CN117248013A - 一种用于人慢性精神类疾病用药药物检测的引物组、试剂盒及其应用 - Google Patents
一种用于人慢性精神类疾病用药药物检测的引物组、试剂盒及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种用于人慢性精神类疾病用药药物检测的引物组、试剂盒及其应用,旨在提供一种具有中高通量,成本低,检测速度快,操作简便的检测方法,该方法包括引物组合1‑引物组合13中的一种或多种的组合,涉及生物检测技术领域。
Description
技术领域
本发明公开了一种引物组,具体地说是一种用于人慢性精神类疾病用药药物检测的引物组,属于生物检测技术领域。
背景技术
精神障碍指的是大脑机能活动发生紊乱,导致认知、情感、行为和意志等精神活动不同程度障碍的总称,主要包括精神分裂症、情绪障碍(抑郁)、神经质(焦虑)、药物或物品使用障碍和人格障碍等。被焦虑和抑郁等精神问题困扰的人已越来越多,甚至年轻人已是高危群体。
传统医疗模式是“试误法”、“千人一药”、“万人一量”的经验用药模式,但药物疗效和不良反应呈个体化差异。相同的病症、相同的治疗药物、相同的剂量,有的人有效且无毒性、有的人无毒且无效、有的人有效但有毒,有的人无效且有毒。影响药物反应个体差异的原因有:性别、年龄、体重、身高、环境因素、病程、器官功能、并发症、遗传因素等,其中遗传因素是主要原因。遗传因素导致的个体间药物代谢与效应差异平均高达60%-95%。随着人类基因组学计划的完成,后基因组学的深入研究,药物基因组学迅速发展起来。
目前美国FDA批准的药品说明书中,已经有近400种药物推荐进行药物基因检测,前三位分别是抗肿瘤药、精神类药和心脑血管药。大量的临床数据也显示临床科室开展个体化药物基因检测的必要性。
药物基因组学的检测的常用方法有一代测序、二代测序、荧光定量PCR技术和飞行时间质谱检测技术。
一代测序,也称Sanger法测序,主要基于桑格发明的双脱氧链终止法和PCR反应。缺点测序通量低,一个反应只能得到一条序列;成本略高,虽然单个反应价格低廉,但获得大量序列的成本很高;灵敏度较低,仅20%。
二代测序,特点是检测通量大,检测价格昂贵,操作繁琐,可检测未知的基因突变,生信分析复杂,目前主要适用于多基因位点的突变检测,在临床上主要用于肿瘤靶向用药基因突变检测,肿瘤易感性基因突变检测等。药物基因检测一般检测20-40个已知基因位点,如果二代测序技术用于药物基因检测样本,时间和人力成本会大大增加。
荧光定量PCR技术,检测通量低,检测基因位点一般在4-6个,若要检测多个位点,探针成本高,且具有一定的局限性。
上述方法均存在经济效益低,操作繁琐,灵敏度低,检测通量过大或者太低的问题。
因此,开发一种具有中高通量,成本低,检测速度快,操作简便,并且不需要复杂的生信分析的特点的检测方法显得尤为必要。
发明内容
针对上述不足,本发明的第一个目的在于提供一种用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的引物组,该引物具有高特异性、高灵敏性的特点,满足对目标位点特异性扩增和单碱基延伸的要求。
本发明的第二个目的是一种用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的试剂盒,该试剂盒具有使用方便、检测位点多、成本低的优点,满足对人慢性精神类疾病药物多基因多位点检测的要求。
本发明的第三个目的是一种用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的方法,该检测方法具有中高通量,成本低,检测速度快,操作简便。
为此,本发明提供的第一个技术方案是这样的:
一种用于人慢性精神类疾病用药药物检测的引物组,包括引物组合1-引物组合13中的一种或多种的组合;
其中:
引物组合1包括:SEQ ID NO.1-2所示的扩增引物和SEQ ID NO.27所示的延伸引物;
引物组合2包括:SEQ ID NO.3-4所示的扩增引物和SEQ ID NO.28所示的延伸引物;
引物组合3包括:SEQ ID NO.5-6所示的扩增引物和SEQ ID NO.29所示的延伸引物;
引物组合4包括:SEQ ID NO.7-8所示的扩增引物和SEQ ID NO.30所示的延伸引物;
引物组合5包括:SEQ ID NO.9-10所示的扩增引物和SEQ ID NO.31所示的延伸引物;
引物组合6包括:SEQ ID NO.11-12所示的扩增引物和SEQ ID NO.32所示的延伸引物;
引物组合7包括:SEQ ID NO.13-14所示的扩增引物和SEQ ID NO.33所示的延伸引物;
引物组合8包括:SEQ ID NO.15-16所示的扩增引物和SEQ ID NO.34所示的延伸引物;
引物组合9包括:SEQ ID NO.17-18所示的扩增引物和SEQ ID NO.35所示的延伸引物;
引物组合10包括:SEQ ID NO.19-20所示的扩增引物和SEQ ID NO.36所示的延伸引物;
引物组合11包括:SEQ ID NO.21-22所示的扩增引物和SEQ ID NO.37所示的延伸引物;
引物组合12包括:SEQ ID NO.23-24所示的扩增引物和SEQ ID NO.38所示的延伸引物;
引物组合13包括:SEQ ID NO.25-26所示的扩增引物和SEQ ID NO.39所示的延伸引物。
其中,上述的引物组合1-13所检测的基因的扩增引物以及相应的SNP位点信息见下表1。
表1
其中,上述的引物组合1-13所检测的基因的延伸引物序列以及相应的SNP位点信息见下表2。
表2
进一步的,上述的用于人慢性精神类疾病用药药物检测的引物组,所述的人慢性精神类疾病药物为羟考酮、曲马多、丙戊酸、苯妥英、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、托吡酯、地西泮、氯巴占、阿立哌唑、奋乃静、氯氮平、奥氮平、氟哌啶醇、伊洛哌酮、珠氯噻醇、匹莫齐特、阿米替林、丙咪嗪、氯丙咪嗪、多塞平、去甲替林、普罗替林、地昔帕明、曲米帕明、氯米帕明、氟伏沙明、米氮平、帕罗西汀、文拉法辛、西酞普兰、舍曲林、依他普仑、奥沙西泮、劳拉西泮、利多卡因、丙胺卡因中的至少一种。
其共检测38种药物8个基因13位点;具体如表3所示。
表3
本发明的第二个技术方案是这样的:
一种用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的试剂盒,包括第一个技术方案所述的引物组。
本发明提供的第三个技术方案是上述用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的方法,依次包括如下步骤:
(1)采用第一个技术方案中引物组中的扩增引物对样品进行PCR扩增,得到PCR扩增产物;
(2)采用SAP酶混合液对步骤(1)的PCR扩增产物进行SAP反应,得到消化反应产物;
(3)对步骤(2)消化反应产物进行EXT延伸反应,得到延伸反应产物;
(4)对延伸反应产物进行样本脱盐后,采用飞行时间质谱检测系统对样本进行分析和检测。
进一步的,上述的用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的方法,在步骤(1)中,PCR扩增的采用的试剂及其用量如下:
超纯水0.95μL;
10×PCR缓冲液0.45μL;
MgCL2 0.3μL;
dNTP混合液0.1μL;
引物组1-引物组13扩增引物的混合液1μL;
PCR酶0.2μL;
DNA 2μL;
PCR扩增的反应程序为:95℃:2min,95℃:30s,56℃:30s,72℃:60s,重复45个循环;再在72℃保持8min,后冷却4℃∞。
进一步的,上述的用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的方法,各个扩增引物浓度见表4。
表4
进一步的,上述的用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的方法,SAP反应采用的SAP酶混合液包括下述组分及其含量:超纯水1.53μL;SAP缓冲液0.17μL;SAP酶
0.3μL;反应程序如下:37℃,40分钟;然后升温85℃,5分钟,后冷却4℃∞。
进一步的,上述的用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的方法,延伸反应采用的试剂及其用量如下:
超纯水0.677μL;
iPLEX缓冲液0.18μL;
iPLEX Terminationmix 0.2μL;
引物组1-引物组13的延伸引物混合液0.9μL;
iPLEX酶0.043μL;
延伸反应的程序为:94℃:40min;94℃:5s,52℃:5s,80℃:5s,52℃:5s,80℃:5s,52℃:5s,80℃:5s,52℃:5s,80℃:5s,52℃:5s,80℃:5s,重复38个循环;再在70℃保持5min,后冷却4℃∞。
进一步的,上述的用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的方法,延伸引物各个引物浓度见表5。
表5
进一步的,上述的用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的方法,52℃:5s,52℃:5s,52℃:5s,52℃:5s,52℃:5s,是在52℃:5s,80℃:5s,重复5个循环。
进一步的,上述的用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的方法,飞行时间质谱检测程序为:
1)使用Assay Editor导入Assay Design文件
2)打开软件
双击软件图标,输入密码,进入操作界面;
3)创建文件夹
在Assay处右键选择Project Administrator,在name栏内输入project的名字,点击Add;
4)导入assay
在对应的project处右键,选择Import Assay Group Designer format…,只勾选Assay Group,点击Browse,选择assay group file,点击import;
5)创建plate
双击打开软件,选择Plate Editor,输入密码,进入软件界面;
6)为Plate添加Assay
在对应的Project处右键,选择New Plate,输入Plate ID,选择96Wells,点击OK;
7)设置Chip Linker
双击Chip Linker按钮,输入密码,进入软件界面,在左侧选择设置好的plate,在右侧分别选择IPLEX,Genotype+area,Nanodispenser96to96,输入ExperimentName,芯片号Chip Barcode,点击Add,再点击Create;
8)在CPM的Deck中放入MTP板和SpectroCHIP
在系统中找到SpectroACQUIRE界面,点击Chip prep module Deck In/Out,CPM的Deck会自动弹出,放入芯片和MTP板。在SpectroACQUIRE中点击Run Setup tab,在Experiment Name处选择对应的文档,设置完毕后点击软件上方的Start Chip PrepModule按钮开始实验。实验结束后点击Remove Old Chips from MA4按钮将芯片返回CPM的Deck内。
9)填写相关实验记录表;
10)下机数据拷贝
将分析文件和分析数据文件拷贝到U盘,转交给审核组审核。
与现有的方法相比,本发明具有以下优点及有益效果:
1.本发明提供的技术方案一次反应可同时检测23个SNP位点,与传统检测技术PCR检测方法相比,无需荧光标记,耗材成本和样本用量低;具有中高通量,成本低的优点。
2、本发明提供的技术方案检测速度快和准确度高,操作简便,在24小时内即可出具结果报告,快速高效,通过正反双向设计引物,能达到快速有效检测;
3、本发明提供的技术方案,数据处理简单,不需要复杂的生信分析,全自动分析数据,赋予质谱获得数据质控状态及结果可信度分析,并完成基因分型报告。
4、本发明提供的技术方案通过检测报告查看患者的基因突变情况,患者服用哪种药物可以达到更好的疗效和最低的不良反应,从而达到预测药物的疗效、预测药物的剂量,规避药物的不良反应。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细描述,但本发明实施方式不限于此。
本检测技术采用DR MassARRAY飞行时间质谱检测系统(广州市达瑞生物技术股份有限公司,DR)进行分析和检测,思路迪全自动核酸提取仪,Thermo Fisher PCR仪。
所述的10×PCR缓冲液采购于AgenaBioscience;
所述的dNTP混合液采购于Agena Bioscience;
所述的PCR酶采购于Agena Bioscience;
所述的SAP缓冲液采购于Agena Bioscience;
所述的SAP酶采购于Agena Bioscience;
所述的iPLEX缓冲液采购于Agena Bioscience;
所述的iPLEX Termination mix采购于Agena Bioscience;
所述的iPLEX酶采购于Agena Bioscience;
实施例1
本实施例提供的一种用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的引物组,包括引物组合1-引物组合13中的一种或多种的组合;
其中:
引物组合1包括:SEQ ID NO.1-2所示的扩增引物和SEQ ID NO.27所示的延伸引物;
引物组合2包括:SEQ ID NO.3-4所示的扩增引物和SEQ ID NO.28所示的延伸引物;
引物组合3包括:SEQ ID NO.5-6所示的扩增引物和SEQ ID NO.29所示的延伸引物;
引物组合4包括:SEQ ID NO.7-8所示的扩增引物和SEQ ID NO.30所示的延伸引物;
引物组合5包括:SEQ ID NO.9-10所示的扩增引物和SEQ ID NO.31所示的延伸引物;
引物组合6包括:SEQ ID NO.11-12所示的扩增引物和SEQ ID NO.32所示的延伸引物;
引物组合7包括:SEQ ID NO.13-14所示的扩增引物和SEQ ID NO.33所示的延伸引物;
引物组合8包括:SEQ ID NO.15-16所示的扩增引物和SEQ ID NO.34所示的延伸引物;
引物组合9包括:SEQ ID NO.17-18所示的扩增引物和SEQ ID NO.35所示的延伸引物;
引物组合10包括:SEQ ID NO.19-20所示的扩增引物和SEQ ID NO.36所示的延伸引物;
引物组合11包括:SEQ ID NO.21-22所示的扩增引物和SEQ ID NO.37所示的延伸引物;
引物组合12包括:SEQ ID NO.23-24所示的扩增引物和SEQ ID NO.38所示的延伸引物;
引物组合13包括:SEQ ID NO.25-26所示的扩增引物和SEQ ID NO.39所示的延伸引物。
其中,上述的引物组合1-13所检测的基因的扩增引物以及相应的SNP位点信息见下表6。
表6
其中,上述的引物组合1-13所检测的基因的延伸引物序列以及相应的SNP位点信息见下表7。
表7
序号 | 位点 | 序列 |
27 | rs28371725 | CCCGCCTGTCCTT |
28 | rs1065852 | TGGGCTGCACTAC |
29 | rs3892097 | GAGACCGTTGGGGCGAAGGGCGTC |
30 | rs1050828 | CAACGGGCATACCA |
31 | rs1799853 | GAGGAGCATTGGAC |
32 | rs1057910 | GGGTTCACGAGGTCCAGATAC |
33 | rs4986893 | TGATTGTAAGCCCCCTG |
34 | rs12248560 | CTCGTGTCTTCTGTTCAAAG |
35 | rs4244285 | GGTGAAGTAATTTGTTGGGTTCC |
36 | rs1902023 | TTTCAGAAGAGAATTCCAAAT |
37 | rs2304016 | AGAGAAAGGAATAGAAAATCA |
38 | rs3812718 | CGCCTATCCTTTACTCTAAACTT |
39 | rs10484555 | ACGTTGGATGATCCCAAGATAACACGGC |
进一步的,上述的用于人慢性精神类疾病用药药物检测的引物组,所述的人慢性精神类疾病药物为羟考酮、曲马多、丙戊酸、苯妥英、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、托吡酯、地西泮、氯巴占、阿立哌唑、奋乃静、氯氮平、奥氮平、氟哌啶醇、伊洛哌酮、珠氯噻醇、匹莫齐特、阿米替林、丙咪嗪、氯丙咪嗪、多塞平、去甲替林、普罗替林、地昔帕明、曲米帕明、氯米帕明、氟伏沙明、米氮平、帕罗西汀、文拉法辛、西酞普兰、舍曲林、依他普仑、奥沙西泮、劳拉西泮、利多卡因、丙胺卡因中的至少一种。
其共检测18种药物16个基因23个位点;具体如表8所示。
表8
/>
/>
/>
/>
注:有些基因位点对应2个或以上药物。
实施例2
一种用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的试剂盒,包括第一个技术方案的引物组。
还可以包括反应基础试剂、芯片、扩增引物试剂、延伸引物试剂。
需要说的是:反应基础试剂和芯片采购于Agena Bioscience,扩增引物试剂和延伸引物试剂由英潍捷基公司合成。
实施例3
上述用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的方法,依次包括如下步骤:
(1)采用表7所述的引物组中的扩增引物对样品进行PCR扩增,得到PCR扩增产物;具体步骤如下:
1.1将扩增反应试剂(表9中的10*PCR缓冲液、MgCL2、扩增反应试剂dNTP混合液、PCR酶,均属于扩增反应试剂的组成部分)解冻至完全溶解,振荡混匀,短暂离心(PCR酶除外),置冰盒备用。
1.2在冰盒上根据下表配制混合液,见表9。
表9
其中各个扩增引物浓度见表10。
表10
1.3完成加样工作后,把板用膜封好,涡旋振荡和离心。
1.4将反应板置于PCR仪上,按照如下反应程序进行反应,见表11。
表11
1.5反应结束时,取出反应板。
(2)采用SAP酶混合液对步骤(1)的PCR扩增产物进行SAP反应,得到消化反应产物,所述的SAP反应具体步骤如下:
2.1将PCR反应后的反应板用微孔板离心机短暂离心,观察液面,防止蒸发状况出现。
2.2将消化反应试剂(表11中的SAP缓冲液、SAP酶均属消化反应试剂的组成部分)解冻,短暂离心(SAP酶除外),置冰盒备用。
2.3在冰盒上根据下表配制SAP酶混合液,见表12。
表12
2.4加2μl SAP酶混合液到每一个孔里(加混液后总体积:7μL)。
2.5把板用膜封好,涡旋振荡和离心(4000rpm 5秒)。
2.6将板放上PCR仪进行以下反应程序,见表13。
表13
(3)对步骤(2)消化反应产物进行EXT延伸反应,得到延伸反应产物,所述的EXT延伸反应的具体步骤如下:
3.1将消化反应后的反应板用微孔板离心机短暂离心。
3.2将延伸反应试剂(延伸反应试剂包括表13中的iPLEX缓冲液、iPLEXTermination mix、iPLEX酶)解冻,短暂离心(iPLEX酶除外),置冰盒备用。
3.3在冰盒上根据下表配制延伸混合液,见表14。
表14
/>
各个延伸引物浓度见表15。
表15
序号 | 位点 | 序列 |
27 | rs28371725 | CCCGCCTGTCCTT |
28 | rs1065852 | TGGGCTGCACTAC |
29 | rs3892097 | GAGACCGTTGGGGCGAAGGGCGTC |
30 | rs1050828 | CAACGGGCATACCA |
31 | rs1799853 | GAGGAGCATTGGAC |
32 | rs1057910 | GGGTTCACGAGGTCCAGATAC |
33 | rs4986893 | TGATTGTAAGCCCCCTG |
34 | rs12248560 | CTCGTGTCTTCTGTTCAAAG |
35 | rs4244285 | GGTGAAGTAATTTGTTGGGTTCC |
36 | rs1902023 | TTTCAGAAGAGAATTCCAAAT |
37 | rs2304016 | AGAGAAAGGAATAGAAAATCA |
38 | rs3812718 | CGCCTATCCTTTACTCTAAACTT |
39 | rs10484555 | ACGTTGGATGATCCCAAGATAACACGGC |
3.4在反应板中每孔加入2μL的延伸Mix,用封口膜封紧。
3.5将反应板离心1min。
3.6将上述反应板置于PCR仪上,按照如下反应程序进行反应见表16。
表16
(4)对延伸反应产物进行样本脱盐后,采用飞行时间质谱检测系统对样本进行分析和检测。
四、质谱检测前准备(样本脱盐)
4.1将延伸反应后的反应板用微孔板离心机短暂离心。
4.2在反应板的每一个有样本的孔里加入超纯水(96孔板加41μL超纯水)然后离心30秒备用。
4.3将反应板放入飞行时间质谱仪的MTP holders,点击运行界面Run Setup tab,勾选Transfer Resin to MTP1和Transfer Resin MTP 2,仪器自动对样本进行脱盐。
五、质谱上机检测
5.1使用Assay Editor导入Assay Design文件(此模板由技术支持负责导入)
5.2打开软件
双击软件图标,输入密码,进入操作界面;
5.3创建文件夹
在Assay处右键选择Project Administrator,在name栏内输入project的名字,点击Add。
5.4导入assay
在对应的project处右键,选择Import Assay Group Designer format…,只勾选Assay Group,点击Browse,选择assay group file,点击import。
5.5创建plate
双击打开软件,选择Plate Editor,输入密码,进入软件界面。
5.6为Plate添加Assay
在对应的Project处右键,选择New Plate,输入Plate ID,选择96Wells,点击OK。
5.7设置Chip Linker
双击Chip Linker按钮,输入密码,进入软件界面,在左侧选择设置好的plate,在右侧分别选择IPLEX,Genotype+area,Nanodispenser 96to 96,输入Experiment Name,芯片号Chip Barcode,点击Add,再点击Create。
5.8在CPM的Deck中放入MTP板和SpectroCHIP
在系统中找到SpectroACQUIRE界面,点击Chip prep module Deck In/Out,CPM的Deck会自动弹出,放入芯片和MTP板。在SpectroACQUIRE中点击Run Setup tab,在Experiment Name处选择对应的文档,设置完毕后点击软件上方的Start Chip PrepModule按钮开始实验。实验结束后点击Remove Old Chips from MA4按钮将芯片返回CPM的Deck内。
5.9填写相关实验记录表。
6.0下机数据拷贝
将分析文件和分析数据文件拷贝到U盘,转交给审核组同事审核。
本发明提供的技术方案在患者确诊后,临床医生处方时使用,辅助临床医生选择药物和剂量,通过检测报告查看患者的基因突变情况,患者服用哪种药物可以达到更好的疗效和最低的不良反应,从而预测药物的疗效、预测药物的剂量,规避药物的不良反应。
为了证明本申请提供的技术方案的优点,下面给出本申请提供的技术方案的临床案例:
案例1:
林某某,20岁,大二,确诊抑郁症,服用去甲替林,联用地西泮。服药一段时间后,复诊,进行肝功能血检,结果显示谷氨酰转肽酶值高达589。医生建议做基因检测,检测结果显示,CYP2D6为中间代谢型,其代谢功能降低。使用去甲替林出现肝功能损伤的风险增加。
检测结果
用药指导
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医生将去甲替林换成舍曲林,剂量逐渐加至75mg/天,联用地西泮。经过2个月的观察,患者病情控制较为稳定。
Claims (9)
1.用于人慢性精神类疾病用药药物检测的引物组,其特征在于,包括引物组合1-引物组合13中的一种或多种的组合;
其中:
引物组合1包括:SEQIDNO.1-2所示的扩增引物和SEQIDNO.27所示的延伸引物;
引物组合2包括:SEQIDNO.3-4所示的扩增引物和SEQIDNO.28所示的延伸引物;
引物组合3包括:SEQIDNO.5-6所示的扩增引物和SEQIDNO.29所示的延伸引物;
引物组合4包括:SEQIDNO.7-8所示的扩增引物和SEQIDNO.30所示的延伸引物;
引物组合5包括:SEQIDNO.9-10所示的扩增引物和SEQIDNO.31所示的延伸引物;
引物组合6包括:SEQIDNO.11-12所示的扩增引物和SEQIDNO.32所示的延伸引物;
引物组合7包括:SEQIDNO.13-14所示的扩增引物和SEQIDNO.33所示的延伸引物;
引物组合8包括:SEQIDNO.15-16所示的扩增引物和SEQIDNO.34所示的延伸引物;
引物组合9包括:SEQIDNO.17-18所示的扩增引物和SEQIDNO.35所示的延伸引物;
引物组合10包括:SEQIDNO.19-20所示的扩增引物和SEQIDNO.36所示的延伸引物;
引物组合11包括:SEQIDNO.21-22所示的扩增引物和SEQIDNO.37所示的延伸引物;
引物组合12包括:SEQIDNO.23-24所示的扩增引物和SEQIDNO.38所示的延伸引物;
引物组合13包括:SEQIDNO.25-26所示的扩增引物和SEQIDNO.39所示的延伸引物。
2.根据权利要求1所述的用于人慢性精神类疾病用药药物检测的引物组,其特征在于,所述的人慢性精神类疾病药物为羟考酮、曲马多、丙戊酸、苯妥英、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、托吡酯、地西泮、氯巴占、阿立哌唑、奋乃静、氯氮平、奥氮平、氟哌啶醇、伊洛哌酮、珠氯噻醇、匹莫齐特、阿米替林、丙咪嗪、氯丙咪嗪、多塞平、去甲替林、普罗替林、地昔帕明、曲米帕明、氯米帕明、氟伏沙明、米氮平、帕罗西汀、文拉法辛、西酞普兰、舍曲林、依他普仑、奥沙西泮、劳拉西泮、利多卡因、丙胺卡因中的至少一种。
3.一种用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的试剂盒,其特征在于,包括权利要求1所述的引物组。
4.一种用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的方法,其特征在于,依次包括如下步骤:
(1)采用权利要求1所述的引物组中的扩增引物对样品进行PCR扩增,得到PCR扩增产物;
(2)采用SAP酶混合液对步骤(1)的PCR扩增产物进行SAP反应,得到消化反应产物;
(3)对步骤(2)消化反应产物进行EXT延伸反应,得到延伸反应产物;
(4)对延伸反应产物进行样本脱盐后,采用飞行时间质谱检测系统对样本进行分析和检测。
5.根据权利要求4所述的用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的方法,其特征在于,在步骤(1)中,PCR扩增的采用的试剂及其用量如下:
超纯水0.95μL;
10×PCR缓冲液0.45μL;
MGCL20.3μL;
dNTP混合液0.1μL;
引物组1-引物组13扩增引物的混合液1μL;
PCR酶0.2μL;
DNA 2μL;
PCR扩增的反应程序为:95℃:2min;95℃:30s,56℃:30s,72℃:60s,重复45个循环;再在72℃保持8min,后冷却4℃∞。
6.根据权利要求4所述的用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的方法,其特征在于,SAP反应采用的SAP酶混合液包括下述组分及其含量:超纯水1.53μL;SAP缓冲液0.17μL;SAP酶0.3μL;反应程序如下:37℃,40分钟;然后升温85℃,5分钟,后冷却4℃∞。
7.根据权利要求4所述的用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的方法,其特征在于,延伸反应采用的试剂及其用量如下:
超纯水0.677μL;
iPLEX缓冲液0.18μL;
iPLEX Terminationmix 0.2μL;
引物组1-引物组13的延伸引物混合液0.9μL;
iPLEX酶0.043μL;
延伸反应的程序为:94℃:40min;94℃:5s,52℃:5s,80℃:5s,52℃:5s,80℃:5s,52℃:5s,80℃:5s,52℃:5s,80℃:5s,52℃:5s,80℃:5s,,重复38个循环;再在70℃保持5min,后冷却4℃∞。
8.根据权利要求7所述的用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的方法,其特征在于,52℃:5s,52℃:5s,52℃:5s,52℃:5s,52℃:5s,重复5个循环。
9.根据权利要求6所述的用于人慢性精神类疾病药物的基因位点检测的方法,其特征在于,飞行时间质谱检测程序为:
1)使用AssayEditor导入AssayDesiGn文件
2)打开软件
双击软件图标,输入密码,进入操作界面;
3)创建文件夹
在Assay处右键选择ProjectAdministrator,在name栏内输入project的名字,点击Add;
4)导入assay
在对应的project处右键,选择ImportAssayGroupDesiGnerformat…,只勾选AssayGroup,点击Browse,选择assayGroupfile,点击import;
5)创建plate
双击打开软件,选择Plate Editor,输入密码,进入软件界面;
6)为Plate添加Assay
在对应的Project处右键,选择NewPlate,输入PlateID,选择96Wells,点击OK;
7)设置ChipLinker
双击Chip Linker按钮,输入密码,进入软件界面,在左侧选择设置好的plate,在右侧分别选择IPLEX,Genotype+area,SinGlepin96to96,输入ExperimentName,芯片号ChipBarcode,点击Add,再点击Create;
8)在CPM的Deck中放入MTP板和SpectroCHIP
在系统中找到SpectroACQUIRE界面,点击Chip prep module Deck In/Out,CPM的Deck会自动弹出,放入芯片和MTP板。在SpectroACQUIRE中点击Run Setup tab,在ExperimentName处选择对应的文档,设置完毕后点击软件上方的Start Chip Prep Module按钮开始实验。实验结束后点击Remove Old Chips from MA4按钮将芯片返回CPM的Deck内。
9)填写相关实验记录表;
10)下机数据拷贝
将分析文件和分析数据文件拷贝到U盘,转交给审核组审核。
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