CN117398307A - 一种真皮层注射长效水光针及其制备与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种真皮层注射长效水光针及其制备与应用，该水光针包含：透明质酸钠和聚酯微球；所述透明质酸钠为分子量为110～300万道尔顿的透明质酸钠和分子量为30～90万道尔顿的透明质酸钠的混合物；所述聚酯微球为聚左旋乳酸微球。本发明解决了现有填充剂不仅填充失效快，而且残留的交联剂形成结节，易引发炎症的问题。本发明采用非交联透明质酸，消除了使用交联剂的安全隐患，采用高分子量透明质酸、低分子量透明质酸以及聚酯微球或微粒的组合，实现了皮肤保水和维持皮肤弹性好的目的，达到了改善肤质，缓解皮肤衰老和刺激胶原蛋白再生的功效，长效填充微细纹效果显著的优势。

Description

一种真皮层注射长效水光针及其制备与应用

技术领域

本发明涉及一种水光针，具体涉及一种真皮层注射长效水光针及其制备与应用。

背景技术

随着年龄增长，人体皮肤受内源性因素和外源性因素综合调控逐渐显现出形态变化和生理性衰减，外在表现为皮肤表皮层变薄，异常色素沉着，皱纹频率增加，皮肤干燥，弹性降低等。随着现代技术的进步和生活质量的提高，越来越多的人选择医学美容手段来改善面部轮廓，抚平较深的静态皱纹，延缓衰老，注射填充材料受到了广泛关注。

目前医美行业广泛选择注射填充材料是玻尿酸(透明质酸钠)，基于其分子中的羟基、羧基和其他极性基团与水分子形成氢键而结合大量水分，具有显著的瞬时填充效果。但由于人体透明质酸酶的存在，外源的透明质酸钠在体内维持时间过短，难以达到长效美容的目的。为了克服这一问题，市场上出现了交联透明质酸钠，如现有产品“乔雅登”、“海薇”和“艾莉薇”等，即采用不同的交联剂使透明质酸钠分子相互连接形成网状结构，从而减缓透明质酸降解速率，但随之而来的问题是交联剂不能被人体吸收，在注入人体后具有极高的过敏反应风险，此外过高的交联度会降低透明质酸钠的亲水性，随之降低其生物相容性，增高免疫反应的风险。聚酯类材料具有良好的生物相容性、可吸收性和低免疫性，其中左旋聚乳酸是经FDA认证的人工合成的生物可降解产品，其在生理环境中可水解成乳酸和二氧化碳，与透明质酸钠不同，聚酯类材料在组织内持续时间可长达3年，具有显著的长效性，但聚酯类材料本身是强疏水性物质，大剂量注射有形成结节的风险，现有技术中常采用助悬剂如羧甲基纤维素钠包裹，但羧甲基纤维素钠非人体内源性物质，且阻碍成纤维细胞迁移，具有组织炎症风险。因此，如何通过工艺设计避免交联剂的缺陷，延长透明质酸填充剂的填充效果，降低聚酯材料的结节和炎症风险，是目前亟需解决的技术问题。

针对上述问题，专利CN109010912 B公开了一种改性的玻尿酸可注射填充材料及其制备方法，将聚乙二醇与玻尿酸通过交联剂EDC/HOBt充分搅拌混匀制备得到聚乙二醇改性的交联透明质酸水凝胶，并添加了山梨糖醇作为稳定剂进行软组织填充，但仍存在交联剂残留，非内源性稳定剂山梨糖醇的风险，以及聚乙二醇在生理环境下降解快的问题。专利CN110339397 B公开了一种不含助悬剂的可注射皮肤填充剂及其制备方法和用途，将渗透压调节剂甘露醇和医用聚酯颗粒以一定比例混合，得到可注射皮肤填充剂，虽然避免了使用助悬剂，但存在显效慢的缺点，无法满足医疗美容见效快的需求，在作为皮肤填充剂时受到了限制。

发明内容

本发明的目的是提供一种真皮层注射长效水光针及其制备与应用，解决了现有填充剂不仅填充失效快，而且残留的交联剂形成结节，易引发炎症的问题。

为了达到上述目的，本发明提供了一种真皮层注射长效水光针，该水光针包含：透明质酸钠和聚酯微球；所述透明质酸钠为分子量为110～300万道尔顿的透明质酸钠和分子量为30～90万道尔顿的透明质酸钠的混合物；所述聚酯微球为聚左旋乳酸微球。

优选地，所述分子量为110～300万道尔顿的透明质酸钠和分子量为30～90万道尔顿的透明质酸钠的质量比为1∶(1～10)。

优选地，所述聚酯微球的粒径为0.5～10μm。

优选地，所述聚酯微球的的分子量为2～20万道尔顿。

优选地，所述透明质酸钠和聚酯微球的质量比为1∶(0.02～0.5)。

本发明提供了一种如所述的真皮层注射长效水光针的制备方法，该方法包含：

(1)将分子量为110～300万道尔顿的透明质酸钠和分子量为30～90万道尔顿的透明质酸钠溶于注射用水中，得到混合溶液；

(2)在500～1500rpm的搅拌速度下，将聚酯微球加到混合溶液中，得到混合体系；

(3)将混合体系充分混匀后冻干后，封装灭菌。

优选地，在步骤(1)中，所述分子量为110～300万道尔顿的透明质酸钠和分子量为30～90万道尔顿的透明质酸钠的总质量与注射用水的体积比为1g∶(100～200)mL。

优选地，在步骤(3)中，所述灭菌为辐照灭菌，辐照的剂量为8～25kGy。

优选地，在步骤(1)中，所述混合体系中的聚酯微球的浓度为0.1～5mg/ml。

本发明提供了一种如所述的真皮层注射长效水光针在作为医美产品中的应用。

本发明的一种真皮层注射长效水光针及其制备与应用，解决了现有填充剂不仅填充失效短，而且残留的交联剂形成结节，易引发炎症的问题，具有以下优点：

1、本发明采用非交联透明质酸，不使用交联剂，避免了交联剂残留的副作用，减少了注射后炎症的反应。

2、本发明采用高分子量透明质酸、低分子量透明质酸以及聚酯微球或微粒的组合(高分子量的透明质酸钠的作用是增加粘度，防止微球沉降聚集；低分子量透明质酸钠起的作用是润滑，调节推注力，注射时好走针；聚酯微球或微粒的作用是维持长效)，实现了皮肤保水和维持皮肤弹性好的目的，达到了长效改善肤质，缓解皮肤衰老和刺激胶原蛋白再生的功效，能够长期填充微细纹且效果显著。

3、本发明本发明制备方法工艺简单，复溶迅速，使用方便，生产效率高，适合大规模化生产。

附图说明

图1为本发明实施例1的聚左旋乳酸微球或微粒的光学显微镜图；

图2为本发明实施例1的聚左旋乳酸微球或微粒的电镜图；

图3为本发明实施例1制得的真皮层注射长效水光针的实物图；

图4为本发明实施例1制得的真皮层注射长效水光针通过30G针头注射器推注的实物图；

图5为本发明实施例1制得的真皮层注射长效水光针注射到大鼠皮下第14天和第90天注射部位的HE染色图；

图6为本发明实施例1制得的真皮层注射长效水光针注射到大鼠皮下第0天，第14天和第90天注射部位的毛囊活性对比图；

图7为本发明实施例1制得的真皮层注射长效水光针注射到大鼠皮下第0天，第14天和第90天注射部位的Masson染色图；

图8为本发明采用对比例1与实施例1制得的水光针治疗皮肤前后局部水分和弹性的变化图；

图9为本发明采用对比例1与实施例1制得的水光针治疗0.5个月、3个月时皮肤的表皮厚度和毛囊个数图；

图10为本发明采用对比例1与实施例1制得的水光针治疗0.5个月、3个月后促进胶原蛋白生成的长效性对比图；

图11为本发明对比例1与实施例1在不同治疗时间后胶原蛋白含量变化图。

图12为本发明对比例4制得的水光针在注射5天、1个月时的炎症反应图；

图13为本发明对比例2制得的水光针及其走针情况图；

图14为本发明实施例1、对比例2制得的水光针在静置30min后的稳定性图；

图15为本发明实施例1、对比例3制得的水光针在注射5天、1个月时的炎症反应图。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

一种真皮层注射长效水光针的制备方法，该方法包含：

(1)将质量比为1∶2的高分子量透明质酸钠(分子量为150万道尔顿)和低分子量透明质酸钠(分子量为70万道尔顿)共溶于120ml注射用水中，得到混合溶液，混合溶液中的透明质酸的总浓度为5mg/ml；

(2)在750rpm搅拌速度下，将平均粒径为3μm的聚左旋乳酸(分子量为20万道尔顿)微球加入步骤(1)的混合溶液中，得到混合体系，混合体系中聚左旋乳酸微球的浓度为1mg/ml；

(3)将步骤(2)得到的混合体系充分混匀后冻干后，封装辐照灭菌，辐照剂量为25kGy，即可得到真皮层注射长效水光针冻干粉；

(4)使用时，将注射用水加入冻干粉中，混合均匀即可注射使用。

对比例1

一种水光针的制备方法与实施例1基本相同，区别在于：

没有步骤(2)。

对比例2

一种水光针的制备方法与实施例1基本相同，区别在于：

在步骤(1)中，不添加高分子量透明质酸钠；

在步骤(1)中，聚左旋乳酸微球的平均粒径由3μm调整为60μm，混合体系中聚左旋乳酸微球的浓度由1mg/ml调整为5mg/ml。

对比例3

一种水光针的制备方法与实施例1基本相同，区别在于：

在步骤(1)中，不添加透明质酸钠，只将羧甲基纤维素钠溶于注射用水中，得到混合溶液；

在步骤(2)中，混合体系中聚左旋乳酸微球的浓度由1mg/ml调整为5mg/ml。

实施例2

一种真皮层注射长效水光针的制备方法与实施例1基本相同，区别在于：

在步骤(1)中，高分子量透明质酸钠和低分子量透明质酸钠的质量比由1∶2调整为1∶5，混合溶液中的透明质酸的总浓度为10.0mg/ml；

在步骤(2)中，搅拌速度由750rpm调整为800rpm，聚左旋乳酸微球的平均粒径由3μm调整为0.5μm，混合体系中聚左旋乳酸微球的浓度由1mg/ml调整为5mg/ml。

实施例3

一种真皮层注射长效水光针的制备方法与实施例1基本相同，区别在于：

在步骤(1)中，高分子量透明质酸钠和低分子量透明质酸钠的质量比由1∶2调整为1∶1，混合溶液中的透明质酸的总浓度为3.34mg/ml；

在步骤(2)中，搅拌速度由750rpm调整为1500rpm，平均粒径为3μm的聚左旋乳酸微球换为平均粒径为10μm的聚D,L-丙交酯(分子量为10万道尔顿)微球，混合体系中聚D,L-丙交酯微球的浓度由1mg/ml调整为5mg/ml；

在步骤(3)中，辐照剂量换为15kGy。

对比例4

一种真皮层注射长效水光针的制备方法与实施例1基本相同，区别在于：

在步骤(2)中，平均粒径为3μm的聚左旋乳酸微球换为平均粒径为10μm的聚己内酯(分子量为10万道尔顿)微球，混合体系中聚己内酯微球的浓度为5mg/ml。

实验例1实施例1、对比例1制得的水光针的效果验证

选择8月龄SD大鼠为动物实验模型，对照组的大鼠不做任何处理，实施例1组大鼠在局部注射实施例1制得的水光针，对比例1组大鼠在局部注射对比例1制得的水光针。采用皮肤检测仪检测对照组、实施例1组和对比例1组的大鼠在注射前后皮肤的水分和弹性，结果详见图8。随着治疗时间的延长，检测对照组、实施例1组和对比例1组的大鼠局部皮肤表皮厚度和真皮层内毛囊数量，结果详见图6、9和表1。对实施例1组大鼠的局部注射部位进行Masson染色和HE染色，结果详见图5和7。检测对照组、实施例1组和对比例1组大鼠的胶原再生能力，结果详见图10、11。

如图1所示，本发明实施例1的聚左旋乳酸微球或微粒的光学显微镜图。由图1可知，实施例1中使用的聚左旋乳酸微球粒径小于5μm。

如图2所示，本发明实施例1的聚左旋乳酸微球或微粒的电镜图。由图2可知实施例1中使用的聚左旋乳酸微球粒径在5μm内，呈球形，表面光滑，且分布均匀。

如图3所示，本发明实施例1制得的真皮层注射长效水光针的实物图。由图3可见，聚左旋乳酸微球可以在长效水光针中稳定分散且不会团聚。

如图4所示，本发明实施例1制得的真皮层注射长效水光针通过26G针头注射器推注的实物图。由图4的A可以看到采用1ml注射器注射时，针尖处有明显的液体推出痕迹，且如图4的B，推注后注射器针头内无白色沉积，证明使用26G注射器可以顺利推注实施例1制得的水光针。

表1在治疗不同时间时真皮层中毛囊个数的变化结果

由表1可见，实施例1制备的真皮层注射长效水光针随着治疗时间延长，毛囊数量的变化呈现出迅速增长，下降更加平稳的趋势，维持时间更长。

如图5所示，本发明实施例1制得的真皮层注射长效水光针注射到大鼠皮下第14天和第90天注射部位的HE染色图，其中A为14天HE染色图，B为90天HE染色图。由图5可知，实施例1制得的长效水光针有效期可以维持至3个月，其中聚左旋乳酸微球到90天时逐渐降解完全，通过HE切片可以观察到注射90天后，皮下组织中仅剩极少量微球(黑色标注)未降解。

如图6所示，本发明实施例1制得的真皮层注射长效水光针注射到大鼠皮下第0天，第14天和第90天注射部位的毛囊活性对比图，其中A为0天对比图，B为14天对比图，C为90天对比图。由图6可知，本发明实施例1制得的水光针注射到大鼠皮下后，随着时间延长，局部注射部位的毛囊根部毛乳头逐渐增大，毛球数量增多，可以明显观察到毛囊更加粗壮。

如图7所示，本发明实施例1制得的真皮层注射长效水光针注射到大鼠皮下第0天，第14天和第90天注射部位的Masson染色图，其中A为第0天Masson染色图，B为第14天Masson染色图，C为第90天Masson染色图。由图7可知，实施例1制得的长效水光针在注射后，随着治疗时间的延长，注射部位真皮层中的胶原蛋白含量呈上升趋势(Masson染色中的蓝色部分)，注射0天时的局部稀疏空缺的胶原蛋白逐渐分布紧密，可以推测实施例1制备的长效水光针能有效刺激胶原蛋白生成。

如图8所示，本发明采用对比例1与实施例1制得的水光针治疗皮肤前后局部水分和弹性的变化图，其中A为水分图，B为弹性图。由图8可见，与对照组和对比例1相比，实施例1制得的水光针能明显提高皮肤的水分和弹性。

如图9所示，本发明采用对比例1与实施例1制得的水光针治疗0.5个月、3个月时皮肤的表皮厚度和毛囊个数图，其中A为表皮厚度图，B为毛囊个数图。由图9可见，与对照组和对比例1相比，实施例1制备的真皮层注射长效水光针促进表皮增厚和毛囊个数增加的能力更强。

如图10所示，本发明采用对比例1与实施例1制得的水光针治疗0.5个月、3个月后促进胶原蛋白生成的长效性对比图，其中第一行为治疗0.5个月后对照组、实施例1组和对比例1组的长效性对比图，第二行为治疗3个月后对照组、实施例1组和对比例1组的长效性对比图。由图10可见，对比例1在使用0.5个月时对促进胶原蛋白再生有一定的效果，但使用3个月后，填充对比例1的真皮层中仍存在胶原蛋白分布松散，空缺明显的问题，无法改善随时间流逝带来的胶原蛋白流失的问题，而实施例1在使用3个月后，真皮层中胶原蛋白的含量显著增多。

为了对结果进行进一步验证，我们对胶原蛋白含量的差异进行量化。

如图11所示，本发明对比例1与实施例1在不同治疗时间后胶原蛋白含量变化图。由图11可知，与对照组和对比例1相比，经统计学分析，实施例1制得的水光针p值小于0.000001，具有显著性差异，有明显的促胶原再生能力。

对比例4中采用聚己内酯微球替代了实施例1中聚左旋乳酸微球，对未处理的大鼠注射对比例4制得的水光针进行效果验证，取大鼠的局部注射部位进行HE染色。

如图12所示，本发明对比例4制得的水光针在注射5天、1个月时的炎症反应图，其中A为在注射5天时的炎症反应图，B为在注射1个月时的炎症反应图。由图12可知，与实施例1的HE染色切片结果(图15的C/D)相比，注射5天后，对比例4引起的炎症反应更强，异物反应剧烈，在注射1个月后，仍能从HE染色切片中观察到较严重的炎症浸润，两者最大的区别在于聚己内酯微球塑型性更强，引起局部硬节的几率比聚左旋乳酸微球高；且对于具有免疫性疾病的求美者来说，聚己内酯的不可控副作用更大。

实验例2实施例1、对比例2、3制得的水光针的效果验证

1、走针情况

如图13所示，本发明对比例2制得的水光针及其走针情况图，其中A水光针走针情况图，B为推注后注射器针头内变化。由图13的A(黑色圈)中可知，对比例2制得的水光针在使用26G注射器注射时由于针头赌塞，针内压力过大，液体会从针头上方处泄露，存在明显的团聚现象，颗粒清晰可见，无法形成通畅的液体推注痕迹。且如图13的B可以看到推注后有大量微球堵塞在注射器针头外部，形成明显的白色沉积，与图4的B形成鲜明对比，说明对比例2存在走针涩的问题。

2、验证稳定性

如图14所示，本发明实施例1、对比例2制得的水光针在静置30min后的稳定性图，其中A为实施例1制得的水光针，B为对比例2制得的水光针。由图13可知，在静置30min后对比例2的水光针中的聚酯材料易沉降，而实施例1的水光针中的聚酯材料仍稳定均匀分布在混合体系中，复溶迅速，体系稳定，使用方便。

3、炎症反应

选择8月龄SD大鼠为动物实验模型，实施例1组大鼠在局部注射实施例1制得的水光针，对比例3组大鼠在局部注射对比例3制得的水光针。在注射时间为0.5个月、3个月后测试炎症情况。

如图15所示，本发明实施例1、对比例3制得的水光针在注射5天、1个月时的炎症反应图，其中A为对比例3制得的水光针在注射5天时的炎症反应图，B为对比例3制得的水光针在注射1个月时的炎症反应图，C为实施例1制得的水光针在注射5天时的炎症反应图、D为实施例1制得的水光针在注射1个月时的炎症反应图。由图15可知，对比例3在注射5天发生了强烈的炎症反应，在注射1个月时，炎症反应仍没有完全消退。而实施例1在注射5天后微球周围并未出现强烈的炎症细胞浸润。因此，对比例3采用了助悬剂羧甲基纤维素钠会带来副反应隐患，炎症反应较强。

尽管本发明的内容已经通过上述优选实施例作了详细介绍，但应当认识到上述的描述不应被认为是对本发明的限制。在本领域技术人员阅读了上述内容后，对于本发明的多种修改和替代都将是显而易见的。因此，本发明的保护范围应由所附的权利要求来限定。

Claims (10)

1.一种真皮层注射长效水光针，其特征在于，该水光针包含：

透明质酸钠和聚酯微球；

所述透明质酸钠为分子量为110～300万道尔顿的透明质酸钠和分子量为30～90万道尔顿的透明质酸钠的混合物；

所述聚酯微球为聚左旋乳酸微球。

2.根据权利要求1所述的真皮层注射长效水光针，其特征在于，所述分子量为110～300万道尔顿的透明质酸钠和分子量为30～90万道尔顿的透明质酸钠的质量比为1∶(1～10)。

3.根据权利要求1所述的真皮层注射长效水光针，其特征在于，所述聚酯微球的粒径为0.5～10μm。

4.根据权利要求1所述的真皮层注射长效水光针，其特征在于，所述聚酯微球的的分子量为2～20万道尔顿。

5.根据权利要求1所述的真皮层注射长效水光针，其特征在于，所述透明质酸钠和聚酯微球的质量比为1∶(0.02～0.5)。

6.一种如权利要求1-5任一项所述的真皮层注射长效水光针的制备方法，其特征在于，该方法包含：

(1)将分子量为110～300万道尔顿的透明质酸钠和分子量为30～90万道尔顿的透明质酸钠溶于注射用水中，得到混合溶液；

(2)在500～1500rpm的搅拌速度下，将聚酯微球加到混合溶液中，得到混合体系；

(3)将混合体系充分混匀后冻干后，封装灭菌。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述分子量为110～300万道尔顿的透明质酸钠和分子量为30～90万道尔顿的透明质酸钠的总质量与注射用水的体积比为1g∶(100～200)mL。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述灭菌为辐照灭菌，辐照的剂量为8～25kGy。

9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述混合体系中的聚酯微球的浓度为0.1～5mg/ml。

10.一种如权利要求1-5任一项所述的真皮层注射长效水光针在作为医美产品中的应用。