CN117347347A - 一种用于检测喉癌标志物cyfra21-1的检测试剂及其应用 - Google Patents
一种用于检测喉癌标志物cyfra21-1的检测试剂及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于生物标志物分析检测领域,具体涉及一种用于检测喉癌标志物CYFRA21‑1的检测试剂及其应用。该检测试剂包括SERS探针、捕获探针和多肽‑DNA偶联探针;SERS探针的制备方法包括:将4‑MBA标记金纳米双锥修饰上活化后的hpDNA1得到SERS探针;捕获探针的制备方法包括:将活化后的MBs表面修饰上活化的hpDNA2得到捕获探针;多肽‑DNA偶联探针的制备方法包括:将DNA1和DNA2分别修饰到Ab1和Ab2表面得到多肽‑DNA偶联探针。基于该检测试剂的检测方法相比现有的蛋白类标志物检测技术,具有更低的检出限,其中CYFRA21‑1的检出限低至0.76pg/mL。
Description
技术领域
本发明属于生物标志物分析检测领域,具体涉及一种用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂及其应用。
背景技术
喉癌(LC)是头颈部第二大常见的恶性肿瘤,喉部的不典型增生,声带白斑,乳头状瘤等疾病易转化为喉癌。虽然早期LC预后较好,五年生存率可达80%,但LC具有隐匿性,易被忽视,大部分患者就诊时已发展至中晚期,错失了最佳治疗时期。尽管化疗、放疗等手段可在一定程度上缓解病情,但5年生存期仍低至61%。虽然显微喉镜结合病理组织活检仍是现今诊断喉癌及喉癌前病变的“金标准”,但这种方法需要特殊设备和专门技术人员操作,检查价格昂贵,经济成本较高,限制了其在人群中的进一步推广使用。此外由于喉癌的病灶所处位置较为特殊,且声音嘶哑、咽喉部异物感、咳嗽、呼吸困难等症状缺乏特异性,喉镜下取组织活检又容易损伤周边的声带等组织,难以作为喉癌人群的初筛手段在大规模人群中应用。因此,LC的筛查和早期诊断成为当前研究领域急待解决的焦点问题,建立简易、非侵入性和高灵敏的检测方法,从而降低LC病人的死亡率已成为迫切的需求。
生物标志物是由于肿瘤异常或者肿瘤刺激宿主产生的一类物质,对评估肿瘤的发生、发展以及预后具有重要的参考意义。角化素蛋白片段19(CYFRA21-1)是细胞角蛋白19的可溶性片断,在上皮组织或细胞溶解或癌变坏死脱落时,大量的CYFRA21-1以溶解片段的形式被释放进入血液循环,导致CYFRA21-1含量异常升高。研究表明,头颈鳞癌患者血清CYFRA21-1含量增高,与肿瘤分期、淋巴结转移呈正相关。目前,酶联免疫吸附剂测定(ELISA)和蛋白免疫印迹试验(WB)等传统方法分析过程涉及大量复杂人工操作,重复性差且灵敏度较低。
因此,亟需开发一种操作操作简单、灵敏度高、特异性的检测新方法。
发明内容
为了解决上述问题,本发明目的之一在于提供一种用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂,该检测试剂是通过多肽-DNA偶联探针将核酸信号放大技术催化发夹自组装(CHA)策略引入蛋白类标志物检测制得检测试剂,具有灵敏度高和特异性强的特点。
为了达到上述目的,本发明可以采用以下技术方案:
本发明一方面提供一种用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂,其包括SERS探针、捕获探针和多肽-DNA偶联探针;SERS探针的制备方法包括:将4-MBA标记金纳米双锥修饰上活化后的hpDNA1得到SERS探针;捕获探针的制备方法包括:将活化后的MBs表面修饰上活化的hpDNA2得到捕获探针;多肽-DNA偶联探针的制备方法包括:将DNA1和DNA2分别修饰到Ab1和Ab2表面得到多肽-DNA偶联探针。
本发明另一方面提供一种用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的SERS传感器,其包括上述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂。
本发明再一方面提供一种用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂盒,包括上述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂。
本发明再一方面提供一种上述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂在制备用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的试剂或试剂盒中的应用。
本发明再提供一种检测喉癌标志物CYFRA21-1的方法,包括:使用上述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂或上述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的SERS传感器或上述用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂盒进行检测。
本发明有益效果至少包括:
(1)本发明通过多肽-DNA偶联探针将核酸信号放大技术CHA策略引入蛋白类标志物检测,为蛋白类标志物检测提供了新思路;
(2)本发明以GNBPs作为SERS活性介质,加之磁球富集分离策略,可提供丰富的“热点”,从而实现SERS信号的显著放大;
(3)本发明相比现有的蛋白类标志物检测技术,具有更低的检出限,其中CYFRA21-1的检出限低至0.76pg/mL。
附图说明
图1是本发明提供的一种用于喉癌标志物CYFRA21-1检测的SERS传感器的制备方法的流程图;(A)为SERS探针和捕获探针的制备示意图;(B)为基于多肽-DNA偶联探针的CHA策略的原理示意图;(C)为使用SERS传感器高灵敏检测CYFRA21-1的示意图;
图2为实施例1中所制备的GNBPs的表征情况;(A)为GNBPs的SEM照片;(B)为
GNBPs的TEM照片;(C)为GNBPs的高分辨TEM照片;(D)为GNBPs的EDX光谱图;(E)为GNBPs的UV-Vis-NIR光谱;(F)为4-MBA修饰的GNBPs和4-MBA的拉曼光谱;
图3为实施例2中标记探针和捕获探针所形成复合物的表征;(A)为MBs的SEM照片;(B)为标记探针和捕获探针所形成复合物的高倍SEM照片;(C)为标记探针和捕获探针所形成复合物的低倍SEM照片;(D)为标记探针和捕获探针所形成复合物的EDX光谱图;
图4为实施例3中反应参数优化情况;(A)为标记探针的体积优化;(B)为捕获探针的体积优化;(C)为反应温度的优化;(D)为反应pH的优化;
图5为实施例4中制备的SERS传感器的性能情况;(A)为SERS传感器的重现性;(B)为不同批次制备的SERS传感器检测CYFRA21-1在1080cm-1特征峰处强度柱状图;(C)为SERS传感器的特异性;(D)为制备的SERS传感器检测CYFRA21-1、CEA、AFP、SCC-Ag在1080cm-1特征峰处强度柱状图;
图6为实施例5中的测试情况;(A)为实施例5中制备的SERS传感器检测分散在PBS中不同浓度的CYFRA21-1的拉曼光谱;(B)为实施例5中分散在PBS中不同浓度的CYFRA21-1在1080cm-1特征峰处强度于浓度的对数值之间的线性关系图;(C)为实施例5中制备的SERS传感器检测分散在血清中不同浓度的CYFRA21-1的拉曼光谱;(D)为实施例5中分散在血清中不同浓度的CYFRA21-1在1080cm-1特征峰处强度于浓度的对数值之间的线性关系图;
图7为实施例6中的测试情况;(A)为SERS传感器检测健康人和喉癌患者血清的拉曼光谱;(B)为健康人和喉癌患者血清的拉曼光谱在1080cm-1特征峰处强度;(C)为SERS检测结果和ELISA检测结果线性关系图。
具体实施方式
所举实施例是为了更好地对本发明进行说明,但并不是本发明的内容仅局限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整,仍属于本发明的保护范围。
本文中使用的术语仅用于描述特定实施例,并且无意于限制本公开。除非在上下文中具有明显不同的含义,否则单数形式的表达包括复数形式的表达。如本文所使用的,应当理解,诸如“包括”、“具有”、“包含”之类的术语旨在指示特征、数字、操作、组件、零件、元件、材料或组合的存在。在说明书中公开了本发明的术语,并且不旨在排除可能存在或可以添加一个或多个其他特征、数字、操作、组件、部件、元件、材料或其组合的可能性。如在此使用的,根据情况,“/”可以被解释为“和”或“或”。
为了达到上述目的,本发明可以采用以下技术方案:
本发明实施例提供一种用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂,其包括SERS探针、捕获探针和多肽-DNA偶联探针;SERS探针的制备方法包括:将4-MBA标记金纳米双锥修饰上活化后的hpDNA1得到SERS探针;捕获探针的制备方法包括:将活化后的MBs表面修饰上活化的hpDNA2得到捕获探针;多肽-DNA偶联探针的制备方法包括:将DNA1和DNA2分别修饰到Ab1和Ab2表面得到多肽-DNA偶联探针。
表1反应所用的核苷酸序列
需要说明的是,表面增强拉曼散射(SERS)是一种利用光激发粗糙金属纳米结构表面电子产生局域表面等离子体共振实现拉曼信号显著放大的检测技术,可在分子水平快速、丰富地反映组织生化的细微变化,具有精细如“指纹”的特点。SERS采集样本信号只需要数秒钟,对样本无需复杂的预处理。SERS具有不易淬灭、检测条件温和、不受背景荧光干扰等特点。此外,SERS不受水溶液信号的干扰,可检测液体状态下的样品,非常适合临床生物样本的检测。另外,目前蛋白类生物标志物SERS检测主要依赖于双抗夹心策略。虽然操作简单,具有可靠的特异性;然而,由于早期LC患者血清中生物标志物浓度极低,仅依靠双抗夹心策略无法满足高灵敏检测的需求。近年来,Aptamer策略的出现打破了核酸只作为遗传信息存储和传递载体的传统认识。利用Aptamer作为识别分子,结合核酸信号放大的策略,满足了高灵敏检测目标蛋白的需求。但是目前Aptamer库比较匮乏,许多蛋白仍缺乏满意的Aptamer,且Aptamer策略受到其序列多样性的严重制约。因此,开发一种简单、通用的检测策略,成为拓展SERS临床应用的突破口。
在一些具体实施例中,上述的SERS探针的制备方法包括:将GNBPs溶液和4-MBA溶液孵育,离心和纯化得4-MBA修饰GNBPs溶液;将hpDNA1溶液使用三(2-羧乙基)膦缓冲液活化得活化hpDNA1溶液;将4-MBA修饰GNBPs溶液和活化hpDNA1溶液混合孵育,纯化得SERS探针。
在一些具体实施例中,上述的SERS探针的制备方法可以包括:将4mL的GNBPs溶液与200μL的4-MBA溶液(2mmol/L)在持续搅拌下孵育1h后离心纯化(15min,7000rpm)。随后,将60μL的hpDNA1溶液(0.1mmol/L)加入80μL新制备的三(2-羧乙基)膦(1mmol/L)缓冲液。将活化的hpDNA1溶液与2mL的4-MBA修饰的GNBPs溶液混合12h,然后与40
L的牛血清白蛋白(1wt%)溶液混合并孵育120min。最后,在三次纯化(15min,5000rpm)后将溶质分散于磷酸缓冲盐溶液可得到SERS探针。
在一些具体实施例中,上述的捕获探针的制备方法可以包括:将MBs溶液、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液和N-羟基琥珀酰亚胺溶液混合孵育得到MBs表面活化溶液;将活化hpDNA2溶液与MBs表面活化溶液混合孵育,分离,洗涤得捕获探针。
在一些具体实施例中,上述的捕获探针的制备方法可以包括:在室温下,将500μL的MBs(0.5mg/mL)溶液与5μL的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(0.1mol/L)溶液和5μL的N-羟基琥珀酰亚胺(0.1mol/L)溶液混合并进行30min的震荡孵育(500rpm)以活化MBs表面的羧基。加入60μL活化的hpDNA2溶液(0.1mmol/L)混合12h后滴加10μL的牛血清白蛋白(1wt%)溶液混合并孵育120min。接着,用磁铁分离MBs,吸取上清液并使用PBS溶液反复洗涤两次,即可得到捕获探针。
在一些具体实施例中,上述的多肽-DNA偶联探针的制备方法可以包括:将Ab1和Ab2溶液与(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯的磷酸缓冲盐溶液反应得混合液a;硫代寡链核苷酸DNA1和DNA2与二硫苏糖醇在磷酸缓冲盐溶液中孵育得混合液b;将混合液a和混合液b纯化得多肽-DNA偶联探针。
在一些具体实施例中,上述的多肽-DNA偶联探针的制备方法可以包括:将1.3mg/mL的Ab1和Ab1溶液与摩尔过量20倍的(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯的磷酸缓冲盐溶液(pH 7.4,包含20mM乙二胺四乙酸和150mM氯化钠)反应2h。同时,将4mL硫代寡链核苷酸DNA1和DNA2与4mL二硫苏糖醇(100mM)在磷酸缓冲盐溶液(pH 7.4,包含5mM乙二胺四乙酸和150mM氯化钠)中孵育1h。通过使用10kDa的截留膜超滤(12min,10000rpm)三次和磷酸缓冲盐溶液来纯化两种产物。接着,未反应的DNA通过使用100kDa的截留膜超滤(10min,10000rpm)三次移除,即可得到多肽-DNA偶联探针。
在一些具体实施例中,金纳米双锥可以采用柠檬酸钠一步还原法制备,具体包括:依次向装有4mL的氯金酸(10mmol/L)溶液的烧杯中加入80mL的十六烷基三甲基溴化铵(100mmol/L)溶液和0.8mL的硝酸银(10mmol/L)溶液得到生长溶液。向生长溶液中加入1.6mL的盐酸(1mol/L)溶液和0.2mL的抗坏血酸(100mmol/L)溶液并不断搅拌。5min后向混合溶液中加入560μL制备好的金种子溶液并于水浴锅(28℃)中静置、保温24h。待溶液颜色变为暗紫色后,将产物使用超纯水离心、清洗三遍,并分散在20mL的超纯水中
本发明另一实施例提供一种用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的SERS传感器,其包括上述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂。
本发明再一实施例提供一种用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂盒,包括上述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂。
本发明再一实施例提供一种上述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂在制备用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的试剂或试剂盒中的应用。
本发明实施例再提供一种检测喉癌标志物CYFRA21-1的方法,包括:使用上述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂或上述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的SERS传感器或上述用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂盒进行检测。
在一些具体实施例中,上述检测喉癌标志物CYFRA21-1的方法,包括:将待血清样本与多肽-DNA偶联探针混合孵育,随后加入SERS探针和捕获探针共同孵育制得复合物;将复合物进行拉曼测试,根据拉曼测试结果检测喉癌标志物CYFRA21-1。
需要说明的是,上述检测喉癌标志物CYFRA21-1的方法中,将血清样本与多肽-DNA偶联探针混合于管中共孵育,确保抗体尾部DNA充分杂交,随后加入SERS探针溶液、捕获探针溶液共孵育,确保反应的充分进行;随后用磁铁在管壁外诱导复合物聚集,去除上清后将固体复合物取出置于拉曼显微镜下测试。测试参数:激光激发波长785nm,扫描范围600~1800cm-1,物镜放大倍数50×,激光功率60mW,曝光时间10s。为保证SERS测试结果的代表性和有效性,取15条光谱的平均值用于分析。
为了更好地理解本发明,下面结合具体示例进一步阐明本发明的内容,但本发明的内容不仅仅局限于下面的示例。
实施例1GNBPs的合成及表征
采用柠檬酸钠一步还原法制备金种子溶液,接着,依次向装有4mL的氯金酸(10mmol/L)溶液的烧杯中加入80mL的十六烷基三甲基溴化铵(100mmol/L)溶液和0.8mL的硝酸银(10mmol/L)溶液得到生长溶液;向生长溶液中加入1.6mL的盐酸(1mol/L)溶液和0.2mL的抗坏血酸(100mmol/L)溶液并不断搅拌;5min后向混合溶液中加入560μL制备好的金种子溶液并于水浴锅(28℃)中静置,保温24h;待溶液颜色变为暗紫色后,将产物使用超纯水离心,清洗三遍,并分散在20mL的超纯水中得到GNBPs溶液。
对制备的GNBPs的形貌和结构使用SEM和TEM进行表征,结果如图2所示,具体地,如图2(A)和图2(B)所示,GNBPs具有两个尖锐的尖端,尺寸均匀、分散性良好;单个GNBP长径为41nm,短径为16nm。
另外,通过GNBPs的HRTEM图像(图2(C))可知,晶格间距为0.235nm,对应于位于金面心立方晶体结构的(111)晶格平面。GNBPs的能谱图如图2(D)所示,可以看出GNBPs主要的元素组成为Au;少量Ag可归因于Ag的欠电位沉积。图2(E)表明,由于尖锐尖端对GNBPs的LSPR效应的影响,在693nm处有一个强的UV-Vis-NIR吸收峰,而窄的半峰宽度进一步表明了GNBPs的均匀尺寸。图2(F)为拉曼信号分子4-MBA(1×10-2mol/L)和4-MBA(1×10-6mol/L)标记GNBPs的SERS光谱。1080cm-1处的特征峰为4-MBA分子面内环形呼吸与(C–S)耦合产生;与4-MBA微弱的信号相比,4-MBA标记GNBPs的SERS信号显著增强。根据公式AEF=(ISERS/CSERS)/(IRS/CRS)可计算得GNBPs的增强因子,其中,ISERS为GNBPs在CSERS浓度下的SERS信号强度;IRS为非SERS条件及CRS浓度下的拉曼信号强度。经过计算,可知GNBPs的增强因子为6.67×105。因此,GNBPs具有良好的SERS增强效应。
实施例2复合物的表征
将CYFRA21-1标准品与多肽-DNA偶联探针混合于管中共孵育,确保抗体尾部DNA充分杂交,随后加入SERS探针溶液、捕获探针溶液共孵育;随后用磁铁在管壁外诱导复合物聚集,去除上清后将固体复合物取出。MBs的SEM图像如图3(A)所示,可见MBs表面粗糙、尺寸均一,平均直径为323.9nm。为表征由多肽-DNA偶联探针介导CHA反应的可行性,通过SEM表征了反应所得的复合物,如图3(B)和图3(C)所示,GNBPs被组装在MBs表面且在相邻MBs颗粒之间可观察到更多GNBPs的聚集,表明磁球富集策略和CHA反应可导致GNBPs的显著聚集,实现SERS信号的双重放大;图3(D)的能谱图再次验证了GNBPs被成功聚集在MBs表面。
实施例3SERS传感器的条件优化
CHA反应效率决定了MBs捕获GNBPs的量,图4(A)优化了SERS标记探针的量;当SERS探针量少于4μLL时,1080cm-1特征峰强度随着量的增加而显著增强,这是由于SERS探针量的增加导致溶液中分子碰撞几率增加,CHA反应效率提高;当SERS探针量大于4μL时,1080cm-1特征峰强度随着量的增加而呈现下降趋势。这是由于随着SERS探针对背景信号的贡献大于对SERS信号的贡献,因此,最佳SERS探针量为4μL。同样的,可以优化捕获探针的量为3μL(见图4(B))。另外,反应温度对于CHA反应中发夹DNA杂交至关重要,如图4(C)所示,1080cm-1特征峰强度随温度的升高而增加并在37℃时达到最大值。再者,图4(D)优化了反应的pH值,可以观察到当pH值为7.5时,反应效率最佳;因此,反应最适pH为7.5。
实施例4传感性能评估
选取五个不同批次制备的SERS传感器用于检测CYFRA21-1,验证了SERS传感器的检测重现性。如图5(A)所示,五个SERS光谱在形状上并无明显差异;图5(B)显示出五个SERS光谱在1080cm-1特征峰强度,相对标准偏差为4.07%,表明所制备的SERS传感器具有优异的重现性;为研究SERS传感器的特异性,选取CEA、AFP和SCC-Ag作为干扰物,使用SERS传感器分别检测CYFRA21-1溶液(1μg/mL)和CEA、AFP、SCC-Ag溶液(10μg/mL)以及空白对照组,如图5(C)和5(D)所示,与干扰物和空白对照组相比,CYFRA21-1展现出显著的特征峰,表明所制备的SERS传感器具有良好的特异性。
实施例5CYFRA21-1的定量分析
将CYFRA21-1分散到PBS缓冲液中并稀释至不同的浓度(1pg/mL、10pg/mL、100pg/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL和1μg/mL);通过制备的SERS传感器与检测不同浓度的CYFRA21-1,并根据4-MBA在1080cm-1特征峰处的信号绘制CYFRA21-1与SERS信号强度变化量的工作曲线。如图6(A)所示,随着CYFRA21-1浓度的增加,SERS信号强度逐渐增强。以CYFRA21-1浓度的对数为横坐标,以1080cm-1特征峰处SERS信号强度为纵坐标,得到对数坐标下的浓度-强度校正曲线(图6B)。可以观察到1080cm-1特征峰处SERS信号强度与CYFRA21-1浓度的对数在1pg/mL~1μg/mL的范围内呈现良好的线性关系。线性回归方程为y=2863.40x+34998.40(R2=0.9808)。通过计算得出SERS传感器对PBS中CYFRA21-1的检出限为0.69pg/mL。同样地,为探究SERS传感器血清中CYFRA21-1的检测性能,将CYFRA21-1分散到血清中并稀释至不同的浓度(1pg/mL、10pg/mL、100pg/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL和1μg/mL)并进行SERS检测。如图6(A)和6(B)所示,SERS信号强度与CYFRA21-1血清浓度的对数呈现良好的线性关系。线性回归方程为y=2642.83x+32233.65(R2=0.9802)。通过计算可得出SERS传感器对血清中CYFRA21-1的检出限为0.76pg/mL。上述结果表明,SERS传感器可用于定量分析CYFRA21-1且具有优异的灵敏度。
实施例6临床样本分析
为探究SERS传感器对于临床样本检测的准备性以判断其临床应用价值,利用其检测了健康人和LC患者血清中CYFRA21-1表达水平。图7(A)和图7(B)分别为30例健康人和30例LC患者血清SERS平均SERS光谱以及在1080cm-1特征峰处的信号强度,可以看出LC患者1080cm-1特征峰处强度显著高于正常人。将30例健康人和30例LC患者检测所得SERS光谱在1080cm-1特征峰处强度代入线性回归方程,计算得到CYFRA21-1的表达水平。为验证SERS检测结果的准确性,将SERS检测结果与ELISA结果进行线性拟合,计算得皮尔逊相关系数为0.97,表明两种检测方法的结果具有高度相关性。因此,SERS传感器对LC临床诊断具有良好的准确性和广阔的应用前景。
最后说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围,其均应涵盖在本发明的权利要求范围。
Claims (9)
1.用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂,其特征在于,包括SERS探针、捕获探针和多肽-DNA偶联探针;SERS探针的制备方法包括:将4-MBA标记金纳米双锥修饰上活化后的hpDNA1得到SERS探针;捕获探针的制备方法包括:将活化后的MBs表面修饰上活化的hpDNA2得到捕获探针;多肽-DNA偶联探针的制备方法包括:将DNA1和DNA2分别修饰到Ab1和Ab2表面得到多肽-DNA偶联探针。
2.根据权利要求1所述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂,其特征在于,SERS探针的制备方法包括:将GNBPs溶液和4-MBA溶液孵育,离心和纯化得4-MBA修饰GNBPs溶液;将hpDNA1溶液使用三(2-羧乙基)膦缓冲液活化得活化hpDNA1溶液;将4-MBA修饰GNBPs溶液和活化hpDNA1溶液混合孵育,纯化得SERS探针。
3.根据权利要求1所述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂,其特征在于,捕获探针的制备方法包括:将MBs溶液、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液和N-羟基琥珀酰亚胺溶液混合孵育得到MBs表面活化溶液;将活化hpDNA2溶液与MBs表面活化溶液混合孵育,分离,洗涤得捕获探针。
4.根据权利要求1所述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂,其特征在于,多肽-DNA偶联探针的制备方法包括:将Ab1和Ab2溶液与(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯的磷酸缓冲盐溶液反应得混合液a;硫代寡链核苷酸DNA1和DNA2与二硫苏糖醇在磷酸缓冲盐溶液中孵育得混合液b;将混合液a和混合液b纯化得多肽-DNA偶联探针。
5.用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的SERS传感器,其特征在于,包括权利要求1至4中任一项权利要求所述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂。
6.用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂盒,其特征在于,包括权利要求1至4中任一项权利要求所述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂。
7.权利要求1至4中任一项权利要求所述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂在制备用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的试剂或试剂盒中的应用。
8.一种检测喉癌标志物CYFRA21-1的方法,其特征在于,使用权利要求1至4中任一项权利要求所述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂或权利要求5所述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的SERS传感器或权利要求6所述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂盒进行检测。
9.根据权利要求8所述的检测喉癌标志物CYFRA21-1的方法,其特征在于,将待血清样本与多肽-DNA偶联探针混合孵育,随后加入SERS探针和捕获探针共同孵育制得复合物;将复合物进行拉曼测试,根据拉曼测试结果检测喉癌标志物CYFRA21-1。
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Family
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Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110716040A (zh) * | 2019-10-31 | 2020-01-21 | 福建师范大学 | 一种基于MXene纳米片光热放大的邻近杂交双模式免疫传感器的制备及应用 |
CN116027044A (zh) * | 2022-12-28 | 2023-04-28 | 南京浦光生物科技有限公司 | 基于邻位诱导效应和门控式介孔硅的pcsk9检测方法 |
CN116519935A (zh) * | 2023-02-24 | 2023-08-01 | 徐州医科大学附属医院 | 一种用于肿瘤标志物cyfra21-1 sers检测的免疫生物芯片及其制备方法 |
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110716040A (zh) * | 2019-10-31 | 2020-01-21 | 福建师范大学 | 一种基于MXene纳米片光热放大的邻近杂交双模式免疫传感器的制备及应用 |
CN116027044A (zh) * | 2022-12-28 | 2023-04-28 | 南京浦光生物科技有限公司 | 基于邻位诱导效应和门控式介孔硅的pcsk9检测方法 |
CN116519935A (zh) * | 2023-02-24 | 2023-08-01 | 徐州医科大学附属医院 | 一种用于肿瘤标志物cyfra21-1 sers检测的免疫生物芯片及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
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XIAO TAO BAO ET AL.: "Highly sensitive detection of CYFRA21-1 with a SERS sensing platform based on the MBs enrichment strategy and antibody-DNA-mediated CHA amplification", FORONTIERS IN BIOENGINEERING AND BIOTECHNOLOGY, vol. 11, 10 August 2023 (2023-08-10), pages 1 - 10 * |
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