甲醇)，B相为乙醇；流速：20毫升/分钟；20％的B相进行洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的先出峰的化合物的保留时间为6min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与化合物B2的阻转构型相同，所述的化合物B2为在以下条件下后出峰的化合物：手性柱CHIRALART Cellulose-SC，2×25厘米，5微米；流动相：A相为正己烷(0.5％，2摩尔/升氨甲醇)，B相为乙醇；流速：20毫升/分钟；20％的B相进行洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的后出峰的化合物的保留时间为8.7min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与化合物C1的阻转构型相同，所述的化合物C1为在以下条件下先出峰的化合物：手性柱NB_CHIRALPAK AD,3x25厘米,5微米；流动相：A相为超临界二氧化碳，B相为丙醇(0.1％2摩尔/升氨甲醇)；流速：100毫升/分钟；50％流动相B洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的先出峰的化合物的保留时间为1.68min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与化合物C2的阻转构型相同，所述的化合物C2为在以下条件下后出峰的化合物：手性柱NB_CHIRALPAK AD,3x25厘米,5微米；流动相：A相为超临界二氧化碳，B相为丙醇(0.1％2摩尔/升氨甲醇)；流速：100毫升/分钟；50％流动相B洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的后出峰的化合物的保留时间为3.63min；/>
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与如上所述的化合物C1的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与如上所述的化合物C2的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物B1的阻转构型相同；/>
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物B2的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物B1的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物B2的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物B1的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物B2的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与化合物D1的阻转构型相同，所述的化合物D1为在以下条件下先出峰的化合物：手性柱CHIRAL ART Cellulose-SC，2×25厘米，5微米；流动相：A相为正己烷(0.5％2摩尔/升氨-甲醇)，B相为乙醇；流速：20毫升/分钟；50％的B相洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的先出峰的化合物的保留时间为4.5min；/>
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与化合物D2的阻转构型相同，所述的化合物D2为在以下条件下后出峰的化合物：手性柱CHIRAL ART Cellulose-SC，2×25厘米，5微米；流动相：A相为正己烷(0.5％2摩尔/升氨-甲醇)，B相为乙醇；流速：20毫升/分钟；50％的B相洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的后出峰的化合物的保留时间为9.5min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与化合物E1的阻转构型相同，所述的化合物E1为/>在以下条件下先出峰的化合物：CHIRAL ART Cellulose-SZ，3x25厘米，5微米；流动相：A相为正己烷(0.1％2摩尔/升氨甲醇)，B相为乙醇；流速：20毫升/分钟；10％流动相B洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的先出峰的化合物的保留时间为8.1min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与化合物E2的阻转构型相同，所述的化合物E2为在以下条件下后出峰的化合物：CHIRAL ART Cellulose-SZ，3x25厘米，5微米；流动相：A相为正己烷(0.1％2摩尔/升氨甲醇)，B相为乙醇；流速：20毫升/分钟；10％流动相B洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的后出峰的化合物的保留时间为10.4min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物C1的阻转构型相同。
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物C2的阻转构型相同。
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物B1的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物B2的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物C1的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物C2的阻转构型相同；
一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物C1的阻转构型相同；
一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物C2的阻转构型相同；
一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物C1的阻转构型相同；
一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物C2的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物B1的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物B2的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物B1的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物B2的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物C1的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物C2的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物B1的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物B2的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物C1的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物C1的阻转构型相同。
某一实施方案中，所述的如式II所示的化合物为以下化合物中的任一种：
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与化合物F1的阻转构型相同，所述的化合物F1为在以下条件下先出峰的化合物：手性柱CHIRALPAK ID，2x25厘米，5微米；流动相：A相为正己烷/甲基叔丁基醚(1/1)(0.5％2摩尔/升氨甲醇)，B相为甲醇；10％流动相B洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的先出峰的化合物的保留时间为5.05min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与化合物F2的阻转构型相同，所述的化合物F2为在以下条件下后出峰的化合物：手性柱CHIRALPAK ID，2x25厘米，5微米；流动相：A相为正己烷/甲基叔丁基醚(1/1)(0.5％2摩尔/升氨甲醇)，B相为甲醇；10％流动相B洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的后出峰的化合物的保留时间为6.47min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与化合物G1的阻转构型相同，所述的化合物G1为在以下条件下先出峰的化合物：手性柱CHIRALPAK ID,2x25厘米,5微米；流动相：A相为正己烷/甲基叔丁基醚(0.5％2摩尔/升氨甲醇)其中正己烷与甲基叔丁基醚(0.5％2摩尔/升氨甲醇)的体积比为1:1，B相为甲醇；流速：20毫升/分钟；10％流动相B洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的先出峰的化合物的保留时间为7.73min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与化合物G2的阻转构型相同，所述的化合物G2为在以下条件下后出峰的化合物：手性柱CHIRALPAK ID,2x25厘米,5微米；流动相：A相为正己烷/甲基叔丁基醚(0.5％2摩尔/升氨甲醇)其中正己烷与甲基叔丁基醚(0.5％2摩尔/升氨甲醇)的体积比为1:1，B相为甲醇；流速：20毫升/分钟；10％流动相B洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的后出峰的化合物的保留时间为13.395min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与化合物H1的阻转构型相同，所述的化合物H1为在以下条件先出峰的化合物：手性柱CHIRALPAK IE,3x25厘米,5微米；流动相：A相为正己烷(10毫摩尔/升氨甲醇溶液)，B相为乙醇；流速：35毫升/分钟；30％的B相进行洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的先出峰的化合物的保留时间为32.5min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与化合物H2的阻转构型相同，所述的化合物H2为在以下条件后出峰的化合物：手性柱CHIRALPAK IE,3x25厘米,5微米；流动相：A相为正己烷(10毫摩尔/升氨甲醇溶液)，B相为乙醇；流速：35毫升/分钟；30％的B相进行洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的先出峰的化合物的保留时间为42min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物H1的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物H2的阻转构型相同。
以上保留时间的测试条件并非对化合物的限定，只要采用上述测试条件进行测定，得到的保留时间与上述记载的相同或在误差范围内，且该化合物为上述用保留时间限定的化合物中的一个立体异构体，则落入本发明的保护范围内。
某一实施方案中，所述的如式I所示的化合物药学上可接受的盐优选为如式I所示的化合物的甲酸盐或如式I所示的化合物的三氟醋酸盐。
某一实施方案中，所述的如式I所示的化合物药学上可接受的盐优选为如式I所示的化合物的甲酸盐或如式I所示的化合物的盐酸盐。
某一实施方案中，所述的如式II所示的化合物药学上可接受的盐优选为如式II所示的化合物的甲酸盐、盐酸盐或三氟醋酸盐，优选为甲酸盐或三氟醋酸盐。
某一实施方案中，所述的如式I所示的化合物药学上可接受的盐的个数优选为1个、2个、3个或4个。
某一实施方案中，所述的如式II所示的化合物药学上可接受的盐的个数优选为1个、2个、3个或4个。
某一实施方案中，所述的如式I所示的化合物药学上可接受的盐为以下化合物中的任一种：
/>
的三氟乙酸盐、
的三氟乙酸盐、
的三氟乙酸盐、
的甲酸盐、
的甲酸盐、/>
的甲酸盐、
的甲酸盐或
的甲酸盐；
优选：
/>
的三氟乙酸盐、
的三氟乙酸盐、
的三氟乙酸盐、/>的甲酸盐、/>的甲酸盐、的甲酸盐、的甲酸盐或的甲酸盐。
某一实施方案中，所述如式II所示的化合物药学上可接受的盐为以下化合物中的任一种
优选：
本发明化合物存在立体构型的，其立体构型与实施例中对应编号化合物的立体构型相同。
以上化合物中，化合物55a’与化合物55a的构型相同，化合物55b’与化合物55b的构型相同，化合物56a’与化合物56a的构型相同，化合物56b’与化合物56b的构型相同，化合物63a’与化合物63的构型相同，化合物化合物60a’与化合物60的构型相同，化合物61a’与化合物61的构型相同，化合物62’与化合物62a的构型相同，化合物62”与化合物62b的构型相同，化合物65a与化合物65的构型相同。
本发明还提供了一种药物组合物，其包括物质X’和一种或多种药用辅料，所述的物质X’为上述的如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐、如式II所示的化合物或其药学上可接受的盐。
在本发明一实施方案中，所述的药物组合物，其包括物质X和一种或多种药用辅料，所述的物质X为上述的如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐。
在本发明某一实施方案中，所述的药物组合物，其包括物质X”和一种或多种药用辅料，所述的物质X”为上述的如式II所示的化合物或其药学上可接受的盐。
本发明还提供一种物质Y’在制备用于治疗或预防与KRAS突变所介导的癌症的药物中的应用；所述的物质Y’为上述的如式I所示的化合物、其药学上可接受的盐、如式II所示的化合物、其药学上可接受的盐或上述的药物组合物。
所述的应用中，所述的KRAS突变蛋白优选为KRAS_G12D突变蛋白。
所述的应用中，所述的与KRAS突变所介导的癌症优选为血液癌症、胰腺癌、MYH相关性息肉病、结肠直肠癌或肺癌等。
本发明还还提供一种物质Y在制备用于治疗或预防与KRAS突变所介导的癌症的药物中的应用；所述的物质Y为上述的如式I所示的化合物、其药学上可接受的盐或上述的药物组合物。
所述的应用中，所述的KRAS突变蛋白优选为KRAS_G12D突变蛋白。
所述的应用中，所述的与KRAS突变所介导的癌症优选为血液癌症、胰腺癌、MYH相关性息肉病、结肠直肠癌或肺癌等。
本发明还提供了一种物质Y’在制备用于治疗或预防癌症的药物中的应用；所述的物质Y’为上述的如式I所示的化合物、其药学上可接受的盐、如式II所示的化合物、其药学上可接受的盐或上述的药物组合物；所述的癌症例如为血液癌症、胰腺癌、MYH相关性息肉病、结肠直肠癌或肺癌。
本发明还提供了一种物质Y在制备用于治疗或预防癌症的药物中的应用；所述的物质Y为上述的如式I所示的化合物、其药学上可接受的盐或上述的药物组合物；所述的癌症例如为血液癌症、胰腺癌、MYH相关性息肉病、结肠直肠癌或肺癌。
本发明还提供了一种治疗预防或治疗KRAS突变所介导的癌症的方法，其包括向患者施用治疗有效量的物质Y’；所述的物质Y’为上述的如式I所示的化合物、其药学上可接受的盐、如式II所示的化合物、其药学上可接受的盐或上述的药物组合物。
在本发明一实施方案中，所述的应用中，还提供了一种治疗预防或治疗KRAS突变所介导的癌症的方法，其包括向患者施用治疗有效量的物质Y；所述的物质Y为上述的如式I所示的化合物、其药学上可接受的盐或上述的药物组合物。
所述的KRAS突变所介导的癌症例如血液癌症、胰腺癌、MYH相关性息肉病、结肠直肠癌或肺癌等。
所述的KRAS突变可为KRAS_G12D突变。
本发明还提供了一种治疗预防或治疗癌症的方法，其包括向患者施用治疗有效量的物质Y’；所述的物质Y’为上述的如式I所示的化合物、其药学上可接受的盐、如式II所示的化合物、其药学上可接受的盐或上述的药物组合物；所述的癌症为血液癌症、胰腺癌、MYH相关性息肉病、结肠直肠癌或肺癌。
本发明还提供了一种治疗预防或治疗癌症的方法，其包括向患者施用治疗有效量的物质Y；所述的物质Y为上述的如式I所示的化合物、其药学上可接受的盐、或上述的药物组合物；所述的癌症为血液癌症、胰腺癌、MYH相关性息肉病、结肠直肠癌或肺癌。本公开还涉及治疗哺乳动物过度增殖性疾病的方法，该方法包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的本公开的化合物或药学上可接受的盐。
Ras突变，包括但不限于已经在血液系统癌症或恶性肿瘤(例如影响血液，骨髓和/或淋巴结的癌症)中鉴定出的K-Ras，H-Ras或N-Ras突变的Ras突变。因此，某些实施方案涉及向需要治疗血液癌症或恶性肿瘤的患者施用所公开的化合物(例如，以药物组合物的形式)。
在某些特定实施方案中，本公开涉及用于治疗肺癌的方法，所述方法包括将有效量的任何上述化合物(或包含所述化合物的药物组合物)施用于需要其的受试者。
本发明中，所述的癌症或恶性肿瘤包括但不限于白血病和淋巴瘤。在某些实施方案中，所述的血病又例如急性淋巴细胞白血病(ALL)，急性骨髓性白血病(AML)，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)，慢性骨髓性白血病(CML)，急性单核细胞白血病(AMoL)和/或其他白血病。在某些实施方案中，所述的淋巴瘤，例如霍奇金淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤的所有亚型。
本发明中，在某些实施方案中，所述的肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)，例如腺癌，鳞状细胞肺癌或大细胞肺癌。在其他实施方案中，肺癌是小细胞肺癌。其他肺癌包括但不限于腺瘤，类癌和未分化癌。
本发明中，在一些实施方案中，所述癌症，例如急性髓细胞性白血病，青少年癌症，儿童肾上腺皮质癌，与艾滋病相关的癌症(例如淋巴瘤和卡波济氏肉瘤)，肛门癌，阑尾癌，星形细胞瘤，非典型类畸形，基底细胞癌，胆管癌，膀胱癌，骨癌，脑干神经胶质瘤，脑肿瘤，乳腺癌，支气管肿瘤，伯基特淋巴瘤，类癌，非典型类畸形，胚胎肿瘤，生殖细胞肿瘤，原发性淋巴瘤，宫颈癌，儿童期癌症，脊索瘤，心脏肿瘤，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，慢性粒细胞性白血病(CML)，慢性骨髓增生性疾病，结肠癌，大肠癌，颅咽管瘤，皮肤T细胞淋巴瘤，肝外导管原位癌(DCIS)，胚胎肿瘤，中枢神经系统癌，子宫内膜癌，室管膜瘤，食管癌，肉芽肿性神经母细胞瘤，尤文氏肉瘤，颅外生殖细胞瘤，性腺外生殖细胞瘤，眼癌，骨纤维组织细胞瘤，胆囊癌，胃癌，胃肠道类癌，胃肠道间质瘤(GIST)，生殖细胞肿瘤，妊娠滋养细胞肿瘤，毛细胞白血病，头颈癌，心脏病，肝癌，霍奇金淋巴瘤，下咽癌，眼内黑色素瘤，胰岛细胞肿瘤，胰腺神经内分泌肿瘤，肾癌，喉癌，嘴唇和口腔癌，肝癌，小叶原位癌(LCIS)，肺癌，淋巴瘤，转移性鳞状鳞癌，隐匿性原发性，中线癌，口腔癌，多发性内分泌肿瘤综合征，多发性骨髓瘤/浆细胞瘤，真菌病，蕈样肉芽肿，骨髓增生异常综合征，骨髓增生异常/骨髓增生性肿瘤，多发性骨髓瘤，默克尔细胞癌，恶性间皮瘤，骨和骨肉瘤的恶性纤维组织细胞瘤，鼻腔和副鼻窦，鼻腔和鼻窦神经母细胞瘤，非霍奇金淋巴瘤，非小细胞肺癌(NSCLC)，口腔癌，嘴唇和口腔癌，口咽癌，卵巢癌，胰腺癌，乳头状瘤病，副神经节瘤，鼻旁窦和鼻腔癌，甲状旁腺癌，阴茎癌，咽喉癌，胸膜肺母细胞瘤，原发性中枢神经系统(CNS)淋巴瘤，前列腺癌，直肠癌症，移行细胞癌，视网膜母细胞瘤，横纹肌肉瘤，唾液腺癌，皮肤癌，胃(胃)癌，小细胞肺癌，小肠癌，软组织肉瘤，T细胞淋巴瘤，睾丸癌，喉癌，胸腺瘤和胸腺癌癌，甲状腺癌，肾盂和输尿管的移行细胞癌，滋养细胞肿瘤，儿童期不常见的癌，尿道癌，子宫肉瘤，阴道癌，外阴癌或病毒性癌。在一些实施方案中，所述非癌性过度增殖性疾病，例如皮肤的良性增生(例如牛皮癣)，再狭窄或前列腺(例如良性前列腺肥大(BPH))。
本发明还提供一种如式I-A、式I-B或式II-A所示的化合物：
其中，上述各式中，Xa独立地为或卤素；
h1独立地为0、1或2；PG1独立地为羟基保护基，PG2独立地为氨基保护基；T1独立地为-L1-T2、被一个或多个OH取代的C1～C4的亚烷基或-(CH2)h2-CHO，h2为0、1、2、3或4，T2为-CH＝CH2或COOH；
R1-1、X、L1、X’、n1’、R2’、R4’、R9’和R10’的定义如前任一方案所述；或者R1-1为
在本发明一实施方案中，如式I-A所示的化合物为如式I-A-1所示的化合物，如式I-B所示的化合物为如式I-B-1所示的化合物，如式II-A所示的化合物为如式II-A-1所示的化合物：
本发明还提供如下所示的任一化合物：
/>
/>
/>
/>
/>
/>
术语定义
术语“药学上可接受的”是指盐、溶剂、辅料等一般无毒、安全，并且适合于患者使用。所述的“患者”优选哺乳动物，更优选为人类。
术语“药学上可接受的盐”指的是本文所定义的药学上可接受的盐，并且具有母体化合物所有的作用。药学上可接受的盐可以通过在有机碱的合适的有机溶剂中加入相应的酸，根据常规方法处理来制备药学上可接受的盐。
成盐实例包括：对于碱加成盐，有可能通过在水性介质中使用碱金属或碱土金属氢氧化物或醇盐(例如乙醇盐或甲醇盐)或适当碱性有机胺(例如二乙醇胺、胆碱或葡甲胺)处理具有适当酸性质子的本发明化合物来制备碱金属(如钠、钾或锂)或碱土金属(如铝、镁、钙、锌或铋)的盐。
或者，对于酸加成盐，与无机酸成盐，如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸；和有机酸所形成的盐，如甲酸、醋酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柃檬酸、乙磺酸、富马酸、葡庚糖酸、谷氨酸、乙醇酸、羟基萘甲酸、2-羟基乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、草酸、丙酮酸、丙二酸、扁桃酸、甲磺酸、黏糠酸、2-萘磺酸、丙酸、水杨酸、琥铂酸、酒石酸、柠檬酸、肉桂酸、对甲苯磺酸或三甲基乙酸。
术语“药用辅料”可为药物生产领域中广泛采用的那些辅料。辅料主要用于提供一个安全、稳定和功能性的药物组合物，还可以提供方法，使受试者接受给药后活性成分以所期望速率溶出，或促进受试者接受组合物给药后活性成分得到有效吸收。所述的药用辅料可以是惰性填充剂，或者提供某种功能，例如稳定该组合物的整体pH值或防止组合物活性成分的降解。所述的药用辅料可以包括下列辅料中的一种或多种：粘合剂、助悬剂、乳化剂、稀释剂、填充剂、成粒剂、胶粘剂、崩解剂、润滑剂、抗粘着剂、助流剂、润湿剂、胶凝剂、吸收延迟剂、溶解抑制剂、增强剂、吸附剂、缓冲剂、螯合剂、防腐剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。
本发明的药物组合物可根据公开的内容使用本领域技术人员已知的任何方法来制备。例如，常规混合、溶解、造粒、乳化、磨细、包封、包埋或冻干工艺。
本发明所述的药物组合物可以任何形式给药，包括注射(静脉内)、粘膜、口服(固体和液体制剂)、吸入、眼部、直肠、局部或胃肠外(输注、注射、植入、皮下、静脉内、动脉内、肌内)给药。本发明的药物组合物还可以是控释或延迟释放剂型(例如脂质体或微球)。固体口服制剂的实例包括但不限于粉末、胶囊、囊片、软胶囊剂和片剂。口服或粘膜给药的液体制剂实例包括但不限于悬浮液、乳液、酏剂和溶液。局部用制剂的实例包括但不限于乳剂、凝胶剂、软膏剂、乳膏剂、贴剂、糊剂、泡沫剂、洗剂、滴剂或血清制剂。胃肠外给药的制剂实例包括但不限于注射用溶液、可以溶解或悬浮在药学上可接受载体中的干制剂、注射用悬浮液和注射用乳剂。所述的药物组合物的其它合适制剂的实例包括但不限于滴眼液和其他眼科制剂；气雾剂：如鼻腔喷雾剂或吸入剂；适于胃肠外给药的液体剂型；栓剂以及锭剂。
“治疗”意味着对哺乳动物体内疾病的任何治疗，包括：(1)防止疾病，即造成临床疾病的症状不发展；(2)抑制疾病，即阻止临床症状的发展；(3)减轻疾病，即造成临床症状的消退。
“有效量”是指当向需要治疗的患者给予化合物时，其量足以(i)治疗相关疾病，(ii)减弱、改善或消除特定疾病或病症的一种或多种症状，或(iii)延迟本文所述的特定疾病或病症的一种或多种症状的发作。对应于该量的所述的如式II所示的羰基杂环类化合物或其药学上可接受的盐或者如上所述的药物组合物的量将根据例如特定化合物、疾病状况及其严重性、需要治疗的患者的特征(例如体重)等因素而变化，但是尽管如此仍然可以由本领域技术人员常规地确定。
本发明所述的“预防”是指获得或发生疾病或障碍的风险降低。
术语“芳基”是指具有指定碳原子数(例如，C6～C14)的、环状的、不饱和的一价烃基，其为单环或多环(例如，2个)，为多环时，单环之间共用两个原子和一根键，且(至少一个环/每个环均)具有芳香性，例如苯基、萘基。
术语“杂芳基”是指含有杂原子的芳香基团，优选含有1个、2个或3个独立选自氮、氧和硫的芳族6-14元或5-10元单环(例如6元单环)、6-14元或5-10元双环(例如9-10元双环)，例如呋喃基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻吩基、异唑基、噁唑基、二唑基、咪唑基、吡咯基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、苯并咪唑基、吲哚基、吲唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并唑基、苯并异唑基、喹啉基、异喹啉基等。
术语“烷基”是指具有指定的碳原子数的直链或支链烷基。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基及其类似烷基。若非特别指明取代基，否则烷基是非取代的。
术语“环烷基”是指具有指定数目(例如C3～C8)环碳原子数的非芳香族的饱和的一价环烃基，其为单环，环烷基的例子包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基。
术语“卤素”是指F、Cl、Br、I。
术语“亚杂环烷基”是指具有指定数目环原子数(例如3～10元)的且至少一个环碳原子被选自N、O和S的杂原子代替形成的非芳香族的饱和二价环烃基。亚杂环烷基可以通过其中的杂原子或碳原子连接到分子中的其他部分。单环的亚杂环烷基的例子包括但不限于并环的亚杂环烷基的例子包括但不限于/>
在本发明中，术语“亚杂烷基”是指具有指定数目链原子数(例如2～9个)的饱和的直链的二价烃基，其中至少有一个链原子为选自N、O和S的杂原子，其余链原子为碳。亚杂烷基可以通过其中的杂原子或碳原子连接到分子中的其他部分。具有2个链原子的亚杂烷基例如-O-CH2-、-CH2-O-等，具有3个链原子的亚杂烷基例如-CH2-CH2-O-、-CH2-O-CH2-等，具有4个链原子的亚杂烷基例如-CH2-O-CH2-CH2-等，具有5个链原子的亚杂烷基例如-CH2-CH2-O-CH2-CH2-等，具有6个链原子的亚杂烷基例如-CH2-CH2-CH2-O-CH2-CH2-等。
在本发明中，术语“亚烷基”是指具有指定数目碳原子的饱和的直链或支链的二价烃基。亚烷基的实例包括但不限于-CH2-、-CH2CH2-。
在本发明中，术语“饱和杂环”是指具有指定环原子数(例如，3～5元)的、指定杂原子数(例如，1个或2个)的、指定杂原子种类(N、O和S中的一种或多种)的饱和环，脂杂环的例子包括但不限于：
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。
除非另有说明，术语“对映异构体”或者“旋光异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。
除非另有说明，术语“顺反异构体”或者“几何异构体”系由因双键或者成环碳原子单键不能自由旋转而引起。
除非另有说明，术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心，并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。
除非另有说明，用楔形实线键和楔形虚线键/>表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键/>和直形虚线键/>表示立体中心的相对构型，用波浪线/>表示楔形实线键/>或楔形虚线键/>或用波浪线/>表示直形实线键/>或直形虚线键/>用“＊”标注的碳是指S构型手性碳、R构型手性碳或非手性碳。
可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。
用表示相应的基团通过该位点与化合物中的其它片段、基团进行连接。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：本发明的化合物对KRAS蛋白具有降解作用或对KRASG12D突变蛋白具有良好的抑制作用。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
本发明中，以下实施例最终制得的化合物及其盐(或游离碱)，若这些化合物中存在由轴手性产生的立体构型时，这些化合物及其盐(或游离碱)由轴手性产生的立体构型与制备这些化合物的含有手性轴中间体的构型一致。例如实施例1中化合物50：化合物50通过含有手性轴的中间体50-2a制得，则化合物50中由轴手性产生的构型与中间体50-2a的构型一致。本发明的其他实施例中由轴手性产生的构型均同实施例1情况。
本发明中，以下实施例编号相同的化合物构型相同，例如实施例6步骤5得到的化合物55-4a与实施例21中使用的原料化合物55-4a构型相同。
制备例1化合物40-2
1.1化合物40-1的制备方法
用3-溴-2,4-二氟苯胺替代2-氯-3-氟-4-氨基吡啶，参考以下化合物38-6的合成方法,得到化合物40-1(淡黄色固体)。MS(ESI,m/z):489.1/491.0[M+H]+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.44–7.36(m,1H),4.48–4.31(m,4H),3.75–3.54(m,2H),2.08–1.92(m,2H),1.79–1.70(m,2H),1.54(s,9H)。
化合物38-6的制备方法如下：
步骤1：
在25摄氏度搅拌条件下，向2-氯-3-氟-4-氨基吡啶(1克，6.82毫摩尔，1.0当量)的乙腈(10毫升)溶液中加入N-碘代丁二酰亚胺(1.84克，7.77毫摩尔，1.2当量)和对甲苯磺酸(130毫克，0.65毫摩尔，0.1当量)。混合物在70摄氏度条件下反应16小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，混合物冷却至25摄氏度，加入30毫升水稀释，用乙酸乙酯(50毫升x3)萃取，合并有机相。有机相依次用50毫升饱和碳酸钠溶液，50毫升饱和亚硫酸钠溶液以及50毫升饱和食盐水洗涤，有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→45％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物38-1(黄色固体，1.72克，产率95％)。MS(ESI,m/z):272.9/274.9[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.17(s,1H),4.84(s,2H)。
步骤2：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物38-1(1克，3.67毫摩尔，1.0当量)的乙醇(10毫升)溶液中加入三乙胺(1.38克，12.96毫摩尔，3.6当量)和二氯二(三苯基膦)钯(266毫克，0.36毫摩尔，0.1当量)。混合物在一氧化碳氛围中80摄氏度条件下反应15小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液冷却至25摄氏度，用硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→31％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物38-2(黄色固体，660毫克，产率74％)。MS(ESI,m/z):219.3/221.3[M+H]+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.56(s,1H),4.41(q,J＝7.1Hz,2H),1.43(t,J＝7.1,3H)。
步骤3：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物38-2(660毫克，2.87毫摩尔，1.0当量)的无水四氢呋喃(6毫升)溶液中滴加三氯乙酰异氰酸酯(853毫克，4.30毫摩尔，1.5当量)。混合物在25摄氏度下反应20分钟，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液浓缩得到粗产品。所得粗产品用甲基叔丁基醚(10毫升)打浆，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚(2毫升x3)洗涤，滤饼干燥得到化合物38-3(白色固体，1.0克，产率77％)。MS(ESI,m/z):406.0/408.0/410.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.19(s,1H),8.91(s,1H),8.78(d,J＝0.8Hz,1H),4.48(q,J＝7.1Hz,2H),1.43(t,J＝7.1,3H)。
步骤4：
在25摄氏度搅拌下，向化合物38-3(1克，2.334毫摩尔，1.00当量)的甲醇(10毫升)溶液中滴加氨甲醇溶液(7摩尔每升，1毫升)。混合液在25摄氏度条件下反应1小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液浓缩得到粗产品。所得粗产品通过甲基叔丁基醚(10毫升)打浆，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚(2毫升x3)洗涤，滤饼干燥得到化合物38-4(白色固体，594毫克，产率94％)。MS(ESI,m/z):216.1/218.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.34(d,J＝1.2Hz,1H)。
步骤5：
在0摄氏度氮气保护的条件下，向干燥的100毫升单口瓶中依次加入化合物38-4(500毫克，2.20毫摩尔，1.0当量)，三氯氧磷(9毫升)和N,N-二异丙基乙胺(0.9毫升)。混合物在0摄氏度条件下搅拌10分钟，然后在90摄氏度下反应12小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液减压浓缩得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→30％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物38-5产品(黄色固体，425毫克，产率72％)。
步骤6：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，将化合物38-5(425毫克，1.68毫摩尔，1.0当量)溶解在5毫升二氯甲烷中。向该溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(652毫克，4.80毫摩尔，3.0当量)和(1R，5S)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(357毫克，1.60毫摩尔，1.0当量)，然后在25摄氏度下反应1小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液浓缩得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→30％乙酸乙酯/二氯甲烷梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物38-6(黄色固体，700毫克，产率97％)。MS(ESI,m/z):428.2/430.2[M+H]+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.86(d,J＝0.6Hz,1H),4.59–4.41(m,4H),3.78–3.71(m,2H),2.04–1.96(m,2H),1.75–1.65(m,2H),1.54(s,9H)。
1.2化合物25-4的制备方法
步骤1
在零摄氏度，氮气保护搅拌条件下，向3-丁烯-1-醇(10.0克，131.7毫摩尔，1.0当量)，三乙胺(28.0克，263.55毫摩尔，2.0当量)和4-二甲氨基吡啶(2.5克，19.7毫摩尔，0.15当量)的二氯甲烷(100毫升)溶液中滴加对甲基苯磺酰氯(29.1克，144.9毫摩尔，1.1当量)。滴加完毕后，混合物在25摄氏度氮气保护搅拌条件下反应16小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应完全后，向体系中加入200毫升水淬灭反应。混合物用二氯甲烷(200毫升x3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到粗产品。粗产品用硅胶柱层析法纯化，用0％→25％的乙酸乙酯/石油醚流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物25-1(无色油状，29.00克，产率92.4％)。MS(ESI,m/z):227.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.82–7.76(m,2H),7.35(d,J＝8.0Hz,2H),5.72–5.62(m,1H),5.10–5.05(m,2H),4.08–4.05(m,2H),2.45(s,3H),2.43–2.37(m,2H)。
步骤2
在25摄氏度，氮气保护搅拌条件下，向100毫升单口瓶中依次将化合物25-1(10.0克，132.6毫摩尔，2.0当量)和氢氧化钾(7.44克，132.6毫摩尔，2.0当量)，将混合物加热到75摄氏度反应30分钟后。然后在75摄氏度将化合物1,3-丙二醇(15.0克，62.9毫摩尔，1.0当量)缓慢滴加至上述体系中，滴加时间不低于30分钟，滴加完毕后将反应体系加热至80摄氏度反应30分钟。反应通过薄层色谱监控，反应完毕后将反应体系冷却至25摄氏度。反应体系用200毫升水淬灭，用乙酸乙酯(200毫升x3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥后过滤，所得滤液通过减压蒸馏除去溶剂。流动相用0％→25％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物25-2(无色油状，2.15克，产率25％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.86–5.76(m,1H),5.13–5.04(m,2H),3.78–3.75(m,2H),3.65–3.62(m,2H),3.52–3.48(m,2H),2.56(s,1H),2.37–2.31(m,2H),1.86–1.80(m,2H)。
步骤3
在零摄氏度，氮气保护搅拌条件下，向化合物25-2(2.15克,16.5毫摩尔,1.0当量)，三乙胺(3.5克,33.1毫摩尔,2.0当量)和4-二甲氨基吡啶(320毫克,2.5毫摩尔,0.15当量)的二氯甲烷(20毫升)溶液中滴加对甲基苯磺酰氯(3.46克,18.1毫摩尔,1.1当量)。滴加完毕后，混合物在25摄氏度氮气保护搅拌条件下反应16小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应完全后，向体系中加入20毫升水淬灭反应。混合物用二氯甲烷(20毫升x3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到粗产品。粗产品用硅胶柱层析法纯化，用0％→25％的乙酸乙酯/石油醚流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物25-3(无色油状，4.0克，产率89％)。MS(ESI,m/z):285.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.81–7.78(m,2H),7.35(d,J＝8.0Hz,2H),5.79–5.69(m,1H),5.07–4.99(m,2H),4.15–4.11(m,2H),3.45–3.42(m,2H),3.38–3.35(m,2H),2.45(s,3H),2.26–2.20(m,2H),1.92–1.86(m,2H)。
步骤4
在25摄氏度搅拌条件下，向100毫升单口瓶中依次加入化合物25-3，L-脯氨醇(0.85克，7.9毫摩尔，1.2当量)，碳酸钾(1.94克，13.3毫摩尔，2.0当量)和乙腈(20.0毫升)。混合物在50摄氏度反应4小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液冷却至室温，过滤除去不溶物，滤液通过减压浓缩得到粗产品。粗产品通过硅胶柱层析法纯化，用0％→5％甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物25-4(白色固体，1.17克，产率77％)。MS(ESI,m/z):214.2[M+H]+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.90–5.77(m,1H),5.14–5.02(m,2H),3.66–3.61(m,1H),3.54–3.45(m,4H),3.41–3.37(m,1H),3.22–3.16(m,1H),3.05(s,1H),2.93–2.83(m,1H),2.64–2.58(m,1H),2.39–2.22(m,4H),1.93–1.70(m,6H)。
1.3化合物40-2的制备方法
在25摄氏度，氮气保护搅拌条件下，向化合物40-1(2.5克，4.849毫摩尔，1当量)，碳酸铯(4.99克，14.547毫摩尔，3当量)和三乙烯二胺(0.11克，0.970毫摩尔，0.2当量)的N,N-二甲基甲酰胺(25毫升)溶液中加入化合物25-4(1.31克，5.819毫摩尔，1.2当量)。混合物在90摄氏度条件下搅拌反应3小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应完全后，加入200毫升水稀释反应液，水层用乙酸乙酯(300毫升x3)萃取，合并后有机层用饱和食盐水(100毫升x3)洗涤，再用无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到粗产品。粗产品通过硅胶柱层析法纯化，用0％→10％甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物40-2(黄色油，1.13克，产率29％)。MS(ESI,m/z):666.1/667.9[M+H]+
制备例2化合物48-8a
步骤1
在0摄氏度氮气保护搅拌条件下，将化合物3-丁烯-1-醇(17.13克，225.62毫摩尔，1.1当量)溶于300毫升四氢呋喃中，向其中分批加入氢化钠(60％，24.61克，615.33毫摩尔，3.0当量)，混合物在0摄氏度反应30分钟后，将溴乙酸(30克，205.11毫摩尔，1.0当量)缓慢滴加上述混合体系中。混合物在70摄氏度条件下反应2小时，反应过程通过薄层层析来监控。反应结束后，反应液冷却至室温，倒入水溶液中淬灭，用2摩尔盐酸调节pH至1～3，乙酸乙酯萃取，合并有机相后干燥，过滤除去干燥剂，滤液浓缩得到粗产品化合物48-1(黄色油，30克，产率56％)，粗产品直接用于下一步合成。
步骤2
在0摄氏度氮气保护搅拌条件下，将化合物48-1(30克，218.99毫摩尔，1.0当量)溶于300毫升无水四氢呋喃中，向其中缓慢滴加四氢铝锂的四氢呋喃溶液(2.5摩尔每升，87.60毫升，218.99毫摩尔，1.0当量)，所得混合物在25摄氏度反应2小时，反应过程通过薄层层析来监控。反应结束后，反应液冷却至0摄氏度，向反应液中依次缓慢滴加水(20毫升)、20％的氢氧化钠(20毫升)和水(60毫升)，加完继续搅拌30分钟，混合物过滤，滤液浓缩得到粗产品。粗产品通过硅胶柱层析法纯化，用0％→50％的乙酸乙酯/石油醚流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物48-2(无色油，5克，产率30％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.88-5.77(m,1H),5.20–4.99(m,2H),3.74-3.71(m,2H),3.63–3.48(m,4H),2.38-2.32(m,2H)。
步骤3
在0摄氏度氮气保护搅拌条件下，将化合物48-2(5克，43.04毫摩尔，1.0当量)和四溴化碳(15.66克，47.34毫摩尔，1.1当量)溶于50毫升二氯甲烷中，缓慢加入三苯基膦(12.40克，47.34毫摩尔，1.1当量)，混合物在0摄氏度反应1小时，反应过程通过薄层层析来监控。反应结束后，反应液浓缩得到粗产品。粗产品通过硅胶柱层析法纯化，用0％→10％的乙酸乙酯/石油醚流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物48-3(无色油，3克，产率50％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.90–5.75(m,1H),5.14–5.00(m,2H),3.80–3.69(m,2H),3.60–3.51(m,2H),3.50–3.42(m,2H),2.41–2.31(m,2H)。
步骤4
在0摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物48-4(参考WO2021041671制得，2克，8.82毫摩尔，1.0当量)，无水甲醇(0.57克，17.65毫摩尔，2当量)以及20毫升无水四氢呋喃，随后向上述溶液中分批加入硼氢化锂(0.40克，17.65毫摩尔，2当量)，所得混合物在25摄氏度反应2小时，反应过程通过薄层层析来监控。反应结束后，反应液倒入饱和碳酸氢钠溶液中淬灭，用三氯甲烷和异丙醇混合溶剂(3/1)萃取，有机相浓缩得到粗产品化合物48-5(无色油，1.5克，产率90％)。MS(ESI,m/z):174.1[M+H]+。粗产品直接用于下一步合成。
步骤5
在0摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物48-5(1.5克，8.22毫摩尔，1.0当量)，咪唑(0.88克，12.34毫摩尔，1.5当量)以及20毫升二氯甲烷，随后向其中缓慢加入叔丁基二苯基氯硅烷(3.09克，10.69毫摩尔，1.3当量)，所得混合物在25摄氏度反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液倒入饱和碳酸氢钠溶液中淬灭，用二氯甲烷(20毫升x3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到粗产品。粗产品通过硅胶柱层析法纯化，用0％→5％的甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物48-5(白色固体，3克，产率84％)。MS(ESI,m/z):412.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.64–7.61(m,4H),7.46–7.37(m,6H),5.33-5.18(m,1H),4.18–4.09(m,1H),3.57(d,J＝10.0Hz,1H),3.43(d,J＝10.0Hz,1H),3.15–3.02(m,1H),2.76–2.67(m,1H),2.42–2.12(m,3H),2.04–1.92(m,2H),1.05(s,9H)。
步骤6
在零下78摄氏度氮气保护搅拌条件下，将化合物48-6(2.6克，6.32毫摩尔，1.0当量)溶于30毫升四氢呋喃中，向其中缓慢滴加二异丙基氨基锂的四氢呋喃溶液(1摩尔每升，8.2毫升，8.20毫摩尔，1.3当量)，混合物在零下78摄氏度反应30分钟后，向上述体系中缓慢滴加48-3(1.46克，8.20毫摩尔，1.3当量)的无水四氢呋喃(2毫升)溶液，加完缓慢升至室温，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液倒入饱和氯化铵溶液中淬灭，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到粗产品。粗产品通过硅胶柱层析法纯化，用0％→30％的乙酸乙酯/石油醚流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物48-7(白色固体，1.9克，产率55％)。MS(ESI,m/z):510.2[M+H]+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.65–7.61(m,4H),7.45–7.39(m,6H),5.87–5.69(m,1H),5.36–5.18(m,1H),5.10–4.93(m,2H),4.25–4.07(m,1H),3.52–3.39(m,5H),3.19–3.01(m,1H),2.97–2.82(m,1H),2.41–2.14(m,5H),2.03–1.87(m,1H),1.77–1.68(m,1H),1.59–1.44(m,2H),1.04(s,9H)。
步骤7
通过超临界液相色谱对本实施例步骤6所得化合物48-7(1.9克)进行异构体分离：手性柱CHIRALPAK IA,3x25厘米,5微米；流动相A：超临界二氧化碳，流动相B：甲醇；流速：50毫升/分钟；柱温：35摄氏度；用15％流动相B洗脱；检测器UV225纳米，得到两个产品。较短保留时间(6.83分钟)的产品为化合物48-7a(无色油，1.4克，回收率80％)，化合物48-7a:MS(ESI,m/z):510.2[M+H]+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.69–7.57(m,4H),7.51–7.32(m,6H),5.86–5.69(m,1H),5.38–5.13(m,1H),5.09–4.89(m,2H),4.24–4.05(m,1H),3.59(d,J＝10.3Hz,1H),3.54–3.38(m,5H),3.22–3.00(m,1H),2.97–2.81(m,1H),2.45–2.11(m,5H),2.05–1.91(m,1H),1.76–1.66(m,1H),1.57–1.43(m,1H),1.04(s,9H)；19F NMR(282MHz,CDCl3)δ-174.00。较长保留时间(10.02分钟)的产品为化合物48-7b(无色油，270毫克，回收率16％)，化合物48-7b:MS(ESI,m/z):510.2[M+H]+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.67–7.56(m,4H),7.48–7.35(m,6H),5.86–5.67(m,1H),5.47–5.21(m,1H),5.10–4.93(m,2H),4.21–4.01(m,1H),3.59–3.53(m,1H),3.52–3.36(m,5H),3.36–3.20(m,1H),2.75–2.63(m,1H),2.58–2.40(m,1H),2.32–2.12(m,3H),2.08–1.89(m,2H),1.81–1.74(m,1H),1.65–1.51(m,1H),1.04(s,9H)；19F NMR(282MHz,CDCl3)δ-170.22。
步骤8
在0摄氏度氮气保护搅拌条件下，将化合物48-7a(600毫克，1.11毫摩尔，1.0当量)溶于6毫升四氢呋喃中，向其中缓慢滴加氢化铝锂的四氢呋喃溶液(1摩尔每升，1.67毫升，1.67毫摩尔，1.5当量)，混合物在60摄氏度反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液降至0摄氏度，向其中依次缓慢加入水(1毫升)、20％的氢氧化钠水溶液(1毫升)和水(3毫升)淬灭，所得混合物过滤，滤液减压浓缩得到粗产品。粗产品通过硅胶柱层析法纯化，用0％→10％的氨甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物48-8a(无色油，210毫克，产率69％)。MS(ESI,m/z):258.2[M+H]+；1HNMR(300MHz,CDCl3)δ5.83–5.66(m,1H),5.27–4.91(m,3H),3.42–3.17(m,7H),3.13–3.03(m,1H),2.99–2.79(m,1H),2.60–2.53(m,1H),2.31–2.08(m,3H),2.06–1.79(m,3H),1.66–1.50(m,3H)。
制备例3化合物46-1
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物40-1(650毫克，1.261毫摩尔，1.0当量)，化合物40-3(525.91毫克，1.387毫摩尔，1.1当量，参照专利WO2021041671A1合成得到)，3-(叔丁基)-4-(2,6-二甲氧基苯基)-2,3-二氢苯并[D][1,3]氧,膦戊轭(87.69毫克，0.252毫摩尔，0.2当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(121.54毫克，0.126毫摩尔，0.1当量)的甲苯/水(5.5毫升/1.1毫升)的混合溶液中分批加入磷酸钾(563.44毫克，2.522毫摩尔，2当量)。混合物在80摄氏度条件下反应4小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液冷却至室温，混合物浓缩得到粗产品。粗产品通过硅胶柱层析法纯化，用0％→20％的乙酸乙酯/石油醚流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压浓缩除去溶剂，得到化合物46-1(白色固体，550毫克，产率64％)。MS(ESI,m/z):643.2/644.2[M+H]+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.74–7.69(m,1H),7.56(d,J＝2.7Hz,1H),7.45–7.41(m,1H),7.32–7.26(m,1H),7.11(d,J＝2.7Hz,1H),5.31(s,2H),4.52–4.41(m,4H),3.71–3.65(m,2H),3.55(s,3H),2.67–2.54(m,1H),2.47–2.33(m,1H),2.06–1.96(m,2H),1.91–1.76(m,2H),1.55(s,9H),0.88–0.83(m,3H)。
实施例1
(2S，4R)-1-((S)-2-(3-(3-((S)-2-((((R或S)-4-(1R，5S)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)丙氧基)丙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺50
合成路线如下：
步骤1：
参照专利WO 2022031678 A1合成得到化合物50-1。
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物40-2(500毫克，0.713毫摩尔，1.00当量)、2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(49.56毫克，0.143毫摩尔，0.2当量)、化合物50-1(308.04毫克，0.856毫摩尔，1.2当量)、磷酸钾(318.43毫克，1.426毫摩尔，2.0当量)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(68.69毫克，0.071毫摩尔，0.1当量)、水(1毫升)和甲苯(5毫升)。所得混合物在80摄氏度氮气保护搅拌条件下反应3小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液过滤，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品，粗产品用硅胶柱层析法纯化，用0％→10％的甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物50-2(黄色固体，483毫克，产率80％)。MS(ESI,m/z):802.4[M+H]+。
步骤2：
通过超临界液相色谱对本实施例步骤1所得化合物50-2(483毫克)进行手性拆分。手性柱：CHIRAL ART Cellulose-SC，3x25厘米，5微米；流动相A：超临界二氧化碳，流动相B：异丙醇/二氯甲烷(1/1，0.1％氨甲醇溶液)；流速：100毫升/分钟；6分钟内用45％流动相B进行洗脱；检测器UV220/240纳米，得到两个化合物。其中较短保留时间(2.55分钟)的为化合物50-2a(白色固体，180毫克，回收率37％)。MS(ESI,m/z):802.5[M+H]+；其中较长保留时间(4.17分钟)的为化合物50-2b(白色固体，193毫克，回收率40％)。MS(ESI,m/z):802.5[M+H]+
步骤3：
在25摄氏度搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物50-2a(155毫克，0.183毫摩尔，1.00当量)、乙腈(1毫升)、四氯化碳(1毫升)和水(1.5毫升)。随后将混合物降至零摄氏度。在零摄氏度搅拌条件下，向反应液中依次加入水合三氯化钌(4.35毫克，0.019毫摩尔，0.1当量)和高碘酸钠(206.69毫克，0.915毫摩尔，5.00当量)。混合物在0摄氏度搅拌条件下反应40分钟。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液倒入冰水(10毫升)中淬灭，所得混合物用三氯甲烷/异丙醇(3/1，20毫升×3)，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。所得粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在20分钟内用0％→30％的乙腈/水流动相(0.1％碳酸氢铵水溶液)进行洗脱；检测器,UV254/220纳米；得到化合物50-3a(白色固体，50.0毫克，产率32％)。MS(ESI,m/z):820.4[M+H]+。
步骤4：
在25摄氏度搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物50-3a(50毫克，0.058毫摩尔，1.00当量)，O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸(30.14毫克，0.075毫摩尔，1.3当量)和N,N-二甲基甲酰胺(1毫升)。混合物在25摄氏度搅拌条件下反应10分钟。在25摄氏度搅拌条件下向反应体系中依次加入N,N-二异丙基乙胺(31.53毫克，0.232毫摩尔，4.01当量)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸(32.53毫克，0.070毫摩尔，1.2当量)。混合物在25摄氏度氮气保护搅拌条件下反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液直接通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在20分钟内用0％→30％的甲醇/水流动相(0.1％碳酸氢铵)进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物50-4a(白色固体，54.0毫克，产率71％)。MS(ESI,m/z):1246.7[M+H]+。
步骤5：
在零摄氏度搅拌条件下，向化合物50-4a(54.00毫克，0.041毫摩尔，1.00当量)的甲醇(2毫升)溶液中滴加盐酸的1,4-二氧六环溶液(4摩尔/升，2毫升)。混合物在25摄氏度搅拌条件下反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过减压旋蒸除去溶剂。所得粗产物在零摄氏度下用饱和碳酸钠水溶液/饱和碳酸氢钠水溶液(1/1，10毫升)调pH至9。所得混合物用三氯甲烷/异丙醇(3/1，20毫升×3)萃取，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。所得粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在20分钟内用0％→30％的甲醇/水流动相(0.1％碳酸氢铵)进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物50(白色固体，16.5毫克，产率35％)。MS(ESI,m/z):1101.6[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.09–9.84(m,1H),9.01–8.94(m,1H),8.41–8.33(m,1H),7.84–7.76(m,1H),7.73–7.61(m,2H),7.46–7.32(m,5H),7.32–7.25(m,1H),7.18–7.07(m,1H),6.98–6.91(m,1H),5.21–5.05(m,1H),5.00–4.84(m,1H),4.57–4.14(m,6H),4.11–3.95(m,1H),3.63–3.45(m,8H),3.44–3.36(m,2H),3.09–2.98(m,1H),2.92–2.72(m,2H),2.47–2.42(m,3H),2.42–2.02(m,6H),2.01–1.74(m,3H),1.75–1.53(m,10H),1.48–1.31(m,3H),0.93–0.79(m,12H)；19F NMR(282MHz,DMSO-d6)δ-118.72,-118.73,-124.22,-124.24。
实施例2
(2S，4R)-1-((2S)-2-(3-(2-((2R，6R，7aS)-7a-(((4-(3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-环丙基-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯烷-2-基)乙氧基)丙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺51
步骤1：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物1-溴-8-碘萘(6.00克,17.119毫摩尔,1当量)，环丙基硼酸(1.55克,17.119毫摩尔,1当量)和磷酸钾(7.65克,34.238毫摩尔,2当量)的甲苯(60毫升)和水(12毫升)的混合溶液中加入[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(1.47克,1.712毫摩尔,0.1当量)。混合物在60摄氏度氮气保护条件下搅拌6小时，反应过程通过薄层层析监控。反应结束后，冷却至室温，向混合物中加入20毫升饱和氯化铵水溶液稀释反应液。混合物用乙酸乙酯(20毫升x3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→10％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱，所得馏分通过减压浓缩除去溶剂，得到化合物51-1(淡黄色固体，2.4克，产率53％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.93–7.87(m,1H),7.84–7.78(m,1H),7.74–7.69(m,1H),7.52–7.47(m,1H),7.43–7.36(m,1H),7.28–7.22(m,1H),3.08–2.94(m,1H),1.18–1.08(m,2H),0.93–0.84(m,2H)。
步骤2：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物51-1(1.5克,5.776毫摩尔,1当量)的庚烷(20毫升)溶液中依次加入联硼酸频那醇酯(1.34克,7.496毫摩尔,1.3当量)，4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶(330毫克,1.153毫摩尔,0.2当量)和(1,5-环辛二烯)氯化铱(I)二聚体(410毫克,0.577毫摩尔,0.1当量)。混合物在80摄氏度下搅拌2小时，反应过程通过薄层层析监控。反应结束后，减压浓缩除去溶剂得到混合物。将所得混合物溶于四氢呋喃(10毫升)，在0摄氏度搅拌条件下，向混合物中缓慢依次滴加水(5毫升)，醋酸(30毫升)和双氧水(30％，15毫升)。混合物在0摄氏度下搅拌30分钟，反应过程通过薄层层析监控。反应结束后，在0摄氏度搅拌条件下，向反应液中缓慢加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH至8。混合物用乙酸乙酯(100毫升x3)萃取，合并有机相。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→20％甲基叔丁基醚/石油醚梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物51-2(黄色油状液体，700毫克，产率44％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.05(s,1H),7.65–7.58(m,1H),7.50(d,J＝2.6Hz,1H),7.33–7.27(m,1H),7.24–7.17(m,2H),2.83(m,1H),1.08–1.01(m,2H),0.83–0.77(m,2H)。
步骤3：
在0摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物51-2(650毫克,2.347毫摩尔,1当量)的二氯甲烷(10毫升)溶液中缓慢加入N,N-二异丙基乙胺(860.56微升,4.694毫摩尔,2当量)和氯甲基甲醚(298.32毫克,3.521毫摩尔,1.5当量)。混合物在25摄氏度搅拌2小时，反应过程通过液质和薄层层析监控。反应结束后，混合物减压浓缩得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→12％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物51-3(黄色油，660毫克，产率88％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.68(d,J＝2.6Hz,1H),7.63–7.57(m,1H),7.38(d,J＝2.6Hz,1H),7.36–7.31(m,2H),5.28(s,2H),3.53(s,3H),2.99–2.90(m,1H),1.16–1.07(m,2H),0.94–0.83(m,2H)。
步骤4：
在-78摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物51-3(300毫克,0.928毫摩尔,1当量)的无水四氢呋喃(4毫升)溶液中缓慢滴加正丁基锂的正己烷溶液(2.5摩尔/升，0.59毫升,1.485毫摩尔,1.6当量)。混合物在-78摄氏度氮气保护搅拌条件下反应1小时后，在相同温度下向上述反应液中缓慢滴加异丙醇频哪醇硼酸酯(327.07毫克,1.670毫摩尔,1.8当量)的无水四氢呋喃(1毫升)溶液。混合物在-78摄氏度继续搅拌1小时后恢复至室温，并在室温条件下搅拌30分钟，反应过程通过液质和薄层层析监控。反应结束后，在0摄氏度下，加入50毫升饱和氯化铵水溶液淬灭反应。混合物用乙酸乙酯(60毫升x3)萃取，合并有机相。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→12％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂得到化合物51-4(无色油状液体，290毫克，产率79％)。MS(ESI,m/z)：355.1[M+H]+；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.61–7.56(m,1H),7.44–7.39(m,2H),7.35–7.29(m,1H),7.23–7.19(m,1H),5.29(s,2H),3.51(s,3H),2.72–2.57(m,1H),1.40(s,12H),1.05–0.97(m,2H),0.69–0.59(m,2H)。
步骤5：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物38-6(160毫克，0.355毫摩尔，1.00当量)、48-8a(105.7毫克，0.391毫摩尔，1.1当量)、N,N-二异丙基乙胺(195.22微升，1.065毫摩尔，3.0当量)和1,4-二氧六环溶液(1.8毫升)。反应液升温至100摄氏度，并在此温度下反应24小时，反应过程通过液质监控。反应结束后，混合物冷却至25摄氏度，减压浓缩得到粗产品，所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→8％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物51-5(黄色固体，122.3毫克，产率50％)。MS(ESI,m/z):649.3/650.3/651.3[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.72(s,1H),5.89–5.73(m,1H),5.48–5.18(m,1H),5.18–4.95(m,2H),4.60–4.00(m,6H),3.80–3.55(m,2H),3.50–3.32(m,5H),3.30–2.96(m,2H),2.80–2.66(m,1H),2.48–2.23(m,5H),2.02–1.89(m,2H),1.76–1.65(m,6H),1.52(s,9H)。
步骤6：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物51-5(150毫克，0.220毫摩尔，1.00当量)和化合物51-4(163.71毫克，0.439毫摩尔，2.0当量)的水(0.5毫升)和1,4-二氧六环(2.5毫升)溶液中依次加入三环己基膦四氟硼酸盐(34.03毫克，0.088毫摩尔，0.4当量)和醋酸钯(10.38毫克，0.044毫摩尔，0.2当量)、碳酸铯(188.21毫克，0.549毫摩尔，2.5当量)，所得混合物在120摄氏度反应16小时，反应过程通过液质监控。反应结束后，混合物冷却至25摄氏度，减压浓缩后粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→5％氨甲醇(7摩尔/升)/二氯甲烷梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物51-6(白色固体，45毫克，产率23％)。MS(ESI,m/z):841.15[M+H]+。
步骤7：
在0摄氏度搅拌条件下，向化合物51-6(45毫克，0.051毫摩尔，1.00当量)的乙腈(0.2毫升)、水(0.3毫升)和四氯化碳(0.2毫升)的混合溶液中依次加入三氯化钌一水合物(1.2毫克，0.005毫摩尔，0.1当量)和高碘酸钠(57.2毫克，0.255毫摩尔，5当量)，所得混合物在0摄氏度反应1小时，反应过程通过液质监控。反应结束后，在0摄氏度下加入10毫升水稀释反应，混合物用氯仿/异丙醇(3/1，10毫升x3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到粗产品。所得粗产品通过反相色谱(C18柱)进行纯化，流动相A：水(0.1％碳酸氢铵)；流动相B:甲醇，在25分钟内用5％→95％的B相进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物51-7(白色固体，28毫克，产率60％)。MS(ESI,m/z):859.9/860.9[M+H]+。
步骤8：
在室温搅拌条件下，向化合物51-7(28毫克，0.032毫摩尔，1.00当量)的N,N-二甲基甲酰胺(1毫升)溶液中加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(16.11毫克，0.040毫摩尔，1.3当量)。混合物在25摄氏度下搅拌反应10分钟后，向反应液中依次加入(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(40.11毫克，0.037毫摩尔，1.2当量)和N,N-二异丙基乙胺(16.85毫克，0.124毫摩尔，4当量)。混合物在25摄氏度下继续搅拌反应1小时，反应过程通过液质来监控。反应完全后，所得粗产品通过反相色谱(C18柱)进行纯化，流动相A：水(0.1％碳酸氢铵)；流动相B:甲醇，在25分钟内用10％→95％的B相进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物51-8(白色固体，30毫克，产率71％)。MS(ESI,m/z):1286.0/1287.7[M+H]+。
步骤9：
在0摄氏度搅拌条件下，向化合物51-8(20毫克，0.015毫摩尔，1.00当量)的甲醇(2毫升)溶液中滴加盐酸的1,4-二氧六环溶液(4摩尔/升，2毫升)。混合物在室温下反应2小时，反应过程通过液质来监控。反应结束后，反应液浓缩得到粗产品。所得粗产品通过反相色谱(C18柱)进行纯化，流动相A：水(0.1％碳酸氢铵)；流动相B:甲醇，在30分钟内用70％→95％的B相进行洗脱；检测器UV254/220纳米。得到化合物51(白色固体，15毫克，产率87％)。MS(ESI,m/z):1140.5/1141.5/1142.5[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.02(s,1H),8.90–8.83(m,1H),7.66–7.58(m,1H),7.45–7.35(m,4H),7.34–7.26(m,2H),7.20–7.15(m,1H),7.10–7.03(m,1H),5.45–5.22(m,1H),5.03–4.95(m,1H),4.72–4.48(m,5H),4.42–4.37(m,1H),4.37–4.20(m,2H),3.89–3.80(m,1H),3.80–3.60(m,8H),3.59–3.41(m,3H),3.41–3.34(m,1H),3.28–3.11(m,2H),2.83–2.70(m,1H),2.63–2.51(m,1H),2.48–2.12(m,9H),1.98–1.62(m,9H),1.60–1.44(m,4H),1.35–1.26(m,1H),1.07–0.95(m,9H),0.58–0.49(m,1H),0.42–0.31(m,1H),0.29–0.18(m,1H),0.11–0.02(m,1H)；19F NMR(377MHz,CD3OD)δ-138.11,-138.18,-172.99。
实施例3
(2S，4R)-1-((2S)-2-(2-(((2S，6R，7aS)-7a-((((7S或7R)-4-(3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯啉-2-基)甲氧基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺52
合成路线如下所示：
/>
步骤1：
在0摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物(2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-甲醇(30克，179.0毫摩尔，1.0当量)，咪唑(15.4克，214.8毫摩尔，1.2当量)以及300毫升二氯甲烷，随后向其中缓慢加入叔丁基二苯基氯硅烷(67.3克，232.6毫摩尔，1.3当量)，所得混合物在25摄氏度氮气保护搅拌条件下反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液倒入饱和碳酸氢钠溶液中淬灭，用二氯甲烷(300毫升×3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到粗产品。粗产品通过硅胶柱层析法纯化，用0％→10％的甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物52-1(无色油，63克，产率84％)。MS(ESI,m/z):398.2[M+H]+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.77–7.64(m,4H),7.50–7.35(m,6H),5.35–5.09(m,1H),3.49(d,J＝9.6Hz,1H),3.38(d,J＝9.6Hz,1H),3.27–2.99(m,3H),2.98–2.83(m,1H),2.26–2.14(m,1H),2.13–1.94(m,2H),1.95–1.63(m,3H),1.09(s,9H)。
步骤2：
在0摄氏度搅拌条件下，向化合物52-1(39克，93.2毫摩尔，1.0当量)的四氯化碳(400毫升)溶液中，加入三氯化钌水合物(4.42克，18.6毫摩尔，0.2当量)的水(400毫升)的溶液和高碘化钠(104.9克，465.9毫摩尔，5.0当量)。混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液冷却到室温，用水(500毫升)淬灭反应，所得混合物用二氯甲烷(500毫升×3)萃取，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂，得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→60％石油醚/甲基叔丁基醚梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂得到化合物48-6(白色固体，19克，产率47％)。MS(ESI,m/z):412.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.66–7.59(m,4H),7.48–7.37(m,6H),5.38–5.15(m,1H),4.21–4.08(m,1H),3.63–3.53(m,1H),3.49–3.39(m,1H),3.17–3.00(m,1H),2.79–2.66(m,1H),2.44–2.34(m,1H),2.33–2.21(m,1H),2.21–2.10(m,1H),2.05–1.92(m,2H),1.04(s,9H)。
步骤3：
在零下78摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物48-6(16克，36.930毫摩尔，1.0当量)的无水四氢呋喃(150毫升)和六甲基磷酰三胺(25毫升)溶液中滴加二异丙基氨基锂的四氢呋喃溶液(46.5毫升，1摩尔/升，1.5当量)，所得混合物在零下78摄氏度氮气保护搅拌条件下反应30分钟。在-78摄氏度氮气保护搅拌条件下向反应体系中加入多聚甲醛(3.5克，73.860毫摩尔，2.0当量)，随后将混合物缓慢升至25摄氏度。混合物在25摄氏度氮气保护搅拌条件下反应2.5小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，在零摄氏度下向反应液中缓慢加入饱和氯化铵水溶液(500毫升)淬灭反应，混合物用乙酸乙酯(500毫升×3)萃取，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂，得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→100％石油醚/甲基叔丁基醚梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂得到化合物52-2(黄色油，5.5克，产率32％)。MS(ESI,m/z):442.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.64–7.61(m,4H),7.47–7.38(m,6H),5.33–5.18(m,1H),4.21–4.12(m,1H),3.82–3.78(m,1H),3.68–3.62(m,1H),3.59(d,J＝10.4Hz,1H),3.44(d,J＝10.4Hz,1H),3.14–2.97(m,2H),2.33–2.16(m,2H),2.06–1.94(m,1H),1.84–1.80(m,1H),1.05(s,9H)。
步骤4：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向250毫升三口瓶中依次加入化合物52-2(2.8克，6.02毫摩尔，1.0当量)、烯丙基溴(0.92克，7.22毫摩尔，1.2当量)和N,N-二甲基甲酰胺(39毫升)。随后将反应体系降至零摄氏度。在零摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应体系中分批加入氢化钠(60％，0.28克，7.22毫摩尔，1.2当量)，所得混合物缓慢升至25摄氏度，再在25摄氏度氮气保护搅拌条件下反应2小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液降至零摄氏度，在零摄氏度搅拌条件下向反应液中加入饱和氯化铵水溶液(500毫升)淬灭反应。混合物用乙酸乙酯(500毫升×3)萃取，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂，得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→40％石油醚/甲基叔丁基醚梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂得到化合物52-3(黄色油，1.57克，产率51％)。MS(ESI,m/z):482.2[M+H]+；1HNMR(300MHz,CDCl3)δ7.73–7.57(m,4H),7.55–7.35(m,6H),6.02–5.74(m,1H),5.47–5.08(m,3H),4.24–4.09(m,1H),4.06–3.95(m,2H),3.86–3.75(m,1H),3.64–3.40(m,3H),3.25–3.00(m,2H),2.43–2.20(m,2H),2.12–1.90(m,2H),1.07(s,9H)。
步骤5：
在零摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物52-3(1.5克，3.1毫摩尔，1.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺(15毫升)溶液中分批加入四氢铝锂(0.18克，4.67毫摩尔，1.5当量)。所得混合物在60摄氏度氮气保护搅拌条件下反应2小时。反应过程通过和薄层层析来监控。反应结束后，向反应液中加入冰水(0.2毫升)淬灭反应，再加入20％的NaOH溶液0.2毫升，最后加入0.6毫升水，搅拌15分钟后，过滤除去不溶物，用四氢呋喃/甲醇(10/1)混合溶液洗涤滤饼(10毫升x3)，合并后滤液通过减压旋蒸除去溶剂，得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→10％二氯甲烷/氨甲醇梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂得到化合物52-4(无色油，0.53克，产率75％)。MS(ESI,m/z):230.2[M+H]+。
步骤6：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入三乙烯二胺(39毫克，0.33毫摩尔，0.2当量)、化合物46-1(1230毫克，1.80毫摩尔，1.1当量)、碳酸铯(1130毫克，3.3毫摩尔，2.0当量)、化合物52-4(400毫克，1.816毫摩尔，1.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)。所得混合物在80摄氏度氮气保护搅拌条件下，反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在25分钟内用5％→95％的甲醇/水流动相(0.1％碳酸氢铵水溶液)进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物52-5(类白色固体，760毫克，产率51％)。MS(ESI,m/z):836.3[M+H]+。
步骤7：
通过高效液相色谱法对本实施例步骤6所得化合物52-5(460毫克)进行手性拆分：手性柱CHIRAL ART Cellulose-SC，2×25厘米，5微米；流动相A：正己烷(0.5％，2摩尔/升氨甲醇)，流动相B：乙醇；流速：20毫升/分钟；在12分钟内用20％的B相进行洗脱，检测器UV205/226纳米，得到两个产品。较短保留时间(6.0分钟)的产品为化合物52-5a(类白色固体，170毫克，回收率37％)，MS(ESI,m/z):836.4[M+H]+；较长保留时间(8.7分钟)的产品为化合物52-5b(类白色固体，178毫克，回收率39％)，MS(ESI,m/z):836.4[M+H]+。
步骤8：
在25摄氏度搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物52-5a(70毫克，0.08毫摩尔，1.0当量)、四氯化碳(0.4毫升)和乙腈(0.4毫升)。所得混合物降至零摄氏度。在零摄氏度搅拌条件下，向反应瓶中依次加入三氯化钌水合物(1.89毫克，0.008毫摩尔，0.当量)的水(0.9毫升)溶液和高碘化钠(89.55毫克，0.4毫摩尔，5.0当量)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液冷却至零摄氏度，加入冰水(20毫升)淬灭反应，混合物用三氯甲烷/异丙醇(3/1，20毫升×3)萃取，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂，得到粗产品。粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在25分钟内用5％→95％的甲醇/水流动相(0.1％碳酸氢铵水溶液)进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物52-6a(白色固体，50毫克，产率69％)。MS(ESI,m/z):854.2[M+H]+。
步骤9：
在25摄氏度搅拌条件下，向反应瓶中依次加入52-6a(50毫克，0.056毫摩尔，1.0当量)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(28.94毫克，0.073毫摩尔，1.3当量)和N,N-二甲基甲酰胺(1毫升)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应15分钟。再在25摄氏度搅拌条件下向反应液中加入(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸(31.24毫克，0.067毫摩尔，1.2当量)和N,N-二异丙基乙胺(30.27毫克，0.0224毫摩尔，4当量)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在25分钟内用5％→95％的甲醇/水流动相(0.1％碳酸氢铵水溶液)进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物52-7a(白色固体，50毫克，产率66％)。MS(ESI,m/z):1280.5[M+H]+。
步骤10：
在零摄氏度搅拌条件下，向化合物52-7a(42毫克，0.03毫摩尔，1.0当量)的甲醇(2毫升)溶液中滴加盐酸的1,4-二氧六环溶液(4摩尔/升，2毫升)。混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过减压旋蒸除去溶剂。所得残渣在零摄氏度下用饱和碳酸钠水溶液/饱和碳酸氢钠水溶液(1/1，10毫升)调pH至9。所得混合物用三氯甲烷/异丙醇(3/1，20毫升×3)萃取，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在20分钟内用5％→95％的甲醇/水流动相(0.1％盐酸)进行洗脱；检测器，UV254/220纳米；得到化合物52(白色固体，24.8毫克，产率95％)。MS(ESI,m/z):1135.5[M+H]+；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.94–8.82(m,1H),7.74–7.56(m,2H),7.47–7.33(m,4H),7.30–7.16(m,2H),7.03–6.91(m,1H),5.43–5.23(m,1H),5.03–4.94(m,2H),4.92–4.89(m,1H),4.68–4.39(m,5H),4.35–4.20(m,2H),4.06–3.90(m,2H),3.88–3.77(m,1H),3.76–3.56(m,7H),3.46–3.32(m,2H),3.27–3.08(m,2H),2.95–2.84(m,1H),2.80–2.66(m,1H),2.63–2.49(m,1H),2.47–2.15(m,8H),2.00–1.80(m,6H),1.60–1.53(m,1H),1.51–1.43(m,3H),1.30–1.27(m,1H),1.09–0.98(m,9H),0.92–0.84(m,1H),0.84–0.74(m,3H)；19F NMR(377MHz,CD3OD)δ-118.60,-118.61,-121.09,-124.14,-124.15,-172.75。
实施例4
(3R)-1-(2-((2S，6R，7aS)-7a-((((7S或7R)-4-(3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯啉-2-基)乙基)-N-((S)-1-(2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)哌啶-3-甲酰胺53
合成路线如下所示：
/>
步骤1：
在25摄氏度搅拌条件下，向反应瓶中依次加入N-叔丁氧羰基-(R)-3-甲酸哌啶(371.31毫克，1.538毫摩尔，1.200当量)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(769.72毫克，1.923毫摩尔，1.50当量)和N,N-二甲基甲酰胺(1毫升)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应15分钟。再在25摄氏度搅拌条件下向反应液中加入(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸(600毫克，1.282毫摩尔，1.00当量)和N,N-二异丙基乙胺(697.71毫升，5.128毫摩尔，5.0当量)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在25分钟内用5％→95％的甲醇/水流动相(0.1％碳酸氢铵水溶液)进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物53-1(白色固体，720毫克，产率81％)。MS(ESI,m/z):656.2[M+H]+。
步骤2：
在零摄氏度搅拌条件下，向化合物53-1(200毫克，0.29毫摩尔，1.00当量)的甲醇(2毫升)溶液中滴加盐酸的1,4-二氧六环溶液(2毫升，4摩尔/升)。混合物在25摄氏度搅拌条件下反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液浓缩得到粗产品。所得粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在20分钟内用0％→30％的乙腈/水流动相(0.1％盐酸)进行洗脱；检测器,UV254/220纳米；得到化合物53-2(黄色固体，180毫克，产率99％)。MS(ESI,m/z):556.3[M+H]+。
步骤3：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向100毫升三口瓶中依次加入48-6(3.0克，6.924毫摩尔，1.00当量)、无水四氢呋喃(30毫升)和六甲基磷酰三胺(6毫升)。在-78摄氏度氮气保护搅拌条件下向反应液中滴加二异丙基氨基锂的四氢呋喃溶液(1摩尔每升，8.3毫升，8.3毫摩尔，1.2当量)。混合物在零下78摄氏度氮气保护搅拌条件下反应0.5小时。随后，在零下78摄氏度氮气保护搅拌条件下向反应液中滴加烯丙基溴(1.06克，8.309毫摩尔，1.2当量)。混合物缓慢升至25摄氏度，并且在25摄氏度氮气保护搅拌条件下反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液缓慢倒入饱和氯化铵溶液(100毫升)中淬灭反应，所得混合物用乙酸乙酯(100毫升×3)萃取。合并有机相，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品，粗产品用硅胶柱层析法纯化，用0％→50％的甲基叔丁基醚/石油醚流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物53-3(无色油，1.09克，产率33％)。MS(ESI,m/z):452.4[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.71–7.59(m,4H),7.50–7.36(m,6H),5.77–5.62(m,1H),5.47–5.31(m,1H),5.00–4.88(m,2H),4.21–4.03(m,1H),3.59–3.51(m,1H),3.42–3.24(m,2H),2.75–2.64(m,1H),2.60–2.43(m,2H),2.18–2.06(m,2H),1.97–1.80(m,1H),1.76–1.70(m,1H),1.04(s,9H)。
步骤4：
在零摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物53-3(600毫克，1.262毫摩尔，1.00当量)的无水四氢呋喃(6毫升)溶液中滴加四氢铝锂的四氢呋喃溶液(1摩尔/升，1.9毫升，1.9毫摩尔，1.5当量)。混合物在60摄氏度氮气保护搅拌条件下反应2小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液冷却至零摄氏度，向反应液中依次加入水(1毫升)，氢氧化钠水溶液(15％，1毫升)，水(3毫升)，加完搅拌15分钟，过滤除去不溶物，滤饼用四氢呋喃/甲醇(3/1，10毫升)清洗。合并后滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。所得粗产品用硅胶柱层析法纯化，用0％→10％的甲醇(1摩尔/升氨甲醇溶液)/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物53-4(无色油，200毫克，产率75％)。MS(ESI,m/z):200.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.84–5.66(m,1H),5.35–5.13(m,1H),5.11–4.88(m,2H),3.40–3.13(m,4H),3.08–2.89(m,1H),2.69–2.60(m,1H),2.34–2.19(m,2H),2.18–2.08(m,3H),2.08–1.97(m,1H),1.98–1.88(m,1H),1.68–1.55(m,1H)。
步骤5：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入53-4(200毫克，0.952毫摩尔，1.00当量)、化合物46-1(645.42毫克，0.952毫摩尔，1.00当量)、碳酸铯(654.04毫克，1.904毫摩尔，2.00当量)、三乙烯二胺(11.24毫克，0.096毫摩尔，0.10当量)和N,N-二甲基甲酰胺(6毫升)。混合物在80摄氏度氮气保护搅拌条件下反应2小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液倒入冰水(60毫升)中淬灭，所得混合物用乙酸乙酯(60毫升×3)萃取。合并有机相，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品，粗产品用硅胶柱层析法纯化，用0％→10％的甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物53-5(白色固体，460.0毫克，产率56％)。MS(ESI,m/z):806.3[M+H]+。
步骤6：
通过超临界液相色谱法对本实施例步骤5所得化合物53-5(460毫克)进行手性拆分：手性柱NB_CHIRALPAK AD,3x25厘米,5微米；流动相A：超临界二氧化碳，流动相B：异丙醇(0.1％2摩尔/升氨甲醇)；流速：100毫升/分钟；用50％流动相B洗脱；检测器UV220/206纳米，得到两个产品。较短保留时间(1.68分钟)的产品为化合物53-5a(白色固体，200毫克，回收率45％)，MS(ESI,m/z):806.4[M+H]+；较长保留时间(3.63分钟)的产品为化合物53-5b(白色固体，220毫克，回收率48％)，MS(ESI,m/z):806.4[M+H]+。
步骤7：
在零摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物53-5a(200毫克，0.236毫摩尔，1.00当量)、二水合锇酸钾(9.14毫克，0.024毫摩尔，0.1当量)、碳酸钾(102.89毫克，0.708毫摩尔，3.00当量)、甲基磺酰胺(23.61毫克，0.236毫摩尔，1.0当量)、铁氰化钾(186.34毫克，0.5664毫摩尔，2.4当量)、三乙烯二胺(5.57毫克，0.047毫摩尔，0.20当量)，水(2毫升)、叔丁醇(4毫升)和乙二醇二甲醚(1毫升)。混合物在零摄氏度氮气保护搅拌条件下反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液倒入饱和硫代硫酸钠水溶液(30毫升)中淬灭反应。混合物用二氯甲烷(30毫升×3)萃取，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂粗产品，粗产品用硅胶柱层析法纯化，用0％→10％的甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物53-6a(白色固体，200.0毫克，产率95％)。MS(ESI,m/z):840.4[M+H]+。
步骤8：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物53-6a(100毫克，0.114毫摩尔，1.00当量)、乙腈(2毫升)和水(0.5毫升)。随后将反应液降至零摄氏度，在零摄氏度氮气保护搅拌条件下向反应液中分批加入高碘酸钠(127.32毫克，0.570毫摩尔，5.00当量)。混合物在25摄氏度氮气保护搅拌条件下反应2小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，过滤反应液，滤液加水(10毫升)稀释，混合物用三氯甲烷/异丙醇(3/1，10毫升×3)萃取，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品，粗产品用硅胶柱层析法纯化，用0％→10％的甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物53-7a(白色固体，90.0毫克，产率93％)。MS(ESI,m/z):808.2[M+H]+。
步骤9：
在25摄氏度搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物53-2(36.78毫克，0.062毫摩尔，1.20当量)、无水乙酸钠(13.57毫克，0.156毫摩尔，3.00当量)和甲醇(0.5毫升)。混合物在25摄氏度搅拌条件下反应10分钟。随后在25摄氏度搅拌条件下向反应瓶中加入乙酸(6.62毫克，0.104毫摩尔，2.00当量)和氰基硼氢化钠(6.93毫克，0.104毫摩尔，2.00当量)，随后缓慢滴加化合物53-7a(44.00毫克，0.052毫摩尔，1.0当量)的甲醇(0.5毫升)溶液。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液浓缩得到粗产品，所得粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在30分钟内用70％→90％的甲醇/水流动相(0.1％碳酸氢铵)进行洗脱；检测器,UV254/220纳米；得到化合物53-8a(白色固体，45.00毫克，产率60％)。MS(ESI,m/z):1347.7/1348.7/1349.7[M+H]+。
步骤10：
在零摄氏度搅拌条件下，向化合物53-8a(45.00毫克，0.032毫摩尔，1.00当量)甲醇(2毫升)溶液中缓慢加入盐酸的1,4-二氧六环溶液(4摩尔/升，2毫升)。混合物在25摄氏度搅拌条件下反应2小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品，所得粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在20分钟内用0％→30％的乙腈/水流动相(0.1％碳酸氢铵)进行洗脱；检测器,UV254/220纳米；得到化合物53(白色固体，15.8毫克，产率48％)。MS(ESI,m/z):1203.5/1204.4[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.97(s,1H),8.39(d,J＝7.8Hz,1H),8.21(s,1H),7.84–7.73(m,1H),7.67(d,J＝10.2Hz,1H),7.49–7.29(m,6H),7.01(d,J＝2.6Hz,1H),5.40–5.21(m,1H),4.95–4.81(m,1H),4.53–4.36(m,2H),4.35–4.17(m,3H),4.09(d,J＝10.3Hz,1H),3.97(d,J＝10.3Hz,1H),3.66–3.57(m,6H),3.29–3.17(m,1H),3.12–2.98(m,2H),2.96–2.88(m,1H),2.49–2.40(m,6H),2.40–1.88(m,11H),1.84–1.75(m,1H),1.74–1.64(m,4H),1.64–1.41(m,8H),1.36(d,J＝6.9Hz,3H),0.93(s,9H),0.81–0.64(m,3H)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-118.39,-119.08,-123.79,-171.34。
实施例5
(3S)-1-(2-((2S，6R，7aS)-7a-((((7S或7R)-4-(3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯啉-2-基)乙基)-N-((S)-1-(2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲酰)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)哌啶-3-甲酰胺54
参照实施例53相同方法，用N-叔丁氧羰基-(S)-3-甲酸哌啶替换N-叔丁氧羰基-(R)-3-甲酸哌啶，合成得到化合物54(白色固体，19.30毫克，产率39％)。MS(ESI,m/z):1203.6/1204.6[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.01(s,1H),8.98(s,1H),8.41(d,J＝7.7Hz,1H),8.36–8.20(m,1H),7.85–7.72(m,1H),7.72–7.64(m,1H),7.49–7.28(m,6H),7.01(d,J＝2.6Hz,1H),5.39–5.19(m,1H),5.10(s,1H),4.94–4.87(m,1H),4.49–4.37(m,2H),4.37–4.20(m,3H),4.08(d,J＝10.2Hz,1H),3.96(d,J＝10.3Hz,1H),3.64–3.46(m,6H),3.25–3.18(m,1H),3.12–2.97(m,2H),2.97–2.86(m,1H),2.45(s,5H),2.39–1.92(m,11H),1.82–1.73(m,1H),1.72–1.31(m,15H),0.92(s,9H),0.78–0.71(m,3H)；19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-118.59,-119.20,-123.88,-171.42.
实施例6
(3S或3R)-3-((4-(4-((2R，6R，7aS)-7a-((((7S或7R)-4-(3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯啉-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮单甲酸盐55a；(3R或3S)-3-((4-(4-((2R，6R，7aS)-7a-((((7S或7R)-4-(3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯啉-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮双甲酸盐55b
步骤1
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，将化合物4-(4-叔丁氧羰基-哌嗪-1-基)-3-氟苯胺(2克，6.433毫摩尔，1.0当量)、3-溴哌啶-2,6-二酮(2.60克，12.866毫摩尔，2.0当量)和碳酸氢钠(3.41克，38.598毫摩尔，6.0当量)溶于10毫升N,N-二甲基甲酰胺中，混合物在85摄氏度反应条件下2小时，反应过程通过薄层层析和液质来监控。反应结束后，反应液冷却至室温，倒入冰水(100毫升)，乙酸乙酯(100毫升x3)萃取，合并有机相后干燥，过滤除去干燥剂，滤液浓缩得到粗产品，粗产品通过硅胶柱层析法纯化，用0％→50％的乙酸乙酯/石油醚流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物55-1(绿色固体，900毫克，产率35％)。MS(ESI,m/z):407.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.06(s,1H),7.26(s,1H),6.95–6.76(m,1H),6.50–6.32(m,2H),4.63(s,1H),4.06–3.89(m,1H),3.67–3.45(m,4H),2.97–2.87(m,4H),2.82–2.68(m,1H),2.64–2.47(m,1H),1.98–1.82(m,1H),1.48(s,9H)。
步骤2
通过超临界液相色谱对本实施例步骤1所得化合物55-1(1克)进行异构体分离：手性柱CHIRALPAK IH,3x25厘米,5微米；流动相A：超临界二氧化碳，流动相B：乙醇；流速：70毫升/分钟；柱温：35摄氏度；用40％流动相B洗脱；检测器UV216纳米，得到两个产品。较短保留时间(3.60分钟)的产品为化合物55-1a(绿色固体，440毫克，回收率42％)，化合物55-1a:MS(ESI,m/z):407.2[M+H]+；较长保留时间(4.58分钟)的产品为化合物55-1b(绿色固体，480毫克，回收率45％)，化合物55-1b:MS(ESI,m/z):407.2[M+H]+。
步骤3
在0摄氏度搅拌条件下，将化合物55-1a(100毫克，0.234毫摩尔，1.0当量)溶于3毫升二氯甲烷中，缓慢滴加1毫升三氟乙酸，混合物在25摄氏度反应1小时，反应过程通过液质来监控。反应结束后，反应液浓缩得到粗产品化合物55-2a(绿色油，120毫克)，MS(ESI,m/z):407.2[M+H]+。
步骤4
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物52-5a(90毫克，0.102毫摩尔，1.0当量)，1,3-二甲基巴比妥酸(33.62毫克，0.204毫摩尔，2当量)，四(三苯基膦)钯(12.44毫克，0.01毫摩尔，0.05当量)和二氯甲烷(0.5毫升)，所得混合物在25摄氏度反应48小时，反应过程通过液质和薄色谱层层析监控。反应结束后减压浓缩除去多余的溶剂得到粗产品。粗产品通过硅胶柱层析法纯化，用0％→8％的氨甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物55-3a(黄色固体，83毫克，产率99％)。MS(ESI,m/z):796.3[M+H]+。
步骤5
在零下78摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中加入二甲基亚砜(35.34毫克，0.427毫摩尔，4.5当量)和1毫升二氯甲烷，随后向其中缓慢滴加草酰氯(38.27毫克，0.285毫摩尔，3当量)，所得混合物在零下78摄氏度反应30分钟，然后将化合物55-3a(80毫克，0.095毫摩尔，1.0当量)溶于0.5毫升二氯甲烷滴加至上述体系中，所得混合物在零下78摄氏度反应1小时，然后在该温度下加入三乙胺(61.03毫克，0.57毫摩尔，6.0当量)，混合物在零下78摄氏度反应20分钟，自然升温至25摄氏度反应1小时，反应过程通过液质来监控。反应结束后，反应液倒入水(10毫升)中淬灭，用三氯甲烷和异丙醇混合溶剂萃取(20毫升x3)，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到粗产品化合物55-4a(黄色油，40毫克，产率50％)。MS(ESI,m/z):794.3[M+H]+。
步骤6
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，化合物55-2a(15.44毫克，0.05毫摩尔，2.0当量)和氰基硼氢化钠(3.17毫克，0.05毫摩尔，2.0当量)溶于1毫升甲醇中，然后加入化合物55-4a(20毫克，0.025毫摩尔，1.0当量)。混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1小时，反应过程通过液质监控。反应结束后，反应液浓缩得到粗产品，粗产品通过高压制备进行纯化，流动相A：水(0.1％三氟乙酸)，流动相B:乙腈；流速：100毫升/分钟；用40％-65％流动相B洗脱30分钟；检测器UV254/220纳米；得到化合物55-5a(白色固体，20毫克，产率73％)。MS(ESI,m/z):1084.5[M+H]+。
步骤7
在0摄氏度搅拌条件下，将化合物55-5a(20毫克，0.018毫摩尔，1.00当量)和三乙基硅烷(10.72毫克，0.090毫摩尔，1.00当量)溶于二氯甲烷(3毫升)，然后滴加三氟乙酸(1毫升)。混合物在室温下反应1小时，反应过程通过液质来监控。反应结束后，反应液浓缩得到粗产品。所得粗产品通过反相色谱(C18柱)进行纯化，流动相A：水(0.1％甲酸)；流动相B:甲醇，在30分钟内用15％→45％的B相进行洗脱；检测器UV254/220纳米。得到化合物55a(白色固体，5.5毫克，产率30％)。MS(ESI,m/z):940.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.77(s,1H),10.00(s,1H),8.21(s,1H),7.80–7.67(m,2H),7.38–7.33(m,2H),7.00(d,J＝2.4Hz,1H),6.80–6.75(m,1H),6.52–6.47(m,1H),6.41–6.39(m,1H),5.79(d,J＝7.6Hz,1H),5.36–5.23(m,1H),4.33–4.22(m,3H),4.13–4.04(m,2H),3.64–3.50(m,2H),3.24–3.17(m,2H),3.11–3.01(m,2H),2.95–2.89(m,1H),2.81–2.77(m,4H),2.76–2.67(m,2H),2.60–2.53(m,4H),2.48–2.39(m,3H),2.37–2.28(m,3H),2.21–2.04(m,4H),1.99–1.79(m,2H),1.73–1.66(m,3H),1.51–1.45(m,1H),0.76–0.72(m,3H)；19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-118.48,-119.19,-123.20,-123.83,-171.40。
步骤8：
参照本实施例化合物55a的合成方法用55-1b替换55-1a得到化合物55b(白色固体，2毫克，产率10％)。MS(ESI,m/z):940.4[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.77(s,1H),8.22(s,2H),7.80–7.67(m,2H),7.38–7.34(m,2H),7.00(d,J＝2.4Hz,1H),6.80–6.75(m,1H),6.52–6.47(m,1H),6.41–6.39(m,1H),5.79(d,J＝7.6Hz,1H),5.36–5.23(m,1H),4.34–4.22(m,3H),4.13–4.04(m,2H),3.64–3.50(m,2H),3.24–3.17(m,2H),3.11–3.01(m,2H),2.95–2.89(m,1H),2.81–2.77(m,4H),2.76–2.67(m,2H),2.58–2.52(m,4H),2.48–2.41(m,3H),2.37–2.28(m,3H),2.21–2.04(m,4H),1.99–1.79(m,2H),1.73–1.66(m,3H),1.51–1.45(m,1H),0.76–0.72(m,3H)；19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-118.42,-119.19,-123.21,-123.82,-171.40。
实施例7
(3R或3S)-3-(5-(4-((1-(((2R，6R，7aS)-7a-((((7S或7R)-4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-双氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯烷-2-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-甲基)-1-氧代异吲哚哌啶-2,6-二酮双三氟乙酸盐56a；(3S或3R)-3-(5-(4-((1-(((2R，6R，7aS)-7a-((((7S或R)-4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-双氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯烷-2-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-甲基)-1-氧代异吲哚哌啶-2,6-二酮双甲酸盐56b
步骤1
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，将化合物3-(5-溴-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮(1.5克，4.410毫摩尔，1.0当量)、1-叔丁氧羰基哌嗪(1.73克，8.820毫摩尔，2.0当量)、二氯[1,3-双(2,6-二-3-戊基苯基)咪唑-2-亚基](3-氯吡啶基)合钯(II)(230毫克，0.221毫摩尔，0.05当量)和碳酸铯(4.54克，13.23毫摩尔，3.0当量)溶于45毫升1,4-二氧六环中，混合物在100摄氏度条件下反应16小时，反应过程通过薄层层析和液质来监控。反应结束后，反应液浓缩得到粗产品，粗产品通过硅胶柱层析法纯化，用0％→50％的乙酸乙酯/石油醚流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物56-1(黄色固体，1克，产率53％)。MS(ESI,m/z):429.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.98(s,1H),7.78(d,J＝8.5Hz,1H),7.10–7.02(m,2H),5.25–5.16(m,1H),4.43(d,J＝15.8Hz,1H),4.28(d,J＝15.8Hz,1H),3.69–3.62(m,4H),3.34–3.27(m,4H),2.96–2.78(m,2H),2.41–2.27(m,1H),2.24–2.17(m,1H),1.49(s,9H)。
步骤2
在0摄氏度搅拌条件下，将化合物56-1(1克，2.336毫摩尔，1.0当量)溶于12毫升二氯甲烷中，缓慢滴加4毫升三氟乙酸，混合物在25摄氏度反应1小时，反应过程通过液质来监控。反应结束后，反应液浓缩得到粗产品化合物56-2(黄色油，800毫克)，直接用于下一步反应，MS(ESI,m/z):329.1[M+H]+。
步骤3
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，将化合物56-2(760毫克，2.20毫摩尔，1.0当量)和氰基硼氢化钠(436.8毫克，6.60毫摩尔，3.0当量)溶于15毫升甲醇中，然后加入化合物1-叔丁氧羰基哌啶-4-甲醛(1.48克，6.60毫摩尔，3.0当量)。混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1小时，反应过程通过液质监控。反应结束后，反应液浓缩得到粗产品，粗产品通过硅胶柱层析法纯化，用0％→10％的甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物56-3(白色固体，620毫克，产率50％)。MS(ESI,m/z):526.3[M+H]+。
步骤4
通过超临界液相色谱对本实施例步骤3所得化合物56-3(620毫克)进3行异构体分离：手性柱CHIRALPAK IH,3x25厘米,5微米；流动相A：超临界二氧化碳，流动相B：甲醇(0.1％的2摩尔氨甲醇)；流速：100毫升/分钟；柱温：35摄氏度；用35％流动相B洗脱；检测器UV204纳米，得到两个产品。较短保留时间(4.65分钟)的产品为化合物56-3a(白色固体，190毫克，回收率31％)，MS(ESI,m/z):526.3[M+H]+；较长保留时间(6.77分钟)的产品为化合物56-3b(白色固体，210毫克，回收率35％)，MS(ESI,m/z):526.3[M+H]+。
步骤5
在0摄氏度搅拌条件下，将化合物56-3a(60毫克，0.108毫摩尔，1.0当量)溶于3毫升二氯甲烷中，缓慢滴加1毫升三氟乙酸，混合物在25摄氏度反应1小时，反应过程通过液质来监控。反应结束后，反应液浓缩得到粗产品化合物56-4a(黄棕色固体，50毫克)，直接用于下一步反应，MS(ESI,m/z):426.2[M+H]+。
步骤6
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，化合物56-4a(32.16毫克，0.12毫摩尔，2.0当量)和氰基硼氢化钠(7.92毫克，0.12毫摩尔，2.0当量)溶于1毫升甲醇中，然后加入化合物55-4a(50毫克，0.06毫摩尔，1.0当量)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1小时，反应过程通过液质监控。反应结束后，反应液浓缩得到粗产品，粗产品通过高压制备进行纯化，流动相A：水(0.1％三氟乙酸)，流动相B:乙腈；流速：100毫升/分钟；用40％-65％流动相B洗脱30分钟；检测器UV254/220纳米；得到化合物56-5a(白色固体，60毫克，产率79％)。MS(ESI,m/z):1203.6[M+H]+。
步骤7
在0摄氏度搅拌条件下，将化合物56-5a(60毫克，0.047毫摩尔，1.00当量)溶于苯甲醚(2毫升)，然后滴加三氟乙酸(2毫升)。混合物在室温下反应1小时，反应过程通过液质来监控。反应结束后，反应液浓缩得到粗产品。所得粗产品通过高压制备(C18柱)进行纯化，流动相A：水(0.1％甲酸)；流动相B:甲醇，在30分钟内用10％→40％的B相进行洗脱；检测器UV254/220纳米。得到化合物56a(白色固体，34毫克，产率53％)。MS(ESI,m/z):1059.5[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6+D2O)δ7.84–7.70(m,2H),7.54(d,J＝8.9Hz,1H),7.43–7.34(m,2H),7.10–6.98(m,3H),5.44–5.26(m,1H),5.11–5.00(m,1H),4.54–4.28(m,3H),4.28–4.13(m,4H),4.06(d,J＝10.4Hz,1H),3.81–3.66(m,2H),3.39–3.22(m,8H),3.20–3.04(m,2H),3.02–2.84(m,4H),2.82–2.56(m,6H),2.43–2.27(m,4H),2.27–2.08(m,4H),2.08–1.90(m,6H),1.89–1.68(m,3H),1.65–1.52(m,1H),1.41–1.25(m,2H),0.80–0.68(m,3H)；19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-73.517,-117.31,-121.02,-124.06,-173.42。
步骤8：
参照本实施例化合物56a的合成方法，用56-3b替换56-3a，得到化合物56b(白色固体，2毫克)。MS(ESI,m/z):1059.5[M+H]+；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.47(s,2H),7.70–7.60(m,3H),7.31–7.20(m,2H),7.09–7.02(m,2H),6.97(d,J＝2.6Hz,1H),5.46–5.28(m,1H),5.17–5.04(m,1H),4.67–4.50(m,2H),4.47–4.33(m,3H),4.33–4.25(m,1H),4.15–4.01(m,2H),3.84–3.69(m,2H),3.57–3.42(m,3H),3.39–3.32(m,2H),3.30–3.23(m,2H),3.22–3.00(m,3H),2.97–2.71(m,6H),2.68–2.23(m,12H),2.21–2.03(m,6H),2.02–1.93(m,2H),1.92–1.79(m,2H),1.52–1.35(m,2H),0.85–0.74(m,3H)；19F NMR(377MHz,CD3OD)δ-117.31,-121.02,-124.06,-173.42。
实施例8
(2S，4R)-1-((S)-2-(3-(((2S，6R，7aS)-7a-((((S或R)-4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-双氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯烷-2-甲基)甲氧基)丙胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺57
合成路线如下所示：
/>
步骤1：
在0摄氏度氮气保护搅拌条件下，向25毫升史莱克管中依次加入52-5a(200.0毫克，0.227毫摩尔，1.00当量)，(1,5-环辛二烯)氯铑(I)二聚体(23.6毫克，0.045毫摩尔，0.20当量)的二氯甲烷(3毫升)溶液以及频哪醇硼烷(61.2毫克，0.454毫摩尔，2.0当量)，所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应16小时。反应结束后减压浓缩得到油状混合物。再在25摄氏度搅拌条件下，向油状混合物中依次加入水(0.5毫升)，四氢呋喃(2.0毫升)，四水合过硼酸钠(195.71毫克，2.270毫摩尔，10.0当量)和尿素过氧化氢复合物(225.06毫升，2.270毫摩尔，10.0当量)。所得混合物体系在25摄氏度搅拌条件下反应4小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在25分钟内用5％→95％的甲醇/水流动相(0.1％碳酸氢铵)进行梯度洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物57-1(白色固体，100毫克，产率49％)。MS(ESI,m/z):854.3[M+H]+。
步骤2：
在-78摄氏度氮气保护搅拌条件下，向二甲基亚砜(54.9毫克，0.66毫摩尔，6.00当量)的二氯甲烷(1.0毫升)溶液中缓慢滴加草酰氯(44.6毫克，0.33毫摩尔，3.0当量)。混合物在-78摄氏度氮气保护搅拌条件下反应30分钟，接着将化合物57-1(100.0毫克，0.11毫摩尔，1.0当量)溶于二氯甲烷(1.0毫升)滴加入反应体系，混合物在-78摄氏度继续反应1小时后滴加三乙胺(118.5毫克，1.11毫摩尔，10.0当量)，滴加完毕后混合物在25摄氏度搅拌条件下反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液缓慢倒入饱和氯化铵溶液(20毫升)中淬灭，所得混合物用氯仿/异丙醇混合溶剂(3/1，30毫升x3)萃取。合并有机相，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。粗产品用硅胶柱层析法纯化，用0％→10％的甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压浓缩除去溶剂，得到化合物57-2(白色固体，70毫克，产率70％)。MS(ESI,m/z):852.3[M+H]+。
步骤3：
在25摄氏度搅拌条件下，向化合物57-2(65.0毫克，0.07毫摩尔，1.00当量)的叔丁醇(1.0毫升)和水(1.0毫升)的混合溶液中依次加入2-甲基-2-丁烯(53.5毫克，0.720毫摩尔，10.0当量)，次氯酸钠(20.7毫克，0.216毫摩尔，3.0当量)和磷酸氢二钠(43.3毫克，0.288毫摩尔，4.0当量)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在25分钟内用5％→95％的甲醇/水流动相(0.1％碳酸氢铵)进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物57-3(白色固体，50毫克，产率76％)。MS(ESI,m/z):868.3[M+H]+。
步骤4：
在25摄氏度搅拌条件下，向反应瓶中依次加入57-3(50毫克，0.058毫摩尔，1.00当量)，O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸(30.1毫克，0.075毫摩尔，1.3当量)和N,N-二甲基甲酰胺(1毫升)。混合物在25摄氏度反应10分钟后依次向反应体系中加入(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(32.5毫克，0.070毫摩尔，1.2当量)和N,N-二异丙基乙胺(31.5毫克，0.232毫摩尔，4.0当量)。所得混合物在25摄氏度氮气保护搅拌条件下反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在20分钟内用5％→95％的甲醇/水流动相(0.1％碳酸氢铵)进行梯度洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物57-4(白色固体，35.0毫克，产率47％)。MS(ESI,m/z):1294.6[M+H]+。
步骤5：
在零摄氏度搅拌条件下，向化合物57-4(35.00毫克，0.026毫摩尔，1.00当量)甲醇(1毫升)溶液中缓慢滴加盐酸1,4-二氧六环溶液(4摩尔/升，1毫升)。混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，减压浓缩除去溶剂得到粗产品，所得粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在20分钟内用0％→95％的甲醇/水流动相(0.1％碳酸氢铵)进行洗脱；检测器,UV254/220纳米；得到化合物57(白色固体，25.0毫克，产率83％)。MS(ESI,m/z):1150.6[M+H]+；1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ8.86(s,1H),7.70–7.63(m,1H),7.62–7.55(m,1H),7.47–7.34(m,4H),7.30–7.18(m,2H),7.00–6.94(m,1H),5.45–5.24(m,1H),5.02–4.94(m,1H),4.64(s,1H),4.60–4.53(m,1H),4.49–4.38(m,3H),4.28(d,J＝10.5Hz,1H),4.18(d,J＝10.4Hz,1H),3.84(d,J＝11.0Hz,1H),3.79–3.54(m,8H),3.53–3.42(m,2H),3.36–3.33(m,1H),3.26–3.21(m,1H),3.15–3.07(m,1H),2.84–2.74(m,1H),2.71–2.50(m,3H),2.50–2.40(m,5H),2.38–2.29(m,2H),2.20–2.13(m,1H),1.98–1.89(m,1H),1.88–1.81(m,4H),1.80–1.70(m,1H),1.47(d,J＝7.0Hz,3H),1.00(s,9H),0.84–0.74(m,3H)；19F NMR(376MHz,CD3OD)δ-118.68,-118.70,-118.71,-121.09,-121.10,-124.07,-173.03。
实施例9
(2S，4R)-1-((S)-2-(3-(2-((3R，6R，7aS)-7a-((((S或R)-4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-3-羟基萘-1-基)-6,8-双氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯啉-3-甲基)乙氧基)丙酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺58
合成路线如下：
/>
步骤1：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，将48-6(2.5克，6.1毫摩尔，1当量)和羰基双(三苯基膦)氯化铱(480毫克，0.61毫摩尔，0.1当量)溶于二氯甲烷(30毫升)中。所得混合物降至0摄氏度，在0摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应液中加入二甲基甲硅基醚(2克，15毫摩尔，2.45当量)。所得混合物在0摄氏度氮气保护搅拌条件下反应30分钟，随后，反应液降至零下70摄氏度。在零下70摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应液中滴加烯丙基溴化镁(15毫升，1摩尔/升，15毫摩尔，2.45当量)。所得混合物在零下70摄氏度氮气保护搅拌条件下反应2小时，随后反应液升至20摄氏度，再在20摄氏度氮气保护搅拌条件下反应2小时。反应通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，在0摄氏度下将反应液倒入饱和氯化铵水溶液(50毫升)中淬灭反应，混合物用乙酸乙酯萃取(50毫升×2)，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。粗产品通过硅胶柱层析法纯化，用0％→20％的乙酸乙酯/石油醚流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物58-21(1.5克，产率56％)，MS(ESI,m/z):438.0[M+H]+。
步骤2：
在25摄氏度搅拌条件下，将58-21(1.5克，3.4毫摩尔，1当量)溶于丙酮(32毫升)和水(8毫升)中。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下，加入4-甲基吗啉-N-氧化物(480毫克，4.1毫摩尔，1.2当量)和二水合锇酸钾(VI)(110毫克，0.34毫摩尔，0.1当量)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应16小时。反应通过液质和薄层层析来监控，反映结束后，反应液过滤除去不溶物，滤液通过减压旋蒸除去溶剂粗品。粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在25分钟内用5％→100％的甲醇/水流动相(0.1％甲酸水溶液)进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物58-22(1.5克，产率93％)。MS(ESI,m/z):472.0[M+H]+。
步骤3：
在25摄氏度搅拌条件下，将58-22(2克，4.24毫摩尔，1当量)溶于乙腈(40毫升)和水(10毫升)中。混合物在25摄氏度搅拌条件下，加入高碘酸钠(4.53克，21.2毫摩尔，5当量)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应16小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，在25摄氏度下，将反应液倒入水(100毫升)中淬灭反应，混合物用二氯甲烷萃取(100毫升×3)，合并有机相，用饱和食盐水(100毫升)清洗，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到化合物58-23(1.9克，产率100％)。MS(ESI,m/z):440.0[M+H]+。
步骤4：
在25摄氏度搅拌条件下，将58-23(1.9克，4.3毫摩尔，1当量)溶于甲醇(50毫升)。随后，将混合物降至0摄氏度。在0摄氏度搅拌条件下，向混合物中缓慢加入硼氢化钠(330毫克，8.6毫摩尔，2当量)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应2小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，在0摄氏度下向反应液中加水(20毫升)淬灭反应。混合物通过减压旋蒸除去有机相，残余混合物用二氯甲烷(50毫升×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50毫升)清洗，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到化合物58-24(1.9克，产率100％)。MS(ESI,m/z):442.0[M+H]+。
步骤5：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，将3-丁烯-1-醇(1.22克，16.98毫摩尔，5当量)和三乙胺(687毫克，6.79毫摩尔，2当量)溶于二氯甲烷(15毫升)中。随后，将反应液降至零下40摄氏度。在零下40摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应液中缓慢加入三氟甲磺酸酐(1.25克，4.4毫摩尔，0.65当量)。混合物在0摄氏度氮气保护搅拌条件下反应1小时(以下称为A液)。在另一个反应瓶(以下称为B瓶)中，在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，将58-24(1.5克，3.39毫摩尔，1当量)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10毫升)中。随后将混合物降至0摄氏度。在0摄氏度氮气保护搅拌条件下，向混合物中分批加入钠氢(60％，679毫克，16.98毫摩尔，5当量)。混合物在0摄氏度氮气保护搅拌条件下反应1小时。在0摄氏度氮气保护搅拌条件下，将A液滴加到B瓶中。所得混合物在25摄氏度氮气保护搅拌条件下反应16小时。反应通过液质和薄层层析来监控。反映结束后，在0摄氏度下，向反应液中加入水(20毫升)淬灭反应。混合物用乙酸乙酯(50毫升×3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50毫升)清洗，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。粗产品通过硅胶柱层析法纯化，用0％→20％的乙酸乙酯/石油醚流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到粗产品。粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行二次纯化，在25分钟内用5％→80％的甲醇/水流动相(0.1％甲酸水溶液)进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物58-25(487毫克，产率29％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.76–7.58(m,4H),7.43–7.35(m,5H),5.91–5.69(m,1H),5.25–4.94(m,3H),3.71–3.27(m,6H),3.25–2.87(m,3H),2.53–2.20(m,3H),2.10–1.62(m,7H),1.06(s,9H)。
步骤6：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物58-25350毫克，0.632毫摩尔，1.0当量)和3.5毫升四氢呋喃。随后向混合物中缓慢滴加四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1.0摩尔/升，0.95毫升，0.95毫摩尔，1.5当量)。所得混合物在50摄氏度氮气保护搅拌条件下反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液冷却至室温。在0摄氏度下将反应液倒入饱和碳酸钠溶液(30毫升)中淬灭反应，混合物用氯仿/异丙醇(3/1，30毫升×3)萃取，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，滤液减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。粗产品通过硅胶柱层析法纯化，用0％→10％的甲醇(1摩尔/升氨甲醇溶液)/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物58-1(无色油，180毫克，产率94％)，MS(ESI,m/z):258.2[M+H]+。
步骤7：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，依次向反应瓶中加入化合物40-1(2.4克，4.655毫摩尔，1.0当量)，化合物50-1(1.51克，4.190毫摩尔0.9当量)，磷酸钾(2.08克，9.310毫摩尔，2.0当量)，3-(叔丁基)-4-(2,6-二甲氧基苯基)-2,3-二氢苯并[D][1,3]氧,膦戊轭(0.24克，0.698毫摩尔，0.15当量)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.31克，0.326毫摩尔，0.07当量)，甲苯(20毫升)和水(4毫升)。混合物在80摄氏度氮气保护搅拌条件下反应3小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液冷却至室温。向反应液中加入50毫升水稀释，所得混合物用乙酸乙酯(50毫升x2)和二氯甲烷(50毫升)萃取，合并有机相。有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→15％乙酸乙酯/(石油醚/二氯甲烷＝7/3)梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂得到化合物58-2(浅黄色固体，2.02克，67％)。MS(ESI,m/z):625.0/627.0[M+H]+。
步骤8：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入三乙烯二胺(10.8毫克，0.092毫摩尔，0.2当量)、58-1(124毫克，0.458毫摩尔，1.0当量)、碳酸铯(314.0毫克，0.916毫摩尔，2.0当量)、58-2(301.2毫克，0.458毫摩尔，1.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(3毫升)。所得混合物在60摄氏度氮气保护搅拌条件下反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在25分钟内用5％→95％的甲醇/水流动相(0.1％碳酸氢铵水溶液)进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物58-3(类白色固体，280毫克，产率69％)。MS(ESI,m/z)：846.4[M+H]+。
步骤9：
通过手性高效液相色谱法对本实施例步骤8所得化合物58-3(310毫克)进行手性拆分：手性柱CHIRAL ART Cellulose-SC，2×25厘米，5微米；流动相A：正己烷(0.5％，2摩尔/升氨-甲醇)，流动相B：乙醇；流速：20毫升/分钟；在14分钟内用50％的B相进行洗脱，检测器UV 200/225纳米，得到两个产品。较短保留时间(4.5分钟)的产品为化合物58-3a(白色固体，115毫克，回收率37％)，MS(ESI,m/z):846.4[M+H]+；较长保留时间(9.5分钟)的产品为化合物58-3b(白色固体，118毫克，回收率38％)，MS(ESI,m/z):846.4[M+H]+。
步骤10：
在0摄氏度搅拌条件下，向反应瓶中依次加入58-3a(75毫克，0.084毫摩尔，1.0当量)、四氯化碳(0.4毫升)和乙腈(0.4毫升)。所得混合物降至0摄氏度。在0摄氏度搅拌条件下，向反应瓶中依次加入三氯化钌水合物(2毫克，0.008毫摩尔，0.1当量)的水(0.6毫升)溶液和高碘化钠(94.8毫克，0.420毫摩尔，5.0当量)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液冷却至零摄氏度，加入冰水(20毫升)淬灭反应，混合物用三氯甲烷/异丙醇(3/1，20毫升×3)萃取，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂，得到粗产品。粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在25分钟内用5％→95％的甲醇/水流动相(0.1％碳酸氢铵水溶液)进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物58-4(白色固体，32毫克，产率42％)。MS(ESI,m/z):864.4[M+H]+。
步骤11：
在25摄氏度搅拌条件下，向反应瓶中依次加入58-4(32毫克，0.035毫摩尔，1.0当量)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(18.3毫克，0.046毫摩尔，1.3当量)和N,N-二甲基甲酰胺(0.5毫升)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应15分钟。在25摄氏度搅拌条件下，向反应液中加入[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸(19.8毫克，0.042毫摩尔，1.2当量)和N,N-二异丙基乙胺(19.2毫克，0.140毫摩尔，4当量)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下继续反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在25分钟内用5％→95％的甲醇/水流动相(0.1％碳酸氢铵水溶液)进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物58-5(白色固体，50毫克，产率90％)。MS(ESI,m/z):1290.6[M+H]+。
步骤12：
在零摄氏度搅拌条件下，向化合物58-5(45毫克，0.033毫摩尔，1.0当量)的甲醇(1毫升)溶液中滴加盐酸的1,4-二氧六环溶液(4摩尔/升，1毫升)。混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过减压旋蒸除去溶剂。所得粗品在零摄氏度下用饱和碳酸钠水溶液/饱和碳酸氢钠水溶液(1/1，10毫升)调pH至9左右。所得混合物用三氯甲烷/异丙醇(3/1，20毫升×3)萃取，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在20分钟内用5％→95％的甲醇/水流动相(0.1％碳酸氢铵)进行洗脱；检测器，UV254/220纳米；得到化合物58(白色固体，16.2毫克，产率41％)。MS(ESI,m/z):1146.7[M+H]+，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.97(s,1H),8.98(s,1H),8.47–8.29(m,1H),7.89–7.77(m,1H),7.80–7.60(m,2H),7.49–7.26(m,6H),7.20–7.06(m,1H),7.03–6.84(m,1H),5.35–4.99(m,2H),4.99–4.78(m,1H),4.57–4.48(m,1H),4.46–4.36(m,1H),4.36–4.16(m,3H),4.15–3.99(m,2H),3.63–3.37(m,10H),3.12–2.86(m,3H),2.48–2.26(m,7H),2.05–1.88(m,2H),1.88–1.70(m,5H),1.69–1.55(m,5H),1.43–1.30(m,3H),1.29–1.17(m,2H),0.97–0.77(m,12H)；19F NMR(377MHz,CD3OD)δ-118.655,-124.177,-180.016。
实施例10
(2S，4R)-1-((S)-2-(2-((((2S、6R、7aS)-7a-((((S或R)-4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-双氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯烷-2-基)氧基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺59；
步骤1
在零下78摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物48-6(5克，11.541毫摩尔，1.0当量)、18-冠醚-6(6.42克，23.082毫摩尔，2.0当量)以及50毫升无水四氢呋喃，随后向其中缓慢滴加叔丁醇钾的四氢呋喃溶液(1摩尔每升，15毫升)。所得混合物在零下78摄氏度条件下反应1小时，然后向其中加入3-苯基-2-苯基磺酰基-1,2-氧氮杂环丙烷(4.76克，17.312毫摩尔，1.5当量)，所得混合物在零下78摄氏度条件下继续反应1小时，反应过程通过薄层层析和液质来监控。反应结束后，将反应液倒入100毫升水中，然后用乙酸乙酯萃取(100毫升x3)，有机相浓缩得到粗产品。粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在25分钟内用5％→95％的乙腈/水流动相(0.1％氨水溶液)进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物59-1(黄色油，4.5克，产率86％)。MS(ESI,m/z):428.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.65–7.61(m,4H),7.46–7.39(m,6H),5.36–5.20(m,1H),4.91(s,1H),4.39–4.33(m,1H),4.13–4.01(m,1H),3.77–3.70(m,1H),3.48–3.40(m,1H),3.25–3.08(m,1H),2.26–2.22(m,1H),2.16–2.09(m,1H),2.00–1.98(m,1H),1.94–1.88(m,1H),1.06(s,9H)。
步骤2
/>
在0摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物59-1(1.7克，3.777毫摩尔，1.0当量)、3-溴丙烯(625.3毫克，4.910毫摩尔，1.3当量)以及20毫升N,N-二甲基甲酰胺，完全溶解后向其中加入分批加入氢化钠(60％，226.6毫克，5.665毫摩尔，1.5当量)。所得混合物在0摄氏度条件下反应1小时，反应过程通过薄层层析和液质来监控。反应结束后，将反应液倒入100毫升饱和的氯化铵水溶液中，然后用乙酸乙酯萃取(100毫升x3)，所得有机相浓缩得到粗产品。粗产品通过硅胶柱层析法纯化，用0％→50％的甲基叔丁基醚/石油醚流动相梯度洗脱，分别得到两个异构体59-2a和59-2b。化合物59-2a(淡黄色油状物，1.28克，产率68％)。MS(ESI,m/z):468.2[M+H]+；1H NMR(300MHz,CD3OD)δ7.68–7.59(m,4H),7.48–7.34(m,6H),5.83–5.68(m,1H),5.50–5.27(m,1H),5.19–5.02(m,2H),4.16–3.88(m,5H),3.60(d,J＝10.1Hz,1H),3.43–3.23(m,1H),2.71–2.50(m,1H),2.19–1.93(m,3H),1.05(s,9H)；19F NMR(282MHz,CD3OD)δ-173.50。化合物59-2b(淡黄色油状物，220毫克，产率12％)。MS(ESI,m/z):468.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.64–7.59(m,4H),7.49–7.36(m,6H),6.00–5.88(m,1H),5.33–5.11(m,3H),4.62–4.56(m,1H),4.42–4.35(m,1H),4.27–4.13(m,2H),3.48(d,J＝10.4Hz,1H),3.35(d,J＝10.4Hz,1H),3.08–2.93(m,1H),2.69–2.60(m,1H),2.18–1.95(m,3H),1.04(s,9H)；19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-173.11。
步骤3
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物59-2a(950毫克，1.93毫摩尔，1.0当量)、羰基二(三苯基膦)氯化铱(158.5毫克，0.193毫摩尔，0.1当量)以及二氯甲烷(10毫升)，随后向其中加入1,1,3,3-四甲基二硅氧烷(1.09克，7.720毫摩尔，4.0当量)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应30分钟后，向反应液中加入硼氢化钠(307.4毫克，7.72毫摩尔，4.0当量)和三氟化硼乙醚(1.15克，7.72毫摩尔，4.0当量)，所得混合物在2S5摄氏度搅拌条件下继续反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，向反应液中加入100毫升水淬灭，再用乙酸乙酯(100毫升x3)萃取，合并有机相。有机相用饱和食盐水(100毫升x3)洗涤后，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到粗产品。所得粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在25分钟内用5％→95％的甲醇/水流动相(0.1％氨水)进行洗脱；检测器,UV254/220纳米；得到化合物59-3(淡黄色油状物，480毫克，产率52％)。MS(ESI,m/z):454.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.70–7.63(m,4H),7.43–7.33(m,6H),5.87–5.75(m,1H),5.28–5.06(m,3H),4.19–4.10(m,1H),3.93–3.81(m,2H),3.70(d,J＝9.2Hz,1H),3.59–3.44(m,1H),3.40–3.22(m,1H),3.20–3.13(m,1H),3.13–3.00(m,2H),2.27–1.96(m,4H),1.06(s,9H)。
步骤4
/>
在25摄氏度搅拌条件下，向化合物59-3(480毫克，1.005毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(5毫升)溶液中滴加四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1摩尔/升，2毫升)。混合物在60摄氏度搅拌条件下反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液浓缩得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→10％氨甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂得到化合物59-4(无色油状物，240毫克，产率95％)。MS(ESI,m/z):216.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.96–5.85(m,1H),5.34–5.15(m,3H),4.20–4.13(m,1H),4.03–3.92(m,2H),3.63(d,J＝10.8Hz,1H),3.46–3.38(m,1H),3.28(d,J＝10.8Hz,1H),3.24–3.19(m,1H),3.18–3.06(m,2H),2.17–2.04(m,4H)；19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-172.55。
步骤5
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入三乙烯二胺(8.72毫克，0.074毫摩尔，0.2当量)、化合物46-1(250毫克，0.369毫摩尔，1.0当量)、碳酸铯(253.3毫克，0.738毫摩尔，2.0当量)、化合物59-4(92.1毫克，0.406毫摩尔，1.1当量)和N,N-二甲基甲酰胺(3毫升)。所得混合物在80摄氏度氮气保护搅拌条件下反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在25分钟内用5％→95％的甲醇/水流动相(0.1％碳酸氢铵水溶液)进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物59-5(类白色固体，290毫克，产率90％)。MS(ESI,m/z):822.4[M+H]+。
步骤6
通过手性高效液相色谱对本实施例步骤5所得化合物59-5(290毫克)进行手性拆分。手性柱：CHIRAL ART Cellulose-SZ，3x25厘米，5微米；流动相A：正己烷(0.1％，2摩尔/升氨甲醇)，流动相B：乙醇；流速：20毫升/分钟；13.5分钟内用10％流动相B进行洗脱；检测器UV222/281纳米，得到两个化合物。其中较短保留时间(8.10分钟)的为化合物59-5a(白色固体，109毫克，回收率38％)。MS(ESI,m/z):822.4[M+H]+；较长保留时间(10.4分钟)的为化合物59-5b(白色固体，113毫克，回收率39％)。MS(ESI,m/z):822.4[M+H]+。
步骤7
在0摄氏度搅拌条件下，向化合物59-5a(75毫克，0.087毫摩尔，1.00当量)的乙腈(0.5毫升)、水(0.75毫升)和四氯化碳(0.5毫升)的混合溶液中依次加入三氯化钌一水合物(2.06毫克，0.009毫摩尔，0.1当量)和高碘酸钠(97.6毫克，0.435毫摩尔，5当量)，所得混合物在0摄氏度反应1小时，反应过程通过液质监控。反应结束后，在0摄氏度下加入10毫升水稀释反应，混合物用氯仿/异丙醇(3/1，10毫升x3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到粗产品。所得粗产品通过反相色谱(C18柱)进行纯化，流动相A：水(0.1％碳酸氢铵)；流动相B:甲醇，在25分钟内用5％→95％的B相进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物59-6a(白色固体，50毫克，产率65％)。MS(ESI,m/z):840.4[M+H]+。
步骤8
在室温搅拌条件下，向化合物59-6a(35毫克，0.04毫摩尔，1.00当量)的N,N-二甲基甲酰胺(1毫升)溶液中加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(20.6毫克，0.052毫摩尔，1.3当量)。混合物在25摄氏度下搅拌反应10分钟后，向反应液中依次加入(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(22.2毫克，0.048毫摩尔，1.2当量)和N,N-二异丙基乙胺(21.5毫克，0.16毫摩尔，4当量)。混合物在25摄氏度下继续搅拌反应1小时，反应过程通过液质来监控。反应完全后，所得粗产品通过反相色谱(C18柱)进行纯化，流动相A：水(0.1％碳酸氢铵)；流动相B:甲醇，在30分钟内用70％→95％的B相进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物59-7a(白色固体，30毫克，产率57％)。MS(ESI,m/z):1266.6[M+H]+。
步骤9
在0摄氏度搅拌条件下，将化合物59-7a(30毫克，0.023毫摩尔，1.00当量)溶于无水甲醇(1毫升)，然后向其中滴加盐酸的1,4-二氧六环溶液(4摩尔每升，1毫升)。混合物在室温下反应1小时，反应过程通过液质来监控。反应结束后，反应液浓缩得到粗产品。所得粗产品通过高压制备(C18柱)进行纯化，流动相A：水(0.1％碳酸氢铵)；流动相B:甲醇，在30分钟内用70％→90％的B相进行洗脱；检测器UV254/220纳米。得到化合物59(白色固体，15.8毫克，产率62％)。MS(ESI,m/z):1122.5[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.99(s,1H),8.98(s,1H),8.40(d,J＝7.7Hz,1H),7.81–7.73(m,1H),7.67(d,1H),7.61(d,J＝9.4Hz,1H),7.46–7.40(m,2H),7.40–7.31(m,4H),7.00(d,J＝2.6Hz,1H),5.41–5.23(m,1H),5.10(s,1H),4.98–4.83(m,1H),4.49–4.41(m,2H),4.34–4.15(m,6H),4.00(d,J＝15.8Hz,1H),3.85(d,J＝15.8Hz,1H),3.59(d,J＝3.1Hz,2H),3.54–3.43(m,4H),3.29–3.21(m,2H),3.17–3.13(m,1H),3.09–3.01(m,2H),2.45(s,3H),2.40–2.31(m,1H),2.30–2.16(m,2H),2.16–1.98(m,3H),1.82–1.72(m,1H),1.69–1.60(m,4H),1.36(d,J＝7.0Hz,3H),0.86(s,9H),0.78–0.70(m,3H)；19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-118.65,-119.21,-123.64,-171.22。
实施例11
3-(5-(4-((1-(((2R，6R，7aS)-7a-((((5aS，6S，9R)-2-((S或R)-(8-乙基-3-萘酚-1-基)-1,3-二氟-5a，6,7,8,9,10-六氢-5H-6,9-表氨基氮[2'，1'：3,4][1,4]氧杂氮卓[5,6,7-de]喹唑啉-13-基)氧基)甲基)-6-氟代六氢-1H-吡咯烷-2-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-1-氧代异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮甲酸盐60
步骤1：
化合物60-1按照专利(WO2019179515A1)合成得到。
在0摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物60-1(14.5克，46.2毫摩尔，1.0当量)的甲醇(150毫升)溶液中缓慢加入硼氢化钠(3.7克，92.3毫摩尔，2当量)。混合物在25摄氏度搅拌条件下反应3小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，在0摄氏度下，向反应液中加入饱和氯化铵溶液(1500毫升)淬灭反应。混合物用二氯甲烷(1500毫升x3)萃取，合并有机相；有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，用0％→10％氨甲醇(7摩尔/升)/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物60-2(无色油，10.8克，产率87％)。MS(ESI,m/z):243.3[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.20-3.94(m,2H),3.59-3.55(m,1H),3.45-3.40(m,1H),3.10-2.93(m,2H),2.74-2.70(m,1H),1.96-1.82(m,2H),1.79-1.70(m,2H),1.47(s,9H)。
步骤2：
在0摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物60-2(10.8克，40.0毫摩尔，1.0当量)和咪唑(4.59克，64.1毫摩尔，1.6当量)的二氯甲烷(20毫升)溶液中缓慢加入叔丁基二甲基氯硅烷(8.3克，52.1毫摩尔，1.3当量)。混合物在25摄氏度搅拌条件下反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，混合物减压浓缩得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，用0％→5％甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物60-3(白色固体，13.7毫克，产率88％)。MS(ESI,m/z):357.2[M+H]+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ4.03(d,J＝6.0Hz,1H),3.61–3.39(m,2H),3.13–2.89(m,2H),2.71(m,1H),1.97–1.82(m,3H),1.81–1.66(m,2H),1.48(s,9H),0.90(s,9H),0.06(s,6H)。
步骤3：
在0摄氏度搅拌条件下，向化合物56-3(300毫克，0.542毫摩尔，1当量)的二氯甲烷(2毫升)溶液中滴加三氟乙酸(2毫升)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过减压旋蒸除去溶剂得到化合物60-4(棕色固体，370毫克，产率84％)MS(ESI,m/z):426.1[M+H]+。
步骤4：
在25摄氏度搅拌条件下，向化合物3-溴-2，4，5-三氟苯胺(25克，111毫摩尔，1当量)和对甲苯磺酸一水合物(2.1克，10.506毫摩尔，0.1当量)的乙腈(300毫升)溶液中分批加入N-碘代丁二酰亚胺(29.87克，126.108毫摩尔，1.5当量)，混合物在60摄氏度氮气保护搅拌下反应3小时。该反应过程通过液质和薄层层析监控。反应结束后，冷却至室温，减压浓缩除去多余溶剂。除去溶剂后所得固体用500毫升乙酸乙酯重新溶解，所得溶液用饱和硫代硫酸钠水溶液(500毫升x3)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→10％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物60-5(棕色固体，34克，产率87％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.20(s,2H)；19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-117.85,-128.47,-141.77。
步骤5：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物60-5(34克，92.0毫摩尔，1当量)的乙醇(1000毫升)溶液中依次加入双三苯基膦二氯化钯(6.78克，9.18毫摩尔，0.1当量)和三乙胺(48.3毫升，330.4毫摩尔，3.6当量)，混合物在80摄氏度，5个大气压的一氧化碳氛围中反应16小时。该反应过程通过液质和薄层层析监控。反应结束后，冷却至室温，减压浓缩除去多余溶剂得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→10％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物60-6棕色固体(21克，产率72％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.67(s,2H),4.50–4.35(m,2H),1.44–1.36(m,3H)；19FNMR(377MHz,CDCl3)δ-132.94,-135.73,-147.14。
步骤6：
在0摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物60-6(18克，57.4毫摩尔，1当量)的四氢呋喃溶液(180毫升)中缓慢滴加三氯乙酰异氰酸酯(17.1克，86.0毫摩尔，1.5当量)，混合物在25摄氏度反应0.5小时。该反应过程通过液质和薄层层析监控。反应结束后，减压浓缩除去多余溶剂得到粗产品。所得粗产品通过甲基叔丁基醚(180毫升)打浆纯化，得到化合物60-7棕色固体(21克，产率69％)。MS(ESI,m/z):484.8/486.8/488.8。
步骤7：
在0摄氏度搅拌条件下，向化合物60-7(20.5克，40.1毫摩尔，1当量)的甲醇溶液(360毫升)中缓慢滴加氨甲醇溶液(7摩尔/升，36毫升)，混合物在25摄氏度反应1小时。该反应过程通过液质和薄层层析监控。反应结束后，减压浓缩除去多余溶剂得到粗产品。所得粗产品通过甲基叔丁基醚(180毫升)打浆纯化，得到化合物60-8(棕色固体，11.4克，产率91％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.62(s,1H),11.58(s,1H)；19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-125.47,-139.98,-143.15。
步骤8：
在0摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物60-8(11.4克，36.7毫摩尔，1当量)的三氯氧磷(120毫升)中缓慢滴加三乙胺(12毫升)。滴加完后在100摄氏度反应16小时。该反应过程通过液质和薄层层析监控。反应结束后，减压浓缩除去多余溶剂得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→10％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物60-9棕色固体(4.6克，产率44％)。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-115.15,-124.03,-137.27。
步骤9：
在0摄氏度搅拌条件下，向化合物60-9(4.6克，13.2毫摩尔，1.0当量)和化合物60-3(5.0克，13.2毫摩尔，1.0当量)的二氯甲烷(10毫升)溶液中缓慢加入N,N-二异丙基乙胺(7.2毫升，39.5毫摩尔，3当量)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液减压浓缩得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，用0％→20％乙酸乙酯/石油醚流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物60-10(白色固体，10克，产率96％)。MS(ESI,m/z):651.1/653.1[M+1]+,1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.58-4.56(m,1H),4.36(s,1H),4.23–4.15(m,1H),3.96(s,1H),3.63(s,1H),3.49-3.45(m,1H),3.15(d,J＝12.0Hz,1H),2.27(s,1H),2.02-1.83(m,3H),1.49(s,9H),0.86(s,9H),0.08(s,6H)。
步骤10：
在25摄氏度搅拌条件下，向化合物60-10(9.7克，14.13毫摩尔，1.0当量)的无水四氢呋喃(300毫升)溶液中缓慢加入四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1摩尔/升，33.9毫升，33.9毫摩尔，2.4当量)。混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1小时，随后升温至65摄氏度并继续搅拌反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液减压浓缩得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，用0％→20％乙酸乙酯/石油醚流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物60-11(白色固体，4.6克，产率65％)。MS(ESI,m/z):501.1/503.1[M+1]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.06(d,J＝12.8Hz,1H),4.58–4.47(m,1H),4.41(s,1H),4.30-4.25(m,2H),4.20-4.12(m,1H),3.24(d,J＝12.0Hz,1H),2.05-1.90(m,2H),1.87-1.77(m,2H),1.51(s,9H)。
步骤11：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物60-11(2克，3.790毫摩尔，1.00当量)、化合物50-1(1.64克，4.548毫摩尔，1.2当量)、3-(叔丁基)-4-(2,6-二甲氧基苯基)-2,3-二氢苯并[D][1,3]氧,膦戊轭(263.6毫克，0.758毫摩尔，0.2当量)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(365.34毫克，0.379毫摩尔，0.1当量)、磷酸钾(1.69克，7.580毫摩尔，2.0当量)、水(4毫升)和甲苯(20毫升)。所得混合物在80摄氏度氮气保护搅拌条件下反应2小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液过滤，滤液通过减压浓缩除去溶剂得到粗产品，粗产品用硅胶柱层析法纯化，用0％→50％的乙酸乙酯/石油醚流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压浓缩除去溶剂，得到化合物60-12(白色固体，2克，产率78％)。MS(ESI,m/z):637.3[M+H]+。
步骤12：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入三乙烯二胺(52.9毫克，0.45毫摩尔，0.2当量)、化合物60-12(1.5克，2.24毫摩尔，1.0当量)、碳酸铯(1.535毫克，4.48毫摩尔，2.0当量)、化合物52-4(594.2毫克，2.24毫摩尔，1.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(15毫升)。所得混合物在80摄氏度氮气保护搅拌条件下，反应5小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液直接通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在25分钟内用5％→95％的甲醇/水流动相(0.1％碳酸氢铵水溶液)进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物60-13(白色固体，800毫克，产率40％)。MS(ESI,m/z):846.4[M+H]+。
步骤13：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物60-13(800毫克，0.95毫摩尔，1.0当量)、1,3-二甲基巴比妥酸(443.0毫克，2.7毫摩尔，3.0当量)、四(三苯基膦)钯(218.6毫克，0.17毫摩尔，0.2当量)和二氯甲烷(10毫升)。混合物在室温下反应16小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液浓缩得到粗产品。粗产品通过反相快速色谱柱(C18柱)进行纯化，在25分钟内用5％→95％的甲醇/水流动相(0.1％碳酸氢铵)进行洗脱，检测器UV254纳米，得到化合物60-14(白色固体，450毫克，产率63％)。MS(ESI,m/z):806.4[M+H]+。
步骤14：
通过高效液相色谱对本实施例步骤13所得化合物60-14(450毫克)进行手性拆分。手性柱：CHIRALPAK ID，2x25厘米，5微米；流动相A：正己烷/甲基叔丁基醚(1/1)(0.5％，2摩尔/升氨甲醇)，流动相B：甲醇；流速：20毫升/分钟；9分钟内用10％流动相B进行洗脱；检测器UV226/292纳米，得到两个化合物。其中较短保留时间(5.05分钟)的为化合物60-14a(白色固体，150毫克，回收率39％)。MS(ESI,m/z):806.4[M+H]+；其中较长保留时间(6.47分钟)的为化合物60-14b(白色固体，120毫克，回收率31％)。MS(ESI,m/z):806.4[M+H]+。
步骤15：
在零下78摄氏度氮气保护搅拌条件下，向二甲基亚砜(48.4毫克，0.59毫摩尔，5当量)的超干二氯甲烷(2毫升)溶液中缓慢滴加草酰氯的二氯甲烷溶液(2摩尔/升，294.7微升，0.59毫摩尔，5当量)。混合物在-78摄氏度反应30分钟，随后加入化合物60-14b(100毫克，0.118毫摩尔，1当量)。混合物在-78摄氏度反应1小时后，加入三乙胺(125.56毫克，1.18毫摩尔，10当量)。混合物在-78摄氏度反应15分钟后，自然升至室温(～1小时)。反应结束后，将反应液倒入冰水中淬灭，所得混合物用氯仿/异丙醇(3/1，10毫升×3)萃取，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥。减压浓缩除去溶剂，得到化合物60-15b粗品(白色固体，98毫克，产率98％)。MS(ESI,m/z):822.55[M+H2O+H]+。
步骤16：
在0摄氏度搅拌条件下，向化合物60-4(70.18毫克，0.087毫摩尔，1.5当量)的甲醇(1毫升)溶液中缓慢加入乙酸钠(22.50毫克，0.261毫摩尔，4.5当量)。混合物在25摄氏度下反应10分钟，随后依次加入氰基硼氢化钠(7.66毫克，0.116毫摩尔，2.0当量)和化合物60-15b(49毫克，0.058毫摩尔，1当量)。混合物在室温下反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液减压浓缩除去多余溶剂得到粗产品。所得粗产品通过制备级薄层层析法进行纯化(展开剂体系：二氯甲烷/甲醇＝7/1)，得到化合物60-16b(白色固体，36毫克，产率49％)。MS(ESI,m/z):607.35[M/2+H]+。
步骤17：
在0摄氏度搅拌条件下，向化合物60-16b(36毫克，0.028毫摩尔，1.0当量)的苯甲醚(2毫升)溶液中缓慢滴加三氟乙酸(2毫升)。混合物在25摄氏度下反应1小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。所得粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在30分钟内用10％→60％的甲醇/水流动相(0.1％甲酸)进行洗脱；检测器,UV254/220纳米；得到化合物60(白色固体，18毫克，产率57％)。MS(ESI,m/z):1069.95[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+D2O)δ8.20(s,1H),7.68(d,J＝8.1Hz,1H),7.61–7.50(m,1H),7.39(t,J＝7.7Hz,1H),7.31(d,J＝2.8Hz,1H),7.16(d,J＝7.3Hz,1H),7.10–7.00(m,2H),6.92(d,J＝2.8Hz,1H),5.43–5.21(m,1H),5.08–4.97(m,1H),4.91–4.77(m,1H),4.68–4.54(m,1H),4.49–4.27(m,2H),4.27–4.06(m,3H),4.06–3.96(m,1H),3.80–3.72(m,1H),3.70–3.64(m,1H),3.34–3.22(m,5H),3.22–3.14(m,1H),3.14–3.00(m,3H),2.99–2.82(m,2H),2.74–2.56(m,5H),2.50–2.37(m,7H),2.36–2.20(m,4H),2.19–2.14(m,2H),2.13–2.03(m,1H),2.02–1.94(m,1H),1.91–1.56(m,7H),1.56–1.45(m,1H),1.28–1.06(m,2H),0.93–0.81(m,3H)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6+D2O)δ-133.18,-140.54,-171.31.
实施例12
3-(5-(4-((1-(((2R，6R，7aS)-7a-((((2R或2S，6aS，7S，10R)-2-(8-乙基-3-萘酚-1-基)-1,3-二氟-5,6,6a,7,8,9,10,11-八氢-7,10-表氨基氮卓[1'，2'：5,6][1,5]氧氮杂[4,3,2-de]喹唑啉-14-基)氧基)甲基)-6-氟代六氢-1H-吡咯啉-2-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-1-氧杂异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮三氟乙酸盐61
步骤1：
在0摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物8-叔丁氧羰基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷(30克，134.2毫摩尔，1当量)和无水碳酸钾(39.09克，268.496毫摩尔，2当量)的乙腈溶液(300毫升)中缓慢滴加苄溴(26.59克，147.67毫摩尔，1.1当量)，混合物在80摄氏度反应6小时。该反应过程通过液质和薄层层析监控。反应结束后，反应体系冷却至室温，过滤除去多余的碳酸钾，滤液减压浓缩得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→30％甲基叔丁基醚/石油醚梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物61-1(淡黄色固体，33克，产率77％)。MS(ESI,m/z):303.4[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.30(d,J＝4.4Hz,4H),7.25–7.19(m,1H),4.15–4.11(m,2H),3.47(s,2H),2.62–2.58(m,2H),2.29–2.25(m,2H),1.99–1.74(m,4H),1.46(s,9H)。
步骤2：
在0摄氏度搅拌条件下，向化合物61-1(33克，103.6毫摩尔，1当量)的水(330毫升)和二甲基亚砜(825毫升)的混合溶液中依次加入碘(221.57克，829.312毫摩尔，8当量)和碳酸氢钠(91.67克，1.04摩尔，10当量)，所得混合物在25摄氏度反应16小时。该反应过程通过液质和薄层层析监控。反应结束后将体系冷却至0摄氏度，缓慢加入1升硫代硫酸钠饱和溶液淬灭反应，混合物用乙酸乙酯(500毫升x3)萃取，合并后有机相用饱和食盐水(1升x3)清洗，无水硫酸钠干燥后，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。粗产品用甲基叔丁基醚/正己烷(1/5，200毫升)打浆纯化，得到化合物61-2(白色固体，29克，产率84％)。MS(ESI,m/z):261.1[M-tBu+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.33–7.24(m,3H),7.21–7.15(m,2H),4.71–4.32(m,4H),3.72–3.51(m,1H),2.89–2.74(m,1H),2.26–2.10(m,3H),1.67–1.55(m,1H),1.44(s,9H)。
步骤3：
通过超临界液相色谱对本实施例步骤2所得化合物61-2(28克)进行手性拆分：手性柱CHIRALPAK IC,5x25厘米,5微米；流动相A：超临界二氧化碳，流动相B：异丙醇(0.5％，2摩尔/升氨甲醇)；流速：200毫升/分钟；柱温：35摄氏度；用40％流动相B洗脱；检测器UV220纳米，得到两个产品。较短保留时间(5.26分钟)的产品为化合物61-2a(白色固体，11克，回收率39％)，MS(ESI,m/z):261.1[M-tBu+H]+；[α]D 25＝-2.1(c＝0.34,甲醇)；较长保留时间(7.92分钟)的产品为化合物61-2b(白色固体，11克，产率39％)，MS(ESI,m/z):261.1[M-tBu+H]+；[α]D 25＝+3.8(c＝0.34,甲醇)。
步骤4：
在0摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物61-2a(10克，30.025毫摩尔，1当量)和羰基二(三苯基膦)氯化铱(2.47克，3.00毫摩尔，0.1当量)的二氯甲烷(100毫升)溶液中缓慢加入1,1,3,3-四甲基二硅氧烷(12.74克，90.075毫摩尔，3当量)，混合物在25摄氏度氮气保护搅拌条件下反应1.5小时。待反应液澄清后将上述体系降至-78摄氏度，在-78摄氏度氮气保护搅拌条件下，向上述反应体系中缓慢滴加烯丙基溴化镁(1摩尔/升，45毫升，45.03毫摩尔，1.5当量)，滴加结束后，将反应体系缓慢升温室温后继续反应1小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，在0摄氏度搅拌条件下向反应液中缓慢加入500毫升饱和氯化铵溶液淬灭反应，混合物用乙酸乙酯(500毫升x3)萃取，合并后有机相，用饱和食盐水(1升)清洗，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→20％甲基叔丁基醚/石油醚梯度洗脱，得到两个化合物。化合物61-3a(无色油，7.26克，产率67％)。MS(ESI,m/z):343.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.37–7.27(m,4H),7.25–7.20(m,1H),5.84(s,1H),5.17–4.95(m,2H),4.42–4.00(m,2H),3.68(d,J＝13.4Hz,1H),3.50(d,J＝13.5Hz,1H),2.73–2.50(m,2H),2.37–2.29(m,1H),2.29–2.19(m,2H),1.96–1.63(m,4H),1.46(s,9H)。化合物61-3b(无色油，240毫克，产率2％)。MS(ESI,m/z):343.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34–7.27(m,4H),7.25–7.17(m,1H),5.81(s,1H),5.15–5.00(m,2H),4.22–3.91(m,3H),3.06(d,J＝13.8Hz,1H),2.69–2.40(m,3H),2.37–2.13(m,1H),2.11–1.90(m,2H),1.88–1.63(m,3H),1.45(s,9H)。
步骤5：
在0摄氏度搅拌条件下，向反应瓶中依次加入铁氰化钾(4.39克,13.3毫摩尔，2.4当量)，二水合锇酸钾(220毫克，0.555毫摩尔，0.1当量)、三乙烯二胺(130毫克，1.11毫摩尔，0.2当量)、碳酸钾(2.42克，16.64毫摩尔，3当量)、甲基磺酰胺(560毫克，5.548毫摩尔，1当量)和水(10毫升)，接着向上述混合物中滴加化合物61-3a(1.9克，5.548毫摩尔，1当量)的乙二醇二甲醚(5毫升)/叔丁醇(20毫升)溶液，加完0摄氏度继续反应2小时。该反应过程通过液质和薄层层析监控。反应结束后将体系冷却至0摄氏度，缓慢加入100毫升水稀释反应，混合物用氯仿/异丙醇(3/1，100毫升x3)萃取，合并后有机相用饱和食盐水(200毫升)清洗，无水硫酸钠干燥后，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→15％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物61-4(深黄色油状液体，2.1克，产率95％)。MS(ESI,m/z):377.1[M+H]+。
步骤6：
在25摄氏度搅拌条件下，向化合物61-4(2克，5.047毫摩尔，1当量)的乙腈(32毫升)和水(8毫升)的混合溶液中加入高碘酸钠(5.68克，25.235毫摩尔，5当量)，混合物在25摄氏度搅拌条件下反应0.5小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，过滤除去不溶物，滤液用氯仿/异丙醇(3/1，50毫升x3)萃取，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品61-5(淡黄色油状液，1.7克，产率93％)。粗产品不经纯化直接用于下一步反应。MS(ESI,m/z):345.1[M+H]+。
步骤7：
在0摄氏度搅拌条件下，向化合物61-5(1.7克，4.689毫摩尔，1当量)的甲醇(20毫升)溶液中分批加入硼氢化钠(280毫克，7.034毫摩尔，1.5当量)。加完混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物61-6(淡黄色油，1.2克，产率63％)。MS(ESI,m/z):347.3[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.35-7.28(m,4H),7.25-7.20(m,1H),4.44-4.30(m,1H),4.18-4.00(m,2H),3.59(d,J＝13.7Hz,2H),3.46-3.35(m,2H),2.72(d,J＝10.0Hz,1H),2.45(d,J＝10.8Hz,1H),2.24-2.21(m,1H),1.85(s,1H),1.74-1.55(m,5H),1.39(s,9H)。
步骤8：
在0摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物61-6(500毫克，1.371毫摩尔，1当量)的二氯甲烷(5毫升)溶液中依次加入咪唑(196.49毫克，2.742毫摩尔，2当量)和叔丁基二甲基氯硅烷(326.26毫克，2.056毫摩尔，1.5当量)。混合物在25摄氏度氮气保护搅拌条件下反应16小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→20％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物61-7(无色油，470毫克，产率70％)。MS(ESI,m/z):461.3[M+H]+。
步骤9：
在25摄氏度搅拌条件下，向化合物61-7(470毫克，0.969毫摩尔，1当量)的乙醇(10毫升)溶液中加入氢氧化钯/碳(氢氧化钯含量20％，95毫克)。所得混合物在25摄氏度1大气压力氢气氛围中反应3小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，过滤除去氢氧化钯/碳，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物61-8(无色油，370毫克，产率97％)。MS(ESI,m/z):371.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.29–3.95(m,2H),3.84–3.62(m,2H),3.18–3.03(m,1H),2.97–2.75(m,1H),2.59–2.45(m,1H),2.02–1.93(m,1H),1.90–1.75(m,4H),1.74–1.66(m,1H),1.46(s,9H),0.88(s,9H),0.05(s,6H)。
步骤10：
在0摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物61-8(331毫克，0.948毫摩尔，1当量)和N,N-二异丙基乙胺(380.8毫克，2.952毫摩尔，3当量)的二氯甲烷(5毫升)溶液中加入化合物60-8(350毫克，0.948毫摩尔，1当量)。所得混合物在25摄氏度氮气保护搅拌条件下反应3小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→20％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物61-9(黄色固体，580毫克，产率87％)。MS(ESI,m/z):665.1/667.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.71–5.15(m,1H),4.54–4.32(m,2H),4.10–3.82(m,1H),3.77–3.46(m,2H),3.42–3.03(m,1H),2.20–2.08(m,1H),2.02–1.69(m,4H),1.49(s,9H),1.27–1.07(m,1H),0.79(s,9H),-0.07(s,3H),-0.16(s,3H)。
步骤10：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物61-9(400毫克，0.571毫摩尔，1当量)和化合物52-4(151.47毫克，0.628毫摩尔，1.1当量)的N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)溶液中依次加入碳酸铯(391.34毫克，1.142毫摩尔，2当量)和三乙烯二胺(13.47毫克，0.114毫摩尔，0.2当量)。所得混合物在50摄氏度氮气保护搅拌条件下反应2小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液缓慢加入到50毫升冰水中淬灭反应，混合物用乙酸乙酯(50毫升x3)萃取，合并后有机相，用饱和食盐水(50毫升x3)清洗，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物61-10(白色固体，400毫克，产率77％)。MS(ESI,m/z):858.3/860.3[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.93–5.84(m,1H),5.49–5.02(m,4H),4.36–4.02(m,5H),4.00–3.94(m,2H),3.87(s,1H),3.69–3.62(m,1H),3.54(s,1H),3.45(d,J＝6.3Hz,3H),3.31–3.00(m,3H),2.86–2.55(m,2H),2.46–2.27(m,2H),2.26–2.11(m,2H),1.97–1.75(m,5H),1.48(s,9H),0.76(s,9H),-0.09(s,3H),-0.17(s,3H)。
步骤11：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物61-10(390毫克，0.431毫摩尔，1当量)的N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液中加入氟化铯(344.88毫克，2.155毫摩尔，5当量)。所得混合物在80摄氏度氮气保护搅拌条件下反应16小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。所得粗品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物61-11(白色固体，300毫克，产率91％)。MS(ESI,m/z):724.3/726.3[M+H]+。
步骤12：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物61-11(290毫克，0.380毫摩尔，1当量)和化合物50-1(205.45毫克，0.570毫摩尔，1.5当量)的甲苯(5毫升)和水(1毫升)混合溶液中依次加入三(二亚苄基丙酮)二钯(36.65毫克，0.038毫摩尔，0.1当量)，3-(叔丁基)-4-(2,6-二甲氧基苯基)-2,3-二氢苯并[D][1,3]氧,膦戊轭(26.44毫克，0.076毫摩尔，0.2当量)和磷酸钾(254.85毫克，0.570毫摩尔，3当量)。所得混合物在80摄氏度氮气保护搅拌条件下反应4小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。所得粗品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物61-12(白色固体，210毫克，产率61％)。MS(ESI,m/z):860.4[M+H]+。
步骤13：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物61-12(200毫克，0.221毫摩尔，1当量)和1,3-二甲基巴比妥酸(108.94毫克，0.663毫摩尔，3当量)的二氯甲烷溶液中加入四(三苯基膦)钯(26.87毫克，0.022毫摩尔，0.1当量)。所得混合物在25摄氏度氮气保护搅拌条件下反应16小时。该反应过程通过液质和薄层层析监控。反应结束后，减压浓缩除去多余溶剂。所得粗品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物61-13(黄色固体，160毫克，产率83％)。MS(ESI,m/z):820.4[M+H]+。
步骤14：
/>
通过高效液相色谱法对本实施例步骤13所得化合物61-13(180毫克)进行手性拆分：手性柱CHIRALPAK ID,2x25厘米,5微米；流动相A：正己烷/甲基叔丁基醚(0.5％2摩尔/升氨甲醇)(50％/50％)，流动相B：甲醇；流速：20毫升/分钟；用10％流动相B洗脱；检测器UV216/244纳米，得到两个产品。较短保留时间(7.73分钟)的产品为化合物61-13a(白色固体，30毫克，回收率18％)，MS(ESI,m/z):820.4[M+H]+；较长保留时间(13.395分钟)的产品为化合物61-13b(白色固体，100毫克，产率62％)，MS(ESI,m/z):820.4[M+H]+。
步骤15：
在零下78摄氏度氮气保护搅拌条件下，向二甲基亚砜(20.01毫克，0.246毫摩尔，6当量)的二氯甲烷(1毫升)溶液中缓慢滴加草酰氯(27.09毫克，0.205毫摩尔，5当量)。所得混合物在零下78摄氏度氮气保护搅拌条件下反应30分钟。随后向上述反应体系中滴加化合物61-13a(35毫克，0.041毫摩尔，1.0当量)的二氯甲烷溶液(0.5毫升)。所得混合物在零下78摄氏度氮气保护搅拌条件下反应1小时。随后，在-78摄氏度氮气保护搅拌条件下，向上述反应体系中加入三乙胺(43.2毫克，0.41毫摩尔，10.0当量)，混合物在零下78摄氏度氮气保护搅拌条件下反应20分钟，缓慢升温至室温继续反应1小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液倒入水(10毫升)中淬灭，混合物用三氯甲烷/异丙醇(3/1，10毫升x3)萃取，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到化合物61-14粗品(黄色油，32毫克，产率91％)。MS(ESI,m/z):836.4[M+H2O+H]+。
步骤16：
在25摄氏度搅拌条件下，向化合物60-4(42.23毫克，0.053毫摩尔，1.5当量)的甲醇(1毫升)的溶液中加入醋酸钠(13.54毫克，0.158毫摩尔，4.5当量)，混合物在25摄氏度搅拌条件下反应10分钟。随后向上述体系中依次加入氰基硼氢化钠(4.61毫克，0.07毫摩尔，2当量)和化合物61-14(30毫克，0.035毫摩尔，1当量)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1.5小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品，所得粗品通过制备薄层层析法进行纯化(展开剂：甲醇/二氯甲烷＝1/8)，得到化合物61-15(淡黄色固体，30.0毫克，产率70％)。MS(ESI,m/z):1227.6[M+H]+。
步骤17：
在0摄氏度搅拌条件下，向化合物61-16(30.0毫克，0.023毫摩尔，1.00当量)的苯甲醚(1毫升)溶液中缓慢滴加三氟乙酸(1毫升)。混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1小时。反应过程通过液质监控。反应结束后，减压浓缩除去溶剂得到粗产品，所得粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在20分钟内用0％→95％的甲醇/水流动相(0.1％甲酸)进行洗脱；检测器,UV254/220纳米；得到化合物61(白色固体，17.0毫克，产率57％)。MS(ESI,m/z):542.5[M/2+H]+；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.66–7.57(m,2H),7.38–7.30(m,1H),7.30–7.21(m,1H),7.18–7.11(m,1H),7.10–6.99(m,2H),6.94–6.87(m,1H),5.47–5.21(m,2H),5.14–5.05(m,1H),4.58–4.48(m,1H),4.45–4.36(m,3H),4.36–4.24(m,2H),3.99–3.85(m,2H),3.81(d,J＝6.3Hz,1H),3.61–3.37(m,5H),3.37–3.32(m,3H),3.26–3.18(m,1H),3.16–3.01(m,2H),3.00–2.71(m,6H),2.69–2.54(m,5H),2.53–2.42(m,4H),2.42–2.22(m,4H),2.21–1.79(m,10H),1.60–1.34(m,3H),1.04–0.84(m,3H)；19F NMR(376MHz,CD3OD)δ-76.89,-135.39,-138.36,-173.74。
实施例13
3-(5-(4-((1-(((2R，6R，7aS)-7a-((((5aS，6S，9R)-2-((S或R)-6-氨基-4-甲基-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1,3-二氟-5a,6,7,8,9,10-六氢-5H-6,9-表氨基氮卓[2'，1'：3,4][1,4]氧杂氮卓[5,6,7]喹唑啉-13-基)氧基)甲基)-6-氟代六氢-1H-吡咯烷-2-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-1-氧代异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮二甲酸盐62a；3-(5-(4-((1-(((2R，6R，7aS)-7a-((((5aS，6S，9R)-2-((R或S)-6-氨基-4-甲基-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1,3-二氟-5a,6,7,8,9,10-六氢-5H-6,9-表氨基氮卓[2'，1'：3,4][1,4]氧杂氮卓[5,6,7]喹唑啉-13-基)氧基)甲基)-6-氟代六氢-1H-吡咯烷-2-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-1-氧代异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮二三氟乙酸盐62b
步骤1
化合物62-1参照专利(WO2022035790A1)合成得到。
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物62-1(4.0克，8.42毫摩尔，1.0当量)、六甲基二锡(5.23克，15.17毫摩尔，1.8当量)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯四氢呋喃络合物(649.13毫克，0.84毫摩尔，0.1当量)和1,4-二氧六环(40毫升)。所得混合物在100摄氏度氮气保护搅拌条件下反应20小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在25分钟内用5％→95％的乙腈/水流动相(0.1％碳酸氢铵)进行洗脱；检测器，UV 254/200纳米；得到化合物62-2(黄色油状，800毫克，产率16％)。MS(ESI,m/z):577.1/579.1/581.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.00–6.88(m,4H),6.72–6.60(m,4H),6.14(s,1H),4.56(s,4H),3.57(s,6H),2.13–2.02(m,3H),0.07(s,9H)；19F NMR(377MHz,CD3OD)δ-56.55。
步骤2
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入三乙烯二胺(11.19毫克，0.095毫摩尔，0.1当量)、化合物60-11(500毫克，0.948毫摩尔，1.0当量)、碳酸铯(649.94毫克，1.896毫摩尔，2.0当量)、化合物52-4(228.70毫克，0.948毫摩尔，1.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)。所得混合物在80摄氏度氮气保护搅拌条件下反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在25分钟内用5％→95％的甲醇/水流动相(0.1％碳酸氢铵水溶液)进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物62-3(类白色固体，760毫克，产率51％)。MS(ESI,m/z):710.2/712.2[M+H]+。
步骤3
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物62-2(339.3毫克，0.200毫摩尔，1.5当量)、化合物62-3(280毫克，0.39毫摩尔，1.0当量)、四(三苯基膦)钯(225.2毫克，0.195毫摩尔，0.5当量)、碘化亚铜(37.05毫克，0.195毫摩尔，0.5当量)、氯化锂的四氢呋喃溶液(0.5摩尔/升，1.95毫升，0.975毫摩尔，2.5当量)和N,N-二甲基甲酰胺(3毫升)。所得混合物在100摄氏度氮气保护搅拌条件下反应16小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在25分钟内用5％→95％的乙腈/水流动相(0.1％碳酸氢铵)进行洗脱；检测器，UV 254/220纳米；得到化合物62-4(白色固体，150毫克，产率36％)。MS(ESI,m/z):1046.5[M+H]+。
步骤4
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物62-4(150毫克，0.143毫摩尔，1.0当量)，1,3-二甲基巴比妥酸(44.62毫克，0.286毫摩尔，2当量)，四(三苯基膦)钯(16.51毫克，0.014毫摩尔，0.1当量)和二氯甲烷(2毫升)，所得混合物在25摄氏度反应16小时，反应过程通过液质和薄色谱层层析监控。反应结束后，反应液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。粗产品通过硅胶柱层析法纯化，用0％→8％的氨甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压浓缩除去溶剂，得到化合物62-5(白色固体，110毫克，产率70％)。MS(ESI,m/z):1006.4[M+H]+。
步骤5
通过高效液相色谱法对本实施例步骤4所得化合物62-5(110毫克)进行手性拆分：手性柱CHIRALPAK IE,3x25厘米,5微米；流动相A：正己烷(10毫摩尔/升氨甲醇溶液)，流动相B：乙醇；流速：35毫升/分钟；在50分钟内用30％的B相进行洗脱，检测器UV 210/228纳米，得到两个产品。较短保留时间(32.5分钟)的产品为化合物62-5a(白色固体，50毫克，回收率45％)，MS(ESI,m/z):1006.4[M+H]+；较长保留时间(42.0分钟)的产品为化合物62-5b(白色固体，50毫克，回收率45％)，MS(ESI,m/z):1006.4[M+H]+。
步骤6
在零下78摄氏度氮气保护搅拌条件下，向二甲基亚砜(35.34毫克，0.25毫摩尔，5.0当量)的二氯甲烷(0.5毫升)溶液中缓慢滴加草酰氯(0.1毫升，0.20毫摩尔，4当量，2摩尔/升)。所得混合物在零下78摄氏度氮气保护搅拌条件下反应30分钟。随后向上述反应体系中滴加化合物62-5a(50毫克，0.05毫摩尔，1.0当量)的二氯甲烷(0.5毫升)溶液，所得混合物在零下78摄氏度氮气保护搅拌条件下反应1小时。随后，在零下78摄氏度氮气保护搅拌条件下，向上述反应体系中加入三乙胺(40毫克，0.40毫摩尔，8.0当量)，混合物在零下78摄氏度氮气保护搅拌条件下反应20分钟，再缓慢升温至25摄氏度，并在25摄氏度氮气保护搅拌条件下反应1小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液倒入冰水(20毫升)中淬灭，混合物用三氯甲烷/异丙醇(3/1，20毫升x3)萃取，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到化合物62-6a(黄色油，50毫克)。MS(ESI,m/z):1022.4[M+H2O+H]+。
步骤7
在25摄氏度搅拌条件下，向化合物60-4(57.5毫克，0.075毫摩尔，1.5当量)的甲醇(1毫升)溶液中加入乙酸钠(18.45毫克，0.225毫摩尔，4.5当量)，混合物在25摄氏度搅拌条件下反应10分钟。随后向上述反应体系中加入氰基硼氢化钠(4.72毫克，0.075毫摩尔，1.5当量)和化合物56-4a(50毫克，0.05毫摩尔，1.0当量)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品，粗产品通过制备薄层层析法进行纯化(展开剂：甲醇/二氯甲烷＝1/8)得到化合物62-7a(白色固体，40毫克，产率60％)。MS(ESI,m/z):1413.7[M+H]+。
步骤8
在0摄氏度搅拌条件下，向化合物62-7a(40毫克，0.028毫摩尔，1.00当量)的苯甲醚(2毫升)溶液中滴加三氟乙酸(2毫升)。混合物在60摄氏度搅拌条件下反应4小时，反应过程通过液质来监控。反应结束后，反应液浓缩得到粗产品。所得粗产品通过高压制备(C18柱)进行纯化，流动相A：水(0.1％甲酸)；流动相B:甲醇，在30分钟内用10％→40％的B相进行洗脱；检测器UV254/220纳米。得到化合物62a(白色固体，10毫克，产率53％)。MS(ESI,m/z):1073.5[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.37(s,2H),7.63(d,J＝8.4Hz,1H),7.11–7.01(m,2H),6.59(s,1H),5.49–5.31(m,1H),5.18–5.06(m,2H),4.67–4.58(m,1H),4.52–4.45(m,1H),4.42–4.37(m,2H),4.36–4.24(m,3H),4.14–3.98(m,2H),3.57–3.41(m,4H),3.40–3.33(m,5H),3.28–3.18(m,1H),3.15–3.06(m,2H),2.97–2.74(m,6H),2.70–2.57(m,4H),2.53–2.40(m,5H),2.39–2.27(m,3H),2.26–2.09(m,3H),2.08–1.95(m,5H),1.92–1.81(m,2H),1.55–1.38(m,2H)；19F NMR(377MHz,CD3OD)δ-56.27,-135.83,-143.18,-173.55。
步骤8：
参照本实施例化合物62a的合成方法，从化合物62-5b出发得到化合物62b(白色固体，5毫克)。MS(ESI,m/z):1073.5[M+H]+；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.64(d,J＝8.8Hz,1H),7.12–7.02(m,2H),6.59(s,1H),5.51–5.31(m,1H),5.15–5.06(m,2H),4.66–4.58(m,1H),4.57–4.48(m,1H),4.45–4.28(m,5H),4.21–4.08(m,2H),3.65–3.52(m,2H),3.52–3.43(m,3H),3.42–3.34(m,5H),3.17–3.06(m,2H),2.98–2.82(m,5H),2.82–2.76(m,1H),2.76–2.63(m,4H),2.58–2.46(m,2H),2.46–2.36(m,6H),2.36–2.22(m,2H),2.18–1.96(m,6H),1.95–1.82(m,2H),1.54–1.41(m,2H)；19F NMR(377MHz,CD3OD)δ-56.30,-76.92,-135.53,-142.97,-173.64。
实施例14
3-(5-(4-((1-(2-((2S，6R，7aS)-7a-((((7S或7R)-4-(3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹啉-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯烷-2-基)乙基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-1-氧代异吲哚-2-基-哌啶-2,6-二酮四三氟乙酸盐63
步骤1：
在25摄氏度搅拌条件下，向化合物60-4(71.26毫克，0.088毫摩尔，1.5当量)的甲醇(1毫升)的溶液中加入醋酸钠(22.85毫克，0.265毫摩尔，4.5当量)，混合物在25摄氏度搅拌条件下反应10分钟。随后向上述反应体系中加入氰基硼氢化钠(11.67毫克，0.177毫摩尔，3当量)和化合物53-7a(50毫克，0.059毫摩尔，1当量)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1.5小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品，所得粗品通过制备薄层层析法进行纯化(展开剂比例：甲醇/二氯甲烷＝1/8)，得到化合物63-1(白色固体，50.00毫克，产率66％)。MS(ESI,m/z):1217.6[M+H]+。
步骤2：
在0摄氏度搅拌条件下，向化合物63-1(50.0毫克，0.041毫摩尔，1.00当量)的苯甲醚(1毫升)溶液中缓慢滴加三氟乙酸(1毫升)。混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1小时。反应过程通过液质监控。反应结束后，减压浓缩除去溶剂得到粗产品，所得粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在20分钟内用5％→50％的乙腈/水流动相(0.05％三氟乙酸)进行洗脱；检测器,UV254/220纳米；得到化合物63(黄色固体，40.0毫克，产率65％)。MS(ESI,m/z):1073.45[M+H]+；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.74–7.64(m,3H),7.31(d,J＝2.6Hz,1H),7.30–7.22(m,1H),7.20–7.11(m,2H),6.98(d,J＝2.6Hz,1H),5.72–5.53(m,1H),5.16–5.06(m,1H),4.76–4.60(m,4H),4.49–4.36(m,2H),4.31–4.17(m,2H),4.15–4.05(m,1H),4.03–3.80(m,5H),3.78–3.60(m,4H),3.59–3.35(m,5H),3.25–3.11(m,5H),3.09–2.97(m,2H),2.96–2.84(m,1H),2.82–2.60(m,5H),2.60–2.50(m,1H),2.49–2.36(m,2H),2.35–2.25(m,1H),2.25–2.05(m,8H),2.03–1.82(m,2H),1.74–1.56(m,2H),0.85–0.70(m,3H)；19F NMR(377MHz,CD3OD)δ-77.03,-116.09,-120.99,-124.26,-174.68。
实施例15
3-(5-(4-((1-(((2R，6R，7aS)-7a-((((5aS，6S，9R)-2-(8-乙基-3-萘酚-1-基)-1,3-二氟-5a,6,7,8,9,10-六氢-5H-6,9-表氨基氮卓[2'，1'：3,4][1,4]氧杂氮杂卓[5,6,7-de]喹唑啉-13-基)氧基)甲基)-6-氟代六氢-1H-吡咯烷-2-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1基)-1-氧代异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮三盐酸盐64
步骤1：
在25摄氏度搅拌条件下，向(S)-3-哌啶甲酸乙酯(1克，6.36毫摩尔，1当量)的丙酮(10毫升)溶液中依次加入3-溴丙醇(972.5毫克，7毫摩尔，1.1当量)、碳酸钾(2.64毫克，19.08毫摩尔，3当量)和碘化钠(106毫克，19.08毫摩尔，0.1当量)，所得混合物在70摄氏度搅拌条件下反应18小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，过滤除去不溶物，滤饼用丙酮(10毫升x3)清洗，合并后滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到化合物64-1(无色油，1克，产率73％)。MS(ESI,m/z):216.2[M+H]+。
步骤2：
在0摄氏度搅拌条件下，向化合物64-1(1克，4.64毫摩尔，1当量)的二氯甲烷(10毫升)溶液中加入三苯基膦(1.22克，4.64毫摩尔，1当量)和四溴化碳(2.31克，6.97毫摩尔，1.5当量)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，用0％→5％甲醇:三乙胺(3:2)/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物64-2(无色油，1克，产率77％)。MS(ESI,m/z):278.1/280.1[M+H]+。
步骤3：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物64-2(1克，3.59毫摩尔，1当量)的丙酮(10毫升)溶液中加入L-脯氨醇(436.3毫克，4.31毫摩尔，1.2当量)和碳酸钾(1.49克，10.78毫摩尔，3当量)，所得混合物在70摄氏度搅拌条件下反应18小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，过滤除去不溶物，滤饼用丙酮(10毫升x3)清洗，合并后滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。所得粗产品通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在20分钟内用5％→50％的甲醇/水流动相(0.1％碳酸氢铵)进行洗脱；检测器,UV254/220纳米；得到化合物64-3(淡黄色油，230毫克，产率22％)。MS(ESI,m/z):299.2[M+H]+。
步骤4：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物48-1(100毫克，0.155毫摩尔，1当量)和化合物64-3(46.4毫克，0.155毫摩尔，1当量)的N,N-二甲基甲酰胺(2毫升)溶液中加入三乙烯二胺(3.49毫克，0.031毫摩尔，0.2当量)和碳酸铯(101.3毫克，0.311毫摩尔，3当量)，所得混合物在80摄氏度氮气保护搅拌下反应2小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液倒入饱和氯化铵溶液(10毫升)中淬灭反应。所得混合物用乙酸乙酯(10毫升x3)萃取，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，用0％→15％甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物64-4(淡黄色固体，50毫克，产率35％)。MS(ESI,m/z):905.6[M+H]+。
步骤5：
在0摄氏度搅拌条件下，向化合物64-4(50毫克，0.055毫摩尔，1当量)的四氢呋喃/甲醇/水(0.5毫升/0.5毫升/0.5毫升)溶液中加入氢氧化锂一水合物(4.64毫克，0.11毫摩尔,2当量)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过减压旋蒸除去有机溶剂。所得混合物用水(1毫升)稀释，在0℃下用盐酸(1摩尔/升)调pH＝5，所得混合物通过减压旋蒸除去溶剂得到化合物64-5粗品(淡黄色固体，45毫克)。MS(ESI,m/z):877.5[M+H]+。
步骤6：
在25摄氏度搅拌条件下，向化合物64-5(45毫克，0.051毫摩尔，1当量)的N,N-二甲基甲酰胺(1毫升)溶液中加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(23.41毫克，0.62毫摩尔，1.2当量)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应10分钟。随后向反应液中依次加入(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(29.62毫克，0.062毫摩尔,1.2当量)和N,N-二异丙基乙胺(19.9毫克，0.153毫摩尔，3当量)。混合物在25摄氏度反应2小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过反相色谱柱(C18柱)进行纯化，在20分钟内用5％→95％的甲醇/水(0.1％盐酸)流动相进行洗脱；检测器,UV254/220纳米；得到化合物64-6(黄色固体，50毫克，产率75％)。MS(ESI,m/z):1303.6。
步骤7：
在0摄氏度搅拌条件下，向化合物64-6的甲醇(1毫升)溶液中加入盐酸的1,4-二氧六环溶液(4摩尔/升，1毫升)。所得混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，通过减压旋蒸除去溶剂得到粗产品。所得粗产品通过高效液相色谱法进行纯化：色谱柱：XBridge Shield RP18 OBD Column 30*150毫米,5微米；流动相A：水(0.05％盐酸)，流动相B：乙腈；流速：60毫升/分钟；在8分钟内以用10％→28％的流动相B梯度洗脱，检测器：254/220纳米，得到化合物64(黄色固体，18毫克，产率30％)。MS(ESI,m/z):1159.5。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+D2O)δ9.05(s,1H),7.85–7.72(m,2H),7.52–7.31(m,6H),7.09–7.00(m,1H),4.97–4.80(m,1H),4.79–4.64(m,2H),4.61–4.46(m,3H),4.45–4.39(m,1H),4.34–4.27(m,1H),4.26–4.15(m,2H),4.05–3.94(m,1H),3.94–3.84(m,2H),3.73–3.35(m,7H),3.35–3.08(m,4H),3.08–2.94(m,2H),2.93–2.80(m,1H),2.50–2.45(m,3H),2.40–2.17(m,4H),2.16–1.74(m,12H),1.53–1.33(m,4H),0.94(s,9H),0.76(t,J＝6.9Hz,3H)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6+D2O)δ-116.22,-118.84,-123.23。
实施例16
3-((4-(4-(((2R，6R，7aS)-7a-((((5aS，6S，9R)-2-((R或S)-6-氨基-4-甲基-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1,3-二氟-5a,6,7,8,9,10-六氢-5H-6,9-表氨基氮卓[2'，1'：3,4][1,4]氧杂氮卓[5,6,7-de]喹唑啉-13-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯啉-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮；四三氟乙酸盐65
/>
步骤1
在0摄氏度搅拌条件下，将化合物55-1(100毫克，0.234毫摩尔，1.0当量)溶于3毫升二氯甲烷中，缓慢滴加1毫升三氟乙酸，混合物在25摄氏度反应1小时，反应过程通过液质来监控。反应结束后，反应液浓缩得到粗产品化合物55-2(绿色油，120毫克)，MS(ESI,m/z):307.2[M+H]+。
步骤2
在25摄氏度搅拌条件下，将化合物55-2(29毫克，0.068毫摩尔，1.5当量)和乙酸钠(5.88毫克，0.068毫摩尔，1.5当量)溶于1毫升甲醇中，混合物在25摄氏度反应10分钟，然后将氰基硼氢化钠(9.01毫克，0.135毫摩尔，3当量)和化合物62-6a(48毫克，0.045毫摩尔，1.0当量)依次加入混合体系中。混合物在25摄氏度搅拌条件下反应1小时，反应过程通过液质监控。反应结束后，反应液浓缩得到粗产品，粗产品通过制备薄层层析法进行纯化，用0％→15％的甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压浓缩除去溶剂得到化合物65-1(白色固体，50毫克，产率79％)。MS(ESI,m/z):1294.4[M+H]+。
步骤3
在0摄氏度搅拌条件下，将化合物65-1(50毫克，0.036毫摩尔，1.00当量)溶于苯甲醚(2毫升)，然后滴加三氟乙酸(2毫升)。混合物在60摄氏度下反应2小时，反应过程通过液质来监控。反应结束后，反应液浓缩得到粗产品。所得粗产品通过高压制备(C18柱)进行纯化，流动相A：水(0.05％三氟乙酸)；流动相B:乙腈，在30分钟内用5％→40％的B相进行洗脱；检测器UV254/220纳米。得到化合物65(白色固体，8.6毫克，产率15％)。MS(ESI,m/z):954.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ6.93(s,1H),6.62(s,1H),6.59–6.43(m,2H),5.78–5.46(m,1H),5.33–5.06(m,1H),4.79–4.52(m,5H),4.49–4.17(m,5H),4.12–3.79(m,3H),3.71–3.38(m,6H),2.89–2.56(m,6H),2.44(s,3H),2.41–2.20(m,4H),2.19–2.04(m,3H),1.99–1.89(m,1H),1.76–1.56(m,2H),1.07–1.00(m,1H)；19F NMR(377MHz,CD3OD)δ-56.42,-77.21,-124.78,-135.35,-141.93,-174.62。
实施例17
4-(4-(4-((1-(((2R，6R，7aS)-7a-((4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]Octan-3-yl)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯烷-2-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)-5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-N-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺66
合成路线如下：
步骤1：
参照文献WO2020207395合成得到化合物66-1。
在室温搅拌条件下，向化合物66-1(32毫克，0.063毫摩尔，1.00当量)的甲醇(2毫升)溶液中加入乙酸钠(23毫克，0.284毫摩尔，4.5当量)，搅拌10分钟加入NaCNBH3(12毫克，0.19毫摩尔，3.00当量)。混合物在25摄氏度搅拌条件下反应0.5小时，再加入化合物55-4a(50毫克，0.063毫摩尔，1.00当量)在40摄氏度搅拌条件下反应2小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过减压旋蒸除去溶剂。所得粗产品通过硅胶色谱柱进行纯化，在20分钟内用0％→10％的甲醇/二氯甲烷流动相进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物66-2(浅黄色固体，52毫克，产率64％)。MS(ESI,m/z):1284.6[M+H]+。
步骤2：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，依次向反应瓶中加入化合物66-2(52毫克，0.04毫摩尔，1.0当量)，4N盐酸二氧六环溶液(2毫升)和甲醇(2毫升)。混合物在室温氩气保护条件下搅拌反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液冷却至室温。将反应液减压浓缩得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→10％(7N氨甲醇溶液)/二氯甲烷梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂得到化合物66(白色固体，23毫克，50％)。MS(ESI,m/z):1140.7[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.73(dd,J＝8.9,6.2Hz,2H),7.59(d,J＝7.8Hz,1H),7.52–7.11(m,8H),7.03(s,1H),6.87(s,1H),6.29(s,1H),5.53(s,1H),5.38(ddd,J＝5.6,4.4,1.1Hz,1H),4.31(s,2H),3.97(dd,J＝26.4,14.0Hz,3H),3.19–3.03(m,4H),2.36(s,2H),2.24(t,J＝7.5Hz,4H),2.07(d,J＝6.1Hz,5H),1.65(d,J＝8.2Hz,4H),1.40–1.29(m,23H),1.02(d,J＝6.9Hz,3H),0.94(t,J＝6.7Hz,5H),0.84(t,J＝7.3Hz,2H).
实施例18
3-(5-(4-(1-(((2R，6R，7aS)-7a-((4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷基-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯烷-2-基)甲基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-1-氧异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮67
合成路线如下：
步骤1
在0摄氏度搅拌条件下，将化合物56-3(60毫克，0.108毫摩尔，1.0当量)溶于3毫升二氯甲烷中，缓慢滴加1毫升三氟乙酸，混合物在25摄氏度反应1小时，反应过程通过液质来监控。反应结束后，反应液浓缩得到粗产品化合物56-4(黄棕色固体，50毫克)，直接用于下一步反应，MS(ESI,m/z):426.2[M+H]+。
步骤2：
参照文献J.Med.Chem.2022,65,3123-3133.合成得到化合物67-1。
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物38-6(85.6毫克，0.2毫摩尔，1.00当量)、化合物52-4(45.8毫克，0.2毫摩尔，1当量)、DIEA(64.62毫克，0.5毫摩尔，2.5当量)和1，4-二氧六环(2毫升)。所得混合物在100摄氏度氩气保护搅拌条件下反应48小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液减压旋蒸除去溶剂得到粗产品，粗产品用硅胶柱层析法纯化，用0％→10％的甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物67-1(黄色固体，107毫克，产率86.2％)。MS(ESI,m/z):621.3[M+H]+。
步骤3：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，依次向反应瓶中加入化合物67-1(100毫克，0.161毫摩尔，1.0当量)，K3PO4(103毫克，0.485毫摩尔3当量)，硼酸酯(90毫克，0.17毫摩尔，1当量)，Ad2nBuP-Pd-G3(12毫克，0.016毫摩尔，0.1当量)，四氢呋喃(2毫升)。混合物在70摄氏度氩气气保护搅拌条件下反应16小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液冷却至室温。将反应液减压浓缩得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂得到化合物67-2(浅黄色固体，99毫克，63％)。MS(ESI,m/z):971.4[M+H]+。
步骤4：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物67-2(99毫克，0.101毫摩尔，1.0当量)，1,3-二甲基巴比妥酸(64毫克，0.409毫摩尔，4当量)，四(三苯基膦)钯(12毫克，0.01毫摩尔，0.1当量)和二氯甲烷(2毫升)，所得混合物在25摄氏度反应48小时，反应过程通过液质和薄色谱层层析监控。反应结束后减压浓缩除去多余的溶剂得到粗产品。粗产品通过硅胶柱层析法纯化，用0％→10％的甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物67-3(黄色固体，54.8毫克，产率58％)。MS(ESI,m/z):931.4[M+H]+。
步骤5：
在25摄氏度搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物67-3(100毫克，0.1毫摩尔，1.00当量)，IBX(200毫克，0.714毫摩尔，1.3当量)和乙酸乙酯(8毫升)。混合物在80摄氏度搅拌条件下反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，过滤，将滤液浓缩通过硅胶色谱柱进行纯化，在20分钟内用0％→10％的甲醇/二氯甲烷流动相进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物67-4(白色固体，93.0毫克，产率93％)。MS(ESI,m/z):930.4[M+H]+。
步骤6：
在室温搅拌条件下，向化合物60-4(90毫克，0.21毫摩尔，2.00当量)的甲醇(2毫升)溶液中加入乙酸钠(83毫克，1.01毫摩尔，10.00当量)，搅拌10分钟加入NaCNBH3(30毫克，0.47毫摩尔，3.00当量)。混合物在25摄氏度搅拌条件下反应0.5小时，再加入化合物67-4(100毫克，0.1毫摩尔，1.00当量)在30摄氏度搅拌条件下反应2小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，反应液通过减压旋蒸除去溶剂。所得粗产品通过硅胶色谱柱进行纯化，在20分钟内用0％→10％的甲醇/二氯甲烷流动相进行洗脱；检测器UV254/220纳米；得到化合物67-5(浅黄色固体，130毫克，产率90％)。MS(ESI,m/z):670.0[M/2+H]+。
步骤7：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物67-5(100毫克,0.0747毫摩尔,1当量)加入了DMF(1.5毫升)搅拌溶解，加入CsF(140毫克,2.228毫摩尔,30当量)。混合物在60摄氏度氮气保护条件下搅拌1小时，反应过程通过LCMS监控。反应结束后，冷却至室温，将反应液过滤，将滤液冻干得到化合物67-6(淡黄色固体，85毫克，产率97％)。
MS(ESI,m/z):[M/2+1]＝592.0
步骤8：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物9(85毫克,0.719毫摩尔,1当量)的苯甲醚(1毫升)溶液中，在0摄氏度滴加三氟醋酸(1毫升)。混合物在25摄氏度下搅拌2小时，反应过程通过薄层层析监控。反应结束后，减压浓缩除去溶剂得到混合物。将所得混合物用制备HPLC(kromasil 100-10-C18,30x250mm,MeOH in 0.1％FA from 20-60％)分离，收集产品冻干的化合物67的三氟乙酸盐(浅黄色固体，12.56毫克，产率16.8％)。
MS(ESI,m/z):[M/2+1]＝519.8.1H NMR(400MHz,MeOD)δ9.09(s,1H),8.13(s,2H),7.87(s,2H),7.66(d,J＝8.6Hz,2H),7.34(d,J＝12.1Hz,3H),7.22(s,2H),7.09(s,4H),5.58(s,1H),5.45(s,1H),5.18–5.04(m,2H),4.58(s,3H),4.39(t,J＝11.2Hz,5H),4.27(s,3H),3.91(d,J＝42.9Hz,6H),3.81–3.38(m,15H),3.19(s,4H),2.96(dd,J＝59.4,25.0Hz,14H),2.83–2.58(m,7H),2.46(dd,J＝26.4,11.9Hz,6H),2.08(d,J＝38.0Hz,16H),1.57(s,5H),1.31(d,J＝18.4Hz,4H).
实施例19
5-(4-(1-(2-((2S，6R，7aS)-7a-(((7S)-4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯烷-2-基)乙基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮68
合成路线如下：
步骤1：
将化合物68-1(160mg，0.35mmol，参考中间体60-4的合成方法制备)溶于甲醇(10mL)中，加入乙酸钠(154mg，1.88mmol)，反应液在20℃搅拌10分钟，加入化合物57-3a(190mg，0.24mmol)，反应液在20℃搅拌30分钟，加入氰基硼氢化钠(44mg，0.71mmol)，反应液在20℃搅拌3小时。应液用二氯甲烷(30mL)稀释，用水(10mL*2)和饱和食盐水(10mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到的粗产品通过柱层析纯化(甲醇/二氯甲烷＝0-20％)，得到化合物68-2(白色固体，160毫克，产率61.26％)。MS(ESI,m/z):1249.0[M+H]+。
步骤2：
将化合物68-2(180mg，0.144mmol)溶于苯甲醚(2mL)中，20℃加入三氟乙酸(2mL)。反应液在20℃搅拌1小时，反应液浓缩，得到的粗产品通过制备HPLC纯化得到化合物5-(4-(1-(2-((2S，6R，7aS)-7a-(((7S)-4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯烷-2-基)乙基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮化合物68的三氟乙酸盐(白色固体，105毫克，产率65.94％)。MS(ESI,m/z):1105.0[M+H]+。1HNMR(400MHz,MeOD)δ7.70(dd,J＝11.5,5.5Hz,2H),7.57(d,J＝11.2Hz,1H),7.48(d,J＝7.3Hz,1H),7.30(ddd,J＝18.8,7.2,2.5Hz,2H),7.00(d,J＝2.5Hz,1H),5.49(d,J＝53.8Hz,1H),5.11(dd,J＝12.5,5.5Hz,1H),4.74–4.46(m,5H),4.25(s,2H),4.13–3.38(m,8H),3.17(d,J＝7.8Hz,2H),3.05(d,J＝30.1Hz,2H),2.95–2.33(m,16H),2.31–1.87(m,12H),1.50(d,J＝11.2Hz,2H),1.33(d,J＝19.0Hz,1H),0.82(t,J＝7.4Hz,3H).
实施例20
3-(4-(4-(1-(2-((2S，6R，7aS)-7a-(((7S)-4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯烷-2-基)乙基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮69
合成路线如下：
步骤1：
将化合物69-1(150mg，0.40mmol，参考60-4的合成方法制备)溶于甲醇(10mL)中，加入乙酸钠(154mg，1.88mmol)，反应液在20℃搅拌10分钟，加入化合物53-7a(190mg，0.24mmol)，反应液在20℃搅拌30分钟，加入氰基硼氢化钠(44mg，0.71mmol)，反应液在20℃搅拌3小时。应液用二氯甲烷(30mL)稀释，用水(10mL*2)和饱和食盐水(10mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到的粗产品通过柱层析纯化(甲醇/二氯甲烷＝0-20％)，得到化合物69-2(白色固体，200毫克，产率73.16％)。MS(ESI,m/z):1162.0[M+H]+。
步骤2：
将化合物69-2(180mg，0.15mmol)溶于苯甲醚(2mL)中，20℃加入三氟乙酸(2mL)。反应液在20℃搅拌1小时，反应液浓缩，得到的粗产品通过制备HPLC纯化得到3-(4-(4-(1-(2-((2S，6R，7aS)-7a-(((7S)-4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯烷-2-基)乙基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮，化合物69的三氟乙酸盐(白色固体，102毫克，产率64.69％)。MS(ESI,m/z):1018.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.76–7.63(m,2H),7.33(d,J＝2.4Hz,1H),7.28(t,J＝9.4Hz,1H),7.17(d,J＝8.6Hz,2H),7.02–6.91(m,3H),5.55(dd,J＝52.5,35.9Hz,1H),4.68(dd,J＝25.3,13.5Hz,5H),4.26(s,2H),4.09–3.47(m,9H),3.31(s,2H),3.22–2.40(m,18H),2.22(dd,J＝11.7,6.3Hz,6H),2.00(dd,J＝30.0,22.5Hz,6H),1.56(d,J＝12.2Hz,2H),1.33(d,J＝19.1Hz,1H),0.82(t,J＝7.3Hz,3H).
实施例21
3-(4-(1-(((2R，6R，7aS)-7a-((((S)-4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯烷-2-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮70
第一步：
化合物55-4a(120mg，0.1512mmol)溶解在甲醇(2mL)中，加入化合物68-1(150mg，0.3279mmol)、氰基硼烷钠(20mg，0.3183mmol)和乙酸钠(120mg，1.463mmol)，将混合物在25℃下搅拌2小时。LCMS显示产物生成。反应液用二氯甲烷(50mL)稀释，用水(10mL)洗涤。有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物通过硅胶板(SiO2，DCM:MeOH＝10∶1)纯化，得到淡黄色固体产物叔丁基3-[2-[[(2R，6R，8S)-2-[[4-[[4-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-6-氟-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]哌嗪-1-基]甲基]-1-哌啶基]甲基]-6-氟-1,2,3,5,6,7-六氢吡咯嗪-8-基]甲氧基]-7-[8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)-1-萘基]-6,8-二氟-喹唑啉-4-基]-3,8-二氟氮杂环[3.2.1]辛烷-8-羧酸盐化合物70-1(150mg，0.12143mmol，产率80.32％)。LC-MS:m/z(M/2+H)+＝618.4。
第二步：
化合物70-1(100mg，0.080952mmol)溶解在二氯甲烷(1mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，将混合物在15℃下搅拌1小时。LCMS显示产物生成，将混合物浓缩，残留物通过制备HPLC纯化(方法：甲酸体系)，将样品浓缩以除去溶剂并冷冻干燥，得到淡黄色固体产物3-(4-(1-(((2R，6R，7aS)-7a-((((S)-4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯烷-2-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮，化合物70的甲酸盐(53mg，0.048570mmol，收率59.999％)。
1H-NMR(MeOD):δ8.33(t,J＝13.3Hz,2H),7.69(dt,J＝9.0,4.9Hz,2H),7.58(d,J＝11.0Hz,1H),7.51(t,J＝6.4Hz,1H),7.32(d,J＝2.7Hz,1H),7.27(td,J＝9.5,2.8Hz,1H),7.01(d,J＝2.5Hz,1H),5.58(d,J＝50.9Hz,1H),5.12(dd,J＝12.6,5.5Hz,1H),4.73–4.62(m,4H),4.27(d,J＝6.6Hz,2H),4.04(s,1H),3.97–3.70(m,5H),3.61(q,J＝10.0,5.8Hz,3H),3.41(t,J＝4.7Hz,4H),3.27(s,2H),3.22–3.12(m,2H),3.05–2.99(m,5H),2.86(dd,J＝13.5,4.7Hz,1H),2.81–2.65(m,6H),2.64–2.54(m,3H),2.44(dt,J＝14.5,5.3Hz,1H),2.14(d,J＝40.1Hz,8H),1.59(d,J＝13.6Hz,2H),0.81(t,J＝7.3Hz,3H)。LC-MS:m/z(M+H)+＝1093.5。HPCL：100％。
实施例22
5-(4-(1-(((2R，6R，7aS)-7a-((((S)-4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-2-基)氧)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯烷-2-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮71
合成路线如下：
第一步：
化合物55-4a(100mg，0.1260mmol)溶解在甲醇(2mL)中，加入化合物69-1(130mg，0.3509mmol，)、氰基硼烷钠(20mg，0.3183mmol)和乙酸钠(120mg，1.463mmol，)，将混合物在25℃下搅拌2小时。LCMS显示产物生成。混合物用二氯甲烷(50mL)稀释，用水(10mL)洗涤。有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物通过制备TLC(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，得到白色固体产物化合物71-1(60mg，0.052251mmol，产率41.48％)。LC-MS:m/z(M/2+H)+＝575.0。
第二步：
化合物71-1(60mg，0.052251mmol)溶解在二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，将混合物在15℃下搅拌1小时。LCMS显示产物生成，将混合物浓缩，残留物通过制备HPLC纯化(方法：甲酸)，浓缩样品以除去溶剂并冷冻干燥，得到白色固体产物5-(4-(1-(((2R，6R，7aS)-7a-((((S)-4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-2-基)氧)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯烷-2-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮，化合物71的甲酸盐(29mg，0.028879mmol，产率55.269％)。
1H-NMR(MeOD):δ7.71(d,J＝8.5Hz,2H),7.36–7.14(m,4H),7.02(d,J＝9.8Hz,3H),5.65(d,J＝51.0Hz,1H),4.73(d,J＝20.3Hz,4H),4.25(d,J＝18.2Hz,3H),4.06–3.79(m,6H),3.73(s,3H),3.51–3.10(m,18H),2.80–2.52(m,6H),2.38(d,J＝55.2Hz,2H),2.20(s,8H),1.74(s,2H),0.82(t,J＝7.4Hz,3H)。LC-MS:m/z(M+H)+＝1006.5。HPLC：100％。
实施例23
4-(4-(1-(2-((2S，6R，7aS)-7a-(((7S)-4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]Octan-3-yl)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯烷-2-基)乙基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-(S)-2,6-二氧哌啶-3-基)-2-氟苄酰胺72
合成路线如下：
步骤1：
在25摄氏度氩气保护搅拌条件下，依次向反应瓶中加入化合物72-1(2.67克，9.44毫摩尔，1.1当量)，化合物72-2(2.01克，8.58毫摩尔，1.0当量)，碳酸铯(6.15克，18.9毫摩尔，2.2当量)，1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(2.14克，3.43毫摩尔，0.4当量)，醋酸钯(0.39克，1.72毫摩尔，0.2当量)和二氧六环(20毫升)。混合物在110摄氏度氩气保护搅拌条件下反应16小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液冷却至室温。将反应液减压浓缩得到粗产品。所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂得到化合物72-3(浅黄色固体，3.01克，81％)。MS(ESI,m/z):436.4[M+H]+。
步骤2：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，依次向反应瓶中加入化合物72-3(1.01克，2.29毫摩尔，1.0当量)，氢氧化锂(0.29克，6.88毫摩尔3当量)，甲醇(16毫升)和水(4毫升)。混合物在60摄氏度氩气保护搅拌条件下反应10小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液冷却至室温。向反应液中加入1N的盐酸水溶液，调节pH值至中性，白色固体析出，过滤，干燥得到化合物72-4(浅黄色固体，702毫克，73％)。MS(ESI,m/z):422.4[M+H]+。
步骤3：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物72-4(350毫克，0.829毫摩尔，1.0当量)，化合物72-5((S)-3-氨基哌啶-2,6-二酮)(191毫克，1.16毫摩尔，1.4当量)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(239毫克，1.24毫摩尔，1.5当量)，1-羟基苯并三唑(168毫克，1.24毫摩尔，1.5当量)，N,N-二异丙基乙胺(536毫克，4.15毫摩尔，5当量)和N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)，所得混合物在25摄氏度反应16小时，反应过程通过液质和薄色谱层层析监控。反应结束后，加入水(5mL)，以乙酸乙脂萃取(10mLx3)，合并有机相，以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，所得粗产品通过硅胶柱层析进行纯化，流动相用0％→10％的甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物72-6(黄色固体，328毫克，产率75％)。MS(ESI,m/z):532.4[M+H]+。
步骤4：
将化合物72-6(328mg，0.265mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，20℃加入三氟乙酸(2mL)。反应液在20℃搅拌1小时，反应液浓缩，得到的粗产品通过制备HPLC纯化得到化合物72-7(白色固体，250毫克，产率63.16％)。化合物72-7直接用于下一步反应。
步骤5：
将化合物72-7(69mg，0.16mmol)溶于甲醇(10mL)中，加入乙酸钠(106mg，1.69mmol)，反应液在20℃搅拌10分钟，加入化合物53-7a(130mg，0.16mmol)，反应液在20℃搅拌30分钟，加入氰基硼氢化钠(30mg，0.48mmol)，反应液在20℃搅拌3小时。应液用二氯甲烷(30mL)稀释，用水(10mL*2)和饱和食盐水(10mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到的粗产品通过柱层析纯化(甲醇/二氯甲烷＝0-20％)，得到化合物72-8(白色固体，80毫克，产率40.64％)。MS(ESI,m/z):1123.0[M+H]+。
步骤6：
将化合物72-8(70mg，0.057mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，20℃加入三氟乙酸(2mL)。反应液在20℃搅拌1小时，反应液浓缩，得到的粗产品通过制备HPLC纯化(甲酸法)得到化合物4-(4-(1-(2-((2S，6R，7aS)-7a-(((7S)-4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]Octan-3-yl)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯烷-2-基)乙基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-(S)-2,6-二氧哌啶-3-基)-2-氟苄酰胺，化合物72的甲酸盐(白色固体，39毫克，产率63.16％)。MS(ESI,m/z):1079.0[M+H]+。1HNMR(400MHz,MeOD)δ8.54–8.36(m,2H),7.84–7.75(m,1H),7.74–7.61(m,2H),7.38–7.17(m,2H),7.05–6.94(m,1H),6.88–6.77(m,1H),6.77–6.64(m,1H),5.51–5.26(m,1H),4.89–4.77(m,6H),4.70–4.53(m,2H),4.49–4.31(m,2H),4.21–4.08(m,2H),3.91–3.74(m,2H),3.69–3.39(m,4H),3.32–3.25(m,3H),3.23–3.04(m,3H),3.04–2.77(m,3H),2.76–2.38(m,9H),2.36–2.20(m,4H),2.20–2.00(m,6H),1.98–1.76(m,4H),1.54–1.34(m,2H),0.88–0.71(m,3H).
实施例24
4-(4-(1-(((2R，6R，7aS)-7a-((((S)-4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-2-基)氧)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯烷-2-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((S)-2,6-二氧哌啶-3-基)-2-氟苄酰胺73
合成路线如下：
第一步：
化合物55-4a(190mg，0.2154mmol)溶解在甲醇(2mL)中，加入化合物72-7(45mg，0.1043mmol)、氰基硼烷化钠(20mg，0.3183mmol)和乙酸钠(180mg，2.194mmol)，将混合物在25℃下搅拌1小时。LCMS显示产物生成。
将混合物用水(30ml)稀释、用二氯甲烷(50mL*2)萃取。盐水洗涤有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到200mg浅棕色固体。通过制备TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10∶1)纯化固体，得到白色固体产物化合物73-1(130mg，0.10749mmol，49.90％产率)。LC-MS:m/z(M/2+H)+＝605.4。
第二步：
将化合物73-1(130mg，0.10749mmol)溶解在二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，将混合物在24℃下搅拌1小时。LCMS显示产物生成。将混合物浓缩，残留物通过制备HPLC(甲酸法)纯化并冻干，得到白色固体产物化合物73的甲酸盐(67mg，0.062899mmol，98.20％，产率58.515％)。
1H-NMR(MeOD):δ7.79(t,J＝9.0Hz,1H),7.70(ddd,J＝8.8,5.9,2.3Hz,2H),7.33(t,J＝2.6Hz,1H),7.28(t,J＝9.3Hz,1H),6.99(d,J＝2.6Hz,1H),6.87–6.80(m,1H),6.73(dt,J＝15.7,3.3Hz,1H),5.74–5.11(m,2H),4.66(dd,J＝24.1,14.5Hz,4H),4.55–4.42(m,2H),4.26(s,2H),3.93–3.71(m,3H),3.65–3.44(m,4H),3.41(d,J＝5.2Hz,3H),3.21(d,J＝15.3Hz,2H),3.03(s,1H),2.94(s,2H),2.88–2.65(m,6H),2.58(q,J＝10.0,9.5Hz,2H),2.52–2.37(m,5H),2.37–2.31(m,1H),2.19(tt,J＝13.1,6.4Hz,6H),2.10–1.87(m,5H),1.52(t,J＝12.0Hz,2H),0.82(t,J＝7.4Hz,3H)。LC-MS:m/z(M+H)+＝1065.5。HPLC：98.20％。
实施例25
1-(4-(4-(2-((2S，6R，7aS)-7a-((4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)-6-氟六氢-1H-吡咯烷-2-基)乙基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H，3H)-二酮
合成路线如下：
步骤1：
参照文献WO2022147465，第861页的操作步骤制备得到化合物74-1。
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物74-1(0.94克，3.43毫摩尔，1.00当量)、化合物74-2(1.46克，6.86毫摩尔，2当量)、乙酸钠(1.41克，17.2毫摩尔，5当量)、氰基硼氢化钠(0.65克，10.3毫摩尔，3当量)和甲醇(2毫升)。所得混合物在40摄氏度氩气保护搅拌条件下反应4小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液减压旋蒸除去溶剂得到粗产品，粗产品用硅胶柱层析法纯化，用0％→10％的甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物74-3(黄色固体，1.1克，产率68.0％)。MS(ESI,m/z):472.3[M+H]+。
步骤2：
/>
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，依次向反应瓶中加入化合物74-3(100毫克，0.212毫摩尔，1.0当量)，4N盐酸二氧六环溶液(1毫升)和二氯甲烷(1毫升)。混合物在氩气保护下室温搅拌反应2小时，反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液冷却至室温。将反应液减压浓缩得到粗产品化合物74-4。所得粗产品化合物74-4直接进行下一步反应。MS(ESI,m/z):372.3[M+H]+。
步骤3：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向反应瓶中依次加入化合物74-4(70毫克，0.18毫摩尔，1.5当量)、化合物53-7a(96.9毫克，0.12毫摩尔，1当量)、乙酸钠(49.2毫克，0.6毫摩尔，5当量)、氰基硼氢化钠(23毫克，0.36毫摩尔，3当量)和甲醇(5毫升)。所得混合物在40摄氏度氩气保护搅拌条件下反应4小时。反应过程通过液质和薄层层析来监控。反应结束后，将反应液减压旋蒸除去溶剂得到粗产品，粗产品用硅胶柱层析法纯化，用0％→10％的甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，所得馏分通过减压旋蒸除去溶剂，得到化合物74-5(黄色固体，121毫克，产率87.0％)。MS(ESI,m/z):1163.3[M+H]+。
步骤4：
在25摄氏度氮气保护搅拌条件下，向化合物74-5(121毫克,0.104毫摩尔,1当量)的二氯甲烷(1毫升)溶液中，在0摄氏度滴加三氟醋酸(1毫升)。混合物在25摄氏度下搅拌2小时，反应过程通过薄层层析监控。反应结束后，减压浓缩除去溶剂得到混合物。将所得混合物用制备HPLC(kromasil 100-10-C18,30x250mm,MeOH in 0.1％FA from 20-60％)分离，收集产品冻干得到化合物74的甲酸盐(白色固体，8.47毫克，产率8.01％)。
MS(ESI,m/z):[M/2+1]＝510.8.1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.49(s,1H),7.75–7.63(m,2H),7.39–7.13(m,4H),7.01(dd,J＝8.9,2.8Hz,3H),5.33(d,J＝55.4Hz,2H),4.60(dd,J＝26.3,13.7Hz,3H),4.45–4.35(m,2H),4.10(s,2H),3.90–3.69(m,4H),3.59–3.47(m,3H),3.26–3.03(m,7H),2.93(d,J＝13.8Hz,2H),2.82(t,J＝6.7Hz,2H),2.62(q,J＝5.4Hz,5H),2.49–2.21(m,6H),2.08(dd,J＝24.6,9.2Hz,6H),1.96–1.79(m,4H),1.44(d,J＝12.4Hz,2H),0.82(t,J＝7.4Hz,3H).
以下化合物，可参考实施例7进行合成：
/>
/>
/>
/>
/>
以下化合物，可参考实施例11进行合成：
/>
/>
/>
/>
/>
以下化合物，可参考实施例12进行合成：
/>
/>
/>
/>
/>
/>
以下化合物，可参考实施例2与实施例7进行合成：
/>
/>
/>
/>
/>
/>
效果实施例A
1.实验目的
通过基于KRAS_G12D与SOS1结合的药物筛选体系来检测小分子化合物对于KRAS-G12D与SOS1结合活性的抑制能力。
2.实验材料及仪器设备
表1
试剂 品牌 货号
KRAS-G12D/SOS1 binding kits Cisbio 63ADK000CB21PEH
GTP Sigma V900868
耗材 品牌 货号
Topseal A PerkinElmer E5341
384-Well Polypropylene microplate labcyte PP-0200
96 Well Plates Nunc 249944
384-well plates Corning CLS4514
仪器 品牌 货号
Envision Perkin Elmer 2104
Centrifuge Eppendorf 5810R
Multi-channel pipettes Eppendorf/Sartorius /
Echo Labcyte /
3.实验方法
3.1实验步骤：
a)BI-2852作为阳性对照，其储存液为稀释的第一个点，3倍稀释，稀释10+0个点。同样待测化合物稀释的第一个点也为其储存液，3倍稀释，稀释11+0个点。用Echo转移0.2μL梯度稀释的化合物溶液到384孔板中，每个化合物做2个复孔，DMSO终浓度均为1％。1000rpm/min，离心1min。Reference终浓度为100，33.33，11.11，3.70，1.23，0.412，0.137，0.046，0.015，0.005，0μM。待测化合物终浓度200，66.67，22.22，7.41，2.47，0.27，0.091，0.03，0.0152，0.01，0μM。
b)将试剂盒中的KRAS_G12D与终浓度为10μM GTP在稀释液中共同配制，转移5μL到384反应板中，1000rpm/min，离心1min，
c)转移5μL SOS1混合液到384反应板中，1000rpm/min，离心1min，25℃孵育15min。
d)转移10μL检测混合液到384反应板中，1000rpm/min，离心1min，4℃孵育过夜。
e)使用Envision多功能读板机读取激发波长665nm和发射波长615nm。665/615Ratio信号强度用于表征酶的活性程度。
f)分析原始数据。
3.2实验数据处理方法：
通过Graphpad Prism 8非线性回归方程拟合化合物IC50：
阴性对照：DMSO
阳性对照：100μM BI-2852
利用以下非线性拟合公式来得到化合物的IC50(半数抑制浓度)：
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))
X:化合物浓度log值
Y:665/615Ratio
效果实施例B
1.实验目的
通过基于KRAS_G12D与cRAF结合的药物筛选体系来检测小分子化合物对于KRAS_G12D与cRAF结合活性的抑制能力。
2.实验材料及仪器设备
表2
3.实验方法
3.1实验步骤：
a)BI-2852作为阳性对照，其储存液为稀释的第一个点，3倍稀释，稀释10+0个点。同样待测化合物稀释的第一个点也为其储存液，3倍稀释，稀释11+0个点。用Echo转移0.2μL梯度稀释的化合物溶液到384孔板中，每个化合物做2个复孔，DMSO终浓度均为1％。1000rpm/min，离心1min。阳性对照的终浓度为100，33.33，11.11，3.70，1.23，0.412，0.137，0.046，0.015，0.005，0μM。待测化合物终浓度200，66.67，22.22，7.41，2.47，0.27，0.091，0.03，0.0152，0.01，0μM。
b)将试剂盒中的KRAS_G12D与终浓度为10μM GTP在稀释液中共同配制，转移5μL到384反应板中，1000rpm/min，离心1min，
c)转移5μL cRAF混合液到384反应板中，1000rpm/min，离心1min，25℃孵育15min。
d)转移10μL检测混合液到384反应板中，1000rpm/min，离心1min，4℃孵育过夜。
e)使用Envision多功能读板机读取激发波长665nm和发射波长615nm。665/615Ratio信号强度用于表征酶的活性程度。
f)分析原始数据。
3.2实验数据处理方法：
通过Graphpad Prism 8非线性回归方程拟合化合物IC50：
阴性对照：DMSO
阳性对照：100μM BI-2852
利用以下非线性拟合公式来得到化合物的IC50(半数抑制浓度)：
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))
X:化合物浓度log值
Y:665/615Ratio
效果实施例C
1实验目的
通过基于KRAS_WT与SOS1结合的药物筛选体系来检测小分子化合物对于KRAS_WT与SOS1结合活性的抑制能力。
2实验材料及仪器设备
表3
/>
3实验方法
3.1实验步骤：
a)BI-2852作为阳性对照，其储存液为稀释的第一个点，3倍稀释，稀释10+0个点。同样待测化合物稀释的第一个点也为其储存液，3倍稀释，稀释11+0个点。用Echo转移0.2μL梯度稀释的化合物溶液到384孔板中，每个化合物做2个复孔，DMSO终浓度均为1％。1000rpm/min，离心1min。阳性对照终浓度为100，33.33，11.11，3.70，1.23，0.412，0.137，0.046，0.015，0.005，0μM。待测化合物终浓度200，66.67，22.22，7.41，2.47，0.27，0.091，0.03，0.0152，0.01，0μM。
b)将试剂盒中的KRAS_WT与终浓度为10μM GTP在稀释液中共同配制，转移5μL到384反应板中，1000rpm/min，离心1min，
c)转移5μL SOS1混合液到384反应板中，1000rpm/min，离心1min，25℃孵育15min。
d)转移10μL检测混合液到384反应板中，1000rpm/min，离心1min，4℃孵育过夜。
e)使用Envision多功能读板机读取激发波长665nm和发射波长615nm。665/615Ratio信号强度用于表征酶的活性程度。
f)分析原始数据。
3.2实验数据处理方法：
通过Graphpad Prism 8非线性回归方程拟合化合物IC50：
阴性对照：DMSO
阳性对照：100μM BI-2852
利用以下非线性拟合公式来得到化合物的IC50(半数抑制浓度)：
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))
X:化合物浓度log值
Y:665/615Ratio
实验结果：以上效果实施例A-C试验结果如下表所示：
表4
效果实施例D KRAS-G12D PROTAC分子降解试验(Degradation Assay)
1实验目的
通过Jess WB检测PANC-1，GP2D，HPAC，ASPC-1等KRAS-G12D突变株和HT29,MKN1细胞(KRAS-野生型)中的KRAS蛋白的降解情况来检测KRAS-G12D PROTAC分子对KRAS-G12D蛋白的靶向降解能力以及特异性。
2.2实验材料及仪器设备
2实验方法
a)复苏的PANC-1、GP2D、HPAC、ASPC-1、HT29和MKN1细胞贴壁培养1-2代之后，分别接种细胞到12孔板中，将细胞板置于37℃5％CO2孵箱中培养过夜。加入本发明化合物，化合物浓度为30uM,1/3稀释或1/4稀释，7+0dose，48h。
b)吸弃培养液，加入1mL 1x PBS洗涤细胞一次，每孔加入300μL Tryple(Gibco)，37℃消化5min，每孔加入900μL培养液终止消化，将细胞转移至1.5mL离心管，于4℃下2000rpm离心5min收集细胞。用1mL 1x PBS洗涤细胞一次，于4℃下2000rpm离心5min收集细胞。
c)根据细胞量加入适量含有1x PMSF的裂解液，混匀后置于冰上裂解30min，于4℃13000rpm离心20min，将离心后的上清转移至新的离心管中。
d)取20μL已知不同浓度的牛血清白蛋白(BSA)以制备蛋白定量标准曲线；待测样品蛋白，按10倍稀释后，取20μL加入相应的检测孔；取PierceTM BCA Protein Assay KitBCA定量试剂，200μL/well，避免产生气泡，37℃避光孵育30min后，检测波长562nm条件下的光密度(OD)值。
f)向蛋白样品中加入适量0.1x上样缓冲液(sample buffer)，沸水浴加热5min，充分变性蛋白，通过Jess WB系统定量分析KRAS-G12D蛋白的降解率，其中一抗选用KRASmouse Antibody(Lsbio),GAPDH mouse mAb(CST)。
3实验结果：
本发明的化合物是基于相同的WB降解实验来测定它们在细胞中的降解活性，结果通过DC50和Dmax来展示，其中Dmax是观察到的最大蛋白降解水平，DC50是达到Dmax的50％所需的化合物浓度；结果见下表：
化合物降解活性数据表5
/>
化合物降解活性数据表6
/>

Claims (13)

1.一种如式I或式II所示的化合物，或它们药学上可接受的盐：
其中，如式I所示的化合物中：
R1为C6～C14的芳基、被一个或多个R1-1取代的C6～C14的芳基、6～14元的杂芳基或被一个或多个R1-2取代的6～14元的杂芳基；
R1-1和R1-2各自独立地为OH、C1～C6的烷基、C3～C8环烷基、卤素、NH2、CN、-O(C＝O)NR1-aR1 -b、-OP(＝O)(OR1-c)2、-O(S＝O)2-R1-d、C2～C6的炔基、C1～C6的烷氧基、被一个或多个卤素取代的C1～C6的烷基、被一个或多个卤素取代的C1～C6的烷氧基或被一个或多个R1-e取代的C3～C8环烷基；
R1-a、R1-b和R1-c各自独立地为H或C1～C6的烷基；
R1-d独立地为被一个或多个R1-d-1取代的C6～C14的芳基；R1-d-1独立地为NO2；
R1-e独立地为C1～C6的烷基；
X为N或CR2；
R2为卤素；
M为3～10元的亚杂环烷基或被一个或多个卤素取代的3～10元的亚杂环烷基；
L为以下情况中的任一种，L左端与M连接，右端与G连接：
i：L为-L1-(C＝O)NH-，L1为具有2～9个链原子的亚杂烷基；
ii：L为-L2-L3-L4--(C＝O)NH-，其中L2为连接键或C1～C6的亚烷基，L3为5～6元的亚杂环烷基，L4为连接键或C1～C6的亚烷基；
iii：L为-L5-L6-L7-L8-，L5为C1～C6的亚烷基或具有2～9个链原子的亚杂烷基，L6为5～6元的亚杂环烷基或氧代的5～6元的亚杂环烷基，L7为连接键或C1～C6的亚烷基，L8为连接键或5～6元的亚杂环烷基；
G为情形1、情形2或情形3：
情形1：G为
情形2：G为
情形3：G为
当G为情形2时，L为-L5-L6-L7-L8-，R1为C6～C14的芳基、被一个或多个R1-1取代的C6～C14的芳基；
所述的亚杂环烷基、所述的亚杂烷基或所述的杂芳基中的杂原子各自独立地为氮、氧或硫中的一种或多种，杂原子的个数各自独立地为1、2、3或4个；
其中，所述如式I所示的化合物不为如下任一化合物：
如式II所示的化合物中；X’为N、O或S；
n1’为1、2、3或4；
L’为-O-(CRL-1RL-2)n2’-*、-(CRL-3RL-4)n3’-*或 *表示与R1’相连的一端；n2’和n3’各自独立地为1、2、3或4；
RL-1、RL-2、RL-3和RL-4分别独立地为H、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、被一个或多个RL-1-1取代的C1-C6烷基或卤素；
各RL-1-1分别独立地为卤素或C1-C6烷氧基；
各R1’为被一个或多个R1-1’取代的4-10元杂环烷基；所述被一个或多个R1-1’取代的4-10元杂环烷基中4-10元杂环烷基里的杂原子独立地为N、O或S中的1、2或3种，杂原子个数为1、2或3个；
各R1-1’分别独立地为卤素、羟基、-O-C1-C6烷基、C1-C6烷基或被一个或多个R1-1-1’取代的C1-C6烷基；
各R1-1-1’分别独立地为羟基、4-10元杂环烷基或被一个或多个R1-1-1-1’取代的4-10元杂环烷基；所述的4-10元杂环烷基和所述的被一个或多个R1-1-1-1’取代的4-10元杂环烷基里的杂原子独立地为N、O或S中的1、2或3种，杂原子个数为1、2或3个；
各R1-1-1-1’分别独立地为C1-C6烷基；
R2’为H或卤素；
R3’为C6-C10芳基、5-10元杂芳基、被一个或多个R3-1’取代的C6-C10芳基或被一个或多个R3-2’取代的5-10元杂芳基，所述5-10元杂芳基和所述的“被一个或多个R3-2’取代的5-10元杂芳基”中的杂原子独立地为N、O或S中的1、2或3种，杂原子个数为1、2或3个；
各R3-1’和R3-2’分别独立地为OH、卤素、C1-C6烷基、被一个或多个R3-1-1’取代的C1-C6烷基、C2-C6炔基、3-8元环烷基、-S-C(R3-1-2’)3、-S(R3-1-3’)5、氨基、C1-C6烷基、5-10元杂芳基或-O-C1-C6烷基；
或者任一相邻的两个R3-1’与其连接的碳原子一起形成5-10元杂芳基或“被一个或多个R3-1-4’取代的5-10元杂芳基”，所述5-10元杂芳基和所述的“被一个或多个R3-1-4’取代的5-10元杂芳基”中的杂原子独立地为N、O或S中的1、2或3种，杂原子个数为1、2或3个；
各R3-1-1’分别独立地为氧代基、OH、C1-C6烷氧基或卤素；
各R3-1-2’和R3-1-3’分别独立地为卤素；
各R3-1-4’分别独立地为C1-C6烷基；
R4’为H、OH、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、“被一个或多个R4-1’取代的C1-C6烷基”、氰基或卤素；
各R4-1’分别独立地为卤素；
R9’和R10’各自独立地为H、C1-C6烷基或卤素，
Lb为连接R1’和E的连接子；
E为E3泛素连接酶的配体。
2.如权利要求1所述的如式I或式II所示的化合物，或它们药学上可接受的盐，其特征在于，
如式I所示的化合物中，
其中，R1为C6～C14的芳基或被一个或多个R1-1取代的C6～C14的芳基；
各R1-1独立地为OH、C1～C6的烷基、C3～C8环烷基、卤素或C2～C6的炔基；
X为N或CR2；
R2为卤素；
M为3～10元的亚杂环烷基或被一个或多个卤素取代的3～10元的亚杂环烷基；
L为以下情况中的任一种，L左端与M连接，右端与G连接：
i：L为-L1-(C＝O)NH-，L1为具有2～9个链原子的亚杂烷基；
ii：L为-L2-L3-L4--(C＝O)NH-，其中L2为连接键或C1～C6的亚烷基，L3为5～6元的亚杂环烷基，L4为连接键或C1～C6的亚烷基；
iii：L为-L5-L6-L7-L8-，L5为C1～C6的亚烷基或具有2～9个链原子的亚杂烷基，L6为5～6元的亚杂环烷基或氧代的5～6元的亚杂环烷基，L7为连接键或C1～C6的亚烷基，L8为连接键或5～6元的亚杂环烷基；
G为
所述的亚杂环烷基和所述的亚杂烷基中的杂原子各自独立地为氮、氧或硫中的一种或多种，杂原子的个数独立地为1、2、3或4个；
其中，所述如式I所示的化合物不为如下任一化合物：
较佳地，方案2中如式I所示的化合物中，各R1-1独立地为OH、C1～C6的烷基、C3～C8环烷基或卤素。
3.如权利要求1所述的如式I或式II所示的化合物，或它们药学上可接受的盐，其特征在于，其满足以下条件的一种或多种：
(1)所述如式II所示的化合物中，Lb的定义与式I所示的化合物中L的定义相同；
(2)所述如式II所示的化合物中，E的定义与式I所示的化合物中G的定义相同。
4.如权利要求1-3任一项所述的如式I或式II所示的化合物，或它们药学上可接受的盐，其特征在于，其满足以下条件的一种或多种：
(1)R1中，所述的C6～C14的芳基或被一个或多个R1-1取代的C6～C14的芳基中的C6～C14的芳基独立地为C6～C10的芳基，例如苯基或萘基，优选为萘基，例如
(2)R1中，所述的6～14元的杂芳基或被一个或多个R1-2取代的6～14元的杂芳基中的C6～C14的杂芳基可独立地为C6～C10杂芳基，例如吡啶基、嘧啶基、吲哚基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、喹啉基、异喹啉基、苯并噻唑基、吡啶并吡唑基、苯并噻吩基，例如
(3)R1-1、R3-1’和R3-2’中，所述的C1～C6的烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基，例如乙基；
(4)R1-1中，所述的C3～C8环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基，例如环丙基；
(5)R1-1、R1-1’和R3-1-1’中，所述的卤素独立地为氟、氯、溴或碘，例如氟；
(6)R2和R2’中，所述的卤素独立地为氟、氯、溴或碘，例如氟；
(7)M中，所述的3～10元的亚杂环烷基或被一个或多个卤素取代的3～10元的亚杂环烷基中的3～10元的亚杂环烷基独立地为5～8元的单环亚杂环烷基或其中中，环A和环B各自独立地为3～5元的饱和杂环，所述的饱和杂环中的杂原子的种类为氮、氧或硫，杂原子的个数为1或2个；Y为C或杂原子；较佳地，环A和环B各自独立地为5元的饱和杂环，所述的5元的饱和杂环中杂原子例如为氮，杂原子的个数例如为1个，更佳地，环A和环B各自独立地为四氢吡咯环；
(8)M中，所述的被一个或多个卤素取代的3～10元的亚杂环烷基中的卤素为氟、氯、溴或碘，例如氟；
(9)L1中，所述的具有2～9个链原子的亚杂烷基中的亚杂烷基为直链亚杂烷基；
(10)L1中，所述的具有2～9个链原子的亚杂烷基为具有2～6个链原子的亚杂烷基，例如2个链原子的亚杂烷基、3个链原子的亚杂烷基、4个链原子的亚杂烷基、5个链原子的亚杂烷基或6个链原子的亚杂烷基；
(11)L1中，所述的具有2～9个链原子的亚杂烷基中杂原子的种类为氧；
(12)L1中，所述的具有2～9个链原子的亚杂烷基中杂原子的个数为1个；
(13)L2和L4中，所述的C1～C6的亚烷基独立地为-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH(CH3)CH2-或-CH2CH(CH3)-，例如-CH2-、-CH2CH2-或-CH2CH2CH2-；
(14)L3中，所述的5～6元的亚杂环烷为6元的亚杂环烷基；
(15)L3中，所述的5～6元的亚杂环烷基中杂原子的种类为氮；
(16)L3中，所述的5～6元的亚杂环烷基中杂原子的个数为1个；
(17)L3中，所述的5～6元的亚杂环烷基通过杂原子与L2或L4相连；
(18)L5和L7中，所述的C1～C6的亚烷基独立地为-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH(CH3)CH2-或-CH2CH(CH3)-，例如-CH2-；
(19)L5中，所述的具有2～9个链原子的亚杂烷基中的亚杂烷基为直链的亚杂烷基；
(20)L5中，所述的具有2～9个链原子的亚杂烷基为具有2～4个链原子的亚杂烷基，例如具有2个链原子的亚杂烷基或3个链原子的亚杂烷基；
(21)L5中，所述的具有2～9个链原子的亚杂烷基中的杂原子的种类为氧；
(22)L5中，所述的具有2～9个链原子的亚杂烷基中的杂原子的个数为1个；
(23)L6中，所述的5～6元的亚杂环烷基或氧代的5～6元的亚杂环烷基中的5～6元的亚杂环烷基独立地为6元的亚杂环烷基；
(24)L6中，所述的5～6元的亚杂环烷基或氧代的5～6元的亚杂环烷基中的5～6元的亚杂环烷基的杂原子的种类独立地为氮；
(25)L6中，所述的5～6元的亚杂环烷基或氧代的5～6元的亚杂环烷基中的5～6元的亚杂环烷基的杂原子的个数独立地为1个或2个；
(26)L6中，所述的5～6元的亚杂环烷基或氧代的5～6元的亚杂环烷基中的5～6元的亚杂环烷基杂原子与L5或L7相连；
(27)L8中，所述的5～6元的亚杂环烷基为6元的亚杂环烷基；
(28)L8中，所述的5～6元的亚杂环烷基的杂原子的种类为氮；
(29)L8中，所述的5～6元的亚杂环烷基的杂原子的个数为2个；
(30)L8中，所述的5～6元的亚杂环烷基的杂原子与L7或G相连；
(31)R1-1中，所述的C2～C6的炔基为乙炔基；
(32)G中，为/>
(33)G中，为/>
(34)R1’中，所述的被一个或多个R1-1’取代的4-10元杂环烷基中的4-10元杂环烷基独立地为5～8元的单环杂环烷基或其中/>中，环A和环B各自独立地为3～5元的饱和杂环，所述的饱和杂环中的杂原子的种类为氮、氧或硫，杂原子的个数为1或2个；Y为C或杂原子；较佳地，环A和环B各自独立地为5元的饱和杂环，所述的5元的饱和杂环中杂原子例如为氮，杂原子的个数例如为1个，更佳地，环A和环B各自独立地为四氢吡咯环；
(35)R3’中，所述的C6-C10芳基或被一个或多个R3-1’取代的C6-C10芳基中的C6-C10芳基独立地为苯基或萘基，优选为萘基，例如
(36)R3’中，所述的5-10元杂芳基或被一个或多个R3-2’取代的5-10元杂芳基中的5-10元杂芳基独立地为吡啶基、嘧啶基、吲哚基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、喹啉基、异喹啉基、苯并噻唑基、吡啶并吡唑基、苯并噻吩基，例如
5.如权利要求4所述的如式I或式II所示的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，其满足以下条件的一种或多种：
(1)M中，所述的3～10元的亚杂环烷基或被一个或多个卤素取代的3～10元的亚杂环烷基中的3～10元的亚杂环烷基独立地为亚四氢吡咯基或亚六氢-1H-吡咯里嗪基，例如
(2)M中，所述的一个或多个卤素取代的3～10元的亚杂环烷基为
(3)L1中，所述的具有2～9个链原子的亚杂烷基为-(CH2)n1O(CH2)n2-，n1和n2各自独立地为0、1、2或3；
(4)L3中，所述的5～6元的亚杂环烷基为亚哌啶基，例如
(5)L5中，所述的具有2～9个链原子的亚杂烷基为-(CH2)n3O(CH2)n4-，n3和n4各自独立为0、1或2，例如为-(CH2)2O或-CH2O-；
(6)L6中，所述的5～6元的亚杂环烷基或氧代的5～6元的亚杂环烷基中的5～6元的亚杂环烷基独立地为亚哌啶基或亚哌嗪基，例如
(7)L6中，所述的氧代的5～6元的亚杂环烷基为
(8)L8中，所述的5～6元的亚杂环烷基为亚哌嗪基，例如
6.如权利要求1所述的如式I或式II所示的化合物，或它们药学上可接受的盐，其特征在于，其满足以下条件的一种或多种：
(1)-L2-L3-L4--(C＝O)NH-为以下情况中的任一种：
①：L2为连接键，L3为5～6元的亚杂环烷基，L4为C1～C6的亚烷基；
②：L2为C1～C6的亚烷基，L3为5～6元的亚杂环烷基，L4为连接键；
(2)-L5-L6-L7-L8-为以下情况中的任一种：
(i)：L5为C1～C6的亚烷基，L6为5～6元的亚杂环烷基，L7和L8为连接键；
(ii)：L5为C1～C6的亚烷基，L6为5～6元的亚杂环烷基，L7为C1～C6的亚烷基，L8为5～6元的亚杂环烷基；
(iii)：L5为具有2～9个链原子的亚杂烷基，L6为氧代的5～6元的亚杂环烷基，L7和L8为连接键。
7.如权利要求1所述的如式I或式II所示的化合物，或它们药学上可接受的盐，其特征在于，其满足以下条件的一种或多种：
(1)所述的R1为/>
/>
/>
(2)X为N或CF；
(3)M为(4)
L为
8.如权利要求1所述的如式I或式II所示的化合物，或它们药学上可接受的盐，其特征在于，其满足以下条件的一种或多种：
(1)n1’为1或2；
(2)X’为O；
(3)R4’为F；
(4)R9’和R10’各自独立地为H；
(5)L’为-OCH2-；
(6)R1’为其中结构式中的a端与Lb相连；
(7)Lb为/>
(8)E为
优选
(9)R3’为/>
/>
(10)R2’为F。
9.如权利要求1所述的如式I或式II所示的化合物，或它们药学上可接受的盐，其特征在于，所述的如式I所示的化合物为以下化合物中的任一种：
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
进一步优选：
的一个阻转异构体，所述阻转异构体中，/>的阻转构型与化合物A1的阻转构型相同，所述的化合物A1为/>在以下条件下先出峰的化合物：手性柱CHIRAL ART Cellulose-SC，3x25厘米，5微米；流动相：A相为超临界二氧化碳，B相为异丙醇/二氯甲烷(v/v＝1/1，0.1％氨甲醇溶液)；流速：100毫升/分钟；45％流动相B洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的先出峰的化合物的保留时间为2.55min；
的一个阻转异构体，所述阻转异构体中，/>的阻转构型与化合物A2的阻转构型相同，所述的化合物A2为在以下条件下后出峰的化合物：手性柱CHIRAL ART Cellulose-SC，3x25厘米，5微米；流动相：A相为超临界二氧化碳，B相为异丙醇/二氯甲烷(v/v＝1/1，0.1％氨甲醇溶液)；流速：100毫升/分钟；45％流动相B洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的后出峰的化合物的保留时间为4.17min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与化合物B1的阻转构型相同，所述的化合物B1为在以下条件下先出峰的化合物：手性柱CHIRALART Cellulose-SC，2×25厘米，5微米；流动相：A相为正己烷(0.5％，2摩尔/升氨甲醇)，B相为乙醇；流速：20毫升/分钟；20％的B相进行洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的先出峰的化合物的保留时间为6min；/>
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与化合物B2的阻转构型相同，所述的化合物B2为在以下条件下后出峰的化合物：手性柱CHIRALART Cellulose-SC，2×25厘米，5微米；流动相：A相为正己烷(0.5％，2摩尔/升氨甲醇)，B相为乙醇；流速：20毫升/分钟；20％的B相进行洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的后出峰的化合物的保留时间为8.7min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与化合物C1的阻转构型相同，所述的化合物C1为在以下条件下先出峰的化合物：手性柱NB_CHIRALPAK AD,3x25厘米,5微米；流动相：A相为超临界二氧化碳，B相为丙醇(0.1％2摩尔/升氨甲醇)；流速：100毫升/分钟；50％流动相B洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的先出峰的化合物的保留时间为1.68min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与化合物C2的阻转构型相同，所述的化合物C2为在以下条件下后出峰的化合物：手性柱NB_CHIRALPAK AD,3x25厘米,5微米；流动相：A相为超临界二氧化碳，B相为丙醇(0.1％2摩尔/升氨甲醇)；流速：100毫升/分钟；50％流动相B洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的后出峰的化合物的保留时间为3.63min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与如上所述的化合物C1的阻转构型相同；/>
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与如上所述的化合物C2的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物B1的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物B2的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物B1的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物B2的阻转构型相同；/>
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物B1的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物B2的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与化合物D1的阻转构型相同，所述的化合物D1为在以下条件下先出峰的化合物：手性柱CHIRAL ART Cellulose-SC，2×25厘米，5微米；流动相：A相为正己烷(0.5％2摩尔/升氨-甲醇)，B相为乙醇；流速：20毫升/分钟；50％的B相洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的先出峰的化合物的保留时间为45min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与化合物D2的阻转构型相同，所述的化合物D2为/>在以下条件下后出峰的化合物：手性柱CHIRAL ART Cellulose-SC，2×25厘米，5微米；流动相：A相为正己烷(0.5％2摩尔/升氨-甲醇)，B相为乙醇；流速：20毫升/分钟；50％的B相洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的后出峰的化合物的保留时间为9.5min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与化合物E1的阻转构型相同，所述的化合物E1为在以下条件下先出峰的化合物：CHIRAL ART Cellulose-SZ，3x25厘米，5微米；流动相：A相为正己烷(0.1％2摩尔/升氨甲醇)，B相为乙醇；流速：20毫升/分钟；10％流动相B洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的先出峰的化合物的保留时间为8.1min；/>
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与化合物E2的阻转构型相同，所述的化合物E2为在以下条件下后出峰的化合物：CHIRAL ART Cellulose-SZ，3x25厘米，5微米；流动相：A相为正己烷(0.1％2摩尔/升氨甲醇)，B相为乙醇；流速：20毫升/分钟；10％流动相B洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的后出峰的化合物的保留时间为10.4min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物C1的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物C2的阻转构型相同；/>
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物B1的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物B2的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物C1的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物C2的阻转构型相同；
一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物C1的阻转构型相同；
一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物C2的阻转构型相同；/>
一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物C1的阻转构型相同；
一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物C2的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物B1的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物B2的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物B1的阻转构型相同；/>
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物B2的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物C1的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物C2的阻转构型相同；/>
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物B1的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物B2的阻转构型相同；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物C1的阻转构型相同；/>
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物C1的阻转构型相同；
例如：
/>
/>
/>
较佳地，所述的如式I所示的化合物药学上可接受的盐优选为如式I所示的化合物的甲酸盐、如式I所示的化合物的三氟醋酸盐或如式I所示的化合物的盐酸盐；
较佳地，所述的如式I所示的化合物药学上可接受的盐的个数优选为1个、2个、3个或4个；较佳地，如式I所示的化合物药学上可接受的盐为以下化合物中的任一种：
的三氟乙酸盐、
的三氟乙酸盐、/>
的三氟乙酸盐、
的甲酸盐、/>的甲酸盐、/>的甲酸盐、
的甲酸盐或
的甲酸盐；
优选：
的三氟乙酸盐、
的三氟乙酸盐、/>
的三氟乙酸盐、
的甲酸盐、/>的甲酸盐、/>的甲酸盐、的甲酸盐或/>
的甲酸盐。
10.如权利要求1所述的如式I或式II所示的化合物，或它们药学上可接受的盐，其特征在于，所述的如式II所示的化合物为以下化合物中的任一种：
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
优选：
/>
进一步优选：
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与化合物F1的阻转构型相同，所述的化合物F1为/>在以下条件下先出峰的化合物：手性柱CHIRALPAK ID，2x25厘米，5微米；流动相：A相为正己烷/甲基叔丁基醚(1/1)(0.5％2摩尔/升氨甲醇)，B相为甲醇；10％流动相B洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的先出峰的化合物的保留时间为5.05min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与化合物F2的阻转构型相同，所述的化合物F2为在以下条件下后出峰的化合物：手性柱CHIRALPAK ID，2x25厘米，5微米；流动相：A相为正己烷/甲基叔丁基醚(1/1)(0.5％2摩尔/升氨甲醇)，B相为甲醇；10％流动相B洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的后出峰的化合物的保留时间为6.47min；/>
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与化合物G1的阻转构型相同，所述的化合物G1为在以下条件下先出峰的化合物：手性柱CHIRALPAK ID,2x25厘米,5微米；流动相：A相为正己烷/甲基叔丁基醚(0.5％2摩尔/升氨甲醇)其中正己烷与甲基叔丁基醚(0.5％2摩尔/升氨甲醇)的体积比为1:1，B相为甲醇；流速：20毫升/分钟；10％流动相B洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的先出峰的化合物的保留时间为7.73min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与化合物G2的阻转构型相同，所述的化合物G2为/>在以下条件下后出峰的化合物：手性柱CHIRALPAK ID,2x25厘米,5微米；流动相：A相为正己烷/甲基叔丁基醚(0.5％2摩尔/升氨甲醇)其中正己烷与甲基叔丁基醚(0.5％2摩尔/升氨甲醇)的体积比为1:1，B相为甲醇；流速：20毫升/分钟；10％流动相B洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的后出峰的化合物的保留时间为13.395min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与化合物H1的阻转构型相同，所述的化合物H1为在以下条件先出峰的化合物：手性柱CHIRALPAK IE,3x25厘米,5微米；流动相：A相为正己烷(10毫摩尔/升氨甲醇溶液)，B相为乙醇；流速：35毫升/分钟；30％的B相进行洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的先出峰的化合物的保留时间为32.5min；/>
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与化合物H2的阻转构型相同，所述的化合物H2为在以下条件后出峰的化合物：手性柱CHIRALPAK IE,3x25厘米,5微米；流动相：A相为正己烷(10毫摩尔/升氨甲醇溶液)，B相为乙醇；流速：35毫升/分钟；30％的B相进行洗脱；较佳地，在所述的条件下，所述的先出峰的化合物的保留时间为42min；
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，的阻转构型与所述的化合物H1的阻转构型相同；/>
的一个阻转异构体，所述的阻转异构体中，/>的阻转构型与所述的化合物H2的阻转构型相同；
例如：
较佳地，所述的如式II所示的化合物药学上可接受的盐优选为如式II所示的化合物的甲酸盐、盐酸盐或三氟醋酸盐，优选为甲酸盐或三氟醋酸盐；
较佳地，所述的如式II所示的化合物药学上可接受的盐的个数优选为1个、2个、3个或4个；较佳地，所述如式II所示的化合物药学上可接受的盐为以下化合物中的任一种：
优选：
11.一种药物组合物，其包括物质X’和一种或多种药用辅料，所述的物质X’为如权利要求1-10任一项所述的如式I所示的化合物或如式II所示的化合物，或它们药学上可接受的盐。
12.一种物质Y’在制备药物中的应用，其特征在于，
所述的药物为用于治疗或预防癌症的药物，或者，用于治疗或预防与KRAS突变所介导的癌症的药物；
所述的癌症为优选为血液癌症、胰腺癌、MYH相关性息肉病、结肠直肠癌或肺癌；
所述的KRAS突变优选为KRAS_G12D突变；所述的与KRAS突变所介导的癌症优选为血液癌症、胰腺癌、MYH相关性息肉病、结肠直肠癌或肺癌；
所述的物质Y’为如权利要求1-10任一项所述的如式I所示的化合物或如式II所示的化合物，或它们药学上可接受的盐或如权利要求11所述的药物组合物。
13.一种如式I-A、式I-B或式II-A所示的化合物：
其中，上述各式中，Xa独立地为或卤素；
h1独立地为0、1或2；PG1独立地为羟基保护基，PG2独立地为氨基保护基；T1独立地为-L1-T2、被一个或多个OH取代的C1～C4的亚烷基或-(CH2)h2-CHO，h2为0、1、2、3或4，T2为-CH＝CH2或COOH；
R1-1、X、L1、X’、n1’、R2’、R4’、R9’和R10’的定义如权利要求1-10任一项所述；或者R1-1为
较佳地，如式I-A所示的化合物为如式I-A-1所示的化合物，如式I-B所示的化合物为如式I-B-1所示的化合物，如式II-A所示的化合物为如式II-A-1所示的化合物：
或者，如下所示的任一化合物：
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
CN202310911252.9A 2022-07-22 2023-07-24 嘧啶环类化合物、其中间体、其药物组合物及其应用 Pending CN117430620A (zh)

Applications Claiming Priority (10)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210873453X 2022-07-22
CN202210873453 2022-07-22
CN2022110990040 2022-09-06
CN202211099004 2022-09-06
CN2022113392763 2022-10-28
CN202211339276 2022-10-28
CN2022114367449 2022-11-16
CN202211436744 2022-11-16
CN2023107195705 2023-06-16
CN202310719570 2023-06-16

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117430620A true CN117430620A (zh) 2024-01-23

Family

ID=89557240

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310911252.9A Pending CN117430620A (zh) 2022-07-22 2023-07-24 嘧啶环类化合物、其中间体、其药物组合物及其应用

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN117430620A (zh)
WO (1) WO2024017392A1 (zh)

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11453667B2 (en) * 2018-01-19 2022-09-27 Medshine Discovery Inc. Pyridone-pyrimidine derivative acting as KRASG12C mutein inhibitor
WO2022148422A1 (en) * 2021-01-08 2022-07-14 Beigene, Ltd. Bridged compounds as kras g12d inhibitor and degrader and the use thereof
JP2024506029A (ja) * 2021-02-09 2024-02-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド 四環系オキサゼピン化合物及びその使用
CN117222650A (zh) * 2021-04-30 2023-12-12 劲方医药科技(上海)有限公司 吡啶或嘧啶并环类化合物，其制法与医药上的用途
WO2022266206A1 (en) * 2021-06-16 2022-12-22 Erasca, Inc. Kras inhibitor conjugates
WO2023077441A1 (en) * 2021-11-05 2023-05-11 Ranok Therapeutics (Hangzhou) Co. Ltd. Methods and compositions for targeted protein degradation

Also Published As

Publication number Publication date
WO2024017392A1 (zh) 2024-01-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113563323B (zh) 一类苯并噻唑基联芳基类化合物、制备方法和用途
US20230365563A1 (en) Quinazoline compound and application thereof
KR20220071193A (ko) Kras g12d 억제제
CN116964036A (zh) Kras g12d抑制剂
KR20210121168A (ko) 복소환식 화합물인 벤조피리돈 및 그 사용
EP3833662B1 (en) Inhibitors of keap1-nrf2 protein-protein interaction
CN114286822A (zh) 作为pd-1/pd-l1小分子抑制剂的化合物及其应用
CN114656482A (zh) 作为egfr抑制剂的大环杂环类化合物及其应用
CN108456208B (zh) 氮杂螺环类化合物及其制备方法和应用
WO2022228576A1 (zh) 一种靶向蛋白调节剂的化合物及其应用
CN114685531A (zh) 四并环化合物及其药物组合物和应用
CN117015537A (zh) 作为lta4h的抑制剂的杂芳基氨基丙醇衍生物
AU2020355845B2 (en) Pyrazolopyridine compounds as selective BTK kinase inhibitors
CN116514847A (zh) 一种喹啉类化合物及其应用
CN117430620A (zh) 嘧啶环类化合物、其中间体、其药物组合物及其应用
TWI839738B (zh) 含氮雜環化合物、其製備方法及應用
WO2023173014A1 (en) Kras inhibitors and their use
WO2023151621A1 (zh) 具有抗kras突变肿瘤活性的化合物
CN115433207A (zh) 作为egfr抑制剂的大环杂环类化合物及其应用
CN112125908B (zh) Cdk激酶抑制剂、其制备方法、药物组合物和应用
JP7292400B2 (ja) ＢＥＴ Ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎタンパク質の阻害とＰＤ－Ｌ１遺伝子の調節の両方の効果を持つ化合物
CN116057052A (zh) 喹唑啉化合物之合成
CN115109055B (zh) 一种用于egfr降解的双功能化合物及其应用
CN112566696B (zh) 双环杂芳基衍生物
TW202340198A (zh) 靶向ｍａｌｔ１的蛋白降解化合物、包含其的醫藥組合物及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication