CN117343130A - 一种具有促慢性难愈合性皮肤创伤修复活性的多肽lx及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有促慢性难愈合性皮肤创伤修复活性的多肽LX及其应用。所述多肽LX的氨基酸序列为：RAVFCEIFKRC，该多肽LX的应用为在制备促皮肤创伤修复药物中的应用。本发明提供了一种新的多肽LX，该多肽LX具有优异的促皮肤组织再生活性，对深二度烫伤和糖尿病慢性皮肤创伤均具有良好的修复作用，采用其治疗Ⅱ型糖尿病小鼠慢性皮肤创伤16天后，皮肤伤口修复率达到了98.4%，显著高于rh‑bFGF（89.8%）。本发明多肽LX仅具有11个氨基酸，易合成、成本低，为慢性皮肤创伤修复类药物的开发提供了新的途径，也为皮肤创伤治疗药物的开发提供了新的方向。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种具有促深二度烫伤和糖尿病慢性皮肤创伤修复活性的多肽LX及其应用。
背景技术
虽然针对慢性皮肤伤口治疗已经做出了巨大努力，但慢性伤口治疗仍是巨大的临床挑战，其不断增加的发病率给全球患者和医疗卫生系统带来巨大的心理和经济负担。据报道，仅在美国就有多达600万人受慢性难愈合性伤口的影响。皮肤为人体最大的器官，约占成年人总体重的15%，是机体发挥抵御病原入侵、防止水分流失和紫外损伤等重要生理功能的关键屏障。当外界环境（包括热、机械、理化和生物损伤等）破坏皮肤结构完整性时，其作为身体防御机制的主要功能就会受损。正常伤口的皮肤再生过程主要经历四个重叠但不同的阶段：止血、炎症、细胞增殖和基质重塑。而伤口修复过程超过12周被定义为慢性难愈合性伤口，通常存在血液循环不良、水肿、感染、肥胖以及糖尿病等自身免疫性疾病等多种因素。如在糖尿病慢性难愈合性皮肤伤口的愈合过程中，皮肤组织血管受损阻碍氧气供应，缺氧导致血管生成（内皮细胞）、再上皮化（角质形成细胞和成纤维细胞）和细胞外基质形成受阻。此外，炎症细胞（如中性粒细胞和巨噬细胞等）在伤口床中持续浸润产生过量炎症介质及活性氧（ROS）损伤伤口组织，高耗氧量的炎症细胞过度募集会加剧缺氧，恶性循环使伤口愈合延迟。由于糖尿病皮肤伤口溃疡涉及的复杂病理生理机制，常规使用美国食品药品监督管理局批准的糖尿病足溃疡疗法护理治疗效果达不到伤口愈合的需求。因此，寻求一种有效促进糖尿病慢性难愈合性伤口愈合的策略对于机体重建正常生理功能、恢复内环境稳态以及减轻患者、社会的心理和经济负担具有重要作用。
近年来，干细胞治疗、组织工程技术以及高压氧疗为慢性难愈合性皮肤创伤修复提供了新型治疗策略，但存在价格昂贵，治疗周期长等缺陷，因此难以得到广泛推广。药物治疗在皮肤创伤治疗中仍发挥着重要的作用，常见的临床创伤修复治疗药物主要包括：小分子化合物，生长因子（rh-bFGF, EGF），动植物来源药物，低粘性敷料等。这些药物虽然具有不错的效果，但也存在诸多缺陷，如难以合成，合成成本较高，储存条件苛刻，药物活性成分不稳定以及容易导致瘢痕形成等，难以满足临床对皮肤创伤治疗的药物需求。因此新型高效的促皮肤组织再生先导分子的发掘以及其促创伤修复分子机制的探索，显得尤为重要且必要。
与小分子化合物药物相比，多肽类药物表现出活性更强、毒性更小，安全性更高、开发的成功率高、靶向性更强等特点。此外，多肽类药物的研发具有广阔的商业市场，已逐渐成为药物开发领域不容忽视的“潜力股”。
本发明旨在提供一种在深二度烫伤和糖尿病慢性皮肤创伤上均表现出良好促皮肤创伤修复活性的多肽。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种具有促皮肤创伤修复活性的多肽LX，本发明的第二目的是提供所述多肽LX的应用。
本发明的第一目的是这样实现的，所述多肽LX具有如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列：RAVFCEIFKRC，其结构式如图1所示。
本发明的第二目的是这样实现的，所述多肽LX的应用为在制备促皮肤创伤修复药物中的应用。所述皮肤创伤为深二度烫伤或糖尿病慢性皮肤创伤。
本发明的有益效果为：本发明提供了一种新的多肽LX，该多肽LX具有优异的促皮肤组织再生活性，对深二度烫伤和糖尿病慢性皮肤创伤均具有良好的修复作用，采用其治疗Ⅱ型糖尿病小鼠慢性皮肤创伤16天后，皮肤伤口修复率达到了98.4%，显著高于rh-bFGF（89.8%）。本发明多肽LX仅具有11个氨基酸，易合成、成本低，为慢性皮肤创伤修复类药物的开发提供了新的途径，也为皮肤创伤治疗药物的开发提供了新的方向。
附图说明
图1为本发明多肽LX的一级结构图；
图2为本发明多肽LX促小鼠深二度烫伤修复活性图；其中，A为小鼠深二度烫伤创口修
复变化图，B为小鼠深二度烫伤创口修复情况量化图；
图3为本发明多肽LX的促深二度烫伤皮肤组织再生活性图；其中A为小鼠深二度烫伤
区域皮肤组织第14天的HE染色图片，B为小鼠创伤区域皮肤组织在烫伤第14天的再生表皮厚度量化图，C为小鼠创伤区域皮肤组织在烫伤第14天的再生肉芽组织再生厚度量化图；
图4为本发明多肽LX对Ⅱ型糖尿病小鼠皮肤伤口修复活性图；其中，A为Ⅱ型糖尿病小
鼠全皮层创口修复变化图，B为Ⅱ型糖尿病小鼠全皮层伤口修复情况量化图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的详细说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或改进，均落入本发明的保护范围。
本发明一种具有促皮肤创伤修复活性的多肽LX，其氨基酸序列为：RAVFCEIFKRC。
本发明还提供了所述多肽LX在制备促皮肤创伤修复药物中的应用。
所述皮肤创伤为深二度烫伤或糖尿病慢性皮肤创伤。
本发明进一步提供了一种药物组合物，该药物组合物包含作为活性剂的所述多肽LX及其药学上有效的载体。
实施例1多肽LX的合成
所述促皮肤慢性创伤修复活性多肽LX的氨基酸序列为RAVFCEIFKRC，采用常规化学合成或基因表达的方式制备得到促皮肤创伤修复活性多肽LX。
本发明促皮肤创伤修复活性多肽LX由武汉百意欣生物技术有限公司合成。
实施例2多肽LX促皮肤皮肤创伤修复活性检测
一、多肽LX的促深二度烫伤组织修复活性检测
实验方法：小鼠深二度烫伤实验
1、用 1%戊巴比妥钠（0.1 mL/20 g）麻醉雄性昆明小鼠（22-30 g），去除背部皮毛后，使用在沸水浴中加热10min 的直径为10 mm 的圆形铜质夹子紧贴于小鼠背部皮肤20 s以创建两个直径为10mm的深二度烫伤伤口。造模完成后，将小鼠随机分为三组每组6只小鼠，分别为空白组（vehicle，PBS）、阳性对照组（positive，rh-bFGF，100 ng/mL）和多肽组（LX，1nM）。使用移液枪吸取不同药物滴加在伤口区域治疗皮肤伤口，每天给药两次，每次20 µL。为了观察伤口愈合过程中伤口愈合变化，分别在术后第0、4、8和 14天拍照记录创口变化情况，以检测多肽LX的治疗效果。此外，在术后14天取小鼠背部创口组织进行病理组织学分析，以揭示皮肤伤口修复组织再生。使用 Image J 软件量化了不同拍照天数伤口面积，表皮和肉芽组织再生厚度。根据以下公式进行小鼠背部伤口修复率计算并使用GraphPad Prism8 软件进行统计分析。小鼠深二度烫伤实验进行了三次独立重复实验且每次实验中不同药物处理分组设置了 6 只小鼠作为平行对照。伤口愈合率（%）=（伤口初始面积（0 d）-治疗不同天数伤口面积（4、8、14 d））/伤口初始面积（0 d）×100%
2、为了评估小鼠创口组织在不同组别处理后的再生情况，进行H&E染色分析。将皮肤组织切成厚度为5 μm的组织片，依次脱蜡、梯度水化然后再进行H&E染色处理。使用光学显微镜在相同的放大倍数记录创伤组织再生情况，用软件Image J计算不同病理组织皮肤的表皮层、新生组织及上皮化形成的变化，并将数据在prism软件中进行统计分析。
结果：从图2可知，本发明多肽LX能够显著促进小鼠背部全皮层创口修复，治疗14天后LX促伤口修复活性与阳性对照rh-bFGF相近，且伤口修复率接近100%。从图3可知，HE染色结果表明本发明多肽LX明显促进了小鼠创伤表皮再生并显著加速了再上皮化，此外，也促进了伤口区域肉芽组织再生。
二、多肽LX的促Ⅱ型糖尿病小鼠皮肤创伤修复活性检测
实验方法：Ⅱ型糖尿病小鼠全皮层创伤实验
连续高脂饲料饲养小鼠一周后，使用浓度为30 mg/mL的链脲佐菌素（STZ），按小鼠体重 30 mg/kg 剂量腹腔注射C57BL/6小鼠构建Ⅱ型糖尿病动物模型。用1%戊巴比妥钠（0.1 mL/20 g）麻醉C57BL/6小鼠，去除背部皮毛。使用活检穿刺器在小鼠背部皮肤两侧创建两个直径为10 mm的全层伤口。将小鼠随机分为四组，分别为正常小鼠对照组（Normalcontrol, PBS）、糖尿病小鼠对照组（Diabetic control, PBS）、阳性对照组（Positive,rh-bFGF, 100 ng/ml）和多肽组（LX, 1nM）。每天给药两次，每次20 µL，术后在第0、4、8、16天拍照记录创口变化情况。
结果：从图4可知，本发明多肽LX能够显著促进小鼠背部全皮层创口修复，治疗8天后LX促伤口修复活性达到58.5%，显著高于空白对照（47.4%）和rh-bFGF（41.7%）。值得注意的是，LX治疗16天皮肤伤口修复率达到了98.4%，显著高于rh-bFGF（89.8%），展现出良好的治疗活性和研发潜力。
综上可知，本发明提供的促创伤修复肽LX具有较强的促皮肤深二度烫伤组织和Ⅱ型糖尿病慢性皮肤伤口修复活性，具有一定的临床应用价值。
Claims (4)
1.一种具有促慢性难愈合性皮肤创伤修复活性的多肽LX，其特征在于，所述多肽LX的氨基酸序列为：RAVFCEIFKRC。
2.权利要求1所述多肽LX在制备促皮肤创伤修复药物中的应用。
3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述皮肤创伤为深二度烫伤或糖尿病慢性皮肤创伤。
4.一种药物组合物，包含作为活性剂的权利要求1所述多肽LX及其药学上有效的载体。
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| CN202310984875.9A CN117343130A (zh) | 2023-08-07 | 2023-08-07 | 一种具有促慢性难愈合性皮肤创伤修复活性的多肽lx及其应用 |
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| CN202310984875.9A CN117343130A (zh) | 2023-08-07 | 2023-08-07 | 一种具有促慢性难愈合性皮肤创伤修复活性的多肽lx及其应用 |
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2023
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