CN117224434A - 一种植物提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种植物提取物及其制备方法和应用，属于植物提取研究领域。该提取物由红曲米经复合酶酶解制备得到，活性成分含量高，具有舒缓、控油等功效，在日用化学品领域具有较高的应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及植物提取研究领域，具体涉及一种植物提取物及其制备方法和应用。
背景技术
随着经济社会发展，农耕时代日出而作日落而息的作息规律逐渐被打破，当代青年人睡眠不规律、饮食不规律、手机等电子产品的电离辐射等因素导致皮肤毛囊皮脂腺水油代谢的平衡失调，分泌大量皮脂腺，容易堵塞毛孔，导致表皮角质增厚，滋生细菌，产生痘痘或黑头，严重影响人的美观，给人在社交活动中带来一定程度的烦恼。因此，调节或控制皮肤油脂分泌对缓解或预防青春痘、痤疮具有非常重要的作用。
中国文件(CN106929428A)公开了一种液态发酵制取红曲多糖的方法及制品，红曲多糖的方法，包括以下步骤：(1)制备菌种发酵培养基；(2)制取菌种；(3)生产和培养基的制备；(4)发酵处理；(5)发酵后处理：将红曲菌丝体，经过压榨、膜过滤后，分离出固体部分；(6)提取红曲多糖。该红曲多糖具有具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒等药理作用。但该红曲多糖制备工艺复杂，工业化生产化比较困难，且主要应用于保健食品和功能性食品。
因此，开发一种多功效、稳定性好、植物源天然活性成分的具有舒缓、控油功效且制备工艺简单的化妆品原料对于化妆品研制和开发具有重要意义。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种植物提取物及其制备方法和应用，该植物提取物活性成分含量高，具有舒缓、控油功效。
为此，本申请提供的技术方案如下：
本发明第一方面提供了一种植物提取物。
根据本发明，所述植物提取物中多糖含量为2.0-7.5g/mL。
根据本发明，所述植物提取物中总糖含量为45-65g/mL。
根据本发明，所述植物提取物中蛋白质含量为0.9-3.0mg/mL。
根据本发明，所述植物为红曲米。
根据本发明，所述植物提取物通过以下制备方法制备：
(1)红曲米粉碎过筛，按一定料液比与水混合，复合酶酶解，得植物粗提液。
根据本发明，所述植物提取物的制备方法还包括：
(2)过滤步骤(1)植物粗提液，脱色，得植物脱色液；
(3)植物脱色液浓缩，过滤，得植物提取液；
(4)植物提取液复配甘油和黄原胶，灭菌，得植物提取物。
根据本发明，所述制备方法步骤(1)中料液比为1:10-1:50(m/m)，例如可以是1:10(m/m)、1:11(m/m)、1:13(m/m)、1:15(m/m)、1:20(m/m)、1:25(m/m)、1:30(m/m)、1:35(m/m)、1:40(m/m)、1:45(m/m)、1:50(m/m)，以及上述数值之间的点值。
根据本发明，所述制备方法步骤(1)中复合酶为中性蛋白酶和α-淀粉酶。
根据本发明，以红曲米粉质量计，所述中性蛋白酶添加量为0.05％-2.0％，例如可以是0.05％、0.06％、0.08％、0.1％、0.15％、0.2％、0.5％、1.0％、2.0％，以及上述数值之间的点值。
根据本发明，以料液质量计，α-淀粉酶添加量为0.05％-2.0％，例如可以是0.05％、0.06％、0.08％、0.1％、0.15％、0.2％、0.5％、1.0％、2.0％，以及上述数值之间的点值。
根据本发明，所述制备方法步骤(1)中复合酶酶解方式为两段式酶解。
根据本发明，所述第一段酶解条件为酶解温度40℃-60℃，例如可以是40℃、41℃、43℃、45℃、50℃、55℃、60℃，以及上述数值之间的点值。
根据本发明，所述第一段酶解条件为酶解时间1-3h，例如可以是1h、2h、3h。
根据本发明，所述第二段酶解条件为酶解温度70℃-85℃，例如可以是70℃、71℃、75℃、80℃、85℃，以及上述数值之间的点值。
根据本发明，所述第二段酶解条件为酶解时间1-3h，例如可以是1h、2h、3h。
根据本发明，所述制备方法步骤(3)中浓缩为将植物脱色液质量浓缩1-3倍。
根据本发明，所述制备方法步骤(1)中红曲米经粉碎过60-120目筛得到。
根据本发明，所述制备方法步骤(2)中过滤方式为用纸板F100过滤。
根据本发明，所述制备方法步骤(2)中脱色方式为以植物粗提液质量计加入滤液质量1.0-3.0％活性炭。
根据本发明，所述制备方法步骤(3)中浓缩方式为使用旋蒸瓶在60-70℃、-0.1Mpa—-0.08MPa下负压旋蒸浓缩。
根据本发明，所述制备方法步骤(3)中过滤方式为用纸板H70过滤。
根据本发明，所述制备方法步骤(3)中精滤液浊度≤2.0FNU。
根据本发明，以植物提取液质量计，所述制备方法步骤(4)中复配5.0-12.0％甘油，例如可以是5.0％、5.1％、5.5％、6.0％、6.5％、7.0％、7.5％、8.0％、9.0％、10.0％、11.0％、12.0％，以及上述数值之间的点值。
根据本发明，以植物提取液质量计，所述制备方法步骤(4)中复配0.01-0.2％黄原胶，例如可以是0.01％、0.02％、0.05％、0.1％、0.2％，以及上述数值之间的点值。
根据本发明，所述制备方法步骤(4)中灭菌方式为本领域常规灭菌方式。
根据本发明，所述制备方法步骤(4)中灭菌方式为以复配后物料总质量计，添加2％戊二醇，1.2％乙二醇，90-95℃，灭菌30min。
本发明第二方面提供了本发明第一方面所述植物提取物的制备方法。
根据本发明，所述制备方法包括如下步骤：
(1)红曲米粉碎过筛60-120目筛，按1:10-1:50(m/m)料液比与水混合，以红曲米粉质量计，加入0.05％-2.0％中性蛋白酶，以料液质量计，加入0.05％-2.0％α-淀粉酶，先在40℃-60℃温度下提取1-3h，然后升温至70℃-85℃提取1-3h，得植物粗提液；
(2)过滤步骤(1)植物粗提液，脱色，得植物脱色液；
(3)植物脱色液质量计，浓缩1-3倍，过滤，得植物提取液；
(4)以植物提取液质量计，复配5.0-12.0％甘油，0.01-0.20％黄原胶，灭菌，得植物提取物。
根据本发明，以红曲米粉质量计，所述中性蛋白酶添加量可以是0.05％、0.06％、0.08％、0.1％、0.15％、0.2％、0.5％、1.0％、2.0％，以及上述数值之间的点值。
根据本发明，以料液质量计，α-淀粉酶添加量可以是0.05％、0.06％、0.08％、0.1％、0.15％、0.2％、0.5％、1.0％、2.0％，以及上述数值之间的点值。
根据本发明，所述制备方法步骤(1)中复合酶酶解方式为两段式酶解。
根据本发明，所述第一段酶解条件为酶解温度可以是40℃、41℃、43℃、45℃、50℃、55℃、60℃，以及上述数值之间的点值。
根据本发明，所述第一段酶解条件为酶解时间可以是1h、2h、3h。
根据本发明，所述第二段酶解条件为酶解温度可以是70℃、71℃、75℃、80℃、85℃，以及上述数值之间的点值。
根据本发明，所述第二段酶解条件为酶解时间可以是1h、2h、3h。
根据本发明，所述制备方法步骤(1)中红曲米经粉碎过60-120目筛得到。
根据本发明，所述制备方法步骤(2)中过滤方式为纸板F100过滤。
根据本发明，所述制备方法步骤(2)中脱色方式为以植物粗提液质量计加入滤液质量1.0-3.0％活性炭。
根据本发明，所述制备方法步骤(3)中浓缩方式为使用旋蒸瓶在60-70℃、-0.1Mpa—-0.08MPa旋蒸浓缩。
根据本发明，所述制备方法步骤(3)中过滤方式为纸板H70过滤。
根据本发明，所述制备方法步骤(3)中精滤液浊度≤2.0FNU。
根据本发明，以植物提取液质量计，所述制备方法步骤(4)中复配甘油添加量可以是5.0％、5.1％、5.5％、6.0％、6.5％、7.0％、7.5％、8.0％、9.0％、10.0％、11.0％、12.0％，以及上述数值之间的点值。
根据本发明，以植物提取液质量计，所述制备方法步骤(4)中复配黄原胶添加量可以是0.01％、0.02％、0.05％、0.1％、0.2％，以及上述数值之间的点值。
根据本发明，所述制备方法步骤(4)中灭菌方式为本领域常规灭菌方式。
根据本发明，所述制备方法步骤(4)中灭菌方式为以复配后物料总质量计，添加2％戊二醇，1.2％乙二醇，90-95℃，灭菌30min。
本发明第三方面提供了本发明第一方面所述植物提取物和/或本发明第二方面所述制备方法制备得到的植物提取物在化妆品领域中的应用。
根据本发明，所述植物提取物具有舒缓、控油等功效。
根据本发明，所述化妆品包括面膜、膏霜、啫喱、乳液、护肤水、洗面奶、洗发水、护发素或沐浴露等，不受剂型的限制。
本发明的有益效果
本申请植物提取物由红曲米经中性蛋白酶和α-淀粉酶复合酶解制备得到，其活性成分含量高，具有舒缓、控油等功效，在日用化学品领域具有较高的应用价值。
附图说明
图1是实施例1-5和对比例1-5植物提取物的外观图；
图2是实施例1-5和对比例3-5植物提取物清除ABTS自由基测试结果；
图3是实施例1-5和对比例3-5植物提取物对TNF-α的抑制作用测试结果；
图4是实施例1-5和对比例3-5植物提取物对IL-1β的抑制作用测试结果；
图5是实施例1-5和对比例3-5植物提取物对IL-6的抑制作用测试结果；
图6是金黄色葡萄球菌生长曲线；
图7是表皮葡萄球菌生长曲线；
图8是使用实施例1和对比例5植物提取物后皮肤油脂含量测试结果。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本发明进行详细说明，但本发明并不受下述实施例限定。
本发明使用原料来源见表1，如无特殊说明本发明所使用原料及仪器均为常规原料。
表1使用原料来源
实施例1：
(1)称取20g红曲米粉碎过80目筛，红曲米按1:20(m/m)料液比与水混合，以红曲米粉质量计加入0.1％中性蛋白酶，以料液质量计加入0.1％α-淀粉酶，先在52±2℃温度下提取1h，然后升温至82±2℃提取1h，得植物粗提液；
(2)将植物粗提液升温至95-100℃，加热搅拌30min，降温至70℃纸板F100过滤，然后加入滤液质量2％活性炭，在温度80-85℃条件下脱色时间1h，得植物脱色液；
(3)使用旋蒸瓶在60-70℃、-0.1MPa旋蒸浓缩，使植物脱色液质量浓缩1倍，待其降温至30℃，再次用纸板H70过滤，控制精滤液的浊度≤2.0FNU，得植物提取液；
(4)以植物提取液质量计，复配10％甘油，0.15％黄原胶，常温搅拌，使其溶解完全，然后以复配后物料总质量计，添加2％戊二醇，1.2％乙二醇，90-95℃，灭菌30min，得实施例1植物提取物。
实施例2：
(1)称取20g红曲米粉碎过100目筛，红曲米按1:50(m/m)料液比与水混合，以红曲米粉质量计加入0.05％中性蛋白酶，以料液质量计加入0.05％α-淀粉酶，先在52±2℃温度下提取1h，然后升温至82±2℃提取1h，得植物粗提液；
(2)将植物粗提液升温至95-100℃，加热搅拌30min，降温至70℃纸板F100过滤，然后加入滤液质量2％活性炭，在温度80-85℃条件下脱色时间1h，得植物脱色液；
(3)使用旋蒸瓶在60-70℃、-0.1MPa旋蒸浓缩，使植物脱色液质量浓缩1倍，待其降温至30℃，再次用纸板H70过滤，控制精滤液的浊度≤2.0FNU，得植物提取液；
(4)以植物提取液质量计，复配10％甘油，0.15％黄原胶，常温搅拌，使其溶解完全，然后以复配后物料总质量计，添加2％戊二醇，1.2％乙二醇，90-95℃，灭菌30min，得实施例2植物提取物。
实施例3：
(1)称取20g红曲米粉碎过120目筛，红曲米按1:10(m/m)料液比与水混合，以红曲米粉质量计，加入2.0％中性蛋白酶，以料液质量计加入2.0％α-淀粉酶，先在52±2℃温度下提取1h，然后升温至82±2℃提取1h，得植物粗提液；
(2)将植物粗提液升温至95-100℃，加热搅拌30min，降温至70℃纸板F100过滤，然后加入滤液质量2％活性炭，在温度80-85℃条件下脱色时间1h，得植物脱色液；
(3)使用旋蒸瓶在60-70℃、-0.1MPa旋蒸浓缩，使植物脱色液质量浓缩1倍，待其降温至30℃，再次用纸板H70过滤，控制精滤液的浊度≤2.0FNU，得植物提取液；
(4)以植物提取液质量计，复配10％甘油，0.15％黄原胶，常温搅拌，使其溶解完全，然后以复配后物料总质量计，添加2％戊二醇，1.2％乙二醇，90-95℃，灭菌30min，得实施例3植物提取物。
实施例4：
(1)称取20g红曲米粉碎过80目筛，红曲米按1:20(m/m)料液比与水混合，以红曲米粉质量计，加入1.0％中性蛋白酶，以料液质量计加入1.0％α-淀粉酶，先在52±2℃温度下提取1h，然后升温至82±2℃提取1h，得植物粗提液；
(2)将植物粗提液升温至95-100℃，加热搅拌30min，降温至70℃纸板F100过滤，然后加入滤液质量2％活性炭，在温度80-85℃条件下脱色时间1h，得植物脱色液；
(3)使用旋蒸瓶在60-70℃、-0.1MPa旋蒸浓缩，使植物脱色液质量浓缩1倍，待其降温至30℃，再次用纸板H70过滤，控制精滤液的浊度≤2.0FNU，得植物提取液；
(4)以植物提取液质量计，复配10％甘油，0.15％黄原胶，常温搅拌，使其溶解完全，然后以复配后物料总质量计，添加2％戊二醇，1.2％乙二醇，90-95℃，灭菌30min，得实施例4植物提取物。
实施例5：
(1)称取20g红曲米粉碎过80目筛，红曲米按1:20(m/m)料液比与水混合，以红曲米粉质量计，加入0.5％中性蛋白酶，以料液质量计加入0.5％α-淀粉酶，先在52±2℃温度下提取1h，然后升温至82±2℃提取1h，得植物粗提液；
(2)将植物粗提液升温至95-100℃，加热搅拌30min，降温至70℃纸板F100过滤，然后加入滤液质量2％活性炭，在温度80-85℃条件下脱色时间1h，得植物脱色液；
(3)使用旋蒸瓶在60-70℃、-0.1MPa旋蒸浓缩，使植物脱色液质量浓缩1倍，待其降温至30℃，再次用纸板H70过滤，控制精滤液的浊度≤2.0FNU，得植物提取液；
(4)以植物提取液质量计，复配10％甘油，0.15％黄原胶，常温搅拌，使其溶解完全，然后以复配后物料总质量计，添加2％戊二醇，1.2％乙二醇，90-95℃，灭菌30min，得实施例5植物提取物。
对比例1：
(1)称取20g红曲米粉碎过100目筛，红曲米按1:20(m/m)料液比与水混合，以红曲米粉质量计，加入0.1％中性蛋白酶和0.1％纤维素酶，先在52±2℃温度下提取1h，然后升温至82±2℃提取1h，得植物粗提液；
(2)将植物粗提液升温至95-100℃，加热搅拌30min，降温至70℃，得对比例1植物提取物。
对比例2：
(1)称取20g红曲米粉碎过100目筛，红曲米按1:20(m/m)料液比与水混合，以红曲米粉质量计，加入0.1％纤维素酶在52±2℃温度下提取1h，升温至82±2℃提取1h，然后加入0.1％中性蛋白酶在52±2℃温度下提取1h，升温至82±2℃提取1h，得植物粗提液；
(2)将植物粗提液升温至95-100℃，加热搅拌30min，降温至70℃，得对比例2植物提取物。
对比例3：
(1)称取20g红曲米粉碎过80目筛，红曲米按1:20(m/m)料液比与水混合，以料液质量计加入0.1％α-淀粉酶在52±2℃温度下提取1h，升温至82±2℃提取1h，然后以红曲米粉质量计加入0.1％中性蛋白酶在52±2℃温度下提取1h，升温至82±2℃提取1h，得植物粗提液；
(2)将植物粗提液升温至95-100℃，加热搅拌30min，降温至70℃用纸板F100过滤，然后加入滤液质量2％活性炭，在温度80-85℃条件下脱色时间1h，得植物脱色液；
(3)使用旋蒸瓶在60-70℃、-0.1MPa旋蒸浓缩，使植物脱色液质量浓缩1倍，待其降温至30℃，再次用纸板H70过滤，控制精滤液的浊度≤2.0FNU，得植物提取液；
(4)以植物提取液质量计，复配10％甘油，0.15％黄原胶，常温搅拌，使其溶解完全，然后以复配后物料总质量计，添加2％戊二醇，1.2％乙二醇，90-95℃，灭菌30min，得对比例3植物提取物。
对比例4：
(1)称取20g红曲米粉碎过80目筛，红曲米按1:20(m/m)料液比与水混合，以红曲米粉质量计，加入0.1％中性蛋白酶在52±2℃温度下提取1h，升温至82±2℃提取1h，然后以料液质量计加入0.1％α-淀粉酶在52±2℃温度下提取1h，升温至82±2℃提取1h，得植物粗提液；
(2)将植物粗提液升温至95-100℃，加热搅拌30min，降温至70℃用纸板F100过滤，然后加入滤液质量2％活性炭，在温度80-85℃条件下脱色时间1h，得植物脱色液；
(3)使用旋蒸瓶在60-70℃、-0.1MPa旋蒸浓缩，使植物脱色液质量浓缩1倍，待其降温至30℃，再次用纸板H70过滤，控制精滤液的浊度≤2.0FNU，得植物提取液；
(4)以植物提取液质量计，复配10％甘油，0.15％黄原胶，常温搅拌，使其溶解完全，然后以复配后物料总质量计，添加2％戊二醇，1.2％乙二醇，90-95℃，灭菌30min，得对比例4植物提取物。
对比例5：
(1)选料浸蒸：选取大米，流水中浸泡36小时，浸泡后蒸熟，冷却至20℃以下备用；
(2)曲种制备：红曲霉曲糟的制备，将红曲米粉碎至10目细度，按质量比1:2向红曲米中加入清水，煮沸后降温至15℃，搅拌混合均匀制成曲糟；经过蒸熟冷却后的富含淀粉的基质中拌醋0.5wt％和所述曲糟0.5wt％配制成红曲霉曲种；
(3)室内发酵：曲种在曲房内堆成山形，保证曲房内洁净度及湿度。温度40℃，一次发酵24小时；后铺散于地面、通风30分钟后再堆成山形，温度30℃二次发酵12小时；然后铺散于地面，保持室温不低于20℃，通风12小时后翻动一次，再12小时后再翻动一次，后每隔3小时翻动一次；
(4)加温发酵：在发酵第4天，用麻袋将曲种装好，放入水池中浸水20分钟，再回到曲房中进行室内发酵，保证室温不低于30℃，堆成山形、密封3天后，铺散于地面，通风，均匀洒上清水，所洒清水总质量约为曲料质量的50％，之后每隔一天翻动一次至出曲房为止；
(5)出房干燥：发酵9天后，转移至烈日下曝晒至干燥，得红曲霉发酵产物；
(6)将红曲霉发酵产物20g与纯净水按料液比m/m 1:20混合，60℃的温度下加热搅拌提取(200r/min)，提取时间3小时，得提取溶液；
(7)粗滤：将所述提取溶液常温下静置1h，上清液过400目滤布粗滤，得提取溶液粗滤液；
(8)脱色：将上述粗滤液用活性炭脱色，活性炭用量为1wt％，脱色温度80℃，脱色时间0.5h，得脱色溶液；
(9)精滤：将上述脱色溶液静置冷却至常温，进行抽滤，抽滤至澄清，得精滤液；
(10)将上述精滤液灭菌(85℃保温1小时)、防腐(以精滤液质量计添加0.8wt％苯氧乙醇与乙基己基甘油(质量比为苯氧乙醇：乙基己基甘油＝9:1)复配物)，得对比例5植物提取物。
试验例1：植物提取物外观
植物提取物的外观图片如图1所示。
对比例1-2在小试过程中过滤困难，无法进行后续试验。这种情况出现的原因可能是植物提取物中胞内粘质液被提取出来，对比例1和对比例2植物提取物复合酶解所选用的中性蛋白酶和纤维素酶具有其高度的选择性，无法识别并酶解胞内粘质液。
试验例2：活性成分含量
(1)采用苯酚-硫酸法测试样品中多糖含量(参考标准：《QB/T 2488-2006化妆品用芦荟汁、粉》)；
(2)采用苯酚-硫酸法测试样品中总糖含量(参考标准：《QB/T 2488-2006》化妆品用芦荟汁、粉》)；
(3)采用Folin-酚法进行蛋白质含量的测定；
(4)采用氨基酸自动分析仪测定样品中氨基酸的方法(参考标准：《GB/T5009.124-2003食品中氨基酸的测定》)。
测试结果：
表2不同植物提取物中多糖含量、总糖含量、蛋白质含量
| 序号 | 多糖(mg/mL) | 总糖(mg/mL) | 蛋白质(mg/mL) |
| 实施例1 | 2.8 | 61 | 1.0 |
| 实施例2 | 2.0 | 45 | 3.0 |
| 实施例3 | 5.0 | 55 | 1.0 |
| 实施例4 | 7.5 | 50 | 0.9 |
| 实施例5 | 3.0 | 65 | 1.5 |
| 对比例3 | 1.5 | 21 | 0.52 |
| 对比例4 | 1.3 | 23 | 0.41 |
| 对比例5 | 1.1 | 19 | 0.67 |
表3不同植物提取物中氨基酸含量
不同植物提取物的活性成分含量如表2-3所示，与对比例3-5相比，本申请中性蛋白酶和α-淀粉酶复合酶解制备的植物提取物具有更高的活性成分，多糖含量高达2.1-3.0mg/mL，总糖含量高达47-61mg/mL，蛋白质含量高达0.88-1.17mg/mL；与对比例5相比，本申请中性蛋白酶和α-淀粉酶复合酶酶解制备的植物提取物具有更高的氨基酸含量，约为对比例5植物提取物氨基酸含量的8倍。
试验例3：清除ABTS自由基
测试样品：实施例1-5、对比例3-5
测试原理：
ABTS自由基清除试验作为评价抑制氧化应激反应的一种方法，可评估物质对氧化应激反应的抑制能力。一般情况下，ABTS自由基清除率越大，表明物质抑制氧化应激反应的能力越强。ABTS在适当的氧化剂作用下氧化生成稳定的蓝绿色阳离子自由基ABTS+·，抗氧化物存在时，ABTS+·与其抗氧化成分发生反应，使得体系颜色褪去。在最大吸收波长下，测定溶液的吸光度值，即可测定并评估产品抑制氧化应激反应的能力。
测试方法：
试验考察了实施例1-5、对比例3-5(0.25％、0.5％、1.0％、2.5％)清除ABTS自由基的能力。测试时使用50％乙醇溶液将实施例1-5、对比例3-5稀释至待测浓度0.25％、0.5％、1.0％、2.5％；阳性对照为维生素C(Vc)。
测试结果：
植物提取物清除ABTS自由基测试结果如图2所示，本申请测试浓度下，实施例1-5均具有清除ABTS自由基的能力，抑制氧化应激反应；在浓度0.25％和0.50％时，对比例3-5几乎不具有清除ABTS自由基的能力。相同测试浓度下，相比于对比例，实施例具有更好的清除ABTS自由基的能力。实验结果表明，本申请特定酶复合酶解制备的植物提取物具有更好的抑制氧化应激反应的能力。
试验例4：抗炎功效实验
测试样品：实施例1-5、对比例3-5
测试方法：
脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)是革兰氏阴性菌细胞壁的组成成分之一。LPS作用于巨噬细胞时会诱导巨噬细胞的炎症反应，使得细胞炎症因子大量生成，如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)等。本试验基于LPS诱导小鼠巨噬细胞(RAW264.7)炎症模型，评价植物提取物抑制炎症因子释放的能力，进而预测其抑制炎症反应进一步发生的能力。本试验阳性对照为0.001％的地塞米松；模型对照为LPS诱导(LPS+)未添加样品的RAW264.7；空白对照为加入磷酸盐缓冲液(PBS)的细胞培养基。细胞功效测试浓度选择标准：
(1)相对细胞活率±SD＞85％(相对细胞活率均值介于85-90％(不包含90％时)需与阴性对照组相比无显著性差异(p＞0.05))；
(2)细胞形态，相比阴性对照组无明显变化。
注：阴性对照为培养基。
检测方法：
选择实施例1-5、对比例3-5植物提取物系列浓度进行细胞试验，基于RAW264.7细胞的毒性检测结果和细胞的形态学观察结果，TNF-α最终选取待测浓度为0.0098％、0.0195％、0.0390％进行试验，IL-1β和IL-6最终选取待测浓度为0.0003％、0.0024％、0.0195％进行试验，测试结果如图3-5和表4-6所示。
测试结果：
表4实施例1-5、对比例3-5植物提取物对TNF-α的抑制作用
植物提取物对TNF-α的抑制作用如图3和表4所示，浓度为0.0098％、0.0195％、0.0390％时，实施例和对比例植物提取物均可抑制炎症因子TNF-α的释放。受试浓度为0.0195％时，对比例3植物提取物对炎症因子TNF-α抑制率为11.61％、对比例4植物提取物对炎症因子TNF-α抑制率为12.92％，实施例2植物提取物对炎症因子TNF-α抑制率为47.27％，约为其4倍；相比于对比例5，实施例2植物提取物对炎症因子TNF-α抑制率约为其3倍。上述测试结果说明本申请通过特定比例和种类的中性蛋白酶和α-淀粉酶复合酶解制备植物提取物具有更好的抑制炎症因子TNF-α释放的效果。
表5实施例1-5、对比例3-5植物提取物对IL-1β的抑制作用
植物提取物对IL-1β的抑制作用如图4和表5所示，浓度为0.0003％、0.0024％、0.0195％时，实施例和对比例植物提取物均可抑制炎症因子IL-1β的释放。受试浓度为0.0195％时，对比例3植物提取物对炎症因子IL-1β抑制率为14.35％、对比例4植物提取物对炎症因子IL-1β抑制率为15.19％，而实施例2植物提取物对炎症因子IL-1β抑制率为50.12％，约为其3倍；相比于对比例5，实施例1植物提取物对炎症因子IL-1β抑制率约为其3倍。上述测试结果说明本申请通过特定比例和种类的中性蛋白酶和α-淀粉酶复合酶解制备植物提取物具有更好的抑制炎症因子IL-1β释放的效果。
表6实施例1-5、对比例3-5植物提取物对IL-6的抑制作用
植物提取物对IL-6的抑制作用如图5和表6所示，浓度为0.0003％、0.0024％、0.0195％时，实施例和对比例植物提取物均可抑制炎症因子IL-6的释放。受试浓度为0.0195％时，实施例对炎症因子IL-6抑制率均在80％以上，相比于对比例提高了约4倍。上述测试结果说明本申请通过特定比例和种类的中性蛋白酶和α-淀粉酶复合酶解制备植物提取物具有更好的抑制炎症因子IL-6释放的效果。
试验例5：抑菌功效实验
测试样品：实施例1-5、对比例3-5
测试方法：
采用微孔板进行金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌生长抑制试验，将试验样品加入到微生物液体培养基中制备浓度为5％样品的培养基，然后加入一定浓度的菌液，配制的菌液终浓度为1.0-5.0×105cfu/mL在培养0h、1h、2h、3h、4h、6h、8h、24h时测定培养基的OD600吸光度。以所有测试样品分别以加入菌液0h的OD600作为零点空白。绘制细菌的生长曲线。以未加入试验样品仅加入菌液的测试样品作为对照组。试验组和对照组分别设置12组平行。对照组：未加入试验样品仅加入菌液的测试样品；测试样品：加入试验样品且加入菌液的测试样品。
细菌生长曲线计算公式：(OD600nh-OD6000h)/OD6000h×100％。
测试结果：
植物提取物对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌生长抑制试验如图6和图7所示，选择浓度5％实施例1-5、对比例3-5植物提取物进行金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌生长抑制试验。根据生长曲线观察，相同测试浓度下，实施例植物提取物相比于对比例均具有更好的金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌生长抑制效果，在3-8h范围内，实施例植物提取物的抑制作用是对比例的数倍，说明选用特定比例和中种类复合酶酶解得到的植物提取物可以有效的抑制金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌生长。
试验例6：控油功效实验
测试样品：实施例1、对比例5
测试仪器：皮肤油脂含量测试仪Sebumeter(SM815 Courage and Khazaka，德国)。
测试方法：
每个样品筛选11名志愿者，试验组单次涂抹10％实施例1或10％对比例5样品于面部，测量使用样品前、碱性皂基清洁产品洁面后即时(洁面后0h)、样品使用后1h、2和、3h额头油脂含量，空白对照组不使用任何样品。通过样品使用前后皮肤油脂含量变化，评估面部油脂分泌的情况，从而评价样品的控油效果。
测试结果：
皮肤油脂含量测试结果如图8所示，在使用样品后1h，实施例1中皮肤油脂含量相对洁面后即时的差值显著小于空白对照侧(P<0.05)，而对比例5中的油脂含量相对于空白对照变化不大，即对比例5植物提取物基本无减小皮肤油脂分泌的功效，说明选用特定酶进行复合酶解得到的植物提取物可以有效减少皮肤油脂分泌。
本申请植物提取物以红曲米为原料经特定比例和种类的中性蛋白酶和α-淀粉酶复合酶解制备得到，其多糖、总糖、蛋白质、氨基酸等活性成分含量高，具有舒缓、控油等功效。
本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无法对所有的实施方式予以穷举，凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。
Claims (9)
1.一种植物提取物，其特征在于，所述植物提取物中多糖含量为2.0-7.5mg/mL，总糖含量为45-65mg/mL，蛋白质含量为0.9-3.0mg/mL；所述植物为红曲米。
2.根据权利要求1所述的植物提取物，其特征在于，所述植物提取物通过以下制备方法制备：
(1)红曲米粉碎过筛，按一定料液比与水混合，复合酶酶解，得植物粗提液。
3.根据权利要求2所述的植物提取物，其特征在于，所述植物提取物的制备方法还包括：
(2)过滤步骤(1)植物粗提液，脱色，得植物脱色液；
(3)植物脱色液浓缩，过滤，得植物提取液；
(4)植物提取液复配甘油和黄原胶，灭菌，得植物提取物。
4.根据权利要求2或3所述的植物提取物，其特征在于，所述制备方法步骤(1)中料液比为1:10-1:50(m/m)。
5.根据权利要求2-4任意一项所述的植物提取物，其特征在于，所述制备方法步骤(1)中复合酶为中性蛋白酶和α-淀粉酶，以红曲米粉质量计，中性蛋白酶添加量为0.05％-2.0％，以料液质量计，α-淀粉酶添加量为0.05％-2.0％。
6.根据权利要求2-5任意一项所述的植物提取物，其特征在于，所述制备方法步骤(1)中复合酶酶解方式为两段式酶解，第一段酶解条件为酶解温度40℃-60℃、提取时间1-3h，第二段酶解条件为酶解温度70℃-85℃、提取时间1-3h。
7.根据权利要求3-6任意一项所述的植物提取物，其特征在于，所述制备方法步骤(3)中浓缩为将植物脱色液质量浓缩1-3倍。
8.一种植物提取物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
(1)红曲米粉碎过筛60-120目筛，按1:10-1:50(m/m)料液比与水混合，以红曲米粉质量计，加入0.05％-2.0％中性蛋白酶，以料液质量计，加入0.05％-2.0％α-淀粉酶，先在40℃-60℃温度下提取1-3h，然后升温至70℃-85℃提取1-3h，得植物粗提液；
(2)过滤步骤(1)植物粗提液，脱色，得植物脱色液；
(3)植物脱色液质量计，浓缩1-3倍，过滤，得植物提取液；
(4)以植物提取液质量计，复配5.0-12.0％甘油，0.01-0.2％黄原胶，灭菌，得植物提取物。
9.权利要求1-7任意一项所述的植物提取物和/或权利要求8所述的制备方法制备得到的植物提取物在化妆品领域中的应用。
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|---|---|---|---|
| CN202210639968.3A CN117224434A (zh) | 2022-06-08 | 2022-06-08 | 一种植物提取物及其制备方法和应用 |
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| CN202210639968.3A CN117224434A (zh) | 2022-06-08 | 2022-06-08 | 一种植物提取物及其制备方法和应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117224434A true CN117224434A (zh) | 2023-12-15 |
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ID=89083141
Family Applications (1)
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2022
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