CN117368491A - 用于检测ProGRP蛋白的多肽及其相关产品和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了用于检测ProGRP蛋白的多肽及其相关产品和应用，涉及生物医学检测领域。本发明提供用于检测ProGRP蛋白的多肽包括多肽探针1～4中的至少一种，多肽探针1～4用于检测ProGRP蛋白具有高特异性和高灵敏度，结合建立的检测方法，在无需表达、纯化大量蛋白或抗体探针并定量固定于支持物表面的情况下即可完成对目标蛋白的准确检测，具有稳定性更好，检测效率更高，且制备成本低等优势。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学检测领域，具体而言，涉及用于检测ProGRP蛋白的多肽及其相关产品和应用。
背景技术
在临床血清学免疫诊断中，蛋白作为一类重要的疾病的标志物需要被测定，其水平变化可以反映出某些疾病的发生和发展，如肿瘤标志物、心脏标志物、炎症因子、甲状腺功能标志物等。
目前临床常规的方法包括：酶联免疫吸附法(ELISA)、化学发光法、放射免疫分析法(RIA)、免疫印迹法(Western blotting)和免疫荧光法。其中，ELISA具有高灵敏度、高特异性、操作简便、结果可靠，可以同时测定多个样品，但可能受到干扰物质的影响，需要较长时间进行标记和检测。化学发光法的高灵敏度，光信号持续时间长，线性范围宽，自动化程度高，但信号产生瞬间完成，且在反应过程中易发生裂变，需对结合相、游离相进行分离，检测成本相对较高。放射免疫分析法(RIA)具有非常高的灵敏度和特异性，可以测定非常低浓度的蛋白质，但使用放射性同位素标记，可能存在潜在的危险性，并且需要专业的设备和人员进行操作。免疫印迹法(Western blotting)可以用于检测复杂混合物中的特定蛋白质，结果可靠，且对于待测蛋白质的大小没有限制，但操作复杂，需要较长时间，可能存在非特异性结合或者缺乏特异性抗体时出现假阳性结果的风险。免疫荧光法具有快速、准确、直观、灵敏，并且可以同时测定多个蛋白质，但对于某些样品可能存在背景荧光干扰，需要专业的设备和人员进行操作。以上的方法应用成熟，但存在各自的技术局限性。
也有少量公司基于生物芯片进行蛋白或抗体检测技术开发，利用生物芯片进行检测的优点主要为多指标联合达成高通量检测，一次检测可达成对于几十、几百、几千乃至更多目标物的测量，除此之外芯片具有微型化的特征，因此具有较少的样品/试剂消耗。结合先进的材料科学以及信息科学等技术的交叉与融合，可以更低的单位花费达成高灵敏高特异性的系统检测。该技术广泛应用于基因组学与蛋白质组学的科学研究、临床疾病诊断、新药研发、司法鉴定和食品安全等领域。目前的蛋白芯片均在捕获待测蛋白(或抗体)过程中依赖于蛋白或抗体大分子探针(例如Olink、Luminex、UNIarray和Huprot)，且表达和纯化大量蛋白、定向固定于支持物表面形成高通量芯片且保持蛋白活性在技术实现以及转化应用的成本控制均具有不小的挑战。
相对于蛋白芯片而言，多肽芯片能够承载大量的多肽片段，可快速精准、有效的找到相应结合位点/域，秉承生物芯片的通用优势，具有高通量检测的优势。且多肽芯片上固定的多肽片段包含蛋白全序列，相对于原大分子蛋白质而言更稳定，不易分解失活，采集的数据更为准确，生产制造方面更为可靠。此外，多肽片段可不局限于已知的蛋白结构，构成多肽分子的氨基酸可以是进行过化学修饰的非天然氨基酸，在药物研发、筛选以及新型诊断标志物探索方面具有很强的灵活性。
目前研究中，多肽芯片主要用于抗体表位分析，多重表位分析，蛋白互作研究，抗体谱研究，免疫监测等领域，但并未实现基于多肽芯片技术进行蛋白质的有效定量。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明提供可用于检测ProGRP蛋白的多肽序列，并且使用这些序列达成可用于检测ProGRP的多肽芯片及其相关产品和应用。
本发明是这样实现的：
第一方面，本发明实施例提供了多肽探针在制备检测ProGRP的产品中的应用，所述多肽探针包括：多肽探针1～多肽探针4中的至少一种；多肽探针1～多肽探针4的氨基酸序列依次如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。
第二方面，本发明实施例提供了一种多肽芯片，其包括：芯片载体和分布在所述芯片载体上的多肽探针，所述多肽探针包括：多肽探针1～多肽探针4中的至少一种；多肽探针1～多肽探针4的氨基酸序列依次如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。
第三方面，本发明实施例提供了一种试剂盒，其包括：前述实施例所述的多肽芯片。
第四方面，本发明实施例提供了一种ProGRP蛋白的检测方法，其包括：采用前述实施例所述的多肽芯片对待测样品进行检测；所述检测方法不以疾病的诊断或治疗为直接目的。
第五方面，本发明实施例提供了一种多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ IDNO:2中任一项所示。
第六方面，本发明实施例提供了一种多肽组合物，其包括：氨基酸序列如SEQ IDNO:1和SEQ ID NO:2所示的多肽中的至少一种。
本发明具有以下有益效果：
本发明提供的多肽芯片包括多肽探针1～4中的至少一种，该多肽探针1～4用于检测ProGRP蛋白具有高灵敏度和高特异性，结合建立的检测方法，无需表达、纯化大量蛋白或抗体探针并定量固定于支持物表面即可完成对目标蛋白的准确定量，具有稳定性更好，检测效率更高，且制备成本低等优势。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为蛋白竞争性抑制特异性抗体结合多肽探针原理图；
图2为直接信号法和间接信号法两种方法的操作步骤图；
图3为ELISA抗体抗原结合实验结果；
图4为蛋白电泳及抗体抗原特异性结合蛋白印迹(Western Blot)验证结果；其中，A为proGRP抗原蛋白的SDS-PAGE实验结果，上样浓度为25μg/mL；B为proGRP抗体抗原结合的蛋白印迹(Western Blot)实验结果；
图5为proGRP抗体特异性多肽抑制筛选结果；
图6为芯片上样排版及荧光点扫描同位图；其中，曝光条件为750ms；
图7为芯片信号预测proGRP蛋白浓度效力；其中，抗原浓度相对数：是按抗体初始浓度100ng/mL，抗体分子量150KD，抗原分子量35KD，计算的摩尔比。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
发明人在采用多肽芯片测蛋白的验证研究时，曾尝试直接利用多肽芯片上多肽探针和蛋白的亲和特性，实际样本中的蛋白构象多变，导致信号不稳定。基于前期抗体表位的研究基础，发明人引入了蛋白对应的特异性抗体，通过多肽芯片发掘目标蛋白识别抗体的高亲和力表位肽(多肽探针)，利用抗体免疫的特异结合位点作为蛋白锚点实现蛋白检测。
本发明提供的多肽芯片可针对复杂样本中ProGRP蛋白进行有效检测，由于原位固相合成的多肽芯片检测时具有较好的抗背景基质干扰能力和检测指标间的抗交叉反应能力，解决了蛋白检测时存在干扰影响大、定量不准确的问题；此外，本发明提供的多肽芯片不需要依赖蛋白表达、包被或者点样(无需在固相支持物上固定蛋白或抗体大分子探针)，只需要针对目标检测蛋白，筛选出具有特异性多肽(多肽探针)或其集合，以该多肽或其集合的信号作为目标数据进行分析，即可完成蛋白的定量。
一方面，本发明实施例提供了多肽探针在制备检测ProGRP的产品中的应用，所述多肽探针包括：多肽探针1～多肽探针4中的至少一种；多肽探针1～多肽探针4的氨基酸序列依次如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。
多肽探针1～4是发明人从13万种多肽中筛选获得的，相对于其他多肽探针而言，本发明筛选获得的多肽探针1～4具有更好的检测特异性和灵敏度。
在一些实施例中，所述产品包括多肽芯片、试剂和试剂盒中的任意一种。
另一方面，本发明实施例还提供了一种多肽芯片，其包括：芯片载体和分布在所述芯片载体上的多肽探针，所述多肽探针包括：多肽探针1～多肽探针4中的至少一种；多肽探针1～多肽探针4的氨基酸序列依次如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ IDNO:4所示。
在一些实施例中，所述多肽芯片的检测物包括ProGRP。
在一些实施例中，所述多肽探针在多肽芯片上以多肽探针簇的形式存在。
在一些实施例中，所述多肽探针簇在芯片载体上的尺寸为7μm～1cm。可选地，该尺寸可以为7μm、10μm、20μm、40μm、60μm、80μm、100μm、200μm、300μm、400μm、500μm、600μm、700μm、800μm、900μm、1mm、5mm、10mm中的任意一种或多种。
在一些实施例中，所述多肽探针固定在芯片载体上的方法包括：原位SPPS(固相多肽合成)、SPOT(斑点合成法)和共价结合中的任意一种。
原位SPPS合成的多肽芯片具有探针信号极稳定且互不干扰的特点，原位固相合成的多肽芯片探针具有较高的纯度和一致性，因为每个探针都是在芯片表面上经过精确计量的氨基酸单体逐步组装而成的；另外由于探针的缩合反应是在芯片表面上进行的，所以每个探针的位置和密度都可以被准确地控制和调节，从而避免了不同探针之间的交叉反应和干扰。
SPOT(斑点合成法)是一种以膜(尤其是纤维素膜)为合成基的多肽库合成技术，可靠而且快速。
在一些实施例中，所述芯片载体选自：醋酸纤维素膜、玻璃片、硝酸纤维素膜、尼龙膜和SiO2芯片中的任意一种。
另一方面，本发明实施例还提供了一种试剂盒，其包括：前述任意实施例所述的多肽芯片。
在一些实施例中，所述试剂盒还包括：荧光标记物、抗ProGRP蛋白的抗体和荧光标记的抗ProGRP蛋白的抗体中的任意一种或多种。可选地，所述试剂盒还包括：荧光标记物和抗ProGRP蛋白的抗体；可选地，所述试剂盒还包括荧光标记的抗ProGRP蛋白的抗体。
在一些实施例中，所述试剂盒还包括：荧光标记物、抗ProGRP蛋白的一抗、抗所述一抗的抗体、荧光标记的抗所述一抗的抗体(二抗)中的任意一种或多种。可选地，所述试剂盒包括荧光标记物、抗ProGRP蛋白的一抗和抗所述一抗的抗体；可选地，所述试剂盒还包括：抗ProGRP蛋白的一抗和荧光标记的抗所述一抗的抗体。
在一些实施例中，所述荧光标记物包括：荧光素类染料、罗丹明类染料、Cy系列菁染料、Alexa系列染料、蛋白类的染料、放射性同位素、化学发光试剂和纳米颗粒类标记物中的至少一种。其中，荧光素类染料包括异硫氰酸荧光素(FITC)、羟基荧光素(FAM)、四氯荧光素(TET)等及其类似物。罗丹明类染料，包括红色罗丹明(RBITC)、四甲基罗丹明(TAMRA)、罗丹明B(TRITC)等。Cy系列菁染料，菁染料通常有两个杂环体系组成，包括Cy2、Cy3、Cy3B、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7及其类似物。Alexa系列染料，包括Alexa Fluor 350、405、430、488、532、546、555、568、594、610、633、647、680、700、750。蛋白类的染料，包括藻红蛋白(PE)、藻蓝蛋白(PC)、别藻蓝蛋白(APC)、多甲藻黄素-叶绿素蛋白(preCP)等。化学发光试剂包括鲁米诺类和吖啶酯类发光剂。纳米颗粒类标记物，包括半导体量子点、碳量子点、AIE纳米颗粒、半导体纳米颗粒和上转换纳米颗粒等。
在一些实施例中，所述试剂盒还包括多肽芯片的检测试剂。
在一些实施例中，所述检测试剂包括：样本稀释液、缓冲液、洗涤液中的任意一种或多种。
另一方面，本发明实施例还提供了一种ProGRP蛋白的检测方法，其包括：采用前述任意实施例所述的多肽芯片对待测样品进行检测；所述检测方法不以疾病的诊断或治疗为直接目的。
在一些实施例中，不以疾病的诊断或治疗为直接目的的情况包括待测样本为环境样本或人工制作样本的情况。
本发明实施例提供的检测方法或多肽芯片的检测原理是根据目标蛋白(待测蛋白)竞争性抑制特异性抗体结合多肽芯片上的多肽探针，具体可参照图1：对照孔中无目标蛋白，检出的是多肽探针的初始信号；测试孔中有目标蛋白与其相应的抗体竞争性结合，目标蛋白的存在会降低多肽探针的信号值，信号的下降与目标蛋白的丰度水平相关。所以通过与选定的目标蛋白的特异性抗体共同孵育，对比对照孔，计算与对照孔信号的差值可以达成目标蛋白的检测。
在一些实施例中，所述检测方法包括：直接信号法和间接信号法中的任意一种。直接信号法和间接信号法都是基于相同的检测原理(根据目标蛋白竞争性抑制特异性抗体结合多肽芯片上的多肽探针)，区别在于操作步骤中特异性抗体的使用上略有差异，直接信号法直接通过荧光标记抗体信号的减低以检测目标蛋白含量，间接信号法不对靶标蛋白特异性抗体进行标记，而是通过荧光标记二抗完成目标蛋白的信号检测。可参照图2。
在一些实施例中，所述直接信号法包括：
获取荧光标记的抗ProGRP蛋白的抗体作为荧光一抗；
采用所述多肽芯片分别对所述荧光一抗和由所述荧光一抗与待测样本混合孵育获得的混合物进行检测，获得荧光一抗的检测结果和所述混合物的检测结果；
基于荧光一抗的检测结果和所述混合物的检测结果之间的差异，分析待测样本中是否存在ProGRP蛋白和/或分析ProGRP蛋白的浓度。
在一些实施例中，“基于荧光一抗的检测结果和所述混合物的检测结果之间的差异，分析待测样本中是否存在ProGRP蛋白和/或分析ProGRP蛋白的浓度”的步骤包括：基于多组已知浓度的样本进行检测，制备标准曲线，对于待测样本，将混合物的检测结果带入标准曲线，确定待测样本中目标蛋白的浓度。
在一些实施例中，所述间接信号法包括：
获取抗ProGRP蛋白的抗体作为一抗，荧光标记抗所述一抗的抗体作为荧光二抗；
采用所述多肽芯片分别与所述一抗和由所述一抗与待测样本混合孵育获得的混合物进行混合孵育，漂洗后分别添加所述荧光二抗，漂洗后进行信号检测，获得所述一抗的检测结果和所述混合物的检测结果；
基于所述一抗的检测结果和所述混合物的检测结果之间的差异，分析待测样本中是否存在ProGRP蛋白和/或分析ProGRP蛋白浓度。
在高通量生物芯片测蛋白领域，通常会使用大量的蛋白或者抗体固相捕捉，需要对蛋白或者抗体进行标记或者改造，如此必将改变蛋白或抗体构象和活性，而且制作工艺较难，成本较大。本发明将抗体抗原免疫特异性结合的原理性优势和多肽阵列芯片(同多肽芯片)的工艺优势巧妙结合，引入了特异性抗体，但避免对其进行改造修饰，保留其液体游离状态的天然构象和结合活性，确保了本发明所建立的创新型检测方法的有效性和特异性。
在一些实施例中，抗ProGRP蛋白的抗体(一抗)为CNPAIR M3601抗ProGRP抗体。
在一些实施例中，二抗为：Thermofisher A21424 Goat anti-Mouse IgG(H+L)Cross-Adsorbed Secondary Antibody,Alexa Fluor 555。
另一方面，本发明实施例还提供了一种多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1和SEQID NO:2中任一项所示。
此外，本发明实施例还提供了一种多肽组合物，其包括：氨基酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的多肽中的至少一种；
在一些实施例中，所述多肽组合物还包括：SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示多肽中的至少一种。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供了用于检测ProGRP蛋白的多肽芯片。
1、多肽芯片
本实施例采用的多肽芯片是采用由中国碳云智能供应的基于掩膜光刻原位合成的多肽芯片，有单个特征点(多肽探针簇)物理尺寸小(7μm～14μm)，可实现高密度芯片制备，更匹配生物分子互作的复杂度等工艺优势。
本实施例提供多肽芯片包含多肽探针1～4，其中，每条探针在芯片上均有7个技术重复。探针的序列信息如下表所示。
多肽芯片检测通用试剂如下：
| 试剂名称 | 型号/货号 | LOT号 |
| D-Mannitol(D-甘露醇) | 63560-250G-F | BCCC4152 |
| Casein sodium salt from bovine milk(Casein) | C8654-500G | WXBC8228V |
| 20×PBS with 1％TWEEN-20(PBST，20×) | P1192 | P119204C2101 |
| Proclin 950 | 46879-U | / |
| LC/MS Grade Isopropanol(异丙醇) | A461-4 | 190658 |
实施例2
本实施例提供了一种ProGRP蛋白的检测方法(间接信号法)，采用采用实施例1提供的多肽芯片中的4条多肽进行ProGRP蛋白检测。(1)、本实施例使用的样本：
抗体与蛋白物料鉴定如下：
(a)ELISA抗体抗原结合实验结果见下表和图3。
| 抗体浓度(ng/mL) | OD 450 |
| 41200 | 2.503 |
| 4120 | - |
| 412 | 2.198 |
| 41.2 | 0.641 |
| 4.12 | 0.364 |
| 0.412 | 0.241 |
| 0 | 0.089 |
(b)抗原蛋白电泳及抗体抗原特异性结合蛋白印迹(Western Blot)验证结果见图4。
由图4中A可知，条带位置正确且单一，纯度高；图4中B显示，印迹显明位置符合预期，且无其他杂带。
芯片测试的通用试剂：同实施例1。
(2)检测方法(间接信号法)：
1.样本处理
1.1抗体处理：荧光二抗用二抗稀释液(含0.75％ Casein的PBST，添加Proclin950)按1：3000倍稀释，以样本稀释液(含1％D-甘露醇及0.05％Casein的PBST，添加Proclin950)溶液将一抗稀释至贴近饱和浓度(500ng/mL)。
1.2将待测目标蛋白ProGRP与抗体按摩尔分子数比为0:1和50:1配制对应浓度。
2.样本(一抗与待测物)芯片外混合孵育
将一抗与待测蛋白混合物共100μL至96孔板中，封膜，振荡混匀，离心，至烘箱37℃，孵育1h。
3.芯片上样
将孵育好的样本(待测蛋白-抗体复合物)分别取90μl加入到卡夹固定的多肽芯片对应孔中。
4.第一次孵育及洗板
将Cassette封膜，置于恒温振荡器37℃孵育1小时，孵育完成后放入洗板机，以磷酸盐缓冲液洗涤3次，充分去除未结合分子和试剂。
5.第二次孵育及洗板
用0.75％的酪蛋白(Casein)溶液配制2nM的荧光二抗溶液，按40μL/每孔加入到卡夹固定的多肽芯片中，置于恒温振荡器37℃孵育1小时。孵育完成后放入洗板机，以磷酸盐缓冲液洗涤3次，充分去除未结合分子和试剂。
6.芯片干燥
从卡夹中取出多肽芯片，用90％异丙醇喷洒清洗后在离心机中甩干。
7.成像扫描
芯片荧光成像仪(ImageXpress)用对应激发波长的荧光通道对多肽芯片进行扫描成像，每个芯片孔位得到一张TIFF图像文件，即为原始数据。
8.图像处理
将荧光成像得到的图片转化为荧光强度数值，得到相应的数值矩阵。
具体包括：
提取特征的荧光强度数值，输出1个GPR5数据文件和1个corner images文件。其中，GPR5文件包含了一个样本的所有信息和所有特征的荧光强度信息；
从所有样本的GPR5数据文件中提取特征的荧光强度信息，生成原始荧光强度(FG，foreground)数据矩阵。
9.初步数据处理和质控
对样本数值进行对数转换和标准化处理，输出标准化矩阵。并进行单样本质控以及系统稳定性质控。
10.数据分析
结果见图5。图5结果表明，在proGRP抗体(Ab)的对照孔与50倍摩尔比浓度的proGRP抗原与抗体预混的测试孔，不同探针的信号差异有差别，阴性对照探针NTC(zLNKR，其氨基酸序列为CGSC)基本无变化甚至有增加，然而本申请中筛选出的多肽SEQ ID NO:1～4就表现出明显的下降幅度。
实施例3
本实施例提供了一种ProGRP蛋白的定量检测方法(间接信号法)，采用采用实施例1提供的多肽芯片进行ProGRP蛋白定量检测，具体步骤如下。
(1)本实施例使用的样本：同前述实施例2。
芯片测试通用试剂:同实施例1。
(2)检测方法(间接信号法)：
1.样本处理
1.1抗体处理：荧光二抗用二抗稀释液(含0.75％ Casein的PBST,添加Proclin950)按1：3000倍稀释，以样本稀释液(含1％D-甘露醇及0.05％Casein的PBST,添加Proclin950)溶液将一抗稀释至贴近饱和浓度(500ng/mL)。
1.2将待测目标蛋白ProGRP与抗体按摩尔分子数比为0：1、2：1、4：1、8：1、16：1、32：1、64：1、128：1配制抗原蛋白的对应浓度，分别以样本稀释液和1000倍稀释的2份人源阴性血清制备样本。
2.样本(一抗与待测物)芯片外混合孵育
将一抗与待测蛋白混合物共100μL至96孔板中，封膜，振荡混匀，离心，至烘箱37℃，孵育1h。
3.芯片上样
将孵育好的样本(待测蛋白-抗体复合物)分别取90μl加入到卡夹固定的多肽芯片对应孔中。
4.第一次孵育及洗板
将Cassette封膜，置于恒温振荡器37℃孵育1小时，孵育完成后放入洗板机，以磷酸盐缓冲液洗涤3次，充分去除未结合分子和试剂。
5.第二次孵育及洗板
用0.75％的酪蛋白(Casein)溶液配制2nM的荧光二抗溶液，按40μL/每孔加入到卡夹固定的多肽芯片中，置于恒温振荡器37℃孵育1小时。孵育完成后放入洗板机，以磷酸盐缓冲液洗涤3次，充分去除未结合分子和试剂。
6.芯片干燥
从卡夹中取出多肽芯片，用90％异丙醇喷洒清洗后在离心机中甩干。
7.成像扫描
芯片荧光成像仪(ImageXpress)用对应激发波长的荧光通道对多肽芯片进行扫描成像，每个芯片孔位得到一张TIFF图像文件，即为原始数据。
8.图像处理
将荧光成像得到的图片转化为荧光强度数值，得到相应的数值矩阵。
具体包括：
提取特征的荧光强度数值，输出1个GPR5数据文件和1个corner images文件。其中，GPR5文件包含了一个样本的所有信息和所有特征的荧光强度信息；
从所有样本的GPR5数据文件中提取特征的荧光强度信息，生成原始荧光强度(FG，foreground)数据矩阵。
9.初步数据处理和质控
对样本数值进行对数转换和标准化处理，输出标准化矩阵。并进行单样本质控以及系统稳定性质控。
10.数据分析
芯片上样排版及成像情况见图6。
本实施例结果统计情况见图7和下表。
参考公式：B＝(M-T)/T×100％；其中，B为相对偏差，M为测试值，T为标定值。通常小于±10％为定量准确度性能优异。
参考公式：CV＝SD/M×100％；其中SD和M为多个重复探针信号值的标准差和平均值，CV为变异系数。通常CV值小于10％为定量重复性性能优异。
结果表明，多肽芯片中筛选出的多肽可以做proGRP蛋白浓度的定值。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.多肽探针在制备检测ProGRP的产品中的应用，其特征在于，所述多肽探针包括：多肽探针1～多肽探针4中的至少一种；多肽探针1～多肽探针4的氨基酸序列依次如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。
2.一种多肽芯片，其特征在于，其包括：芯片载体和分布在所述芯片载体上的多肽探针，所述多肽探针包括：多肽探针1～多肽探针4中的至少一种；多肽探针1～多肽探针4的氨基酸序列依次如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。
3.根据权利要求2所述的多肽芯片，其特征在于，所述多肽及多肽芯片的检测物包括ProGRP；
可选地，所述多肽探针在多肽芯片上以多肽探针簇的形式存在；
可选地，所述多肽探针簇在所述芯片载体上的尺寸为7μm～1cm；
可选地，所述多肽探针固定在所述芯片载体上的方法包括：原位SPPS、SPOT和共价结合中的任意一种；
可选地，所述芯片载体选自：醋酸纤维素膜、玻璃片、硝酸纤维素膜、尼龙膜和SiO2芯片中的任意一种。
4.一种试剂盒，其特征在于，其包括：权利要求2或3所述的多肽芯片；
可选地，所述试剂盒还包括：荧光标记物、抗ProGRP蛋白的抗体和荧光标记的抗ProGRP蛋白的抗体中的任意一种或多种；
可选地，所述试剂盒还包括：荧光标记物、抗ProGRP蛋白的一抗、抗所述一抗的抗体、荧光标记的抗所述一抗的抗体中的任意一种或多种。
5.一种ProGRP蛋白的检测方法，其特征在于，其包括：采用权利要求2或3所述的多肽芯片对待测样品进行检测；
所述检测方法不以疾病的诊断或治疗为直接目的。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：直接信号法和间接信号法中的任意一种。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述直接信号法包括：
获取荧光标记的抗ProGRP蛋白的抗体作为荧光一抗；
采用所述多肽芯片分别对所述荧光一抗和由所述荧光一抗与待测样本混合孵育获得的混合物进行检测，获得荧光一抗的检测结果和所述混合物的检测结果；
基于荧光一抗的检测结果和所述混合物的检测结果之间的差异，分析待测样本中是否存在ProGRP蛋白和/或分析ProGRP蛋白的浓度。
8.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述间接信号法包括：
获取抗ProGRP蛋白的抗体作为一抗，荧光标记抗所述一抗的抗体作为荧光二抗；
采用所述多肽芯片分别与所述一抗和由所述一抗与待测样本混合孵育获得的混合物进行混合孵育，漂洗后分别添加所述荧光二抗，漂洗后进行信号检测，获得所述一抗的检测结果和所述混合物的检测结果；
基于所述一抗的检测结果和所述混合物的检测结果之间的差异，分析待测样本中是否存在ProGRP蛋白和/或分析ProGRP蛋白浓度。
9.一种多肽，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2中任一项所示。
10.一种多肽组合物，其特征在于，其包括：氨基酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的多肽中的至少一种；
可选地，所述多肽组合物还包括：SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示多肽中的至少一种。
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311608899.0A Pending CN117368491A (zh) | 2023-11-28 | 2023-11-28 | 用于检测ProGRP蛋白的多肽及其相关产品和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117368491A (zh) |
-
2023
- 2023-11-28 CN CN202311608899.0A patent/CN117368491A/zh active Pending
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