CN117338626A - 一种抗衰老美白保湿组合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提出了一种抗衰老美白保湿组合物及其制备方法，属于化妆品技术领域。将铁皮石斛、燕麦、沙棘破壁处理后，酶解，过滤，固体留用，滤液加入锌盐和钙盐，制得蛋白肽‑氨基酸螯合Zn‑Ca复合物；将固体与银耳、人参混合，沸水提取，过滤，得到第一固体留用，醇沉，得到复合多糖，甘草经过超临界流体萃取获得甘草精油，固体与第一固体混合，接种发酵菌发酵，过滤，滤液经萃取纯化，干燥，得到活性提取物，与蛋白肽‑氨基酸螯合Zn‑Ca复合物、复合多糖、甘草精油、透明质酸钠、烟酰胺、胜肽混合制得抗衰老美白保湿组合物，具有很好的抗氧化、美白、抗炎、抗敏的作用，对受损皮肤屏障具有修复作用，具有广阔的应用前景。

Description

一种抗衰老美白保湿组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域，具体涉及一种抗衰老美白保湿组合物及其制备方法。
背景技术
皮肤屏障功能是指表皮尤其是角质层的物理性屏障作用。通常是由皮脂膜、角质层角蛋白、脂质形成的砖墙结构以及真皮粘多糖类、粘多糖类等共同组成,健康的皮肤屏障能够抵御外界有害物、刺激物和日光侵害皮肤,同时具有保湿及调节作用。然而，由于环境、饮食和错误的皮肤护理等原因，皮肤屏障容易受损，使得皮肤自身防御能力不足，导致皮肤敏感、老化、干燥、脱屑等皮肤问题。因此，维持、修复皮肤屏障功能不仅有助于改善皮肤状态，还能够预防、治疗皮肤疾病。研究开发一种新的具有修复皮肤屏障作用的产品，具有重要意义。
经研究证明皮肤的屏障功能与皮肤脂类有关。皮肤屏障功能与其脂类有密切关系,皮肤脂类可调节皮肤屏障功能。皮肤脂质含量减少,会导致皮肤屏障功能的下降。同时经研究证明，皮肤角质层中的神经酰胺在屏障功能的调控中起主导性的作用。可与其他脂质形成有序的复层板层结构，在皮肤对水的通透屏障功能中起重要的作用。同时神经酰胺具有多样性，在角质层结构及凝聚中具有独特的性能。另外脂质间的游离脂肪酸和天然保湿因子(如透明质酸)在皮肤屏障中也起到重要作用。因此，开发能够更好的修复皮肤屏障的制剂，同时制剂能兼容多种神经酰胺以及皮肤内源性物质，已成为现今需要解决的问题。
随着年龄的增加，皮肤中神经酰胺的流失逐渐加大，尤以神经酰胺3流失最快。因此，神经酰胺在优秀的修复皮肤屏障的制剂中是不可或缺的成分，但是其对制剂的稳定性存在很大的威胁，若加入不当将会出现针状或线状的重结晶现象。同时，其他内源性修复成分的选择也能起到至关重要的作用。
中国专利申请CN1679470A《用于化妆品的海藻糖和透明质酸钠组合物及其制备方法》公开了一种可用于化妆品的海藻糖和透明质酸钠的组合物，且仅说明该组合物具有补水保湿的作用，该组合物的最佳使用比例，何种分子量的透明质酸钠效果更好以及该组合物的其他作用均未公开。
发明内容
本发明的目的在于提出一种抗衰老美白保湿组合物及其制备方法，具有很好的抗氧化、美白、抗炎、抗敏的作用，具有防止光老化、抑制酪氨酸酶活性，促进皮肤弹性，减少皱纹，增加角质层中的神经酰胺含量，对受损皮肤屏障具有修复作用，具有广阔的应用前景。
本发明的技术方案是这样实现的：
本发明提供一种抗衰老美白保湿组合物的制备方法，将铁皮石斛、燕麦、沙棘经破壁处理后，蛋白酶酶解，过滤，固体留用，滤液加入锌盐和钙盐，制得蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物；将固体与银耳、人参混合，沸水提取，过滤，得到第一固体留用，醇沉，得到复合多糖，甘草经过超临界流体萃取获得甘草精油，固体与第一固体混合，接种酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌发酵，过滤，滤液经过离子液体萃取纯化，正己烷反萃取，干燥，得到活性提取物，与蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物、复合多糖、甘草精油、透明质酸钠、烟酰胺、胜肽混合均匀制得抗衰老美白保湿组合物。
作为本发明的进一步改进，包括以下步骤：
S1.破壁处理：将铁皮石斛、燕麦、沙棘洗净，加水匀浆，反复冻融，获得冻融液，加入复合酶酶解，灭酶，过滤，固体干燥，留用，滤液为提取液；
S2.蛋白肽酶解：向步骤S1中提取液中加入复合蛋白酶，酶解，灭酶，冷冻干燥，制得蛋白肽-氨基酸混合物；
S3.金属离子的螯合：将可溶性锌盐和可溶性钙盐溶于水中，加入步骤S2制得的蛋白肽-氨基酸混合物，搅拌反应，制得蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物；
S4.多糖的提取：将银耳、人参洗净，与步骤S1中的固体混合加入水中，加热至沸提取，过滤，滤渣干燥，留用，获得第一固体，滤液冷却加入乙醇沉淀，离心收集获得第二固体，第二固体干燥为复合多糖，上清液留用；
S5.精油的提取：将甘草洗净，干燥，粉碎，经过超临界流体萃取，制得甘草精油，固体干燥，留用；
S6.发酵：将步骤S4中的第一固体、步骤S5中的固体混合加入水中，灭菌，接种酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液，发酵培养，过滤，收集滤液；
S7.萃取纯化：将步骤S6制得的滤液、步骤S4中的上清液混合，加入离子液体萃取剂，加热振荡萃取，静置，收集离子液体层；
S8.反萃取：将步骤S7中的离子液体层与正己烷混合均匀，加热振荡反萃取，静置，收集有机层，减压除去正己烷，获得活性提取物；
S9.添加剂的制备：将透明质酸钠、烟酰胺、胜肽混合均匀，制得添加剂；
S10.抗衰老美白保湿组合物的制备：将步骤S3制得的蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物、步骤S4制得的复合多糖、步骤S5制得的甘草精油、步骤S8制得的活性提取物、步骤S9制得的添加剂混合均匀，制得抗衰老美白保湿组合物。
作为本发明的进一步改进，步骤S1中所述铁皮石斛、燕麦、沙棘的质量比为10-12:7-10:8-14，所述反复冻融的方法为将匀浆液在-20至-25℃条件下冷冻2-4h后，室温融解，重复操作2-3次，所述复合酶的添加量为冻融液的1-2wt％，所述复合酶选自纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、淀粉酶中的至少两种，所述酶解的温度为45-50℃，时间为1-3h；步骤S2中所述复合蛋白酶的添加量为提取液的2-3wt％，所述复合蛋白酶选自无花果蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶中的至少两种，所述酶解的温度为35-40℃，时间为2-4h。
作为本发明的进一步改进，所述复合酶为纤维素酶和果胶酶，质量比为5-7:1-2；所述复合蛋白酶为木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶，质量比为3-5:5-7。
作为本发明的进一步改进，步骤S3中所述可溶性锌盐、可溶性钙盐、蛋白肽-氨基酸混合物的质量比为3-5:5-7:50，所述可溶性锌盐选自氯化锌、硫酸锌、硝酸锌、葡萄糖酸锌、柠檬酸锌中的至少一种，所述可溶性钙盐选自氯化钙、硝酸钙、葡萄糖酸钙中的至少一种，所述搅拌反应的时间为20-30min；步骤S4中所述银耳、人参、固体和水的质量比为7-10:1-2:10-12:200-300，所述加热至沸提取的时间为2-4h，所述加入乙醇至体系乙醇含量为75-85wt％，沉淀时间为5-7h。
作为本发明的进一步改进，步骤S5中所述超临界流体萃取的条件为：萃取压力：25-30MPa，萃取温度：35-40℃，CO2流量：7-12L/h，萃取时间：2-3h；步骤S6中所述第一固体、步骤S5中的固体和水的质量比为7-10:5-7:200-250，所述酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液的接种量分别为2-4v/v％和1-3v/v％，所述菌种种子液的含菌量为108-109cfu/mL，所述发酵培养的条件为45-50℃，70-100r/min，发酵培养48-56h。
作为本发明的进一步改进，步骤S7中所述步骤S6制得的滤液、步骤S4中的上清液和离子液体萃取剂的质量比为10-15:5-7:30-40，所述离子液体萃取剂为咪唑类离子液体，选自[Bmim]Cl、[Bmim]MeCO2、[Bmim]EtCO2、[Bmim]BF4、[Bmim]PF6中的至少一种，所述加热振荡萃取的温度为35-40℃，时间为2-4h；步骤S8中所述离子液体层与正己烷的质量比为15-20:25-30，所述加热振荡反萃取的温度为40-45℃，时间为1-2h。
作为本发明的进一步改进，步骤S9中所述透明质酸钠、烟酰胺、胜肽的质量比为5-7:1-2:0.5-1；步骤S10中所述蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物、复合多糖、甘草精油、活性提取物、添加剂的质量比为7-10:10-14:3-5:10-15:2-4。
作为本发明的进一步改进，具体包括以下步骤：
S1.破壁处理：将10-12重量份铁皮石斛、7-10重量份燕麦、8-14重量份沙棘洗净，加200重量份水，匀浆，反复冻融，获得冻融液，加入复合酶，所述复合酶的添加量为冻融液的1-2wt％，45-50℃酶解1-3h，灭酶，过滤，固体干燥，留用，滤液为提取液；
所述反复冻融的方法为将匀浆液在-20至-25℃条件下冷冻2-4h后，室温融解，重复操作2-3次；
所述复合酶为纤维素酶和果胶酶，质量比为5-7:1-2；
S2.蛋白肽酶解：向步骤S1中提取液中加入复合蛋白酶，所述复合蛋白酶的添加量为提取液的2-3wt％，35-40℃酶解2-4h，灭酶，冷冻干燥，制得蛋白肽-氨基酸混合物；
所述复合蛋白酶为木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶，质量比为3-5:5-7；
S3.金属离子的螯合：将3-5重量份可溶性锌盐和5-7重量份可溶性钙盐溶于300重量份水中，加入50重量份步骤S2制得的蛋白肽-氨基酸混合物，搅拌反应20-30min，制得蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物；
S4.多糖的提取：将7-10重量份银耳、1-2重量份人参洗净，与10-12重量份步骤S1中的固体混合加入200-300重量份水中，加热至沸提取2-4h，过滤，滤渣干燥，留用，获得第一固体，滤液冷却加入乙醇至体系乙醇含量为75-85wt％，沉淀5-7h，离心收集获得第二固体，第二固体干燥为复合多糖，上清液留用；
S5.精油的提取：将甘草洗净，干燥，粉碎，经过超临界流体萃取，制得甘草精油，固体干燥，留用；
所述超临界流体萃取的条件为：萃取压力：25-30MPa，萃取温度：35-40℃，CO2流量：7-12L/h，萃取时间：2-3h；
S6.发酵：将7-10重量份步骤S4中的第一固体、5-7重量份步骤S5中的固体混合加入200-250重量份水中，灭菌，接种酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液，所述酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液的接种量分别为2-4v/v％和1-3v/v％，45-50℃，70-100r/min，发酵培养48-56h，过滤，收集滤液；
S7.萃取纯化：将10-15重量份步骤S6制得的滤液、5-7重量份步骤S4中的上清液混合，加入30-40重量份离子液体萃取剂，加热至35-40℃，振荡萃取2-4h，静置，收集离子液体层；
S8.反萃取：将15-20重量份步骤S7中的离子液体层与25-30重量份正己烷混合均匀，加热至40-45℃，振荡反萃取1-2h，静置，收集有机层，减压除去正己烷，获得活性提取物；
S9.添加剂的制备：将5-7重量份透明质酸钠、1-2重量份烟酰胺、0.5-1重量份胜肽混合均匀，制得添加剂；
S10.抗衰老美白保湿组合物的制备：将7-10重量份步骤S3制得的蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物、10-14重量份步骤S4制得的复合多糖、3-5重量份步骤S5制得的甘草精油、10-15重量份步骤S8制得的活性提取物、2-4重量份步骤S9制得的添加剂混合均匀，制得抗衰老美白保湿组合物。
本发明进一步保护一种上述的制备方法制得的抗衰老美白保湿组合物。
本发明具有如下有益效果：
铁皮石斛含有丰富的多糖、抗氧化物质(如维生素C、维生素E、类胡萝卜素和多酚类化合物)、氨基酸等，其中，铁皮石斛多糖具有保湿和保护皮肤屏障的能力，可以提供皮肤的滋润和保湿效果，有助于皮肤的柔软和光滑；抗氧化物质可以帮助减少自由基的损害，有助于抵抗皮肤老化和环境因素对皮肤的损害。
燕麦中含有丰富的蛋白质和多糖类物质，其中燕麦多糖可以在皮肤表面形成保护性膜，有助于锁住水分，防止水分蒸发，从而保持皮肤水分，使皮肤保持柔软和滋润，其中，β-葡聚糖和抗氧化剂，具有镇静和抗炎作用，有助于减轻皮肤炎症和红肿，蛋白质也是能够对皮肤蛋白的起到补给作用，维持皮肤稳态。
沙棘含有丰富的抗氧化物质维生素C和维生素E，有助于减少自由基的损害，促进胶原蛋白的生成，帮助皮肤保持弹性和光滑，保护皮肤免受环境因素如紫外线辐射的损害。沙棘中还含有油脂类成分脂肪酸，有助于维持皮肤的屏障功能，防止水分流失，从而保持皮肤柔软和水润。含有的多酚类化合物，如花青素和黄酮类化合物，有助于减少皮肤炎症和氧化应激。含有的β-胡萝卜素和其他胡萝卜素，有助于改善皮肤的色彩和均匀肤色。含有的氨基酸是构建皮肤胶原蛋白质的基本单元，有助于维持皮肤的健康和弹性。
甘草中含有的甘草酸具有抗炎和抗氧化作用。它可以帮助减轻皮肤红肿和炎症，同时有助于平衡油脂分泌，对痤疮和其他皮肤问题有益；甘草甜素具有抗氧化和抗炎作用，可以帮助减轻皮肤敏感和红肿，同时有助于防止色素沉着，改善肤色；甘草中的其他化合物，如酚类、黄酮类、类黄酮和甘草甜素的同分异构体，可以协同作用，提供多种有益于皮肤的效果。另外，甘草精油具有镇静和抗炎作用，可以用于减轻皮肤不适和炎症。
人参中含有丰富的人参皂苷，具有抗氧化、抗炎和保湿作用，有助于减少皮肤受到自由基损害，减轻炎症和保持皮肤水分。含有多糖类化合物，提高皮肤免疫力、促进伤口愈合和保持肌肤弹性。另外，人参皮甙有助于增强皮肤的血液循环，使皮肤更有光泽和活力。人参中其他的活性成分还具有抗炎、抗氧化、美白等特点，可以减轻皮肤炎症，包括因紫外线辐射引起的炎症。
本发明将铁皮石斛、燕麦、沙棘经过反复冻融的方法结合复合酶酶解，在纤维素酶和果胶酶的协同酶解作用下，促进细胞壁破壁，使得大部分氨基酸、蛋白质溶出，将提取液经过蛋白酶酶解，在木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶的协同酶解作用下，将复杂结构蛋白质酶解为单链蛋白肽或小分子氨基酸，通过螯合作用与锌离子和钙离子螯合制得蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物。
其中，钙离子可能促进层状体分泌和角质细胞膜的形成，这种钙浓度梯度分布能调控表皮的增殖分化和表皮分层，钙能降低毛细血管通透性，有效缓解炎症水肿症状，可用于消炎抗过敏，对修复皮肤屏障功能具有重大意义。锌离子有助于加速伤口愈合，促进新细胞的生长和维持皮肤屏障功能，可以减轻皮肤炎症，特别是在痤疮治疗中有用。可以促进胶原蛋白的形成，有助于减缓皮肤松弛和皱纹的产生。它们也具有抗氧化性质，可以减少自由基损害。蛋白肽或氨基酸螯合锌钙的稳定性好、水溶性好、吸收利用效率高、毒副作用小，可以减少组织液外渗，降低毛细血管通透性，缓解过敏症状，延缓皮肤松弛，减少自由基损害，具有抗炎消肿作用，起到很好的修复皮肤屏障的作用，两者协同作用，还具有很好的促进皮肤弹性，抑制酪氨酸酶活性，抑制丝氨酸蛋白酶对角质层桥粒蛋白的降解作用，提高角质层细胞间的黏合力的效果。
本发明将银耳、人参加入固体后，加热沸腾提取，乙醇沉淀，获得复合多糖，在皮肤表面形成一层均匀的薄膜，减少皮肤表面水分蒸发，为皮肤提供一个良好的保湿环境的同时抵御外界不良环境及细菌、致敏源的伤害，减少炎性反应，促进皮肤屏障功能的恢复，提高皮肤的耐受性，增高巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数，诱导产生白细胞介素-1，激活巨噬细胞，增强其细胞溶解性。而巨噬细胞作为皮肤组织修复的主要因素，能够分泌多种细胞因子促进皮肤的再次生长、胶原沉积、血管生成及毛囊再生。
甘草经过超临界流体萃取获得的甘草精油具有镇静和抗炎作用，可以用于减轻皮肤不适和炎症。
随后，本发明将固体物质进行酿酒酵母和地衣芽孢杆菌进行协同发酵，一方面，在发酵菌的作用下，人参中常见皂苷向稀有皂苷转化，另一方面，发酵产生的活性物质具有抗氧化、防止光老化、抑制酪氨酸酶活性，增加角质层中的神经酰胺含量，对受损皮肤屏障具有修复作用，且含有抗炎抗敏成分，有助于减少抗原进入皮肤的同时避免正常细胞产生变态反应，加快皮肤屏障自我修复速度。
但是，发酵液以及水提取过程中也获得了大量的其他非活性杂质，使得活性物质如黄酮、皂苷、三萜、多酚、甾醇等物质的含量下降，传统的提取溶剂存在溶剂消耗量大而传质慢、处理量小等问题，本发明采用离子液体，克服传统溶剂的缺点，萃取效率显著提高，反萃取干燥得到的活性提取物纯度大大提高，减少杂质的含量，从而大大提高了抗衰老美白保湿组合物的功效。
本发明制得的抗衰老美白保湿组合物具有很好的抗氧化、美白、抗炎、抗敏的作用，具有防止光老化、抑制酪氨酸酶活性，促进皮肤弹性，减少皱纹，增加角质层中的神经酰胺含量，对受损皮肤屏障具有修复作用，具有广阔的应用前景。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[Bmim]Cl、[Bmim]PF6均购于购自上海艾科股份有限公司，纯度>99％。
纤维素酶，1.1万U/g；果胶酶，2.5万U/g；木瓜蛋白酶，10万U/g；菠萝蛋白酶，10万U/g；均购于夏盛(北京)生物科技开发有限公司。
酿酒酵母菌，100亿cfu/g，购于安琪酵母股份有限公司；地衣芽孢杆菌，100亿cfu/g，购于新仰韶生物科技有限公司。
酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液的制备方法如下：
将酿酒酵母菌接种至PDA琼脂培养基，50℃，100r/min，活化培养18h，制得含菌量为108-109cfu/mL的菌种种子液。
将地衣芽孢杆菌接种至高氏培养基中，40℃，120r/min，活化培养24h，制得含菌量为108-109cfu/mL的菌种种子液。
实施例1
本实施例提供一种抗衰老美白保湿组合物的制备方，具体包括以下步骤：
S1.破壁处理：将10重量份铁皮石斛、7重量份燕麦、8重量份沙棘洗净，加200重量份水，匀浆，反复冻融，获得冻融液，加入复合酶，所述复合酶的添加量为冻融液的1wt％，45℃酶解1h，灭酶，过滤，固体干燥，留用，滤液为提取液；
所述反复冻融的方法为将匀浆液在-20℃条件下冷冻2h后，室温融解，重复操作2次；
所述复合酶为纤维素酶和果胶酶，质量比为5:1；
S2.蛋白肽酶解：向步骤S1中提取液中加入复合蛋白酶，所述复合蛋白酶的添加量为提取液的2wt％，35℃酶解2h，灭酶，冷冻干燥，制得蛋白肽-氨基酸混合物；
所述复合蛋白酶为木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶，质量比为3:5；
S3.金属离子的螯合：将3重量份氯化锌和5重量份氯化钙溶于300重量份水中，加入50重量份步骤S2制得的蛋白肽-氨基酸混合物，搅拌反应20min，制得蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物；
S4.多糖的提取：将7重量份银耳、1重量份人参洗净，与10重量份步骤S1中的固体混合加入200重量份水中，加热至沸提取2h，过滤，滤渣干燥，留用，获得第一固体，滤液冷却加入乙醇至体系乙醇含量为75wt％，沉淀5h，离心收集获得第二固体，第二固体干燥为复合多糖，上清液留用；
S5.精油的提取：将甘草洗净，干燥，粉碎，经过超临界流体萃取，制得甘草精油，固体干燥，留用；
所述超临界流体萃取的条件为：萃取压力：25MPa，萃取温度：35℃，CO2流量：7L/h，萃取时间：2h；
S6.发酵：将7重量份步骤S4中的第一固体、5重量份步骤S5中的固体混合加入200重量份水中，灭菌，接种酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液，所述酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液的接种量分别为2v/v％和1v/v％，45℃，70r/min，发酵培养48h，过滤，收集滤液；
S7.萃取纯化：将10重量份步骤S6制得的滤液、5重量份步骤S4中的上清液混合，加入30重量份离子液体[Bmim]Cl，加热至35℃，振荡萃取2h，静置，收集离子液体层；
S8.反萃取：将15重量份步骤S7中的离子液体层与25重量份正己烷混合均匀，加热至40℃，振荡反萃取1h，静置，收集有机层，减压除去正己烷，获得活性提取物；
S9.添加剂的制备：将5重量份透明质酸钠、1重量份烟酰胺、0.5重量份胜肽，搅拌混合20min，制得添加剂；
S10.抗衰老美白保湿组合物的制备：将7重量份步骤S3制得的蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物、10重量份步骤S4制得的复合多糖、3重量份步骤S5制得的甘草精油、10重量份步骤S8制得的活性提取物、2重量份步骤S9制得的添加剂，搅拌混合20min，制得抗衰老美白保湿组合物。
实施例2
本实施例提供一种抗衰老美白保湿组合物的制备方，具体包括以下步骤：
S1.破壁处理：将12重量份铁皮石斛、10重量份燕麦、14重量份沙棘洗净，加200重量份水，匀浆，反复冻融，获得冻融液，加入复合酶，所述复合酶的添加量为冻融液的2wt％，50℃酶解3h，灭酶，过滤，固体干燥，留用，滤液为提取液；
所述反复冻融的方法为将匀浆液在-25℃条件下冷冻4h后，室温融解，重复操作3次；
所述复合酶为纤维素酶和果胶酶，质量比为7:2；
S2.蛋白肽酶解：向步骤S1中提取液中加入复合蛋白酶，所述复合蛋白酶的添加量为提取液的3wt％，40℃酶解4h，灭酶，冷冻干燥，制得蛋白肽-氨基酸混合物；
所述复合蛋白酶为木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶，质量比为5:7；
S3.金属离子的螯合：将5重量份葡萄糖酸锌和7重量份硝酸钙溶于300重量份水中，加入50重量份步骤S2制得的蛋白肽-氨基酸混合物，搅拌反应30min，制得蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物；
S4.多糖的提取：将10重量份银耳、2重量份人参洗净，与12重量份步骤S1中的固体混合加入300重量份水中，加热至沸提取4h，过滤，滤渣干燥，留用，获得第一固体，滤液冷却加入乙醇至体系乙醇含量为85wt％，沉淀7h，离心收集获得第二固体，第二固体干燥为复合多糖，上清液留用；
S5.精油的提取：将甘草洗净，干燥，粉碎，经过超临界流体萃取，制得甘草精油，固体干燥，留用；
所述超临界流体萃取的条件为：萃取压力：30MPa，萃取温度：40℃，CO2流量：12L/h，萃取时间：3h；
S6.发酵：将10重量份步骤S4中的第一固体、7重量份步骤S5中的固体混合加入250重量份水中，灭菌，接种酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液，所述酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液的接种量分别为4v/v％和3v/v％，50℃，100r/min，发酵培养56h，过滤，收集滤液；
S7.萃取纯化：将15重量份步骤S6制得的滤液、7重量份步骤S4中的上清液混合，加入40重量份离子液体[Bmim]PF6，加热至40℃，振荡萃取4h，静置，收集离子液体层；
S8.反萃取：将20重量份步骤S7中的离子液体层与30重量份正己烷混合均匀，加热至45℃，振荡反萃取2h，静置，收集有机层，减压除去正己烷，获得活性提取物；
S9.添加剂的制备：将7重量份透明质酸钠、2重量份烟酰胺、1重量份胜肽，搅拌混合20min，制得添加剂；
S10.抗衰老美白保湿组合物的制备：将10重量份步骤S3制得的蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物、14重量份步骤S4制得的复合多糖、5重量份步骤S5制得的甘草精油、15重量份步骤S8制得的活性提取物、4重量份步骤S9制得的添加剂，搅拌混合20min，制得抗衰老美白保湿组合物。
实施例3
本实施例提供一种抗衰老美白保湿组合物的制备方，具体包括以下步骤：
S1.破壁处理：将11重量份铁皮石斛、8.5重量份燕麦、11重量份沙棘洗净，加200重量份水，匀浆，反复冻融，获得冻融液，加入复合酶，所述复合酶的添加量为冻融液的1.5wt％，47℃酶解2h，灭酶，过滤，固体干燥，留用，滤液为提取液；
所述反复冻融的方法为将匀浆液在-22℃条件下冷冻3h后，室温融解，重复操作3次；
所述复合酶为纤维素酶和果胶酶，质量比为6:1.5；
S2.蛋白肽酶解：向步骤S1中提取液中加入复合蛋白酶，所述复合蛋白酶的添加量为提取液的2.5wt％，37℃酶解3h，灭酶，冷冻干燥，制得蛋白肽-氨基酸混合物；
所述复合蛋白酶为木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶，质量比为4:6；
S3.金属离子的螯合：将4重量份硝酸锌和6重量份葡萄糖酸钙溶于300重量份水中，加入50重量份步骤S2制得的蛋白肽-氨基酸混合物，搅拌反应25min，制得蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物；
S4.多糖的提取：将8.5重量份银耳、1.5重量份人参洗净，与11重量份步骤S1中的固体混合加入250重量份水中，加热至沸提取3h，过滤，滤渣干燥，留用，获得第一固体，滤液冷却加入乙醇至体系乙醇含量为80wt％，沉淀6h，离心收集获得第二固体，第二固体干燥为复合多糖，上清液留用；
S5.精油的提取：将甘草洗净，干燥，粉碎，经过超临界流体萃取，制得甘草精油，固体干燥，留用；
所述超临界流体萃取的条件为：萃取压力：27MPa，萃取温度：37℃，CO2流量：10L/h，萃取时间：2.5h；
S6.发酵：将8.5重量份步骤S4中的第一固体、6重量份步骤S5中的固体混合加入225重量份水中，灭菌，接种酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液，所述酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液的接种量分别为3v/v％和2v/v％，47℃，85r/min，发酵培养52h，过滤，收集滤液；
S7.萃取纯化：将12重量份步骤S6制得的滤液、6重量份步骤S4中的上清液混合，加入35重量份离子液体[Bmim]Cl，加热至37℃，振荡萃取3h，静置，收集离子液体层；
S8.反萃取：将17重量份步骤S7中的离子液体层与27重量份正己烷混合均匀，加热至42℃，振荡反萃取1.5h，静置，收集有机层，减压除去正己烷，获得活性提取物；
S9.添加剂的制备：将6重量份透明质酸钠、1.5重量份烟酰胺、0.7重量份胜肽，搅拌混合20min，制得添加剂；
S10.抗衰老美白保湿组合物的制备：将8.5重量份步骤S3制得的蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物、12重量份步骤S4制得的复合多糖、4重量份步骤S5制得的甘草精油、12重量份步骤S8制得的活性提取物、3重量份步骤S9制得的添加剂，搅拌混合20min，制得抗衰老美白保湿组合物。
实施例4
与实施例3相比，不同之处在于，复合酶为单一的纤维素酶。
实施例5
与实施例3相比，不同之处在于，复合酶为单一的果胶酶。
实施例6
与实施例3相比，不同之处在于，复合蛋白酶为单一的木瓜蛋白酶。
实施例7
与实施例3相比，不同之处在于，复合蛋白酶为单一的菠萝蛋白酶。
对比例1
与实施例3相比，不同之处在于，步骤S1中未添加复合酶。
具体如下：
S1.破壁处理：将11重量份铁皮石斛、8.5重量份燕麦、11重量份沙棘洗净，加200重量份水，匀浆，反复冻融，获得冻融液，过滤，固体干燥，留用，滤液为提取液；
所述反复冻融的方法为将匀浆液在-22℃条件下冷冻3h后，室温融解，重复操作3次。
对比例2
与实施例3相比，不同之处在于，步骤S2中未添加复合蛋白酶。
具体如下：
S1.破壁处理：将11重量份铁皮石斛、8.5重量份燕麦、11重量份沙棘洗净，加200重量份水，匀浆，反复冻融，获得冻融液，加入复合酶，所述复合酶的添加量为冻融液的1.5wt％，47℃酶解2h，灭酶，过滤，固体干燥，留用，滤液为提取液；
所述反复冻融的方法为将匀浆液在-22℃条件下冷冻3h后，室温融解，重复操作3次；
所述复合酶为纤维素酶和果胶酶，质量比为6:1.5；
S2.金属离子的螯合：将4重量份硝酸锌和6重量份葡萄糖酸钙溶于300重量份水中，加入50重量份步骤S1制得的提取液，搅拌反应25min，制得螯合Zn-Ca复合物；
S3.多糖的提取：将8.5重量份银耳、1.5重量份人参洗净，与11重量份步骤S1中的固体混合加入250重量份水中，加热至沸提取3h，过滤，滤渣干燥，留用，获得第一固体，滤液冷却加入乙醇至体系乙醇含量为80wt％，沉淀6h，离心收集获得第二固体，第二固体干燥为复合多糖，上清液留用；
S4.精油的提取：将甘草洗净，干燥，粉碎，经过超临界流体萃取，制得甘草精油，固体干燥，留用；
所述超临界流体萃取的条件为：萃取压力：27MPa，萃取温度：37℃，CO2流量：10L/h，萃取时间：2.5h；
S5.发酵：将8.5重量份步骤S3中的第一固体、6重量份步骤S4中的固体混合加入225重量份水中，灭菌，接种酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液，所述酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液的接种量分别为3v/v％和2v/v％，47℃，85r/min，发酵培养52h，过滤，收集滤液；
S6.萃取纯化：将12重量份步骤S5制得的滤液、6重量份步骤S3中的上清液混合，加入35重量份离子液体[Bmim]Cl，加热至37℃，振荡萃取3h，静置，收集离子液体层；
S7.反萃取：将17重量份步骤S6中的离子液体层与27重量份正己烷混合均匀，加热至42℃，振荡反萃取1.5h，静置，收集有机层，减压除去正己烷，获得活性提取物；
S8.添加剂的制备：将6重量份透明质酸钠、1.5重量份烟酰胺、0.7重量份胜肽，搅拌混合20min，制得添加剂；
S9.抗衰老美白保湿组合物的制备：将8.5重量份步骤S2制得的螯合Zn-Ca复合物、12重量份步骤S3制得的复合多糖、4重量份步骤S4制得的甘草精油、12重量份步骤S7制得的活性提取物、3重量份步骤S8制得的添加剂，搅拌混合20min，制得抗衰老美白保湿组合物
对比例3
与实施例3相比，不同之处在于，步骤S3中未添加硝酸锌。
具体如下：
S3.金属离子的螯合：将10重量份葡萄糖酸钙溶于300重量份水中，加入50重量份步骤S2制得的蛋白肽-氨基酸混合物，搅拌反应25min，制得蛋白肽-氨基酸螯合Ca复合物。
对比例4
与实施例3相比，不同之处在于，步骤S3中未添加葡萄糖酸钙。
具体如下：
S3.金属离子的螯合：将10重量份硝酸锌溶于300重量份水中，加入50重量份步骤S2制得的蛋白肽-氨基酸混合物，搅拌反应25min，制得蛋白肽-氨基酸螯合Zn复合物。
对比例5
与实施例3相比，不同之处在于，未进行步骤S3。
具体如下：
S1.破壁处理：将11重量份铁皮石斛、8.5重量份燕麦、11重量份沙棘洗净，加200重量份水，匀浆，反复冻融，获得冻融液，加入复合酶，所述复合酶的添加量为冻融液的1.5wt％，47℃酶解2h，灭酶，过滤，固体干燥，留用，滤液为提取液；
所述反复冻融的方法为将匀浆液在-22℃条件下冷冻3h后，室温融解，重复操作3次；
所述复合酶为纤维素酶和果胶酶，质量比为6:1.5；
S2.蛋白肽酶解：向步骤S1中提取液中加入复合蛋白酶，所述复合蛋白酶的添加量为提取液的2.5wt％，37℃酶解3h，灭酶，冷冻干燥，制得蛋白肽-氨基酸混合物；
所述复合蛋白酶为木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶，质量比为4:6；
S3.多糖的提取：将8.5重量份银耳、1.5重量份人参洗净，与11重量份步骤S1中的固体混合加入250重量份水中，加热至沸提取3h，过滤，滤渣干燥，留用，获得第一固体，滤液冷却加入乙醇至体系乙醇含量为80wt％，沉淀6h，离心收集获得第二固体，第二固体干燥为复合多糖，上清液留用；
S4.精油的提取：将甘草洗净，干燥，粉碎，经过超临界流体萃取，制得甘草精油，固体干燥，留用；
所述超临界流体萃取的条件为：萃取压力：27MPa，萃取温度：37℃，CO2流量：10L/h，萃取时间：2.5h；
S5.发酵：将8.5重量份步骤S3中的第一固体、6重量份步骤S4中的固体混合加入225重量份水中，灭菌，接种酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液，所述酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液的接种量分别为3v/v％和2v/v％，47℃，85r/min，发酵培养52h，过滤，收集滤液；
S6.萃取纯化：将12重量份步骤S5制得的滤液、6重量份步骤S4中的上清液混合，加入35重量份离子液体[Bmim]Cl，加热至37℃，振荡萃取3h，静置，收集离子液体层；
S7.反萃取：将17重量份步骤S6中的离子液体层与27重量份正己烷混合均匀，加热至42℃，振荡反萃取1.5h，静置，收集有机层，减压除去正己烷，获得活性提取物；
S8.添加剂的制备：将6重量份透明质酸钠、1.5重量份烟酰胺、0.7重量份胜肽，搅拌混合20min，制得添加剂；
S9.抗衰老美白保湿组合物的制备：将8.5重量份步骤S2制得的蛋白肽-氨基酸混合物、12重量份步骤S3制得的复合多糖、4重量份步骤S4制得的甘草精油、12重量份步骤S7制得的活性提取物、3重量份步骤S8制得的添加剂，搅拌混合20min，制得抗衰老美白保湿组合物。
对比例6
与实施例3相比，不同之处在于，步骤S4中未添加人参。
具体如下：
S4.多糖的提取：将10重量份银耳洗净，与11重量份步骤S1中的固体混合加入250重量份水中，加热至沸提取3h，过滤，滤渣干燥，留用，获得第一固体，滤液冷却加入乙醇至体系乙醇含量为80wt％，沉淀6h，离心收集获得第二固体，第二固体干燥为复合多糖，上清液留用。
对比例7
与实施例3相比，不同之处在于，步骤S4中未添加银耳。
具体如下：
S4.多糖的提取：将10重量份人参洗净，与11重量份步骤S1中的固体混合加入250重量份水中，加热至沸提取3h，过滤，滤渣干燥，留用，获得第一固体，滤液冷却加入乙醇至体系乙醇含量为80wt％，沉淀6h，离心收集获得第二固体，第二固体干燥为复合多糖，上清液留用。
对比例8
与实施例3相比，不同之处在于，未进行步骤S5。
具体如下：
S1.破壁处理：将11重量份铁皮石斛、8.5重量份燕麦、11重量份沙棘洗净，加200重量份水，匀浆，反复冻融，获得冻融液，加入复合酶，所述复合酶的添加量为冻融液的1.5wt％，47℃酶解2h，灭酶，过滤，固体干燥，留用，滤液为提取液；
所述反复冻融的方法为将匀浆液在-22℃条件下冷冻3h后，室温融解，重复操作3次；
所述复合酶为纤维素酶和果胶酶，质量比为6:1.5；
S2.蛋白肽酶解：向步骤S1中提取液中加入复合蛋白酶，所述复合蛋白酶的添加量为提取液的2.5wt％，37℃酶解3h，灭酶，冷冻干燥，制得蛋白肽-氨基酸混合物；
所述复合蛋白酶为木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶，质量比为4:6；
S3.金属离子的螯合：将4重量份硝酸锌和6重量份葡萄糖酸钙溶于300重量份水中，加入50重量份步骤S2制得的蛋白肽-氨基酸混合物，搅拌反应25min，制得蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物；
S4.多糖的提取：将8.5重量份银耳、1.5重量份人参洗净，与11重量份步骤S1中的固体混合加入250重量份水中，加热至沸提取3h，过滤，滤渣干燥，留用，获得第一固体，滤液冷却加入乙醇至体系乙醇含量为80wt％，沉淀6h，离心收集获得第二固体，第二固体干燥为复合多糖，上清液留用；
S5.发酵：将8.5重量份步骤S4中的第一固体、6重量份甘草混合加入225重量份水中，灭菌，接种酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液，所述酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液的接种量分别为3v/v％和2v/v％，47℃，85r/min，发酵培养52h，过滤，收集滤液；
S6.萃取纯化：将12重量份步骤S5制得的滤液、6重量份步骤S4中的上清液混合，加入35重量份离子液体[Bmim]Cl，加热至37℃，振荡萃取3h，静置，收集离子液体层；
S7.反萃取：将17重量份步骤S6中的离子液体层与27重量份正己烷混合均匀，加热至42℃，振荡反萃取1.5h，静置，收集有机层，减压除去正己烷，获得活性提取物；
S8.添加剂的制备：将6重量份透明质酸钠、1.5重量份烟酰胺、0.7重量份胜肽，搅拌混合20min，制得添加剂；
S9.抗衰老美白保湿组合物的制备：将8.5重量份步骤S3制得的蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物、12重量份步骤S4制得的复合多糖、12重量份步骤S7制得的活性提取物、3重量份步骤S8制得的添加剂，搅拌混合20min，制得抗衰老美白保湿组合物
对比例9
与实施例3相比，不同之处在于，步骤S6中未接种酿酒酵母菌菌种种子液。
具体如下：
S6.发酵：将8.5重量份步骤S4中的第一固体、6重量份步骤S5中的固体混合加入225重量份水中，灭菌，接种地衣芽孢杆菌菌种种子液，所述地衣芽孢杆菌菌种种子液的接种量为5v/v％，47℃，85r/min，发酵培养52h，过滤，收集滤液。
对比例10
与实施例3相比，不同之处在于，步骤S6中未接种地衣芽孢杆菌菌种种子液。
具体如下：
S6.发酵：将8.5重量份步骤S4中的第一固体、6重量份步骤S5中的固体混合加入225重量份水中，灭菌，接种酿酒酵母菌菌种种子液，所述酿酒酵母菌菌种种子液的接种量为5v/v％，47℃，85r/min，发酵培养52h，过滤，收集滤液。
对比例11
与实施例3相比，不同之处在于，未进行步骤S6。
具体如下：
S1.破壁处理：将11重量份铁皮石斛、8.5重量份燕麦、11重量份沙棘洗净，加200重量份水，匀浆，反复冻融，获得冻融液，加入复合酶，所述复合酶的添加量为冻融液的1.5wt％，47℃酶解2h，灭酶，过滤，固体干燥，留用，滤液为提取液；
所述反复冻融的方法为将匀浆液在-22℃条件下冷冻3h后，室温融解，重复操作3次；
所述复合酶为纤维素酶和果胶酶，质量比为6:1.5；
S2.蛋白肽酶解：向步骤S1中提取液中加入复合蛋白酶，所述复合蛋白酶的添加量为提取液的2.5wt％，37℃酶解3h，灭酶，冷冻干燥，制得蛋白肽-氨基酸混合物；
所述复合蛋白酶为木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶，质量比为4:6；
S3.金属离子的螯合：将4重量份硝酸锌和6重量份葡萄糖酸钙溶于300重量份水中，加入50重量份步骤S2制得的蛋白肽-氨基酸混合物，搅拌反应25min，制得蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物；
S4.多糖的提取：将8.5重量份银耳、1.5重量份人参洗净，与11重量份步骤S1中的固体混合加入250重量份水中，加热至沸提取3h，过滤，滤渣干燥，留用，获得第一固体，滤液冷却加入乙醇至体系乙醇含量为80wt％，沉淀6h，离心收集获得第二固体，第二固体干燥为复合多糖，上清液留用；
S5.精油的提取：将甘草洗净，干燥，粉碎，经过超临界流体萃取，制得甘草精油，固体干燥，留用；
所述超临界流体萃取的条件为：萃取压力：27MPa，萃取温度：37℃，CO2流量：10L/h，萃取时间：2.5h；
S6.萃取纯化：将18重量份步骤S4中的上清液混合，加入35重量份离子液体[Bmim]Cl，加热至37℃，振荡萃取3h，静置，收集离子液体层；
S7.反萃取：将17重量份步骤S6中的离子液体层与27重量份正己烷混合均匀，加热至42℃，振荡反萃取1.5h，静置，收集有机层，减压除去正己烷，获得活性提取物；
S8.添加剂的制备：将6重量份透明质酸钠、1.5重量份烟酰胺、0.7重量份胜肽，搅拌混合20min，制得添加剂；
S9.抗衰老美白保湿组合物的制备：将8.5重量份步骤S3制得的蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物、12重量份步骤S4制得的复合多糖、4重量份步骤S5制得的甘草精油、12重量份步骤S7制得的活性提取物、3重量份步骤S8制得的添加剂，搅拌混合20min，制得抗衰老美白保湿组合物
对比例12
与实施例3相比，不同之处在于，未进行步骤S7和S8。
具体如下：
S1.破壁处理：将11重量份铁皮石斛、8.5重量份燕麦、11重量份沙棘洗净，加200重量份水，匀浆，反复冻融，获得冻融液，加入复合酶，所述复合酶的添加量为冻融液的1.5wt％，47℃酶解2h，灭酶，过滤，固体干燥，留用，滤液为提取液；
所述反复冻融的方法为将匀浆液在-22℃条件下冷冻3h后，室温融解，重复操作3次；
所述复合酶为纤维素酶和果胶酶，质量比为6:1.5；
S2.蛋白肽酶解：向步骤S1中提取液中加入复合蛋白酶，所述复合蛋白酶的添加量为提取液的2.5wt％，37℃酶解3h，灭酶，冷冻干燥，制得蛋白肽-氨基酸混合物；
所述复合蛋白酶为木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶，质量比为4:6；
S3.金属离子的螯合：将4重量份硝酸锌和6重量份葡萄糖酸钙溶于300重量份水中，加入50重量份步骤S2制得的蛋白肽-氨基酸混合物，搅拌反应25min，制得蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物；
S4.多糖的提取：将8.5重量份银耳、1.5重量份人参洗净，与11重量份步骤S1中的固体混合加入250重量份水中，加热至沸提取3h，过滤，滤渣干燥，留用，获得第一固体，滤液冷却加入乙醇至体系乙醇含量为80wt％，沉淀6h，离心收集获得第二固体，第二固体干燥为复合多糖，上清液留用；
S5.精油的提取：将甘草洗净，干燥，粉碎，经过超临界流体萃取，制得甘草精油，固体干燥，留用；
所述超临界流体萃取的条件为：萃取压力：27MPa，萃取温度：37℃，CO2流量：10L/h，萃取时间：2.5h；
S6.发酵：将8.5重量份步骤S4中的第一固体、6重量份步骤S5中的固体混合加入225重量份水中，灭菌，接种酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液，所述酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液的接种量分别为3v/v％和2v/v％，47℃，85r/min，发酵培养52h，过滤，滤液冷冻干燥，制得发酵产物；
S7.添加剂的制备：将6重量份透明质酸钠、1.5重量份烟酰胺、0.7重量份胜肽，搅拌混合20min，制得添加剂；
S8.抗衰老美白保湿组合物的制备：将8.5重量份步骤S3制得的蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物、12重量份步骤S4制得的复合多糖、4重量份步骤S5制得的甘草精油、12重量份步骤S6制得的发酵产物、3重量份步骤S7制得的添加剂，搅拌混合20min，制得抗衰老美白保湿组合物。
对比例13
与实施例3相比，不同之处在于，步骤S10中未添加添加剂。
具体如下：
S10.抗衰老美白保湿组合物的制备：将8.5重量份步骤S3制得的蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物、12重量份步骤S4制得的复合多糖、4重量份步骤S5制得的甘草精油、12重量份步骤S8制得的活性提取物，搅拌混合20min，制得抗衰老美白保湿组合物。
对比例14
与实施例3相比，不同之处在于，步骤S10中未添加复合多糖。
具体如下：
S10.抗衰老美白保湿组合物的制备：将8.5重量份步骤S3制得的蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物、4重量份步骤S5制得的甘草精油、12重量份步骤S8制得的活性提取物、3重量份步骤S9制得的添加剂，搅拌混合20min，制得抗衰老美白保湿组合物。
对比例15
与实施例3相比，不同之处在于，步骤S10中未添加蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物。
具体如下：
S10.抗衰老美白保湿组合物的制备：将12重量份步骤S4制得的复合多糖、4重量份步骤S5制得的甘草精油、12重量份步骤S8制得的活性提取物、3重量份步骤S9制得的添加剂，搅拌混合20min，制得抗衰老美白保湿组合物。
测试例1
将1重量份单硬脂酸甘油酯、2.5重量份液状石蜡混合加热至75℃熔化，加入3重量份实施例1-7和对比例1-15制得的抗衰老美白保湿组合物搅拌混合均匀，加入50重量份去离子水、1重量份卡波姆、2重量份甘油，搅拌混合均匀，制得护肤霜。
将250只小鼠随机分为25组，分别为正常组、屏障功能受损模型组、护肤霜基质组(未添加抗衰老美白保湿组合物)、实施例1-7组、对比例1-15组，每组10只。除正常组外，其他组剔除小鼠背毛，用胶带紧贴于裸露皮肤，快速撕下，重复5次，完成1次造模刺激，每天进行2次造模刺激，间隔5h，连续造模3天。
造模成功后，在损伤处涂抹护肤霜0.2g/只，按摩至吸收，连续3d。末次涂抹后24h，进行实验检测。
采用多功能皮肤检测仪测定小鼠背部皮肤的油分含量(检测环境温度为25±2℃，湿度为55±5％)，每次检测重复3次。
结果见表1。
表1
组别 油分含量(％)
正常组 37.1±6.8
屏障功能受损模型组 21.2±7.1*
护肤霜基质组 31.2±6.3#
实施例1 34.5±6.5#
实施例2 34.8±5.9#
实施例3 35.4±6.0#
实施例4 32.1±6.3
实施例5 32.8±7.1
实施例6 33.5±6.9
实施例7 33.7±5.5
对比例1 31.7±6.2
对比例2 32.6±5.9
对比例3 33.1±6.4
对比例4 32.8±6.1
对比例5 32.1±5.2
对比例6 32.3±4.9
对比例7 31.8±5.0
对比例8 30.5±5.2
对比例9 30.1±4.4
对比例10 29.7±4.8
对比例11 28.9±5.2
对比例12 28.2±6.7
对比例13 29.9±8.0
对比例14 30.2±7.2
对比例15 29.6±6.9
注释：*为与正常组相比，P<0.05；#为与模型组相比，P<0.05。
由上表可知，本发明实施例1-3制得的抗衰老美白保湿组合物制得的护肤霜的能明显提高皮肤油分比例。
取各组背部皮肤，用福尔马林固定，将各组织固定、切片并染色，置于正置显微镜下，平行测量表皮厚度5次取平均值。然后将背部皮肤匀浆，测试表皮神经酰胺的含量。
结果见表2。
表2
组别 表皮厚度(μm) 神经酰胺含量(μmol/g)
正常组 11.52±0.92 0.2615±0.0025
屏障功能受损模型组 140.25±35.21* 0.1327±0.0011*
护肤霜基质组 87.12±13.15 0.1682±0.0019
实施例1 37.53±14.26# 0.2312±0.0024#
实施例2 37.84±14.92# 0.2347±0.0012#
实施例3 37.14±14.22# 0.2406±0.0018#
实施例4 41.24±15.25 0.2117±0.0012
实施例5 41.07±15.02 0.2205±0.0021
实施例6 39.71±13.82 0.2289±0.0019
实施例7 39.52±15.29 0.2275±0.0023
对比例1 42.35±14.88 0.2089±0.0014
对比例2 40.24±13.72 0.2204±0.0012
对比例3 41.82±14.09 0.2089±0.0009
对比例4 42.22±15.12 0.2032±0.0022
对比例5 43.74±14.72 0.1985±0.0031
对比例6 43.15±13.78 0.2113±0.0025
对比例7 43.84±14.27 0.2142±0.0024
对比例8 44.12±15.01 0.2177±0.0011
对比例9 44.34±14.21 0.2082±0.0016
对比例10 44.12±13.82 0.2057±0.0021
对比例11 45.65±12.18 0.1994±0.0013
对比例12 44.27±13.09 0.2011±0.0015
对比例13 43.21±14.25 0.2094±0.0018
对比例14 44.92±13.25 0.1987±0.0011
对比例15 45.25±13.82 0.1825±0.0021
注释：*为与正常组相比，P<0.05；#为与模型组相比，P<0.05。
由上表可知，本发明实施例1-3制得的抗衰老美白保湿组合物制得的护肤霜的能明显提高皮肤神经酰胺含量，降低表皮厚度。
测试例2
将1重量份单硬脂酸甘油酯、2.5重量份液状石蜡混合加热至75℃熔化，加入3重量份实施例1-7和对比例1-15制得的抗衰老美白保湿组合物搅拌混合均匀，加入50重量份去离子水、1重量份卡波姆、2重量份甘油，搅拌混合均匀，制得护肤霜。
选择240例年龄为18-42岁的面部皮炎治疗患者，其中男性112人，女性为128人，随机分为24组，分别为护肤霜基质组(未添加抗衰老美白保湿组合物)、阳性药组(硼酸氧化锌冰片软膏)、实施例1-7组、对比例1-15组，每组10人。
纳入标准：符合《面部皮炎的诊断思考》中对面部皮炎的临床诊断标准，且自愿参与，在知情同意书上签字盖章。
排除标准：①合并传染类疾病；②合并严重器官功能障碍；③对实验所选药物过敏者；④有精神障碍者。
治疗方法：实施例1-7组、对比例1-15组分别涂抹相应制得的护肤霜，1g/人，早晚各一次；阳性药组涂抹硼酸氧化锌冰片软膏，1g/人，早晚各一次；护肤霜基质组涂抹未添加抗衰老美白保湿组合物的霜，1g/人，早晚各一次。治疗4周。
疗效结果。判定标准：优秀为皮损发红、炎症、瘙痒等症状消失；良好为皮损发红、炎症等症状消失，但伴些许瘙痒；差为皮损发红、炎症、瘙痒等症状略减轻；无为皮损发红、炎症、瘙痒等症状无变化或持续恶化。优良率＝(优秀+良好)例数/总例数×100％
结果见表3。
表3
/>
由上表可知，本发明实施例1-3制得的抗衰老美白保湿组合物制得的护肤霜能明显改善皮肤炎症，有很好的质量效果。
皮肤屏障功能测试：
采用皮肤水含量成分测试仪，测试各组受试者皮肤角质层水含量；皮脂测量仪测量皮脂含量，测量3次取平均值。正常皮肤角质层水含量20％-30％，皮脂含量为5％-8％。
结果见表4。
/>
注释：与护肤霜基质组相比，*为P<0.05。
由上表可知，本发明实施例1-3制得的抗衰老美白保湿组合物制得的护肤霜能明显提高角质层含水量，皮脂含量提高。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种抗衰老美白保湿组合物的制备方法，其特征在于，将铁皮石斛、燕麦、沙棘经破壁处理后，蛋白酶酶解，过滤，固体留用，滤液加入锌盐和钙盐，制得蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物；将固体与银耳、人参混合，沸水提取，过滤，得到第一固体留用，醇沉，得到复合多糖，甘草经过超临界流体萃取获得甘草精油，固体与第一固体混合，接种酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌发酵，过滤，滤液经过离子液体萃取纯化，正己烷反萃取，干燥，得到活性提取物，与蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物、复合多糖、甘草精油、透明质酸钠、烟酰胺、胜肽混合均匀制得抗衰老美白保湿组合物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.破壁处理：将铁皮石斛、燕麦、沙棘洗净，加水匀浆，反复冻融，获得冻融液，加入复合酶酶解，灭酶，过滤，固体干燥，留用，滤液为提取液；
S2.蛋白肽酶解：向步骤S1中提取液中加入复合蛋白酶，酶解，灭酶，冷冻干燥，制得蛋白肽-氨基酸混合物；
S3.金属离子的螯合：将可溶性锌盐和可溶性钙盐溶于水中，加入步骤S2制得的蛋白肽-氨基酸混合物，搅拌反应，制得蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物；
S4.多糖的提取：将银耳、人参洗净，与步骤S1中的固体混合加入水中，加热至沸提取，过滤，滤渣干燥，留用，获得第一固体，滤液冷却加入乙醇沉淀，离心收集获得第二固体，第二固体干燥为复合多糖，上清液留用；
S5.精油的提取：将甘草洗净，干燥，粉碎，经过超临界流体萃取，制得甘草精油，固体干燥，留用；
S6.发酵：将步骤S4中的第一固体、步骤S5中的固体混合加入水中，灭菌，接种酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液，发酵培养，过滤，收集滤液；
S7.萃取纯化：将步骤S6制得的滤液、步骤S4中的上清液混合，加入离子液体萃取剂，加热振荡萃取，静置，收集离子液体层；
S8.反萃取：将步骤S7中的离子液体层与正己烷混合均匀，加热振荡反萃取，静置，收集有机层，减压除去正己烷，获得活性提取物；
S9.添加剂的制备：将透明质酸钠、烟酰胺、胜肽混合均匀，制得添加剂；
S10.抗衰老美白保湿组合物的制备：将步骤S3制得的蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物、步骤S4制得的复合多糖、步骤S5制得的甘草精油、步骤S8制得的活性提取物、步骤S9制得的添加剂混合均匀，制得抗衰老美白保湿组合物。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述铁皮石斛、燕麦、沙棘的质量比为10-12:7-10:8-14，所述反复冻融的方法为将匀浆液在-20至-25℃条件下冷冻2-4h后，室温融解，重复操作2-3次，所述复合酶的添加量为冻融液的1-2wt％，所述复合酶选自纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、淀粉酶中的至少两种，所述酶解的温度为45-50℃，时间为1-3h；步骤S2中所述复合蛋白酶的添加量为提取液的2-3wt％，所述复合蛋白酶选自无花果蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶中的至少两种，所述酶解的温度为35-40℃，时间为2-4h。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述复合酶为纤维素酶和果胶酶，质量比为5-7:1-2；所述复合蛋白酶为木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶，质量比为3-5:5-7。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中所述可溶性锌盐、可溶性钙盐、蛋白肽-氨基酸混合物的质量比为3-5:5-7:50，所述可溶性锌盐选自氯化锌、硫酸锌、硝酸锌、葡萄糖酸锌、柠檬酸锌中的至少一种，所述可溶性钙盐选自氯化钙、硝酸钙、葡萄糖酸钙中的至少一种，所述搅拌反应的时间为20-30min；步骤S4中所述银耳、人参、固体和水的质量比为7-10:1-2:10-12:200-300，所述加热至沸提取的时间为2-4h，所述加入乙醇至体系乙醇含量为75-85wt％，沉淀时间为5-7h。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S5中所述超临界流体萃取的条件为：萃取压力：25-30MPa，萃取温度：35-40℃，CO2流量：7-12L/h，萃取时间：2-3h；步骤S6中所述第一固体、步骤S5中的固体和水的质量比为7-10:5-7:200-250，所述酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液的接种量分别为2-4v/v％和1-3v/v％，所述菌种种子液的含菌量为108-109cfu/mL，所述发酵培养的条件为45-50℃，70-100r/min，发酵培养48-56h。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S7中所述步骤S6制得的滤液、步骤S4中的上清液和离子液体萃取剂的质量比为10-15:5-7:30-40，所述离子液体萃取剂为咪唑类离子液体，选自[Bmim]Cl、[Bmim]MeCO2、[Bmim]EtCO2、[Bmim]BF4、[Bmim]PF6中的至少一种，所述加热振荡萃取的温度为35-40℃，时间为2-4h；步骤S8中所述离子液体层与正己烷的质量比为15-20:25-30，所述加热振荡反萃取的温度为40-45℃，时间为1-2h。
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S9中所述透明质酸钠、烟酰胺、胜肽的质量比为5-7:1-2:0.5-1；步骤S10中所述蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物、复合多糖、甘草精油、活性提取物、添加剂的质量比为7-10:10-14:3-5:10-15:2-4。
9.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
S1.破壁处理：将10-12重量份铁皮石斛、7-10重量份燕麦、8-14重量份沙棘洗净，加200重量份水，匀浆，反复冻融，获得冻融液，加入复合酶，所述复合酶的添加量为冻融液的1-2wt％，45-50℃酶解1-3h，灭酶，过滤，固体干燥，留用，滤液为提取液；
所述反复冻融的方法为将匀浆液在-20至-25℃条件下冷冻2-4h后，室温融解，重复操作2-3次；
所述复合酶为纤维素酶和果胶酶，质量比为5-7:1-2；
S2.蛋白肽酶解：向步骤S1中提取液中加入复合蛋白酶，所述复合蛋白酶的添加量为提取液的2-3wt％，35-40℃酶解2-4h，灭酶，冷冻干燥，制得蛋白肽-氨基酸混合物；
所述复合蛋白酶为木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶，质量比为3-5:5-7；
S3.金属离子的螯合：将3-5重量份可溶性锌盐和5-7重量份可溶性钙盐溶于300重量份水中，加入50重量份步骤S2制得的蛋白肽-氨基酸混合物，搅拌反应20-30min，制得蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物；
S4.多糖的提取：将7-10重量份银耳、1-2重量份人参洗净，与10-12重量份步骤S1中的固体混合加入200-300重量份水中，加热至沸提取2-4h，过滤，滤渣干燥，留用，获得第一固体，滤液冷却加入乙醇至体系乙醇含量为75-85wt％，沉淀5-7h，离心收集获得第二固体，第二固体干燥为复合多糖，上清液留用；
S5.精油的提取：将甘草洗净，干燥，粉碎，经过超临界流体萃取，制得甘草精油，固体干燥，留用；
所述超临界流体萃取的条件为：萃取压力：25-30MPa，萃取温度：35-40℃，CO2流量：7-12L/h，萃取时间：2-3h；
S6.发酵：将7-10重量份步骤S4中的第一固体、5-7重量份步骤S5中的固体混合加入200-250重量份水中，灭菌，接种酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液，所述酿酒酵母菌和地衣芽孢杆菌菌种种子液的接种量分别为2-4v/v％和1-3v/v％，45-50℃，70-100r/min，发酵培养48-56h，过滤，收集滤液；
S7.萃取纯化：将10-15重量份步骤S6制得的滤液、5-7重量份步骤S4中的上清液混合，加入30-40重量份离子液体萃取剂，加热至35-40℃，振荡萃取2-4h，静置，收集离子液体层；
S8.反萃取：将15-20重量份步骤S7中的离子液体层与25-30重量份正己烷混合均匀，加热至40-45℃，振荡反萃取1-2h，静置，收集有机层，减压除去正己烷，获得活性提取物；
S9.添加剂的制备：将5-7重量份透明质酸钠、1-2重量份烟酰胺、0.5-1重量份胜肽混合均匀，制得添加剂；
S10.抗衰老美白保湿组合物的制备：将7-10重量份步骤S3制得的蛋白肽-氨基酸螯合Zn-Ca复合物、10-14重量份步骤S4制得的复合多糖、3-5重量份步骤S5制得的甘草精油、10-15重量份步骤S8制得的活性提取物、2-4重量份步骤S9制得的添加剂混合均匀，制得抗衰老美白保湿组合物。
10.一种如权利要求1-9任一项所述的制备方法制得的抗衰老美白保湿组合物。
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