TW202340198A - 靶向ｍａｌｔ１的蛋白降解化合物、包含其的醫藥組合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明涉及藉由募集E3泛素連接酶抑制MALT1並促進其降解化合物，以及該化合物在製備治療由MALT1靶點介導的相關疾病藥物中的應用，具體公開了如式（Ⅰ’）所示化合物及其藥學上可接受的鹽。

Description

靶向MALT1的蛋白降解化合物、包含其的醫藥組合物及其用途
本發明要求於2022年1月28日提交中國專利局、申請號為202210107957.0發明名稱為“靶向MALT1的蛋白降解化合物”的中國專利申請案、2022年11月11日提交中國專利局、申請號為202211410392.X發明名稱為“靶向MALT1的蛋白降解化合物”的中國專利申請案、2023年1月6日提交中國專利局、申請號為202310016529.1發明名稱為“靶向MALT1的蛋白降解化合物”的中國專利申請案的優先權，其全部內容藉由引用結合在本發明中。
本發明屬於藥物化學領域，具體關於藉由募集E3泛素連接酶抑制和/或促進MALT1降解的化合物，含有所述化合物的藥物組合物以及利用本發明化合物治療細胞增殖性疾病，例如癌症的方法。
彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）是B細胞的癌症，是成年人中最常見的非霍奇金淋巴瘤類型。 DLBCL是一種侵襲性腫瘤，幾乎可以出現在身體的任何部位。通常，DLBCL來自正常的B細胞，但它也可能代表其他類型的淋巴瘤或白血病的惡性轉化，而潛在的免疫缺陷是重要的危險因素。DLBCL有兩種主要的生物學上不同的分子亞型：生發中心B細胞（GCB）和活化B細胞（ABC）。黏膜相關淋巴組織淋巴瘤易位蛋白1（MALT1）是半胱天冬酶家族的一部分，並具有蛋白水解活性。它在轉錄因子NF-κB的激活，白介素2（IL-2）的產生以及T和B淋巴細胞的增殖中具有重要作用。幾種已知的ABC-DLBCL細胞系的存活取決於三重訊號轉導適配器：CARD11，MALT1和BCL10。這些蛋白質形成了CBM複合物，與抗原依賴性有關激活NF-κΒ。除了在CBM複合物中充當支架蛋白外，MALT1還包含在ABC-DLBCL中被組成性激活的蛋白水解活性。已知MALT1抑制劑抑制NF-κB靶基因表達和ABC-DLBCL生存力，使得MALT1抑制成為用於治療ABC-DLBCL的有吸引力的治療靶標。
E3泛素連接酶是與E2泛素連接酶結合，促進泛素藉由異肽鍵連接到目標蛋白上的賴氨酸上。蛋白質的泛素化通常導致蛋白酶體降解目標蛋白質。
von Hippel-Lindau腫瘤抑制物（VHL）是E3泛素連接酶。VHL包括底物識別亞基/ E3泛素連接酶複合物VCB，其包括延伸蛋白B和C，以及複合物，包括Cullin-2和Rbx1。 VHL的主要底物是低氧誘導因子Ia（HIF-1a），一種轉錄因子，可回應低氧水準上調基因，例如促血管生成生長因子VEGF和誘導紅細胞的細胞因子促紅細胞生成素。 VCB是癌症，慢性貧血和局部缺血的已知靶標。
Cereblon（CRBN）是另一種E3泛素連接酶，它與受損的DNA結合蛋白1（DDB 1），Cullin-4A（CUL4A）和cullins 1（ROC 1）的調節劑一起形成E3泛素連接酶複合物。 該複合物泛素化許多其他蛋白質。藉由尚未完全闡明的機制，目標蛋白的Cereblon泛素化導致成纖維細胞生長因子8（FGF8）和成纖維細胞生長因子10（FGF10）的水準升高。 FGF8依次調節許多發育過程，例如肢體和聽覺囊泡的形成。另外，研究表明結合並抑制Cereblon的小分子（例如來那度胺）對DLBCL細胞，較佳ABC-DLBCL細胞具有直接的抗腫瘤活性。
蛋白降解靶向嵌合體（Proteolysisi Targeting Chimera；PROTAC）是一種應用泛素-蛋白酶體系統靶向特定蛋白質並誘導其在細胞內降解的技術。泛素-蛋白酶體系統是細胞內蛋白質降解的主要途徑，其正常生理功能主要負責清除細胞內變性、突變或有害蛋白質，細胞內80%以上蛋白質的降解都依賴於泛素-蛋白酶體系統。PROTAC是一種雙功能的小分子三聯體化合物，可以分為靶蛋白小分子抑制劑、Linker（接頭）、E3泛素連接酶配體三部分。PROTAC分子進入細胞後，其結構中的目標蛋白（Protein of Interest，POI）配體可特異性地與相應的靶蛋白結合，而另一端可以募集E3連接酶從而形成POI-Linker-E3 ligase三員複合物，其中E3連接酶可介導泛素結合酶E2對POI泛素化。被泛素標記的POI被蛋白酶體識別並降解。
本發明描述了雙功能或蛋白水解靶向嵌合化合物（PROTAC）化合物，其可作為靶向泛素化的MALT1抑制和/或降解劑。
本發明提供了一種可以用於抑制和/或降解MALT1的新型雙功能化合物，含有所述化合物的藥物組合物、製備方法及其用於治療癌症的用途。
該化合物為包含靶蛋白的小分子配體、接頭與E3泛素連接酶的配體的三聯體化合物，如下式所示， 其中，靶蛋白的小分子配體可以特異性結合靶蛋白，在三聯體化合物中藉由共價鍵與接頭相連接；接頭為靶蛋白的小分子配體與E3泛素連接酶的配體的連接基團，一端與靶蛋白的小分子配體結合，另一端與E3泛素連接酶的配體結合；E3泛素連接酶的配體能夠結合泛素連接酶，如E3泛素連接酶，與接頭共價結合。
本發明提供了式（I’）所示的化合物： ( I’ ) 或其異構體以及藥學上可接受的鹽，其中TGL結合MALT1靶標配體， 選自 、 、 、 、 、 、 ； 其中E為結合泛素連接酶的降解決定子，選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 ； 其中L為接頭，具有式（Ⅱ’）所示結構 （Ⅱ’） B 1為C 1-15亞烴基鏈, 其中所述C 1-15亞烴基鏈中的氫原子任選地被1-3個R a取代，C 1-15亞烴基鏈中的碳原子任選的被-NR b-、-O-、羰基所替代；R a為C 1-4烷基；R b為H或者C 1-4烷基；較佳地，B 1為C 1-15亞烷基鏈，其中所述C 1-15亞烷基鏈中的氫原子任選地被1-3個R a取代，C 1-15亞烷基鏈中的碳原子任選的被-NR b-、-O-、羰基所替代；R a為C 1-4烷基；R b為H或者C 1-4烷基； B 2為化學鍵、任選被取代的如下基團：C 3-6的環烷基、3-6員雜環烷基、C 7-11螺環烷基、7-11員螺雜環烷基； B 3為化學鍵、碳原子任選的被-NR b-、-O-、羰基所替代的C 1-4亞烷基鏈; B 4為化學鍵、任選被取代的如下基團：C 3-6環烷基、3-6員雜環烷基、C 7-11螺環烷基、7-11員螺雜環烷基； B 5為化學鍵、C 1-5亞烷基鏈，所述亞烷基鏈中碳原子任選的被NR c、羰基或氧所替代，R c為H或C 1-4烷基； n 1、n 2、n 3、n 4為0或1。
在本發明的一些方案中，上述E選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 。
在本發明的一些方案中，上述L具有式（Ⅱ’a）結構。 （Ⅱ’a）
在本發明的一些方案中，上述L具有式（Ⅱ’b）結構。 （Ⅱ’b）
在本發明的一些方案中，上述L具有式（Ⅱ’c）結構。 （Ⅱ’c）
在本發明的一些方案中，上述L具有式（Ⅱ’d）結構。 （Ⅱ’d）
在本發明的一些方案中，上述L具有式（Ⅱ’e）結構。 （Ⅱ’e）
在本發明的一些方案中，上述L具有式（Ⅱ’f）結構。 （Ⅱ’f）
在本發明的一些方案中，上述B 2、B 3、B 4、B 5各自獨立的為化學鍵。
在本發明的一些方案中，上述B 1為C 1-15亞烴基鏈，C 1-15亞烴基鏈中氫原子任選地被1-2個R a取代，C 1-15亞烴基鏈中碳原子任選2～4個碳原子被-NR b-、-O-、羰基所替代，R a為C 1-4烷基；R b為H或者C 1-4烷基。
在本發明的一些方案中，上述B 1為C 1-11亞烷基鏈，C 1-11亞烷基鏈中氫原子任選地被1-2個R a取代，碳原子任選的被-NR b-、-O-、羰基所替代，R b為H或者C 1-4烷基。
在本發明的一些方案中，上述B 1為C 1-11亞烷基鏈，C 1-11亞烷基鏈中氫原子任選地被1-2個R a取代，任選2～4個碳原子被-NR b-、-O-、羰基所替代，R b為H或者C 1-4烷基。
在本發明的一些方案中，上述B 1為C 1-6亞烷基鏈，C 1-6亞烷基鏈中氫原子任選地被1-2個R a取代，碳原子任選的被-NR b-、-O-、-C(O)-替代，R b為H或者C 1-4烷基。
在本發明的一些方案中，上述B 1為C 7-11亞烷基鏈，C 7-11亞烷基鏈中氫原子任選地被1-2個R a取代，碳原子任選的被-NR b-、-O-、羰基所替代， R b為H或者C 1-4烷基；
在本發明的一些方案中，上述B 1為C 1-6亞烷基鏈，C 1-6亞烷基鏈中氫原子任選地被1-2個R a取代，任選2～4個碳原子任選的被-NR b-、-O-、羰基所替代，R b為H或者C 1-4烷基。
在本發明的一些方案中，上述B 1為C 7-11亞烷基鏈，C 7-11亞烷基鏈中氫原子任選地被1-2個R a取代，任選1～2碳原子被-NR b-、-O-、羰基所替代，R b為H或者C 1-4烷基。
在本發明的一些方案中，上述B 1為C 7-11亞烷基鏈，C 7-11亞烷基鏈中氫原子任選地被1-2個R a取代，任選3～5碳原子被-NR b-、-O-、羰基所替代，R b為H或者C 1-4烷基。
在本發明的一些方案中，上述R a為甲基。
在本發明的一些方案中，上述R b為氫或甲基。
在本發明的一些方案中，上述B 1選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 。
在本發明的一些方案中，上述B 2選自C 3-6的環烷基、4-6員雜環烷基，其中雜環烷基中含有1-2個N雜原子，所述環烷基、雜環烷基任選被C 1-4烷基取代。
在本發明的一些方案中，上述B 2選自C 7-11螺環烷基、9-11員螺雜環烷基，其中螺雜環烷基中含有1-2個N雜原子。
在本發明的一些方案中，上述B 2選自C 9-11螺環烷基、7-11員螺雜環烷基，其中螺雜環烷基中含有1-2個N雜原子。
在本發明的一些方案中，上述B 2選自7-11員螺雜環烷基，其中螺雜環烷基中含有1-2個N雜原子。
在本發明的一些方案中，上述B 2為 、 、 、 、 、 、 、 、 。
在本發明的一些方案中，上述B 2為 。
在本發明的一些方案中，上述B 3為碳原子任選的被-NR b-、-O-、羰基所替代的C 1-4亞烷基鏈；較佳-CH 2-、-CH 2-N(CH 3)-、-CO-。
在本發明的一些方案中，上述B 3選自-N(CH 3)-、-(CH 2) 2-。
在本發明的一些方案中，上述B 4為任選被取代的如下基團：C 3-6環烷基、3-6員雜環烷基、C 7-11螺環烷基、7-11員螺雜環烷基。
在本發明的一些方案中，上述B 4選自C 3-6的環烷基、4-6員雜環烷基，其中雜環烷基中含有1-2個N雜原子，所述環烷基、雜環烷基任選被C 1-4烷基取代。
在本發明的一些方案中，上述B 4選自C 7-11螺環烷基、9-11員螺雜環烷基，其中螺雜環烷基中含有1-2個N雜原子。
在本發明的一些方案中，上述B 4選自7-11員螺雜環烷基，其中螺雜環烷基中含有1-2個N雜原子。
在本發明的一些方案中，上述B 4選自C 9-11螺環烷基、7-11員螺雜環烷基，其中螺雜環烷基中含有1-2個N雜原子。
在本發明的一些方案中，上述B 4為 、 、 、 、 、 、、 、 。
在本發明的一些方案中，上述B 4為 。
在本發明的一些方案中，上述 B 5為C 1-5亞烷基鏈，碳原子任選的被NR c、羰基或氧所替代，R c為H或C 1-4烷基。
在本發明的一些方案中，上述R c為氫。
在本發明的一些方案中，上述R c為-CH 3。
在本發明的一些方案中，上述 B 5選自 、 、 、 、 、 、 。
在本發明的一些方案中，上述B 5選自 、 、 、 。
在本發明的一些方案中，上述L 為C 1-11亞烷基鏈，其中所述C 1-11亞烷基鏈中的氫原子任選地被1-3個R a取代，C 1-11亞烷基鏈中的碳原子任選的被-NR b-、-O-、羰基所替代；R a為C 1-4烷基；R b為H或者C 1-4烷基。
在本發明的一些方案中，上述L為C 1-7亞烷基鏈與C 6-9環烷烴的組合，其中所述C 1-7亞烷基鏈中的氫原子任選地被1-3個R a取代，C 1-7亞烷基鏈中的碳原子任選的被-NR b-、-O-、羰基所替代；R a為C 1-4烷基；R b為H或者C 1-4烷基。
在本發明的一些方案中，上述L為C 1-7亞烷基鏈與4-9員雜環烷烴的組合，其中所述C 1-7亞烷基鏈中的氫原子任選地被1-3個R a取代，C 1-7亞烷基鏈中的碳原子任選的被-NR b-、-O-、羰基所替代；R a為C 1-4烷基；R b為H或者C 1-4烷基。
在本發明的一些方案中，上述L選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 。
在本發明的一些方案中，上述L選自 、 、 、 、 、 、 。
在本發明的一些方案中，上述L選自 、 、 、 、 、 、 、 。
本發明還提供下述化合物或其異構體或藥學上可接受的鹽，其選自： 。
本發明還提供了化合物的製備方法： 方法一：
R a為氫或C 5-6含氮雜芳基；R b為鹵素或者鹵代C 1-4烷基；L’為直連烷烴或者為直連烷烴與雜環烷基的組合，其中所述烷烴中碳原子任選被雜原子取代，L’任選被C 1-4烷基取代；Y選自結合至CRBN、VHL的結構或類似物。
PG為羥基的保護基團，可為任選取代的如下基團：C 1-6烷基(例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基和叔丁基等)、苯基、C 7-10芳烷基(例如苄基等)、C 1-6烷基羰基(例如乙醯基和丙醯基等)、甲醯基、苯氧基羰基、C 7-10芳烷氧基羰基(例如苄氧基羰基等)、四氫吡喃基、四氫呋喃基和甲矽烷基等。所述取代基可為，例如鹵原子(例如氟、氯、溴和碘)、C 1-6烷基、苯基、C 7-11芳烷基和硝基等，並且取代基的數目可為1-4個。
中間體IN-1由化合物A經脫保護反應生成。具體的脫保護條件包括，鹽酸（HCl）/甲醇（MeOH）或二氧六環（dioxane）、H 2/鈀碳（Pd-C）、三氟乙酸（TFA）等。
產物由IN-1和化合物B經公知的縮合條件得到。 方法二： R a、 R b、L’、Y如上述定義；X為鹵素； 產物由化合物C在鹼性條件下，與化合物B經取代反應得到。其中“鹼”的實例是無機鹼，例如碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀和氫氧化鉈等；以及有機鹼，例如三乙胺、二異丙基乙基胺和吡啶等。 方法三： R a、 R b、L’、Y如上述定義； 產物由化合物D和化合物B在鹼存在下反應，並進一步被還原生成。其中“鹼”的實例是無機鹼，例如碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀和氫氧化鉈等；以及有機鹼，例如三乙胺、二異丙基乙基胺和吡啶等。該反應使用的反應溶劑例如N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯烷酮、乙腈、DMSO、四氫呋喃等；其中，還原條件如Pd/C等。
本發明還提供一種藥物組合物，其含有治療有效量的（I’）所示化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽和藥學上可接受的載體、稀釋劑和賦形劑。藥物組合物能配製用於特定給藥途徑，如口服給藥、胃腸外給藥和直腸給藥等。口服，例如片劑、膠囊劑(包括持續釋放或定時釋放處方)、丸劑、散劑、顆粒劑、酏劑、酊劑、混懸液(包括奈米混懸液、微米混懸液、噴霧乾燥分散劑)、糖漿劑和乳劑；舌下給藥；含服；胃腸外給藥，例如藉由皮下、靜脈內、肌內或胸骨內的注射，或輸注技術(例如作為無菌可注射水溶液或非水溶液或混懸液) ；經鼻，包括對鼻黏膜給藥，例如藉由吸入噴霧給藥；局部給藥，例如以乳膏或軟膏的形式；或經直腸給藥，例如以栓劑的形式給藥。它們可單獨給藥，但通常會與根據所選擇的給藥途徑和標準藥學操作選擇的藥學載體一起給藥。
“藥學上可接受的載體”指本領域通常可接受的用於將生物活性藥劑遞送給動物、特別是哺乳動物的介質，根據給藥方式和劑型的性質包括例如佐劑、賦形劑或賦形物，例如稀釋劑、防腐劑、填充劑、流動調節劑、崩解劑、潤濕劑、乳化劑、助懸劑、甜味劑、調味劑、芳香劑、抗菌劑、抗真菌劑、潤滑劑和分散劑。藥學上可接受的載體在本領域普通技術人員的眼界範圍內根據大量因素配製。其包括但不限於：配製的活性藥劑的類型和性質，要將含有該藥劑的組合物給藥的物件，組合物的預期給藥途徑，和目標治療適應症。藥學上可接受的載體包括含水介質和非水介質這兩者以及多種固體和半固體劑型。除了活性藥劑以外，這樣的載體包括許多不同的成分和添加劑，因多種原因(例如穩定活性藥劑、黏合劑等)在處方中包括的這樣的另外的成分對於本領域普通技術人員是眾所周知的。
用於本發明化合物的給藥方案當然可根據已知的因素改變，例如具體藥劑的藥效學特徵及其給藥的模式和途徑，接受者的物種、年齡、性別、健康、醫學狀況和體重，症狀的性質和程度，共存的治療的種類，治療的頻率，給藥的途徑，患者的腎臟和肝臟的功能，和需要的效果。治療有效劑量的化合物、藥物組合物或其組合取決於物件種類、體重、年齡和個體情況、所治療病症或疾病或其嚴重度。掌握普通技術的醫生、臨床醫生或獸醫能容易確定預防、治療或抑制病症或疾病進展所需的各活性成分有效量。
本發明還提供（I’）所示化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽或上述的藥物組合物在製備治療由MALT1靶點介導的相關疾病藥物中的用途。
在本發明的一些方案中，所述MALT1靶點介導的相關疾病為細胞異常增殖性疾病；較佳地，所述的細胞異常增殖性疾病為癌症。
本發明還提供（I’）所示化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽或上述的藥物組合物在製備治療細胞異常增殖性疾病藥物中的應用；較佳地，所述的細胞異常增殖性疾病為癌症。
在本發明的一些方案中，上述的應用，其中癌症包括膽管、骨、膀胱、中樞神經系統、乳房、結直腸、胃、頭和頸、肝、肺、神經元、食道、卵巢、胰腺、前列腺、腎臟、皮膚、睾丸、甲狀腺、子宮和外陰的等實體腫瘤。
本發明還提供了一種治療癌症性疾病的方法，所述方法包括向受試者施用治療有效量的式（I’）所示的化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽。
本發明還提供了一種式（I’）所示的化合物，所述化合物用於治療癌症性疾病。 [技術效果]
本發明化合物有顯著的蛋白降解活性、細胞增殖抑制活性，可用於癌症的治療。 [說明和定義]
除非另有說明，本文所用的下列術語和短語旨在具有下列含義。一個特定的術語或短語在沒有特別定義的情況下不應該被認為是不確定的或不清楚的，而應該按照普通的含義去理解。
術語“藥學上可接受的”指在合理的醫學判斷範圍內適合與人類和動物的組織接觸使用而無過度的毒性、刺激、過敏反應或其它的問題或併發症，與合理的收益/風險比相當的那些化合物、材料、組合物和/或劑型。
術語“藥學上可接受的鹽”是指本發明化合物與相對無毒的酸或鹼製備得到的衍生物。這些鹽可以在化合物合成、分離、純化期間就被製備，或者單獨使用經過純化的化合物的遊離形式與適合的酸或鹼反應。當化合物中含有相對酸性的官能團時，與鹼金屬、鹼土金屬氫氧化物或有機胺反應得到鹼加成鹽，包括基於鹼金屬與鹼土金屬的陽離子以及無毒的銨、季銨和胺陽離子，還涵蓋氨基酸的鹽等。當化合物中含有相對鹼性的官能團時，與有機酸或無機酸反應得到酸加成鹽。
本發明中所記載的各結構單元的斷開位置僅是為了便於本發明內容的描述，其對於化合物的合成方法或者各片段獨立存在的結構不具有限定作用。
本發明所述的異構體包括幾何異構體以及立體異構體，例如順反異構體、對映異構體、非對映異構體、及其外消旋混合物和其他混合物，所有這些混合物都屬於本發明的範圍之內。
術語“對映異構體”是指互為鏡像關係的立體異構體。
術語“非對映異構體”是指分子具有兩個或多個手性中心，並且分子間為非鏡像的關係的立體異構體。
術語“順反異構體”是指分子中雙鍵或者成環碳原子單鍵不能自由旋轉而存在的構型。
除非另有說明，用楔形實線鍵 和楔形虛線鍵 表示一個立體中心的絕對構型，用直形實線鍵 和直形虛線鍵 表示立體中心的相對構型，如雙直形實線鍵 或雙直形虛線鍵 表示順式結構，一直形實線鍵 和一直形虛線鍵 表示反式結構。例如 、 代表羥基和醯胺基位於吡咯烷的同側， 代表羥基和醯胺基位於吡咯烷的兩側。
本發明化合物的立體異構體可以藉由手性合成或手性試劑或者其它常規技術製備。例如本發明某化合物的一種對映體，可以藉由不對稱催化技術或者手性助劑衍生技術製備得到。或者藉由手性拆分技術，從混合物中得到單一立體構型的化合物。或者用手性起始原料，直接製備得到。本發明中的光學純化合物的分離通常是使用製備色譜完成的，採用手性色譜柱，達到分離手性化合物的目的。
化合物的絕對立體構型藉由可以藉由本領域常規技術手段予以確證。例如單晶X射線繞射法，也可以藉由原料的手性結構以及不對稱合成的反應機理來確證化合物的絕對構型。本文中標記為“絕對構型未測定”的化合物，通常是由消旋體化合物藉由手性製備型SFC拆分為單一異構體，然後進行表徵和測試。
術語“賦形劑”通常是指配製有效的藥物組合物所需要載體、稀釋劑和/或介質。
術語“有效預防或治療量”是指本發明化合物或其藥學上可接受的鹽以適用於任何醫學治療和/或預防的合理效果/風險比治療障礙的足夠量的化合物。但應認識到，本發明式（I’）所示化合物或其藥學上可接受的鹽和組合物的總日用量須由主診醫師在可靠的醫學判斷範圍內作出決定。對於任何具體的患者，具體的治療有效劑量水準鬚根據多種因素而定，所述因素包括所治療的障礙和該障礙的嚴重程度；所採用的具體化合物的活性；所採用的具體組合物；患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別和飲食；所採用的具體化合物的給藥時間、給藥途徑和排泄率；治療持續時間；與所採用的具體化合物組合使用或同時使用的藥物；及醫療領域公知的類似因素。例如，本領域的做法是，化合物的劑量從低於為得到所需治療效果而要求的水準開始，逐漸增加劑量，直到得到所需的效果。
除非特別說明，術語“任選被取代的”是指給定基團中的氫原子可以被取代，也可以不被取代，除非另有規定，取代基的種類和數目在化學上可以實現的基礎上可以是任意的，例如，術語“可任選地被一個或多個R a取代”是指可以被一個或多個R a取代，也可以不被R a取代。
當列出的取代基未指明該取代基藉由哪個原子連接至具有給定結構式的化合物的其餘部分上時，則該取代基可藉由取代基中的任一可鍵合原子來連接。
除非另有規定，術語“烷基”表示直鏈或支鏈的飽和烴基，包括C 1-6的烷基、C 1-4的烷基，數值表示碳原子數目。烷基的實例包括，但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、丁基、異丁基等。
除非另有規定，術語“亞烴基鏈”指直鏈或支鏈的鏈狀烴去掉氫原子所衍生的基團，所述鏈烴包括烷烴、烯烴、炔烴。具體鏈烴基實例包括但不限於： 、 、 、 、 、 等。
除非另有規定，“環”是指飽和的、部分飽和的或不飽和的單環以及多環，“多環”包括螺環、并環或橋環。代表性的“環”包括被取代或未被取代的環烷基、雜環烷基、環烯基、雜環烯基、環炔基、雜環炔基、芳基或雜芳基。術語“雜”表示取代或未被取代的雜原子以及雜原子的氧化形式，所述雜原子一般選自N、O、S，氧化形式一般包括NO、SO、S(O) 2，氮原子可以是取代的，即NR（R為H或者文中定義的其他取代基）；環上原子的數目通常被定義為環的員數，例如，“3-6員雜環烷基”是指3-6個原子環繞排列而成的環，每個環任選地包含1～3個雜原子，即N、O、S、NO、SO、S(O) 2或NR，每個環任選的被R基團所取代，R為文中所定義的基團。
除非另有規定，“環烷基”是指飽和的單環或多環烴基。環烷基較佳3-6員單環烷基，這些單環烷基的實例包括但不限於，環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基。
除非另有規定，“雜環烷基”是指環中包含一定數目雜原子的單雜環烷基以及多雜環烷基，所述雜原子一般選自N、NR、O、S、NO、SO、S(O) 2，較佳1-2個N和/或NR和/或O。雜環烷基較佳3-6員單雜環烷基，更佳5-6員單雜環烷基，這些單雜環烷基的實例包括，但不限於環氧乙烷基、四氫吡咯基、呱啶基、呱嗪基、嗎啉基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、四氫吡喃基、1,3-二氧戊環、1,4-二氧六環等。
除非另有規定, “螺環烷基”是指兩個碳環共有一個碳原子形成螺環基，螺環烷基較佳5-13員螺雜環基、6-12員螺雜環基、或者7-11員螺雜環基。螺環烷基的實施列包括但不限於 、 、 、 、 。
除非另有規定，“螺雜環基”是指是指螺環骨架結構中的一個或多個碳原子被雜原子取代的螺環基，所述雜原子選自N、NR、O、S，較佳1-2個N、NR和/或O。螺雜環基較佳5-13員螺雜環基、6-12員螺雜環基、或者7-11員螺雜環基。螺雜環基的實施例包括但不限於 、 、 、 、 、 、 。
除非另有規定，術語“雜芳基”意指穩定的單環或者多環的芳族烴，其包含至少一個雜原子（N、O、S、NO、SO、S(O) 2或NR）。較佳5員或6員單環的雜芳基。所述含氮雜芳基是指雜芳基基團中至少含有一個N雜原子。雜芳基的實例包括但不限於吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡嗪基、惡唑基、異惡唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基。
本發明所述的取代基和/或變數的組合應在這些組合產生穩定化合物或可用的合成中間體時才允許。穩定化合物或穩定結構是指足夠穩定以經受化學反應、以有用的純度分離出、可以配製成有效治療藥物的化合物。
在本發明實施例中，標題化合物的命名是藉助Chemdraw藉由化合物結構轉化過來的。若化合物名稱與化合物結構存在不一致的情況，可藉由綜合相關資訊和反應路線輔助確定；無法藉由其他來確認的，以給出的化合物結構式為準。
本發明的化合物可以藉由本領域技術人員所熟知的多種合成方法來製備，包括下面列舉的具體實施方式、其與其他化學合成方法的結合所形成的實施方式以及本領域技術上人員所熟知的等同替換方式，較佳的實施方式包括但不限於本發明的實施例。
為使本發明的目的、技術方案、及優點更加清楚明白，以下舉實施例，對本發明進一步詳細說明。顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基於本發明中的實施例，本領域普通技術人員所獲得的所有其他實施例，都屬於本發明保護的範圍。
本發明的化合物結構是藉由核磁共振（NMR）或/和液質聯用色譜（LC-MS），或超高效液質聯用色譜（UPLC-MS）來確定的。NMR化學位移（δ）以百萬分之一（ppm）的單位給出。NMR的測定是用Bruker Neo 400M或者Bruker Ascend 400核磁儀器，測定溶劑為氘代二甲基亞碸（DMSO- d 6），氘代甲醇（CD 3OD）和氘代氯仿（CDCl 3），重水（D 2O），內標為四甲基矽烷（TMS）。
液質聯用色譜LC-MS的測定用Agilent 1260-6125B single quadrupole mass spectrometer，柱子為 Welch Biomate column (C18, 2.7 um, 4.6*50 mm) 或者waters H-Class SQD2，柱子為 Welch Ultimate column (XB-C18, 1.8 um, 2.1*50 mm)，質譜儀（離子源為電噴霧離子化）。
超高效液質聯用色譜UPLC-MS的測定用Waters UPLC H-class SQD質譜儀（離子源為電噴霧離子化）。
HPLC的測定使用Waters e2695-2998或Waters ARC和Agilent 1260或 Agilent Poroshell HPH高效液相色譜。
製備HPLC使用Waters 2555-2489 (10 µm，ODS 250cm ×5cm）或GILSON Trilution LC，柱子為Welch XB-C18 柱 (5um, 21.2*150 mm)。
手性HPLC測定使用waters acquity UPC2；柱子為 Daicel chiralpak AD-H (5 um, 4.6*250 mm), Daicel chiralpak OD-H (5 um, 4.6*250 mm), Daicel chiralpak IG-3 (3 um, 4.6*150 mm), Chiral Technologies Europe AD-3 (3 um, 3.0*150 mm) 和 Trefoil TM Technology Trefoil TM AMY1 (2.5 um, 3.0*150 mm)。
超臨界流體色譜（SFC）使用waters SFC 80Q，柱子為Daicel Chiralcel OD/O J/OZ (20 x 250 mm, 10 um) 或 Daicel Chiralpak IC/IG/IH/AD/AS (20 x 250 mm, 10 um)。
薄層層析矽膠板使用煙臺江友矽膠開發有限公司GF254矽膠板或乳山市上邦新材料有限公司GF254矽膠板，TLC採用的規格是0.15 mm~0.20 mm，製備型20 x 20 cm，柱層析一般使用於成化工200~300目矽膠為載體。
本發明實施例中的起始原料是已知的並且可以在市場上買到，或者可以採用或按照本領域已知的方法來合成。
在無特殊說明的情況下，本發明的所有反應均在連續的磁力攪拌下，在乾燥氮氣或氬氣氣氛下進行，溶劑為乾燥溶劑，反應溫度單位為攝氏度。
下面藉由實施例對本發明進行詳細描述，但並不意味著對本發明任何不利限制。本發明的化合物可以藉由本領域技術人員所熟知的多種合成方法來製備，包括下面列舉的具體實施方式、其與其他化學合成方法的結合所形成的實施方式以及本領域技術上人員所熟知的等同替換方式，較佳的實施方式包括但不限於本發明的實施例。對本領域的技術人員而言，在不脫離本發明精神和範圍的情況下針對本發明具體實施方式進行各種變化和改進將是顯而易見的。
中間體INT-1:(S) -2-氯-7-（1-甲氧基乙基）吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-羧酸
反應流程：
實施例流程：
步驟A：將 (S)-2-羥基丙酸苄酯 (5.5 克, 30.5 毫莫耳) 溶於丙酮 (30毫升)中，再陸續向該溶液中加入碘甲烷 (43克, 305毫莫耳)和氧化銀 (10.6 克, 45.75毫莫耳)。該反應系統在室溫條件下繼續攪拌過夜。LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加乙酸乙酯 (100 毫升) ，過濾除去固體，有機相用飽和食鹽水 (100 毫升 ×3) ，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化 (洗脫劑: 石油醚/乙酸乙酯= 6/1) 得到2.4 克化合物 INT-1-1。
步驟B：將 化合物INT-1-1 (1.6 克, 8.3 毫莫耳) 溶於乙醇 (15 毫升)，氬氣置換後，加入 Pd/C (10%, 0.2 克)。 該系統用氫氣置換，並在氫氣球的環境中室溫攪拌三個小時。將反應液過濾，濾液減壓濃縮，得到0.9 克化合物INT-1-2。該粗品直接用於下一步反應。
步驟C：將化合物INT-1-2 (0.9克, 8.2 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (10 毫升)，並在零攝氏度條件下加入N,N' - 羰基二咪唑 (1.5 克, 9.0 毫莫耳)。撤去冰浴，將溫度升至28攝氏度，並在該條件下攪拌3個小時。(反應液一)；
將3-叔丁氧基-3-氧丙二酸 (2.0克, 12.2 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (10 毫升)。零攝氏度條件下慢慢加入異丙基氯化鎂 (12.2 毫升, 24.5 毫莫耳) 。撤去冰浴，將溫度升至28攝氏度，並在該條件下攪拌3個小時。(反應液二)
零攝氏度條件下，將反應液二慢慢加入反應液一中，待滴加完畢，將反應系統升至28攝氏度，並在該溫度下攪拌1小時。反應液用10 %的檸檬酸淬滅，乙酸乙酯 (25 毫升 ×2) 萃取。合併有機相，用飽和碳酸氫鈉溶液 (25 毫升 ×2) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓蒸餾，所得粗品用矽膠柱層析純化 (洗脫劑: 石油醚/乙酸乙酯= 4/1) 得到0.7 克化合物INT-1-3。
MS (ESI) M/Z: 225.3 [M+Na] +。
步驟D：將化合物INT-1-3 (0.5 克, 2.7 毫莫耳) 溶於N,N-二甲基甲醯胺二甲基縮醛 (1.25 毫升)，該系統在120攝氏度的條件下加熱1小時，然後降溫至80攝氏度。
將3-氯-lH-吡唑-5-胺 (314.0 毫克, 2.7 毫莫耳) 溶於乙醇 (5 毫升)，並將該溶液加入上述反應系統中，在80攝氏度條件下攪拌2個小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓濃縮，所得粗品用矽膠柱層析純化得到0.7 克化合物INT-1-4。
MS (ESI) M/Z: 312.2 [M+H] +。
步驟E：將化合物INT-1-4 (600 毫克, 1.93 毫莫耳) 溶於三氟乙酸 (5 毫升)，該溶液在室溫下下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓濃縮，所得粗品用矽膠柱層析純化得到400 毫克中間體INT-1。
MS (ESI) M/Z: 256.3 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.73 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 5.42 - 5.40 (m, 1H), 3.16 (s, 3H), 1.64 (d, J= 6.8 Hz, 3H).
中間體INT-2:(S) -1-(2-(2-氨基乙氧基)-5-氯吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲鹽酸鹽
反應流程：
實施例流程：
步驟A: 在零攝氏度和氮氣保護條件下，將5-氯-3-硝基吡啶-2-醇 (1.7 克, 10.0 毫莫耳)，叔丁基（2-羥乙基）氨基甲酸酯 (1.6 克, 10.0 毫莫耳)，三苯基膦 (5.2 克, 20.0 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (30 毫升)，加入偶氮二甲酸二乙酯 (3.5 克, 20.0 毫莫耳)。滴加完畢，該反應系統在室溫下攪拌18小時。反應液用水 (50 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (50 毫升 ×3) 萃取。合併有機相，有機相用飽和食鹽水 (50 毫升 ×3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到1.8 克化合物INT-2-1。
MS (ESI) M/Z: 340.1 [M+Na] +。
步驟B：將化合物INT-2-1 (10.0 克, 31.5 毫莫耳) 和氯化銨 (1.7 克, 31.5 毫莫耳) 溶於乙醇 (120 毫升) 和水 (12 毫升) 中。加入鐵粉 (17.7 克, 315.0 毫莫耳)，該反應系統在85攝氏度下攪拌3小時。反應液降至室溫，加水 (100 毫升) 稀釋，乙酸乙酯 (100 毫升 ×3) 萃取。合併有機相，有機相用飽和食鹽水 (100 毫升 ×3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化 (洗脫劑: 石油醚/乙酸乙酯= 1/1) 得到8.0化合物INT-2-2。
MS (ESI) M/Z: 310.0 [M+Na] +。
步驟C: 將中間體INT-1 (45.0 毫克, 0.2 毫莫耳) 溶於1,4-二氧六環 (2 毫升) 中。加入疊氮磷酸二苯酯(0.1 毫升，0.5毫莫耳) 和三乙胺 (0.1 毫升, 0.7 毫莫耳)。該系統在室溫下攪拌半個小時。將化合物INT-2-2 (100.0 毫克, 0.3 毫莫耳) 加入上述反應系統中。該反應液加熱至100攝氏度並攪拌1小時。反應液降至室溫，加入水 (10 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (10 毫升 ×3) 萃取。合併有機相，用飽和碳酸鈉溶液 (10 毫升 ×3) 和飽和食鹽水 (10 毫升 ×3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用高效液相色譜分離得到48.0 毫克化合物INT-2-3。
MS (ESI) M/Z: 563.3 [M+Na] +。
步驟 D：將化合物INT-2-3 (200.0 毫克, 0.4 毫莫耳) 溶於乙酸乙酯 (5 毫升) 和鹽酸的二氧六環溶液 (4 莫耳，5 毫升) 中。該系統在室溫攪拌3小時。反應液減壓濃縮得到(S) -1-(2-(2-氨基乙氧基)-5-氯吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲鹽酸鹽120.0 毫克中間體INT-2。
MS (ESI) M/Z: 440.3 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 9.72 (s, 1H), 9.60 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.52 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 8.38 (br, 2H), 7.82 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.35-5.33 (m, 1H), 4.49-4.46 (m, 2H), 3.33-3.31 (m, 2H), 3.21 (s, 3H), 1.62 (d, J= 6.7 Hz, 3H).
中間體INT-3:(S) -1-(2-(2-氨基乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲鹽酸鹽
製備方法參考中間體INT-2製備例，最後得到目標產物 (S) -1-(2-(2-氨基乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲鹽酸鹽中間體INT-3。
MS (ESI) M/Z: 474.1 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 9.86 (s, 1H), 9.64 (s, 1H), 8.76 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.40 (br, 2H), 8.19 (d, J= 0.8 Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 5.36-5.34 (m, 1H), 4.59-4.56 (m, 2H), 3.39-3.35 (m, 2H), 3.22 (s, 3H), 1.63 (d, J= 6.8 Hz, 3H).
中間體INT-4:(S)-1-(2-(2-氨基乙氧基)-5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-(1-甲氧乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)尿鹽酸鹽
製備方法參考INT-2製備例，最後得到目標產物中間體INT-4。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 10.03 (s, 1H), 9.71 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.40 (brs, 2H), 8.15 (s, 2H), 6.96 (s, 1H), 5.37 (q, J= 6.8 Hz, 1H), 4.49 (t, J= 4.8 Hz, 2H), 3.34 - 3.30 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 1.65 (d, J= 6.8 Hz, 3H).
中間體INT-5:(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1 -(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺
反應流程:
實施例流程：
步驟 A: 將40克 (0.2 莫耳) (S)-1-(4-溴苯基)乙-1-胺加入乙酸乙酯 (400 毫升) 和水 (400 毫升) 的混合溶液中，將二碳酸二叔丁酯 (64 克, 0.3 莫耳)、 碳酸氫鈉 (24 克, 0.4 莫耳) 加入上述混合物中。 將所得混合物在 25 攝氏度攪拌 1 小時。LCMS監測顯示原料消失 (全溶解)。 加入1升水和1升 乙酸乙酯並將反應混合物劇烈攪拌5分鐘。 有機相分離後，水相再次用乙酸乙酯萃取。 用水洗滌合併的有機萃取物並用硫酸鈉乾燥。過濾，濃縮得到55 克化合物INT-5-1。
步驟B: 將化合物INT-5-1 (5 克，16 毫莫耳)，醋酸鈀 (35.8 毫克, 0.16 毫莫耳) 溶在N,N-二甲基乙醯胺 (80 毫升) 中，再向該溶液中加入 醋酸鉀(3.1 克，32 毫莫耳) 和 4-甲基噻唑 (3.2 克，32 毫莫耳)。 將得到的反應混合物在90攝氏度下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後， 反應液用純淨水 (50 毫升) 淬滅，用二氯甲烷 (50 毫升 ×3) 萃取。 合併有機相並用無水硫酸鈉乾燥後過濾濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化兩次得到2.5 克化合物INT-5-2。
步驟 C: 將20毫升鹽酸的1,4-二氧六環溶液加入到化合物INT-5-2 (5.8 克, 18.2 毫莫耳) 和二氯甲烷 (40 毫升) 的混合溶液中。 將反應混合物在 25攝氏度下 攪拌 1 小時。LCMS監測顯示原料消失。將反應液減壓濃縮，得到7 克化合物INT-5-3，無需純化直接用於下一步。MS (ESI) M/Z: 219.3  [M+H] +。
步驟 D: 將化合物N-BOC-反式-4-羥基-D-脯氨酸(4.2 克, 18.2 毫莫耳)、化合物INT-5-3 (7 克)、2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (6.9 克, 18.2 毫莫耳) 和N,N-二異丙基乙基乙基胺 (11.7 克, 90.7 毫莫耳) 加入四氫呋喃 (100 毫升) 中，並在 20攝氏度攪拌 18 小時。LCMS監測顯示原料消失。反應液用純淨水 (200 毫升) 淬滅，用乙酸乙酯 (100 毫升 ×3) 萃取。 合併有機相並用無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化  得到6.8 克化合物 INT-5-4。MS (ESI) M/Z: 432.1 [M+H] +。
步驟 E：將 鹽酸的1,4-二氧六環溶液 (4 M, 4 毫升) 與化合物INT-5-4 (350 毫克，0.8 毫莫耳) 加入二氯甲烷 (4 毫升) 中。反應混合物在 25攝氏度下攪拌 1 小時。LCMS監測顯示原料消失。將反應 混合物濃縮除去溶劑得到420 毫克INT-5-5。
MS (ESI) M/Z: 332.3 [M+H] +。
步驟 F：將(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酸 (293 毫克, 1.3 毫莫耳)、化合物INT-5-5(420 毫克，1.3 毫莫耳)、 2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (483 毫克，1.3 毫莫耳) 和,N-二異丙基乙基乙基胺 (818 毫克，6.3 毫莫耳) 分別加入四氫呋喃 (5 毫升) 溶液中，並在20攝氏度下攪拌18小時。LCMS監測顯示原料消失。反應液用純淨水 (200 毫升) 淬滅後，用乙酸乙酯 (100 毫升 ×3) 萃取。 合併有機相並用無水硫酸鈉乾燥後過濾濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到510 毫克化合物INT-5-6。
MS (ESI) M/Z: 545.3 [M+H] +。
步驟 G: 將鹽酸的1,4-二氧六環溶液 (4 M，2 毫升) 加入化合物INT-5-6 (240 毫克, 0.4 毫莫耳) 和 二氯甲烷 (2 毫升) 的混合物中。 將混合物在 25攝氏度下 攪拌 1 小時, LCMS監測顯示原料消失。 將混合物除去溶劑得到196 毫克中間體INT-5。
MS (ESI) M/Z: 445.1 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 9.06 (s, 1H), 8.58 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 8.12 (s, 3H), 7.41 (dd, J= 25.7, 8.3 Hz, 4H), 4.97 – 4.87 (m, 2H), 4.58 – 4.51 (m, 2H), 4.31 (s, 1H), 3.89 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 3.73 (d, J= 11.1 Hz, 1H), 3.52 – 3.46 (m, 1H), 2.46 (s, 3H), 2.18 – 2.06 (m, 1H), 1.82 – 1.70 (m, 1H), 1.38 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 1.03 (d, J= 8.1 Hz, 9H).
中間體INT-6:(2S, 4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁醯)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺鹽酸鹽
製備方法參考中間體INT-5製備例，最後得到目標產物中間體INT-6。
MS (ESI) M/Z: 431.3 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 9.01 (s, 1H), 8.74 - 8.71 (t, J= 6 Hz, 1H), 8.09 - 8.08 (m, 2H), 7.40 (s, 4H), 4.57 - 4.52 (t, J= 8.4 Hz, 2H), 4.51 - 4.38 (m, 2H), 3.93 - 3.89 (m, 1H), 3.76 - 3.73 (m, 1H), 2.45 (s, 1H), 2.15 - 2.08 (m, 1H), 1.91 (s, 2H), 1.03 (s, 9H).
實施例1：
N1-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-N7-((S)-1-((2S，4R)-4-羥基-2-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲醯)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)庚烷二胺
反應流程:
實施例流程：
步驟A:中間體INT-5 (390.0 毫克, 0.9 毫莫耳)，7-叔丁氧基-7-氧庚酸 (190.0 毫克, 0.9 毫克)，N,N-二異丙基乙胺 (566.0 毫克, 4.4 毫莫耳) 和2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (501.0 毫克, 1.3 毫莫耳) 溶於N,N-二甲基甲醯胺 (150 毫升)。該反應系統在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液用水 (10 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (10 毫升 ×3) 萃取。合併有機相，用水 (10 毫升 ×3) 和飽和食鹽水 (10 毫升 ×3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，減壓濃縮。所得混合物用反相柱層析 (流動相：70% 乙腈，30% 蒸餾水，蒸餾水含0.025% 甲酸) 純化得到240.0 毫克化合物1-1。
MS (ESI) M/Z: 643.3 [M+H] +。
步驟B：將化合物1-1(240.0 毫克, 0.4 毫莫耳) 溶於二氯甲烷 (4 毫升) 和三氟乙酸 (2 毫升) 中。該反應系統在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮得到200毫克化合物1-2。該化合物直接用於下一步。
MS (ESI) M/Z: 609.3 [M+Na] +。
步驟C: 脫鹽的中間體INT-2 (95.0 毫克, 0.2 毫莫耳)，化合物1-2 (120.0 毫克, 0.2 毫莫耳)，N,N-二異丙基乙胺 (0.16 毫升, 1.0 毫莫耳) 和2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (82.0 毫克, 0.2 毫莫耳) 溶於N,N-二甲基甲醯胺 (3 毫升)。該反應系統在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液用水 (10 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (10 毫升 ×3) 萃取。合併有機相，用水 (10 毫升 ×3) 和飽和食鹽水 (10 毫升 ×3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，減壓濃縮。所得混合物用高效液相色譜製備(流動相：80% 乙腈，20% 蒸餾水，蒸餾水含0.025% 甲酸) 得到41.3 毫克N1-(2-((3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-N7-((S)-1-((2S, 4R)-4-羥基-2-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲醯)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)庚烷二胺 (化合物1)。
MS (ESI) M/Z: 504.6 [M/2+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 9.11 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.45 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.35 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 8.00 (t, J= 4.4 Hz, 1H), 7.81 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.76 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 7.44 - 7.32 (m, 4H), 6.92 (s, 1H), 5.41 - 5.36 (m, 1H), 5.08 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 4.94 - 4.88 (m, 1H), 4.50 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 4.43-4.40 (m, 3H), 4.27 (br, 1H), 3.63 - 3.56 (m, 2H), 3.53 - 3.45 (m, 2H), 3.27 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.25 - 2.19 (m, 1H), 2.11 - 2.06 (m, 3H), 2.03 - 1.98 (m, 1H), 1.82 - 1.76 (m, 1H), 1.59 (d, J= 5.6 Hz, 3H), 1.52 - 1.40 (m, 5H), 1.37 (d, J= 6.0 Hz, 3H), 1.24 - 1.17 (m, 2H), 0.91 (s, 9H).
實施例2：
N1-(2-((3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-N7-((S)-1-((2S，4R)-4-羥基-2-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲醯)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)庚烷二胺
反應流程:
實施例流程：
步驟A：將中間體INT-3的鹽酸鹽(80.0 毫克, 0.2 毫莫耳)，化合物1-2 (102.3 mg, 0.2毫莫耳)，N,N-二異丙基乙胺 (112.6毫克, 0.9毫莫耳) 和2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (99.5毫克, 0.3毫莫耳) 溶於N,N-二甲基甲醯胺 (5毫升)。該反應系統在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液用水 (10 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (10毫升×3) 萃取。合併有機相，用水 (10毫升×3) 和飽和食鹽水 (10毫升×3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，減壓濃縮。所得混合物用高效液相色譜製備(流動相：80% 乙腈，20% 蒸餾水，蒸餾水含0.025% 甲酸) 得到135.0毫克N1-(2-((3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-N7-((S)-1-((2S, 4R)-4-羥基-2-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲醯)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)庚烷二胺(化合物2)。
MS (ESI) M/Z: 1042.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 9.24 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.92 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.69 (d, J= 2 Hz, 1H), 8.35 (d, J= 8 Hz, 1H), 8.18-8.17 (m, 1H), 8.02 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 7.76 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.44-7.36 (m, 4H), 6.93 (s, 1H), 5.42-5.37 (m, 1H), 5.08 (d, J= 3.2 Hz, 1H), 4.95 - 4.87 (m, 1H)，4.53 - 4.48 (m, 3H), 4.43 - 4.39 (t, J= 8 Hz, 1H), 4.27 (br, 1H), 3.63 - 3.52 (m, 3H), 3.27 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.24 - 2.18(m, 1H), 2.12 - 1.97 (m, 5H), 1.82 - 1.75(m, 1H), 1.59 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.53 - 1.41 (m, 4H), 1.37 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.25 - 1.17 (m, 2H), 0.92 (s, 9H).
實施例3：
(2S, 4R)-1-((S)-2-(7-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基))吡唑并[ 1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙醯胺基)庚醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4- (4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺
反應流程:
實施例流程：
步驟A: 在零攝氏度下將偶氮二甲酸二乙酯 (2克, 11.5毫莫耳) 加到混有 (5-氯-3-硝基-2-羥基)吡啶 (1克, 5.7毫莫耳)、2-羥基乙酸叔丁酯 (752 毫克, 5.7毫莫耳) 和 三苯基磷 (6.6 克, 25.3毫莫耳) 的四氫呋喃溶液 (20 毫升) 中。在室溫攪拌過夜，LCMS監測顯示原料消失。將反應液倒入水 (50 毫升) 中，並用乙酸乙酯 (100 毫升×3) 萃取。 合併的有機相並用鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥後，過濾並濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化 (洗脫劑: 石油醚/乙酸乙酯= 100/1) 得到210 毫克化合物3-1。
MS (ESI) M/Z：311.1 [M+Na] +。
步驟 B: 將鐵粉 (275 毫克, 4.9毫莫耳) 加入混有化合物3-1(140毫克, 0.5毫莫耳) 的飽和氯化銨水溶液 (0.2 毫升) 和乙醇  (2 毫升) 的混合溶液中。 混合物在回流下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失。將反應冷卻至室溫，濾液藉由矽藻土並濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化 (洗脫劑: 石油醚/乙酸乙酯= 1/1) 得到化合物70 毫克3-2。
步驟 C: 將疊氮磷酸二苯酯 (0.1 毫升) 和三乙胺 (150 微升, 1.2毫莫耳) 添加到含有中間體INT-1(100 毫克, 0.4毫莫耳) 的1，4-二惡烷 (4 毫升) 溶液中。 將所得黃色溶液在室溫攪拌30分鐘，加入200 毫克化合物3-2，並將混合物加熱回流1小時。LCMS監測顯示原料消失。冷卻至室溫後，混合物用水 (50 毫升) 稀釋，用乙酸乙酯 (30 毫升×3) 萃取。 合併的有機相用飽和碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。 殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到40 毫克化合物3-3。
MS(ESI)M/Z: 511.0 [M+H] +。
步驟 D: 在零攝氏度下將三氟乙酸 (2 毫升) 加入含中間體3-3 (200 毫克，0.4毫莫耳) 的二氯甲烷 (5 毫升) 溶液中。 所得黃色溶液在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失。濃縮混合物。無需純化即可獲得120 毫克化合物3-4。
MS(ESI)M/Z：455.1 [M+H] +。
步驟 E:  將7-((叔丁氧基羰基)氨基)庚酸 (108 毫克, 0.4毫莫耳)、中間體INT-5 (196 毫克，0.4毫莫耳)、 2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (167.6毫克，0.4毫莫耳) 和N,N-二異丙基乙基乙基胺 (172 毫克，1.3毫莫耳) 分別加入四氫呋喃 (5 毫升) 中，並在 20攝氏度下攪拌 18 小時。LCMS監測顯示原料消失。反應液用純淨水 (20 毫升) 淬滅後，用乙酸乙酯 (20 毫升×3) 萃取。 合併有機相並用無水硫酸鈉乾燥後過濾濃縮。所得混合物用反相矽膠柱層析純化 (洗脫劑: 乙腈/水 = 1/1) 得到192 毫克化合物3-5。
MS(ESI)M/Z：672.3 [M+H] +。
步驟 F：將 鹽酸的1,4-二氧六環溶液 (4M, 4 毫升) 加入到化合物3-5 (192 毫克, 0.3毫莫耳) 的二氯甲烷 (4 毫升) 溶液中。 將混合物在 25攝氏度下 攪拌 1小時。LCMS監測顯示原料消失。將反應液旋乾得到 187 毫克化合物3-6。
MS(ESI)M/Z：573.0 [M+H] +。
步驟G: 將 化合物3-6 (187 毫克, 0.3毫莫耳)、 化合物3-4 (96毫克，0.2毫莫耳)、 2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (79.8毫克，210微莫耳) 和N,N-二異丙基乙基乙基胺 (94.8 毫克，740微莫耳) 溶在 四氫呋喃 (10 毫升) 中，所得的溶液在 20攝氏度下攪拌 1小時。LCMS監測顯示原料消失。反應液用純淨水 (20 毫升) 淬滅後，用乙酸乙酯 (15 毫升×3) 萃取。 合併有機相並用無水硫酸鈉乾燥後過濾濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化後再用反相柱層析純化 (洗脫劑: 二氯甲烷/甲醇= 4/1，水/乙腈= 2/3)得到43 毫克(2S,4R)-1-((S)-2-(7-( 2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基 )氧基)乙醯氨基)庚醯氨基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺(化合物3)。
MS(ESI)M/Z：1010.2 [M+H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ 9.36 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.47 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.35 ( J= 7.7 Hz, 1H), 8.07 – 8.02 (m, 1H), 7.78 – 7.75 (m, 2H), 7.44 – 7.37 (m, 4H), 6.92 (s, 1H), 5.45 – 5.35 (m, 1H), 4.97 – 4.87 (m, 1H), 4.83 (s, 2H), 4.5 1( J= 9.3 Hz, 1H), 4.44 – 4.39 (m, 1H), 4.31 – 4.26 (m, 1H), 3.64 – 3.55 (m, 2H), 3.27 (s, 3H), 3.12 – 3.04 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.28 – 2.20 (m, 1H), 2.14 – 2.06 (m, 1H), 2.04 – 1.97 (m, 1H), 1.83 – 1.75 (m, 1H), 1.58 (d, J= 6.7 Hz, 3H), 1.52 – 1.38 (m, 4H), 1.37 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 1.24 (d, J= 7.1 Hz, 5H), 0.92 (d, J= 6.3 Hz, 9H).
實施例4：
N1-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-N6-((S)-1-((2S，4R)-4-羥基-2-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲醯)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)己二胺
反應流程:
實施例流程：
步驟A: 中間體INT-2 (95.0 毫克, 0.2 毫莫耳)，化合物4-1 (120.0毫克, 0.2毫莫耳)，N,N-二異丙基乙胺 (0.2 mL, 1.0毫莫耳) 和2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (82.0毫克, 0.2毫莫耳) 溶於N,N-二甲基甲醯胺 (3 毫升)。該反應系統在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液用水 (10毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (10毫升×3) 萃取。合併有機相，用水 (10毫升×3) 和飽和食鹽水 (10毫升×3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，減壓濃縮。所得混合物用薄層層析純化得到70.0毫克N1-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-N6-((S)-1-((2S，4R)-4-羥基-2-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲醯)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)己二胺 (化合物4)。
MS (ESI) M/Z: 994.1 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 9.11 (s, 1H), 8.98 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.76 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 8.45 (d, J= 3.2 Hz, 1H), 8.35 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 8.03 - 8.00 (t, J= 4.4 Hz, 1H), 7.81 (d, J= 2 Hz, 1H), 7.76 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.44 - 7.36 (m, 4H), 6.92 (s, 1H), 5.39 - 5.36 (m, 1H), 4.93 - 4.89 (m, 1H), 4.50 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 4.43 - 4.39 (m, 3H), 4.27 (br, 1H), 3.60 - 3.56 (m, 2H), 3.52 - 3.48 (m, 3H), 3.26 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.24 - 2.22 (m, 1H), 2.11 - 2.07 (m, 3H), 2.00 - 1.98 (m, 1H), 1.81 - 1.79 (m, 1H), 1.58 (d, J= 5.2 Hz, 3H), 1.49 - 1.43 (m, 4H), 1.37 (d, J= 5.6 Hz, 3H), 0.91(s, 9H).
實施例5:
(2S,4R)-1-((S)-2-(7-((2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基)庚醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺
反應流程:
實施例流程：
步驟A：室溫下將7-溴庚酸 (1.1 克, 5.3 毫莫耳)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(20 毫升)中，在冰水浴和氬氣保護下，加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'--四甲基脲六氟磷酸酯(2.0 克, 5.3毫莫耳)，攪拌10分鐘後，依次加入中間體INT-5 (2.0 克, 4.5 毫莫耳)和N,N-二異丙基乙胺 (2.2 毫升, 12.9 毫莫耳)。反應液在冰水浴並且氬氣保護下攪拌30分鐘。LC-MS顯示原料反應完全。向反應液中加入水 (50 毫升) 後用乙酸乙酯(50 毫升× 3) 萃取，合併後的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾，濾液濃縮，所得殘渣經矽膠柱層析分離得到1.2 克化合物5-1。
步驟B： 室溫下將化合物5-1 (60 毫克, 94.4 微莫耳)，中間體INT-2的鹽酸鹽 (23 毫克, 45.2微莫耳)，N,N-二異丙基乙胺 (59 毫克, 453.1微莫耳)，碘化鉀 (19 毫克, 113.3微莫耳) 和N,N-二甲基甲醯胺 (2 毫升) 依次加入單口瓶中。反應液加熱至70 攝氏度攪拌4小時。LC-MS顯示有產物生成。向冷卻後的反應液中加水 (5 毫升) 後用乙酸乙酯 (5 毫升 ×3) 萃取，合併後的有機相經飽和食鹽水 (10 毫升 ×3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經薄層製備色譜純化(展開劑: 二氯甲烷/乙酸乙酯)，得到4.5 毫克(2S,4R)-1-((S)-2-(7-((2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基)庚醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺 (化合物5)。
MS (ESI) M/Z: 994.4 [M+H] +；992.4 [M-H] -。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.49 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.65 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.64 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.35 - 7.32 (m, 4H), 7.28 - 7.25 (m, 1H), 6.64 - 6.61 (m, 2H), 5.53 (q, J= 6.7 Hz, 1H), 5.11 - 5.02 (m, 1H), 4.70 - 4.57 (m, 3H), 4.49 - 4.45 (m, 2H), 3.98 (d, J= 11.6 Hz, 1H), 3.50 - 3.43 (m, 2H), 3.39 (s, 3H), 3.38 - 3.26 (m, 1H), 3.23 - 3.11 (m, 1H), 3.06 - 2.93 (m, 1H), 2.51 (s, 3H), 2.37 - 2.16 (m, 4H), 1.76 - 1.70 (m, 5H), 1.66 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.46 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.41 - 1.32 (m, 4H), 0.96 (s, 9H).
實施例6:
(2S,4R)-1-((S)-2-(7-((2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基)庚醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺
反應流程:
實施例流程：
步驟A: 室溫下將脫鹽的中間體INT-4 (21 毫克, 41 微莫耳) 溶解於N,N-二甲基甲醯胺 (2 毫升) 中，攪拌下加入化合物5-1 (52 毫克, 82 微莫耳)，碘化鉀(21 毫克, 124 微莫耳) 和N,N-二異丙基乙胺 (16 毫克, 124 微莫耳)，反應液加熱至70 攝氏度攪拌4小時。
LC-MS顯示原料基本消耗完全。向冷卻後的反應液中加入乙酸乙酯 (20 毫升)，所得有機相經水洗 (5 毫升×3)，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得粗品殘渣經高效液相製備色譜分離，得到13 毫克(2S,4R)-1-((S)-2-(7-((2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基)庚醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺 (化合物6)。
MS (ESI) M/Z: 1061.1 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.87 (brs, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.89 (s, 2H), 7.41 - 7.30 (m, 5H), 6.65 (s, 1H), 6.15 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 5.64 (q, J= 6.4 Hz, 1H), 5.07 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 4.70 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 4.56 - 4.45 (m, 4H), 4.09 (d, J= 11.6 Hz, 1H), 3.60 - 3.57 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.07 (s, 2H), 2.69 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.25 - 2.20 (m, 2H), 2.06 - 2.02 (m, 2H), 1.64 - 1.54 (m, 5H), 1.47 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.37 - 1.25 (m, 6H), 1.03 (s, 9H).
實施例7：
(2S，4R)-1-((S)-2-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基)庚胺基)-3,3-二甲基丁醯)-4-羥基-N-(4-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺
反應流程:
實施例流程：
步驟A: 將7-羥基庚酸 (1.2 克, 7.9 毫莫耳) 溶於二甲基亞碸 (20 毫升)，加入2-碘醯苯甲酸 (3.3 克, 11.9 毫莫耳)。該反應系統在室溫下攪拌4小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液中加入水 (8 毫升) 淬滅，過濾，濾液用乙酸乙酯 (40 毫升) 萃取。有機相用水 (20 毫升) 和飽和食鹽水 (30 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，濾液減壓濃縮，得到1.0 克化合物7-1。
步驟B：將脫鹽的中間體INT-2 (200.0 毫克, 455.0 微莫耳) 和化合物7-1 (85.0 毫克, 0.6 毫莫耳) 溶於1,2-二氯乙烷 (5 毫升) 中。加入醋酸 (1滴)，四異丙氧基鈦 (258.0 毫克, 0.9 毫莫耳) 和三醋酸硼氫化鈉 (289.0 毫克, 1.4 毫莫耳)。該反應系統在25攝氏度反應6小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液用水 (10 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (15 毫升) 萃取，有機相用飽和食鹽水 (15 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用反相柱層析純化 (流動相：28% 乙腈，72% 純淨水，純淨水重中含0.025% 甲酸) 得到80.0 毫克化合物7-2。
MS (ESI) M/Z: 568.3 [M+H] +。
步驟C：在N,N-二甲基甲醯胺 (5 毫升) 中，加入化合物7-2 (200.0 毫克, 352.0 微莫耳)，2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (134.0 毫克, 0.4 毫莫耳)，N,N-二異丙基乙胺 (0.3 毫升, 1.8 毫莫耳) 和 脫鹽的中間體INT-6 (151.0 毫克, 0.4 毫莫耳)。該反應系統在25攝氏度下攪拌1.5小時。反應液用水 (10 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (20 毫升) 萃取，有機相用飽和食鹽水(20 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用反相柱層析純化 (流動相：60% 乙腈，40% 純淨水，純淨水重中含0.025% 甲酸) 得到25.0 毫克, (2S，4R)-1-((S)-2-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基)庚胺基)-3,3-二甲基丁醯)-4-羥基-N-(4-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺 (化合物7)。
MS (ESI) M/Z: 491.0 [M/2+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 9.92(br, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.57 - 8.54 (m, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.84 - 7.89 (m, 2H), 7.49 - 7.36 (m, 4H), 6.92 (s, 1H), 5.36 - 5.31 (m, 1H), 5.13 - 5.08 (m, 1H), 4.55 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 4.52 - 4.40 (m, 4H), 4.34 (s, 1H), 4.27 - 4.19 (m, 1H), 3.65 - 3.61 (m, 2H), 3.23 (s, 3H), 3.03 - 2.92 (m, 2H), 2.66 - 2.60 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.27 - 2.15 (m, 1H), 2.11 - 2.01 (m, 2H), 1.93 – 1.82 (m, 1H)1.59 (d, J= 5.2 Hz, 3H), 1.49 - 1.32 (m, 4H), 1.23 - 1.196 (m, 6H), 0.92 (s, 9H).
實施例8:
N1-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-N7-((S)-1-((2S,4R)-4-羥基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲醯基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)庚二胺
反應流程:
實施例流程：
步驟A: 將化合物8-1 (96 毫克, 511.0 微莫耳) 溶解於N,N-二甲基甲醯胺 (2.0 毫升) 中，零攝氏度下加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (212 毫克, 557 微莫耳)。反應液在零攝氏度下攪拌10分鐘。在零攝氏度下加入脫鹽的中間體INT-6 (200 毫克, 465 微莫耳) 和N,N-二異丙基乙胺 (180 毫克, 1.4 毫莫耳)。反應液在0攝氏度下攪拌10分鐘。LC-MS顯示原料反應完全。向反應液中加入水 (40 毫升) 後用乙酸乙酯 (30 毫升 × 3) 萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水 (80 毫升 × 6) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經矽膠柱層析分離，得到168 毫克化合物8-2。
步驟B: 將化合物8-2 (70 毫克, 116 微莫耳) 溶解於四氫呋喃 (7 毫升) 和水 (1.4 毫升) 中，在冰水浴下加入氫氧化鋰一水合物 (49 毫克, 1.2 毫莫耳)。反應液緩慢恢復至室溫並攪拌過夜。LC-MS顯示原料反應完全。加入稀鹽酸調節反應液的pH至至5 – 6，向反應液中加入水 (10 毫升) 後用乙酸乙酯 (10 毫升 × 3) 萃取，合併後的有機相經飽和食鹽水 (25 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾，濾液濃縮，所得殘渣經製備色譜純化得到41 毫克化合物8-3。
步驟C: 零攝氏度下將化合物8-3 (40 毫克, 70 微莫耳) 溶解於N,N-二甲基甲醯胺 (2.0 毫升) 中，加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (29 毫克, 76.2 微莫耳)。反應液零攝氏度下攪拌10分鐘，零攝氏度下加入中間體INT-2 (30 毫克, 63 微莫耳) 和N,N-二異丙基乙胺 (25 毫克, 190 微莫耳)。反應液零攝氏度下攪拌10分鐘。LC-MS顯示原料反應完全。向反應液中加入水 (10 毫升) 後用乙酸乙酯 (15 毫升 ×3) 萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水 (20 毫升 ×5) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經製備色譜純化 (洗脫劑: 二氯甲烷/無水甲醇 = 10/1)，得到27.6 毫克N1-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-N7-((S)-1-((2S,4R)-4-羥基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲醯基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)庚二胺(化合物8)。
MS (ESI) M/Z: 994.3 [M+H] +; 992.3 [M-H] -。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 9.53 (s, 1H), 9.35 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.56 (t, J= 6.2 Hz, 1H), 8.46 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.42 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 7.81 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.78 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.43 -7.36 (m, 4H), 6.92 (s, 1H), 5.36 (q, J= 6.7 Hz, 1H), 5.11 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 4.52 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 4.45 - 4.18 (m, 4H), 3.68 - 3.59 (m, 2H), 3.52 - 3.47 (m, 2H), 3.22 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 2.25 - 1.84 (m, 6H), 1.62 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 1.53 - 1.39 (m, 4H), 1.27 - 1.14 (m, 4H), 0.91 (s, 9H).
實施例9：
(2S，4R)-1-((S)-2-(8-((2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基)八胺基)-3,3-二甲基丁醯)-4-羥基-N-(4-(4-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺
反應流程:
實施例流程：
步驟A: 將8-羥基辛酸 (1.0 克, 6.2 毫莫耳) 溶於二甲基亞碸 (20 毫升)，加入2-碘醯苯甲酸 (2.6 克, 9.4 毫莫耳)。該反應系統在室溫下攪拌4小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液用水 (20 毫升) 淬滅，過濾，濾液用乙酸乙酯 (20 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到0.7 克化合物9-1。
步驟B: 將中間體INT-2 (120.0 毫克, 252.0 微莫耳) 溶於N,N-二甲基甲醯胺 (1 毫升) 和四氫呋喃 (1 毫升) 中，加入三乙胺 (77.0 毫克, 757.0 微莫耳)，該系統在室溫攪拌半個小時。將化合物9-1 (40.0 毫克, 252.0 微莫耳) 和醋酸 (一滴) 一起加入上述反應液中，繼續攪拌1小時。再將三醋酸硼氫化鈉 (107.0 毫克, 504.0 微莫耳) 加入到反應液中，該反應在室溫繼續攪拌12小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液用水 (3 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (20 毫升 ×3) 萃取。合併有機相，用鹽水 (20 毫升 ×3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用反相純化 (流動相：乙腈/水= 1/1) 得到40.0 毫克化合物9-2。
MS (ESI) M/Z: 582.2 [M+H] +。
步驟C: 在N,N-二甲基甲醯胺 (2 毫升) 中，加入化合物9-2 (40.0 毫克，69微莫耳)， 脫鹽的中間體INT-6  (48.0 毫克, 0.1 毫莫耳)，2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (39.0 毫克, 0.1 毫莫耳) 和N,N-二異丙基乙胺(0.05 毫升, 0.3 毫莫耳)。該反應系統在20攝氏度下攪拌18小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液倒入冰水 (5 毫升) 中，乙酸乙酯 (10 毫升 × 3) 萃取，合併有機相，用鹽水 (10 毫升 ×3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮。所得混合物先後用高效液相色譜分離，薄層層析純化，反相柱純化得到 15 毫克(2S, 4R)-1-((S)-2-(8-((2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基)八胺基)-3,3-二甲基丁醯)-4-羥基-N-(4-(4-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺 (化合物9)。
MS (ESI) M/Z: 994.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 9.58 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.57 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 8.42 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.84 - 7.79 (m, 2H), 7.42 - 7.36 (m, 4H), 6.91 (s, 1H), 5.27 - 5.24 (m, 1H), 5.16 - 5.08 (m, 1H), 4.55 - 4.52 (m, 3H), 4.45 - 4.39 (m, 2H), 4.34 (br, 1H), 4.23 - 4.18 (m, 1H), 3.68 - 3.61 (m, 2H), 3.17 (s, 3H), 2.93 - 2.90 (m, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.25 - 2.20 (m, 1H), 2.11 - 2.01 (m, 2H), 1.92 - 1.86 (m, 1H), 1.61 - 1.39 (m, 8H), 1.28 - 1.15 (m, 6H), 0.92 (s, 9H).
實施例10：
(2S,4R)-1-((2S)-2-(7-((2-((3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基)庚醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺
反應流程：
實施例流程：
步驟 A: 室溫下將中間體INT-4 (18 毫克, 鹽酸鹽, 35.3 微莫耳)，化合物10-1 (44 毫克, 70.7 微莫耳)，N,N-二異丙基乙胺(44 毫克, 339.3 微莫耳)，碘化鉀(14 毫克, 84.8 微莫耳)和N,N-二甲基甲醯胺(1 毫升)加入單口瓶中。反應液在70 攝氏度下攪拌4小時。LC-MS顯示有產物生成。向冷卻後的反應液中加入水(10 毫升)後用乙酸乙酯(10 毫升× 3)萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水(20 毫升× 6)洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經薄層製備色譜純化，得到8.0毫克(2S,4R)-1-((2S)-2-(7-((2-((3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基)庚醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺(化合物10)。
MS (ESI) M/Z: 1013.5 [M+H] +; 1011.5 [M-H] -。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.61 (s, 1H), 8.93 (s, 1H), 8.81 - 8.77 (m, 2H), 8.64 (s, 1H), 7.83 (s, 2H), 7.65 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.44 (t, J= 6.4 Hz, 1H), 7.30 - 7.25 (m, 5H), 6.62 (s, 1H), 6.43 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 5.53 (q, J= 6.4 Hz, 1H), 4.87 - 4.57 (m, 4H), 4.53 - 4.38 (m, 5H), 4.03 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 3.62 - 3.44 (m, 2H), 3.40 (s, 3H), 3.40 - 3.37 (m, 1H), 3.24 - 3.01 (m, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.28 - 2.16 (m, 4H), 1.43 – 1.38 (m, 2H), 1.36 - 1.28 (m, 3H), 1.11 (s, 3H), 0.89 (s, 9H).
實施例11：
(2R,4S)-1-((S)-2-(7-((2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基)庚醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺
反應流程：
實施例流程：
步驟A: 室溫下將化合物11-1(80 毫克, 128 微莫耳)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(2 毫升)中，室溫下加入中間體INT-2 (31 毫克, 鹽酸鹽, 65 微莫耳)和碘化鉀(25 毫克, 154 微莫耳)。反應液加熱至70 攝氏度攪拌4小時。LC-MS顯示有QL-MDC2026生成。向冷卻後的反應液中加入乙酸乙酯(20 毫升)後水洗(5 毫升× 6)，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經高效液相製備色譜分離，得到3.1毫克(2R,4S)-1-((S)-2-(7-((2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基)庚醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺(化合物11)。
MS (ESI) M/Z: 980.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.71 (s, 1H), 8.93 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.63 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 7.66 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 7.52 (t, J= 4.2 Hz, 1H), 7.40 - 7.33 (m, 4H), 7.18 - 7.11 (m, 1H), 6.63 (s, 1H), 5.54 (q, J= 6.7 Hz, 1H), 4.68 - 4.51 (m, 5H), 4.22 - 4.08 (m, 3H), 3.70 - 3.66 (m, 1H), 3.39 - 3.35 (m, 5H), 3.14 - 3.08 (m, 1H), 2.88 - 2.81 (m, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.34 - 2.19 (m, 5H), 1.77 - 1.72 (m, 2H), 1.66 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 1.37 - 1.25 (m, 5H), 1.01 (s, 9H).
實施例12：
(2S,4R)-1-((2S)-2-(5-((2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基)戊醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺
反應流程：
實施例流程：
步驟A: 室溫下將5-氯戊酸 (152 毫克, 1.1 毫莫耳) 溶解於N,N-二甲基甲醯胺 (4 毫升) 中，氬氣保護，冰水浴並且攪拌下加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(706 毫克, 1.9 毫莫耳)。冰水浴下攪拌30分鐘後依次加入中間體INT-6 (400 毫克, 0.9 毫莫耳)和N,N-二異丙基乙胺(0.8 毫升, 1.9 毫莫耳)。反應液室溫下攪拌1小時。LC-MS顯示原料已消耗。向反應液中加入水 (15 毫升) 後用乙酸乙酯 (10 毫升 ×3)萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水(10 毫升 × 3)洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經矽膠柱層析分離，得到290 毫克化合物12-1。
MS (ESI) M/Z: 549.2 [M+H] +。
步驟B: 室溫下將化合物12-1 (110 毫克, 0.20 毫莫耳)，脫鹽的中間體INT-2 (44 毫克, 0.10 毫莫耳)，碘化鉀(40 毫克, 0.24 毫莫耳)和N,N-二異丙基乙胺(129 毫克, 1.0 毫莫耳)分散在N,N-二甲基甲醯胺(1 毫升)中，氬氣保護下加熱至80 攝氏度攪拌16小時。LC-MS顯示大部分原料已消耗，並且有產物QL-MDC2018生成。向冷卻後的反應液中加水(10 毫升)後用乙酸乙酯(5 毫升×3)萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水(10 毫升 ×3)洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經薄層製備色譜分離，得到5.3 毫克 (2S,4R)-1-((2S)-2-(5-((2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基)戊醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺 (化合物12)。
MS (ESI) M/Z: 952.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.40 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 8.91 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.59 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.61 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.36 - 7.30 (m, 4H), 7.27 - 7.23 (m, 1H), 6.77 - 6.71 (m, 1H), 6.59 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 5.51 (q, J= 6.7 Hz, 1H), 4.71 - 4.66 (m, 1H), 4.60 - 4.46 (m, 5H), 4.38 - 4.33 (m, 1H), 3.96 - 3.93 (m, 1H), 3.62 - 3.58 (m, 1H), 3.38 - 3.34 (m, 5H), 3.09 - 3.02 (m, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.43 - 2.28 (m, 4H), 2.23 - 2.15 (m, 1H), 1.92 - 1.82 (m, 2H), 1.76 - 1.71 (m, 2H), 1.67 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 0.93 (s, 9H).
實施例13：
(2S,4R)-1-((2S)-2-(6-((2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基)己醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺
反應流程：
實施例流程：
化合物13-1的製備方法參考實施例12。
化合物rac-INT-2的製備參考中間體INT-2。
步驟A: 室溫下將化合物13-1 (60 毫克, 0.1 毫莫耳)，化合物rac-INT-2 (22 毫克, 0.05 毫莫耳)，碘化鉀(20 毫克, 0.1 毫莫耳)和N,N-二異丙基乙胺(64 毫克, 0.5 毫莫耳)分散在N,N-二甲基甲醯胺(1 毫升)中，反應液氬氣保護下加熱至80 攝氏度攪拌16小時。LC-MS顯示大部分原料已消耗，並且有產物QL-MDC2019生成。向冷卻後的反應液中加水(10 毫升)後用乙酸乙酯(5 毫升 ×3)萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水(10 毫升 × 3)洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經高效液相製備色譜(酸性條件, 流動相含甲酸)分離，所得組分經冷凍乾燥, 得到6.2 毫克 (2S,4R)-1-((2S)-2-(6-((2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基)己醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺(化合物13)。
MS (ESI) M/Z: 966.3 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.52 (s, 1H), 8.97 (d, J= 10.7 Hz, 1H), 8.81 (d, J= 4.2 Hz, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.60 - 8.59 (m, 1H), 8.56 (s, 1H), 7.68 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.36 - 7.30 (m, 4H), 7.22 - 7.20 (m, 1H), 6.64 - 6.61 (m, 2H), 5.53 - 5.47 (m, 1H), 5.43 - 5.25 (m, 4H), 4.72 - 4.53 (m, 3H), 4.49 - 4.46 (m, 1H), 4.42 - 4.34 (m, 2H), 3.86 - 3.78 (m, 1H), 3.51 - 3.42 (m, 2H), 3.33 (d, J= 8.0 Hz, 3H), 3.20 - 3.14 (m, 1H), 3.10 - 3.03 (m, 1H), 2.50 (s, 3H), 2.36 - 2.28 (m, 2H), 2.24 - 2.20 (m, 3H), 2.07 - 1.98 (m, 4H), 1.47 - 1.44 (m, 2H), 0.93 (s, 9H).
實施例14：
(2S,4R)-1-((2S)-2-(7-((2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基)庚醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺
反應流程：
實施例流程：
步驟A: 室溫下將化合物10-1 (60 毫克, 0.1 毫莫耳)，化合物rac-INT-2 (21 毫克, 50 微莫耳)，碘化鉀(19 毫克, 0.1 毫莫耳)和N,N-二異丙基乙胺(62 毫克, 0.5 毫莫耳)分散在N,N-二甲基甲醯胺(1 毫升)中，氬氣保護下加熱至80 攝氏度攪拌16小時。LC-MS顯示大部分原料已消耗，並且有產物QL-MDC2020生成。向冷卻後的反應液中加水(10 毫升)後用乙酸乙酯(5 毫升 × 3)萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水(10 毫升 × 3)洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經高效液相製備色譜(酸性條件, 流動相含三氟乙酸)分離, 所得組分經冷凍乾燥, 得到5.6 毫克(2S,4R)-1-((2S)-2-(7-((2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基)庚醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺 (化合物14)。
MS (ESI) M/Z: 980.3 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.61 - 9.48 (m, 1H), 8.98 - 8.94 (m, 2H), 8.81 - 8.80 (m, 2H), 8.63 (s, 1H), 8.58 - 8.56 (m, 1H), 7.67 - 7.66 (m, 1H), 7.38 - 7.32 (m, 4H), 7.20 - 7.15 (m, 1H), 6.65 - 6.61 (m, 2H), 5.86 - 5.79 (m, 1H), 5.53 - 5.47 (m, 2H), 5.37 - 5.16 (m, 2H), 4.67 - 4.60 (m, 3H), 4.55 - 4.50 (m, 2H), 4.45 - 4.38 (m, 2H), 4.09 - 4.04 (m, 1H), 3.57 - 3.53 (m, 1H), 3.48 - 3.38 (m, 2H), 3.32 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 3.18 - 3.04 (m, 2H), 2.52 (d, J= 1.6 Hz, 3H), 2.28 - 2.22 (m, 3H), 1.80 - 1.74 (m, 2H), 1.65 - 1.64 (m, 2H), 1.61 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 0.94 (s, 9H).
實施例15：
(2S,4R)-1-((2S)-2-(5-((2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基)丙醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺
反應流程：
實施例流程：
步驟A: 室溫下將中間體INT-6 (100 毫克, 0.2毫莫耳)和三乙胺 (0.1 毫升, 0.7 毫莫耳)溶解於無水二氯甲烷 (1 毫升)中，氬氣保護，冰水浴並且攪拌下加入丙烯醯氯(21 毫克, 0.23 毫莫耳) 的無水二氯甲烷 (1 毫升) 溶液。反應液室溫並且氬氣保護下攪拌16小時。LC-MS顯示原料消失。向反應液中加入水 (10 毫升) 後用二氯甲烷 (10 毫升× 3) 萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水 (10 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經薄層製備色譜(展開劑: 二氯甲烷/甲醇 = 20/1)純化，得到46 毫克化合物15-1。
MS (ESI) M/Z: 485.2 [M+H] +。
步驟B:室溫下將化合物15-1 (46 毫克, 95 微莫耳)，化合物rac-INT-2 (33 毫克, 76 微莫耳)和碳酸鈉 (50 毫克, 47 微莫耳) 分散在甲醇(1 毫升)中，反應液氬氣保護下加熱至65 攝氏度攪拌48小時。LC-MS顯示大部分原料消失並且有產物生成。將冷卻後的反應液濃縮。向所得殘渣中加水(10 毫升)後用乙酸乙酯(5 毫升× 3)萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水(10 毫升)洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經薄層製備色譜(展開劑: 二氯甲烷/甲醇 = 10/1)純化，得到11.2毫克 (2S,4R)-1-((2S)-2-(5-((2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基)丙醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺(化合物15)。
MS (ESI) M/Z: 924.1 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.08 (d, J= 14.4 Hz, 1H), 8.84 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.69 - 8.66 (m, 2H), 8.53 - 8.47 (m, 1H), 7.67 - 7.56 (m, 2H), 7.35 - 7.26 (m, 4H), 7.00 - 6.94 (m, 1H), 6.64 (s, 1H), 5.59 - 5.52 (m, 1H), 4.69 - 4.64 (m, 3H), 4.55 - 4.46 (m, 3H), 4.36 - 4.30 (m, 1H), 4.11 - 4.03 (m, 1H), 3.61 - 3.54 (m, 1H), 3.41 (d, J= 3.6 Hz, 3H), 3.34 (s, 2H), 3.30 - 3.15 (m, 2H), 3.02 - 2.95 (m, 1H), 2.58 - 2.53 (m, 1H), 2.50 (s, 3H), 2.48 - 2.40 (m, 1H), 2.18 - 2.12 (m, 2H), 2.04 – 1.84 (m, 4H), 1.67 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.30 – 1.22(m, 3H), 0.94 (s, 9H).
實施例16：
N2-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-N6-((S)-1-((2S,4R)-4-羥基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨甲醯)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)螺環[3.3]庚烷二甲醯胺
反應流程:
實施例流程:
步驟A: 脫鹽的中間體INT-2 (100.0 毫克, 0.2 毫莫耳)、6-(甲氧羰基)螺環[3.3]庚烷-2-羧酸 (42.0 毫克, 0.2 毫莫耳)、HATU (80.0 毫克, 0.2 毫莫耳) 和二異丙基乙基胺 (0.2 毫升, 1.1 毫莫耳) 溶於N,N-二甲基甲醯胺 (2 毫升) 中，反應系統在室溫下攪拌1.5 小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液倒入冰水中並用二氯甲烷 (10 毫升) 萃取，用水 (10 毫升) 和鹽水 (10 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，粗品經矽膠柱層析純化，獲得60.0 毫克化合物16-1。
MS (ESI) M/Z: 620.1 [M+H] +。
步驟B: 在零攝氏度條件下，將化合物16-1 (60.0 毫克, 0.1 毫莫耳) 和一水合氫氧化鋰 (6.1 毫克, 0.1 毫莫耳) 溶於四氫呋喃/水(1 毫升/1 毫升)。得到的溶液在零攝氏度下攪拌1.5小時。LCMS監測顯示原料消失後，用1莫耳 鹽酸水溶液調節溶液酸鹼度到 2- 3，並用乙酸乙酯 (5 毫升) 萃取，用水 (5 毫升) 和鹽水 (5 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾和濃縮，粗產品直接做下一步，無需進一步純化。
MS (ESI) M/Z: 606.2 [M+H] +。
步驟C: 將化合物16-2 (50 毫克，82.6 微莫耳)、中間體INT-6 (42.0 毫克，0.09 毫莫耳)、HATU (80.0 毫克，0.2 毫莫耳) 和二異丙基乙基胺 (0.2 毫升，1.1 毫莫耳) 溶於二氯甲烷 (2 毫升) 中，所得的溶液在室溫下攪拌15 小時。LCMS監測顯示原料消失後，倒入冰水中並用二氯甲烷 (10 毫升) 萃取，用水和鹽水洗滌，過濾並濃縮，藉由製備TLC (展開劑: 甲醇/二氯甲烷= 1/15) 純化3次以獲得25.0 毫克N2-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-N6-((S)-1-((2S，4R)-4-羥基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨甲醯)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)螺環[3.3]庚烷二甲醯胺 (化合物16)。
MS (ESI) M/Z: 1018.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 9.10 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.57 - 8.53 (m, 1H), 8.45 (d, J= 2 Hz, 1H), 7.88 - 7.85 (t, J= 4 Hz, 1H), 7.80 (d, J= 2 Hz, 1H), 7.66 - 7.62 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.42 - 7.37 (m, 4H), 6.92 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 5.41 - 5.36 (m, 1H), 5.12 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 4.52 - 4.48 (m, 1H), 4.45 - 4.39 (m, 4H), 4.34 (br, 1H), 4.23-4.19 (m, 1H), 3.67 - 3.61 (m, 2H), 3.49 - 3.45 (m, 2H), 3.27 (s, 3H), 3.09 - 3.05 (m, 1H), 2.85 - 2.82 (m, 1H), 2.44 (s, 3H), 2.18 - 1.86 (m, 9H), 1.59 (d, J= 5.2 Hz, 3H), 1.26 - 1.23 (m, 1H), 0.90 (d, J= 5.2 Hz, 9H).
實施例17:
N-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-3-(2-((1-(2,6-二氧呱啶-3-基)-3-甲基-2-氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)氨基)乙氧基)丙醯胺
反應流程:
實施例流程：
步驟A：將 2-氟-3-硝基苯甲酸 (20 克, 108毫莫耳) 和甲胺鹽酸鹽 (8.7 克, 129 毫莫耳) 溶於乙醇 (200 毫升)，然後加入 N，N-二異丙基乙胺 (70 克, 540 毫莫耳)。室溫攪拌過夜。LCMS監測顯示原料消失後，濃縮，加水 (100 毫升), 用濃鹽酸調節pH值到3，黃色沉澱過濾，乾燥得10.5 克化合物17-1。
MS (ESI) M/Z: 197.3 [M+H] +。
步驟B：將化合物17-1 (11.6 克, 59 毫莫耳) 溶於叔丁醇(200 毫升) 中，加入N，N-二異丙基乙胺 (15.3 克, 118.3 毫莫耳) 和疊氮磷酸二苯酯 (17.9 克, 65.0 毫莫耳)。反應系統在90攝氏度下攪拌過夜。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液濃縮。粗產物加水 (500 毫升)，搗碎，過濾，濾餅用乙酸乙酯 (10 毫升) 洗滌，乾燥獲得化合物17-2 (11.0 克，黃色固體，收率95%)。
MS (ESI) M/Z: 194.0 [M+H] +。
步驟C：將化合物17-2溶於N,N-二甲基甲醯胺（10 毫升），冷卻到零攝氏度, 加入氫化鈉 (108 毫克, 2.7 毫莫耳)，反應10分鐘後，加入 3-溴呱啶-2,6-二酮 （517 毫克, 2.7 毫莫耳），零攝氏度反應2小時。用水（50 毫升）稀釋, 用濃鹽酸調節pH值到3，並用乙酸乙酯 (100 毫升 × 2) 萃取。合併有機相，用水 (20 毫升) 和鹽水（20 毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮。粗產物用矽膠柱層析分離 (乙酸乙酯：二氯甲烷：石油醚 = 1：1：1)，得化合物17-3 (140 毫克, 黃色固體，收率 27%)。
MS (ESI) M/Z: 305 [M+H] +。
步驟D：將化合物17-3 (140 毫克，460 微莫耳) 溶與四氫呋喃 (15 毫升) 和甲醇 (15 毫升) 中，加入5% 鈀/碳 (40 毫克, 含水50%)。室溫氫化反應過夜。過濾，洗滌，濃縮，得化合物17-4 (80 毫克)。粗產品不經進一步反應，直接用於下一步反應。
MS (ESI) M/Z: 275 [M+H] +。
步驟E：氮氣保護下，於-78 攝氏度下，無水二甲亞碸 (666 毫克, 8.5 毫莫耳) 的二氯甲烷 (2 毫升) 溶液慢慢加入草醯氯 (541 毫克, 4.3 毫莫耳) 的二氯甲烷溶液 (20 毫升)中。-78 攝氏度攪拌半小時，慢慢滴加含化合物17-5 (500 毫克, 2.1 毫莫耳) 的二氯甲烷 (2 毫升) 溶液，繼續攪拌1 小時。三乙胺 (1293 毫克, 12.8 毫莫耳) 緩慢加入, 繼續恒溫攪拌1小時。自然升到室溫，濃縮。加水 (20 毫升)，用乙酸乙酯萃取 ( 20 毫升 × 2), 合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得500 毫克化合物17-6。粗產品不經進一步反應，直接用於下一步反應。
1H NMR (500 MHz, CDCl 3) δ 9.73 (s, 1 H), 4.16 (s, 2 H), 3.75 - 3.60 (m, 6 H), 2.55 - 2.45 (m, 2 H), 1.44 (s, 9 H).
步驟F：氮氣保護下，化合物17-6 (81 毫克, 340 微莫耳)和化合物17-4 (80 毫克,  0.3毫莫耳) 下溶於二甲亞碸 (4 毫升)， 加入乙酸 (0.2 毫升)，60攝氏度反應1小時，氰基硼氫化鈉 (27 毫克, 430 微莫耳) 分批加入，繼續恒溫攪拌過夜。加水（50 毫升）稀釋, 用乙酸乙酯萃取 (20 毫升 × 2) 合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮。粗產物用矽膠柱層析分離，得到42 毫克化合物17-7。
MS (ESI) M/Z: 491.1 [M+H] +。
步驟G：將化合物17-7 (42 毫克, 85 微莫耳) 溶於二氯甲烷 (4 毫升) 中，加入三氟乙酸 (1 毫升)。室溫下反應3小時，反應液濃縮， 得40 毫克化合物17-8。
MS (ESI) M/Z: 435.2 [M+H] +。
步驟H：氮氣保護下，往化合物17-8 (40 毫克, 0.09 毫莫耳)和中間體INT-2的鹽酸鹽 (52 毫克, 0.1毫莫耳) 的 乾燥 N,N-二甲基甲醯胺 (4 毫升) 溶液中，依次加入N，N-二異丙基乙胺 (35 毫克, 0.27 毫莫耳), 2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (53 毫克, 140 微莫耳)。室溫下反應2小時後，加入水 (50 毫升), 用乙酸乙酯萃取 (20 毫升 × 2), 無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。 粗品用反相色譜柱製備 (甲酸系統), 得到25 毫克N-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-3-(2-((1-(2,6-二氧呱啶-3-基)-3-甲基-2-氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)氨基)乙氧基)丙醯胺 (化合物17)。
MS (ESI) M/Z:856 [M+H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.06 (s, 1H), 9.18 (s, 1H), 9.04 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.45 (d, J= 3.0 Hz, 1H), 8.19 (t, J= 5.5 Hz, 1H), 7.80 (d, J= 3.0 Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 6.85 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 6.50 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.43 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 5.37 (q, J= 7.0 Hz, 2H), 5.30 - 5.27 (m, 1H), 4.98 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 4.40 (t, J= 7.0 Hz, 2H), 3.64 - 3.60 (m, 6 H), 3.52 - 3.46 (m, 6H), 3.26 (s, 3H), 3.21 (t, J= 5.5 Hz, 2H) 2.91 - 2.85 (m,1H), 2.71 - 2.59 (m, 2H), 2.36 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 1.98 - 1.95 (m, 1H), 1.59 (d, J= 7.0 Hz, 3H).
實施例18：
N-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-3-(4-((1-(2,6-二氧呱啶-3-基)-3-甲基-2-氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)氨基)甲基)呱啶-1-基)丙醯胺
反應流程:
實施例流程：
步驟A: 將丙烯酸叔丁酯 (tert-butyl acrylate, 3.3 克, 25.8 毫莫耳) 和呱啶-4-基甲醇 (2.0 克, 21.7 毫莫耳) 溶於甲醇 (20 毫升)，該反應系統在室溫下攪拌18小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮，所得混合物用反相柱層析純化 (流動相: 50% 乙腈，50%蒸餾水，蒸餾水含0.01%碳酸氫銨) 得到化合物18-1 (3.9 克, 白色固體，收率92.0%)。
MS (ESI) M/Z: 244.2 [M+H] +。
步驟B： 在-78攝氏度下，將草醯氯 (0.6 克, 4.5 毫莫耳) 溶於二氯甲烷 (3 毫升) 中，將二甲基亞碸 (0.7 毫升, 9.1 毫莫耳) (溶於2毫升二氯甲烷) 慢慢滴加到上述溶液中。該系統攪拌5分鐘。將化合物18-1 (1.0 克, 4.1 毫莫耳) (溶於2.5毫升的二氯甲烷) 慢慢滴加到反應液中。反應液在-78攝氏度下攪拌15分鐘。將三乙胺 (2 毫升, 14.8 毫莫耳) 慢慢滴加到反應系統中，反應液慢慢升至室溫，並在室溫下攪拌45分鐘。LCMS監測顯示原料消失後，反應液加水 (20 毫升) 淬滅，二氯甲烷 (20 毫升 ×3) 萃取。合併有機相，先後用10% 的鹽酸 (20 毫升)，飽和碳酸氫鈉 (20 毫升 ×3)，水 (20 毫升 ×3)，飽和食鹽水 (20 毫升 ×3) 洗滌，無水硫酸鎂乾燥。過濾，減壓濃縮得到700毫克化合物18-2。該化合物直接用於下一步。
步驟C: 將化合物18-2 (120.0 毫克, 0.5 毫莫耳)，化合物18-3(136.0 毫克, 0.5 毫莫耳)，乙酸 (0.5 毫升) 和氰基硼氫化鈉 (47.0 毫克, 0.8 毫莫耳) 溶於二甲基亞碸 (5 毫升) 中。該系統在60攝氏度下攪拌18小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液加冰水 (50 毫升) 淬滅，二氯甲烷 (50 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，先後用水 (50 毫升 ×3) 和飽和食鹽水 (50 毫升 ×3) 洗滌，無水硫酸鎂乾燥。過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用反相柱層析純化 (流動相: 40% 乙腈，60% 蒸餾水，蒸餾水含0.025% 甲酸) 得到100.0 毫克化合物18-4。
MS (ESI) M/Z: 500.4 [M+H] +。
步驟 D：將化合物18-4 (120.0 毫克, 0.2 毫莫耳) 溶於二氯甲烷 (4 毫升) 和三氟乙酸 (1 毫升) 中。該系統在室溫攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮。得到化合物18-5 (100.0 毫克)。該化合物直接用於下一步。
MS (ESI) M/Z: 444.3 [M+H] +。
步驟E：將化合物18-5 (100.0 毫克, 0.2 毫莫耳)，中間體INT-2 (99.2 毫克, 0.2 毫克)，N,N-二異丙基乙胺 (145.4 毫克, 1.1 毫莫耳) 和2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (128.5 毫克, 0.3 毫莫耳) 溶於N,N-二甲基甲醯胺 (5 毫升)。該反應系統在室溫下攪拌1小時。 LCMS監測顯示原料消失後，反應液用水 (50 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (50 毫升 ×3) 萃取。合併有機相，用水 (10 毫升 ×3) 和飽和食鹽水 (10 毫升 ×3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，減壓濃縮。所得混合物用高效液相色譜製備(流動相：60% 乙腈，40% 蒸餾水，蒸餾水含0.025% 甲酸) 得到80.0 毫克N-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-3-(4-((1-(2,6-二氧呱啶-3-基)-3-甲基-2-氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)氨基)甲基)呱啶-1-基)丙醯胺 (化合物18)。
MS (ESI) M/Z: 865.3 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.07 (s, 1H), 9.13 (s, 1H), 8.92 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.47 (d, J= 2 Hz, 1H), 8.37 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 7.82 (d, J= 2 Hz, 1H), 6.94 (s, 1H), 6.87 (t, J= 6.4 Hz, 1H), 6.52-6.43 (m, 2H), 5.42-5.37 (m, 1H), 5.30-5.26 (m, 1H), 5.15 (br, 1H), 4.46 (t, J= 4.4 Hz, 2H), 3.62 (s, 3H), 3.30-3.22 (m, 6H), 2.99-2.84 (m, 5H), 2.69-2.58 (m, 4H), 2.07-1.95 (m, 4H), 1.87-1.65 (m, 2H), 1.58 (d, J= 6 Hz, 3H), 1.44-1.38 (m, 2H).
實施例19：
1-(5-氯-2-(2-((4-((2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-4-基)氨基)丁基)氨基)乙氧基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲
反應流程：
實施例流程：
步驟A: 室溫下將化合物19-1 (2.3 克, 8.3 毫莫耳)溶解於N-甲基吡咯烷酮(20 毫升)中，隨後氬氣保護並且攪拌下加入4-氨基丁醛二甲縮醛(1.0 克, 7.5毫莫耳)和N,N-二異丙基乙胺(5.2 毫升, 30.0 毫莫耳)。將反應液埋入事先預熱至140 攝氏度的油浴鍋中，140 攝氏度並且氬氣保護下攪拌30分鐘。LC-MS顯示無原料剩餘，並且主產物為化合物19-2。向冷卻後的反應液中加水(100 毫升)後用乙酸乙酯(100 毫升, 50 毫升)萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水(50 毫升 ×10)洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經矽膠柱層析分離，得到2.16 克化合物19-2。
MS (ESI) M/Z: 388.2 [M-H] -; 412.1 [M+Na] +。
步驟B: 零攝氏度下將化合物19-2 (80 毫克, 0.2 毫莫耳)加入到三氟乙酸(8 毫升)中。將反應液置於室溫下攪拌3小時。LC-MS顯示原料消失。將反應液逐滴滴加到冰水浴冷卻的飽和碳酸氫鈉水溶液，邊滴加邊搖勻。滴加完畢加乙酸乙酯(20 毫升×2)萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水(20 毫升×3)洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經薄層製備色譜分離(展開劑: 二氯甲烷/甲醇 = 20/1)，得到15 毫克化合物19-3。
步驟C: 室溫下將化合物19-3 (15 毫克, 44 微莫耳)和脫鹽的中間體INT-2 (10 毫克, 23 微莫耳)溶解於四氫呋喃(2 毫升)中，零攝氏度並且攪拌下加入三乙醯氧基硼氫化鈉(24.4 毫克, 115 微莫耳)。反應液室溫攪拌2小時。LC-MS顯示主產物為QL-MDC2040。將反應液用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 毫升)淬滅，所得混合物用乙酸乙酯(20 毫升×3)萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水(20 毫升×3)洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經薄層製備色譜純化(展開劑: 二氯甲烷/甲醇 = 20/1)，得到4.1 毫克1-(5-氯-2-(2-((4-((2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-4-基)氨基)丁基)氨基)乙氧基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲 (化合物19)。
MS (ESI) M/Z: 767.1 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.31 (s, 1H), 9.03 (s, 1H), 8.58 - 8.52 (m, 2H), 7.63 (s, 1H), 7.52 - 7.47 (m, 1H), 7.11 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 6.86 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.65 (s, 1H), 6.22 (s, 1H), 5.61 - 5.56 (m, 1H), 4.92 - 4.87 (m, 1H), 4.54 (s, 2H), 3.39 (s, 3H), 3.31 - 3.26 (m, 4H), 2.97 - 2.68 (m, 6H), 1.50 - 0.82 (m, 7H).
實施例20：
1-(5-氯-2-(2-((7-((2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-4-基)氨基)庚基)氨基)乙氧基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲
反應流程：
實施例流程：
化合物20-1的製備參考實施例19。
步驟A: 零攝氏度下將化合物20-1 (18 毫克, 47微莫耳)和脫鹽的中間體INT-2 (20 毫克, 45 微莫耳)溶解於四氫呋喃(2 毫升)中，零攝氏度下並且攪拌下加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (38 毫克, 180 微莫耳)。反應液隨後室溫攪拌2小時。將反應液用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 毫升)淬滅，所得混合物用乙酸乙酯(20 毫升 ×3)萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水(50 毫升 ×3)洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得產物經薄層製備色譜分離，得到9.3 毫克1-(5-氯-2-(2-((7-((2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-4-基)氨基)庚基)氨基)乙氧基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲 (化合物20)。
MS (ESI) M/Z: 809.3 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.30 (brs, 1H), 8.87 (brs, 1H), 8.67 (brs, 1H), 8.63 – 8.59 (m, 2 H), 7.63 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.45 - 7.50 (m, 1H), 7.10 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 6.88 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.65 (s, 1H), 6.22 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 5.57 (q, J= 6.3 Hz, 1H), 4.90 – 4.84 (m, 1H), 4.61 (s, 2H), 3.40 (s, 3H), 3.40 - 3.23 (m, 4H), 3.01 - 2.65 (m, 5H), 2.18 - 2.10 (m, 1H), 1.68 - 1.66 (m, 7H), 1.41 - 1.12 (m, 6H).
實施例21：
1-(5-氯-2-(2-((5-((2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙氧基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲
反應流程：
實施例流程：
化合物21-1的製備參考實施例19。
步驟A: 室溫下將化合物21-1 (80 毫克, 224 微莫耳)和脫鹽的中間體INT-2 (30 毫克, 68 微莫耳) 溶解於四氫呋喃 (5 毫升) 中，零攝氏度並且攪拌下加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (72 毫克, 341 微莫耳)。反應液隨後室溫攪拌2小時。LC-MS顯示主產物為QL-MDC2042。向反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液(20 毫升)後用乙酸乙酯(20 毫升×3)萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水(20 毫升×3)洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經薄層製備色譜分離(展開劑: 二氯甲烷/甲醇 = 20/1)，得到7.7毫克1-(5-氯-2-(2-((5-((2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙氧基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲 (化合物21)。
MS (ESI) M/Z: 781.3 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.19 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.58 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.61 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.48 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.09 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.84 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.65 (s, 1H), 5.56 (q, J= 6.7 Hz, 1H), 4.90 - 4.87 (m, 1H), 4.67 (s, 2H), 3.38 - 3.26 (m, 7H), 3.05 - 3.00 (m, 2H), 2.89 - 2.70 (m, 3H), 2.14 - 2.10 (m, 1H), 1.88 (s, 2H), 1.67 - 1.62 (m, 5H), 1.50 - 1.46 (m, 3H).
實施例22：
N1-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-N6-((S)-1-((2S，4R)-4-羥基-2-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲醯)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)己二胺
反應流程：
實施例流程：
步驟A: 將7-氨基庚酸叔丁酯 (100.0 毫克, 0.5 毫莫耳)，2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-4-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (138.0 毫克, 0.5 毫莫耳)，N,N-二異丙基乙胺 (0.4 毫升, 2.4 毫莫耳) 溶於二甲基亞碸 (2 毫升)。該反應系統在90攝氏度下攪拌18小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液降至室溫，用水 (10 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (10 毫升×3) 萃取。合併有機相，用水 (10 毫升×3) 和飽和食鹽水 (10 毫升×3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，減壓濃縮。所得混合物先用矽膠柱層析純化得到100.0 毫克化合物 22-1。
MS (ESI) M/Z: 481.3 [M+Na] +。
步驟B: 將化合物22-1(100 毫克，0.2 毫莫耳)於二氯甲烷 (2 毫升) 和三氟乙酸 (1 毫升) 中。該反應系統在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到50.0 毫克化合物 22-2。
MS (ESI) M/Z: 402.3 [M+H] +。
步驟C: 將中間體INT-2 (77.0 毫克, 0.2 毫莫耳)，化合物22-2 (65.0 毫克, 0.2 毫莫耳)，N,N-二異丙基乙胺 (103.2 毫克, 0.8 毫莫耳) 和2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (62.0 毫克, 0.2 毫莫耳) 溶於N,N-二甲基甲醯胺 (3 毫升)。 該反應系統在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液用水 (10 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (10 毫升 × 3) 萃取合併有機相，用水 (10 毫升×3) 和飽和食鹽水 (10 毫升×3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，減壓濃縮。所得混合物先用高效液相色譜製備，再用薄層層析純化得到39.0 毫克N-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-7-((2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-1,3-二氧異喹啉-4-基)氨基)庚醯胺(化合物22)。
MS (ESI) M/Z: 823.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.08 (s, 1H), 9.09 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.44 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.00 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 7.79 (d, J= 2 Hz, 1H), 7.56 (t, J= 6 Hz, 1H), 7.05 - 6.99 (m, 2H), 6.92 (s, 1H), 6.50 - 6.47 (m, 1H), 5.40 - 5.35 (m, 1H), 5.06 - 5.02 (m, 1H), 4.41 (t, J= 4.8 Hz, 2H), 3.52 - 3.43 (m, 2H), 3.27 (s, 3H), 3.26 - 3.21 (m, 1H), 2.90 - 2.83 (m, 1H), 2.64 - 2.52 (m, 1H), 2. 09 (t, J= 6 Hz, 2H), 2.04 - 1.99 (m, 1H), 1.57 (d, J= 5.2 Hz, 3H), 1.56 - 1.47 (m, 4H), 1.34 - 1.23 (m, 6H).
實施例23:
N-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基) 吡唑并[1,5-a] 嘧啶-6-基脲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基) 吡啶-2-基)氧基)乙基)-9-((2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-4-基)氨基)壬醯胺
反應流程：
實施例流程：
化合物23-1的合成參考實施例22。
化合物rac-INT-4的製備參考中間體INT-4。
步驟A: 零攝氏度並且氬氣保護下向攪拌著的化合物23-1 (33 毫克, 77 微莫耳)的N,N-二甲基甲醯胺(1 毫升)溶液中加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (HATU, 40 毫克, 0.1 毫莫耳)。反應液零攝氏度並且氬氣保護下攪拌30分鐘。加入化合物rac-INT-4 (粗品鹽酸鹽, 35.4 毫克, 65.1 微莫耳)和N,N-二異丙基乙胺 (27.1 毫克, 0.2 毫莫耳)。反應液隨後室溫並且氬氣保護下攪拌1小時。反應液加水(50 毫升)稀釋後用乙酸乙酯(50 毫升 ×3)萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水(50 毫升)洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得粗產品經薄層製備色譜，得到30.6 毫克N-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基) 吡唑并[1,5-a] 嘧啶-6-基脲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基) 吡啶-2-基)氧基)乙基)-9-((2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-4-基)氨基)壬醯胺(化合物23)。
MS (ESI) M/Z: 918.3 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.96 (d, J= 4.4 Hz, 1H), 9.16 (s, 1H), 8.83 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.34 (d, J= 27.7 Hz, 1H), 8.26 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 7.96 (d, J= 2.0 Hz, 2H), 7.48 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.07 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 6.89 - 6.80 (m, 2H), 6.67 (s, 1H), 6.21 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 5.61 (q, J= 6.6 Hz, 1H), 4.91 (dd, J= 11.8, 5.0 Hz, 1H), 4.59 (t, J= 4.8 Hz, 2H), 3.78 - 3.70 (m, 2H), 3.51 (s, 3H), 3.24 (q, J= 6.6 Hz, 2H), 2.92 - 2.71 (m, 3H), 2.24 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 2.17 - 2.09 (m, 1H), 1.68 - 1.61 (m, 6H), 1.38 - 1.27 (m, 7H).
實施例24：
N-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-3-(4-(3-((2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-4-基)氨基)丙氧基)呱啶-1-基)丙醯胺
反應流程:
實施例流程：
化合物24-1的製備參考實施例22。
步驟A: 室溫下將化合物24-1 (45 毫克, 92.5 微莫耳)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(1 毫升)中，冰水浴，氬氣保護並且攪拌下加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU, 47 毫克, 123.3 微莫耳)。冰水浴下攪拌30分鐘後依次加入化合物rac-INT-4 (17 毫克, 33.5 微莫耳)和N,N-二異丙基乙胺(DIPEA, 12 毫克, 92.5 微莫耳)。反應液冰水浴並且氬氣保護下攪拌1小時。LC-MS顯示原料消失。向反應液中加入水(5 毫升)後用乙酸乙酯(10 毫升 ×3)萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水(15 毫升)洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得粗品殘渣經薄層製備色譜分離，得到3.3 毫克N-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-3-(4-(3-((2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-4-基)氨基)丙氧基)呱啶-1-基)丙醯胺(化合物24)。
MS (ESI) M/Z: 975.3 [M+H] +; 973.3 [M-H] -。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 10.04 (s, 1H), 9.18 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.11 (s, 2H), 7.51 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.09 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.89 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.72 - 6.56 (m, 2H), 5.64 - 5.56 (m, 1H), 5.43 - 5.24 (m, 1H), 5.01 - 4.88 (m, 1H), 4.63 (s, 2H), 3.84 - 3.55 (m, 5H), 3.52 (s, 3H), 3.49 - 3.33 (m, 4H), 3.32 - 3.07 (m, 3H), 2.92 - 2.67 (m, 6H), 2.28 - 2.19 (m, 1H), 2.18 - 2.06 (m, 2H), 2.03 - 1.95 (m, 4H), 1.88 - 1.77 (m, 3H).
實施例25：
N-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-3-((3-(2-((2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)丙基)(甲基)氨基)丙醯胺
反應流程：
實施例流程：
步驟A: 室溫下將化合物25-1 (23 毫克, 50 微莫耳)和三乙胺 (7 毫克, 70 微莫耳) 溶解於二氯甲烷 (2 毫升)中，冰水浴並且攪拌下加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (HATU, 19 毫克, 50 微莫耳)。反應液隨後在室溫下攪拌0.5小時。冰水浴並且攪拌下再加入化合物rac-INT-4 (18 毫克, 粗品鹽酸鹽, 30微莫耳)。反應液室溫下攪拌8小時。LC-MS顯示原料消失。反應液用二氯甲烷(5 毫升)稀釋，再經水(5 毫升 ×3)洗滌，飽和食鹽水(5 毫升 ×3)洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經薄層製備色譜分離(展開劑: 二氯甲烷/甲醇 = 20/1)，得到7.3毫克N-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-3-((3-(2-((2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)丙基)(甲基)氨基)丙醯胺 (化合物25)。
MS (ESI) M/Z: 949.3 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 10.11 (s, 1H), 9.19 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.34 - 8.29 (m, 3H), 7.50 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.12 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 6.85 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.66 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 5.61 (q, J= 6.8 Hz, 1H), 5.07 - 4.99 (m 1H), 4.58 (s, 2H), 3.80 - 3.70 (m, 2H), 3.70 - 3.63 (m, 2H), 3.63 - 3.56 (m, 2H), 3.52 (s, 3H), 3.43 - 3.40 (m, 4H), 3.34 - 3.10 (m, 2H), 3.10 - 2.90 (m, 2H), 2.84 - 2.83 (m, 2H), 2.71 - 2.66 (m, 4H), 2.16 - 2.13 (m, 3H), 1.63 (d, J= 6.8 Hz, 3H).
實施例26：
1-(5-氯-2-(2-((8-(2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1-氧代異喹啉-4-基)辛-7-炔-1-基)氨基)乙氧基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲
反應流程：
實施例流程：
步驟A: 室溫下將化合物26-1 (1 克, 3.1 毫莫耳) 溶解於N,N-二甲基甲醯胺(20 毫升)中，氬氣保護下依次加入7辛炔醇(586 毫克, 4.6 毫莫耳)，碳酸銫(2.02 克, 6.2 毫莫耳)，碘化亞銅 (118 毫克, 618.9 微莫耳)和雙 (三苯基磷) 二氯化鈀(217 毫克, 309.5 微莫耳)。反應液在80 攝氏度並且氬氣保護下攪拌2小時。LC-MS顯示原料反應完全。向冷卻後的反應液中加入水 (200 毫升) 後用乙酸乙酯 (150 毫升 ×3) 萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水(400 毫升 ×8)洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經矽膠柱層析分離(洗脫劑: 二氯甲烷/無水甲醇 = 40/1)，得到420 毫克化合物26-2。
步驟B: 室溫下將化合物26-2 (100 毫克, 271.4 微莫耳) 溶解於乙酸乙酯(25 毫升)中，零攝氏度下加入戴斯-馬丁氧化劑 (158 毫克,372.6 微莫耳)。反應液緩慢恢復至室溫並攪拌過夜。向反應液中加入飽和碳酸氫鈉(10 毫升)和水(10 毫升)後用乙酸乙酯(20 毫升 ×3)萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水(50 毫升)洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經薄層製備色譜純化，得到44 毫克化合物26-3。
MS (ESI) M/Z: 367.2 [M+H] +。
步驟C: 室溫下將化合物26-3 (44 毫克, 120.1 微莫耳)和脫鹽的中間體INT-2 (48 毫克, 109.2 微莫耳) 溶解於四氫呋喃 (2 毫升) 中，零攝氏度下加入三乙醯氧基硼氫化鈉(69 毫克, 327.5 微莫耳)。反應液緩慢恢復至室溫並攪拌2小時。LC-MS顯示原料有少量剩餘並且有產物生成。向反應液中加入飽和氯化鈉水溶液(2 毫升)和飽和碳酸氫鈉水溶液(2 毫升)後用乙酸乙酯(10 毫升 ×3)萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水(10 毫升)洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經薄層製備色譜純化，得到的產物再次經薄層製備色譜純化，得到26 毫克1-(5-氯-2-(2-((8-(2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1-氧代異喹啉-4-基)辛-7-炔-1-基)氨基)乙氧基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲(化合物26)。
MS (ESI) M/Z: 790.2 [M+H] +; 788.3 [M-H] -。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.17 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.57 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.77 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.59 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.54 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.42 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 6.66 (s, 1H), 5.54 (q, J= 6.9 Hz, 1H), 5.25 - 5.21 (m, 1H), 4.65 (s, 2H), 4.49 - 4.27 (m, 2H), 3.39 - 3.38 (m, 3H), 3.04 (t, J= 7.4 Hz, 2H), 2.85 - 2.76 (m, 2H), 2.42 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 2.33 - 2.15 (m, 3H), 1.67 - 1.64 (m, 4H), 1.60 - 1.51 (m, 4H), 1.45 - 1.31 (m, 4H).
實施例27：
1-(5-氯-2-(2-((5-(2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1-氧代異喹啉-4-基)戊-4-炔-1-基)氨基)乙氧基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲
反應流程：
實施例流程：
化合物27-1的合成參考實施例26。
步驟A: 室溫下將化合物27-1 (25 毫克, 77.1 微莫耳) 和脫鹽的中間體INT-2 (31 毫克, 70.1 微莫耳) 溶解於四氫呋喃 (2 毫升) 中，零攝氏度下加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (45 毫克, 210.2 微莫耳)。反應液緩慢恢復至室溫並攪拌2小時。LC-MS顯示原料有少量剩餘並且有產物生成。向反應液中加入飽和氯化鈉水溶液 (2 毫升) 和飽和碳酸氫鈉水溶液 (2 毫升) 後用乙酸乙酯 (10 毫升×3) 萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水(10 毫升)洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經薄層製備色譜純化，得到的產物經薄層製備色譜純化，得到12.2毫克1-(5-氯-2-(2-((5-(2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1-氧代異喹啉-4-基)戊-4-炔-1-基)氨基)乙氧基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲 QL-MDC2101 (化合物27)。
MS (ESI) M/Z: 748.2 [M+H] +; 746.2 [M-H] -。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.22 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.78 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.51 – 7.46 (m, 1H), 7.41 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 6.64 (s, 1H), 5.60 - 5.53 (m, 1H), 5.20 - 5.14 (m, 1H), 4.59 - 4.50 (m, 3H), 4.33 - 4.28 (m, 1H), 3.39 - 3.37 (m, 3H), 3.18 - 3.06 (m, 2H), 2.83 - 2.75 (m, 2H), 2.60 - 2.47 (m, 2H), 2.44 - 2.33 (m, 2H), 2.22 - 2.14 (m, 1H), 2.12 - 2.02 (m, 3H), 1.66 - 1.63 (m, 4H).
實施例28:
1-(5-氯-2-(2-((4-((4-(2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)呱嗪-1-基)甲基)環己基)氨基)乙氧基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲
反應流程：
實施例流程：
步驟A: 冰水浴下將化合物28-1 (0.5 克, 2.9 毫莫耳) 和苄基-1-呱嗪碳酸脂 ( 1.4 克, 6.4 毫莫耳)溶解於四氫呋喃 (20 毫升) 中，攪拌下分批加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.9 克, 9.6 毫莫耳)，加完後將反應液升溫至室溫並且攪拌2小時。LC-MS顯示原料消失並且主產物為化合物34-2。向反應液中加入水(20 毫升)後用乙酸乙酯(50 毫升 ×2)萃取。合併後的有機相經無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經矽膠柱層析分離(洗脫劑: 石油醚/乙酸乙酯 = 5/1)，得到0.6 克化合物28-2。
MS (ESI) M/Z: 375.2 [M+H] +。
步驟B:室溫下將化合物28-2 (650 毫克, 1.7 毫莫耳)溶解於甲醇 (10 毫升) 中，加入鈀/碳 (65 毫克, 10 %)。加料完畢，抽換氫氣三次，氫氣球保護並且室溫下攪拌過夜。LC-MS顯示原料消失並且主產物為化合物28-3。反應液經矽藻土過濾，濾餅用甲醇洗滌，合併後的濾液經濃縮得油狀物，再經矽膠柱層析分離，得到423毫克化合物28-3。
步驟C: 室溫下將化合物28-4 (1.2 克, 6.5 毫莫耳) 分散在冰醋酸 (25 毫升) 中，加入3-胺基-呱啶-2,6-二酮的鹽酸鹽 (1.1 克, 6.8 毫莫耳) 和醋酸鉀 (0.7 克, 7.2 毫莫耳)。反應液升溫至90 攝氏度並且攪拌過夜。LC-MS顯示原料消失。將反應液冷卻至室溫後慢慢加至水 (500 毫升) 中，攪拌2小時後過濾。濾餅用水充分洗滌，收集並乾燥，得到1.7 克化合物28-5。
步驟D: 室溫下將化合物28-5 (273 毫克, 0.9 毫莫耳) 溶解於N-甲基吡咯烷酮(10 毫升)中，加入化合物28-3 (110 毫克, 0.5 毫莫耳) 和N,N-二異丙基乙胺 (853 毫克, 6.6 毫莫耳)。將反應液埋至預先加熱到140 攝氏度的油浴鍋中並且攪拌30分鐘。LC-MS顯示原料基本消耗完全並且主產物為化合物28-6。將反應液冷卻至室溫並加入水後用乙酸乙酯 (20 毫升 ×2) 萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水 (30 毫升 ×10) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經薄層製備色譜分離，得到143 毫克化合物28-6。
MS (ESI) M/Z: 515.2 [M+H] +。
步驟E: 室溫下將化合物28-6 (75 毫克, 0.2 毫莫耳) 溶解於丙酮 (10 毫升) 中，加入稀鹽酸 (1 M, 10 毫升, 10 毫莫耳)。反應液室溫攪拌過夜。LC-MS顯示原料消失。向反應液中小心加入飽和碳酸鈉水溶液 (20 毫升) 和乙酸乙酯 (20 毫升)，分離有機相。水相再用乙酸乙酯 (10 毫升) 萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水 (20 毫升 ×3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液濃縮，所得殘渣經薄層製備色譜純化，得到54 毫克化合物28-7。
MS (ESI) M/Z: 471.2 [M+H] +。
步驟F: 冰水浴下將化合物28-7 (50 毫克, 0.1 毫莫耳)溶解於四氫呋喃(10 毫升) 中，加入脫鹽的中間體INT-2 (61毫克, 0.1 毫莫耳)，冰水浴並且攪拌下加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (112毫克, 0.5 毫莫耳) 和無水醋酸鈉 (11毫克, 0.1 毫莫耳)，反應液升溫至室溫並且攪拌5小時。向反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液並用乙酸乙酯 (20毫升×3) 萃取。合併後的有機相經無水硫酸鈉乾燥並過濾，濾液濃縮，所得殘渣經薄層製備色譜純化(展開劑: 第一次 二氯甲烷/甲醇 = 12/1; 第二次 乙酸乙酯/甲醇 = 10/1)，得到62 毫克化合物28 (isomer1和isomer2的混合物)，再經高效液相製備色譜分離（OD柱, 流動相：60% 甲醇, 40% 乙腈），得到17.2毫克化合物28-P1（ 保留時間3min）和12.2 毫克化合物28-P2（保留時間2.8min）。
化合物28-P1: MS (ESI) M/Z: 894.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.12 (s, 1H), 9.48 (s, 1H), 9.36 (s, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.81 - 8.73 (m, 3H), 8.47 (s, 1H), 7.87 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.86 - 7.81 (m, 2 H), 7.60 (s, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.39 (q, J= 6.8 Hz, 1H), 5.12 (dd, J= 13.2, 5.2 Hz, 1H), 4.64 (t, J= 5.2 Hz, 2H), 3.84 - 3.77 (m, 1H), 3.62 - 3.61 (m, 1H), 3.47 - 3.30 (m, 3H), 3.27 (s, 3H), 3.11 - 3.01 (m, 1H), 2.94 - 2.84 (m, 1H), 2.68 - 2.57 (m, 4H), 2.16 - 1.70 (m, 5H), 1.59 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.50 - 1.29 (m, 5H), 1.15 - 1.05 (m, 2H).
化合物28-P2: MS (ESI) M/Z: 894.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.11 (s, 1H), 9.66 (br, 1H), 9.37 (s, 1H), 9.05 (s, 1H), 8.81 (br, 2H), 8.74 (s, 1H), 8.48 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.86 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.82 (d, J= 10.8 Hz, 1H), 7.60 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.38 (q, J= 6.4 Hz, 1H), 5.12 (dd, J= 12.8, 5.2 Hz, 1H), 4.64 (t, J= 5.0 Hz, 2H), 3.87 - 3.65 (m, 1H), 3.36 - 3.28 (m, 4H), 3.26 (s, 3H), 3.18 - 3.12 (m, 2H), 2.94 - 2.84 (m, 1H), 2.67 - 2.51 (m, 1H), 2.16 - 1.86 (m, 5H), 1.84 - 1.60 (m, 8H), 1.59 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.53 - 1.41 (m, 2H).
實施例29：
1-(5-氯-2-(2-((1-(1-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異喹啉-5-基)氮雜環丁烷-3-基)呱啶-4-基)氨基)乙氧基)吡啶-3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲
反應流程:
實施例流程：
步驟A: 將1-[1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基]吡咯烷-3-醇1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基甲烷磺酸鹽（3.1 克， 9.8 毫莫耳）溶解於乙腈（35 毫升）中。在上述溶液中加入1,4-二氧雜-8-氮雜螺環[4.5]癸烷（1.7 克，12 毫莫耳）和三乙胺（1.2 克，12 毫莫耳），所得的溶液加熱到90度過夜。 LCMS監測顯示原料消失後，藉由蒸發除去溶劑，並將殘餘物溶解在乙酸乙酯（100 毫升）中，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，然後減壓濃縮的粗品，粗品經過柱層析純化 (展開劑：乙酸乙酯：石油醚=1:1) 收集目標餾分獲得3.1克化合物29-1。
MS (ESI) M/Z: 365.4 [M+H] +。
步驟B：將化合物29-1（2.5 克，6.8 毫莫耳）在氮氣下溶解於乾燥的二氯甲烷 (100 毫升)中，並在零度下向所得溶液中添加1-氯甲酸氯乙酯 (2.3 毫升，21 毫莫耳)。將混合物攪拌1.5 h，然後添加甲醇。將溶液加熱至回流20分鐘，然後藉由蒸發除去溶劑。殘渣用丙酮溶解，過濾得到的沉澱由異丙醇重結晶得到1.2克化合物29-2。
MS (ESI) M/Z: 199.3 [M+H] +。
步驟C：在氮氣保護的條件下，將化合物29-2 (0.5 克,  2.5 毫莫耳) 溶於N-甲基吡咯烷酮 (15 毫升) 中。加入化合物28-5 (722 毫克, 2.5 毫莫耳) 和N,N-二異丙基乙胺 (980 毫克, 7.5 毫莫耳)。該系統在140攝氏度下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用薄層層析分離得到520 毫克化合物29-3。
MS (ESI) M/Z: 473 [M+H] +。
步驟D：將化合物29-3 (520 毫克, 1.1 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (5 毫升)，水(5 毫升)和鹽酸溶液(5 毫升，4M 溶於1，4-二氧六環中)中，將該反應系統加熱到50度並攪拌三個小時。LCMS監測顯示大部分原料消失後，將反應液調節至弱鹼性並用反相純化收集目標群組分並凍乾得到150 毫克化合物29-4。
MS (ESI) M/Z: 429.1 [M+H] +。
步驟E: 將脫鹽的中間體INT-2（200 毫克，0.4 毫莫耳）和化合物29-4（200 毫克，0.4毫莫耳）溶於1,2-二氯乙烷（6 毫升）和甲醇（1 毫升）中，向上述溶液中加入醋酸（0.15 毫升）和鈦酸四異丙酯（0.3 毫升），然後在室溫下攪拌0.5小時，再向反應液中加入三乙醯氧基硼氫化鈉（180.4 毫克，0.9 毫莫耳）。在室溫下攪拌2小時,然後倒入冰中過濾，濾液用二氯甲烷升萃取，濃縮有機層得到粗品，粗品經過高效液相色譜製備，再經過製備薄層層析制得25 毫克1-(5-氯-2-(2-((1-(1-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異喹啉-5-基)氮雜環丁烷-3-基）呱啶-4-基)氨基)乙氧基)吡啶-3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲 (化合物29) 。
MS (ESI) M/Z: 852.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.09 (s, 1H), 9.29 (s, 2H), 8.71 (s, 1H), 8.42 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.81 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.59 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 6.94 – 6.83 (m, 2H), 5.36 – 5.21 (m, 1H), 5.06 (dd, J= 12.6, 5.5 Hz, 1H), 4.47 (s, 2H), 4.23 – 4.18 (m, 2H), 3.93 (s, 2H), 3.22 (s, 4H), 3.07 (s, 2H), 2.91 – 2.56 (m, 5H), 2.01 – 1.80 (m, 6H), 1.59 (d, J= 6.6 Hz, 4H), 1.36 (s, 2H).
實施例30：
N-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S）-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲)吡啶-2-基)氧基)乙基）-1-(1-(2-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)氮雜環丁烯-3-基）呱啶-4-甲醯胺
反應流程:
實施例流程：
步驟A: 將呱啶-4-羧酸叔丁酯 (10.0 克, 54.0 毫莫耳) 溶於甲醇 (150 毫升)，加入3-氧代氮雜苯胺-1-羧酸苄酯 (11.1 克, 54.0 毫莫耳) 和氰基硼氫化鈉 (6.8 克, 109.0 毫莫耳)。該反應系統在室溫下攪拌5小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液過濾，減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化 (洗脫劑: 石油醚/乙酸乙酯= 4/1) 得到4.0 克化合物30-1。
MS (ESI) M/Z: 375.2 [M+H] +。
步驟B：將化合物30-1 (1.0 克, 2.7 毫莫耳) 溶於甲醇 (15 毫升) 中。氮氣保護下，加入氫氧化鈀/碳 (500.0 毫克)，該反應系統用氫氣置換，並在氫氣球的環境下攪拌17小時。LCMS監測顯示原料消失後，過濾，減壓濃縮。得到450.0 毫克化合物30-2。該化合物直接用於下一步。
MS (ESI) M/Z: 241.3 [M+H] +。
步驟C:在氮氣保護的條件下，將化合物30-2 (330.0 毫克, 1.4 毫莫耳) 溶於N-甲基吡咯烷酮 (15 毫升) 中。加入化合物28-5 (403.0 毫克, 1.4 毫莫耳) 和N,N-二異丙基乙胺 (5.5 克, 55.0 毫莫耳)。該系統在140攝氏度下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用薄層層析分離得到460毫克化合物30-3。
MS (ESI) M/Z: 515.3 [M+H] +。 步驟 D：將化合物30-3 (120.0 毫克, 0.2 毫莫耳) 溶於二氯甲烷 (4 毫升) 和三氟乙酸 (4 毫升) 中。該系統在室溫攪拌4小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液過濾，減壓濃縮。得到100毫克化合物30-4。該化合物直接用於下一步。
MS (ESI) M/Z: 459.3 [M+H] +。
步驟E：在N,N-二甲基甲醯胺 (10 毫升) 中，加入化合物30-4 (100.0 毫克, 0.2 毫莫耳)，脫鹽的中間體INT-2  (97.0 毫克, 0.2 毫莫耳)，1-羥基苯并三唑 (44.0 毫克, 0.3 毫莫耳)，(1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亞胺) (126.0 毫克, 0.7 毫莫耳) 和三乙胺 (3.1 克, 30.6 毫莫耳)。該反應系統在室溫下攪拌17小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓濃縮。所得混合物用薄層層析純化得到41.2 毫克N-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲)吡啶-2-基)氧基)乙基)-1-(1-(2-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)氮雜環丁烯-3-基)呱啶-4-甲醯胺（化合物30）。
MS (ESI) M/Z: 882.1 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.09 (s, 1H), 9.10 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.43 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.97 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 7.81 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.60 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 6.90 (t, J= 3.6 Hz, 2H), 5.41-5.35 (m, 1H), 5.09-5.04 (m, 1H), 4.42 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 4.25-4.13 (m, 2H), 3.97-3.91 (m, 2H), 3.51-3.43 (m, 2H), 3.26 (s, 4H), 3.25-3.22 (m, 1H), 2.92-2.73 (m, 3H), 2.60-2.46 (m, 1H), 2.11-2.00 (m, 2H), 1.83-1.67 (m, 4H), 1.61-1.54 (m, 5H).
實施例31：
N-(2-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-1-(1-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)氮雜環丁烷-3-基）呱啶-4-甲醯胺
反應流程:
步驟A：在N,N-二甲基甲醯胺 (5 毫升) 中，加入化合物31-4 (80.0 毫克, 0.2 毫莫耳)，脫鹽的中間體INT-3 (80.0 毫克, 0.2 毫莫耳)，1-羥基苯并三唑 (34.0 毫克, 0.3 毫莫耳)，(1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亞胺) (97.0 毫克, 0.5 毫莫耳) 和三乙胺 (51.0 毫克, 0.5 毫莫耳)。該反應系統在室溫下攪拌17小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓濃縮。所得混合物用薄層層析純化得到31.1 毫克N-(2-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-1-(1-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)氮雜環丁烷-3-基)呱啶-4-甲醯胺）（化合物31）。
MS (ESI) M/Z: 914.1 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.09 (s, 1H), 9.24 (s, 1H), 8.94 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.67 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.18 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 8.00 (t, J= 5.2 Hz, 1H), 7.59 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 6.91-6.89 (m, 2H), 5.42-5.36 (m, 1H), 5.09-5.04 (m, 1H), 4.53 (t, J= 5.6 Hz, 2H), 4.19 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.98-3.84 (m, 2H), 3.58-3.46 (m, 2H), 3.27 (s, 3H), 3.25-3.22 (m, 1H), 2.88-2.77 (m, 3H), 2.61-2.52 (m, 2H), 2.11-2.00 (m, 2H), 1.83-1.67 (m, 4H), 1.60-1.55 (m, 5H).
實施例32：
N-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲)吡啶-2-基)氧基)乙基)-4-(4-(2-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)呱嗪-1-基)環己烷-1-甲醯胺
反應流程:
實施例流程：
步驟A: 將4-氧代環己烷-1-羧酸叔丁酯 (500.0 毫克 , 2.5 毫莫耳) 和呱嗪-1-羧酸苄酯 (555.0 毫克, 2.5 毫莫耳) 溶於甲醇 (5 毫升)，加入乙酸 (1 毫升) 和氰基硼氫化鈉 (238.0 毫克, 3.8 毫莫耳)。該反應系統在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮，所得混合物用反相柱層析純化得到159.0 毫克化合物32-1。
MS (ESI) M/Z: 403.1 [M+H] +。
步驟B：將化合物32-1 (1.0 克, 2.5 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (5 毫升) 和甲醇(0.5 毫升) 中。氮氣保護下，加入鈀/碳 (10%，100.0 毫克)，該反應系統用氫氣置換，並在氫氣球的環境下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，過濾，減壓濃縮。得到750毫克化合物32-2。該化合物直接用於下一步。
MS (ESI) M/Z: 269.4 [M+H] +。
步驟C:在氮氣保護的條件下，將化合物32-2 (455.6 毫克, 1.7 毫莫耳) 溶於N-甲基吡咯烷酮 (5 毫升) 中。加入化合物28-5 (500.0 毫克, 1.7 毫莫耳) 和N,N-二異丙基乙胺 (657.5 毫克, 5.1 毫莫耳)。該系統在140攝氏度下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液加入水中 (15 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (30 毫升) 萃取，有機相用飽和食鹽水 (20 毫升) 洗滌，無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析分離得到323毫克化合物32-3。
MS (ESI) M/Z: 543.1 [M+H] +。
步驟 D：將化合物32-3 (323.0 毫克, 0.6 毫莫耳) 溶於二氯甲烷 (5 毫升) 和三氟乙酸 (2 毫升) 中。該系統在室溫攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，過濾，減壓濃縮。所得混合物藉由高效液相色譜分離得到224.0 毫克化合物32-4。
MS (ESI) M/Z: 487.3 [M+H] +。
步驟E：在N,N-二甲基甲醯胺 (3 毫升) 中，加入化合物32-4 (70.0 毫克, 0.1 毫莫耳)，脫鹽的中間體INT-2 (57.0 毫克, 0.1 毫莫耳)，1-羥基苯并三唑 (23.0 毫克, 0.2 毫莫耳)，(1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亞胺) (31.0 毫克, 0.2 毫莫耳) 和N,N-二異丙基乙胺 (56.0 毫克, 0.4 毫莫耳)。該反應系統在室溫下攪拌3小時。 LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮。所得混合物用高效液相製備純化得到37毫克N-(2-((5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲)吡啶-2-基)氧基)乙基)-4-(4-(2-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)呱嗪-1-基)環己烷-1-甲醯胺 (化合物32)。
MS (ESI) M/Z: 909.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.11 (s, 1H), 9.14 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.79 – 8.74 (m, 1H), 8.44-8.41 (m, 1H), 7.98-7.94 (m, 1H), 7.82-7.80 (m, 1H), 7.74-7.69 (m, 1H), 7.44-7.38 (m, 1H), 6.93 (s, 1H), 5.40-5.37 (m, 1H), 5.13-5.08 (m, 1H), 4.40 (t, J= 5.6 Hz, 2H), 3.55-3.53 (m, 2H), 3.27 (s, 3H), 3.26-3.15 (m, 4H), 2.89-2.84 (m, 1H), 2.69-2.56 (m, 3H), 2.54-2.46 (m, 2H), 2.32-2.26 (m, 2H), 2.08-2.01 (m, 2H), 1.85-1.78 (m, 3H), 1.61-1.58 (m, 3H), 1.43-1.33 (m, 3H), 1.24-1.17 (m, 2H).
實施例33：
N-(2-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-4-(4-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)呱嗪-1-基)環己烷-1-甲醯胺
反應流程:
實施例流程：
步驟A：在N,N-二甲基甲醯胺 (3 毫升) 中，加入化合物32-4 (70.0 毫克, 0.1 毫莫耳)，脫鹽的中間體INT-3  (61.0 毫克, 0.1 毫莫耳)，1-羥基苯并三唑 (23.0 毫克, 0.2 毫莫耳)，(1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亞胺) (31.0 毫克, 0.2 毫莫耳) 和N,N-二異丙基乙胺 (56.0 毫克, 0.4 毫莫耳)。該反應系統在室溫下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液加水 (50 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (50 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，用飽和食鹽水 (50 毫升 ×3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用高效液相製備純化 (流動相: 60% 乙腈，40% 蒸餾水，蒸餾水含0.001% 甲酸) 得到20毫克N-(2-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-4-(4-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)呱嗪-1-基)環己烷-1-甲醯胺 (化合物33)。
MS (ESI) M/Z: 942.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.13 (s, 1H),9.86 (br, 1H), 9.62 (br, 1H) 9.39 – 9.29 (m, 1H), 9.15-9.12 (m, 1H), 8.76-8.69 (m, 2H), 8.20-8.17 (m, 2H), 7.83-7.77 (m, 1H), 7.60-7.54 (m, 1H), 6.94-6.92 (m, 1H), 5.41-5.37 (m, 1H), 5.15-5.10 (m, 1H), 4.52-4.49 (m, 2H), 3.79-3.73 (m, 4H), 3.26-3.13 (m, 6H), 2.93-2.84 (m, 1H), 2.63-2.54 (m, 2H), 2.14-2.03 (m, 4H), 1.89-1.63 (m, 3H), 1.61-1.54 (m, 4H), 1.51-1.37 (m, 4H).
實施例 34 ：
N-(2-(2-氯-7-(( S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-1-(1-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)氮雜環丁烷-3-基)-N-甲基呱啶-4-甲醯胺
反應流程:
實施例流程：
化合物34-1的合成參考INT-2的合成；
步驟 A ：在 N, N-二甲基甲醯胺 (3 毫升) 中，加入化合物31-4 (105.0 毫克, 0.2 毫莫耳)，化合物34-1 (116.0 毫克, 0.2 毫莫耳)，2-(7-氮雜苯并三氮唑)- N, N, N', N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (135.8 毫克, 0.4 毫莫耳)， N, N-二異丙基乙胺 (153.6 毫克, 1.2 毫莫耳)。該反應系統在室溫下攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，加水 (100 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (100 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，用飽和食鹽水 (100 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用高效液相色譜分離 (流動相：50% 乙腈，50% 蒸餾水，蒸餾水中含0.01% 甲酸) 得到65.4 毫克 N-(2-(2-氯-7-(( S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-1-(1-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)氮雜環丁烷-3-基)-N-甲基呱啶-4-甲醯胺(化合物34)。
MS (ESI) M/Z: 928.0 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.10 (s, 1H), 9.44 - 9.26 (m, 1H), 8.93 - 8.63 (m, 3H), 8.24 – 8.17 (m, 1H), 7.63 - 7.53 (m, 1H), 6.93 - 6.84 (m, 2H), 5.41 - 5.37 (m, 1H), 5.09 - 5.04 (m, 1H), 4.79 - 4.77 (m, 1H), 4.68 - 4.65 (m, 1H), 4.22 - 4.14 (m, 2H), 3.95 - 3.89 (m, 2H), 3.81 - 3.70 (m, 2H), 3.36 (s, 4H), 3.10 (s, 2H), 2.94 - 2.75 (m, 5H), 2.60 - 2.51 (m, 3H), 2.03 – 1.95 (m, 2H), 1.58 - 1.50 (m, 7H).
實施例 35 ：
1-(5-氯-2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)丙-2-炔-1-基)氨基)乙氧基)吡啶-3-(2-氯-7-(S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)尿素
反應流程：
實施例流程：
步驟 A ：將碘化亞銅 (12 毫克, 0.06 毫莫耳)，三乙胺 (120 毫克, 1.20 毫莫耳), 2-丙炔-1-醇 (68 毫克, 1.20 毫莫耳) 和1,1'-雙二苯基膦二茂鐵二氯化鈀 (44 毫克，0.06 毫莫耳) 加入到化合物26-1 (200 毫克，0.60 毫莫耳) 的 N, N-二甲基甲醯胺 (5 毫升) 溶液中。氮氣保護下，在80 攝氏度下攪拌16小時後。LCMS監測顯示原料消失後， 加水 (40 毫升) ，並用乙酸乙酯 (20 毫升 ×2) 萃取，並飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。所得粗產物經矽膠柱層析純化得到110 毫克化合物35-1。
MS (ESI) M/Z: 314.0 [M+H] +。
步驟 B ：將化合物35-1 (90 毫克，0.3 毫莫耳）溶於二甲基亞碸 (1 毫升) 中，加入2-碘醯苯甲酸 (530 毫克, 1.9毫莫耳), 室溫下反應過夜。LCMS監測顯示原料消失後，反應混合物用水稀釋，水相用乙酸乙酯萃取 (20 毫升 ×2) 。合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮。所得粗產物經矽膠柱層析分離得到60 毫克化合物35-2。
MS (ESI) M/Z: 312.0 [M+H] +。
步驟 C ：將化合物35-2 (60 毫克, 0.2 毫莫耳), 中間體INT-2 (92 毫克, 0.2 毫莫耳), 三乙胺 (19 毫克, 0.2 毫莫耳) 溶與二氯甲烷（10 毫升）中，所得的溶液在室溫下攪拌10 分鐘, 然後加入乙酸 (0.5 毫升) 和三乙醯氧基硼氫化鈉 (110 毫克, 0.57 毫莫耳)。室溫攪拌過夜。LCMS監測顯示原料消失後，加入飽和碳酸氫鈉水溶液 (20 毫升), 二氯甲烷萃取 (10 毫升 ×2) 。合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮。所得粗產物用反相製備 (甲酸系統) 得4.3 毫克1-(5-氯-2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)丙-2-炔-1-基)氨基)乙氧基)吡啶-3-(2-氯-7-(S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)尿素 (化合物35)。
MS (ESI) M/Z: 735.3 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.11 (s, 1H), 9.21 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.41 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.80 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.12 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.04 - 6.96 (m, 2H), 6.92 (s, 1H), 5.40 - 5.34 (m, 2H), 4.53 (t, J= 5.2 Hz, 2H), 3.76 (s, 2H), 3.62 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 3.12 (t, J= 4.8 Hz, 2H), 2.90 - 2.84 (m, 1H), 2.70 - 2.60 (m, 2H), 2.50 - 1.99 (m, 2H), 1.56 (d, J= 6.4 Hz, 3H).
實施例 36 ：
N-(2-(2-氯-7-(( S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-2-(1-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)呱啶-4-基)乙醯胺
反應流程:
實施例流程：
步驟 A:將化合物28-5 (500.0 毫克 , 1.7 毫莫耳) 和2-(呱啶-4-基)乙酸叔丁酯 (500.0 毫克, 2.5 毫莫耳) 溶於 N-甲基吡咯烷酮 (5 毫升)，加入 N,N-二異丙基乙胺 (668.0 毫克, 5.2 毫莫耳)。該反應系統在140攝氏度下攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液降至室溫，加入水 (50 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (80 毫升) 萃取，有機相用飽和食鹽水 (80 毫升) 洗滌，無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用高效液相製備純化 (流動相：30% 乙腈，70% 蒸餾水，蒸餾水含0.01% 甲酸) 得到589.0 毫克的化合物36-1。
MS (ESI) M/Z: 474.3 [M+H] +。
步驟 B ：將化合物36-1 (300.0 毫克, 0.6 毫莫耳) 溶於二氯甲烷 (10 毫升)中，加入三氟乙酸 (5 毫升)，該反應系統在室溫的環境下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，減壓濃縮。所得混合物用高效液相製備純化 (流動相：64% 乙腈，36% 蒸餾水，蒸餾水含0.01% 甲酸) 得到195.0 毫克的化合物36-2。
MS (ESI) M/Z: 418.1[M+H] +。
步驟 C:將化合物36-2 (70.0 毫克, 0.2 毫莫耳) 和脫鹽的中間體INT-3 (79.5 毫克, 0.2 毫莫耳) 溶於 N,N-二甲基甲醯胺 (5 毫升) 中。加入2-(7氮雜苯并三氮唑)- N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯 (67.毫克, 0.2 毫莫耳) 和 N, N-二異丙基乙胺 (64.0 毫克, 0.5 毫莫耳)。該系統在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，反應液加入水 (15 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (30 毫升) 萃取，有機相用飽和食鹽水 (20 毫升) 洗滌，無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物用高效液相製備純化 (流動相：70% 乙腈，30% 蒸餾水，蒸餾水含0.01% 甲酸) 得到67.0 毫克 N-(2-(2-氯-7-(( S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-2-(1-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)呱啶-4-基)乙醯胺 (化合物36)。
MS (ESI) M/Z: 873.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.12 (s, 1H), 9.29 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.68 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.19 (d, J= 0.4 Hz, 1H), 8.13 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 7.61 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.37 (d, J= 6 Hz, 1H), 6.90 (s, 1H), 5.40 - 5.36 (m, 1H), 5.11 - 5.07 (m, 1H), 4.55 (t, J= 4.4 Hz, 2H), 3.59 – 3.50 (m, 4H), 3.26 (s, 3H), 2.95 - 2.78 (m, 3H), 2.61 - 2.51 (m, 2H), 2.09 - 2.02 (m, 3H), 1.89 - 1.84 (m, 1H), 1.73 (d, J= 9.6 Hz, 2H), 1.58 (d, J= 5.6 Hz, 3H), 1.32 - 1.25 (m, 2H).
實施例 37 ：
1-(2-氯-7-(( S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異吲哚-5-基)呱啶-4-基)乙基)氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素
反應流程：
實施例流程：
化合物37-1的製備參考實施例35。
步驟 A ：將化合物37-1 (50.0 毫克, 0.1 毫莫耳)，脫鹽的中間體INT-3 (60.0 毫克, 0.1 毫莫耳) 溶於甲醇 (4 毫升) 中。加入醋酸 (0.01 毫升)。該系統在室溫攪拌30分鐘。將三乙醯氧基硼氫化鈉 (20.0 毫克, 0.4 毫莫耳) 加入到上述反應液中。該反應體。系在25攝氏度反應3小時。
LCMS監測顯示原料消失後，反應液用水 (20 毫升) 淬滅，二氯甲烷 (20 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，用水 (20 毫升 × 3) 和飽和食鹽水 (20 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用反相柱層析 (流動相：30% 乙腈，70% 蒸餾水，蒸餾水中含0.025% 甲酸) 純化得到20.0 毫克1-(2-氯-7-(( S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異吲哚-5-基)呱啶-4-基)乙基)氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素  (化合物37)。
MS (ESI) M/Z: 859.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.13 (br, 1H), 10.35 (br, 1H), 10.18 (s, 1H), 8.73 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.69 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 7.42 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 5.29 - 5.23 (m, 1H), 5.13 - 5.08 (m, 1H), 4.63 - 4.56 (m, 2H), 3.59 (d, J= 11.6 Hz, 2H), 3.37 - 3.27 (m, 2H), 3.18 (s, 4H), 3.04 - 2.91 (m, 2H), 2.88 - 2.81 (m, 3H), 2.68 - 2.57 (m, 1H), 2.08 - 1.96 (m, 2H), 1.79 (d, J= 12 Hz, 2H), 1.65 - 1.59 (m, 6H), 1.38 - 1.23 (m, 2H).
實施例38：
1-(5-氯-2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異喹啉-5-基)氨基)-7-氮雜螺環[3.5]壬-7-基)乙基)氨基)乙氧基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-(S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)尿素
反應流程:
實施例流程：
步驟 A:室溫下，將化合物38-1 (0.7 克, 2.6 毫莫耳) 和2-(溴甲基)-1,3-二氧戊環 (0.5 克, 3.1 毫莫耳) 溶於乙腈 (15 毫升) 中。加入碳酸鉀 (1.1 克, 8.0 毫莫耳) 。將該系統升至90攝氏度並在該溫度下反應16小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液降至室溫，加入飽和碳酸氫鈉水溶液 (50 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (50 毫升 × 2) 萃取。合併有機相，用飽和食鹽水 (50 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化 (洗脫劑: 石油醚/乙酸乙酯= 2/1) 得到900.0 毫克化合物38-2。
MS (ESI) M/Z: 361.3 [M+H] +。
步驟 B ：室溫下，將化合物38-2 (900.0 毫克, 2.5 毫莫耳) 溶於甲醇 (5 毫升) 中，氮氣置換，加入鈀/碳 (90.0 毫克, 10%)。該系統用氫氣置換並在氫氣球的環境中室溫攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，過濾，濾液減壓濃縮，得到500.0 毫克化合物38-3。
MS (ESI) M/Z: 227.1 [M+H] +。
步驟 C:在氮氣保護的條件下，將化合物38-3 (500.0 毫克, 2.2 毫莫耳) 溶於 N-甲基吡咯烷酮 (15 毫升) 中。加入化合物28-5 (650.0 毫克, 2.2 毫莫耳) 和 N, N-二異丙基乙胺 (850.0 毫克, 6.6 毫莫耳)。該系統在120攝氏度下攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液降至室溫，用反相柱分離 (流動相：40% 乙腈，60% 蒸餾水，蒸餾水中含0.01% 甲酸) 得到500.0 毫克化合物38-4。
MS (ESI) M/Z: 501.2 [M+H] +。
步驟 D ：將化合物38-4 (400.0 毫克, 0.8 毫莫耳) 溶於濃鹽酸 (20 毫升) 中。該系統在50攝氏度下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液降至室溫，加入飽和碳酸氫鈉溶液 (100 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (100 毫升) 萃取，有機相用飽和食鹽水 (50 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用反相柱層析純化 (流動相：40% 乙腈，60% 蒸餾水，蒸餾水中含0.01% 甲酸) 得到150.0 毫克化合物38-5。
MS (ESI) M/Z: 475.2 [M+18] +。
步驟 E ：將化合物38-5 (130.0 毫克, 0.3 毫莫耳) 和脫鹽的中間體INT-2  (150.0 毫克, 0.3 毫莫耳 ) 溶於四氫呋喃 (8 毫升) 中，加入醋酸 (0.25 毫升) 和四異丙氧基鈦 (243.0 毫克, 0.9 毫莫耳 )。該系統在室溫攪拌1小時。將三醋酸硼氫化鈉 (181.0 毫克, 0.9 毫莫耳) 加入到上述反應系統中。反應液在室溫攪拌5小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮，所得混合物先後用反相柱純化和薄層層析 (展開劑: 二氯甲烷/甲醇= 15/1) 純化得到1.9 毫克的1-(5-氯-2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異喹啉-5-基)氨基)-7-氮雜螺環[3.5]壬-7-基)乙基)氨基)乙氧基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-(S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)尿素 (化合物38)。
MS (ESI) M/Z: 880.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.13 (br, 1H), 9.40 - 9.60 (m, 2H), 8.76 (s, 1H), 8.51 (d, J= 2 Hz, 1H), 7.87 (d, J= 2 Hz, 1H), 7.62 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.11 - 7.07 (m, 1H), 7.06 - 7.01 (m, 1H), 6.97 (s, 1H), 5.42 - 5.34 (m, 1H), 5.13 - 5.09 (m, 1H), 4.58 - 4.53 (m, 2H), 4.15 - 4.07 (m, 1H), 3.31 - 3.13 (m, 6H), 3.02 - 2.76 (m, 3H), 2.70 - 2.61 (m, 1H), 2.53 - 2.52 (m, 2H), 2.40 - 2.29 (m, 4H), 2.08 - 2.04 (m, 2H), 1.81 - 1.72 (m, 2H), 1.68 - 1.58 (m, 5H), 1.57 - 1.47 (m, 4H).
實施例39 ：
N-(2-(3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-2-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)氨基)-7-氮雜螺環[3.5]壬基)乙醯胺
反應流程:
實施例流程：
化合物39-1的製備參考實施例38。
步驟 A:將化合物39-1 (50.0 毫克, 0.1 毫莫耳)，脫鹽的中間體INT-3(50.0 毫克, 0.1 毫莫耳)， N, N-二異丙基乙胺 (43.0 毫克, 0.3 毫莫耳) 和2-(7-氮雜苯并三氮唑)- N, N, N', N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (41.8 毫克, 0.1 毫莫耳) 溶於二氯甲烷 (5 毫升)。該反應系統在室溫下攪拌4小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液用乙酸乙酯 (20 毫升) 稀釋，有機相用水 (20 毫升 ×3) 和飽和食鹽水 (20 毫升 ×3) 洗滌。合併有機相，用水 (10 毫升 ×3) 和飽和食鹽水 (10 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化 (洗脫劑: 二氯甲烷/甲醇 = 10/1) 得到51.0 毫克 N-(2-(3-(3-(2-氯-7-(( S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-2-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)氨基)-7-氮雜螺環[3.5]壬基)乙醯胺 (化合物39)。
MS (ESI) M/Z: 928.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.08 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.69 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 8.18 (d, J= 0.8 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.56 (d, J= 8 Hz, 1H), 7.02 (d, J= 3.2 Hz, 1H), 6.93 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 6.89 (s, 1H), 5.42 - 5.37 (m, 1H), 5.08 - 5.03 (m, 1H), 4.57 - 4.55 (t, J= 4 Hz, 2H), 4.02 - 3.99 (m, 1H), 3.65 - 3.56 (m, 2H), 3.31 (s, 2H), 3.27 (s, 3H), 2.92 - 2.85 (m, 2H), 2.64 - 2.52 (m, 2H), 2.31 - 2.14 (m, 4H), 2.02 - 1.96 (m, 2H), 1.76 - 1.67 (m, 2H), 1.65 - 1.55 (m, 5H), 1.54 - 1.42 (m, 2H).
實施例40：
1-(5-氯-2-(3-(2-((2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異喹啉-5-基)氨基)-7-氮雜螺環[3.5]壬-7-基)丙氧基)吡啶-3-(2-氯-7-(( S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)尿素
反應流程:
實施例流程：
化合物40-1的製備參考中間體INT-2的製備流程。
步驟 A ：將化合物40-1 (400.0 毫克, 0.7 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (5 毫升) 中，加入氟化氫的三乙胺溶液 (566.0 毫克, 3.5 毫莫耳)。該系統在室溫攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，零攝氏度下，滴加飽和碳酸氫鈉溶液，調至反應液的酸鹼度為中性，乙酸乙酯 (20 毫升 ×3) 萃取，合併有機相，用水 (20 毫升 ×3) 和飽和食鹽水 (20 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化 (洗脫劑: 石油醚/乙酸乙酯= 1/1) 得到350.0 毫克化合物40-2。
MS (ESI) M/Z: 455.1 [M+H +]。
步驟 B:將化合物40-2 (300.0 毫克, 0.7 毫莫耳) 溶於二甲基亞碸 (10 毫升)，加入2-碘醯苯甲酸 (369.0 毫克, 1.3 毫莫耳)。該反應系統在28攝氏度下攪拌4小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液中加乙酸乙酯 (20 毫升) 稀釋，依次用飽和硫代硫酸鈉溶液 (20 毫升 × 3)，碳酸氫鈉溶液 (20 毫升 × 3)，水 (20 毫升 × 3)和 飽和食鹽水 (20 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，濾液減壓濃縮，得到260.0 毫克化合物40-3。
MS (ESI) M/Z: 452.9 [M+H] +。
步驟 C:在氮氣保護的條件下，將化合物40-4 (500.0 毫克, 2.0 毫莫耳) 溶於 N-甲基吡咯烷酮 (5 毫升) 中。加入化合物28-5 (573.8 毫克, 2.0 毫莫耳) 和 N, N-二異丙基乙胺 (1 毫升, 6.0 毫莫耳)。該系統在130攝氏度下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液直接用反相柱分離 (流動相：50% 乙腈，50% 蒸餾水，蒸餾水中含0.01% 甲酸) 得到580.0 毫克化合物40-5。
MS (ESI) M/Z: 537.3 [M+Na] +。
步驟 D:將化合物40-5 (480.0 毫克, 0.9 毫莫耳) 懸濁於鹽酸的二氧六環溶液 (4 莫耳，30 毫升) 中。該系統在室溫攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，減壓濃縮得到410.0 毫克化合物40-6的鹽酸鹽。
步驟 E ：將化合物40-6 的鹽酸鹽 (235.0 毫克, 0.5 毫莫耳) 和化合物40-3 (260.0 毫克, 0.6 毫莫耳) 溶於甲醇 (30 毫升) 中，加入醋酸 (62.5 毫克, 1.0 毫莫耳)。該系統在室溫攪拌1小時。氰基硼氫化鈉 (98.0 毫克, 1.6 毫莫耳) 加入到上述反應系統中。反應液在室溫攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液中加入水 (20 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (20 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，用飽和食鹽水 (20 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物先後用高效液相色譜製備和薄層層析 (展開劑: 二氯甲烷/甲醇= 15/1) 純化得到40.0 毫克的1-(5-氯-2-(3-(2-((2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異喹啉-5-基)氨基)-7-氮雜螺環[3.5]壬-7-基)丙氧基)吡啶-3-(2-氯-7-(( S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)尿素 (化合物40)。
MS (ESI) M/Z: 853.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.08 (s, 1H), 9.10 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.41 (d, J= 2 Hz, 1H), 7.81 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.57 (d, J= 8 Hz, 1H), 7.05 - 7.04 (m, 1H), 7.00 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 5.39 - 5.34 (m, 1H), 5.07 - 5.03 (m, 1H), 4.43 (t, J= 4.8 Hz, 2H), 4.13 - 4.08 (m, 1H), 3.24 (s, 3H), 2.91 - 2.84 (m, 1H), 2.64 - 2.54 (m, 3H), 2.48 - 2.36 (m, 2H), 2.40 - 2.22 (m, 4H), 2.02 - 1.94 (m, 4H), 1.80 - 1.76 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 1.70 - 1.64 (m, 2H), 1.59 (d, J= 5.6 Hz, 3H), 1.55 - 1.51 (m, 2H).
實施例41：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(4-((4-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-1,3-二氧異喹啉-5-基)呱嗪-1-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素
反應流程:
實施例流程：
化合物41-6的製備參考實施例40。
步驟 A ：將呱嗪-1-羧酸叔丁酯 (1.9 克, 10.0 毫莫耳) 溶於 N-甲基吡咯烷酮 (30 毫升)，加入 N,N-二異丙基乙胺 (4.9 毫升, 28.1 毫莫耳) 和化合物41-1 (2.8 克, 10.0 毫莫耳)。該反應系統在140攝氏度下攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液降至室溫，加水 (50 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (50 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，用水 (50 毫升 × 3) 和飽和食鹽水 (50 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所的混合物用矽膠柱層析純化 (洗脫劑: 100% 乙酸乙酯) 得到3.5 克化合物41-2。
步驟 B ：將化合物41-2 (3.5 克, 7.9 毫莫耳) 溶於乙酸乙酯 (15 毫升) 中，加入鹽酸的1,4-二氧六環溶液 (4 莫耳, 15 毫升)。該系統在室溫攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮得到2.6 克化合物41-3的鹽酸鹽。
MS (ESI) M/Z: 343.3 [M+H] +。
步驟 C ：室溫下，將化合物41-3 的鹽酸鹽 (350.0 毫克, 0.9 毫莫耳) 和4-甲醯呱啶-1-羧酸叔丁酯 (218.0 毫克, 1.0 毫莫耳 ) 溶於 N,N-二甲基甲醯胺 (5 毫升) 和四氫呋喃 (5 毫升) 中，加入醋酸 (306.0 毫克, 5.1 毫莫耳)。該系統在室溫攪拌0.5小時。 三醋酸硼氫化鈉 (649.0 毫克, 3.1 毫莫耳) 加入到上述反應系統中。反應液在室溫攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液 (50 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (50 毫升 × 2) 萃取。合併有機相，用水 (50 毫升 × 3) 和飽和食鹽水 (50 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鎂乾燥。過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物先後用矽膠柱層析純化 (洗脫劑: 二氯甲烷/甲醇= 15/1) 得到化合物450.0 毫克41-4。
MS (ESI) M/Z: 562.3 [M+Na] +。
步驟 D ：將化合物41-4 (450.0 毫克, 0.8 毫莫耳) 溶於二氯甲烷 (10 毫升)。加入鹽酸的二氧六環溶液 (4 莫耳，3 毫升) 中。該系統在室溫攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，過濾，濾餅用二氯甲烷洗滌，乾燥，得到300.0 毫克化合物41-5的鹽酸鹽。
MS (ESI) M/Z: 440.3 [M+H] +。
步驟 E ：室溫下，將化合物41-5 的鹽酸鹽(50.0 毫克, 0.1 毫莫耳) 和化合物41-6 (54.0 毫克, 0.1 毫莫耳 ) 溶於甲醇 (2 毫升) 中，加入醋酸 (0.1 毫升) 和四異丙氧基鈦 (0.2 毫升)。該系統在室溫攪拌1小時。2-甲基吡啶硼烷絡合物 (37.0 毫克, 0.3 毫莫耳) 加入到上述反應系統中。反應液在室溫攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮，所得混合物先後用反相柱層析和薄層色譜層析純化 (展開劑: 二氯甲烷/甲醇) 得到6.2 毫克的1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(4-((4-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-1,3-二氧異喹啉-5-基)呱嗪-1-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素 (化合物41)。
MS (ESI) M/Z: 896.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 11.09 (s, 1H), 9.30 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.68 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 8.18 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.67 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.32 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 7.23 (dd, J= 8.7, 2.3 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 5.38 (q, J= 6.6 Hz, 1H), 5.07 (dd, J= 12.8, 5.4 Hz, 1H), 4.64 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 3.42 – 3.38 (m, 4H), 3.26 (s, 3H), 2.98 – 2.76 (m, 5H), 2.62 – 2.53 (m, 2H), 2.47 – 2.42 (m, 4H), 2.13 (d, J= 7.1 Hz, 2H), 2.05 – 1.91 (m, 3H), 1.71 - 1.64 (m, 2H), 1.58 (d, J= 6.7 Hz, 3H), 1.52 (s, 1H), 1.16 - 1.03 (m, 2H).
實施例42：
1-(5-氯-2-(2-((4-(4-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異吲哚-5-基)呱嗪-1-基)環己基)氨基)乙氧基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)尿素
反應流程：
實施例流程：
步驟 A:將1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷 (5.0 克, 32.1 毫莫耳)，呱嗪-1-羧酸苄酯 (7.1 克, 32.2 毫莫耳) 溶於甲醇 (50 毫升) 中，加入乙酸 (1滴)。該反應系統在室溫下攪拌0.5小時。將氰基硼氫化鈉 (3.0 克, 48.0 毫莫耳) 加入上述反應液中。該反應液在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液加水淬滅 (100 毫升) ，二氯甲烷 (100 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，用水 (200 毫升) 和飽和食鹽水 (200 毫升) 洗滌，無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物藉由矽膠柱層析(乙酸乙酯：石油醚= 1:2）純化得到3.0 克化合物42-1。
MS (ESI) M/Z: 361.3 [M+H] +。
步驟 B ：將化合物42-1 (3.0 克, 8.3 毫莫耳) 溶於乾燥的四氫呋喃 (30 毫升)，氮氣置換，加入鈀碳 (0.3 克, 10%) 中。該反應系統在氫氣球和室溫下攪拌6小時。LCMS監測顯示原料消失後，過濾，濾液減壓濃縮，得到1.7 克化合物42-2。
MS (ESI) M/Z: 227.4 [M+H] +。
步驟 C:將化合物42-2 (1.7 克, 7.6 毫莫耳)) 溶於 N-甲基吡咯烷酮 (25 毫升)。加入化合物28-5 (2.3 克, 7.6 毫莫耳) 和 N, N-二異丙基乙胺 (3.0 克, 23.1 毫莫耳)。該反應系統在120攝氏度下攪拌1小時。 LCMS監測顯示原料消失後，反應液加水淬滅 (100 毫升)，乙酸乙酯 (100 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，用水 (200 毫升) 和飽和食鹽水 (200 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物藉由矽膠柱層析（乙酸乙酯：石油醚= 2:1）純化得到3.8 克化合物42-3。
MS (ESI) M/Z: 501.3 [M+H] +。
步驟 D ：將化合物42-3 (800.0 毫克, 1.6 毫莫耳) 溶於於鹽酸 (2.4 毫升) 和乙酸乙酯 (12 毫升) 中。該反應系統在室溫下攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液加冰水淬滅 (50 毫升) ，乙酸乙酯 (50 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，用水 (50 毫升) 和飽和食鹽水 (50 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮, 得到222.0 毫克化合物42-4。
MS (ESI) M/Z: 457.3 [M+H] +。
步驟 E ：將化合物42-4 (150.0 毫克, 0.3 毫莫耳)，中間體INT-2 (144.6 毫克, 0.3 毫莫耳) 和鈦酸四異丙酯 (0.3 毫升) 溶於1,2-二氯乙烷 (10 毫升) 中。加入醋酸 (0.3 毫升) 和1-硼烷基-2-甲基-1-吡啶 (70.3 毫克, 0.7 毫莫耳) 。該系統在室溫攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液用水 (50 毫升) 淬滅，二氯甲烷 (50 毫升 × 3) 萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水 (50 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用反相純化(45% 乙腈：55% 水：0.025% 甲酸)得到7.3 毫克的化合物42-P1 (保留時間2.12min)和11.9 毫克化合物42-P2（保留時間2.26 min) 。
化合物42-P1:
MS (ESI) M/Z: 880.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.10 (br, 1H), 9.33 (br, 1H), 8.76 - 8.73 (m, 1H), 8.44 - 8.41 (m, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.71 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.42 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 6.91 (s, 1H), 5.38 - 5.29 (m, 1H), 5.14 - 5.08 (m, 1H), 4.68 - 4.61 (m, 1H), 4.50 - 4.42 (m, 2H), 3.27 - 3.18 (m, 8H), 2.94 - 2.85 (m, 1H), 2.75 - 2.60 (m, 6H), 2.40 - 2.20 (m, 2H), 2.09 - 1.95 (m, 6H), 1.85 - 1.75 (m, 2H), 1.59 (d, J= 5.2 Hz, 3H), 1.54 - 1.41 (m, 2H).
化合物42-P2:
MS (ESI) M/Z: 880.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.12 (br, 1H), 9.96 (br, 1H), 9.71 (s, 1H), 8.62 (d, J= 4 Hz, 1H), 8.43 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.82 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.76 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 7.44 (d, J= 11.6 Hz, 1H), 6.91 (s, 1H), 5.28 - 5.25 (m, 1H), 5.13 - 5.08 (m, 1H), 4.57 - 4.51 (t, J= 10.8 Hz, 2H), 3.46 - 3.38 (m, 7H), 3.18 (s, 3H), 2.91 - 2.81 (m, 5H), 2.70 - 2.54 (m, 4H), 2.15 - 1.98 (m, 5H), 1.90 - 1.78 (m, 2H), 1.63 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.53 - 1.45 (m, 2H).
實施例43：
1-(2-氯-7-(( S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-((4-((4-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異喹啉-5-基)呱嗪-1-基)甲基)環己基)氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素
反應流程：
實施例流程：
化合物43-1的製備參考實施例42。
步驟 A ：將脫鹽的中間體INT-3  (200.0 毫克, 0.4 毫莫耳) 和化合物43-1 (201.0 毫克, 0.4 毫莫耳) 溶於1,2-二氯乙烷 (10 毫升) 和甲醇 (1.5毫升) 中。加入醋酸 (0.1 毫升) 和四異丙氧基鈦 (0.4 毫升, 1.4 毫莫耳)。該反應系統在25攝氏度反應0.5小時。將三醋酸硼氫化鈉 (180.4 毫克, 0.9 毫莫耳) 加入上述反應系統中，該反應液在25攝氏度反應2小時。LCMS監測有21% 的產物生成，反應液用水 (15 毫升) 淬滅，二氯甲烷 (20 毫升) 萃取，有機相用飽和食鹽水 (15 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用反相柱層析純化得到120.0 毫克的1-(2-氯-7-(( S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-((4-((4-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異喹啉-5-基)呱嗪-1-基)甲基)環己基)氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素 (化合物43)。
MS (ESI) M/Z: 928.3 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 11.12 (br, 1H), 9.32 (br, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.77 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 8.68 - 8.65 (m, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.74 - 7.70 (m, 1H), 7.45 - 7.42 (m, 1H), 6.92 (d, J= 2 Hz, 1H), 5.41 - 5.37 (m, 1H), 5.13 - 5.09 (m, 1H), 4.61- 4.53 (m, 2H), 3.29 -3.24 (m, 3H), 3.21 - 3.20 (m, 4H), 3.15 - 2.71 (m, 4H), 2.64 - 2.53 (m, 2H), 2.49 - 2.45 (m, 5H), 2.17 - 2.10 (m, 2H), 2.05 - 2.02 (m, 1H), 1.93 - 1.91 (m, 1H), 1.78 - 1.76 (m, 1H), 1.62 - 1.58 (m, 4H), 1.51 - 1.29 (m, 6H).
實施例44：
1-(5-氯-2-(2-((1-((1-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異喹啉-5-基)呱啶-4-基)甲基)呱啶-4-基)氨基)乙氧基)吡啶-3-(2-氯-7-(( S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)尿素
反應流程:
實施例流程：
化合物44-1的製備參考實施例42。
步驟 A ：將化合物44-1 (100.0 毫克, 0.2 毫莫耳)，脫鹽的中間體INT-2(92.0 毫克, 0.2 毫莫耳) 和鈦酸四異丙酯 (0.4 毫升) 溶於1,2-二氯乙烷 (5 毫升) 中。加入醋酸 (0.02 毫升)。該系統在室溫攪拌30分鐘。將醋酸硼氫化鈉 (88.6 毫克, 2.4 毫莫耳) 加入到上述反應液中。該反應系統在25攝氏度反應2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液用水 (10 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (15 毫升) 萃取，有機相用飽和食鹽水 (15 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析和反相柱層析純化得到31.0 毫克的1-(5-氯-2-(2-((1-((1-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧異喹啉-5-基)呱啶-4-基)甲基)呱啶-4-基)氨基)乙氧基)吡啶-3-(2-氯-7-(( S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)尿素(化合物44)。
MS (ESI) M/Z: 894.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.07 (br, 1H), 9.26 (br, 1H), 9.04 (br, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.42 (d, J= 2 Hz, 1H), 7.82 (d, J= 2 Hz, 1H), 7.69 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.42 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 5.40 - 5.31 (m, 1H), 5.12 - 5.07 (m, 1H), 4.46 (t, J= 4.4 Hz, 2H), 3.58 (d, J= 9.6 Hz, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.10 – 2.97 (m, 2H), 2.95 - 2.82 (m, 4H), 2.79 - 2.76 (m, 2H), 2.74 - 2.48 (m, 2H), 2.12 - 2.10 (m, 2H), 2.10 – 1.96 (m, 2H), 1.90 - 1.76 (m, 7H), 1.72 - 1.65 (m, 1H), 1.59 (d, J= 5.2 Hz, 3H), 1.48 - 1.25 (m, 3H).
實施例45：
N-(2-(5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-3-(4-(1-(2,6-二氧呱啶-3-基)-3-甲基-2-氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)呱嗪-1-基)丙胺
反應流程:
實施例流程
步驟 A：將原料 4-溴-3-甲基-1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1,3-二氫-2H-苯并[d]咪唑-2-酮 (500 毫克, 1.4 毫莫耳), 1-叔丁氧羰基呱嗪 (261 毫克, 1.4 毫莫耳)，叔丁醇鈉 (400 毫克, 4.2 毫莫耳),  2-雙環已基膦-2 ',6'-二異丙氧基聯苯 (65 毫克, 140 微莫耳), 三二亞苄基丙酮二鈀 (64 毫克, 70 微莫耳)，加入到三口燒瓶中，加入二氧六環 (10 毫升)，置換氮氣3次。將反應液加熱到90 攝氏度，在90 攝氏度氮氣保護下攪拌過夜。LCMS監測顯示原料消失後，向反應系統中加水 (100 毫升) 淬滅。混合液用乙酸乙酯 (50 毫升 ×3) 萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水 (10 毫升 x 3) 洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮反應液濃縮，粗品用矽膠柱層析分離 (石油醚/乙酸乙酯 = 1/2)，得到600 毫克的化合物45-1。
MS (ESI) M/Z: 463.2 [M+H] +。
步驟 B ：在室溫下，將化合物45-1 (600 毫克, 1.3 毫莫耳) 溶於 1M 四丁基氟化銨/四氫呋喃 (10.4 毫升) 中。反應液加熱回流過夜。LCMS監測顯示原料消失後，向反應系統中加水 (50 毫升) 淬滅。混合液用乙酸乙酯 (50 毫升 × 3) 萃取，合併有機相，有機相用水 (20 毫升 × 2) 和飽和食鹽水 (20 毫升) 洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化 (洗脫劑: 石油醚/乙酸乙酯) 得到330 毫克化合物45-2。
MS (ESI) M/Z: 333.1 [M+H] +。
步驟 C ：將化合物45-2 (270 毫克, 0.8 毫莫耳) 溶於無水四氫呋喃 (10 毫升)中，氮氣保護下，冷卻到零攝氏度， 加入叔丁醇鉀 (182 毫克, 1.6 毫莫耳)，並且加入完畢後攪拌5分鐘，再滴加入1-(4-甲氧基苄基)-2, 6 - 二氧呱啶 - 3 - 三氟甲基磺酸酯 (450 毫克, 1.2 毫莫耳) 的四氫呋喃溶液 (2 毫升)，加完後在此溫度下攪拌30分鐘。LCMS監測顯示原料消失後，加入飽和氯化銨水溶液 (10 毫升) 淬滅反應。混合液用乙酸乙酯 (20 毫升 ×3) 萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水 (10 毫升) 洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮反應液濃縮，粗品用矽膠柱層析分離（二氯甲烷/乙酸乙酯)，得到160 毫克化合物45-3。
MS (ESI) M/Z: 564.2 [M+H] +。
步驟 D ：在室溫和氮氣保護下，化合物45-3 (160 毫克, 0.3 毫莫耳) 溶於三氟乙酸 (10 毫升) 中。隨後，向其中加入三氟甲磺酸 (480 毫克, 3.2 毫莫耳)。 反應液在60攝氏度下繼續攪拌過夜。 LCMS監測顯示原料消失後，反應液濃縮，得500 毫克化合物45-4。化合物不經進一步提純，直接進行下一步反應。
MS (ESI) M/Z: 344.1 [M+H] +。
步驟 E ：將化合物45-4 (500 毫克) 溶於乙腈 (10 毫升) 中。在零攝氏度下，向其中加入三乙胺 (324 毫克, 3.2 毫莫耳)，然後加入丙烯酸乙酯 (205 毫克, 1.6 毫莫耳)，室溫下繼續攪拌過夜。 LCMS 監測顯示原料消失後，反應液濃縮。加水 (40 毫升)，用乙酸乙酯 (20 毫升 × 3) 萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水 (10 毫升) 洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。 粗品用矽膠柱層析分離（二氯甲烷/甲醇)，得到140 毫克化合物45-5。
MS (ESI) M/Z: 472.2 [M+H +]。
步驟 F ：將化合物45-5 (70 毫克, 0.2 毫莫耳) 溶於二氯化甲烷 (4 毫升) 中。 在零攝氏度下，向其中加入三氟乙酸 (2 毫升)，室溫下繼續攪拌過夜。 LCMS 監測顯示原料消失後，反應液濃縮。得到80 毫克化合物45-6。
MS (ESI) M/Z: 416.1 [M+H] +。
步驟 G ：將化合物45-6 (80 毫克, 0.2 毫莫耳) 和脫鹽的中間體INT-2 (72 毫克, 0.2 毫莫耳) 溶於N,N-二甲基甲醯胺 (5 毫升) 中。 在零攝氏度下，向其中依次加入N，N-二異丙基乙胺 (97 毫克, 0.8 毫莫耳) 和  2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (95 毫克, 0.3 毫莫耳)。室溫下反應2小時後，加入水 (50 毫升), 用乙酸乙酯萃取 (20 毫升 ×2), 無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。粗品用矽膠柱層析分離（二氯甲烷/甲醇), 得43.5 毫克N-(2-(5-氯-3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-3-(4-(1-(2,6-二氧呱啶-3-基)-3-甲基-2-氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)呱嗪-1-基)丙胺 (化合物45)。
MS (ESI) M/Z: 837.1 [M+H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.09 (s, 1H), 9.13 (s, 1H), 8.92 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.46 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.29 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 7.82 (d, J= 3.0 Hz, 1H), 6.95-6.92 (m, 2H), 6.87-6.86 (m, 1H), 6.73 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 5.38 (q, J= 6.5 Hz, 1H), 5.35 - 5.32 (m, 1H), 4.42 (t, J= 6.0 Hz, 2H ) 3.58 (s, 3H), 3.53 (t, J= 6.0 Hz, 2 H), 3.26 (s, 3H), 2.92 - 2.85 (m, 5H), 2.72 - 2.61 (m, 6H), 2.34 (t, J= 7.0 Hz, 2H), 2.23 - 2.21 (m, 2H), 1.99 - 1.97 (m, 1H), 1.57 (d, J= 6.5 Hz, 3H).
實施例46：
1-(5-氯-2-(2-((4-(4-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-1-氧異喹啉-5-基)呱嗪-1-羰基)環己基)氨基)乙氧基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)尿素
反應流程:
實施例流程：
化合物46-7的製備參考實施例42。
步驟 A:將5-溴-3H-異苯并呋喃-1-酮 (5.0 克, 23.5 毫莫耳) 和叔丁基呱嗪-1-羧酸酯 (4.8 克, 25.8 毫莫耳) 溶於甲苯 (50 毫升) 中。添加碳酸銫 (15.3 克, 46.9 毫莫耳) )、2-二環己基膦基-2'-( N,N-二甲氨基)聯苯 (73.9毫克, 0.2 毫莫耳) 和乙酸鈀(II) (0.1 克，0.4 毫莫耳)。反應系統在氮氣保護下100 攝氏度攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液過濾，用乙酸乙酯 (100 毫升 × 2) 沖洗濾渣。所得溶液減壓濃縮，所得混合物用快速矽膠層析柱純化 (洗脫劑: 石油醚/乙酸乙酯 = 13/7) 得到4.7 克化合物 46-1 。
MS (ESI) M/Z: 319.1 [M+H] +。
步驟 B ：將化合物 46-1 (4.7 克，14.7 毫莫耳) 溶於四氫呋喃/甲醇/水 (體積比為1/1/1) (90 毫升) 中。 在零攝氏度下加入氫氧化鈉 (2.2 克, 55.6 毫莫耳)，然後將混合物在室溫下攪拌過夜。LCMS監測顯示原料消失後，用2莫耳的稀鹽酸將反應液的酸鹼值調至4-5。用乙酸乙酯 (100 毫升 × 4) 萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到3.2 克化合物 46-2。該化合物直接用於下一步。
MS (ESI) M/Z: 337.1 [M+H] +。
步驟 C:將化合物 46-2 (3.2 克, 9.4 毫莫耳) 溶在甲醇 (20 毫升) 和 乙酸乙酯 (20 毫升) 的溶液中。在零下10攝氏度下，向溶液中滴加 (三甲基甲矽烷基)重氮甲烷 (2 莫耳, 20 毫升)，滴加完後繼續攪拌15分鐘。 LCMS監測顯示原料消失後，反應液用水 (50 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (100 毫升 × 3) 萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，得到3.1 克化合物46-3。
MS (ESI) M/Z: 351.0 [M+H] +。
步驟 D:將化合物46-3 (3.1 克, 8.9 毫莫耳) 溶在四氫呋喃 (30 毫升) 中，向溶液中加入三苯基膦 (3.5 克, 13.4 毫莫耳) 和 四溴化碳 (4.5 克, 13.4 毫莫耳)。混合物在室溫下攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水 (50 毫升) 淬滅，再用乙酸乙酯 (100 毫升 × 3 ) 萃取，過濾，減壓濃縮。所得混合物用快速矽膠層析柱純化(洗脫劑: 石油醚/乙酸乙酯 = 3/1) 得到3.1 克化合物46-4。
步驟 E:將化合物46-4 (3.1 克, 7.4 毫莫耳) 溶在 N,N-二甲基甲醯胺 (30 毫升) 中，向溶液中加入3-氨基呱啶-2,6- 二酮鹽酸鹽 (2.5 克, 14.9 毫莫耳) 和 N,N-二異丙基乙胺 (3.8 克, 29.8 毫莫耳)，反應在100攝氏度下攪拌過夜。 LCMS監測顯示原料消失後，將反應液倒入水 (50 毫升) 中，過濾，濾餅用乙腈 (100 毫升) 洗滌，乾燥後得到2.3 克化合物46-5。
MS (ESI) M/Z: 429.0 [M+H] +。
步驟 F:將化合物46-5 (2.3 克, 5.4 毫莫耳) 溶於1, 4-二氧六環 (30 毫升) 中，加入鹽酸的1, 4-二氧六環溶液 (4莫耳, 22.5 毫升)，混合物在室溫下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液過濾，得到的固體用乙酸乙酯 (20 毫升 × 2) 和二氯甲烷 (20 毫升 × 2) 洗滌，乾燥後得到2.0 克化合物46-6。
MS (ESI) M/Z: 329.1 [M+H] +。
步驟 G:將化合物46-7 (100.0 毫克, 0.2 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (5 毫升) 和水 (1 毫升)，加入一水合氫氧化鋰 (21.0毫克, 0.5 毫莫耳)。該反應系統在零攝氏度下攪拌5小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液用冰水 (3 毫升) 淬滅，並用1莫耳的鹽酸調至溶液的酸鹼值為2。乙酸乙酯 (6 毫升 × 3) 萃取，合併有機相，用飽和食鹽水 (6 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到85.0毫克化合物46-8。該粗品可直接用於下一步反應。
MS (ESI) M/Z: 566.3 [M+H] +。
步驟 H ：在 N, N-二甲基甲醯胺 (5 毫升) 中，加入化合物46-8 (85.0 毫克, 0.1 毫莫耳)，化合物46-6 (109.0 毫克, 0.3 毫莫耳)，1-羥基苯并三唑 (30.0 毫克, 0.2 毫莫耳)，(1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亞胺) (86.0毫克, 0.5 毫莫耳) 和三乙胺 (45.0毫克, 0.5 毫莫耳)。該反應系統在室溫下攪拌17小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮。所得混合物用薄層層析純化 (展開劑: 二氯甲烷/甲醇= 10/1) 得到12.8毫克的1-(5-氯-2-(2-((4-(4-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-1-氧異喹啉-5-基)呱嗪-1-羰基)環己基)氨基)乙氧基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)尿素 (化合物46)。
MS (ESI) M/Z: 875.9 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 10.97 (s, 1H), 9.22 (s, 1H), 9.03 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.43 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.82 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.55 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.08 (s, 1H), 7.07 (d, J= 8 Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 5.39 - 5.34 (m, 1H), 5.08 - 5.03 (m, 1H), 4.47 - 4.44 (m, 2H), 4.36 - 4.18 (m, 2H), 3.67 - 3.55 (m, 4H), 3.24  (s, 6H), 3.12 - 2.85 (m, 3H), 2.71 - 2.56 (m, 4H), 2.44 - 2.32 (m, 1H), 2.04 – 1.88 (m, 3H), 1.77 - 1.68 (m, 2H), 1.59 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 1.45 - 1.32 (m, 2H), 1.30 - 1.03 (m, 3H).
實施例47：
1-(2-氯-7-(( S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-(4-((2,6-二氧呱啶-3-基)氨基)苯基)環己基)氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素
反應流程:
實施例流程：
化合物47-5的製備參考實施例40。
步驟 A:在氮氣保護條件下，將1-溴-4-硝基苯 (500.0 毫克, 2.5 毫莫耳) 和叔丁基(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯甲醛-2-基)環己-3-烯-1-基)氨基甲酸酯 (803 毫克, 2.5 毫莫耳) 溶於1,4-二氧六環 (10 毫升)，加入二氯[1,1'-二(二苯基膦)二茂鐵]鈀 (183.0 毫克, 0.3 毫莫耳) 和碳酸鉀水溶液 (2 毫升, 10% )。該反應系統在90攝氏度下攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，冰浴下，加入乙酸乙酯 (150 毫升) 稀釋，有機相用水 (150 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化 (洗脫劑: 石油醚/乙酸乙酯) 得到660.0 毫克化合物47-1。
步驟 B ：將化合物47-1 (560.0 毫克, 1.8 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (100 毫升) 中。反應系統用氮氣置換，加入鈀/碳 (56 毫克, 10%)，該反應系統用氫氣置換，並在氫氣球的環境中室溫攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，過濾，濾液減壓濃縮，得到450 毫克的化合物47-2。
步驟 C:在5毫升的微波管中，依次加入化合物47-2 (450.0 毫克, 1.6 毫莫耳)，3-溴呱啶-2,6-二酮 (703.0 毫克, 3.7 毫莫耳)， N,N-二異丙基乙基胺 (460.0 毫克, 3.5 毫莫耳) 和1,4-二氧六環 (1 毫升)。密封後，反應液在80攝氏度下攪拌14小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液降至室溫，加入乙酸乙酯 (50 毫升) 稀釋。有機相，用水 (50 毫升 × 3) 和飽和食鹽水 (50 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化 (洗脫劑: 二氯甲烷/甲醇= 10/1) 得到340.0 毫克化合物47-3。
MS (ESI) M/Z: 424.3 [M+Na] +。
步驟 D ：將化合物47-3 (290.0 毫克, 0.7 毫莫耳) 溶於乙酸乙酯 (10 毫升) 中，加入鹽酸的1,4-二氧六環溶液 (4莫耳，10 毫升)。該系統在室溫攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮，得到210.0 毫克化合物47-4。
MS (ESI) M/Z: 302.1 [M+H] +。
步驟 E ：在氮氣保護下，將化合物47-4 (210.0 毫克, 0.7 毫莫耳) 和化合物47-5 (329.0 毫克, 0.7 毫莫耳 ) 溶於甲醇 (20 毫升) 中，加入醋酸 (0.2毫升, 0.1 毫莫耳) 和鈦酸四異丙酯。該系統在50攝氏度下攪拌1小時。反應液降至室溫，加入2-甲基吡啶硼烷 (112.0 毫克, 1.1 毫莫耳)。反應液在室溫攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液中加入甲醇 (40 毫升) 和十水硫酸鈉淬滅，加二氯甲烷 (40 毫升) 萃取。有機相用水 (40 毫升 × 3) 和飽和食鹽水 (40 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鎂乾燥。過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化 (洗脫劑: 二氯甲烷/甲醇= 10/1)得到18.0 毫克的1-(2-氯-7-(( S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-(4-((2,6-二氧呱啶-3-基)氨基)苯基)環己基)氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素(化合物47)。
MS (ESI) M/Z: 758.3 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 10.75 (s, 1H), 9.97 (br, 1H), 9.53 (br, 1H), 9.07 (br, 1H), 8.74 - 8.66 (m, 2H), 8.20 (s, 1H), 7.12 - 6.92 (m, 3H), 6.59 (d, J= 6.4 Hz, 2H), 5.67 - 5.63 (m, 1H), 5.38 - 5.31 (m, 1H), 4.71 - 4.65 (m, 2H), 4.28 - 4.22 (m, 1H), 3.23 - 3.22 (m, 4H), 2.80 - 2.66 (m, 1H), 2.59 - 2.54 (m, 2H), 2.37 - 2.22 (m, 1H), 2.11 – 1.75 (m, 8H), 1.63 - 1.39 (m, 6H).
實施例48：
N-(2-((3-(2-氯-7-(( S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-4-((4-(2,6-二氧呱啶-3-基)苯基)氨基)甲基)環己烷-1-甲醯胺
反應流程:
實施例流程：
步驟 A:將1-氯-4-硝基苯 (5.0 克, 31.8 毫莫耳)，2-氰基乙酸甲酯 (7.9 克, 79.3 毫莫耳)，碳酸鉀 (11.8 克, 85.5 毫莫耳) 溶於N,N-二甲基甲醯胺 (25 毫升)。該反應系統在110攝氏度下攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液降至室溫，加水 (50 毫升) 淬滅。滴加稀硫酸，調至溶液的酸鹼度為2。過濾，濾餅用水洗滌，濾液用乙酸乙酯 (100 毫升 × 2) 萃取。合併有機相，用飽和食鹽水 (100 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物與濾餅合併，用矽膠柱層析純化 (洗脫劑: 石油醚/乙酸乙酯= 3/2) 得到6.0 克化合物48-1。
MS (ESI) M/Z: 221.1 [M+H] +。
步驟 B ：將化合物48-1 (0.5 克, 2.2 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (10 毫升) 中。加入丙烯酸甲酯 (190.0 毫克, 2.2 毫莫耳) 和 N-甲基嗎啡啉 (222.0 毫克, 2.2 毫莫耳)，該反應系統在60攝氏度下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液降至室溫，加用水 (20 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (20 毫升 ×2) 萃取。合併有機相，用飽和食鹽水 (20 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化 (洗脫劑: 石油醚/乙酸乙酯 = 3/2) 得到0.7 克化合物48-2 。
MS (ESI) M/Z: 307.2 [M+H] +。
步驟 C:將化合物48-2 (700.0 毫克, 2.3 毫莫耳) 溶於乙酸 (10 毫升) 中。加入濃硫酸 (800.0 毫克, 8.2 毫莫耳)。該系統在110攝氏度下攪拌2個小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液降至室溫，慢慢加入3莫耳的氫氧化鈉水溶液，調至溶液為弱酸性。乙酸乙酯 (25 毫升 × 2) 萃取。合併有機相，用水 (25 毫升 × 2) 飽和食鹽水 (25 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化 (洗脫劑: 石油醚/乙酸乙酯= 1/4) 得到400.0 毫克化合物48-3。
MS (ESI) M/Z: 235.3 [M+Na] +。
步驟 D ：將化合物48-3 (400.0 毫克, 1.7 毫莫耳)，氯化銨 (130.0 毫克, 2.5 毫莫耳) 和鐵粉 (400.0 毫克, 7.1 毫莫耳) 溶於乙醇 (5 毫升) 和水 (0.5 毫升) 中。該系統在 100 攝氏度下攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液降至室溫，過濾，減壓濃縮。殘餘物加乙酸乙酯 (50 毫升) 溶解，有機相用水 (50 毫升) 和飽和食鹽水 (50 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物藉由矽膠柱層析純化得到300.0 毫克化合物48-4。
MS (ESI) M/Z: 205.3 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 10.74 (s, 1H), 6.84 (d, J= 8 Hz, 2H), 6.52 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 5.04 (br, 2H), 3.64 - 3.60 (m, 1H), 2.68 - 2.56 (m, 1H), 2.46 - 2.33 (m, 1H), 2.11 - 1.96 (m, 2H).
步驟 E:將 (1 R，4 R)-4-(甲氧羰基)環己烷-1-羧酸 (393.0 毫克, 2.1 毫莫耳)，脫鹽的中間體INT-3  (1.0 克, 2.1 毫莫耳)， N, N-二異丙基乙胺 (1.4 克, 10.6 毫莫耳) 和2-(7-氮雜苯并三氮唑)- N, N, N', N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (1.2 克, 3.2 毫莫耳) 溶於 N,N-二甲基甲醯胺 (10 毫升)。 該反應系統在室溫下攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液用水 (100 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (100 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，用飽和食鹽水 (100 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，減壓濃縮。所得混合物藉由高效液相色譜純化得到1.4 克化合物48-5。
MS (ESI) M/Z: 642.1 [M+H] +。
步驟 F:在零下78攝氏度和氬氣保護的條件下，將化合物48-5  (1.0 克, 1.6 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (16 毫升)。慢慢滴加二異丙基氫化鋁 (2莫耳的四氫呋喃溶液, 4.1 毫升)，滴加完畢，該反應系統慢慢升至室溫，並在該問下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液加水 (50 毫升) 淬滅。過濾，濾液用乙酸乙酯 (50 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，用水 (50 毫升 × 3) 和飽和食鹽水 (50 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，減壓濃縮，得到350.0 毫克化合物48-6。該化合物直接用於下一步。
MS (ESI) M/Z: 614.4 [M+H] +。
步驟 G:將化合物48-6 (350.0 毫克, 0.6 毫莫耳) 溶於二甲基亞碸 (5 毫升)，加入2-碘醯苯甲酸 (319.2 毫克, 1.1 毫莫耳)。該反應系統在30攝氏度下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液中加水 (50 毫升) 淬滅。過濾，濾液用乙酸乙酯 (50 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，先後用飽和硫代硫酸鈉溶液 (50 毫升 ×3)，飽和碳酸氫鈉溶液 (50 毫升 ×3)，水 (50 毫升 ×3) 和飽和氯化鈉溶液 (50 毫升 ×3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到288.0 毫克化合物48-7。
MS (ESI) M/Z: 612.2 [M+H] +。
步驟 H ：室溫下，將化合物48-7 (200.0 毫克, 0.3 毫莫耳)，化合物48-4 (66.0 毫克, 0.3 毫莫耳) 溶於甲醇 (8 毫升) 中。加入醋酸 (39.2 毫克, 0.7 毫莫耳)。該反應液在50攝氏度下攪拌1小時。將2-甲基吡啶的硼烷絡合物 (70.0 毫克,0.7 毫莫耳) 加入到上述反應液中。該系統在室溫攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液倒入水 (100 毫升) 中，乙酸乙酯 (100 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，用水 (100 毫升 ×3) 和飽和氯化鈉溶液 (100 毫升 ×3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，減壓濃縮。所得混合物用反相柱層析純化得到48.9 毫克 N-(2-((3-(2-氯-7-(( S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-4-((4-(2,6-二氧呱啶-3-基)苯基)氨基)甲基)環己烷-1-甲醯胺(化合物48)。
MS (ESI) M/Z: 800.3 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 10.75 (s, 1H), 9.34 (s, 1H), 9.14 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.69 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.11 - 8.08 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 6.96 - 6.93 (m, 3H), 6.63 (s, 2H), 5.40 - 5.36 (m, 1H), 4.50 - 4.47 (t, J= 4.4 Hz, 2H), 3.69 - 3.65 (m, 1H), 3.56 - 3.48 (m, 3H), 3.25 (s, 3H), 2.87 (d, J= 4.8 Hz, 2H), 2.65 - 2.58 (m, 1H), 2.48 - 2.42 (m, 1H), 2.13 - 2.05 (m, 2H), 2.02 - 1.96 (m, 1H), 1.85 - 1.74 (m, 4H), 1.59 (d, J= 5.2 Hz, 3H), 1.54 - 1.47 (m, 1H), 1.38 - 1.23 (m, 2H), 0.97 - 0.89 (m, 2H).
實施例49：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(4-((4-(1-(2,6-二氧呱啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)呱嗪-1-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素
反應流程:
實施例流程：
步驟 A：在氮氣保護的條件下，將4-溴-3-甲基-1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1,3-二氫-2H-苯并[d]咪唑-2-酮 (2.0 克, 5.6 毫莫耳)，呱嗪-1-羧酸叔丁酯 (1.3 克, 6.8 毫莫耳)，叔丁醇鈉 (808.0 毫克, 8.4 毫莫耳)，2-雙環已基膦-2 ',6'-二異丙氧基聯苯 (20.0 毫克, 0.04 毫莫耳) 和氯(2-二環己基膦基-2',6'-二-異丙氧基-1,1'-聯苯基)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (32.0 毫克, 0.04 毫莫耳) 溶於甲苯 (20 毫升) 中。該系統在90攝氏度攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液降至室溫，加水 (200 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (200 毫升) 萃取。合併有機相，用飽和食鹽水 (200 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到2.2 克 4-(3-甲基-2-氧代-1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物49-1)。
MS (ESI) M/Z: 463.3 [M+H] +。
1H-NMR (500 MHz, CDCl 3) δ 7.07 (t, J= 7.9 Hz, 1H), 7.01 (dd, J= 7.8, 0.8 Hz, 1H), 6.94 (dd, J= 8.0, 0.8 Hz, 1H), 5.33 (s, 2H), 4.15 (q, J= 7.1 Hz, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.69 – 3.60 (m, 2H), 3.07 (s, 4H), 2.87 (s, 2H), 1.53 (s, 9H), 0.98 – 0.93 (m, 2H), 0.02 (s, 9H).
步驟 B：在氮氣保護的條件下，將化合物49-1 (2.2 克, 4.8 毫莫耳) 溶於四丁基氟化銨的四氫呋喃溶液 (1莫耳, 48 毫升)。該反應系統在80攝氏度攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液降至室溫，加入飽和氯化銨溶液 (200 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (200 毫升) 萃取。合併有機相，用水 (100 毫升) 和飽和食鹽水 (100 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物藉由矽膠柱層析純化得到1.8 克化合物49-2。
MS (ESI) M/Z: 333.3 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.04 (s, 1H), 7.00 (t, J= 7.9 Hz, 1H), 6.87 (dd, J= 7.5, 4.3 Hz, 2H), 4.28 – 3.95 (m, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.04 (s, 4H), 2.84 (s, 2H), 1.50 (s, 9H).
步驟 C：在氮氣保護和0攝氏度條件下，將化合物49-2 (1.8 克, 5.4 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (50 毫升) 中，慢慢滴加叔丁醇鉀 (1莫耳, 8 毫升)，滴加完畢，該系統在0攝氏度攪拌1小時。在0攝氏度下，將1-(4-甲氧基苄基)-2,6-二氧呱啶-3-基三氟甲烷磺酸鹽 (2.4 克, 6.3 毫莫耳) 和四氫呋喃 (50 毫升) 的混合溶液緩慢滴加到上述溶液中，並在該溫度下攪拌2小時。 LCMS監測顯示原料消失後，反應液中加入乙酸乙酯 (100 毫升) 稀釋，有機相用水 (50 毫升 × 3) 和飽和食鹽水 (50 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物經過矽膠柱層析純化得到2.3 克化合物49-3。
MS (ESI) M/Z: 564.3 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 7.37 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 6.93 – 6.74 (m, 5H), 5.03 – 4.90 (m, 2H), 3.80 – 3.76 (m, 7H), 3.18 – 2.95 (m, 4H), 2.89 – 2.76 (m, 4H), 2.71 – 2.51 (m, 2H), 2.26 – 2.11 (m, 2H), 1.49 (s, 9H).
步驟 D：常溫下，將化合物49-3 (1.2 克, 2.1 毫莫耳) 溶於乙酸乙酯 (50 毫升) 中，加入鹽酸的1,4-二氧六環溶液 (4莫耳, 5 毫升)，該系統在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液中加入乙酸乙酯 (100 毫升) 稀釋，有機相用水 (100 毫升 × 3) 和飽和食鹽水 (100 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物經過矽膠柱層析純化得到950毫克化合物49-4。
MS (ESI) M/Z: 464.3 [M+H] +。
步驟 E ：在氮氣保護下，將化合物49-4 (200.0 毫克, 0.4 毫莫耳)，4-甲醯呱啶-1-羧酸叔丁酯 (91.0 毫克, 0.4 毫莫耳)，乙酸 (51.6 毫克, 0.9 毫莫耳) 和四異丙氧基鈦 (244.0 毫克, 0.9 毫莫耳) 溶於甲醇 (20 毫升) 中，該系統在50攝氏度攪拌0.5小時。將反應液降至室溫，加入2-甲基吡啶的硼烷絡合物 (70.0 毫克, 0.5 毫莫耳)，該反應液在室溫下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料有50% 的剩餘，反應液中加入二氯甲烷 (50 毫升) 稀釋，十水硫酸鈉 (5.0 克) 淬滅並攪拌0.5小時。過濾，濾液用水 (50 毫升 × 3) 和飽和食鹽水 (50 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物經過矽膠柱層析純化得到130.0 毫克化合物49-5。
MS (ESI) M/Z: 661.3 [M+H] +。
步驟 F ：在氮氣保護下，將化合物49-5 (130.0 毫克, 0.2 毫莫耳) 溶於三氟乙酸 (5 毫升) 中，加入三氟甲磺酸 (0.5 毫升)。該系統在60攝氏度攪拌16小時。LCMS監測顯示原料反應完全後，將反應液減壓濃縮。得到360毫克化合物49-6。
MS (ESI) M/Z: 441.3 [M+H] +。
步驟 G ：在氮氣保護下，將化合物49-6 (130.0 毫克, 0.2 毫莫耳) 溶於乙腈 (5 毫升) 中，加入三乙胺 (4.0 g, 4.0 毫莫耳) 和碳酸二叔丁酯 (65.4 毫克, 0.3 毫莫耳)。該系統在室溫下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料反應完全後，反應液中加入二氯甲烷 (50 毫升) 稀釋，有機相用水 (50 毫升 × 3) 和飽和食鹽水 (50 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物藉由矽膠柱層析純化得到77毫克化合物49-7。
MS (ESI) M/Z: 541.3 [M+H] +。
步驟 H ：在氮氣保護下，將化合物49-7 (130.0 毫克, 0.2 毫莫耳) 溶於二氯甲烷 (10 毫升) 中，加入三氟乙酸 (1 毫升)。該系統在室溫下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料反應完全後，將反應液減壓濃縮，得到60毫克化合物49-8。
MS (ESI) M/Z: 441.3 [M+H] +。
步驟 I ：在氮氣保護下，將化合物49-8 (60.0 毫克, 0.1 毫莫耳)，化合物49-9 (64.0 毫克, 0.1 毫莫耳)，乙酸 (17.0 毫克, 0.3 毫莫耳) 和鈦酸四異丙酯 (80.0 毫克, 0.3 毫莫耳) 溶於甲醇 (5 毫升) 中，該體系在50攝氏度攪拌0.5小時。將反應液降至室溫，加入2-甲基吡啶的硼烷絡合物 (23.0 毫克, 0.2 毫莫耳)，該反應液在室溫下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料反應完全後，反應液中加入二氯甲烷 (50 毫升) 稀釋，十水硫酸鈉淬滅並攪拌0.5小時。過濾，濾液用水 (50 毫升 × 3) 和飽和食鹽水 (50 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物經過矽膠柱層析純化得到25毫克1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(4-((4-(1-(2,6-二氧呱啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)呱嗪-1-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素(化合物49)。
MS (ESI) M/Z: 897.3 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.11 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 9.03 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.68 (d, J= 2 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.00 - 6.84 (m, 4H), 5.41 - 5.33 (m, 2H), 4.67- 4.63 (t, J= 5.2 Hz, 2H), 3.62 (s, 3H), 3.29 (s, 3H), 2.97 - 2.78 (m, 10H), 2.77 - 2.54 (m, 4H), 2.33 - 2.09 (m, 4H), 2.66 - 1.91 (m, 2H), 1.76 - 1.65 (m, 2H), 1.60 - 1.55 (m, 4H), 1.17 - 1.01 (m, 2H).
實施例50：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-((1-(2,6-二氧呱啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)氨基)-7-氮雜螺環[3.5]壬-7-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素
反應流程：
實施例流程：
步驟 A:在氮氣保護的條件下，將2-氨基-7-氮雜螺環[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯 (1.0 g, 4.2 毫莫耳)，4-溴-3-甲基-1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1,3-二氫-2H-苯并[d]咪唑-2-酮 (1.5 g, 4.2 毫莫耳)，叔丁醇鈉 (599.0 毫克, 6.2 毫莫耳)，2-雙環已基膦-2 ',6'-二異丙氧基聯苯 (194.0 毫克, 0.4 毫莫耳) 和氯(2-二環己基膦基-2',6'-二-異丙氧基-1,1'-聯苯基)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (323.0 毫克, 0.4 毫莫耳) 溶於甲苯 (10 毫升) 中。該系統在90攝氏度攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液降至室溫，加水 (100 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (100 毫升) 萃取。合併有機相，用飽和食鹽水 (100 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到1.7 g化合物50-1。
MS (ESI) M/Z: 517.3 [M+H] +。
步驟 B ：在氮氣保護的條件下，將化合物50-1 (1.2 g, 2.3 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (5毫升), 加入四丁基氟化銨的四氫呋喃溶液 (1莫耳, 23 毫升)。該反應系統在90攝氏度攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液降至室溫，加入飽和氯化銨溶液 (200 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (200 毫升) 萃取。合併有機相，用水 (100 毫升) 和飽和食鹽水 (100 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物藉由矽膠柱層析純化得到800毫克化合物50-2。
MS (ESI) M/Z: 387.3 [M+H] +。
步驟 C ：在氮氣保護和0攝氏度的條件下，將化合物50-2 (800 毫克, 2.1 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (10 毫升) 中，慢慢滴加叔丁醇鉀 (1莫耳, 2.1 毫升)，滴加完畢，該系統在0攝氏度攪拌1小時。在0攝氏度下，將1-(4-甲氧基苄基)-2,6-二氧呱啶-3-基三氟甲烷磺酸鹽 (1.6 克, 4.1 毫莫耳) 和四氫呋喃 (5 毫升) 的混合溶液緩慢滴加到上述溶液中，並在該溫度下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液中加入乙酸乙酯 (100 毫升) 稀釋，有機相用水 (50 毫升 × 3) 和飽和食鹽水 (50 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物經過矽膠柱層析得到1.16 克化合物50-3。
MS (ESI) M/Z: 618.3 [M+H] +。
步驟 D ：在氮氣保護下，將化合物50-3 (1.2 克, 1.8 毫莫耳) 溶於三氟乙酸 (10 毫升) 中，加入三氟甲磺酸 (1 毫升)。該系統在60攝氏度攪拌16小時。LCMS監測顯示原料反應完全後，將反應液減壓濃縮。得到746毫克化合物50-4。
MS (ESI) M/Z: 398.3 [M+H] +。
步驟 E ：在氮氣保護下，將化合物50-4 (746.0 毫克, 1.8 毫莫耳) 溶於乙腈 (5 毫升) 中，加入三乙胺 (379.6 毫克, 3.8 毫莫耳) 和碳酸二叔丁酯 (491.6 毫克, 2.3 毫莫耳)。該系統在室溫下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料反應完全後，反應液中加入二氯甲烷 (50 毫升) 稀釋，有機相用水 (50 毫升 × 3) 和飽和食鹽水 (50 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物藉由矽膠柱層析純化得到510毫克化合物50-5。
MS (ESI) M/Z: 498.3 [M+H] +。
步驟 F ：在氮氣保護下，將化合物50-5 (510.0 毫克, 1.0 毫莫耳) 溶於二氯甲烷 (4 毫升) 中，加入鹽酸-1，4-二氧六環 (1 毫升)。該系統在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料反應完全後，將反應液減壓濃縮，得到400毫克化合物50-6。
MS (ESI) M/Z: 398.3 [M+H] +。
步驟 G ：在氮氣保護下，將化合物50-6 (120.0 毫克, 0.3 毫莫耳)，(S) -1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-氧乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素 (化合物50-7, 142.7.0 毫克, 0.3 毫莫耳)，乙酸 (0.05 毫升) 和四異丙氧基鈦 (0.1 毫升) 溶於甲醇 (5 毫升 )中，該系統在50攝氏度攪拌0.5小時。將反應液降至室溫，加入2-甲基吡啶的硼烷絡合物 (69.0 毫克, 0.2 毫莫耳)，該反應液在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料反應完全後，反應液中加入二氯甲烷 (50 毫升) 稀釋，十水硫酸鈉淬滅並攪拌0.5小時。過濾，濾液用水 (50 毫升 × 3) 和飽和食鹽水 (50 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物經過矽膠柱層析純化得到43.7 毫克1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-((1-(2,6-二氧呱啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)氨基)-7-氮雜螺環[3.5]壬-7-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素(化合物50)。
MS (ESI) M/Z: 854.3 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.07 (s, 1H), 9.42 (s, 1H), 9.17 (s, 1H), 8.75 (d, J= 1.4 Hz,  1H), 8.69 (d, J= 0.8 Hz, 1H), 8.19 (d, J= 1.8 Hz, 2H), 6.94 (s, 1H), 6.82 - 6.85 (m, 1H), 6.52 (d, J= 3.0 Hz, 1H), 6.28 (d, J= 3.2 Hz, 1H), 5.18-5.39 (m, 3H), 4.63-4.65 (m, 2H), 3.79 - 3.80 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.24 (s, 4H), 2.86 - 2.88 (m, 3H), 2.59-2.64 (m, 4H), 2.26 - 2.27 (m, 2H), 1.96-1.98 (m, 1H), 1.59 - 1.69 (m, 10H).
實施例51：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-((4-(4)) -((2,6-二氧代呱啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)呱嗪-1-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲
反應流程：
實施例流程：
步驟 A:將1-溴-2-氟-4-硝基苯 (1.0 g, 4.5 毫莫耳) 和呱嗪-1-羧酸叔丁酯 (0.83 g, 4.5 毫莫耳) 溶於N,N-二甲基甲醯胺 (20 毫升) 中，加入三乙胺 (1.36 g, 13.5 毫莫耳)。該系統在100攝氏度下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液冷卻至室溫，用乙酸乙酯 (50 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，用飽和食鹽水 (50 毫升 × 2) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到720毫克化合物51-1。
MS (ESI) M/Z: 270.1 [M-56+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.10 – 7.97 (m, 2H), 7.18 (dd, J= 11.1, 7.3 Hz, 1H), 3.48 (d, J= 5.0 Hz, 4H), 3.34 – 3.18 (m, 4H), 1.46 – 1.39 (m, 9H).
步驟 B:將化合物51-1  (720.0 毫克, 2.21 毫莫耳) 和氯化銨 (120.0 毫克, 2.6 毫莫耳) 溶於乙醇 (10 毫升) 和水 (1 毫升) 中，攪拌下加入鐵粉 (1.0 g, 22.1 毫莫耳)。將該系統升至100攝氏度並在該溫度下攪拌18小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液降至室溫，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用乙酸乙酯 (50 毫升) 溶解，有機相用水 (40 毫升 × 3) 和飽和食鹽水 (30 毫升 × 2) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到560 毫克化合物51-2。
MS (ESI) M/Z: 296.2 [M+H] +。
步驟 C:在氮氣保護的條件下，將化合物51-2 (560.0 毫克, 1.89 毫莫耳), 3-溴呱啶-2,6-二酮 (903.0 毫克,4.73毫莫耳) 溶於N,N-二甲基甲醯胺 (10 毫升) 中，加入N,N-二異丙基乙胺 (731.0 毫克, 5.67 毫莫耳)。將該系統升至80攝氏度並在該溫度下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液降至室溫，用乙酸乙酯 (50 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，用飽和食鹽水 (50 毫升 × 2) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到600毫克化合物51-3。
MS (ESI) M/Z: 407.1 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 10.79 (s, 1H), 6.90 – 6.79 (m, 1H), 6.53 (dd, J= 14.9, 2.5 Hz, 1H), 6.43 (dd, J= 8.7, 2.4 Hz, 1H), 5.87 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 4.32 – 4.24 (m, 1H), 3.44 (s, 4H), 2.82 – 2.77 (m, 5H), 2.57 (dt, J= 8.6, 3.9 Hz, 1H), 2.14 – 2.05 (m, 1H), 1.91 – 1.79 (m, 1H), 1.42 (s, 9H).
步驟 D ：在氮氣保護的條件下，將化合物51-3 (100.0 毫克, 0.246 毫莫耳) 溶於二氯甲烷 (3 毫升) 中，加入鹽酸的1,4-二氧六環溶液 (1 毫升)。該反應液在室溫下攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液中加入二氯甲烷 (10 毫升) 稀釋，反應液減壓濃縮，得到80毫克化合物51-4。
步驟 E ：在氮氣保護下，將化合物51-4 (80.0 毫克, 0.26 毫莫耳) 和4-甲醯呱啶-1-羧酸叔丁酯 (55.0 毫克, 0.261 毫莫耳) 溶於混合溶劑（N,N-二甲基甲醯胺：四氫呋喃=1:1）(6 毫升) 中，加入三乙胺（79.0 毫克,0.78 毫莫耳），室溫攪拌0.5小時.然後加入乙酸 (0.1 毫升) 和四異丙氧基鈦 (0.1 毫升)，該系統在常溫下攪拌半小時。加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (165.0 毫克, 0.783 毫莫耳)，該反應液在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮。所得混合物經過反相純化得到110毫克化合物51-5。
MS (ESI) M/Z: 504.3 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 10.79 (s, 1H), 6.82 (t, J= 9.3 Hz, 1H), 6.50 (d, J= 15.0 Hz, 1H), 6.42 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 5.81 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 4.26 (t, J= 8.2 Hz, 1H), 3.92 (d, J= 9.7 Hz, 3H), 2.92 – 2.59 (m, 7H), 2.23 – 1.96 (m, 4H), 1.84 (dt, J= 11.7, 7.8 Hz, 2H), 1.68 (d, J= 10.8 Hz, 4H), 1.39 (s, 9H), 0.91 (t, J= 19.1 Hz, 3H).
步驟 F ：在氮氣保護的條件下，將化合物51-5 (110.0 毫克, 0.218 毫莫耳) 溶於二氯甲烷 (3 毫升) 中，加入鹽酸的1,4-二氧六環溶液 (1 毫升)。該反應液在室溫下攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液中加入二氯甲烷 (10 毫升) 稀釋，反應液減壓濃縮，得到60毫克化合物51-6。
MS (ESI) M/Z: 404.3 [M+H] +。
步驟 G:在氮氣保護下，將化合物51-6 (60.0 毫克, 0.148 毫莫耳) 和 化合物51-7 (70.0 毫克, 0.148 毫莫耳) 溶於混合溶劑（N,N-二甲基甲醯胺：四氫呋喃=1:1） (6 毫升)中，加入三乙胺（46.4 毫克, 0.42 毫莫耳）室溫攪拌30分鐘。然後加入乙酸 (0.3 毫升) 和四異丙氧基鈦 (0.2 毫升)，該系統在常溫下攪拌30分鐘。加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (134.0 毫克, 0.63 毫莫耳)，該反應液在室溫下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮。所得混合物先後經過反相純化和薄層層析製備得到15毫克1-(2-氯-7-(S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(4-(4-(2,6-二氧呱啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)呱嗪-1-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素(化合物51)。
MS (ESI) M/Z: 860.3 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 10.79 (s, 1H), 9.30 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 6.94 (s, 1H), 6.83 – 6.79 (m, 1H), 6.52-6.40 (d, J= 7.8 Hz, 2H), 5.80 – 5.36 (m, 2H), 4.64 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 4.26 (s, 1H), 3.42 (m, 10H), 2.92 (s, 2H), 2.83-2.77 (s, 4H), 2.14 – 2.01 (m, 4H), 1.99 – 1.65 (t, J= 8.8 Hz, 6H), 1.58 (s, 3H), 1.26 (d, J= 19.0 Hz, 3H).
實施例52：
1-(2-氯-7-(S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(1-(1-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-1,3-二氧異異丙醇-5-基)呱啶-4-基)甲基)呱啶-4-基)乙氧基)-5-（三氟甲基)吡啶-3-基)尿素
反應流程:
實施例流程：
步驟 A:在0攝氏度和氮氣保護條件下，將3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-醇 (2.2 g, 9.6 毫莫耳)，4-(2-羥乙基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (2.0 g, 9.6 毫莫耳)，三苯基膦 (5.0 g, 19.2 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (50 毫升)，慢慢滴加偶氮二甲酸二乙酯 (3.5 g, 20.2 毫莫耳)。滴加完畢，該反應系統在室溫下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液用飽和碳酸氫鈉水溶液 (100 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (100 毫升 × 2) 萃取。合併有機相，有機相用水 (100 毫升) 和飽和食鹽水 (100 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化 (洗脫劑: 石油醚/乙酸乙酯= 5/1) 得到3.2 g化合物52-1。
MS (ESI) M/Z: 442.1 [M+Na] +。
1H-NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.64 (d, J= 1.3 Hz, 1H), 8.48 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 4.62 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 4.12 (dd, J= 14.3, 7.1 Hz, 2H), 3.75 (t, J= 6.6 Hz, 1H), 2.72 (s, 2H), 1.89 - 1.66 (m, 6H), 1.46 (s, 9H), 1.24 - 1.12 (m, 2H).
步驟 B:將化合物52-1 (3.2 克, 7.64 毫莫耳) 和氯化銨 (0.83 g, 15.28 毫莫耳) 溶於乙醇 (100 毫升) 和水 (10 毫升) 中。加入鐵粉 (4.29 克, 76.4 毫莫耳)，該反應系統在85攝氏度攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液降至室溫，加水 (50 毫升) 稀釋，乙酸乙酯 (100 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，有機相用飽和食鹽水 (100 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到2.8克化合物52-2。
MS (ESI) M/Z: 412.2 [M+Na] +。
步驟 C:將化合物52-2 (1.62 克, 6.37 毫莫耳) 溶於1,4-二氧六環 (50 毫升) 中。加入疊氮磷酸二苯酯 (2.48 克, 5.0 毫莫耳) 和三乙胺 (3.1 毫升, 22.2 毫莫耳) 。該系統在室溫下攪拌半個小時。將4-(2-(3-氨基-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (2.8 克, 7.4 毫莫耳) 加入上述反應系統中。該反應液加熱至100攝氏度並攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液降至室溫，加入飽和碳酸氫鈉水溶液 (100 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (100 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，用水 (100 毫升 × 3) 和飽和食鹽水 (100 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到1.95 克化合物52-3。
MS (ESI) M/Z: 642.3 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 9.21 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.68 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 8.19 (d, J= 1.1 Hz, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.39 (q, J= 6.7 Hz, 1H), 4.58 (t, J= 6.9 Hz, 2H), 3.93 (s, 2H), 3.26 (s, 3H), 2.68 (s, 2H), 1.85 - 1.56 (m, 8H), 1.39 (s, 9H), 1.19 - 1.05 (m, 2H).
步驟 D ：將化合物52-3 (600.0 毫克, 0.9 毫莫耳) 溶於二氯甲烷 (10 毫升) 中，再將氯化氫的1,4-二氧六環溶液 (5 毫升, 4莫耳) 加入上述溶液中。得到的反應液於室溫攪拌反應4個小時。LCMS 監測顯示原料消失，將反應液濃縮得500毫克化合物52-4。
MS (ESI) M/Z: 542.2 [M+H] +。
步驟 E ：將呱啶-4-甲醇 (626.0 毫克, 5.4 毫莫耳) 溶於 N-甲基吡咯烷酮 (15 毫升)，加入 N,N-二異丙基乙胺 (1.8 毫升, 10.9 毫莫耳) 和化合物52-5 (1.0 克, 3.6 毫莫耳)。該反應系統在140攝氏度攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液降至室溫，加水 (50 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (50 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，用水 (50 毫升 × 3) 和飽和食鹽水 (50 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所的混合物用反相純化得到1.1 克化合物52-6。
MS (ESI) M/Z: 372.1 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 11.08 (s, 1H), 7.64 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.31 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.23 (dd, J= 8.7, 2.2 Hz, 1H), 5.06 (dd, J= 12.9, 5.4 Hz, 1H), 4.48 (s, 1H), 4.06 (d, J= 12.8 Hz, 2H), 3.27 (d, J= 6.0 Hz, 2H), 3.06 - 2.76 (m, 3H), 2.73 - 2.53 (m, 3H), 2.03 - 1.94 (m, 1H), 1.82 - 1.56 (m, 3H), 1.29 - 1.09 (m, 2H).
步驟 F ：將化合物起始原料化合物52-6 (350.0 毫克, 0.95 毫莫耳) 溶於二甲基亞碸 (6 毫升) 中，再將2-碘醯基苯甲酸 (530.0 毫克, 1.9 毫莫耳) 加入上述溶液中。得到的反應液於室溫攪拌反應16個小時。LCMS 監測顯示原料消失，加水 (30 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (30 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，用水 (30 毫升 × 3) 和飽和食鹽水 (30 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所的混合物用重結晶得到280 毫克化合物52-7。
MS (ESI) M/Z: 370.2 [M+H] +。
步驟 G ：將化合物起始原料化合物52-4 (176.0 毫克, 0.3 毫莫耳) 溶於四氫呋喃和N,N-二甲基甲醯胺 (4.0 毫升/4.0 毫升) 中，再加三乙胺 (0.13 毫升, 0.98 毫莫耳) 並於室溫攪拌30分鐘，再將醋酸 (0.1 毫升) 和化合物52-7 (120 毫克，0.3 毫莫耳) 加入上述溶液中並於室溫攪拌15分鐘，再將三乙醯氧基硼氫化鈉 (138.0 毫克, 0.7 毫莫耳) 加入上述溶液中。得到的反應液於室溫攪拌反應3個小時。LCMS 監測顯示原料消失，將反應液加入水和乙酸乙酯的混合溶液中並過濾，濾液分層得到有機層，有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾後將濾液濃縮，所得粗品經反相純化，再經過製備薄層層析得到100 毫克產物1-(2-氯-7-( S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(1-(1-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-1,3-二氧異異丙醇-5-基)呱啶-4-基)甲基)呱啶-4-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素(化合物52)。
MS (ESI) M/Z: 895.2 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 11.09 (s, 1H), 9.22 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.67 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.66 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.38 - 7.15 (m, 2H), 6.94 (s, 1H), 5.39 (q, J= 6.6 Hz, 1H), 5.07 (dd, J= 12.9, 5.4 Hz, 1H), 4.58 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 4.05 (d, J= 10.8 Hz, 2H), 3.26 (s, 3H), 3.03 - 2.76 (m, 5H), 2.64 - 2.53 (m, 4H), 2.03 (dd, J= 22.6, 17.4 Hz, 4H), 1.80 (s, 8H), 1.60 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.14 (s, 3H).
實施例53：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(4-((2R)-4-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-1,3-二氧異辛多林-5-基)-2-甲基呱嗪-1-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素
反應流程:
實施例流程：
步驟 A:將5-氟異苯并呋喃-1,3-二酮 (1.0 克, 6.0 毫莫耳) 溶於乙酸 (2 毫升) 中。加入3-氨基呱啶-2,6-二酮 (1.1 克, 6.6 毫莫耳) 和醋酸鉀 (1.8 克, 18.6 毫莫耳)。該系統在90攝氏度攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液降至室溫。零攝氏度下，加入水 (20 毫升) 淬滅，減壓濃縮以除去上清液，剩餘粗品用甲醇轉移至250毫升的單口瓶中，減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到700毫克化合物53-1。
MS (ESI) M/Z: 277.3 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 11.13 (s, 1H), 8.01 (dd, J= 8.3, 4.5 Hz, 1H), 7.85 (dd, J= 7.4, 2.2 Hz, 1H), 7.78 - 7.63 (m, 1H), 5.17 (dd, J= 12.8, 5.4 Hz, 1H), 2.98 - 2.81 (m, 1H), 2.69 - 2.53 (m, 2H), 2.14 - 2.01 (m, 1H).
步驟 B ：在氮氣保護下，將化合物53-2 (1.0 克, 4.3 毫莫耳) 和4-甲醯呱啶-1-羧酸叔丁酯 (916.0 毫克, 4.3 毫莫耳) 溶於甲醇 (5 毫升) 中，加入醋酸 (0.5 毫升)，該反應液在室溫攪拌0.5小時。將三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.4 克, 6.4 毫莫耳) 加入到上述反應系統中，該反應液在室溫下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液中加入二氯甲烷和十水硫酸鈉，繼續攪拌0.5小時。過濾，濾液用水 (100 毫升 × 3) 和飽和食鹽水 (100 毫升) 洗滌，無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到1.2 克化合物53-3。
MS (ESI) M/Z: 432.3 [M+H] +。
步驟 C ：將化合物53-3 (1.2 克, 2.8 毫莫耳) 溶於甲醇 (50 毫升) 中。氮氣置換該系統後，加入鈀/碳 (100 毫克)，氫氣置換反應系統，該反應液在氫氣球的環境下室溫攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液經矽藻土過濾後，濾液減壓濃縮，得到900毫克化合物53-4。該化合物直接用於下一步反應。
MS (ESI) M/Z: 298.1 [M+H] +。
步驟 D ：室溫下，將化合物53-4 (240.0 毫克, 0.8 毫莫耳) 和化合物53-1 (230.0 毫克, 0.8 毫莫耳) 溶於 N-甲基吡咯烷酮 (10 毫升) 中，加入 N,N-二異丙基乙胺 (322.0  毫克, 2.5 毫莫耳)，將該系統加熱至140攝氏度並攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液降至室溫，加水 (100 毫升) 淬滅，二氯甲烷 (50 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，有機相用水 (100 毫升) 和飽和食鹽水 (100 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物經過反相純化得到750毫克化合物53-5。
MS (ESI) M/Z: 576.3 [M+Na] +。
步驟 E ：將化合物53-5 (400.0 毫克, 1.4 毫莫耳) 溶於二氯甲烷 (5 毫升) 中，加入鹽酸的乙酸乙酯溶液 (4莫耳, 1 毫升)。該反應液在室溫並攪拌1小時。LCMS檢測顯示原料反應完全後，將反應液減壓濃縮，得到300.毫克化合物53-6。
MS (ESI) M/Z: 454.2 [M+H] +。
步驟 F ：室溫下，將化合物53-6 (100.0 毫克, 0.2 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (5 毫升) 和 N,N-二甲基甲醯胺 (5 毫升) 中，加入三乙胺 (0.5 毫升)，該系統在室溫下攪拌0.5小時。再依次將醋酸 (0.5 毫升) ，化合物53-7 (104.0 毫克, 0.2 毫莫耳) 和三乙醯氧基硼氫化鈉 (55.8 毫克, 0.3 毫莫耳) 加入到上述反應系統中，反應液在室溫攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液中加入二氯甲烷 (50 毫升) 稀釋，加入十水硫酸鈉並攪拌0.5小時。過濾，濾液用水 (50 毫升 ×3) 和飽和食鹽水 (50 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物藉由薄層層析 (展開劑: 二氯甲烷/甲醇 = 15/1) 純化兩次得到40毫克1-(2-氯-7-(( S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(4-((2 R)-4-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-1,3-二氧異辛多林-5-基)-2-甲基呱嗪-1-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素(化合物53)。
MS (ESI) M/Z: 910.7 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.08 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 9.03 (s, 1H), 8.75  (s, 1H), 8.68 (d, J= 2 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.66 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.25 - 7.20 (m, 1H), 6.93 (s, 1H), 5.40 - 5.31 (m, 1H), 5.09 - 5.04 (m, 1H), 4.69 - 4.60 (m, 2H), 3.78 - 3.68 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.03 - 2.78 (m, 7H), 2.72 - 2.56 (m, 3H), 2.22 - 1.91 (m, 7H), 1.78 - 1.72 (m, 1H), 1.67 - 1.57 (m, 4H), 1.54 - 1.43 (m, 2H), 1.13 - 1.01 (m, 4H).
實施例54：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(1-(1-(2,6-二氧呱啶-3-基)3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)呱啶-4-基]乙基)氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基尿素
反應流程：
實施例流程：
步驟 A ：將4-溴-3-甲基-1-(2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1,3-二氫-2H-苯并[d]咪唑-2-酮 （1.5 克, 4.2 毫莫耳）和叔丁基(2-(呱啶-4-基)乙基)氨基甲酸酯(1.2 克, 5.2 毫莫耳），叔丁醇鈉（1.0 克, 10.5 毫莫耳），2-雙環已基膦-2 ',6'-二異丙氧基聯苯（98 毫克, 0.2 毫莫耳）溶於1,4-二氧六環（20 毫升）中，置換氮氣三次，再將三(二亞苄基丙酮)二鈀（192 毫克, 0.2 毫莫耳）加入上述溶液中。得到的反應液於90攝氏度攪拌2個小時。LCMS 監測顯示原料消失，將反應液冷卻後過濾，濾液旋乾得粗品。粗品經正相純化得到0.6 克化合物54-1。
MS (ESI) M/Z: 505.3 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 7.05 (t, J= 7.9 Hz, 1H), 6.95 (dd, J= 11.7, 7.6 Hz, 2H), 5.32 (s, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.68 – 3.60 (m, 2H), 3.21 (dd, J= 20.4, 8.8 Hz, 4H), 2.75 (s, 2H), 1.85 (d, J= 8.9 Hz, 2H), 1.49 (s, 15H), 1.00 – 0.89 (m, 2H), 0.00 (s, 9H).
步驟 B ：將化合物54-1（0.6 克, 1.2 毫莫耳）溶於四丁基氟化銨（11.9 毫升, 1莫耳四氫呋喃溶液）中，得到的混合物在80攝氏度攪拌16個小時。LCMS 監測原料消失，將反應液冷卻後倒入乙酸乙酯和飽和氯化銨的混合溶液中，有機層用飽和氯化銨洗滌，水洗，鹽水洗，乾燥，過濾，濾液旋乾得到0.4 克化合物54-2。
MS (ESI) M/Z: 375.2 [M+H] +。
步驟 C ：將化合物54-2（470 毫克, 1.3 毫莫耳）溶於四氫呋喃（15 毫升）中，將反應系統置於冰浴中，將叔丁醇鉀（1.9 毫升, 1.9 毫莫耳）滴加到上述溶液中，所得混合物在零度攪拌一個小時，再將1-(4-甲氧基苄基)-2,6-二氧呱啶-3-基-三氟甲磺酸酯（506 毫克, 2.5 毫莫耳）溶於四氫呋喃（10 毫升）中，滴加到上述溶液中，反應系統緩慢升至室溫並攪拌兩個小時。LCMS 檢測大部分都是產物，還有少量原料，將反應液倒入水和乙酸乙酯的混合溶劑中，分液，將有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋乾得粗品，粗品經正相純化得到600 毫克化合物54-3。
MS (ESI) M/Z: 606.3 [M+H] +。
步驟 D:將化合物54-3（0.6 克, 1.0 毫莫耳）溶於三氟乙酸（7 毫升）中，再將三氟甲磺酸（0.7 毫升, 7.9 毫莫耳）加入上述溶液，加熱到60攝氏度過夜。LCMS 顯示原料消失，將反應液將至室溫，旋乾得到380 毫克化合物54-4。
MS (ESI) M/Z: 386.2 [M+H] +。
步驟 E:將化合物54-4（380 毫克,粗品）溶於乙腈（10 毫升）中，零度條件下滴加三乙胺至反應液的PH值在8-9，再將碳酸二叔丁酯（324 毫克, 1.5 毫莫耳）加入上述溶液中，得到的混合物在室溫條件下攪拌2個小時。LCMS 監測顯示反應完全，將反應液旋乾，再加水和乙酸乙酯，乙酸乙酯層再用鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾後正相純化得到170 毫克化合物54-5。
MS (ESI) M/Z: 486.3 [M+H] +。
步驟 F:將化合物54-5（140 毫克, 0.3 毫莫耳）溶於二氯甲烷（5 毫升）中，再將鹽酸的乙酸乙酯溶液（2 毫升）加入上述溶液中，得到的混合物在室溫條件下攪拌2個小時。LCMS 顯示原料消失，直接旋乾得到110 毫克化合物54-6。
MS (ESI) M/Z: 386.2 [M+H] +。
步驟 G ：將化合物54-6 (110 毫克,0.3 毫莫耳) ，化合物54-7 (119 毫克,0.3 毫莫耳)，醋酸 (0.2 毫升)，和鈦酸四異丙酯 (0.3 毫升)溶於甲醇（5 毫升）中，加熱至50攝氏度攪拌半個小時，降至室溫, 將2-甲基吡啶硼烷 (60 毫克, 0.6 毫莫耳)加入上述溶液中。得到的反應液於室溫攪拌反應3個小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液加入水和乙酸乙酯的混合溶劑中，過濾，濾液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液濃縮得粗品，粗品經過正相製備三次得到20 毫克1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(1-(1-(2,6-二氧呱啶-3-基)3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)呱啶-4-基]乙基)氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基尿素(化合物54)。
MS (ESI) M/Z: 842.3 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.92 (br, 1H), 9.28 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.75 (d, J= 2.9 Hz, 1H), 8.68 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 6.99 – 6.63 (m, 4H), 5.45 – 5.31 (m, 2H), 4.58 (t, J= 5.6 Hz, 2H), 3.60 (s, 2H), 3.53 (s, 1H), 3.26 (s, 3H), 3.05 - 2.98 (m, 5H), 2.75 – 2.56 (m, 6H), 2.04 – 1.94 (m, 1H), 1.74 (d, J= 11.1 Hz, 2H), 1.58 (d, J= 6.6 Hz, 3H), 1.52 - 1.27 (m, 6H).
實施例55：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-(4-((1-(2,6-二羰基呱啶-3-基)-3-甲基-2-羰基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)呱嗪-1-基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲甲酸鹽
反應流程:
實施例流程：
化合物55-1的製備參考實施例42。
步驟 A ：在常溫下，將化合物55-1 (60 毫克，0.09 毫莫耳)，吡啶 (32 毫克，0.4 毫莫耳)  溶於甲醇 (5 毫升)。將反應液加熱至60攝氏度攪拌10分鐘。反應液冷卻至室溫,將(S)-1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-羰基乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲 (32 毫克，0.07 毫莫耳) 和2-甲基吡啶硼烷 (58 毫克，0.5 毫莫耳) 加入到反應液中，經氮氣置換後在常溫下攪拌16小時。LCMS監測原料基本反應完全。將反應液濃縮，所得殘留物藉由製備型高效液相色譜純化得到12.9 毫克1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-(4-((1-(2,6-二羰基呱啶-3-基)-3-甲基-2-羰基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)呱嗪-1-基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲甲酸鹽(化合物55)。
MS (ESI) M/Z: 897.3 [M+H] +。
1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.10 (s, 1H), 9.31 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.68 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 8.19 - 8.17 (m, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.07 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 6.98 - 6.91 (m, 2H), 6.87 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 5.41 - 5.33 (m, 2H), 4.63 (t, J= 5.9 Hz, 2H), 3.65 (d, J= 8.6 Hz, 5H), 3.25 (s, 3H), 3.08 - 2.99 (m, 2H), 2.94 - 2.80 (m, 3H), 2.76 - 2.58 (m, 3H), 2.49 - 2.08 (m, 10H), 2.05 - 1.97 (m, 1H), 1.77 - 1.69 (m, 2H), 1.58 (d, J= 6.7 Hz, 3H), 1.46 - 1.33 (m, 2H).
實施例56：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-((6-(1-(2,6-二羰基呱啶-3-基)-3-甲基-2-羰基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲
反應流程:
實施例流程：
化合物55-1的製備參考實施例42。
步驟 A ：在常溫下，將化合物55-1 (55 毫克，0.05 毫莫耳) 溶於三氟乙酸 (1 毫升) 和三氟甲磺酸 (0.1 毫升) 的混合溶液中。該反應液升溫至70攝氏度，在氮氣保護下攪拌12小時。TLC和LCMS監測原料基本反應完全，將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，所得混合物經製備型高效液相色譜純化得到5.5 毫克1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-((6-(1-(2,6-二羰基呱啶-3-基)-3-甲基-2-羰基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲(化合物56)。
MS (ESI) M/Z: 909.6 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.08 (s, 1H), 9.33 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.68 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 8.19 (d, J= 1.1 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 6.98 - 6.90 (m, 2H), 6.73 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 6.62 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 5.39 (q, J= 6.7 Hz, 1H), 5.32 (dd, J= 12.7, 5.4 Hz, 1H), 4.64 (t, J= 5.9 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.55 (s, 4H), 3.26 (s, 4H), 3.17 (s, 2H), 2.97 (d, J= 11.0 Hz, 4H), 2.83 (t, J= 5.3 Hz, 3H), 2.83 (t, J= 5.3 Hz, 3H), 2.69 - 2.62 (m, 2H), 2.42 (d, J= 5.3 Hz, 2H), 2.09 (t, J= 10.4 Hz, 2H), 2.01 - 1.95 (m, 1H), 1.59 (d, J= 6.7 Hz, 4H), 1.30 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 1.15 - 1.05 (m, 2H), 1.15 - 1.04 (m, 2H).
實施例57：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-((1-(2)) -(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)呱啶-4-基)甲基)呱嗪-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素
反應流程:
實施例流程：
步驟A：在室溫下，將化合物57-1（86 毫克, 0.16 毫莫耳）溶於四氫呋喃（2 毫升）和N,N-二甲基甲醯胺（2 毫升）中。隨後，向其中加入N,N-二異丙基乙胺（41毫克, 0.3 毫莫耳），室溫下攪拌10 分鐘，然後加入乙酸（0.5 毫升）和 (S)-1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-氧代乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基）脲（76 毫克, 0.2 毫莫耳），反應液在室溫下攪拌1小時，再加入 三乙醯氧基硼氫化鈉（51 毫克, 0.24 毫莫耳）。反應液在室溫下繼續攪拌過夜。LCMS監測顯示原料消失後，反應液濃縮。加入飽和碳酸氫鈉溶液 （10 毫升）。混合液用乙酸乙酯（20 毫升 × 3）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10 毫升）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。粗品先用矽膠柱層析分離，然後反相製備得44毫克1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-((1-(2)) -(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)呱啶-4-基)甲基)呱嗪-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素(化合物57)。
MS (ESI) M/Z: 897.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.08 (s, 1H), 9.26 (d, J= 4.4 Hz, 1H), 8.99 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.77 - 8.76 (m, 1H), 8.67 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.19 (s, 2H), 7.64 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.29 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.21 (dd, J= 8.8, 1.6 Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 5.38 (q, J= 6.4 Hz, 1H), 5.05 (dd, J= 12.8, 6.0 Hz, 1H), 4.64 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 4.04 - 4.01 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 2.96 - 2.80 (m, 3H), 2.79 (t, J= 6.0 Hz, 3H), 2.60 - 2.57 (m, 5H), 2.40 - 2.23 (m, 4H), 2.10 (d, J= 6.8 Hz, 2H), 2.02 - 1.86 (m, 1H), 1.77 - 1.74 (m, 3H), 1.58 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 1.15 - 1.07 (m, 2H).
實施例58：
1-(2-氯-7-(S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-(4-(2-(2,6-二氧代異戊啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)呱啶-1-基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲
反應流程：
實施例流程：
步驟 A ：在氮氣保護下，將化合物58-1 (100.0 毫克, 0.2 毫莫耳)，1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-氧代乙氧基)-5-三氟甲基吡啶-3-基脲 (107.7 毫克, 0.2 毫莫耳)，乙酸 (27.9 毫克, 0.5 毫莫耳) 和鈦酸四異丙酯 (64.8 毫克, 0.2 毫莫耳) 溶於甲醇 (5 毫升) 中，該系統在室溫下攪拌0.5小時。將反應液降至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (96.8 毫克, 0.5 毫莫耳)，該反應液在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料反應完全後，反應液中加入二氯甲烷 (50 毫升) 稀釋，十水硫酸鈉淬滅並攪拌0.5小時。過濾，濾液用水 (50 毫升 × 3) 和飽和食鹽水 (50 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物經過矽膠柱層析純化得到18.4 毫克1-(2-氯-7-(S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-(4-(2-(2,6-二氧代異戊啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)呱啶-1-基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲(化合物58)。
MS (ESI) M/Z: 894.3 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.12 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.69 (d, J= 1.0 Hz, 1H), 8.19 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 7.76-7.86 (m, 3H), 6.93 (s, 1H), 5.37-5.40 (m, 1H), 5.11-5.16 (m, 1H), 4.64-4.67 (m, 2H), 3.26 (s, 3H), 2.75-2.94 (m, 9H), 1.91-2.19 (m, 8H), 1.68-1.77 (m, 6H), 1.58-1.61 (m, 4H).
實施例59：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(4-(2-(1-(2,6-二氧呱啶-3-基)-3-甲基-2-氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)乙基)呱嗪-1-基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素
反應流程：
實施例流程：
步驟 A ：室溫下，將化合物59-1 (130.0 毫克, 0.3 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (5 毫升) 和N,N-二甲基甲醯胺 (5 毫升) 中，加入三乙胺 (0.5 毫升)，該系統在室溫下攪拌0.5小時。再依次將醋酸 (0. 5 毫升) ，化合物1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-氧代乙氧基)-5-三氟甲基吡啶-3-基脲(144.4 毫克, 0.3 毫莫耳) 和三乙醯氧基硼氫化鈉 (97.3 毫克, 0.45 毫莫耳) 加入到上述反應系統中，反應液在室溫攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液中加入二氯甲烷 (50 毫升) 稀釋，加入十水硫酸鈉並攪拌0.5小時。過濾，濾液用水 (50 毫升 ×3) 和飽和食鹽水 (50 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物藉由薄層層析 (展開劑: 二氯甲烷/甲醇 = 15/1) 純化兩次得到42.4 毫克1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(4-(2-(1-(2,6-二氧呱啶-3-基)-3-甲基-2-氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)乙基)呱嗪-1-基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素(化合物59)。
MS (ESI) M/Z: 882.3 [M+H] +。
1HNMR(400MHz, DMSO- d 6 ) δ 10.94 (s, 1H), 9.33 (s, 1H), 9.07 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.68 (d, J= 2.2Hz, 1H), 8.27–8.10 (m, 2H), 7.52 (d, J= 8.7Hz, 1H), 7.09–7.01 (m, 2H), 6.93 (s, 1H), 5.45–5.31 (m, 1H), 5.05 (dd, J= 13.3, 5.1Hz, 1H), 4.65 (t, J= 6.0Hz, 2H), 4.26 (dd, J= 49.9, 17.0Hz, 2H), 3.26 (s, 5H), 3.03–2.94 (m, 2H), 2.94–2.88 (m, 1H), 2.88–2.79 (m, 2H), 2.64–2.54 (m, 1H), 2.49–2.43 (m, 4H), 2.40–2.30 (m, 1H), 2.19–2.06 (m, 4H), 2.03–1.91 (m, 1H), 1.69 (d, J= 12.2Hz, 2H), 1.59 (d, J= 6.7Hz, 3H), 1.57–1.47 (m, 1H), 1.17–1.02 (m, 2H).
實施例60：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基) 吡唑并[1,5-a] 嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-((1-(2-(2,6-二氧代異戊啶-3-基)- 1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)呱啶-4-基)(甲基)氨基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲
反應流程：
實施例流程：
步驟 A ：步驟 A ：室溫下，將化合物60-1 (130.0 毫克, 0.3 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (5 毫升) 和N,N-二甲基甲醯胺 (5 毫升) 中，加入三乙胺 (0.5 毫升)，該系統在室溫下攪拌0.5小時。再依次將醋酸 (0. 5 毫升) ，1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-氧代乙氧基)-5-三氟甲基吡啶-3-基脲(135.5 毫克, 0.3 毫莫耳) 和三乙醯氧基硼氫化鈉 (97.3 毫克, 0.45 毫莫耳) 加入到上述反應系統中，反應液在室溫攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液中加入二氯甲烷 (50 毫升) 稀釋，加入十水硫酸鈉並攪拌0.5小時。過濾，濾液用水 (50 毫升 ×3) 和飽和食鹽水 (50 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物藉由薄層層析 (展開劑: 二氯甲烷/甲醇 = 15/1) 純化兩次得到32.8 毫克1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基) 吡唑并[1,5-a] 嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-((1-(2-(2,6-二氧代異戊啶-3-基)- 1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)呱啶-4-基)(甲基)氨基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲(化合物60)。
MS (ESI) M/Z: 910.3 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.07 (br, 1H), 9.25 (br, 1H), 8.95 (br, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.68  (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.19 - 8.18 (m, 1H), 7.66 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.24 - 7.21 (m, 1H), 6.92 (s, 1H), 5.41 - 5.37 (m, 1H), 5.08 - 5.04 (m, 1H), 4.65- 4.62 (m, 2H), 4.07- 4.02 (m, 2H), 3.26 (s, 3H), 2.99 - 2.91 (m, 4H), 2.78 - 2.75 (m, 2H), 2.68 - 2.66 (m, 1H), 2.60 - 2.56 (m, 1H), 2.34 - 2.32 (m, 1H), 2.12 (s, 3H), 2.07 - 1.98 (m, 3H), 1.74 - 1.71 (m, 2H), 1.64 - 1.59 (m, 2H), 1.58 - 1.58 (d, J=6.4 Hz, 3H), 1.50 - 1.40 (m, 4H).
實施例61：
1-(2-氯-7-((S) -1-甲氧乙基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基) -3-氧代異吲哚-5-基)呱嗪-1-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲
反應流程：
實施例流程：
步驟 A:在室溫下，將化合物61-1（90 毫克, 0.2 毫莫耳）溶於二氯甲烷（5 mL）和N,N-二甲基甲醯胺（2 毫升）中，加入N,N-二異丙基乙胺（66 毫克, 0.5 毫莫耳），室溫下攪拌10 分鐘。 然後加入乙酸（0.5 毫升）和 (S)-1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-氧代乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素（95 毫克, 0.2 毫莫耳），室溫下攪拌10 分鐘，再加入三乙醯氧基硼氫化鈉（72 毫克, 0.3 毫莫耳）。反應液在室溫下繼續攪拌過夜。LCMS監測顯示原料消失後，加入飽和碳酸氫鈉溶液（10 毫升），混合液用乙酸乙酯（10 毫升 × 3）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10 毫升）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。 粗品用薄層矽膠板分離，得33.4 毫克1-(2-氯 -7-((S)-1-甲氧乙基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-3-氧代異吲哚-5-基)呱嗪-1-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲(化合物61)。
MS (ESI) M/Z: 882.3 [M+H]+。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 10.98 (br, 1H), 9.26 (br, 1H), 8.96 (br, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.67 (s, J= 2.0 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.42 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.24 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.14 (d, J= 1.6Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 5.38 (q, J= 6.8 Hz, 1H), 5.09 (dd, J= 13.2, 5.2 Hz, 1H), 4.64 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 4.32 (d, J= 16.4 Hz, 1H), 4.20 (d, J= 16.8 Hz, 1H), 3.33 - 3.31 (m, 4H), 3.25 (s, 3H), 3.18 - 3.15 (m, 4H), 2.94 - 2.90 (m, 3H), 2.78 - 2.76 (m, 2H), 2.61 - 2.51 (m, 2H), 2.43 - 2.32 (m, 1H), 2.14 (d, J= 6.8 Hz, 2H), 2.03 - 1.9 (m, 3H), 1.68 - 1.66 (m, 2H), 1.57 (d, J= 6.8 Hz, 3H) 1.52-1.50 (m, 1H), 1.25 -1.04 (m, 2H).
實施例62：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(1-(2,6-二氧代呱啶-3-基-3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基-2,7-二氮雜[3.5]壬-7-基)乙基)氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基脲
反應流程：
實施例流程：
步驟 A ：在0攝氏度下，將化合物62-1（80.0 毫克, 0.2 毫莫耳）溶於四氫呋喃（3.0 毫升）和 N,N-二甲基甲醯胺（3.0 毫升）中，加入 N,N-二異丙基乙胺（97.0 毫克, 0.8 毫莫耳），冰浴下攪拌10分鐘。然後加入乙酸（0.2 毫升）和(S) -1-(2-氯 -7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶 -6-基) -3-(2-(2-氧代乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素（71.0 毫克，0.15 毫莫耳），室溫下攪拌10分鐘，再加入三乙醯氧基硼氫化鈉（64.0 毫克, 0.3 毫莫耳）。反應液在室溫下繼續攪拌過夜。
LCMS監測顯示原料消失後，加入飽和碳酸氫鈉溶液（10 毫升），混合液用乙酸乙酯（20 毫升 × 3）萃取，合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（10 毫升）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。 粗品用矽膠柱層析分離得20.5 毫克1-(2-氯-7-((S) -1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(2-(1-(2,6-二氧呱啶-3-基)-3-甲基 -2-氧代-2,3-二氫-1h-苯并[ d ]咪唑-4-基)-2,7-重氮阿司匹林[3.5]壬-7-基)乙基)乙氧基) -5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素(化合物62)。
MS (ESI) M/Z: 883.3 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.10 (br, 1H), 9.29 (br, 1H), 9.05 (br, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.68 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 6.94 - 6.91 (m, 2H), 6.71 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 6.58 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 5.39 (q, 1H), 5.32 (dd, J= 12.8, 5.6 Hz, H), 4.58 (t, J= 5.6 Hz, 2H), 3.52 (s, 3H), 3.50 - 3.46 (m, 4H), 3.26 (s, 3H), 3.03 - 3.01 (m, 2H), 2.91 - 2.84 (m, 1H), 2.73 - 2.59 (m, 5H), 2.41 - 2.26 (m, 6H), 1.98 - 1.97 (m, 2H), 1.71 - 1.67 (m, 4H), 1.60 (d, J= 6.0 Hz, 3H).
實施例63：
1-(2-氯-7-(S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)呱啶-4-基)乙基)-2-氮雜螺[3,3]庚烷-6-基)氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素
反應流程：
實施例流程：
步驟 A ：將化合物63-1（100.0 毫克, 0.3 毫莫耳）和化合物63-2（130.9 毫克, 0.3 毫莫耳），醋酸（29.9 毫克, 0.5 毫莫耳），四異丙氧基鈦（70.8 毫克, 0.3 毫莫耳）溶於甲醇（2 毫升）和二氯甲烷 （2 毫升）中，該系統在室溫下攪拌1小時。再加入三乙醯氧基硼氫化鈉（105.7 毫克, 0.5 毫莫耳），該反應液在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料反應完全後，反應液中加入二氯甲烷（50 毫升）稀釋，和水（30 毫升）。過濾，濾液用水（50 毫升 × 3）和飽和食鹽水（50 毫升 × 3）洗滌，無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物反相柱層析純化得37.3 毫克1-(2-氯-7-(S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-)-3-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)呱啶-4-基)乙基)-2-氮雜螺[3,3]庚烷-6-基)氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素(化合物63)。
MS (ESI) M/Z: 911.2 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.12 (brs, 1H), 9.20 (brs, 1H), 9.04 (brs, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.66 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.72 (d, J= 11.4 Hz, 1H), 7.45 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.39 (q, J= 6.7 Hz, 1H), 5.24 (t, J= 7.1 Hz, 1H), 5.10 (dd, J= 5.4 Hz, 1H), 3.60 (d, J= 11.9 Hz, 3H), 3.26 (s, 3H), 2.85 (dd, J= 14.8 Hz, 7H), 2.67 (s, 1H), 2.08 – 1.98 (m, 1H), 1.76 (d, J= 12.5 Hz, 2H), 1.60 (d, J= 6.7 Hz, 3H), 1.52 (s, 2H), 1.41 – 1.21 (m, 8H).
實施例64：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-6-基) -3-(2-(4-(9-(1-(2,6-二氧呱啶-3-基) -3-甲基-2-氧代-2,3-二氫 -1h-苯并[ d ]咪唑-4-基) -3,9-重氮阿司匹林[5.5]十一烷 -3-基)呱啶 -1-基)乙氧基) -5-(三氟甲基)吡啶 -3-基)脲
反應流程：
實施例流程：
步驟 A ：在室溫下，將化合物64-1（120.0 毫克, 0.2 毫莫耳）溶於四氫呋喃（10.0 mL）和 N,N-二甲基甲醯胺（2.0 毫升）的混合溶劑中。隨後，向其中加入 N,N-二異丙基乙胺（49 毫克, 0.4 毫莫耳），室溫下攪10分鐘，然後加入乙酸（0.5 毫升）和 (S) -1-(2-氯 -7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-氧代乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素（90.0 毫克, 0.19 毫莫耳）。反應液在室溫下攪拌0.5小時，然後加入三乙醯氧基硼氫化鈉（81.0 毫克, 0.38 毫莫耳），反應液在室溫下繼續攪拌過夜。LCMS監測顯示原料消失後， 反應液濃縮， 加入飽和碳酸氫鈉溶液（10 毫升）。混合液用乙酸乙酯（20毫升×3）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10 毫升）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。殘餘物用薄層矽膠板層析純化得49.1毫克1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(4-(9-(1-(2,6-二氧呱啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1h-苯并[d]咪唑-4-基)-3,9-重氮阿司匹林[5.5]十一烷-3-基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲(化合物64)。
MS (ESI) M/Z: 965.2 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.09 (s, 1H), 9.29 (br, 1H), 9.00 (br, 1H), 8.77 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.67 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.19 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 6.96 - 6.93 (m, 3H), 6.86 - 6.85 (m, 1H), 5.39 - 5.35 (m, 2H), 4.64 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 3.62 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 2.91 - 2.80 (m, 9H), 2.78 - 2.58 (m, 2H), 2.33 - 2.29 (m, 4H), 2.08 - 1.97 (m, 5H), 1.65 - 1.35 (m, 14H), 1.06 - 1.02 (m, 2H).
實施例65：
1-(5-氯-2-(2-(4-(9-(1-(2,6-二氧呱啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-3,9-二氮螺環[5.5]十一碳-3-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)吡啶-3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲
反應流程：
實施例流程：
步驟 A ：將原料化合物65-1（1 克, 2.8 毫莫耳），3,9-二氮螺環[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯（712 毫克, 2.8 毫莫耳），叔丁醇鈉（807 毫克, 8.4 毫莫耳），2-雙環已基膦-2 ',6'-二異丙氧基聯苯（65.0 毫克, 0.14 毫莫耳），氯(2-二環己基膦基-2',6'-二-異丙氧基-1,1'-聯苯基)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II)（109 毫克, 0.14 mol），加入到三口燒瓶中，加入二氧六環（10 毫升），置換氮氣3次。將反應液加熱到 90攝氏度，在90攝氏度 氮氣保護下攪拌過夜。LCMS監測顯示原料消失後，向反應系統中加水（50 毫升）淬滅。混合液用乙酸乙酯（50 毫升 × 3）萃取，合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（10 毫升 × 3） 洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到710 毫克化合物65-2。
MS (ESI) M/Z: 531.2 [M+H] +。
步驟 B ：在室溫下，將化合物65-2（710 毫克, 1.3 毫莫耳）溶於1莫耳四丁基氟化銨/四氫呋喃（13.4 毫升）中。反應液加熱回流過夜。LCMS監測顯示原料消失後，向反應系統中加水 (50 毫升) 淬滅。混合液用乙酸乙酯（50 毫升 × 3）萃取，合併有機相，有機相用水（20 毫升 × 2）和飽和食鹽水（20 毫升）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到480 毫克化合物65-3。
MS (ESI) M/Z: 401.2 [M+H] +。
步驟 C ：將化合物65-3（480 毫克, 1.2 毫莫耳）溶於無水四氫呋喃（20 毫升）中。氮氣保護下，冷卻到 0 攝氏度，加入叔丁醇鉀（269 毫克, 2.4 毫莫耳），加入完畢後攪拌5分鐘。再滴加入1-(4-甲氧基苄基)-2, 6-二氧呱啶-3-三氟甲基磺酸酯 （549 毫克, 1.4 毫莫耳）的四氫呋喃溶液（4 毫升），加完後在此溫度下攪拌0.5 小時。LCMS監測顯示原料消失後，加入飽和氯化銨水溶液（10 毫升）淬滅反應。混合液用乙酸乙酯（20 毫升 × 3）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10 毫升）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後反應液濃縮。粗品用矽膠柱層析分離得到370 毫克化合物65-4。
MS (ESI) M/Z: 632.2 [M+H] +。
步驟 D ：在室溫和氮氣保護下，將化合物65-4（370 毫克, 0.6 毫莫耳）溶於三氟乙酸（10 毫升）中。隨後，向其中加入三氟甲磺酸（1 毫升）。反應液在60 攝氏度下攪拌過夜。LCMS監測顯示原料消失後，反應液濃縮，得到600 毫克三氟甲磺酸化合物65-5。
MS (ESI) M/Z: 412.1 [M+H] +。
步驟 E ：在室溫下，將化合物65-5（600 毫克, 0.6 毫莫耳 含有三氟甲磺酸）溶於乙腈 (10 毫升) 中。隨後，向其中加入N,N-二異丙基乙胺（381 毫克, 3.0 毫莫耳）和二碳酸二叔丁酯（194 毫克, 0.9 毫莫耳）。反應液在室溫下攪拌過夜。LCMS監測顯示原料消失後，反應液濃縮。加入水（20 毫升）。混合液用乙酸乙酯（20 毫升 × 3）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10 毫升）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。粗品用矽膠柱層析分離得到280 毫克化合物65-6。
MS (ESI) M/Z: 512.2 [M+H] +。
步驟 F ：在室溫下，將化合物65-6（280 毫克, 0.6 毫莫耳）溶於二氯甲烷（2 毫升）中。隨後，向其中加入三氟乙酸（2 毫升）。反應液在室溫下攪拌過夜。LCMS監測顯示原料消失後，反應液濃縮，得到290 毫克化合物65-7。
MS (ESI) M/Z: 412.1 [M+H] +。
步驟 G ：在室溫下，將化合物65-7（290 毫克, 0.6 毫莫耳）溶於二氯甲烷（20 毫升）中。隨後，向其中加入N,N-二異丙基乙胺（107 毫克, 0.8 毫莫耳），室溫下攪拌10 分鐘，然後加入乙酸（1 毫升）和4-甲醯呱啶-1-羧酸叔丁酯（176 毫克, 0.8 毫莫耳），反應液在室溫下攪拌0.5 小時。 再加入三乙醯氧基硼氫化鈉（233 毫克, 1.1 毫莫耳），反應液在室溫下繼續攪拌過夜。LCMS監測顯示原料消失後，反應液濃縮。加入飽和碳酸氫鈉溶液 （20 毫升）。混合液用乙酸乙酯（20 毫升 × 3）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10 毫升）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。粗品用矽膠柱層析分離得到290 毫克化合物65-8。
MS (ESI) M/Z: 609.3 [M+H] +。
步驟 H ：在室溫下，將化合物65-8（290 毫克 0.6 毫莫耳）溶於3 莫耳/升鹽酸乙酸乙酯溶液（10 毫升）中。室溫下攪拌2 小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液濃縮，得到270 毫克化合物65-9。
MS (ESI) M/Z: 509.2 [M+H] +。
步驟 I ：在室溫下，將化合物65-9（50.0 毫克, 0.08 毫莫耳）溶於二氯甲烷（10 毫升）中。隨後，向其中加入N,N-二異丙基乙胺（21 毫克, 0.2 毫莫耳），室溫下攪拌10 分鐘，然後加入乙酸（0.5 毫升）和 (S) -1-(5-氯-2-(2-氧乙氧基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-（1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)尿素（化合物65-10, 35 毫克, 0.08 毫莫耳）。反應液在室溫下攪拌1 小時，然後加入三乙醯氧基硼氫化鈉（25 毫克, 0.1 毫莫耳）, 反應液在室溫下繼續攪拌過夜。LCMS監測顯示原料消失後，反應液濃縮。加入飽和碳酸氫鈉溶液（10 毫升）。混合液用乙酸乙酯（20 毫升 x 3）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10 毫升）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。粗品用矽膠柱層析分離得16.6 毫克1-(5-氯-2-(2-(4-(9-(1-(2,6-二氧呱啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-3,9-二氮螺環[5.5]十一碳-3-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)吡啶-3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲(化合物65)。
MS (ESI) M/Z: 931.3 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.11 (s, 1H), 9.13 (s, 1H), 8.94 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.44 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.83 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 6.97 - 6.95 (m, 2H), 6.94 (s, 1H), 6.87 - 6.85 (m, 1H), 5.39 - 5.36 (m, 2H), 4.54 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 3.62 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 2.91 - 2.86 (m, 7H), 2.73 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 2.67 - 2.57 (m, 2H), 2.30 - 2.28 (m, 4H), 2.09 - 2.08 (m, 2H), 2.03 - 1.98 (m, 3H), 1.69 - 1.23 (m, 14H), 1.05 - 1.02 (m, 2H).
實施例66：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基) -3-(2-(2-(1-(2,6-二氧呱啶 -3-基) -5-甲氧基-3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)氨基)-7-氮雜螺[3.5]壬烯-7-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素
反應流程：
實施例流程：
步驟A: 在氮氣保護條件下，將化合物66-1（5.0 克, 22.8 毫莫耳）溶於四氫呋喃（50 毫升）中，將甲胺的四氫呋喃溶液（4.7 克, 25.1 毫莫耳）滴加入上述溶液中，該反應系統在0 攝氏度下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，加入二氯甲烷（150 毫升），有機相用飽和食鹽水（50 毫升 ×2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到4.9 克化合物66-2。
MS (ESI) M/Z: 249.1 [M+H] +。
步驟B: 在0攝氏度下，將化合物66-2（4.9 克, 19.7 毫莫耳）溶於甲醇（50 毫升）中，將甲醇鈉的甲醇溶液（40 毫升）滴加其中，在0攝氏度下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，加入二氯甲烷（150 毫升），有機相用飽和食鹽水（50 毫升 ×2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到4.3 克化合物66-3。
MS (ESI) M/Z: 261.0 [M+H] +。
步驟C: 在室溫條件下，將化合物66-3（4.3 克, 16.6 毫莫耳）溶於乙醇（40 毫升）中，將鐵粉（9.2 克, 166 毫莫耳）和氯化銨（1.7 克, 33.2 毫莫耳）加入其中，該反應系統90攝氏度下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液過濾後，減壓濃縮，粗產物經矽膠柱層析純化得到3.9 克化合物66-4。
MS (ESI) M/Z: 231.1 [M+H] +。
步驟D：在室溫條件下，將化合物66-4（3.9 克, 16.9 毫莫耳）溶於乙腈( 40 毫升）溶劑中，將N,N-羰基二咪唑(3.6 克, 22 毫莫耳)加入其中，在80攝氏度下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應物過濾後得到濾餅，粗產物經矽膠柱層析純化得2.2 克化合物66-5。
MS (ESI) M/Z: 257.0 [M+H] +。
步驟E: 在0攝氏度條件下，將化合物66-5（1.1 克,  4.3 毫莫耳）溶於N,N-二甲基甲醯胺（10 毫升）溶劑中，將氫化鈉（344.0 毫克, 8.6 毫莫耳）加入其中，再滴加2-(三甲矽烷基)乙氧甲基氯（1.1 克, 6.5 毫莫耳），該反應系統0攝氏度下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，加入冰水淬滅後，加入乙酸乙酯（100 毫升 ×2）萃取合併有機相，有機相用飽和食鹽水（50 毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到的粗品藉由薄層矽膠板分離得到840.0 毫克化合物66-6。
MS (ESI) M/Z: 387.0 [M+H] +。
步驟F：在室溫條件下，將化合物66-6（840.0 毫克, 2.2 毫莫耳）溶於1，4-二氧六環（10 毫升）溶劑中，將叔丁醇鈉（620.0 毫克, 6.4 毫莫耳），三[二亞苄基丙酮]二鈀(0)（218.4 毫克, 220 微莫耳）, 2-二環己基磷-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯（101.9 毫克, 218.4 微莫耳）溶液在90攝氏度下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，加入乙酸乙酯（100 毫升 ×2）萃取合併有機相，有機相用飽和食鹽水（50 毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，粗產物經矽膠柱層析純化得到520.0 毫克化合物66-7。
MS (ESI) M/Z: 547.3 [M+H] +。
步驟G: 在室溫條件下，將化合物66-7（520.0 毫克, 1.4 毫莫耳），溶於四甲基氟化胺的四氫呋喃溶液（15 毫升）中，反應液升至80攝氏度下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，二氯甲烷（30 毫升 ×2）萃取，合併有機相，有機相用飽和氯化銨（50 毫升 ×2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到的粗品藉由薄層矽膠板分離得到240.0 毫克化合物66-8。
MS (ESI) M/Z: 417.2 [M+H] +。
步驟H: 在氮氣保護和0攝氏度條件下，將化合物66-8 (240.0 毫克, 0.6 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (5 毫升) 中，慢慢滴加叔丁醇鉀 (1 莫耳, 8 毫升)，滴加完畢，並在該溫度下攪拌1小時。在0攝氏度下，將1-(4-甲氧基苄基)-2,6-二氧呱啶-3-基三氟甲烷磺酸鹽(331 毫克, 0.9 毫莫耳)和四氫呋喃(5 毫升)的混合溶液緩慢滴加到上述溶液中，並在該溫度下攪拌2小時。 LCMS監測顯示原料消失後，反應液中加入乙酸乙酯(50 毫升) 稀釋，有機相用水(50 毫升 × 3)和飽和食鹽水(50 毫升 × 3)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得粗品經過矽膠柱層析純化得到140.0 毫克化合物66-9。
MS (ESI) M/Z: 648.3 [M+H] +。
步驟I：在氮氣保護下，將化合物66-9 (140.0 毫克, 0.22 毫莫耳)溶於三氟乙酸(5 毫升)中，加入三氟甲磺酸(0.5 毫升)。該系統在60攝氏度下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料反應完全後，將反應液減壓濃縮，得到90.0 毫克化合物66-10。
MS (ESI) M/Z: 428.2 [M+H] +。
步驟J：將化合物66-10 (90.0 毫克, 0.2 毫莫耳) 溶於乙腈(5 毫升)中，加入三乙胺(60.0 毫克, 0.6 毫莫耳)和二碳酸二叔丁酯(65.4 毫克, 0.3 毫莫耳)。該系統在室溫下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料反應完全後，反應液中加入二氯甲烷(50 毫升)稀釋，有機相用水(50 毫升 × 3)和飽和食鹽水(50 毫升 ×3)洗滌，無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物藉由矽膠柱層析純化得到95.0 毫克化合物66-11。
MS (ESI) M/Z: 528.2 [M+H] +。
步驟K：將化合物66-11 (95.0 毫克, 0.2 毫莫耳)溶於二氯甲烷(3 毫升)中，加入鹽酸二氧六環溶液(3 毫升)。該系統在室溫下攪2小時。LCMS監測顯示原料反應完全後，將反應液減壓濃縮，得到65.0 毫克化合物66-12。
MS (ESI) M/Z: 428.2 [M+H] +。
步驟L：將化合物66-12（65.0 毫克, 0.2 毫莫耳），溶於N,N-二甲基甲醯胺（3 毫升）和四氫呋喃（3 毫升）的混合溶劑中，將N,N-二異丙基乙胺（58 毫克, 0.5 毫莫耳）加入其中，並於室溫下攪拌30分鐘，再加入醋酸（0.1 毫升）和 (S) -1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-氧代乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素（85.0 毫克, 0.2 毫莫耳），最後加入三乙醯氧基硼氫化鈉（80.0 毫克, 0.4毫莫耳），該反應系統室溫下攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，加入飽和碳酸氫鈉中和，乙酸乙酯（30 毫升 ×2）合併有機相，有機相用飽和食鹽水（50 毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到的粗品藉由薄層矽膠板分離得到11.7 毫克1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(1-(2,6-二氧呱啶-3-基)-5-甲氧基-3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)氨基)-7-氮雜螺[3.5]壬烯-7-基)乙氧基) -5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素（化合物66）。
MS (ESI) M/Z: 884.3 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.06 (s, 1H), 9.29 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.67 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 6.76 - 6.71 (m, 2H), 5.40 - 5.35 (m, 1H), 5.30 - 5.27 (m, 1H), 4.64 - 4.60 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 4.01 (d, J= 10.8 Hz, 1H), 3.48 (s, 3H), 3.45 (s, 3H), 3.25 (s, 3H), 2.91 - 2.84 (m, 1H), 2.72 - 2.62 (m, 4H), 2.50 - 2.34 (m, 2H), 2.20 - 1.90 (m, 4H), 1.80 - 1.70 (m, 3H), 1.69 - 1.59 (m, 4H), 1.70 - 1.65 (m, 4H).
實施例67：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(2-((1-(2,6-二羰基呱啶-3-基)-5-氟-3-甲基-2-羰基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)氨基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲
反應流程：
實施例流程：
步驟A：在室溫下，將化合物67-1 (4.5 克，19.0 毫莫耳) 和甲胺溶液 (4.5 克，47.4 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (50 毫升)，然後在60攝氏度下悶罐中攪拌16小時。將反應液冷卻至室溫，LCMS監測顯示原料消失，減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到3.5 克化合物67-2。
MS (ESI) M/Z: 249.0 [M+H] +。
步驟B：在室溫下，將化合物67-2 (3.3 克，13.3 毫莫耳) 溶於混合溶劑丙酮（15 毫升）和飽和碳酸氫鈉溶液，15 毫升)，然後在0攝氏度下分批加入連二亞硫酸鈉 (18.5 克，106.0 毫莫耳)，常溫下攪拌0.5小時。LCMS監測顯示原料消失，反應液加水淬滅，乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到1.8 克化合物67-3。
MS (ESI) M/Z: 221.0 [M+H] +。
步驟C：在室溫下，將化合物67-3 (1.3 克，6.0 毫莫耳)，N,N'-羰基二咪唑 (1.9 克，11.9 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (20 毫升) 中。氮氣置換3次，然後在65攝氏度下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到1.2 克化合物67-4。
MS (ESI) M/Z: 245.0 [M+H] +。
步驟D：在室溫下，將化合物67-4 (1.2 克，4.9 毫莫耳) 溶於無水N,N-二甲基甲醯胺 (20 毫升) 中，然後在0攝氏度下加入鈉氫 (377.0 毫克，9.8 毫莫耳)，攪拌10分鐘後加入2-(三甲基矽烷基)乙氧甲基氯 (1.6 克，9.8 毫莫耳)，在常溫下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失，反應液經甲醇淬滅後減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到1.5 克化合物67-5。
步驟E：在室溫下，將化合物67-5 (1.5 克，4.0 毫莫耳) 和叔-丁基 2-氨基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯 (1.1 克，4.4 毫莫耳) ，三(二亞苄基丙酮)鈀 (367.0 毫克，0.4 毫莫耳)，2-二環己基磷-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯 (373.0 毫克，0.8 毫莫耳) 和叔丁醇鈉 (1.2 克，12.0 毫莫耳) 溶於無水1.4-二氧六環 (25 毫升) 中，經氮氣置換3次後，在100攝氏度下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到345.0 毫克化合物67-6。
MS (ESI) M/Z: 535.5 [M+H] +。
步驟F：在常溫下，將化合物67-6 (345.0 毫克，0.6 毫莫耳) 溶於混合溶劑三氟乙酸（1 毫升）和二氯甲烷（3 毫升)，然後在常溫下攪拌4小時。LCMS監測原料基本反應完全，減壓濃縮，所得殘留物溶於混合溶劑乙腈（2 毫升）和氨水（4 毫升)，然後在常溫下攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失，減壓濃縮，所得混合物用製備色譜純化得到200.0 毫克化合物67-7。
MS (ESI) M/Z: 305.1 [M+H] +。
步驟G：在室溫下，將化合物67-7 (196.0 毫克，0.6 毫莫耳)，三乙胺 (195.0 毫克，1.9 毫莫耳) 和二碳酸二叔丁酯 (281.0 毫克，1.3 毫莫耳) 溶於二氯甲烷 (5 毫升) 中，然後在常溫下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到166.0 毫克化合物67-8。
MS (ESI) M/Z: 405.2 [M+H] +。
步驟H：在室溫下，將化合物67-8 (166.0 毫克，0.4 毫莫耳) 和叔丁醇鉀 (92.0 毫克，0.8 毫莫耳) 溶於無水四氫呋喃 (8 毫升) 中，在0攝氏度下攪拌10分鐘。然後將溶於無水四氫呋喃 (6 毫升) 的1-(4-甲氧苄基)-2,6-二羰基呱啶-3-基三氟甲磺酸 (235.0 毫克，0.6 毫莫耳) 溶液緩慢滴加入反應液，加入完畢後0攝氏度下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到220.0 毫克化合物67-9。
MS (ESI) M/Z: 636.3 [M+H] +。
步驟I：在常溫下，將化合物67-9 (200.0 毫克，0.3 毫莫耳) 溶於混合溶劑三氟乙酸（1 毫升）和三氟甲磺酸（3 毫升)，然後在50攝氏度下攪拌10小時。LCMS監測原料基本反應完全，將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，所得混合物用製備色譜純化得到100.0 毫克化合物67-10。
MS (ESI) M/Z: 416.2 [M+H] +。
步驟J：在氮氣保護下，將化合物67-10 (95.0 毫克，148.0微莫耳)，吡啶 (70.0 毫克，0.9 毫莫耳) 溶於甲醇 (8 毫升)，反應液在室溫下攪拌10分鐘，將(S)-1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-羰基乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲 (70.0 毫克，148.0 微莫耳) 和2-甲基吡啶硼烷 (127.0 毫克，1.2 毫莫耳) 加入到反應液中，反應液在常溫下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液濃縮，所得混合物藉由製備色譜純化得到51.6 毫克1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(2-((1-(2,6-二羰基呱啶-3-基)-5-氟-3-甲基-2-羰基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)氨基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲（化合物67）。
MS (ESI) M/Z: 872.3 [M+H] +。
1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.08 (s, 1H), 9.24 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.68 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.21 - 8.15 (m, 1H), 6.93 (s, 1H), 6.87 - 6.78 (m, 1H), 6.73 - 6.70 (m, 1H), 5.45 - 5.26 (m, 2H), 4.62 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 4.45 - 4.43 (m, 1H), 3.62 - 3.53 (m, 4H), 3.25 (s, 3H), 2.92 - 2.81 (m, 1H), 2.76 - 2.70 (m, 2H), 2.70 - 2.58 (m, 2H), 2.45 - 2.30 (m, 4H), 2.15 - 2.06 (m, 2H), 2.03 - 1.94 (m, 1H), 1.73 - 1.67 (m, 2H), 1.58 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.51 - 1.45 (m, 4H).
實施例68：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-((1-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-3,3-二甲基-2-氧代吲哚-4-基)氨基)-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲
反應流程：
實施例流程：
步驟A: 在氮氣的保護下，將化合物68-1（3.0 克, 14.1 毫莫耳） 溶於四氫呋喃（75 毫升）中，將反應液降到-78攝氏度，將雙三甲基矽基胺基鋰（1莫耳, 53 毫升）加入上述溶液中，在該溫度下攪拌30分鐘後，再將碘甲烷（5.0 克, 35.4 毫莫耳）緩慢滴加進反應液中。該反應系統在室溫下攪拌 3小時。LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入飽和氯化銨溶液（100 毫升）淬滅，乙酸乙酯（100 毫升 × 3）萃取，合併有機相，用飽和食鹽水（50 毫升 × 3）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物藉由矽膠柱層析純化得到3.1 克化合物68-2。
MS (ESI) M/Z: 242.1 [M+H] +。
步驟B： 將化合物68-2（500.0 毫克, 2.1 毫莫耳）和2-氨基-7-氮螺[3.5]壬-7-羧酸叔丁酯（750.0 毫克, 3.1 毫莫耳），叔丁醇鈉（400.0 毫克, 4.2 毫莫耳），2-二環己基磷-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯（48.6 毫克, 0.1 毫莫耳）和三二亞苄基丙酮二鈀（190.6 毫克, 0.2 毫莫耳） 溶於1,4-二氧六環（10 毫升）中，該系統在110攝氏度下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料反應完全後，反應液中加入乙酸乙酯（100 毫升）和水（100 毫升）稀釋，，飽和食鹽水（100 毫升 ×3）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物矽膠柱層析純化得到650.0 毫克化合物68-3。
MS (ESI) M/Z: 400.4 [M+H] +。
步驟C: 在氮氣保護和零攝氏度的條件下，將化合物68-3（650.0 毫克, 1.6 毫莫耳） 溶於四氫呋喃 （5 毫升） 中，慢慢滴加叔丁醇鉀 （1莫耳, 2.4 毫升），滴加完畢，該系統在零攝氏度攪拌1小時。在零攝氏度下，將1-(4-甲氧基苄基)-2,6-二氧代呱啶-3-基三氟甲磺酸酯 （1.2 克, 3.3 毫莫耳）和四氫呋喃（5 毫升）的混合溶液緩慢滴加到上述溶液中，並在該溫度下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液中加入乙酸乙酯（100 毫升）稀釋，有機相用水（50 毫升 ×3）和飽和食鹽水（50 毫升 ×3）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物經過矽膠柱層析純化得到400.0 毫克化合物68-4。
MS (ESI) M/Z: 631.3 [M+H] +。
步驟D：在氮氣保護下，將化合物68-4（400.0 毫克, 0.6 毫莫耳）溶於三氟乙酸（4 毫升）中，加入三氟甲磺酸（0.4 毫升）。該系統在60攝氏度攪拌16小時。LCMS監測顯示原料反應完全後，將反應液減壓濃縮，得到260.0 毫克粗品化合物68-5，直接用於下一步反應。
MS (ESI) M/Z: 411.3 [M+H] +。
步驟E：將化合物68-5（260.0 毫克, 0.6 毫莫耳）溶於乙腈 （5 毫升）中，加入三乙胺 （128.1 毫克, 1.3 毫莫耳）和二碳酸二叔丁酯（289.9 毫克, 0.8 毫莫耳）。該系統在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料反應完全後，反應液中加入二氯甲烷（50 毫升）稀釋，有機相用水（50 毫升 ×3）和飽和食鹽水（50 毫升 ×3）洗滌，無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物藉由矽膠柱層析純化得到210.0 毫克化合物68-6。
MS (ESI) M/Z: 511.2 [M+H] +。
步驟F：將化合物68-6（65.0 毫克, 130.0 微莫耳）溶於二氯甲烷（2 毫升），加入鹽酸1,4-二氧六環（2 毫升）。該反應系統在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮，得到52.0 毫克化合物68-7。
MS (ESI) M/Z: 411.3 [M+H] +。
步驟G：將化合物68-7（52.0 毫克, 130.0 微莫耳）和N,N-二異丙基乙胺（49.0 毫克, 0.4 毫莫耳）溶入N,N-二甲基甲醯胺（2 毫升）和四氫呋喃（2 毫升）的混合溶劑中，室溫下攪拌0.5小時, 然後加入(S)-1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-氧代乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲（59.8 毫克, 130.0 微莫耳），醋酸（0.1 毫升），再加入三乙醯氧基硼氫化鈉（53.8 毫克, 253.8 微莫耳），該反應液在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失，反應液中加入乙酸乙酯（50 毫升）稀釋，用水（50 毫升 ×3）和飽和食鹽水（50 毫升 ×3）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物反相柱層析純化得到33.5 毫克1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-((1-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-3,3-二甲基-2-氧代吲哚-4-基)氨基)-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲（化合物68）。
MS (ESI) M/Z: 867.2 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.03 (s, 1H), 9.30 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.69 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.01 - 6.97 (m, 1H), 6.94 (s, 1H), 6.30 - 6.22 (m, 2H), 5.41 - 5.36 (m, , 1H), 5.11 (s, 1H), 4.72 - 4.58 (m, 3H), 3.97 – 3.82 (m, 1H), 3.26 (s, 3H), 2.92 – 2.73 (m, 3H), 2.65 – 2.52 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.25 - 2.21 (m, 2H), 1.96 - 1.85 (m, 1H), 1.78 - 1.69 (m, 2H), 1.65 - 1.48 (m, 6H), 1.37 (s, 3H), 1.36 (s, 3H).
實施例69：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(6-(2-((1-(2,6-二羰基呱啶-3-基)-3-甲基-2-羰基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)氨基)乙基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲
反應流程：
實施例流程：
化合物69-1的製備方法參考實施例50。
步驟A：在氮氣保護下，將化合物69-1 (250.0 毫克，0.4 毫莫耳)，吡啶 (100.0 毫克，1.3 毫莫耳) 溶於甲醇 (8 毫升)，反應液在室溫下攪拌10分鐘，將(S)-1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-羰基乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲 (100.0 毫克，0.2 毫莫耳) 和2-甲基吡啶硼烷 (181.0 毫克，1.7 毫莫耳) 加入到反應液中，在常溫下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液濃縮，所得混合物藉由製備色譜純化得到5.9 毫克1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(6-(2-((1-(2,6-二羰基呱啶-3-基)-3-甲基-2-羰基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)氨基)乙基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲（化合物69）。
MS (ESI) M/Z: 854.4 [M+H] +。
1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.05 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.68 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 6.85 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 6.49 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.37 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 5.41 - 5.36 (m, 1H), 5.31 - 5.23 (m, 1H), 4.96 - 4.94 (m, 1H), 4.50 - 4.47 (m, 2H), 3.59 (s, 3H), 3.25 (s, 4H), 3.14 (s, 2H), 2.96 - 2.79 (m, 5H), 2.69 - 2.59 (m, 2H), 2.24 - 2.16 (m, 3H), 2.00 - 1.93 (m, 1H), 1.80 - 1.62 (m, 5H), 1.59 (d, J= 6.8 Hz, 3H).
實施例70：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(6-((1-(2,6-二羰基呱啶-3-基)-3-甲基-2-羰基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)氨基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲
反應流程：
實施例流程：
化合物70-1的製備方法參考實施例50。
步驟A：在氮氣保護下，將化合物70-1 (100.0 毫克，0.3 毫莫耳) 和吡啶 (126.4 毫克，1.6 毫莫耳) 溶於甲醇 (1 毫升)，反應液在室溫下攪拌10分鐘，加入(S)-1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-羰基乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲 ( 191.2 毫克，0.4 毫莫耳) 和2-甲基吡啶-N-甲硼烷 (235.2 毫克，2.2 毫莫耳)，反應液在室溫下攪拌12小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液減壓濃縮，所得混合物藉由製備色譜純化得到55.3 毫克1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(6-((1-(2,6-二羰基呱啶-3-基)-3-甲基-2-羰基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)氨基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲（化合物70）。
MS (ESI) M/Z: 826.1 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ11.05 (s, 1H), 9.25 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.70 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 6.85 - 6.81 (m, 1H), 6.52 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.27 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 5.41 - 5.36 (m, 1H), 5.30 - 5.25 (m, 1H), 5.18 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 4.50 (t, J= 5.6 Hz, 2H), 3.71 - 3.66 (m, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 3.20 (s, 2H), 2.94 - 2.79 (m, 3H), 2.74 - 2.51 (m, 6H), 2.13 - 1.87 (m, 3H), 1.59 (d, J= 6.8 Hz, 3H).
實施例71：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(1-(1-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)呱啶-4-基)甲基)呱啶-4-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素
反應流程：
實施例流程：
步驟A: 在0攝氏度下，向化合物71-1 (5.0 克, 23.3 毫莫耳)的四氫呋喃（50 毫升）溶液中，緩慢加入氫化鈉（837.0 毫克, 34.9 毫莫耳），並在0攝氏度下攪拌1小時，再將溴化苄（4.7 克, 27.9 毫莫耳）加入上述溶液中。將混合物升溫至室溫後繼續攪拌4小時。LCMS顯示反應完成後，將混合物用飽和氯化銨溶液（50 毫升）和乙酸乙酯（70 毫升）進行淬滅。收集有機相並用水（50毫升）和飽和食鹽水（50毫升）進行洗滌。有機相用無水硫酸鈉進行乾燥，過濾，旋乾後用矽膠柱層析純化得到5.9 克化合物71-2。
MS (ESI) M/Z: 328.2 [M+Na] +。
步驟 B：在0攝氏度下，向化合物71-2 (5.9 克, 19.3 毫莫耳)的二氯甲烷（100 毫升）溶液中，緩慢滴加鹽酸的乙酸乙酯溶液（1 莫耳, 40 毫升），所得反應液在室溫下攪拌1小時。LCMS顯示反應完成後，旋乾得到5.1 克化合物71-3。
MS (ESI) M/Z: 205.8 [M+H] +。
步驟 C：在室溫下，向化合物71-3 (2.0 克, 10 毫莫耳)的1,4-二氧六環（100 毫升）溶液中，加入4-溴-3-甲基-1-((2-(三甲基矽)乙氧基)甲基)-1,3-二氫-2H-苯并[d]咪唑-2-酮（3.5 克, 10 毫莫耳），叔丁醇鈉（2.0 克, 20.0 毫莫耳）, 三二亞苄基丙酮二鈀 (1.0 克, 1.0 毫莫耳) 和 2-雙環己基膦-2`,6`-二異丙氧基聯苯 (500 毫克, 1.0 毫莫耳)。用氮氣將系統置換三次後在90攝氏度下攪拌4小時。LCMS顯示反應完成後，將反應液降至室溫，加入水（100 毫升）和乙酸乙酯（100 毫升）進行萃取。收集有機相後用飽和食鹽水（100 毫升）進行洗滌並用無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，粗品用矽膠柱層析純化得到2.9 克化合物71-4。
MS (ESI) M/Z: 482.2 [M+H] +。
步驟 D: 在室溫下，向化合物71-4 (2.9 克, 6.0 毫莫耳)的四氫呋喃（20 毫升）溶液中，加入四丁基氟化銨的四氫呋喃溶液（80.0 毫升, 80.0 毫莫耳）並在80攝氏度下攪拌16小時。LCMS顯示反應完成後，將反應液降至室溫，加入水（50 毫升）和乙酸乙酯（50 毫升）進行萃取。收集有機相後用飽和食鹽水（100 毫升）洗滌並用無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到1.9 克化合物71-5。
MS (ESI) M/Z: 352.2 [M+H] +。
步驟 E: 在0攝氏度下，向化合物71-5 (1.9 克, 5.4 毫莫耳)的四氫呋喃（100 毫升）溶液中，滴加叔丁醇鉀的四氫呋喃溶液（1莫耳，13.5 毫升）並在0攝氏度下攪拌1小時後，緩慢滴加1-(4-甲氧基苄基)-2,6-二氧代呱啶-3-基三氟甲磺酸酯（4.1 克, 10.8 毫莫耳）的四氫呋喃溶液，將反應液升至室溫後繼續反應4小時。LCMS顯示反應完成後，將混合物加入水（60 毫升）和乙酸乙酯（60 毫升）進行萃取。收集有機相後用飽和食鹽水（100 毫升）進行洗滌並用無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋乾後用矽膠柱層析純化得到1.2 克化合物71-6。
MS (ESI) M/Z: 583.2 [M+H] +。
步驟 F：在室溫下，向含有化合物71-6 (1.2 克, 3.4 毫莫耳)的三氟醋酸（10 毫升）溶液中，滴加三氟甲磺酸溶液（1 毫升）並在60攝氏度下攪拌16小時。LCMS顯示反應完成後，旋去大部分溶劑後得到3.5 克化合物71-7。
MS (ESI) M/Z: 468.4 [M+H] +。
步驟 G：在0攝氏度下，向化合物71-7（3.5 克, 7.5毫莫耳）的甲醇（20 毫升）溶液中加入碳酸鉀（2.1 克, 15 毫莫耳）並在0攝氏度下繼續攪拌30分鐘。LCMS顯示反應完全後過濾，濾液加入二氯甲烷（50 毫升）並用水進行洗滌，收集有機相後用無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化後得200.0 毫克化合物71-8。
MS (ESI) M/Z: 373.1 [M+H] +。
步驟H：室溫下，將化合物71-8（90.0 毫克, 242.0 微莫耳） 溶於二甲亞碸（4 毫升），加入2-碘醯苯甲酸（135.0 毫克, 0.5 毫莫耳），室溫攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失，反應液加入碳酸氫鈉溶液（50 毫升），乙酸乙酯（50 毫升）萃取，有機相用水（50 毫升）洗和鹽水（50 毫升）洗，乾燥，濃縮，得到80.0 毫克化合物71-9。
MS (ESI) M/Z: 371.1 [M+H] +。
步驟I：將化合物71-10（117.0 毫克, 0.2 毫莫耳）溶於四氫呋喃（2 毫升）和N,N-二甲基甲醯胺 (2 毫升) 中，加入三乙胺（0.2 毫升），室溫攪拌半小時，加入乙酸（0.3 毫升）和化合物71-9（80.0 毫克, 0.2 毫莫耳），室溫攪拌半小時，再加入三乙醯氧基硼氫化鈉（92.0 毫克, 432.0微莫耳），該系統在室溫下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液濃縮，粗品用薄層矽膠層析純化得到43.8 毫克1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(1-(1-(2,6-二氧呱啶-3-基)-2-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)呱啶-4-基甲基)呱啶-4-基(乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基脲（化合物71）。
MS (ESI) M/Z: 896.3 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ11.09 (s, 1H), 9.20 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 6.95 - 6.92 (m, 2H), 6.87 - 6.84 (m, 2H), 5.39 - 5.32 (m, 2H), 4.55 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 3.61 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 3.10 - 3.08 (m, 2H), 2.88 - 2.81 (m, 2H), 2.70 - 2.62 (m, 4H), 2.15 (s, 2H), 2.00 - 1.97 (m, 2H), 1.88 - 1.76 (m, 6H), 1.71 - 1.68 (m, 2H), 1.58 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 1.45 - 1.18 (m, 6H).
實施例72：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-((1-((1-( 2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)呱啶-4-基)甲基)呱啶-4-基)氧基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶- 3-基)脲
反應流程：
實施例流程：
步驟A: 在氮氣保護下，將化合物72-1 (5.0 克, 24.9 毫莫耳) 溶於 N,N-二甲基甲醯胺 (50 毫升) 中，在0攝氏度下加入鈉氫 (657.6 毫克, 27.4 毫莫耳)。該系統在0 攝氏度下攪拌30分鐘，然後緩慢滴加 (2-溴乙氧基)甲基)苯(5.9 克, 27.4 毫莫耳), 反應液升至室溫攪拌12小時。LCMS監測顯示原料消失後，加入冰水(50 毫升)淬滅，用乙酸乙酯 (200 毫升 × 3) 萃取，合併有機相，用飽和食鹽水 (100 毫升 × 2) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到4.4 克化合物72-2。
MS (ESI) M/Z: 336.2 [M+H] +。
步驟B: 將化合物72-2 (4.4 克, 13.1 毫莫耳) 和鈀碳 (500.0 毫克) 加入甲醇 (40 毫升)中，反應液經氫氣置換3次後，在室溫下攪拌18小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液降至室溫，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用乙酸乙酯 (50 毫升) 溶解，有機相用水 (50 毫升 × 3) 和飽和食鹽水 (50 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到1.2 克化合物72-3。
MS (ESI) M/Z: 268.1 [M+Na] +。
步驟C: 在氮氣保護下，將化合物72-3 (1.2 克, 4.9 毫莫耳)，3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-醇(1.0 克, 4.9 毫莫耳)，三苯基膦（2.6 克, 9.8 毫莫耳），溶於四氫呋喃 (60 毫升) 中，在0攝氏度下，緩慢滴加偶氮二羧酸二乙酯（1.7 克, 9.9 毫莫耳），滴加完畢，將反應液緩慢升至室溫攪拌16小時，LCMS監測顯示原料消失後，用乙酸乙酯 (100 毫升 × 3) 萃取。合併有機相，用飽和食鹽水 (50 毫升 ×2) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到300.0 毫克化合物72-4。
MS (ESI) M/Z: 458.1 [M+Na] +。
步驟 D：將化合物72-4 (300.0 毫克, 0.7 毫莫耳) 和氯化銨(73.0 毫克, 1.4 毫莫耳) 溶於乙醇(10 毫升) 和水(1 毫升) 中，攪拌下加入鐵粉(380.0 毫克, 6.8 毫莫耳)，然後將反應液升至90 攝氏度攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液降至室溫，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用乙酸乙酯 (10 毫升) 溶解，有機相用水(10 毫升 ×3) 和飽和食鹽水(10 毫升 × 3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到270.0 毫克化合物72-5。
MS (ESI) M/Z: 406.2 [M+H] +。
步驟 E：在氮氣保護下，將化合物INT-1（170.9 毫克, 0.7 毫莫耳）溶於1,4二氧六環（10 毫升）中，再將三乙胺（203.0 毫克, 2.0 毫莫耳）和疊氮磷酸二苯酯（203.5 毫克, 0.7 毫莫耳）加入上述溶液中，得到的混合物在室溫下攪拌30分鐘，再將4-(2-((3-氨基-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙氧基)呱啶-1-羧酸叔丁酯（化合物72-5, 270.0 毫克, 0.7 毫莫耳）加入到反應液中，反應液升至100攝氏度攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液降至室溫，用水和乙酸乙酯稀釋，水層用乙酸乙酯（30 毫升 ×3）萃取，有機層用飽用食鹽水(30 毫升 × 3) 洗滌，並在無水硫酸鈉上乾燥，過濾濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到105.0 毫克化合物72-6。
MS (ESI) M/Z: 658.2 [M+H] +。
步驟 F：在氮氣保護下，將化合物72-6 (105.0 毫克, 0.2 毫莫耳) 溶於二氯甲烷 (3 毫升) 中，加入鹽酸的1,4-二氧六環溶液 (1 毫升)，反應液在室溫下攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮，得到80.0 毫克化合物72-7。
MS (ESI) M/Z: 558.2 [M+H] +。
步驟G: 在氮氣保護下，將化合物72-7 (80.0 毫克, 143.0 微莫耳)溶於混合溶劑 N,N-二甲基甲醯胺(3 毫升)和四氫呋喃(3 毫升)中，然後加入三乙胺(46.4 毫克, 0.4 毫莫耳），在室溫攪拌30分鐘，再加入1-(2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚-5-基)呱啶-4-甲醛(化合物72-8, 52.9 毫克, 143.0 微莫耳)，乙酸 (0.3 毫升) 和三乙醯氧基硼氫化鈉 (134.0 毫克, 0.63 毫莫耳)，反應液在室溫下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮，所得混合物先後經過反相純化和薄層矽膠板分離得到15.0 毫克1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-((1-((1-( 2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)呱啶-4-基)甲基)呱啶-4-基)氧基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲（化合物72）。
MS (ESI) M/Z: 911.3 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ11.08 (s, 1H), 9.31 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.64 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.22 - 7.19 (m, 1H), 6.93 (s, 1H), 5.42 - 5.37 (m, 1H), 5.09 - 5.04 (m, 1H), 4.69 - 4.66 (m, 2H), 4.01 (d, J= 12.8 Hz, 2H), 3.85 - 3.83 (m, 2H), 3.27 (s, 3H), 2.92 – 2.78 (m, 3H), 2.62 – 2.53 (m, 4H), 2.12 - 1.93 (m, 6H), 1.82 – 1.68 (m, 6H), 1.59 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.47 - 1.33 (m, 2H), 1.23 - 1.01 (m, 2H).
實施例73：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(4-(4-((2,6-二氧呱啶-3-基)氨基)-3-氟苯基)呱嗪-1-基)甲基)呱啶-1-基(乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基尿素
反應流程：
實施例流程：
化合物73-1的製備方法參考實施例51。
步驟A: 在0攝氏度條件下，將化合物73-1（100.0 毫克, 0.3 毫莫耳），溶於N,N-二甲基甲醯胺（4.0 毫升）和四氫呋喃（4.0 毫升）的混合溶劑中，然後加入N,N-二異丙基乙胺（96.8毫克, 0.8 毫莫耳），反應液在室溫下攪拌10分鐘，再加入醋酸（0.3 毫升）和 (S) -1-(2-氯 -7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-6-基) -3-(2-(2-氧代乙氧基) -5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素（177.0 毫克, 0.4 毫莫耳）和三乙醯氧基硼氫化鈉（132.0 毫克, 0.6 毫莫耳），反應液在室溫下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，加入飽和碳酸氫鈉中和，乙酸乙酯（30 毫升×2）萃取合併有機相，有機相用飽和食鹽水（50 毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，所得粗品藉由薄層矽膠板分離得到28.4 毫克1-(2-氯 -7-((S) -1-甲氧乙基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶 -6-基) -3-(2-(2-(4-(4-(2,6-二氧呱啶 -3-基)氨基) -3-氟苯基)呱嗪 -1-基)甲基)呱啶 -1-基)乙氧基) -5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲（化合物73）。
MS (ESI) M/Z: 860.2 [M+H] + 。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.77 (s, 1H), 9.25 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.67 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 6.76-6.71 (m, 2H), 6.58-6.56 (m, 1H), 5.07-5.05 (m, 1H), 4.64 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 4.28-4.23 (m, 1H), 3.26 (s, 3H), 2.96-2.91 (m, 6H), 2.78-2.72 (m, 3H), 2.58-2.53 (m, 2H), 2.43 (s, 4H), 2.13-1.94 (m, 6H), 1.67-1.64 (m, 2H), 1.58 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.55-1.41 (m, 1H), 1.32-1.01 (m, 2H).
實施例74：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶 -6-基)-3-(2-(2-(4-(4-(2,6-二氧呱啶 -3-基)氨基)苯基)呱啶 -1-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲
反應流程：
實施例流程：
化合物74-1的製備方法參考實施例51。
步驟A: 在0攝氏度下，將化合物74-1（50.0 毫克, 0.2 毫莫耳）溶於N,N-二甲基甲醯胺和（2.0 毫升）和四氫呋喃（2.0 毫升）的混合溶劑中，將N,N-二異丙基乙胺（56.0 毫克, 0.4 毫莫耳）加入其中，反應液在室溫下攪拌10分鐘，然後加入醋酸（0.2 毫升）和 (S) -1-(2-氯 -7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-氧代乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素（120.0 毫克, 0.3 毫莫耳）和三乙醯氧基硼氫化鈉（90.0 毫克, 0.4 毫莫耳），該反應系統室溫下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，加入飽和碳酸氫鈉中和，乙酸乙酯（30 毫升×2）合併有機相，有機相用飽和食鹽水（50 毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到的粗品藉由薄層矽膠板分離得到17.2 毫克1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-(4-(2,6-二氧呱啶-3-基)氨基)苯基)呱啶-1-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲（化合物74）。
MS (ESI) M/Z: 841.2 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.78 (s, 1H), 9.26 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 6.95 – 6.93 (m, 3H), 6.60 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.64 (s, 1H), 5.41 – 5.36 (m, 1H), 4.65 (s, 2H), 4.31 – 4.20 (m, 1H), 3.26 (s, 3H), 3.01 – 2.65 (m, 9H), 2.59 (s, 3H), 2.20 – 1.78 (m, 8H), 1.68 – 1.58 (m, 7H), 1.06 (s, 2H).
實施例75：
1-(2-氯-7-(S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-(4-(5-(2,6-二氧代呱啶-3-基)氨基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲
反應流程：
實施例流程：
化合物75-1的製備方法參考實施例51。
步驟A：在氮氣保護條件下，將化合物75-1（50.0 毫克, 120.0 微莫耳）和三乙胺（0.04 毫升）溶於N,N-二甲基甲醯胺（2 毫升）和四氫呋喃（2 毫升）的混合溶液中，反應系統在室溫下下攪拌10分鐘，加入(S) -1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-氧乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素（67.0毫克, 0.14 毫莫耳）和醋酸（0.04 毫升）和醋酸硼氫化鈉（54.1 毫克, 0.2 毫莫耳），該反應系統在室溫下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，加入飽和碳酸氫鈉中和，乙酸乙酯（30 毫升 × 2）合併有機相，有機相用飽和食鹽水（30 毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，濾液減壓濃縮，得到的粗品藉由薄層矽膠板分離得到19.8 毫克1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-((4-(5)) -((2,6-二氧代呱啶-3-基)氨基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲（化合物75）。
MS (ESI) M/Z: 845.3 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.76 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.68 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.69 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 7.06-7.03 (m, 1H), 6.93 (s, 1H), 6.66 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 5.41-5.38 (m, 2H), 4.64 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 4.22-4.19 (m, 1H), 3.29 (s, 3H), 3.26 (s, 4H), 2.93-2.58 (m, 7H), 2.40 (s, 4H), 2.13-1.99 (m, 6H), 1.68-1.65 (m, 2H), 1.58 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.23 - 1.20 (m, 2H).
實施例76：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-((4-(1)) -(2,6-二氧代呱啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)呱啶-1-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲
反應流程：
實施例流程：
步驟A:將化合物76-1(1.0 克, 2.2 毫莫耳)溶於1,4-二氧六環溶液（20 毫升）中，加入4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯（696.0 毫克, 2.2 毫莫耳），碳酸銫（1.1 克, 3.4 毫莫耳），四三苯基磷鈀（46.2 毫克, 40.0 微莫耳）和水（2 毫升），反應液經氮氣置換3次後，升溫至100攝氏度攪拌2小時。LCMS顯示反應完成後，將反應液降至室溫，加入乙酸乙酯（100 毫升 ×3）和水（100 毫升）進行萃取，收集有機相用飽和食鹽水（100 毫升 × 2）洗滌後，無水硫酸鈉乾燥，濃縮旋乾，所得混合物用矽膠柱層析純化得到1.0 克化合物76-2。
MS (ESI) M/Z: 482.3 [M+Na] +。
步驟B：向含有化合物76-2 (1.0克, 2.2 毫莫耳) 的四氫呋喃溶液（20 毫升）中，加入四丁基氟化銨（4 莫耳, 5 毫升）。系統用氮氣置換三次後升溫至60攝氏度攪拌16小時。LCMS顯示反應完成後，將反應液降至室溫，加入乙酸乙酯（100 毫升 ×3）和水（100 毫升）進行萃取，收集有機相用飽和食鹽水（100 毫升 × 2）洗滌後，無水硫酸鈉乾燥，濃縮旋乾，所得粗品用矽膠柱層析純化得到860.0 毫克化合物76-3。
MS (ESI) M/Z: 330.2 [M+H] +。
步驟C：在氮氣保護和0攝氏度條件下，將叔丁醇鉀（1莫耳, 3.1 毫升）滴加到含有化合物76-3（680.0 毫克, 2.1 毫莫耳）的四氫呋喃（15 毫升）溶液中，並在0攝氏度下攪拌1小時，之後再在0攝氏度下緩慢滴加1-(4-甲氧基苯基)-2,6-二氧蛋白酶-3-基三氟甲磺酸酯（1.7 克, 4.5 毫莫耳）的四氫呋喃（15 毫升）溶液，滴加完畢後繼續攪拌2小時。LCMS顯示反應完成，加入乙酸乙酯（100 毫升）後用水（100 毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得粗品用矽膠柱層析純化得到950.0 毫克化合物76-4。
MS (ESI) M/Z: 561.3 [M+H] +。
步驟D：將鈀碳（500.0 毫克）加到化合物76-4（1.2 克, 0.4 毫莫耳）的甲醇（50 毫升）溶液中，再用氫氣置換三次後，在室溫下攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，過濾除去鈀碳，濾液減壓濃縮，得到1.3 克化合物76-5。
MS (ESI) M/Z: 563.1 [M+H] +。
步驟E：在氮氣保護下將鹽酸的乙酸乙酯溶液（4 莫耳, 5.0 毫升）加到化合物76-5（1.2 克, 21.4 毫莫耳）的二氯甲烷（10 毫升）的溶液中，並在室溫下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成，濾液減壓濃縮得到1.3 克化合物76-6。
MS (ESI) M/Z: 463.1 [M+H] +。
步驟F：在氮氣保護下，將三乙醯氧基硼氫化鈉（560.0 毫克, 2.5 毫莫耳）加到化合物76-6（950.0 毫克, 1.7 毫莫耳）和4-甲醯呱啶-1-羧酸叔丁酯（360.0 毫克, 0.4 毫莫耳）的甲醇（10 毫升）的溶液後，滴加0.2 毫升乙酸，並在室溫下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成，加入二氯甲烷和水後進行萃取，收集有機相乾燥過濾，濾液減壓濃縮，粗品用矽膠柱層析純化得到740.0 毫克化合物76-7。
MS (ESI) M/Z: 660.3 [M+H] +。
步驟G：將化合物76-7（740.0 毫克, 1.1 毫莫耳）加到三氟甲磺酸（1毫升）的三氟乙酸（8 毫升）的溶液中，反應液升至60攝氏度攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，溶劑減壓濃縮後，得到1.0 克化合物76-8。
MS (ESI) M/Z: 540.2 [M+H] +。
步驟H：將化合物76-8（1.0 克, 2.3 毫莫耳）加到含有三乙胺（920.0 毫克, 9.1 毫莫耳）的乙腈（50 毫升）的溶液中，室溫攪拌1小時後，加入二碳酸二叔丁酯（746.0 毫克, 3.4 毫莫耳）並繼續攪拌2小時。LCMS顯示反應完成後，加入乙酸乙酯(200 毫升 x 2)和水（200 毫升）進行萃取，收集有機相並用飽和食鹽水洗滌後乾燥過濾，濾液減壓濃縮，粗品經矽膠柱層析純化純化後得到680.0 毫克化合物76-9。
MS (ESI) M/Z: 540.3 [M+H] +。
步驟I：將化合物76-9（680.0 毫克, 1.3 毫莫耳）加到含有三氟乙酸（2 毫升）的二氯甲烷（10 毫升）的溶液中，室溫攪拌2小時。LCMS顯示反應完成，溶劑減壓濃縮後得到600.0 毫克化合物76-10。
MS (ESI) M/Z: 440.2 [M+H] +。
步驟J：將化合物76-10（100.0 毫克, 0.2 毫莫耳）加到 N,N-二異丙基乙基胺（0.2 毫升）的四氫呋喃（8 毫升）和DMF（1 毫升）的混合溶液中，室溫攪拌0.5小時後，加入乙酸（0.5 毫升）和( S) -1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-氧乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素（104.0 毫克, 0.2 毫莫耳）並繼續攪拌20分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉（74 毫克, 0.4 毫莫耳）並於室溫下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。加入乙酸乙酯（10 毫升）和水（10 毫升）洗滌後回收有機相並乾燥，溶劑減壓濃縮後用薄層矽膠板分離純化得到16.3 毫克 (S)-1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-氧代乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶 -3-基）脲（化合物76）。
MS (ESI) M/Z: 896.3 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 11.10 (s, 1H), 9.29 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.68 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.01-6.96 (m, 3H), 6.93 (s, 1H), 5.42-5.32 (m, 2H), 4.64 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 3.57 (s, 3H), 3.24 (s, 3H), 2.94-2.85 (m, 5H), 2.78-2.60 (m, 5H), 2.14-2.13 (s, 2H), 2.08-1.99 (m, 5H), 1.77-1.66 (m, 6H), 1.58 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.49 (s, 1H), 1.07 - 1.04 (m, 2H).
實施例77：
1-(2-氯-7-(S)-1-甲氧基乙基吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-(1-(1-(2，6-二羰基呱啶-3-基)-3-甲基-2-羰基-2，3-二氫-1H-苯并咪唑-4-基)呱啶-4-基(甲基)氨基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲
反應流程：
實施例流程：
化合物77-1的製備方法參考實施例65。
步驟A：將化合物77-1（80.0 毫克, 0.2 毫莫耳）加到 N,N-二異丙基乙基胺（0.2 毫升）的四氫呋喃（8 毫升）和DMF（1 毫升）的混合溶液中，室溫攪拌0.5小時後， 加入乙酸（0.5 毫升）和( S) -1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-氧乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)尿素（100.0 毫克, 0.2 毫莫耳）並繼續攪拌20分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉（75.0 毫克, 0.4 毫莫耳）並於室溫下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成，加入飽和碳酸氫鈉中和，乙酸乙酯（30 毫升 × 2）萃取合併有機相，有機相用飽和食鹽水（30 毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到的粗品藉由薄層矽膠板分離純化得到7.6 毫克 1-(2-氯-7-(S)-1-甲氧基乙基吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-(1-(1-(2，6-二羰基呱啶-3-基)-3-甲基-2-羰基-2，3-二氫-1H-苯并咪唑-4-基)呱啶-4-基(甲基)氨基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲（化合物77）。
MS (ESI) M/Z: 911.3 [M+H] +。
1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.09 (s, 1H), 9.29 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.68 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 6.99 - 6.93 (m, 2H), 6.89 - 6.85 (m, 2H), 5.42 - 5.32 (m, 2H), 4.64 (t, J= 5.6 Hz, 2H), 3.62 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 3.13 - 3.11 (m, 2H), 2.99 - 2.97 (m, 2H), 2.94 - 2.84 (m, 1H), 2.79 - 2.58 (m, 7H), 2.21 (s, 3H), 2.10 - 1.98 (m, 4H), 1.79 - 1.64 (m, 6H), 1.59 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 1.51 - 1.37 (m, 2H).
實施例78：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-((4-(4-(2,6-二羰基呱啶-3-基)-2-氟苯基)呱嗪-1-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲
反應流程：
實施例流程：
步驟A：在室溫下，將化合物78-1 (6.4 克，25.2 毫莫耳)，[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀 (1.7 克，2.1 毫莫耳) 和乙酸鉀 (4.1 克，42.0 毫莫耳) 溶於無水1，4-二氧六環 (46 毫升) 中，反應液氮氣置換3次後，升溫至95攝氏度攪拌12小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得4.6 克化合物78-2。
MS (ESI) M/Z: 238.3 [M+H] +。
步驟B：在室溫下，將化合物78-2 (3.3 克，13.8 毫莫耳)，2,6-二(苄氧基)-3-溴吡啶 (4.7 克，12.6 毫莫耳)，[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀 (1.1 克，1.3 毫莫耳) 和碳酸鉀 (5.2 克，37.8 毫莫耳) 溶於1，4-二氧六環和水 (40 毫升) 中。該反應液升溫至95攝氏度，在氮氣保護下攪拌12小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到3.3 克化合物78-3。
MS (ESI) M/Z: 401.5 [M+H] +。
步驟C：在常溫下，將化合物78-3 (3.3 克，8.1 毫莫耳) 和鈀碳 (650.0 毫克) 溶於乙醇(15 毫升)，乙酸乙酯(15 毫升)和二氯甲烷(3 毫升)的混合溶液中。該反應液在室溫下，氫氣保護攪拌12小時。LCMS監測顯示原料消失，過濾，減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到750.0 毫克化合物78-4。
MS (ESI) M/Z: 348.5 [M+H] +。
步驟D：在常溫下將化合物78-4 (300.0 毫克，1.35 毫莫耳)，雙(2-溴乙基)胺 (632.0 毫克，2.0 毫莫耳) 和碳酸鉀 (373.0 毫克) 加入到異丙醇 (5 毫升) 中，反應液在90攝氏度下攪拌24小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物藉由矽膠柱層析純化得到210.0 毫克化合物78-5。
MS (ESI) M/Z: 292.2 [M+H] +。
步驟E：在常溫下，將化合物78-5 (50.0 毫克，0.2 毫莫耳)，苯甲基 4-甲醯基呱啶-1-羧酸酯 (46.7 毫克，0.2 毫莫耳)，2-甲基吡啶硼烷 (55.0 毫克，0.5 毫莫耳)，醋酸 (8.2 毫克，140.0 微莫耳) 和鈦酸四異丙酯 (24.4 毫克，85.0 微莫耳) 溶於甲醇 (5 毫升)。經氮氣置換後將反應液加熱至50攝氏度攪拌30分鐘。LCMS監測顯示原料消失，反應液冷卻至室溫，將反應液濃縮，所得混合物用薄層矽膠板純化得到30.0 毫克化合物78-6。
MS (ESI) M/Z: 523.2 [M+H] +。
步驟F：在常溫下，將化合物78-6 (30.0 毫克，60.0 微莫耳) 溶於混合溶劑二氯甲烷（3毫升），三氟乙酸（1 毫升)。反應液攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液濃縮所得到35.0 毫克化合物78-7。
MS (ESI) M/Z: 389.0 [M+H] +。
步驟G：在常溫下，將化合物78-7 (35.0 毫克，60.0 微莫耳)，吡啶 (27.0 毫克，0.3 毫莫耳) 溶於甲醇 (5 毫升)，反應液在室溫下攪拌10分鐘，將(S)-1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-羰基乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲(32.0 毫克，68.0 微莫耳) 和2-甲基吡啶硼烷 (48.6 毫克，450.0 微莫耳) 加入到反應液中，並且在常溫下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液濃縮，所得混合物藉由製備色譜純化得到6.4 毫克1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(4-((4-(4-(2,6-二羰基呱啶-3-基)-2-氟苯基)呱嗪-1-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲（化合物78）。
MS (ESI) M/Z: 845.5 [M+H] +。
1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ10.81 (s, 1H), 9.50 - 9.30 (m, 2H), 8.74 (s, 1H), 8.68 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.19 - 8.17 (m, 1H), 7.04 - 7.00 (m, 1H), 6.98 - 6.94 (m, 2H), 6.93 (s, 1H), 5.40 -5.35 (m, 1H), 4.66 - 4.58 (m, 2H), 3.83 - 3.79 (m, 1H), 3.24 (s, 3H), 3.06 - 2.90 (m, 6H), 2.87 - 2.73 (m, 2H), 2.67 - 2.60 (m, 1H), 2.55 - 2.52 (m, 3H), 2.48 - 2.45 (m, 3H), 2.24 - 2.13 (m, 3H), 2.05 - 1.95 (m, 2H), 1.73 - 1.64 (m, 2H), 1.61 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.55 - 1.43 (m, 1H), 1.16 - 0.97 (m, 2H).
實施例79：
2-氯-N-(2-(2-(4-((4-(2-(2,6-二羰基呱啶-3-基)-1,3-二羰基異二氫吲哚-5-基)呱嗪-1-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氫-6H-吡唑并[1,5-a]吡咯並[2,3-e]嘧啶-6-甲醯胺
反應流程：
實施例流程：
步驟A：在室溫下，將化合物79-1 (20.0 克，103.6 毫莫耳) 和三乙胺 (20.9 克，207.3 毫莫耳) 溶於二氯甲烷 (250 毫升) 中。然後在0攝氏度下緩慢滴加溶於二氯甲烷 (80 毫升) 的丙醯氯 (11.4 克，124.3 毫莫耳) 溶液，滴加完畢後在室溫下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失，加入水（300 毫升）淬滅，乙酸乙酯（200 毫升 ×3）萃取合併有機相，有機相用飽和食鹽水（300 毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到26.0 克化合物79-2。
MS (ESI) M/Z: 250.2 [M+H] +。
步驟B：在75攝氏度下，向溶於四氫呋喃 (300 毫升) 的鈉氫 (3.9 克，101.2 毫莫耳)中緩慢滴加化合物79-2 (21.0 克，84.3 毫莫耳) 的四氫呋喃 (150 毫升) 的溶液，滴加完畢後在75攝氏度下攪拌16小時。LCMS監測顯示消失，將反應液冷卻至室溫，加入水（300 毫升）淬滅，乙酸乙酯（200 毫升 ×3）萃取合併有機相，有機相用飽和食鹽水（100 毫升 ×3）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到12.0 克化合物79-3。
MS (ESI) M/Z: 204.3 [M+H] +。
步驟C：在常溫下，將化合物79-3 (3.4 克，17.0 毫莫耳) 溶於N,N-二甲基甲醯胺 (70 毫升) ，然後在0攝氏度下向其中加入鈉氫 (975.0 毫克，25.4 毫莫耳)。反應液在常溫下攪拌半小時。然後降溫至零下55攝氏度，向其中加入S-(三氟甲基)二苯并噻吩三氟甲基磺酸鹽 (7.5 克，18.7 毫莫耳)，反應液在該溫度下攪拌1小時然後升至室溫攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液緩慢倒入冰水 (300 毫升)中，乙酸乙酯(300 毫升)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到3.4 克化合物79-4。
MS (ESI) M/Z: 272.2 [M+H] +。
步驟D：在0攝氏度下，向溶於四氫呋喃 (80 毫升) 的化合物79-4 (3.4 克，12.5 毫莫耳) 溶液中緩慢滴加氫化鋁鋰溶液 (1 莫耳，56.5 毫升)，滴加完畢後在0攝氏度下攪拌半小時，然後加熱至80攝氏度攪拌15小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液冷卻至0攝氏度，先後緩慢加入水 (2.1 毫升)，10%飽和氫氧化鈉溶液 (2.1 毫升)，水 (2.1 毫升) 淬滅，然後室溫下攪拌半小時，藉由矽藻土過濾，濾液進行減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到2.5 克化合物79-5。
MS (ESI) M/Z: 260.2 [M+H] +。
步驟E：在常溫下，將化合物79-5 (2.5 克，9.7 毫莫耳)，鈀碳 (600.0 毫克，20%)，1 莫耳鹽酸溶液 (10 毫升) 溶於乙醇 (10 毫升)，經氫氣置換後，反應液升溫至50攝氏度，攪拌16小時。LCMS監測原料基本反應完全，將反應液冷卻至室溫，1 莫耳鹽酸溶液 (10 毫升)加入反應液，室溫下攪拌30分鐘，經矽藻土過濾，濾液減壓濃縮，得到2.1 克化合物79-6。
MS (ESI) M/Z: 170.0 [M+H] +。
步驟F：在常溫下，將化合物79-6 (2.1 克，12.4 毫莫耳)，二碳酸二叔丁酯 (5.4 克，24.7 毫莫耳)，三乙胺 (6.3 克，61.8 毫莫耳) 溶於 四氫呋喃 (50 毫升) 中，然後在常溫下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失，對該反應液進行減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到2.0 克化合物79-7。
MS (ESI) M/Z: 270.0 [M+H] +。
步驟G：在常溫下，將化合物79-7 (2.0 克，7.4 毫莫耳)，氯鉻酸吡啶鹽 (8.0 克，37.2 毫莫耳)，4A 分子篩 (10.0 克) 溶於 二氯甲烷(50 毫升) 中，氮氣置換後在40攝氏度下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，經矽藻土過濾，減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析法純化得到1.3 克化合物79-8。
MS (ESI) M/Z: 268.0 [M+H] +。
步驟H：在常溫下，將化合物79-8 (1.3 克，4.9 毫莫耳) 溶於N,N-二甲基甲醯胺二甲基縮醛 (30 毫升) 中，氮氣置換後在室溫下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液進行減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到540.0 毫克化合物79-9。
MS (ESI) M/Z: 323.6 [M+H] +。
步驟I：在常溫下，將化合物79-9 (540.0 毫克，1.7 毫莫耳)，3-氯-1H-吡唑-5-胺 (216.8 毫克，1.8 毫莫耳) ，乙酸 (3 毫升) 溶於甲苯(50 毫升) 中，氮氣置換後在95攝氏度下攪拌1.5小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到160.0 毫克化合物79-10。
MS (ESI) M/Z: 377.0 [M+H] +。
步驟J：在常溫下，將化合物79-10 (160.0 毫克，0.4 毫莫耳) 溶於混合溶劑二氯甲烷（3毫升）和三氟乙酸（1 毫升) 中，然後在常溫下攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到130.0 毫克化合物79-11。
MS (ESI) M/Z: 277.0 [M+H] +。
步驟K：在0攝氏度下，將化合物79-12 (50.0 毫克，150.0 微莫耳)，三乙胺 (30.0 毫克，0.3 毫莫耳) 和三光氣 (17.6 毫克，1.8 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (3 毫升) 中。然後在常溫下攪拌1小時，過濾，濾液在0攝氏度下加入溶於四氫呋喃 (3 毫升) 的2-氯-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氫-6H-吡唑并[1,5-a]吡咯並[2,3-e]嘧啶 (化合物79-11，37.0 毫克，134.0 毫莫耳) 溶液，攪拌5分鐘，然後向其中加入三乙胺 (150.0 毫克，1.5 毫莫耳) 和4-二甲氨基吡啶 (36.3 毫克，0.3 毫莫耳)，反應液在常溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到60.0 毫克化合物79-13。
步驟L：在常溫下，將化合物79-13 (50 毫克， 78.0 微莫耳) 和四丁基氟化銨 (0.8 毫升) 溶於四氫呋喃 (2毫升) 中，然後在55攝氏度下攪拌0.5小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到55.0 毫克化合物79-14。
MS (ESI) M/Z: 525.0 [M+H] +。
步驟M：在常溫下，將化合物79-14 (45.0 毫克，86.0 微莫耳) 和鄰苯二甲酸二甲酯 (72.8 毫克，0.2 毫莫耳) 溶於二氯甲烷 (5毫升) 中，然後在45攝氏度下攪拌24小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，加水（10 毫升）淬滅，乙酸乙酯（30 毫升 ×3）萃取，有機相合併無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到39.0 毫克化合物79-15。
MS (ESI) M/Z: 523.5 [M+H] +。
步驟N：在常溫下，將2-(2,6-二羰基呱啶-3-基)-5-(4-(呱啶-4-基甲基)呱嗪-1-基)異二氫吲哚-1,3-二酮 (55.0 毫克，82.0 微莫耳)，吡啶 (30.0 毫克，0.4 毫莫耳) 溶於甲醇 (4 毫升)。將反應液加熱至60攝氏度攪拌10分鐘。反應液冷卻至室溫，將化合物79-15 (33.0 毫克，63.0微莫耳) 和2-甲基吡啶硼烷 (54.0 毫克，0.5 毫莫耳) 加入到反應液中，經氮氣置換後在常溫下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失，將反應液濃縮，所得混合物用製備色譜純化得到6.6 毫克2-氯-N-(2-(2-(4-((4-(2-(2,6-二羰基呱啶-3-基)-1,3-二羰基異二氫吲哚-5-基)呱嗪-1-基)甲基)呱啶-1-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氫-6H-吡唑并[1,5-a]吡咯並[2,3-e]嘧啶-6-甲醯胺（化合物79）。
MS (ESI) M/Z: 946.9 [M+H] +。
1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.08 (s, 1H), 9.30 (s, 1H), 8.40 - 8.34 (m, 2H), 7.68 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.33 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.28-7.21 (m, 1H), 7.04 (s, 1H), 5.12-5.05 (m, 1H), 4.82 (d, J= 11.4 Hz, 1H), 4.59 - 4.51 (m, 2H), 4.25 (d, J= 11.4 Hz, 1H), 3.40 - 3.35 (m, 4H), 3.00 - 2.85 (m, 3H), 2.84 - 2.70 (m, 2H), 2.68 - 2.53 (m, 2H), 2.44 - 2.37 (m, 4H), 2.13 - 2.06 (m, 3H), 2.06 - 2.00 (m, 2H), 1.98 (s, 3H), 1.68 - 1.57 (m, 2H), 1.54 - 1.36 (m, 1H), 1.13 - 0.99 (m, 2H).
實施例80：
N 1-(2-((3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-N7-((S,4R)-4-羥基-2-((R)-2-羥基-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲醯基)吡咯烷)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)庚二醯胺
反應流程：
實施例流程：
步驟A：將化合物80-1（5.0 克, 18.0 毫莫耳）溶於85%的乙醇水溶液（100 毫升）中，在室溫下加入甲酸鈉（3.7 克, 54.0 毫莫耳），反應系統在110攝氏度下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，加入水攪拌半小時，將析出固體過濾出來，凍乾水分，得到3.8 克化合物80-2。
MS (ESI) M/Z: 216.9 [M+H] +。
步驟B：在冰浴條件下，將化合物80-2（3.8 克, 17.8 毫莫耳）溶於二氯甲烷（50 毫升）中，加入咪唑（3.6 克, 53.3 毫莫耳）和4-二甲胺基吡啶（220.0 毫克, 1.8 毫莫耳），最後緩慢加入叔丁基二甲基氯矽烷（3.2 克, 21.3 毫莫耳），反應液在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，加水淬滅，用二氯甲烷（50 毫升 ×3）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（20 毫升）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮，得到粗品藉由矽膠柱層析純化得到2.5 克化合物80-3。
MS (ESI) M/Z: 329.0 [M+H] +。
步驟C：在室溫下，將化合物80-3（2.5 克, 7.6 毫莫耳）和(S)-2-甲基丙烷-2-磺醯胺（1.4 克, 11.4 毫莫耳）溶於四氫呋喃（50 毫升）中，緩慢加入鈦酸四異丙酯（6.5 克, 22.8 毫莫耳），反應溶在80°C下攪拌過夜。LCMS監測顯示原料消失後，加水淬滅，過濾掉析出固體，濾液用乙酸乙酯（50 毫升 ×3）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（50 毫升）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮，得到粗品藉由矽膠柱層析純化得到1.8 克化合物80-4。
MS (ESI) M/Z: 432.0 [M+H] +。
步驟D: 在乾冰丙酮浴下，將化合物80-4（1.8 克, 4.2 毫莫耳）溶於四氫呋喃（30.0 毫升）中，緩慢加入硼烷的四氫呋喃溶液（12.5 毫升, 12.5 毫莫耳）後，在低溫下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，在低溫下緩慢滴加甲醇淬滅，用乙酸乙酯（30 毫升 ×3）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（20 毫升）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮，得到1.8 克化合物80-5。
MS (ESI) M/Z: 434.1 [M+H] +。
步驟E: 在室溫下，將化合物80-5（1.8 克, 4.2 毫莫耳）溶於二氯甲烷（20 毫升）中，緩慢滴加入鹽酸的二氧六環溶液（10.4 毫升, 10.4 毫莫耳），反應溶液在室溫下攪拌1小時後，將反應液減壓濃縮，溶於乙腈（20 毫升）中，冰浴條件下，加入三乙胺（2.1 克, 20.8 毫莫耳）和二碳酸二叔丁酯（1.8 克, 8.3 毫莫耳），反應液在室溫下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，加水稀釋，用乙酸乙酯（20 毫升 ×3）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（20 毫升）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮，得到粗品藉由矽膠柱層析純化得到800.0 毫克化合物80-6。
MS (ESI) M/Z: 217.9 [M+H] +。
步驟F: 在室溫下，將化合物80-6（800.0 毫克, 2.5 毫莫耳）和4-甲基噻唑（497.0 毫克, 5.0 毫莫耳）溶於N,N-二甲基乙醯胺（10.0 毫升）中，加入乙酸鉀（496.0 毫克, 5.0 毫莫耳）和醋酸鈀（68.0 毫克, 0.3 毫莫耳），反應液升溫至120攝氏度攪拌3小時。LCMS監測顯示反應完成，反應液加水稀釋，用乙酸乙酯（30 毫升 ×3）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（20 毫升）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮，得到粗品藉由矽膠柱層析純化得到300.0 毫克化合物80-7。
MS (ESI) M/Z: 334.9 [M+H] +。
步驟G：在室溫條件下，將化合物80-7（300.0 毫克, 0.9 毫莫耳）溶於二氯甲烷（5 毫升）中，加入鹽酸二氧六環（1.2 毫升），反應液在室溫下攪拌2 小時。LCMS監測顯示原料消失後， 反應液直接減壓濃縮，得到300.0 毫克化合物80-8。
MS (ESI) M/Z: 235.0 [M+H] +。
步驟H：在室溫下，將化合物80-8（300.0 毫克, 1.1 毫莫耳）和(2S,4R)-1-((R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基吡咯烷-2-羧酸（573.0 毫克, 1.7 毫莫耳）溶於二氯甲烷（15 毫升）中，將三乙胺（333.0 毫克, 3.3 毫莫耳）和2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（646.0 毫克, 1.7 毫莫耳）加入其中，該反應系統室溫下攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，系統溶液加水稀釋，用二氯甲烷（20 毫升 ×3）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（20 毫升）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮，得到的粗品藉由矽膠柱層析純化得到400.0 毫克化合物80-9。
MS (ESI) M/Z: 560.9 [M+H] +。
步驟I: 在室溫下，將化合物80-9（400.0 毫克, 0.7 毫莫耳）溶於二氯甲烷（5 毫升）中，緩慢滴加入三氟乙酸（2 毫升），反應液在室溫下攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，直接減壓濃縮，得到400.0 毫克粗品化合物80-10。
MS (ESI) M/Z: 461.0 [M+H] +。
步驟J: 在室溫下，將粗品化合物80-10（400.0 毫克, 0.7 毫莫耳）和7-(叔丁氧基)-7-氧代庚酸（233.0 毫克, 1.1 毫莫耳）溶於二氯甲烷（15.0 毫升）中，將三乙胺（218.0 毫克, 2.2 毫莫耳）和2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（418.0 毫克, 1.1 毫莫耳）加入其中，該反應系統室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，系統溶液加水稀釋，用二氯甲烷（20 毫升 ×3）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（20 毫升）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮，得到的粗品藉由矽膠柱層析純化得到150.0 毫克化合物80-11。
MS (ESI) M/Z: 659.2 [M+H] +。
步驟K: 在室溫下，將化合物80-11（150.0 毫克, 0.2 毫莫耳）溶於二氯甲烷（5 毫升）中，緩慢滴加入三氟乙酸（2.0 毫升），反應液在室溫下攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，直接減壓濃縮，得到150.0 毫克粗品化合物80-12。
MS (ESI) M/Z: 603.2 [M+H] +。
步驟L: 在室溫下，將粗品化合物80-12（150.0 毫克, 0.3 毫莫耳）和(S)-1-(2-(2-氨基乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲鹽酸鹽（化合物80-13, 127.0 毫克, 0.3 毫莫耳）溶於N,N-二甲基甲醯胺（10.0 毫升）中，將二異丙基乙基胺（97.0 毫克, 0.8 毫莫耳）和1-乙基-3-(3-二甲基丙胺)碳二亞胺（68.0 毫克, 0.4 毫莫耳）和1-羥基苯并三氮唑（81.0 毫克, 0.4 毫莫耳）加入其中，該反應系統室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，系統溶液加水稀釋，用乙酸乙酯（20 毫升 ×3）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（20 毫升）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮，得到的粗品藉由反相純化得到51.5 毫克N 1-(2-((3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)-N7-((S,4R)-4-羥基-2-(((R)-2-羥基-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲醯基)吡咯烷)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)庚二醯胺（化合物80）。
MS (ESI) M/Z: 529.7 [M/2+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 9.33 (s, 1H), 9.09 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.69 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.37 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.15 - 8.12 (s, 1H), 7.81 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.44 – 7.38 (m, 4H), 6.94 (s, 1H), 5.41-5.36 (m, 1H), 5.11-5.10 (m, 1H), 4.89-4.84 (m, 1H), 4.77-4.74 (m, 1H), 4.51 – 4.43 (m, 4H), 4.28 (s, 1H), 3.60 – 3.57 (m, 3H), 3.55-3.52 (m, 2H), 3.26 (s, 3H), 2.46 (s, 3H), 2.27 – 2.18 (m, 1H), 2.10-2.07 (m, 3H), 2.03 – 1.98 (m, 1H), 1.85 – 1.76 (m, 1H), 1.59 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.53 – 1.41 (m, 4H), 1.24 – 1.17 (m, 3H), 0.92 (s, 9H).
實施例81：
(2S,4R)-N-(2-(2-(1-(2-((3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)呱啶-4-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟環丙烷-1-甲醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基吡咯烷-2-甲醯胺
反應流程：
實施例流程：
步驟A：在氮氣保護下，將化合物81-1（10.0 克, 50.5 毫莫耳）, 4-甲基噻唑（10.0 克, 101.0 毫莫耳）, 乙酸鉀（9.9 克, 101.0 毫莫耳）和醋酸鈀（0.11 克，0.51 毫莫耳）溶於超乾N,N-二甲基乙醯胺（100 毫升）中,該反應液加熱至150 攝氏度下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液冷卻至室溫，加入水（100 毫升）淬滅，用乙酸乙酯（100 毫升 ×3）萃取，合併有機相，用飽和食鹽水（100 毫升 ×2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到6.7 克化合物81-2。
MS (ESI) M/Z: 216.9 [M+H] +。
步驟B：在氮氣保護下，將化合物81-2（6.7 克, 31.0 毫莫耳），溶於超乾四氫呋喃（500 毫升）中，降至0 攝氏度後，緩慢滴加四氫鋁鋰的四氫呋喃溶液（93 毫升, 1莫耳）,該反應液攪拌5分鐘後，在氮氣保護下，加熱至50 攝氏度攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液冷卻至室溫，在冰水浴條件下緩慢加入十水合硫酸鈉（12.0 克），攪拌1小時後過濾，濾餅用混合溶劑（二氯甲烷/甲醇=10:1）(100 毫升 ×4）洗滌，濾液合併，減壓濃縮，得到2.5 克化合物81-3。
MS (ESI) M/Z: 221.1 [M+H] +。
步驟C：在氮氣保護下，將(2S,4R)-1-((S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3,3-二甲基丁醯)-4-羥基吡咯烷-2-羧酸（3.9 克, 11.4 毫莫耳）, 化合物81-3（2.5 克,11.4 毫莫耳）, 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽（2.4 克, 12.5 毫莫耳）和1-羥基苯并三唑（1.8 克，13.6 毫莫耳）溶於N,N-二甲基甲醯胺（100 毫升）中,反應液降至0攝氏度後，緩慢滴加N,N-二異丙基乙胺（4.4 克, 34.1 毫莫耳），該反應液升至室溫並攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入冰水（100 毫升）淬滅，用乙酸乙酯（300 毫升 ×3）萃取，合併有機相，用飽和食鹽水（200 毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到2.6 克化合物81-4。
MS (ESI) M/Z: 547.2 [M+H] +。
步驟D: 室溫條件下，將化合物81-4（2.6 克, 4.8 毫莫耳）溶於二氯甲烷（21 毫升）中，緩慢滴加三氟乙酸（7 毫升），該反應液在室溫下攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，用二氯甲烷稀釋，減壓濃縮得到2.0 克化合物81-5。
MS (ESI) M/Z: 447.2 [M+H] +。
步驟E：在氮氣保護和0 攝氏度下，將化合物81-5（2.0 克, 4.5 毫莫耳）, 1-氟環丙烷-1-羧酸（514.8 毫克, 5.0 毫莫耳）, 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽（945.5 毫克, 4.95 毫莫耳）和1-羥基苯并三唑（729.0 毫克，5.4 毫莫耳）溶於N,N-二甲基甲醯胺（50 毫升）中，緩慢滴加N,N-二異丙基乙胺（2.3 克, 18.0 毫莫耳），該反應液升至室溫下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入冰水（50 毫升）淬滅，用乙酸乙酯（200 毫升 ×4）萃取，合併有機相，用飽和食鹽水（150 毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到1.5 克化合物81-6。
MS (ESI) M/Z: 533.3 [M+H] +。
步驟F: 在0攝氏度下向化合物81-7（5.0 克, 21.8 毫莫耳）的二氯甲烷（60 毫升）溶液中添加四溴化碳（11.6 克, 34.9 毫莫耳）和三苯基膦（6.9 克, 26.2 毫莫耳）。在室溫下將混合物攪拌17小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到4.8 克化合物81-8。
MS (ESI) M/Z: 292.1 [M+H] +。
步驟G: 向化合物81-8（300.0 毫克, 1.0 毫莫耳）的丙酮溶液（10 毫升）中加化合物81-6（547.9 毫克, 1.0 毫莫耳）碳酸鉀（568.5 毫克, 4.1 毫莫耳）和四丁基碘化銨（77.5 毫克, 0.2 毫莫耳）。將反應液升溫至60攝氏度攪拌17小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到180.0 毫克化合物81-9。
MS (ESI) M/Z: 744.3 [M+H] +。
步驟H:在氮氣保護下，將化合物81-9 (180.0 毫克, 240.0 微莫耳) 溶於三氟醋酸(1 毫升) 和二氯甲烷(8 毫升) 中，反應液在室溫下攪拌4小時。LCMS監測顯示原料消失後，過濾，減壓濃縮，得到140.0 毫克化合物81-10。
MS (ESI) M/Z: 644.2 [M+H] +。
步驟I: 在氮氣保護下，將化合物81-10 (140.0 毫克, 220.0 微莫耳)溶於混合溶劑N,N-二甲基甲醯胺（3 毫升）和四氫呋喃（3 毫升)中，加入三乙胺（66.7 毫克, 0.7 毫莫耳）室溫攪拌0.5 小時. 然後加入乙酸(0.1 毫升) 和四異丙氧基鈦(0.2 毫升)和(S) -1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-氧乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲（103.8 毫克, 0.2 毫莫耳），該系統在常溫下攪拌0.5小時，加入三乙醯氧基硼氫化鈉(93.3 毫克, 0.4 毫莫耳)，該反應液在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到24.0毫克 (2S,4R)-N-(2-(2-(1-(2-((3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)呱啶-4-基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟環丙烷-1-甲醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基吡咯烷-2-甲醯胺（化合物81）。
MS (ESI) M/Z: 1101.2 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 9.31 (s, 1H), 9.06 (s 1H), 8.98 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.69 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.52-8.49 (m, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.39 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.30 - 7.27 (m, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 5.39 - 5.34 (m, 1H), 4.64 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 4.58 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.51 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 4.35 – 4.18 (m, 3H), 4.08 (d, J= 6.0 Hz, 2H), 3.65 – 3.58 (m, 2H), 3.24 (s, 3H), 2.98 – 2.93 (m, 2H), 2.81-2.78 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.12 – 2.03 (m, 3H), 1.93 – 1.89 (m, 1H), 1.72 – 1.66 (m, 4H), 1.57 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.39 – 1.35 (m, 2H), 1.30 – 1.15 (m, 5H), 0.94 (s, 9H).
實施例82：
(2S,4R)-N-(2-((1-(2-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)呱啶-4-基)甲氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-(((S -2-(1-氟環丙烷-1-甲醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基吡咯烷-2-甲醯胺
反應流程：
實施例流程：
化合物82-1的製備方法參考實施例81。
步驟A: 在氮氣保護下，將(2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟環丙烷-1-甲醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-(呱啶-4-基甲氧基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺三氟乙酸鹽(化合物82-1, 95.0 毫克, 130.0 微莫耳)溶於混合溶劑N,N-二甲基甲醯胺（1.5 毫升）和四氫呋喃（1.5 毫升）中，加入三乙胺（40.0 毫克, 0.4 毫莫耳）並於室溫攪拌三十分鐘，然後加入乙酸(0.1 毫升)和(S)-1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-氧乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲（62.0 毫克, 130.0 微莫耳），再將三乙醯氧基硼氫化鈉(55.0 毫克, 260.0 微莫耳) 加入上述反應液，該反應液在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，加入碳酸氫鈉水溶液，用乙酸乙酯（10 毫升）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾後旋乾。所得混合物用薄層矽膠板純化得到35.0 毫克(2S,4R)-N-(2-((1-(2-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-基)脲基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)呱啶-4-基)甲氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-(((S -2-(1-氟環丙烷-1-甲醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基吡咯烷-2-甲醯胺(化合物82)。
MS (ESI) M/Z: 1086.2 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.27 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.69 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.52 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.41 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.33 – 7.25 (m, 1H), 7.00 – 6.92 (m, 3H), 5.38 (q, J = 6.6 Hz, 1H), 5.18 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 4.67 (s, 2H), 4.59 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.51 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 4.38 – 4.26 (m, 2H), 4.19 (dd, J = 16.6, 5.6 Hz, 1H), 3.90 (s, 2H), 3.66 – 3.56 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.01 (s, 2H), 2.82 (s, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.18 – 2.01 (m, 3H), 1.96 – 1.87 (m, 1H), 1.79 (s, 3H), 1.58 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.41 – 1.27 (m, 6H), 0.94 (s, 9H).
實施例83：
(2S,4 R)-N-((S)-3-((1-(2-(3-(3-(3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)尿嘧啶)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)呱啶-4-基)甲基)氨基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-3-氧丙基)-1-((S)-2-(1-氟環丙烷-1-甲醯胺)-3,3-二甲基丁醯基) -4-羥基吡咯烷-2-甲醯胺
反應流程：
實施例流程：
步驟A：室溫下，將化合物83-1（5.0 克, 14.5 毫莫耳）溶於四氫呋喃（50 毫升）和甲醇（20 毫升）中，系統降溫至0-5攝氏度，滴加三甲基矽重氮甲烷（2.5 克, 21.8 毫莫耳），室溫攪拌3小時。LCMS顯示原料反應完全。反應液加碳酸氫鈉溶液 (150 毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (150 毫升 ×2) 萃取。合併有機相，用水(150 毫升)洗滌，飽和食鹽水(150 毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物經矽膠柱層析純化得到5.1克化合物83-2。
MS (ESI) M/Z: 380.2 [M+Na] +。
步驟B：室溫下，將化合物83-2（4.0 克，11.2 毫莫耳）溶於N,N-二甲基甲醯胺(50 毫升)中，加入醋酸鉀（2.20 克, 22.4 毫莫耳）和醋酸鈀（126.0 毫克, 0.6 毫莫耳），再加入4-甲基噻唑（4.4 克, 44.8 毫莫耳），反應液升溫至90 攝氏度攪拌3小時。LCMS監測顯示原料反應完全，反應液降至室溫，加入碳酸氫鈉溶液（150 毫升）淬滅，加乙酸乙酯（200 毫升） 萃取，水（150 毫升）洗，飽和食鹽水（150 毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，所得粗品經矽膠柱層析純化得到2.0 克化合物83-3。
MS (ESI) M/Z: 377.0 [M+H] +。
步驟C：室溫下，將化合物83-3（2.0 克, 5.3 毫莫耳）溶於二氯甲烷（30 毫升），將三氟乙酸（10 毫升）加入上述反應液，室溫攪拌2小時。LCMS監測顯示原料反應完全，反應液減壓濃縮，得到1.5 克化合物83-4。
MS (ESI) M/Z: 277.0 [M+H] +。
步驟D：室溫下，將化合物83-4（1.5 克, 5.3 毫莫耳）和化合物83-5（1.7 克, 5.3 毫莫耳）溶於N,N-二甲基甲醯胺(30 毫升)中，加入1-羥基苯并三唑（0.9 克, 6.4 毫莫耳）和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽（1.1 克, 5.8 毫莫耳），再加入N,N-二異丙基乙胺（1.4 克, 10.6 毫莫耳），室溫下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料反應完全。反應液加入碳酸氫鈉溶液（150 毫升）淬滅，加乙酸乙酯（200 毫升） 萃取，水（150 毫升）洗，飽和食鹽水（150 毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，所得粗品經矽膠柱層析純化得到1.8 克化合物83-6。
MS (ESI) M/Z: 589.3 [M+H] +。
步驟E：將化合物83-6（1.8 克, 3.1 毫莫耳）溶於四氫呋喃(15 毫升)和水(15 毫升)中，冰水浴下加入氫氧化鋰一水合物（257.0 毫克, 6.1 毫莫耳），冰水浴下攪拌3小時。LCMS監測顯示原料反應完全。反應液加水（35 毫升）於冰水浴中滴加鹽酸調PH至2-3，再加入乙酸乙酯（100 毫升）萃取，有機相用飽和食鹽水（50 毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，所得粗品經反相純化得到700.0 毫克化合物83-7。
MS (ESI) M/Z: 575.1 [M+H] +。
步驟F: 在0攝氏度條件下，將(S)-1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-氧乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲（250.0 毫克, 0.5 毫莫耳）溶於甲醇(5.0 毫升)中，再加入醋酸（0.2 毫升）和叔丁基(呱啶-4-甲基)氨基甲酸酯（化合物83-8, 100.0 毫克, 0.5 毫莫耳），最後加入氰基硼氫化鈉（50.0 毫克, 0.8 毫莫耳），該反應系統室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，加入飽和碳酸氫鈉水溶液中和，乙酸乙酯（30 毫升 ×2）萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水（50 毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到的粗品藉由薄層矽膠板分離得到170.0 毫克化合物83-9。
MS (ESI) M/Z: 670.9 [M+H] +。
步驟 G：在室溫條件下，將化合物83-9（170.0 毫克, 0.3 毫莫耳）溶於二氯甲烷(2 毫升）和鹽酸二氧六環（4 莫耳, 5 毫升）混合溶劑中，溶液在室溫下攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，直接濃縮得到120.0 毫克化合物83-10。
MS (ESI) M/Z: 571.2 [M+H] +。
步驟 H：在氮氣保護的條件下，將化合物83-10（50.0 毫克, 87.0 微莫耳）溶於二氯甲烷 (5 毫升) 中，加入化合物83-7 (50.0 毫克, 87.0微莫耳), N,N-二異丙基乙胺(34.0 毫克, 0.3 毫莫耳), 1-羥基苯并三唑(18.0 毫克, 130.0 微莫耳) 和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(50.0 毫克，0.3 毫莫耳)。該反應液在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液中加入二氯甲烷 (20 毫升) 稀釋，有機相用飽和食鹽水 (50 毫升) 洗滌，無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得混合物藉由製備色譜純化得到46.2 毫克(2S,4R)-N-((S)-3-((1-(2-(3-(3-(3-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)尿嘧啶)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)乙基)呱啶-4-基)甲基)氨基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-3-氧丙基)-1-((S)-2-(1-氟環丙烷 -1-甲醯胺) -3,3-二甲基丁醯基) -4-羥基吡咯烷-2-甲醯胺（化合物83）。
MS (ESI) M/Z: 1128.0 [M+H] +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 9.26 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.68 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.56 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.22 – 8.15 (m, 1H), 7.84 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 7.42 – 7.31 (m, 4H), 7.25 – 7.23 (m, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.38 (q, J= 6.8 Hz, 1H), 5.18 - 5.12 (m, 2H), 4.58 - 4.56 (m, 3H), 4.43 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 4.27 (s, 1H), 3.61 - 3.54 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 2.92 - 2.90 (m, 1H), 2.80 (s, 2H), 2.79 - 2.73 (m, 3H), 2.72 - 2.66 (m, 2H), 2.59 - 2.57 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.06 - 2.00 (m, 1H), 1.88 - 1.79 (m, 2H), 1.76 – 1.69 (m, 1H), 1.58 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 1.42 - 1.32 (m, 4H), 1.22 - 1.17 (m, 3H), 0.96 (s, 9H).
實施例84：
(2S,4R)-N-((S)-3-(4-(2-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1, 5-a]嘧啶-6-基)脲)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧)乙基)呱嗪-1-基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-3-氧代丙基)-1-((S)-2-(1-氟環丙烷-1-甲醯胺)-3,3-二甲基丁醯)-4-羥基吡咯烷-2-甲醯胺
反應流程：
實施例流程：
化合物84-4的製備方法參考實施例83。
步驟A: 在氮氣保護下，將三乙醯氧基硼氫化鈉（140.0 毫克, 0.7 毫莫耳）加到 (S)-1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-氧代乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3)脲（200 毫克, 0.4 毫莫耳）和化合物84-1（78.8 毫克, 0.4 毫莫耳）的1,2-二氯乙烷（2 毫升）的溶液後，滴加乙酸（0.2 毫升），並在室溫下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成後，加入二氯甲烷（30 毫升）和水（30 毫升），收集有機相乾燥並濃縮，所得粗品藉由矽膠柱層析純化後得到198.0 毫克化合物84-2。
MS (ESI) M/Z: 643.0 [M+H] +。
步驟 B：將化合物84-2 (198.0 毫克, 0.3 毫莫耳)和三氟醋酸（1 毫升）加到二氯甲烷（5 毫升）中。在室溫下攪拌1小時。LCMS顯示反應完全。將反應液濃縮後用反相純化得到110.0 毫克化合物84-3。
MS (ESI) M/Z: 543.1 [M+H] +。
步驟 C：將化合物84-3（35.0 毫克, 70.0 微莫耳）和(S)-3-((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟環丙烷-1-甲醯胺)-3,3-二甲基丁醯)-4-羥基吡咯烷-2-甲醯胺)-3-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)丙酸（化合物84-4, 44.2 毫克, 70.0 微莫耳）溶於二氯甲烷（4 毫升）中。在0攝氏度下依次加入二異丙基乙基胺（45.0 毫克, 0.4 毫莫耳）、1-羥基苯并三唑（14.2 毫克, 105.0微莫耳）和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽（20.0 毫克, 105.0微莫耳），加料完畢，升至室溫攪拌3小時。LCMS顯示反應完全，加入二氯甲烷（10 毫升）和水（40 毫升）進行洗滌後收集有機相。用飽和食鹽水（20 毫升）洗滌後用無水硫酸鈉固體進行乾燥，過濾濃縮，所得粗品用反相純化得到15.0 毫克產品(2S,4R)-N-((S)-3-(4-(2-(3-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑[1, 5-a]嘧啶-6-基)脲)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧)乙基)呱嗪-1-基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-3-氧代丙基)-1-((S)-2-(1-氟環丙烷-1-甲醯胺)-3，3-二甲基丁醯)-4-羥基吡咯烷-2-甲醯胺（化合物84）。
MS (ESI) M/Z: 1099.3 [M+H] +。
1H-NMR(400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 9.26 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.50 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.43 – 7.38 (m, 3H), 7.28 – 7.21 (m, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.39 (q, J= 6.4 Hz, 1H), 5.24 – 5.08 (m, 2H), 4.64 – 4.62 (m, 2H), 4.56 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 4.44 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 4.31 – 4.23 (m, 1H), 3.62 – 3.32 (m, 5H), 3.25 (s, 3H), 2.88 – 2.72 (m, 5H), 2.44 (s, 3H), 2.39 – 2.29 (m, 2H), 2.29 – 2.19 (m, 1H), 2.08 – 2.00 (m, 1H), 1.80 – 1.72 (m, 1H), 1.57 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.39 – 1.30 (m, 2H), 1.13 – 1.18 (m, 4H), 0.94 (s, 9H).
實施例85：
1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(9-((1-(2,6-二羰基呱啶-3-基)-3-甲基-2-羰基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)氨基)-3-氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲
反應流程：
實施例流程：
步驟A：將化合物85-1 (900.0 毫克，3.4 毫莫耳)，(2,4-二甲氧苯基)甲胺 (675.0 毫克，4.0 毫莫耳)，三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.1 克，5.1 毫莫耳) 和醋酸 (141.0 毫克，2.4 毫莫耳) 溶於1,2-二氯乙烷 (15 毫升) 中。反應系統經氮氣置換3次，在室溫下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液用水 (50毫升) 淬滅，乙酸乙酯 (50毫升×3) 萃取。合併有機相，用飽和食鹽水 (50毫升×3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到1.4 克化合物85-2。
MS (ESI) M/Z: 419.2 [M+H] +。
步驟B：將化合物85-2 (700.0 毫克，1.7 毫莫耳)，氫氧化鈀 (150.0 毫克)，鈀碳 (150.0 毫克) 溶於甲醇 (10 毫升)。反應系統經氫氣置換3次後，反應液升溫至60攝氏度攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液冷卻至室溫，過濾濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到450.0 毫克化合物85-3。
MS (ESI) M/Z: 269.2 [M+H] +。
步驟C：將化合物85-3 (450.0 毫克，1.7 毫莫耳)，4-溴-3-甲基-1-((2-(三甲基甲矽烷基)乙氧基)甲基)-1,3-二氫-2H-苯并[d]咪唑-2-酮 (460.0 毫克，1.3 毫莫耳)，三二亞苄基丙酮二鈀 (118.0 毫克，130.0 微莫耳)，2-雙環已基膦-2 ',6'-二異丙氧基聯苯 (120.0 毫克，260.0 微莫耳) 和叔丁醇鈉 (372.0 毫克，3.9 毫莫耳) 溶於1，4-二氧六環(8 毫升)溶液中。將反應液氮氣置換3分鐘，然後置於微波反應器中，升溫至100攝氏度攪拌1小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液冷至室溫，反應液加入水 (30毫升)，乙酸乙酯 (30毫升 ×3) 萃取，合併有機相，用飽和食鹽水 (30毫升 ×3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到480.0 毫克化合物85-4。
MS (ESI) M/Z: 545.4[M+H] +。
步驟D：將化合物85-4 (480.0 毫克，0.9 毫莫耳) 溶於四丁基氟化銨 (1 莫耳,10 毫升) 中。反應液升溫至70攝氏度，攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液冷至室溫，減壓濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到170.0 毫克化合物85-5。
MS (ESI) M/Z: 415.6 [M+H] +。
步驟E：將化合物85-5 (170.0 毫克，0.4 毫莫耳) 溶於四氫呋喃 (10毫升) 溶液中，在0攝氏度下加入叔丁醇鉀 (1 莫耳，1 毫升)，室溫下攪拌10分鐘，加入1-(4-甲氧苄基)-2,6-二羰基呱啶-3-基三氟甲磺酸  (187.0 毫克，0.5 毫莫耳)，升溫至60攝氏度攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液冷卻至室溫，反應液加入水 (10毫升)淬滅，乙酸乙酯 (30毫升 ×3) 萃取，合併有機相，用飽和食鹽水 (10毫升 ×3) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到110.0 毫克化合物85-6。
MS (ESI) M/Z: 646.9 [M+H] +。
步驟F：將化合物85-6 (110.0 毫克，170 微莫耳) 溶於混合溶劑二氯甲烷（3 毫升）和三氟乙酸（1 毫升）中，反應液在室溫下攪拌2小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓濃縮，得到50 毫克化合物85-7。
MS (ESI) M/Z: 546.2 [M+H] +。
步驟G：將化合物85-7 (50.0 毫克，65.0 微莫耳)，吡啶 (30.7 毫克，0.4 毫莫耳) 溶於甲醇 (5 毫升)，在室溫下攪拌反應10分鐘，將(S)-1-(2-氯-7-(1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-羰基乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲 (30.5 毫克， 65.0 微莫耳) 和2-甲基吡啶硼烷 (55.3 毫克，0.5 毫莫耳) 加入到反應液中，經氮氣置換後在常溫下攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，反應液加入水 (10毫升)淬滅，乙酸乙酯 (20毫升 ×3) 萃取，合併有機相，用飽和食鹽水 (10毫升) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，所得混合物用矽膠柱層析純化得到25.0 毫克化合物85-8。
MS (ESI) M/Z: 1002.6 [M+H] +。
步驟H：將化合物85-8 (25.0 毫克，25.0 微莫耳) 溶於混合溶劑三氟甲磺酸（1 毫升）和三氟乙酸（3 毫升）。反應系統經氮氣置換後，反應液升溫至50攝氏度攪拌16小時。LCMS監測顯示原料消失後，將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，所得混合物用製備色譜純化得到7.1 毫克1-(2-氯-7-((S)-1-甲氧基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-(2-(2-(9-((1-(2,6-二羰基呱啶-3-基)-3-甲基-2-羰基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-4-基)氨基)-3-氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)乙氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲（化合物85）。
MS (ESI) M/Z: 883.0 [M+H] +。
1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.07 (s, 1H), 9.37 (s, 1H), 9.15 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.79 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 5.44 - 5.39 (m, 1H), 5.32 - 5.28 (m, 1H), 4.91 - 4.80 (m, 2H), 3.63 (s, 3H), 3.31 - 3.12 (m, 8H), 2.96 - 2.81 (m, 1H), 2.74 - 2.59 (m, 2H), 2.16 - 1.93 (m, 4H), 1.85 - 1.77 (m, 2H), 1.65 - 1.55 (m, 5H), 1.54 - 1.36 (m, 6H), 1.30 - 1.20 (m, 2H).
生物學測試評價
活细胞中蛋白實时定量检测實驗
評價本發明化合物對MALT1蛋白的降解作用
本實驗採用HiBiT蛋白標記技術方法在MALT1-HiBiT 293T細胞中測試PROTAC化合物對MALT1的降解作用，並得出化合物降解MALT1的半數降解效應濃度DC 50。
1. 實驗材料
HiBiT空載體及 檢測發光底物Nano-Glo Endurazine（100×）購自 Promega 公司。
MALT1-HiBiT 293T穩轉細胞由本公司構建。
RPMI 1640培養基，胎牛血清 (FBS) ，青黴素-鏈黴素(Penicillin-Streptomycin)購自 GIBCO。
2.實驗方法
1) 按照每孔 150000個細胞的密度將 MALT1-HiBiT 293T細胞接種於 96 孔培養板，每孔 100 μL培養液。
2) Day 0：將培養板置於 細胞培養箱(37 ℃，5％CO2)培養過夜 。
3) Day 1：製備3×Nano-Glo Endurazine培養液，每50 μL 培養液加入1.5μL的Nano-Glo Endurazine試劑，混合均勻。
4) 向接種MALT1-HiBiT 293T細胞的96 孔培養板中每孔加入50μL 的3×Nano-Glo Endurazine培養液，終體積為150μL。
5) 使用 TECAN D300e超微量加樣儀向培養板細胞中加入 150 nL梯度稀釋的待測化合物，DMSO終濃度為 0.1%。空白對照加入每孔 150 nL的 DMSO。
6) Spark 酶標儀 (瑞士 TECAN公司) 檢測不同時間點生物發光訊號。
7) 使用GraphPad Prism 6 軟體進行資料分析，得出PROTAC化合物的DC 50。除非特別說明，否則DC 50均表示在加入化合物後8小時的DC 50。
3. 實驗結果
本發明化合物對MALT1蛋白的降解作用活性結果見表1。
表 1MALT1蛋白的降解活性
化合物 MALT1DC50 (nM) 化合物 MALT1DC50 (nM)
化合物 1 A 化合物 2 A
化合物 3 B 化合物 4 A
化合物 5 B 化合物 6 B
化合物 7 C 化合物 8 B
化合物 9 B 化合物 12 C
化合物 13 C 化合物 14 C
化合物 15 C 化合物 16 A
化合物 18 A 化合物 28-P1 B
化合物 29 B 化合物 30 A
化合物 31 A 化合物 32 A
化合物 33 A 化合物 34 B
化合物 36 B 化合物 37 A
化合物 38 A 化合物 39 A
化合物 40 A 化合物 41 A
化合物 42-P1 A 化合物 43 A
化合物 44 A 化合物 45 A
化合物 46 A 化合物 48 B
化合物 49 A 化合物 50 A
化合物 51 A 化合物 52 A
化合物 53 A 化合物 54 A
化合物 56 A 化合物 57 B
化合物 58 A 化合物 59 A
化合物 60 A 化合物 61 A
化合物 62 A 化合物 63 A
化合物 64 A 化合物 65 A
化合物 66 A 化合物 67 A
化合物 68 A 化合物 69 A
化合物 70 A 化合物 71 A
化合物 72 A 化合物 73 A
化合物 74 A 化合物 75 A
化合物 76 A 化合物 77 A
化合物 78 A 化合物 79 A
化合物 80 B 化合物 81 A
化合物 82 B 化合物 83 B
化合物 84 B 化合物 85 A
註：本發明化合物對MALT1蛋白的降解活性DC 50數據如表1中所展示。其中DC 50≤200 nM的化合物用A來標識，200nm＜DC 50≤2 μM之間的化合物用B來標識，2 μM＜DC 50≤10 μM之間的化合物用C來標識，DC50＞10 μM的化合物用D來標識。
資料顯示，本發明化合物對MALT1蛋白具有較好的降解活性。
细胞增殖抑制實驗
評價本發明化合物對彌漫性大 B 細胞淋巴瘤OCI-LY3 細胞增殖抑制作用
本實驗採用CellTiter-Glo（CTG）的方法測試化合物對OCI-LY3細胞增殖的抑制作用，並得出化合物抑制細胞生長半數的濃度 IC 50。
1.實驗材料
IMDM培養基，胎牛血清 (FBS) ，Penicillin-Streptomycin，2-巰基乙醇(2-Mercaptoethanol)購自 GIBCO。
OCI-LY3 細胞購自南京科佰生物科技有限公司。
CellTiter-Glo 試劑，購自 Promega 公司。
2.實驗方法
1) 按照每孔 1000個細胞的密度將 OCI-LY3 細胞接種於 96 孔培養板，每孔 100 μL。
2) Day 0：使用 TECAN D300e超微量加樣儀向培養板細胞中加入 100 nL梯度稀釋的待測化合物，DMSO終濃度為 0.1%，空白對照加入每孔 100 nL的 DMSO。將培養板置於細胞培養箱中培養120小時 (37 ℃，5％CO 2) 。
3) Day 5：每孔加入 50 μL Cell Titer-Glo 試劑，500 rpm震盪2分鐘，室溫避光靜置培養 10 分鐘穩定發光訊號。
4) Envision 酶標儀 (PerkinElmer公司) 檢測化學發光訊號。
5) 使用GraphPad Prism 6 軟體進行資料分析，得出化合物的IC 50。
3. 實驗結果
本發明化合物對彌漫性大 B 細胞淋巴瘤OCI-LY3 細胞增殖抑制結果見表2。
表 2OCI-LY3 細胞增殖抑制結果
化合物 OCI-Ly3 IC 50(nM) 化合物 OCI-Ly3 IC 50(nM)
化合物 1 A 化合物 2 A
化合物 3 B 化合物 4 A
化合物 5 A 化合物 6 A
化合物 7 B 化合物 8 A
化合物 9 B 化合物 10 C
化合物 11 C 化合物 12 C
化合物 13 B 化合物 14 B
化合物 15 C 化合物 16 B
化合物 17 C 化合物 18 A
化合物 19 A 化合物 20 B
化合物 21 A 化合物 22 C
化合物 23 C 化合物 24 C
化合物 25 B 化合物 26 A
化合物 27 B 化合物 28-1 B
化合物 28-2 B 化合物 29 A
化合物 30 B 化合物 31 B
化合物 32 B 化合物 33 B
化合物 34 B 化合物 35 C
化合物 36 C 化合物 37 A
化合物 38 A 化合物 39 A
化合物 40 A 化合物 41 A
化合物 42-P1 B 化合物 42-P2 A
化合物 43 A 化合物 44 B
化合物 45 B 化合物 46 B
化合物 47 A 化合物 48 B
化合物 49 A 化合物 50 A
化合物 51 A 化合物 52 A
化合物 53 A 化合物 54 A
化合物 55 A 化合物 56 A
化合物 57 B 化合物 58 A
化合物 59 A 化合物 60 A
化合物 61 A 化合物 62 A
化合物 63 A 化合物 64 A
化合物 65 A 化合物 66 A
化合物 67 A 化合物 68 A
化合物 69 A 化合物 70 A
化合物 71 A 化合物 72 A
化合物 73 A 化合物 74 A
化合物 75 A 化合物 76 A
化合物 77 A 化合物 78 A
化合物 79 A 化合物 80 A
化合物 81 A 化合物 82 A
化合物 83 B 化合物 84 A
化合物 85 A / /
註：本發明化合物對彌漫性大 B 細胞淋巴瘤OCI-LY3 細胞增殖抑制活性的抑制IC50資料如表1中所展示。其中IC 50≤300 nM的化合物用A來標識，300nM＜IC 50≤1 μM之間的化合物用B來標識，1 μM＜IC 50≤5 μM之間的化合物用C來標識，5 μM＜ IC 50≤10 μM 的化合物用D來標識，IC 50＞10μM的化合物用E來標識。
資料顯示，本發明化合物對彌漫性大 B 細胞淋巴瘤OCI-LY3 細胞具有較好的增殖抑制活性。
以上所述僅為本發明的較佳實施例，並不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內，所做的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明保護的範圍之內。
無
無。
無。

Claims (24)

  1. 一種式（I’）所示的化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽， ( I’) 其中，TGL為結合MALT1靶標配體， 選自 、 、 、 、 、 、 ； 其中，E為結合泛素連接酶的降解決定子，選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 ； 其中，L為接頭，具有式（Ⅱ’）所示結構 （Ⅱ’） B 1為C 1-15亞烴基鏈，其中所述C 1-15亞烴基鏈中的氫原子任選地被1-3個R a取代，所述C 1-15亞烴基鏈中的碳原子任選的被-NR b-、-O-、羰基所替代；R a為C 1-4烷基；R b為H或者C 1-4烷基； B 2為化學鍵、任選被取代的如下基團：C 3-6的環烷基、3-6員雜環烷基、C 7-11螺環烷基、7-11員螺雜環烷基； B 3為化學鍵、C 1-4亞烷基鏈，所述亞烷基鏈中碳原子任選的被-NR b-、-O-、羰基所替代； B 4為化學鍵、任選被取代的如下基團：C 3-6環烷基、3-6員雜環烷基、C 7-11螺環烷基、7-11員螺雜環烷基； B 5為化學鍵、C 1-5亞烷基鏈，所述亞烷基鏈中碳原子任選的被NR c、羰基或氧所替代，R c為H或C 1-4烷基； n 1、n 2、n 3、n 4為0或1。
  2. 如請求項1所述之化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，L具有式（Ⅱ’a）結構： （Ⅱ’a）。
  3. 如請求項1所述之化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，L具有式（Ⅱ’b）結構： （Ⅱ’b）。
  4. 如請求項1所述之化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，L具有式（Ⅱ’c）結構： （Ⅱ’c）。
  5. 如請求項1所述的化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，L具有式（Ⅱ’d）結構： （Ⅱ’d）。
  6. 如請求項1所述之化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，L具有式（Ⅱ’e）結構： （Ⅱ’e）。
  7. 如請求項1所述之化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，L具有式（Ⅱ’f）結構： （Ⅱ’f）。
  8. 如請求項1至7中任一項所述之化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，B 1為C 1-15亞烴基鏈，所述C 1-15亞烴基鏈中氫原子任選地被1-2個R a取代，所述C 1-15亞烴基鏈中碳原子任選2～4個碳原子被-NR b-、-O-、羰基所替代，R a為C 1-4烷基；R b為H或者C 1-4烷基。
  9. 如請求項1至7中任一項所述之化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，B 2選自C 3-6的環烷基、4-6員雜環烷基，其中雜環烷基中含有1-2個N雜原子，所述環烷基、雜環烷基任選被C 1-4烷基取代。
  10. 如請求項1至7中任一項所述之化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，B 2選自C 9-11螺環烷基、7-11員螺雜環烷基，其中所述螺雜環烷基中含有1-2個N雜原子。
  11. 如請求項1至7中任一項所述之化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，B 4為選自C 9-11螺環烷基、7-11員螺雜環烷基，其中所述螺雜環烷基中含有1-2個N雜原子。
  12. 如請求項1至11中任一項所述之化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，R a為甲基。
  13. 如請求項1至12中任一項所述之化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，R b為氫或甲基。
  14. 如請求項1至13中任一項所述之化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，R c為氫。
  15. 如請求項1至14中任一項所述之化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，B 1為 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 。
  16. 如請求項1至15中任一項所述之化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，B 2為 、 、 、 、 、 、 、 、 、 。
  17. 如請求項1至16中任一項所述之化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，B 3為-CH 2-、-CH 2-N(CH 3)-、-CO-、-N(CH 3)-、-(CH 2) 2-。
  18. 如請求項1至17中任一項所述之化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，B 4為 、 、 、 、 、 、 、 、 。
  19. 如請求項1至18中任一項所述之化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，B 5選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 。
  20. 如請求項1至19中任一項所述之化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，L選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 。
  21. 如請求項1至20中任一項所述之化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，所述化合物選自： 。
  22. 一種藥物組合物，其包含如請求項1至21中任一項所述之化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽；及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
  23. 一種如請求項1至21中任一項所述之化合物、或其異構體或其藥學上可接受的鹽及如請求項22所述之藥物組合物在製備治療由MALT1靶點介導的相關疾病之藥物的用途。
  24. 如請求項23所述之用途，其中，所述MALT1靶點介導的相關疾病為細胞異常增殖性疾病； 較佳地，所述細胞異常增殖性疾病為癌症。
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