CN117363592A - 一种糖基转移酶基因及其在生成麦黄酮-5-o-葡萄糖苷中的应用 - Google Patents

一种糖基转移酶基因及其在生成麦黄酮-5-o-葡萄糖苷中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种糖基转移酶基因及其在生成麦黄酮‑5‑O‑葡萄糖苷中的应用。本发明提供了氨基酸序列为SEQ ID No.1或经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加或具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同一性且来源于籼稻具有相同功能的蛋白质或在其N端和/或C端连接蛋白标签后得到的融合蛋白。本发明所提供的OsUGT707A22蛋白能够作为糖基转移酶，催化麦黄酮(tricin)糖基化生成麦黄酮‑5‑O‑葡萄糖糖苷(tricin‑5‑O‑glucopyranoside)。

Description

一种糖基转移酶基因及其在生成麦黄酮-5-O-葡萄糖苷中的 应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种糖基转移酶基因及其在生成麦黄酮-5-O-葡萄糖苷中的应用。
背景技术
麦黄酮(tricin)是一类重要的黄酮类化合物，该物质在抑制杂草生长、抗褐飞虱等方面发挥着重要作用。
在水稻中Os07g0503900(UGT707A2)蛋白能够催化麦黄酮糖基化生成麦黄酮-5-O-葡萄糖苷(tricin-5-O-glucopyranoside)，麦黄酮-5-O-葡萄糖糖苷(tricin-5-O-glucopyranoside)具有显著抑制稗草和生菜根生长的作用。但是关于是否有其他基因参与麦黄酮-5-O-葡萄糖苷的生成仍然不是很清楚。
发明内容
本发明的目的是提供一种糖基转移酶基因及其在生成麦黄酮-5-O-葡萄糖苷中的应用。
第一方面，本发明要求保护一种蛋白质，命名为OsUGT707A22。
本发明要求保护的蛋白质为如下任一：
(A1)氨基酸序列为SEQ ID No.1的蛋白质；
(A2)将SEQ ID No.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且来源于籼稻具有相同功能的蛋白质；
(A3)与(A1)-(A2)中任一所限定的氨基酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同一性且来源于籼稻具有相同功能的蛋白质；
(A4)在(A1)-(A3)中任一所限定的蛋白质的N端和/或C端连接蛋白标签后得到的融合蛋白。
上述蛋白质中，所述蛋白标签(protein-tag)是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和/或纯化。所述蛋白标签可为Flag标签、His标签、MBP标签、HA标签、myc标签、GST标签和/或SUMO标签等。
上述蛋白质中，同一性是指氨基酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定氨基酸序列的同一性，如NCBI主页网站的BLAST网页。例如，可在高级BLAST2.1中，通过使用blastp作为程序，将Expect值设置为10，将所有Filter设置为OFF，使用BLOSUM62作为Matrix，将Gap existence cost，Per residue gap cost和Lambda ratio分别设置为11，1和0.85(缺省值)并进行检索一对氨基酸序列的同一性进行计算，然后即可获得同一性的值(％)。
上述蛋白质中，所述95％以上的同源性可为至少96％、97％或98％的同一性。所述90％以上的同源性可为至少91％、92％、93％或94％的同一性。所述85％以上的同源性可为至少86％、87％、88％或89％的同一性。所述80％以上的同源性可为至少81％、82％、83％或84％的同一性。
第二方面，本发明要求保护编码前文第一方面所述蛋白质的核酸分子。
进一步地，所述核酸分子可为如下任一：
(B1)SEQ ID No.2所示的DNA分子；
(B2)在严格条件下与(B1)限定的DNA分子杂交且前文第一方面中所述蛋白质的DNA分子；
(B3)与(B1)-(B2)中任一限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码前文第一方面中所述蛋白质的DNA分子。
上述核酸分子中，所述严格条件可为如下：50℃，在7％十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5M Na3PO4和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，2×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M Na3PO4和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，1×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M Na3PO4和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，0.5×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5MNa3PO4和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，0.1×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M Na3PO4和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在65℃，0.1×SSC，0.1％SDS中漂洗；也可为：在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。
上述核酸分子中，同源性是指核苷酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定核苷酸序列的同一性，如NCBI主页网站的BLAST网页。例如，可在高级BLAST2.1中，通过使用blastp作为程序，将Expect值设置为10，将所有Filter设置为OFF，使用BLOSUM62作为Matrix，将Gap existence cost，Per residue gap cost和Lambda ratio分别设置为11，1和0.85(缺省值)并进行检索一对核苷酸序列的同一性进行计算，然后即可获得同一性的值(％)。
上述核酸分子中，所述95％以上的同源性可为至少96％、97％或98％的同一性。所述90％以上的同源性可为至少91％、92％、93％或94％的同一性。所述85％以上的同源性可为至少86％、87％、88％或89％的同一性。所述80％以上的同源性可为至少81％、82％、83％或84％的同一性。
第三方面，本发明要求保护含有前文第二方面中所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组菌或转基因细胞系。
所述表达盒是指能够在宿主细胞中表达前文第一方面所述蛋白质的DNA，该DNA不但可包括启动前文第二方面所述核酸分子转录的启动子，还可包括终止所述核酸分子转录的终止子。进一步，所述表达盒还可包括增强子序列。
所述重组载体可为含有所述表达盒的重组载体。在本发明的具体实施方式中，所述重组载体具体为将所述核酸分子(如SEQ ID No.2)克隆到pMAL-c2X载体(如BamHI和HindШ两个酶切位点之间)后得到的重组质粒。
所述重组菌可为含有所述重组载体的重组菌。在本发明的具体实施方式中，所述重组菌为将所述重组质粒导入到受体大肠杆菌(如大肠杆菌NovaBlue)后得到的重组大肠杆菌。
第四方面，本发明要求保护前文第一方面所述的蛋白质在作为糖基化转移酶中的应用。
第五方面，本发明要求保护前文第一方面所述的蛋白质在催化麦黄酮(tricin)糖基化生成麦黄酮-5-O-葡萄糖糖苷(tricin-5-O-glucopyranoside)中的应用。
第六方面，本发明要求保护前文第二方面所述的核酸分子或前文第三方面所述的表达盒、重组载体、重组菌或转基因细胞系在制备糖基化转移酶中的应用。
第七方面，本发明要求保护前文第二方面所述的核酸分子或前文第三方面所述的表达盒、重组载体、重组菌或转基因细胞系在制备用于催化麦黄酮(tricin)糖基化生成麦黄酮-5-O-葡萄糖糖苷(tricin-5-O-glucopyranoside)的产品中的应用。
在前文第四和第六方面中，所述糖基化的受体具体可为麦黄酮(tricin)。
在前文第四至第七方面中，所述糖基化的供体具体可为UDPG。
实验证明，本发明所提供的OsUGT707A22蛋白能够作为糖基转移酶，催化麦黄酮(tricin)糖基化生成麦黄酮-5-O-葡萄糖糖苷(tricin-5-O-glucopyranoside)。
附图说明
图1为MH63基因组中OsUGT707A22基因位置示意图。NIP表示粳稻品种日本晴。
图2为OsUGT707A22基因表达模式分析。
图3为OsUGT707A22蛋白催化功能分析。Tricin为麦黄酮，tricin-5-O-glucopyranoside为麦黄酮-5-O-葡萄糖苷。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、UGT707A2基因多样性分析
稻属(genus Oryza)属于禾本科的稻亚科，由27个种组成，包含11种基因组类型，其中6种是二倍体(n＝12，AA、BB、CC、EE、FF和GG)，另外5种是异源四倍体(n＝24，BBCC、CCDD、HHJJ、HHKK和KKLL)(Stein et al.,2018)。Stein等(2018)利用多种手段对包括2个栽培稻IR 8(O.sativa.L.ssp.indica cv.IR 8)、N22(O.sativa.L.ssp.aus cv.N22)以及7个野生稻(O.rufipogon、O.nivara、O.barthii、O.glumaepatula、O.meridionalis、O.punctata和L.perrieri)在内的9个物种基因组序列进行了拼接和注释，结合之前公布的日本晴(Oryza sativa L.ssp.japonica cv.Nipponbare)(Matsumoto et al.,2005)、9311(Oryza sativa L.ssp.indica cv.9311)(Yu et al.,2002)、O.glaberrima(Wang et al.,2014)和O.brachyantha(Chen et al.,2013)的基因组序列，共获得了13个水稻品种的参考序列。此外，Zhang等(2014)通过测序获得了O.longistaminata的基因组序列。Zhang等(2016)公布了籼稻品种珍汕97(O.sativa L.ssp.indica cv.ZS97)和明恢63(O.sativaL.ssp.indica cv.MH63)的高质量参考基因组。Du等(2017)对蜀恢498(O.sativaL.ssp.indica cv.R498)的基因组进行了测序和拼接，获得了高质量的基因组序列。从NCBI数据库中下载这17个品种的全基因组参考序列，并从水稻注释网站(Rice GenomeAnnotation Project)中下载UGT707A2的核酸序列和氨基酸序列，利用blastn和blastp方法将UGT707A2的序列与17个水稻品种的基因组序列进行比对(包括核酸序列和氨基酸序列)。然后将比对获得的序列进行手动注释，获得稻属中各个水稻品种UGT707A2的核酸序列和氨基酸序列。通过对获得的稻属中UGT707A2基因序列进行分析发现，与Nipponbare中UGT707A2序列相比，该基因在9311、IR8、N22、ZS97、MH63、O.barthii、O.glumaepatula和O.glaberrima等品种中还存在一个同源基因。将MH63基因组中该基因的同源基因提交至UGT基因命名委员会，命名为UGT707A22(图1)。
UGT707A22基因序列如SEQ ID No.2所示，编码SEQ ID No.1所示蛋白质。
实施例2、UGT707A22基因表达模式分析
一、水稻叶片总RNA提取
水稻叶片总RNA提取方法如下(TRIzol法)：
(1)1000×DEPC水溶液的配制：取1mL DEPC于1L蒸馏水中，用磁力搅拌器搅拌过夜直至充分溶解；
(2)用配制好的DEPC溶液浸泡RNA提取过程中所需的2mL Eppendorf离心管、1.5mLEppendorf离心管和不锈钢钢珠等。浸泡约10h后高温高压灭菌以使DEPC分解；
(3)剪取新鲜水稻叶片(约100mg)于装有一粒不锈钢钢珠(经DEPC处理)的2mLRNase-free离心管中，液氮速冻；
(4)用球磨仪破碎样品(频率30Hz，破碎20s)；
(5)迅速加入1mL TRIzol溶液，涡旋至样品与TRIzol溶液充分混匀，然后置于室温静置5min；
(6)加入200μL氯仿，立即涡旋混匀后置于室温静置约3min；
(7)低温(4℃)，12,000rpm离心15min，然后吸取600μL上清于一新的1.5mL RNase-free离心管中；
(8)加入等体积(600μL)预冷的异丙醇，涡旋混匀后置于室温静置约10min；
(9)再次低温(4℃)离心15min(12,000rpm)，弃去上清后加入1mL 75％乙醇，洗涤RNA沉淀；
(10)4℃，7,500rpm离心5min，弃去上清；
(11)用枪头吸去残留的溶液，打开管盖，室温静置5-10min，直至RNA沉淀变为半透明状；
(12)加入30μL RNase-free ddH2O溶解沉淀，涡旋混匀，4℃，7,500rpm离心1min；
(13)利用琼脂糖凝胶电泳检测所获得的总RNA的质量(上样量1μL)。
二、总RNA中基因组DNA去除
为了避免提取的总RNA中含有的DNA对后续实验造成影响，需要使用DNase酶去除其中的DNA。
(1)去除DNA反应液配制：
涡旋混匀后，置于37℃反应1h；
(2)反应结束后，加入50μL RNase-free ddH2O涡旋混匀，然后加入50μL Tris饱和酚，50μL氯仿：异戊醇(体积比24:1)溶液，充分混匀，4℃，12,000rpm离心10min；
(3)吸取100μL上层溶液至一新的1.5mL离心管(RNase-free)中，再次加入100μL氯仿：异戊醇(体积比24:1)溶液，涡旋混匀，4℃，12,000rpm离心10min；
(4)吸取100μL上层溶液于一新的1.5mL RNase-free离心管中，加入1/10体积(10μL)3M醋酸钠(NaAc)溶液，再加入2.5倍体积(250μL)事先预冷的无水乙醇，涡旋混匀后置于-20℃冰箱中静置1h或过夜；
(5)4℃，12,000rpm离心30min。弃上清后用75％乙醇洗涤RNA沉淀两次并干燥；
(6)加入15μL ddH2O(RNase-free)溶解RNA沉淀，然后利用琼脂糖凝胶电泳检测获得的总RNA质量(上样量1μL)。
三、RNA反转录
用Invitrogen SuperScriptTMIII反转录酶进行反转录，步骤如下：
(1)oligo(dT)18引物与RNA模板结合：
涡旋混匀后瞬时离心，在PCR仪中65℃反应5min，立即置于冰上放置3min；
(2)cDNA合成：在(1)中的反应体系中加入下列组分：
涡旋混匀后短暂离心，然后置于PCR仪中50℃1h，70℃15min。将获得的cDNA溶液保存于-20℃备用。
四、实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)
将反转录得到的cDNA溶液用无菌的去离子水稀释20倍后作为模板，使用SuperReal Pre Mix(SYBR Green)进行qRT-PCR，以MH63中Os07g0503900(UGT707A2)为对照(UGT707A2基因序列如SEQ ID No.4所示，编码SEQ ID No.3所示蛋白)。以水稻中的看家基因OsACTIN(Os03g0718100)为内参基因，用于cDNA模板的均一化。
具体的引物序列如下：
OsACTIN-qRT-F：5’-TGACGGAGCGTGGTTACTCAT-3’；
OsACTIN-qRT-R：5’-AGGACCTCAGGGCAGCGGAAA-3’。
707A22-qRT-F：5’-GTGCCTGATGGACGAG-3’；
707A22-qRT-R：5’-CTATTTGGACGACACATGGAT-3’。
707A2-qRT-F：5’-CCGTTCTGCGTCTCC-3’；
707A2-qRT-R：5’-TCTCGTCGATCTCGG-3’。
最后用Delta Delta CT relative quantitation法(2-ΔΔCT法)分析基因在不同材料中的表达量。每个材料均包含4个生物学重复，最终各个基因的表达量为4个生物学重复的平均值。反应体系如下：
反应程序为：95℃30s；95℃5s，62℃15s，72℃20s，40个循环。
结果发现，在粳稻品种中由于不存在OsUGT707A22基因，故在粳稻品种中检测不到该基因的表达量，而在籼稻品种叶片中OsUGT707A22有较高的表达量(图2)。
实施例3、OsUGT707A22基因催化功能分析
一、原核表达载体构建
MH63基因组中OsUGT707A22基因CDS序列(SEQ ID No.2)委托生物公司合成至pMAL-c2X表达载体中，即将pMAL-c2X载体BamHI和HindIII两个酶切位点之间的序列替换为OsUGT707A22基因(SEQ ID No.2)得到的载体，命名为pMAL-OsUGT707A22。SEQ ID No.2为OsUGT707A22基因的CDS序列，编码SEQ ID No.1所示蛋白质。
MH63基因组中OsUGT707A2基因序列经PCR扩增获得。具体过程如下：
(1)提取MH63幼苗期叶片的基因组DNA。
(2)用含有BamHI和HindIII的引物F1/R1以MH63基因组DNA为模板扩增含有酶切位点的OsUGT707A2基因CDS序列。
引物F1：5’-ggatccATGGCTTCAGCGATGGCGAG-3’；
引物R1：5’-aagcttCTATATGGATGACATGTGGGC-3’。
(3)将获得的基因片段连接到pEASY-T3载体(TransGen Biotech，-T3Cloning Kit)，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，利用蓝白斑筛选阳性克隆。
(4)将阳性克隆利用引物F2/R2进行PCR鉴定，扩增片段大小为310bp为阳性克隆。引物如下：
引物F2：5’-AGGACTTCATGCCCGGTTCATGC-3’；
引物R2：5’-TTCTTCATCACAGGCGTCGGCAACA-3’。
(5)将阳性克隆委托公司进行测序，经测序验证正确后的重组质粒命名为pEASY-T3-OsUGT707A2。
重组载体pEASY-T3-OsUGT707A2的结构描述为：将pEASY-T3载体的酶切位点BamHI和HindIII之间的小片段替换为SEQ ID No.4所示DNA片段后的重组质粒。SEQ ID No.4为OsUGT707A2基因的CDS序列，编码SEQ ID No.3所示蛋白质。
(6)用限制性内切酶BamHI和HindIII将实施重组载体完全酶切，同时酶切表达载体pMAL-c2X(华越洋，VECT-570)。酶切体系为：5μg质粒、2.5μL 10×酶切缓冲液、2μLBamHI、2μL HindIII，加ddH2O补充反应体系至50μL。酶切反应条件为：37℃酶切4小时。
(7)用琼脂糖电泳对酶切产物进行分离，回收大小约为1.5Kb包含OsUGT707A2的片段，以及6.6Kb左右的pMAL-c2X载体片段，分别溶解于30μL ddH2O中。
(8)将步骤(7)获得的基因片段与载体骨架片段进行连接反应。连接反应体系为：1μL 10×连接酶缓冲液、0.5μL T4 DNA连接酶、1μL pMAL-c2X载体片段、3μL基因片段，加ddH2O补充反应体系至10μL。连接反应条件为：4℃连接12小时。
(9)将连接反应的产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，用含有Ampicillin的LB平板(Ampicillin浓度为100μg/mL)进行筛选。
(10)将阳性克隆进行PCR鉴定(引物F2/R2)。OsUGT707A2阳性克隆的扩增片段为310bp。
引物F2：5’-AGGACTTCATGCCCGGTTCATGC-3’
引物R2：5’-TTCTTCATCACAGGCGTCGGCAACA-3’。
(11)将获得的阳性克隆委托公司测序，并提取质粒。该质粒为将pMAL-c2X载体BamHI和HindIII两个酶切位点之间的序列替换为OsUGT707A2基因(SEQ ID No.4)得到的载体，分别命名为pMAL-OsUGT707A2，为重组原核表达载体。
二、OsUGT707A2及OsUGT707A22原核表达
(1)将步骤一获得的两个重组原核表达载体(pMAL-OsUGT707A22和pMAL-OsUGT707A2)分别转入大肠杆菌NovaBlue(华越洋，WR4478)感受态细胞中。同时设置转入pMAL-c2X空载体作为对照。用含有Ampicillin的LB平板筛选阳性克隆。
(2)将阳性克隆接种于20mL LB液体培养基(含100μg/mL Ampicillin)中，37℃，220rpm振荡培养12-14h。
(3)按1:1000的比例(体积比)将(2)中的菌夜转接至400mL LB液体培养基(含100μg/mL Ampicillin)中，37℃，220rpm，培养至OD 600＝0.6-0.8。
(4)将菌夜取出置于冰上制冷后加入160μL浓度为500mM的IPTG，使IPTG的终浓度为0.2mM。
(5)16℃，100rpm振荡培养24h，以诱导蛋白表达。
(6)4℃，10,000rpm离心10min收集菌体。然后用柱缓冲液重悬菌体，置于-20℃冷冻过夜。柱缓冲液(1L)配方如下：NaCl 11.7g；DTT 154mg；0.5M EDTA2mL；1M Tris-HCl(pH＝7.4)40mL；余量为水。
(7)次日待样品融化后，用超声破碎仪破碎细胞，然后10,000rpm离心10min。
(8)利用直链淀粉柱纯化目的蛋白。具体纯化过程如下：
a、利用柱缓冲液(配方见上)活化亲和柱填料(流速为1mL/min)。
b、将(7)中获得的粗蛋白上清液缓慢加入已活化的直链淀粉柱中，将流速调至约0.5mL/min，以使目的蛋白与亲和柱填料充分结合。
c、待样品都流过填料后，加入柱缓冲液冲洗多次，以去除未结合的杂蛋白。
d、加入15mL含有麦芽糖的柱缓冲液(1L柱缓冲液中含有3.6g麦芽糖)洗脱目的蛋白，重复该步骤一次。
e、将洗脱液分次加入超滤管中，每次4℃，5000rpm离心15min。
f、加入1mL 100mM Tris-HCl 4℃，5000rpm离心15min，倒掉废液。将目的蛋白溶液转入1.5mL Eppendorf离心管中。
g、吸取获得的目的蛋白溶液2μL，加入1mL Bradford(Quick StartTM Bradford 1×Dye Reagent，BioRAD，CAS 67-56-1)，利用分光光度计测量待测蛋在595nm(OD595)处的吸收峰并将目的蛋白的吸收值换算为蛋白浓度，得出纯化获得的OsUGT707A2重组蛋白的浓度为4.27μg/μL；OsUGT707A22重组蛋白的浓度为3.14μg/μL。
三、OsUGT707A2及OsUGT707A22体外酶活
(1)酶活反应体系为：Tris-HCl(pH 7.0，50mM，含有10mM DTT)38μL，10mM糖基受体(tricin)1μL，100mM糖基供体(UDPG)1μL，步骤二获得的重组蛋白10μL。30℃水浴反应1h，然后用等体积甲醇中止反应。以加入从转入pMAL-c2X空载体的大肠杆菌中按照上述步骤二操作所得蛋白的样品为对照。
(2)酶活产物检测：将(1)中样品4℃，12,000rpm离心10min离心，取30μL用UPLC-MS(Agilent 1290UPLC-6540Q-TOF)进行检测。流动相A相：0.1％甲酸水溶液，％表示体积百分含量；B相：乙腈。洗脱梯度：0-2min：5％B-10％B，2-12min：10％B-25％B，12-18min：25％B-70％B，18-23min：70％B-90％B，23-25min：90％B-100％B，25-30min：100％B，后运行5min，％均表示体积百分含量。流速0.3mL/min，柱温：40℃，进样量：5μL。采用电喷雾离子源(ESI)，正离子模式检测，载气为高纯氮气，压力40psi，温度325℃。
检测结果表明，与空载体相比，加入OsUGT707A2及OsUGT707A22重组蛋白的反应体系中出现一个新的色谱峰，说明在体外OsUGT707A2及OsUGT707A22均能催化tricin发生糖基化，糖基化的产物为tricin-5-O-glucopyranoside(图3)。
以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

Claims (10)

1.蛋白质，为如下任一：
(A1)氨基酸序列为SEQ ID No.1的蛋白质；
(A2)将SEQ ID No.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且来源于籼稻具有相同功能的蛋白质；
(A3)与(A1)-(A2)中任一所限定的氨基酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同一性且来源于籼稻具有相同功能的蛋白质；
(A4)在(A1)-(A3)中任一所限定的蛋白质的N端和/或C端连接蛋白标签后得到的融合蛋白。
2.编码权利要求1所述蛋白质的核酸分子。
3.根据权利要求2所述的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子为如下任一：
(B1)SEQ ID No.2所示的DNA分子；
(B2)在严格条件下与(B1)限定的DNA分子杂交且编码权利要求1所述蛋白质的DNA分子；
(B3)与(B1)-(B2)中任一限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码权利要求1所述蛋白质的DNA分子。
4.含有权利要求2或3所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组菌或转基因细胞系。
5.权利要求1所述的蛋白质在作为糖基化转移酶中的应用。
6.权利要求1所述的蛋白质在催化麦黄酮糖基化生成麦黄酮-5-O-葡萄糖糖苷中的应用。
7.权利要求2或3所述的核酸分子或权利要求4所述的表达盒、重组载体、重组菌或转基因细胞系在制备糖基化转移酶中的应用。
8.权利要求2或3所述的核酸分子或权利要求4所述的表达盒、重组载体、重组菌或转基因细胞系在制备用于催化麦黄酮糖基化生成麦黄酮-5-O-葡萄糖糖苷的产品中的应用。
9.根据权利要求5或7所述的应用，其特征在于：所述糖基化的受体为麦黄酮。
10.根据权利要求5-9中任一所述的应用，其特征在于：所述糖基化的供体为UDPG。
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