CN117295814A - 通过环丙沙星将干细胞诱导为软骨祖细胞以及分化为软骨细胞 - Google Patents

通过环丙沙星将干细胞诱导为软骨祖细胞以及分化为软骨细胞 Download PDF

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Abstract

本发明涉及环丙沙星将干细胞诱导为软骨祖细胞或分化为软骨细胞的诱导效果。根据本发明的药物组合物、软骨祖细胞以及软骨细胞可以用于预防或治疗软骨相关疾病。

Description

通过环丙沙星将干细胞诱导为软骨祖细胞以及分化为软骨 细胞
技术领域
本发明涉及环丙沙星将干细胞诱导为软骨祖细胞以及分化为软骨细胞的诱导效果。
背景技术
全世界正在积极开展各种研究，以治疗因人口老龄化而引发的最频繁的退行性疾病——软骨疾病。随着老化，软骨组织的软骨厚度和软骨细胞数量减少，且导致基质的组成发生变化，还诱发细胞功能发生变化。此外，众所周知，特别的是，软骨是没有血管、神经以及淋巴组织，因此是一种损伤后无法自行再生的组织。
为了治疗这样的软骨疾病，通常使用止痛药、类固醇或非甾体抗炎药等药物或者使用透明质酸、胶原蛋白等可以补充软骨的辅助物质或者进行人工关节手术。然而，上述药物或手术在帮助维持方面存在局限性，或对年龄、过敏等环境存在局限性。
因此，近年来正在尝试利用干细胞来克服退行性疾病，但其效率不高。
此外，对于诱导干细胞分化为软骨细胞需要很多物质，并且很难确认实际存在于体内的干细胞分化为软骨细胞是否受其帮助。
一方面，环丙沙星(Ciprofloxacin)作为抗生素的一种，是被列入世界卫生组织(WHO)基本药物清单的安全药物，其不仅在美国食品药品管理局(FDA)注册并流通，在韩国也已经注册并流通，但尚不清楚环丙沙星将干细胞分化为软骨的诱导效果。
因此，本发明人确认了环丙沙星能够诱导干细胞分化为软骨细胞，同时可将干细胞诱导为软骨细胞成熟前的软骨祖细胞，从而完成了本发明。
发明内容
发明所要解决的问题
本发明的目的在于提供一种用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物，上述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
本发明的另一目的在于提供一种用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物，上述组合物含有环丙沙星。
本发明的另一目的在于提供一种软骨祖细胞，其通过用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物诱导，上述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
本发明的另一目的在于提供一种软骨细胞，其通过用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物分化，上述组合物含有环丙沙星。
本发明的另一目的在于提供一种用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物，上述药物组合物中包含用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物，上述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
本发明的另一目的在于提供一种用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物，上述药物组合物中包含用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物，上述组合物含有环丙沙星。
本发明的另一目的在于提供一种用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物，上述药物组合物中包含根据本发明的软骨祖细胞。
本发明的另一目的在于提供一种用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物，上述药物组合物中包含根据本发明的软骨细胞。
本发明的另一目的在于提供一种将干细胞诱导为软骨祖细胞的方法，上述方法包括在包含用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物的培养基中培养干细胞的步骤，上述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
本发明的另一目的在于提供一种治疗软骨相关疾病的方法，上述方法包括向有需要的受试者施用含有环丙沙星以及生长因子的、用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物的步骤。
本发明的另一目的在于提供一种治疗软骨相关疾病的方法，上述方法包括向有需要的受试者施用通过用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物诱导的软骨祖细胞的步骤，其中，上述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
本发明的另一目的在于提供一种软骨祖细胞的制备方法，上述方法包括在包含用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物的培养基中培养干细胞的步骤，其中，上述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
本发明的另一目的在于提供一种用于制备将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物的环丙沙星(ciprofloxacin)以及生长因子的用途，其中，上述组合物含有环丙沙星及生长因子。
本发明的另一目的在于提供一种用于制备软骨祖细胞的、用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物的用途，其中，上述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
本发明的另一目的在于提供一种用于制备用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物的、用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物的用途，其中，上述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
本发明的另一目的在于提供一种用于制备用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物的、通过用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物诱导的软骨祖细胞的用途，其中，上述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
本发明的另一目的在于提供一种诱导干细胞分化为软骨细胞的方法，上述方法包括在包含用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物的培养基中培养干细胞的步骤，其中，上述组合物含有环丙沙星。
本发明的另一目的在于提供一种治疗软骨相关疾病的方法，上述方法包括向有需要的受试者施用含有环丙沙星的用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物的步骤。
本发明的另一目的在于提供一种治疗软骨相关疾病的方法，上述方法包括向有需要的受试者施用通过用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物分化的软骨细胞的步骤，其中，上述组合物含有环丙沙星。
本发明的另一目的在于提供一种软骨细胞的制备方法，上述方法包括在包含用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物的培养基中培养干细胞的步骤，其中，上述组合物含有环丙沙星。
本发明的另一目的在于提供一种用于制备诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物中的环丙沙星(ciprofloxacin)的用途。
本发明的另一目的在于提供一种用于制备软骨细胞的含有环丙沙星(ciprofloxacin)的用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物的用途。
本发明的另一目的在于提供一种用于制备用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物的、用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物的用途，其中，上述组合物含有环丙沙星(ciprofloxacin)。
本发明的另一目的在于提供一种用于制备用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物的、通过用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物诱导分化的软骨细胞的用途，其中上述组合物含有环丙沙星(ciprofloxacin)。
用于解决问题的方案
为了实现上述目的，本发明提供一种用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物，上述组合物含有环丙沙星和生长因子。
此外，本发明提供一种用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物，上述组合物含有环丙沙星。
在本发明中所使用的术语，“干细胞”是指在未分化状态下具有无限增殖能力(自我更新能力(Self-Renewal Capacity))并且能够通过特定的分化诱导刺激分化成各种组织的细胞的能力(多能性(Multi-differentiation Potency))的细胞，优选地，可以是间充质干细胞。
在本发明中所使用的术语，“间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cell)”是指在未分化状态下具有无限增殖能力并且能够通过特定的分化诱导刺激分化成各种组织的细胞的能力的细胞。本发明的间充质干细胞可以是具有分化能力以及增殖能力的所有细胞，其可以源自例如人类(Human)、猴(Monkeys)、猪(Pigs)、马(Horses)、牛(Cows)、羊(Sheep)、狗(Dogs)、猫(Cats)、小鼠(Mice)以及兔(Rabbits)等所有动物，优选地，可以源自人类，更优选地，可以从人类的脂肪组织、骨髓、外周血或脐带血等中分离，最优选地，可以源自脂肪。
在本发明中所使用的术语，“环丙沙星(Ciprofloxacin，CPFX)”作为一种用于治疗现有的多种细菌感染的抗生素，是一种被列入世界卫生组织(WHO)基本药物清单的抗生素，上述清单是医疗制度中必不可少的最有效、安全的药物清单。在本发明中确认了当在含有环丙沙星的培养基中培养干细胞时，能将干细胞诱导为软骨祖细胞，或干细胞分化为软骨细胞。
在本发明中所使用的术语，“旁分泌效应(Paracrine)”是指软骨祖细胞或软骨细胞并不取代或再生软骨细胞或软骨组织，而是从软骨祖细胞或软骨细胞分泌的各种有用物质可以激活生物体内的软骨祖细胞或软骨细胞，从而可预防或治疗软骨相关疾病。
在本发明中，上述有用物质可以是SRY-Box转录因子9(SRY-Box TranscriptionFactor 9，SOX9)或软骨寡聚基质蛋白(Cartilage Oligomeric Matrix Protein，COMP)，但不限于此。
在一个实施例中，将干细胞培养在培养基中，然后将环丙沙星加入到含有干细胞的培养基中，以确认环丙沙星的细胞毒性，结果显示，与对照组(CONT)相比，细胞活力没有显著差异，并确认了环丙沙星显示出生物相容性且无细胞毒性。
在一个实施例中，本发明的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的含有环丙沙星的培养基的成分的成分比没有限制，但基础培养基为含有1％至10％FBS的杜氏改良eagle培养基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium，DMEM)或含有1％至10％FBS的a-MEM培养基，并且可以含有环丙沙星、例如表皮细胞生长因子(Epidermal Growth Factor，EGF)、成纤维细胞生长因子(Fibroblast Growth Factor，FGF)、血管内皮生长因子(Vascularendothelial growth factor，VEGF)以及皮肤生长因子(skin growth factor，SGF)等的生长因子，优选地，可以包括EGF以及FGF等，但不限于此。
当上述EGF包含在含有环丙沙星的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的培养基组合物中时，以培养基组合物的总重量为基准，上述EGF的含量可以为0.1ng至100ng，当上述FGF包含在含有环丙沙星的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的培养基组合物中时，上述FGF的含量可以为0.1ng至100ng。
在本发明中，以培养基组合物的总重量为基准，用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的上述环丙沙星的含量可以为0.01uM至1uM，优选为0.1uM至1uM，但不限于此。
在另一实施例中，本发明的用于诱导干细胞分化为软骨细胞的含有环丙沙星的培养基的成分的成分比没有限制，但基础培养基为含有1％至10％FBS的DMEM或含有1％至10％FBS的a-MEM培养基，并且可以含有环丙沙星。
在本发明中，上述用于诱导干细胞分化为软骨细胞的含有环丙沙星的培养基中可以不含有环丙沙星以外的其他因子，例如生长因子。
在本发明中，以培养基组合物的总重量为基准，用于诱导干细胞分化为软骨细胞的上述环丙沙星的含量可以为0.05uM至10uM或0.08uM至8uM，优选为0.1uM至6uM，但不限于此。
在本发明中所使用的术语，“分化(Differentiation)”是指细胞在分裂增值从而生长的期间，结构或功能彼此特殊化的现象，即生物的细胞、组织等的形态或功能发生变化以执行各自被赋予的任务。本发明中的分化是指从干细胞分化为软骨细胞。
在一个实施例中，当将通过根据本发明的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物诱导的软骨祖细胞的干细胞潜能标志物表达率、自我更新能力以及多能性与干细胞进行比较时，确认了使用根据本发明的含有环丙沙星以及生长因子的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物诱导的软骨祖细胞能够与干细胞类似地进行自我复制，进一步，可以诱导脂肪分化、诱导骨分化以及诱导软骨分化，并表达间充质干细胞的表面抗原。
在另一个实施例中，当将通过根据本发明的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物诱导的软骨祖细胞的软骨分化能力与干细胞进行比较时，当将通过根据本发明的含有环丙沙星和生长因子的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物诱导的软骨祖细胞应用于软骨细胞治疗时，确认了可解决使用干细胞治疗软骨细胞时出现的SOX9指数级增加从而诱导的软骨肥大化和使COMP等软骨硬化的诸如Col2缺乏的透明软骨缺乏等问题。
在另一个实施例中，当将通过根据本发明的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物诱导的软骨祖细胞的软骨分化能力与干细胞进行比较时，当将通过根据本发明的含有环丙沙星和生长因子的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物诱导的软骨祖细胞处理在诱导炎症反应的软骨细胞时，确认了与干细胞相比，软骨祖细胞的软骨细胞再生能力更优异。
在另一个实施例中，为了确认通过根据本发明的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物诱导的软骨祖细胞的旁分泌效应，使用含有插入物(insert)的板片在软骨细胞中诱导炎症反应，然后在插入物上处理(间接处理)软骨祖细胞的情况下，确认了ADAMTS4的表达水平降低了约35％，并且当直接对板片处理软骨祖细胞时，ADAMTS4的表达水平降低了约76％。
即，确认了通过根据本发明的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物诱导的软骨祖细胞的软骨降解酶的抑制能力优异。
软骨降解酶作为一种降解软骨的酶，可以是已知的现有软骨降解酶，例如ADAMTS4、ADAMTS5、MMP-13等。
因此，本发明提供一种通过用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物诱导的软骨祖细胞，上述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
在本发明的另一个实施例中，通过2D培养(或2维培养)确认了当用环丙沙星处理干细胞时，诱导干细胞分化为软骨细胞。结果确认了随着干细胞分化为软骨细胞，细胞变得密集的性状，并且确认了由SOX9依赖性显示的阿尔新蓝(Alcian blue)染色存在于整个软骨细胞中。
在本发明的另一个实施例中，通过3D培养(或3维培养)确认了当用环丙沙星处理干细胞时，诱导干细胞分化为软骨细胞。结果确认了随着干细胞分化为软骨细胞，细胞变得密集并具有诸如组织的性状，并且确认了由SOX9依赖性显示的阿尔新蓝(Alcian blue)染色存在于整个软骨细胞中。
因此，本发明提供一种通过含有环丙沙星的用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物分化的软骨细胞。
在本说明书中，如聚集蛋白聚糖(Aggrecan，ACAN)、COMP或Col2a，SOX9是一种软骨分化或软骨细胞的标记基因或软骨分化标志物。众所周知，SOX9作为在软骨形成以及发育中起核心作用的转录因子，当SOX9被过度抑制时，软骨的主要成分ACAN以及Col2a的表达就不能很好地显示(Cha BH et al.Cartilage tissue formation from dedifferentiatedchondrocytes by codelivery of BMP-2and SOX-9genes encoding bicistronicvector.Cell Transplant 2012)。
因此，根据本发明的含有环丙沙星以及生长因子的、用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物，或含有环丙沙星的用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物，可以使上述诱导细胞中的选自由SOX9、ACAN、COMP以及Col2a组成的组中的一种以上的基因表达得以增加。
如上所述，根据本发明的含有环丙沙星以及生长因子的、用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物诱导的软骨祖细胞，或通过含有环丙沙星的用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物分化的软骨细胞，可以用于预防或治疗需要软骨再生的疾病，例如，软骨相关疾病。
上述软骨相关疾病可以是选自由骨关节炎、变形性关节病、软骨发育异常、退行性关节炎、类风湿性关节炎、骨软化症、纤维性骨炎以及无动力性骨病组成的组中的一种以上，但不限于此。
因此，本发明提供一种用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物，上述药物组合物中包含用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物，上述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
此外，本发明提供一种用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物，上述药物组合物中包含用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物，其中，上述组合物含有环丙沙星。
同时，本发明提供一种用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物，上述药物组合物中包含通过用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物诱导的软骨祖细胞，其中，上述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
此外，本发明提供一种用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物，上述药物组合物中包含通过用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物分化的软骨细胞，其中，上述组合物含有环丙沙星。
为了施用，本发明的药物组合物除了包括含有上述环丙沙星以及生长因子的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物、含有环丙沙星的诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物、以及根据本发明的软骨祖细胞或软骨细胞之外，还可以包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。上述载体、赋形剂以及稀释剂可以例举乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁和矿物油。
此外，本发明的药物组合物能够以任何剂型应用，更具体地，可以是肠胃外剂型。肠胃外剂型可以是喷雾形式，例如注射用、涂覆用以及气雾剂等。更具体地，可以是注射剂形式。
用于肠胃外施用的制剂包括无菌水溶液、非水溶液、混悬剂、乳剂、冻干制剂以及栓剂。非水溶剂以及混悬液包括丙二醇(Propylene glycol)、聚乙二醇、例如橄榄油的植物油以及例如油酸乙酯的可注射酯类等。
为了制剂化为注射型制剂，可将本发明的组合物与稳定剂或缓冲剂一起在水中混合以制备溶液或混悬液，并将其制剂成以安瓿或小瓶为单位用于施用。
本发明还提供一种用于预防或治疗软骨相关疾病的方法，上述方法包括向有需要的个体施用根据本发明的药物组合物的步骤。具体地，上述软骨疾病可以是选自由骨关节炎、变形性关节病、软骨发育异常、退行性关节炎、类风湿性关节炎、骨软化症、纤维性骨炎以及无动力性骨病组成的组中的一种以上，但不限于此。
在本发明中，在将上述药物组合物制剂化为医药品时，可以参考“Remington'sPharmaceutical Science,Mack Publishing Company,Easton PA”中公开的内容，并且上述文献包含在本说明书的一部分中。
本说明书中，“药学有效量”是指以能够适用于医学治疗的合理的受惠/风险比例足以治疗疾病的量，有效容量水平可以根据患者的性别、年龄、疾病的种类、严重程度、药物的活性、对药物的敏感度、给药时间、给药途径以及排泄率、治疗时间以及同时使用的药物包括在内的因素以及医学领域中众所周知的其他因素来确定。本发明的药物组合物可以作为单独的治疗剂施用或与其他治疗剂联合施用，并且可以与常规治疗剂依次施用或同时施用。此外，本发明的药物组合物可以单次或多次施用。考虑到上述所有因素，施用能够以最小量达到最大效果且没有副作用的量最为重要，并且本领域技术人员可以容易地确定施用量。
本发明的术语“个体”包括患有能够通过施用根据本发明的药物组合物来使症状能够得到好转的软骨相关疾病的马、羊、猪、山羊、骆驼、羚羊、狗等动物或人类。通过将本发明的用于预防或治疗的药物组合物施用于个体，可以有效地预防或治疗软骨相关疾病。
本说明书中，“施用”是指通过任何适当的方法将指定的物质引入人或动物体内，根据本发明的用于预防或治疗的组合物的施用途径可以通过任何一般途径口服或肠胃外施用，只要能够到达靶组织即可。此外，根据本发明的用于预防或治疗软骨相关疾病的组合物可以通过能够将有效成分移动至靶细胞的任何装置来施用。
根据本发明的药物组合物的优选给药量根据患者的状态以及体重、疾病的程度、药物形式、给药途径以及时间而不同，但可以由本领域技术人员适当选择。
在本发明的一个实施例中，在含有环丙沙星以及生长因子的、用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物，或含有环丙沙星的用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物中，分别确认了干细胞被诱导为软骨祖细胞，并且分化为软骨细胞，可以使用含有上述环丙沙星以及生长因子的、用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物来诱导软骨祖细胞，并且使用含有环丙沙星的用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物来诱导分化为软骨细胞。
本发明的另一个方面涉及一种将干细胞诱导为软骨祖细胞的方法，上述方法包括在包含用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物的培养基中培养干细胞的步骤，其中，上述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
本发明的另一个方面涉及一种治疗软骨相关疾病的方法，上述方法包括向有需要的受试者施用含有环丙沙星以及生长因子的、用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物。
本发明的另一个方面涉及一种治疗软骨相关疾病的方法，上述方法包括向有需要的受试者施用通过含有环丙沙星以及生长因子的、用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物诱导的软骨祖细胞。
本发明的另一个方面涉及一种软骨祖细胞的制备方法，上述方法包括在包含用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物的培养基中培养干细胞的步骤，其中，上述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
本发明的另一个方面涉及一种用于制备含有环丙沙星和生长因子的、用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物的环丙沙星(ciprofloxacin)以及生长因子的用途。
本发明的另一个方面涉及一种用于制备软骨祖细胞的、含有环丙沙星以及生长因子的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物的用途。
本发明的另一个方面涉及一种用于制备用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物的、用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物的用途，其中，上述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
本发明的另一个方面涉及一种用于制备用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物的、通过用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物诱导的软骨祖细胞的用途，其中，上述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
在本发明中，用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的含有环丙沙星的培养基的成分的成分比没有限制，但基础培养基为含有1％至10％FBS的杜氏改良eagle培养基(Dulbecco'sModified Eagle's Medium，DMEM)或含有1％至10％FBS的a-MEM培养基，并且可以含有环丙沙星以及例如EGF、FGF、VEGF以及SGF等生长因子，优选地，上述生长因子可以包括EGF以及FGF等，但不限于此。
此外，本发明的另一个方面涉及一种诱导干细胞分化为软骨细胞的方法，上述方法包括在包含用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物的培养基中培养干细胞的步骤，上述组合物含有环丙沙星。
本发明的另一个方面涉及一种治疗软骨相关疾病的方法，上述方法包括向有需要的受试者施用含有环丙沙星的用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物的步骤。
本发明的另一个方面涉及一种治疗软骨相关疾病的方法，上述方法包括向有需要的受试者施用通过含有环丙沙星的用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物分化的软骨细胞的步骤。
本发明的另一个方面涉及一种软骨细胞的制备方法，上述方法包括在包含用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物的培养基中培养干细胞的步骤，其中，上述组合物含有环丙沙星。
本发明的另一个方面涉及一种用于制备用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物的环丙沙星(ciprofloxacin)的用途。
本发明的另一个方面涉及一种用于制备软骨细胞的、用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物的用途，其中，上述组合物含有环丙沙星(ciprofloxacin)。
本发明的另一个方面涉及一种用于制备用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物的、用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物的用途，其中，上述组合物含有环丙沙星(ciprofloxacin)。
本发明的另一个方面涉及一种用于制备用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物的、通过用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物诱导分化的软骨细胞的用途，其中，上述组合物含有环丙沙星(ciprofloxacin)。
在本发明中，“干细胞”是指在未分化状态下具有无限增殖能力(自我更新能力(Self-Renewal Capacity))并且能够通过特定的分化诱导刺激分化成各种组织的细胞的能力(多能性(Multi-differentiation Potency))的细胞，优选地，可以是间充质干细胞。
在本发明中，在将干细胞诱导为软骨祖细胞时所使用的含有环丙沙星以及生长因子的培养基中，以培养基组合物的总重量为基准，能够包含0.01uM至1uM的环丙沙星，优选地，能够包含0.1uM至1uM的环丙沙星，以培养基组合物的总重量为基准，可分别包含0.1ng至100ng的生长因子，但不限于此。
此外，在用于诱导干细胞分化为软骨细胞时所使用的含有环丙沙星的培养基中，以培养基组合物的总重量为基准，可包含0.01uM至10uM或0.08uM至8uM，优选地，可包含1uM至6uM，但不限于此。
在本发明中，用于培养干细胞的培养基可以是含有胎牛血清(fetal bovineserum，FBS)的DMEM或a-MEM培养基，但不限于此。
以培养基组合物的总重量为基准，可含有1％至15％或1％至13％的上述FBS，优选地，可含有1％至10％的上述FBS。
在本说明书中，“预防”是指通过施用本发明的组合物来防止目标症状或疾病的发生，或延迟其发生或表达的所有作用。
在说明书中，“治疗”是指通过施用本发明的组合物来使目标症状或疾病好转或消除的所有作用。
在本发明中，如果能够将干细胞诱导为软骨祖细胞或诱导干细胞分化为软骨细胞，则能够以多种含量包含在本发明的组合物中包含的环丙沙星以及生长因子的含量。如果有效成分的含量低于下限，则可能无法实现将干细胞诱导为软骨祖细胞或可能无法实现诱导干细胞分化为软骨细胞，如果含量超过上限，则可能在细胞中发生毒性。
除非另有说明，本说明书中记载的上述数值应解释为包括等效范围。
发明效果
根据本发明的组合物通过含有环丙沙星，可以将干细胞诱导为软骨祖细胞或诱导干细胞分化为软骨细胞。
此外，与干细胞相比，根据本发明的软骨祖细胞表现出优异的软骨再生效果。
因此，根据本发明的组合物、软骨祖细胞或软骨细胞可以用于预防或治疗软骨相关疾病。
附图说明
图1a中作为干细胞具有的基本特征，示出了干细胞的性状。
图1b中作为干细胞具有的基本特征，示出了对于干细胞表达的免疫表型中，对CD29、CD73、CD90以及CD105呈阳性反应，对CD31、CD34以及CD45呈阴性反应。
图1c中作为干细胞具有的基本特征，在间充质干细胞的分化能力中，为了确认多能性，确认了其分化为脂肪、骨、软骨的分化能力。
图1d中作为干细胞具有的基本特征，示出了通过细胞集落形成实验(Colonyforming assay)显示的自我更新能力。
图1e中通过确认即使培养至6代，也没有发生遗传性缺陷的变化，从而证实了本发明的干细胞的稳定性。
图2示出了确认环丙沙星细胞毒性的结果。
图3a中通过2D方法示出了使用环丙沙星诱导间充质干细胞分化为软骨细胞的用途中细胞性状以及蛋白质的变化。
图3b示出了通过3D方法确认使用环丙沙星诱导干细胞分化为软骨细胞的用途中细胞性状以及蛋白质变化的结果。
图4a示出了环丙沙星诱导的软骨祖细胞的性状。
图4b中通过环丙沙星诱导的软骨祖细胞的核型分析示出了诱导的细胞没有发生基因突变。
图5a示出了确认根据本发明的软骨祖细胞和干细胞的干细胞潜能标志物的表达率的结果。
图5b示出了确认根据本发明的软骨祖细胞和干细胞的自我更新能力的结果。
图5c示出了确认根据本发明的软骨祖细胞和干细胞的多能性(脂肪分化诱导能力、成骨分化诱导能力以及软骨分化诱导能力)的结果。
图6a确认根据本发明的软骨祖细胞和根据诱导干细胞分化的SOX9的mRNA表达水平的结果。
图6b示出了在根据本发明的软骨祖细胞的情况下，COMP随着SOX9的减少而增加，但在干细胞的情况下，其在分化诱导早期增加，然后减少。
图7a示出了确认根据本发明的软骨祖细胞和干细胞的软骨细胞再生效果的结果。
图7b示出了分析在根据本发明的软骨祖细胞处理组和干细胞处理组、正常软骨细胞以及炎症性软骨细胞中再生的软骨细胞区域的结果。
图8示出了确认根据本发明的软骨祖细胞的软骨降解酶(ADAMTS4)抑制效果的结果。
具体实施方式
通过参考详细描述的实验例以及制备例，可以明确本发明的优点、特征以及实现上述优点和特征的方法。然而，本发明不限于以下所公开的实验例以及制备例，而是能够以各种不同的形式实现，其目的仅仅是为了使本发明的公开完整，并且使本领域技术人员充分了解本发明的范畴而提供。
[实施例]
实施例1.确认环丙沙星的细胞毒性
将干细胞(从医院为非营利目的治疗患者而接受捐赠的组织中采集)在含有1％至10％ FBS的杜氏改良eagle培养基(Dulbecco's modified Eagle's medium，DMEM)或a-MEM中附着80％以上并进行培养。
此后，使用胰蛋白酶-EDTA(Trypsin-EDTA)回收细胞，计数后以1×103细胞/孔接种(seeding)到96孔板中并贴壁24小时。然后，根据浓度施用环丙沙星(三星制药，环丙沙星注射液)后，确认特定时间(最长166小时)的细胞毒性。接下来，以10ul/孔对CCK-8试剂盒(Cell Counting Kit-8，CCK-8)(以下称为CCK，同仁化学，产品编号CK04-13)进行处理后，在37℃、5％ CO2的培养箱中培养1小时。
通过使用吸收光酶标仪(宝特(Bio-Tek)，Epoch2)测量吸光度来定量计算。
结果证实，即使处理至6uM，环丙沙星也不会在干细胞中表现出细胞毒性(图2)。
实施例2.使用环丙沙星诱导干细胞分化为软骨细胞(2D)
将干细胞(从医院为非营利目的治疗患者而接受捐赠的组织中采集)在含有1％至10％ FBS的DMEM或a-MEM中附着80％以上并进行培养。
此后，使用胰蛋白酶-EDTA(Trypsin-EDTA)回收细胞，计数后以1×103细胞/孔接种(seeding)到96孔板中并贴壁24小时。然后，根据浓度施用环丙沙星(三星制药，环丙沙星注射液)后，确认特定时间(最长166小时)的细胞毒性。接下来，以10ul/孔对CCK-8试剂盒(Cell Counting Kit-8，CCK-8)(以下称为CCK，同仁化学，产品编号CK04-13)进行处理后，在37℃、5％ CO2的培养箱中培养1小时。
此后，对于诱导分化16天的干细胞，用DPBS洗涤并用4％多聚甲醛(Paraformaldehyde)固定1小时。
使用阿尔新蓝溶液(默克，B8438)将完成固定的细胞染色1小时至1天。然后，使用1N HCl洗涤一次后，使用灭菌蒸馏水再洗涤3次。
通过显微镜观察最终洗涤后的样品。
结果证实，随着干细胞诱导为软骨细胞，细胞变得密集的性状，并且由Sox9依赖性显示的阿尔新蓝(Alcian blue)染色存在于整个软骨细胞中(图3a)。
实施例3.使用环丙沙星诱导干细胞分化为软骨细胞(3D)
将干细胞(从医院为非营利目的治疗患者而接受捐赠的组织中采集)在含有1％至10％ FBS的DMEM或a-MEM中附着80％以上并进行培养。
此后，使用胰蛋白酶-EDTA回收细胞并计数，然后将5×105个细胞接种到15mL锥形管(conical tube)中。使用离心机(Centrifuge)(翰尼科学，Combi415)将细胞以150g沉淀到含有0.1uM至6uM环丙沙星的培养基。在37℃、5％ CO2的培养箱中培养16天，每2至3天更换一次培养基。
对于诱导分化16天的干细胞，用DPBS洗涤并用4％多聚甲醛固定1小时。
使用阿尔新蓝溶液(默克，B8438)将完成固定的细胞染色1小时至24小时。然后，使用1N HCl洗涤一次后，使用灭菌蒸馏水再洗涤3次。
观察最终洗涤后的样品。
结果证实，随着干细胞分化为软骨细胞，细胞变得密集并具有诸如组织的性状，并且由Sox9依赖性显示的阿尔新蓝(Alcian blue)染色存在于整个软骨细胞中(图3b)。
实施例4.使用环丙沙星诱导软骨祖细胞
将干细胞(从医院为非营利目的治疗患者而接受捐赠的组织中采集)在含有1％至10％ FBS的DMEM或a-MEM中附着80％以上并进行培养。然后，使用胰蛋白酶-EDTA回收细胞并计数。使用含有0.1uM至1uM的环丙沙星、0.1ng至100ng的EGF以及0.1ng至100ng的FGF等生长因子的培养基，将细胞悬浮在FLASK中，并在37℃、5％ CO2培养箱中培养，每2至3天更换一次培养基。将其反复1至3代。
结果证实，通过含有环丙沙星的组合物将干细胞诱导为软骨祖细胞，确认了诱导的软骨祖细胞的细胞性状(图4a)，并且进行核型分析(图4b)确认了没有发生细胞的基因突变。
实施例5.软骨祖细胞与干细胞的比较
回收并洗涤完成培养的干细胞(从医院为非营利目的治疗患者而接受捐赠的组织中采集)和实施例4中诱导的软骨祖细胞。
使用FACs缓冲液将完成洗涤的细胞悬浮后，将干细胞标志物CD73、CD90、CD105、CD31、CD34以及CD45在4℃下染色1小时后，以1500RPM离心(centrifugation)3分钟。然后，使用FACs缓冲液(buffer)洗涤两次后，使用FACS(BD，Accuri6)设备确认表达。
结果证实，干细胞阳性标志物在软骨祖细胞中也呈阳性，并且阴性标志物在软骨祖细胞中也呈阴性。
此外，当使用常用的培养基或试剂盒进行集落形成测定(Colony formingassay)、骨细胞分化能力、软骨细胞分化能力以及脂肪细胞分化能力时，确认了与干细胞相同或相似的值。
实施例6.软骨祖细胞与干细胞的软骨分化能力比较
对完成培养的干细胞(从医院为非营利目的治疗患者而接受捐赠的组织中采集)和实施例4中制备的软骨祖细胞的软骨分化能力进行了比较。
结果证实，在对照组中，早期标志物SOX9在软骨祖细胞中基本比干细胞表达了约20倍以上。然而，确认了随着诱导分化，对于其数值下降的模式而言，在干细胞中只有早期标志物的表达在持续增加(图6a)。
此后，随着软骨细胞的组织化，组成基质(matrix)的成分COMP在软骨祖细胞中随着SOX9的减少而增加，然而干细胞在分化诱导的早期阶段先增加后减少(图6b)。
因此，在将软骨祖细胞应用于软骨细胞治疗的情况下，可解决使用干细胞进行软骨细胞治疗时出现的软骨肥大化(因SOX9的指数级增加而诱导)和透明软骨缺失(缺乏使COMP等软骨硬化的Col2)等问题。
实施例7.软骨祖细胞与干细胞的软骨细胞再生能力比较
对完成培养的干细胞(从医院为非营利目的治疗患者而接受捐赠的组织中采集)和实施例4中制备的软骨祖细胞的软骨细胞再生效果进行了比较。
对软骨细胞使用LPS诱导炎症反应。此后，给予2mm以上的划痕以造成物理压力后，处理干细胞或软骨祖细胞。
结果证实，在软骨细胞中诱导炎症反应后，损毁一部分区域，用干细胞和软骨祖细胞进行处理，并比较软骨细胞再生的区域时，正常软骨细胞表现出约61％的再生，但诱导炎症的软骨细胞再生了24％。此外，干细胞和软骨祖细胞处理组显示出约47％以上的再生能力，尤其是干细胞处理组表现出约47％的再生能力，软骨祖细胞处理组表现出约89％的再生能力(图7a以及图7b)。
即，可见软骨祖细胞的软骨细胞再生能力优于干细胞。
实施例8.软骨祖细胞的软骨降解酶抑制效果比较
为了确认软骨祖细胞的旁分泌效应，使用含有插入物的板片(VWR，734-2719)在软骨细胞中诱导炎症反应。诱导后，当在插入物上处理(间接处理)软骨祖细胞或在上述板片上直接处理软骨祖细胞时，确认了软骨降解酶的抑制效果。
软骨降解酶作为诸如ADAMTS4、ADAMTS5以及MMP-13的酶，诱导软骨降解。
结果证实，当间接处理软骨祖细胞时，ADAMTS4的表达水平降低了约35％，而当直接处理软骨祖细胞时，降低了约76％(图8)。

Claims (44)

1.一种用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物，其中，所述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
2.根据权利要求1中所述的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物，其中，所述干细胞为间充质干细胞。
3.根据权利要求1中所述的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物，其中，所述生长因子选自由EGF、FGF、VEGF以及SGF组成的组中的一种以上。
4.一种用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物，其中，所述组合物含有环丙沙星。
5.根据权利要求4中所述的用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物，其中，所述干细胞为间充质干细胞。
6.一种软骨祖细胞，其通过用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物诱导，其中，所述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
7.一种软骨细胞，其通过用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物分化，其中，所述组合物含有环丙沙星。
8.一种用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物，其中，所述药物组合物中包含根据权利要求1中所述的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物。
9.一种用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物，其中，所述药物组合物中包含根据权利要求4中所述的用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物。
10.一种用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物，其中，所述药物组合物中包含根据权利要求6中所述的软骨祖细胞。
11.一种用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物，其中，所述药物组合物中包含根据权利要求7中所述的软骨细胞。
12.根据权利要求10或11中所述的用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物，其中，所述软骨相关疾病选自由骨关节炎、变形性关节病、软骨发育异常、退行性关节炎、类风湿性关节炎、骨软化症、纤维性骨炎以及无动力性骨病组成的组中的一种以上。
13.一种将干细胞诱导为软骨祖细胞的方法，其中，所述方法包括在包含用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物的培养基中培养干细胞的步骤，其中，所述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
14.根据权利要求13中所述的将干细胞诱导为软骨祖细胞的方法，其中，所述干细胞为间充质干细胞。
15.根据权利要求13中所述的将干细胞诱导为软骨祖细胞的方法，其中，所述生长因子选自由EGF、FGF、VEGF以及SGF组成的组中的一种以上。
16.一种治疗软骨相关疾病的方法，其中，所述方法包括向有需要的受试者施用根据权利要求1中所述的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物的步骤。
17.一种治疗软骨相关疾病的方法，其中，所述方法包括向有需要的受试者施用根据权利要求6中所述的软骨祖细胞的步骤。
18.一种软骨祖细胞的制备方法，其中，所述方法包括在培养基中培养干细胞的步骤，所述培养基含有根据权利要求1中所述的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物。
19.根据权利要求18中所述的软骨祖细胞的制备方法，其中，所述干细胞为间充质干细胞。
20.根据权利要求18中所述的软骨祖细胞的制备方法，其中，所述生长因子选自由EGF、FGF、VEGF以及SGF组成的组中的一种以上。
21.一种用于制备将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物的环丙沙星以及生长因子的用途。
22.根据权利要求21中所述的环丙沙星以及生长因子的用途，其中，所述干细胞为间充质干细胞。
23.根据权利要求21中所述的环丙沙星以及生长因子的用途，其中，所述生长因子选自由EGF、FGF、VEGF以及SGF组成的组中的一种以上。
24.一种用于制备软骨祖细胞的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物的用途，所述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
25.根据权利要求24中所述的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物的用途，其中，所述干细胞为间充质干细胞。
26.根据权利要求24中所述的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物的用途，其中，所述生长因子选自由EGF、FGF、VEGF以及SGF组成的组中的一种以上。
27.一种用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物的用途，所述组合物用于制备用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物，所述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
28.根据权利要求27中所述的用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物的用途，其中，所述软骨相关疾病选自由骨关节炎、变形性关节病、软骨发育异常、退行性关节炎、类风湿性关节炎、骨软化症、纤维性骨炎以及无动力性骨病组成的组中的一种以上。
29.一种通过用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物诱导的软骨祖细胞的用途，所述软骨祖细胞用于制备预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物，其中，所述组合物含有环丙沙星以及生长因子。
30.根据权利要求29中所述的通过用于将干细胞诱导为软骨祖细胞的组合物诱导的软骨祖细胞的用途，其中，所述软骨相关疾病选自由骨关节炎、变形性关节病、软骨发育异常、退行性关节炎、类风湿性关节炎、骨软化症、纤维性骨炎以及无动力性骨病组成的组中的一种以上。
31.一种诱导干细胞分化为软骨细胞的方法，其中，所述方法包括在包含用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物的培养基中培养干细胞的步骤，其中，所述组合物含有环丙沙星。
32.根据权利要求31中所述的诱导干细胞分化为软骨细胞的方法，其中，所述干细胞为间充质干细胞。
33.一种治疗软骨相关疾病的方法，其中，所述方法包括向有需要的受试者施用根据权利要求4中所述的用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物的步骤。
34.一种治疗软骨相关疾病的方法，其中，所述方法包括向有需要的受试者施用根据权利要求7中所述的软骨细胞的步骤。
35.一种软骨细胞的制备方法，其中，所述方法包括在培养基中培养干细胞的步骤，所述培养基含有权利要求4中所述的用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物。
36.根据权利要求35中所述的软骨细胞的制备方法，其中，所述干细胞为间充质干细胞。
37.一种用于制备诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物的环丙沙星的用途。
38.根据权利要求37中所述的环丙沙星的用途，其中，所述干细胞为间充质干细胞。
39.一种用于制备软骨细胞的用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物的用途，其中，所述组合物含有环丙沙星。
40.根据权利要求39中所述的用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物的用途，所述干细胞为间充质干细胞。
41.一种用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物的用途，所述组合物用于制备用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物，所述组合物含有环丙沙星。
42.根据权利要求41中所述的用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物的用途，其中，所述软骨相关疾病选自由骨关节炎、变形性关节病、软骨发育异常、退行性关节炎、类风湿性关节炎、骨软化症、纤维性骨炎以及无动力性骨病组成的组中的一种以上。
43.一种通过用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物诱导分化的软骨细胞的用途，所述软骨细胞用于制备用于预防或治疗软骨相关疾病的药物组合物，所述组合物含有环丙沙星。
44.根据权利要求43中所述的通过用于诱导干细胞分化为软骨细胞的组合物诱导分化的软骨细胞的用途，其中，所述软骨相关疾病选自由骨关节炎、变形性关节病、软骨发育异常、退行性关节炎、类风湿性关节炎、骨软化症、纤维性骨炎以及无动力性骨病组成的组中的一种以上。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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KR102522295B1 (ko) 2022-08-30 2023-04-18 주식회사 스마트셀랩 말초혈액유래 줄기세포의 분리 및 배양조건과 이를 활용한 전구세포로의 분화유도

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1463800A4 (en) * 2001-12-07 2006-04-26 Geron Corp CHONDROCYTE PRE-CREATOR CELLS DERIVED FROM HUMAN EMBRYONIC STEM CELLS
EP1907014A4 (en) * 2005-05-27 2009-03-04 Warsaw Orthopedic Inc CHONDROGENIC COMPOSITIONS AND METHODS OF USE
US10494607B2 (en) * 2007-02-12 2019-12-03 Celularity, Inc. CD34+,CD45−placental stem cell-enriched cell populations
EP2977448B1 (en) * 2013-03-21 2019-07-10 Public University Corporation Yokohama City University Method for preparing chondrocytes
EP3813852A4 (en) * 2018-05-02 2022-03-02 The Trustees of Columbia University in the City of New York METHODS OF INDUCING DETERMINAL DIFFERENTIATION IN STEM CELLS BY INTERFERENCE WITH DNA REPLICATION, METHODS OF INDUCING PANCREATIC DIFFERENTIATION AND DIFFERENTIATED CELLS OBTAINED THEREFORE
KR102169924B1 (ko) 2019-03-26 2020-10-26 연세대학교 산학협력단 연골세포 분화 유도용 조성물 및 이의 용도
KR102197871B1 (ko) 2019-03-28 2021-01-04 이화여자대학교 산학협력단 엽산, 엽산 유도체, 또는 엽산 저해제를 이용한 줄기세포의 연골세포로의 분화 유도 방법

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