CN117204562A - 一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球及其制备方法 - Google Patents

一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球及其制备方法 Download PDF

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邓玉兰
何晓桐
杜冰
黎攀
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South China Agricultural University
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Abstract

本发明提供一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球及其制备方法，涉及食品领域。本发明利用植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵铁皮石斛水提物，得到铁皮石斛发酵多糖，并以铁皮石斛发酵多糖与海藻酸钠作为复配壁材对鸡胆酶转化物进行包封，然后对制得的海藻酸钠凝胶微球进行复裹，形成一种具有稳定包封结构的海藻酸钠凝胶微球。通过发酵处理得到分子量适中的铁皮石斛多糖可以更高效地与海藻酸钠相互作用，使海藻酸钠凝胶微球更牢固、更致密，同时对制得的海藻酸钠凝胶微球进行复裹，进一步阻止了凝胶微球中鸡胆酶转化物的溶出，该多层包封结构为鸡胆酶转化物提供了良好的包埋保护，有效解决了鸡胆酶转化物苦腥味的问题。

Description

一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球及其制备方法
技术领域
本发明涉及食品领域，具体涉及一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球及其制备方法。
背景技术
鸡胆，作为鸡肉加工的副产物，产量巨大，鸡胆汁中含有丰富的胆汁酸，通常以结合胆盐的形式存在，经过生物酶解后，其中的鹅去氧胆酸可生成熊去氧胆酸，具有治疗胆固醇结石、胆汁淤积性疾病、原发性胆汁性肝硬化等功效。虽然实验研究证明鸡胆酶转化物(或称鸡胆汁酶解物)具有多种药理作用，但目前其临床及食品应用仍不广泛。因此，对鸡胆酶转化物的开发价值得更深入、更广泛的研究。
鸡胆汁食之味苦、具有浓烈的腥臭味，鸡胆酶转化物同样存在这一问题。市面上所售的鸡胆汁相关产品多通过借助甜味剂和抑苦剂制成口服液等饮剂，或者是通过胶壳包裹制成鸡胆粉胶囊等。例如，专利文献CN101176737A公开了一种鸡胆汁的药物组合物，含有鸡胆汁膏、味道掩蔽剂、甜味剂和芳香矫味剂，通过药物组合的方式解决了鸡胆汁具有特定腥臭和苦味的问题，该组合物可制备成颗粒剂、胶囊、片剂和分散片。但是此类方法并不适合将鸡胆酶转化物加工成为食品，限制了其在食品领域的应用。
目前尚未见借助凝胶包埋技术来改善鸡胆酶转化物腥苦味的报道。常见的凝胶包埋技术通常将海藻酸钠与蛋白质、多糖、脂质等高分子材料复配的方式对一些功能因子进行包埋，以此达到稳定活性成分、掩盖不良的风味、提高生物利用率等作用。现有技术中制作微球凝胶的壁材多为海藻酸钠复配天然的生物聚合物，简单的复配存在着凝胶强度较弱，钙化膜也存在机械性能较差的缺点，导致海藻酸钠微囊在应用过程中容易出现内容物释放不稳定、微囊易破裂等问题。
因此，制备一种具有较高的硬度和强度，且能有效减少鸡胆酶转化物苦腥味成分溶出的海藻酸钠凝胶微球，对于推进鸡胆酶转化物在食品领域的应用具有重要的现实意义。
发明内容
本发明旨在提供一种具有较高的硬度和强度，且能有效减少鸡胆酶转化物苦腥味成分溶出的海藻酸钠凝胶微球的制备方法。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
第一方面，本发明提供一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，包括以下步骤：
(1)取铁皮石斛粉末加水提取，离心，取上清液接入植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌进行发酵，发酵完成后取发酵液浓缩冻干，得到铁皮石斛发酵多糖；
(2)将海藻酸钠、β-环糊精、所述铁皮石斛发酵多糖加水混匀，加热，向其中加入鸡胆酶转化物，溶解，得到鸡胆酶转化物-海藻酸钠溶液；
(3)将所述鸡胆酶转化物-海藻酸钠溶液滴入氯化钙溶液中，固化，得到海藻酸钠凝胶微球；
(4)将海藻酸钠加水混匀，加热，得到复裹溶液；
(5)将所述海藻酸钠凝胶微球从所述氯化钙溶液中滤出，放入所述复裹溶液中，搅拌，过滤，得到所述包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球。
进一步地，步骤(1)中，
所述铁皮石斛粉末和水的质量之比为1:25～40；
提取温度为90～92℃；提取时间为2～3h；
发酵温度为25～30℃；发酵时间为24～96h；
以所述上清液的质量计，接入的所述植物乳杆菌的活菌数为108～1010cfu/g，接入的所述枯草芽孢杆菌的活菌数为108～1010cfu/g。
进一步地，步骤(1)中，所述铁皮石斛粉末和水的质量之比为1:30；提取温度为90℃；提取时间为2h；发酵温度为30℃；发酵时间为72h；
以所述上清液的质量计，接入的所述植物乳杆菌的活菌数为1010cfu/g，接入的所述枯草芽孢杆菌的活菌数为1010cfu/g。
进一步地，步骤(2)中，
所述海藻酸钠、β-环糊精、铁皮石斛发酵多糖、水和鸡胆酶转化物的质量比为10:4:1～4:400:10，优选为10:4:3:400:10；
加热温度为50～53℃；加热时间为30～35min。
优选的，加热温度为50℃；加热时间为30min。
进一步地，步骤(3)中，
所述氯化钙溶液的质量浓度为1.11％；
所述固化在磁力搅拌下进行，转速为350～500rpm，优选为500rpm，时间为30min。
进一步地，步骤(4)中，
所述复裹溶液中海藻酸钠的质量浓度为0.5％～1.25％；
加热温度为50～53℃，加热时间为30～35min。
优选的，加热温度为50℃，加热时间为30min。
进一步地，步骤(4)中，
所述复裹溶液的原料还包括麦芽糊精、阿拉伯糖和果汁中的至少一种。
进一步地，步骤(4)中，
所述复裹溶液的原料还包括麦芽糊精、阿拉伯糖和果汁，所述海藻酸钠、麦芽糊精、阿拉伯糖、水和果汁的质量之比为4～12:4:48:800:64，优选为8:4:48:800:64。
进一步地，所述果汁的制备方法包括：取水果原浆添加果胶酶和纤维素酶进行酶解，对酶解后的原浆进行过滤，得到所述果汁，所述水果原浆包括百香果原浆和/或芒果原浆。
进一步地，所述果汁的原料包括百香果原浆和芒果原浆，所述百香果原浆和芒果原浆的质量之比为1～2：1～2；
以所述水果原浆的质量计，所述果胶酶添加量为0.6～0.85g/kg，优选为0.6g/kg，所述纤维素酶的添加量为0.6～0.8g/kg，优选为0.6g/kg。
第二方面，本发明提供由所述的制备方法得到的包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球。
本发明技术方案，具有如下优点：
1、本发明提供一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，利用植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵铁皮石斛水提物，得到铁皮石斛发酵多糖，并以铁皮石斛发酵多糖与海藻酸钠作为复配壁材对鸡胆酶转化物进行包封，然后对制得的海藻酸钠凝胶微球进行复裹，形成一种具有稳定包封结构的海藻酸钠凝胶微球。
通过发酵处理得到分子量适中的铁皮石斛多糖可以更高效地与海藻酸钠相互作用，使海藻酸钠凝胶微球更牢固、更致密，相较于复配未发酵提取的铁皮石斛多糖以及不添加铁皮石斛发酵多糖而言，明显提高了微球的热稳定性和储藏稳定性，有效改善鸡胆酶转化物的浸出问题。同时对制得的海藻酸钠凝胶微球进行复裹，进一步阻止了凝胶微球中鸡胆酶转化物的溶出，提高微球的热稳定性和储藏稳定性，该多层包封结构为鸡胆酶转化物提供了良好的包埋保护，有效解决了鸡胆酶转化物苦腥味的问题，由此拓宽了鸡胆酶转化物在食品领域的应用。
2、本发明提供的制备方法中，复裹溶液的原料还可以进一步包括麦芽糊精、阿拉伯糖和果汁，麦芽糊精和阿拉伯糖起到甜味剂的作用，果汁的加入能提供果香味，进一步改善微球的食用口感和风味。优选的，果汁由芒果原浆和百香果原浆酶解得到，通过实验证明，百香果浆和芒果原浆的酶解添加比例对鸡胆酶转化物-海藻酸钠凝胶微球的气味及味道影响较大，对颜色及粘连性的感官评价无明显影响，制得的凝胶微球具有香甜的水果气味，色泽美观、无明显的粘连现象，软硬度适中，整体风味口感优良。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例1中包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备工艺流程图；
图2为本发明实验例1中铁皮石斛多糖发酵时间对凝胶微球热稳定性的影响；
图3为本发明实验例1中铁皮石斛多糖发酵时间对凝胶微球储藏稳定性的影响；
图4为本发明实验例2中铁皮石斛发酵多糖添加量对凝胶微球热稳定性的影响；
图5为本发明实验例2中铁皮石斛发酵多糖添加量对凝胶微球储藏稳定性的影响；
图6为本发明实验例2中铁皮石斛发酵多糖添加量对凝胶微球硬度的影响；
图7为本发明实验例4中复裹溶液中海藻酸钠添加量对凝胶微球硬度、复裹厚度的影响；
图8为本发明实验例4中复裹溶液中海藻酸钠添加量对凝胶微球储藏稳定性的影响；
图9为本发明实验例4中复裹溶液中海藻酸钠添加量对凝胶微球热稳定性的影响。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
原料来源
铁皮石斛：安徽省霍山县铁皮石斛；
百香果：广西壮族自治区北流市黄金百香果；
芒果：广西壮族自治区田阳县田阳香芒；
枯草芽孢杆菌BS-15：该菌株已在专利文献CN112940960A中公开，保藏编号为CGMCC No.20851。
植物乳杆菌P-8：该菌株已在专利文献CN102994422A中公开，保藏编号为CGMCCNo.6312。
鸡胆酶转化物：由中山丽高生物医药有限公司提供，采用酶解工艺将鸡胆汁中的牛磺鹅去氧胆酸转化为牛磺熊去氧胆酸。
实施例或实验例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用原料或仪器，均为可以通过市购获得的常规产品，包括但不限于本申请实施例或实验例中采用的原料或仪器。
实施例1
本实施例提供一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，工艺流程如图1所示，具体步骤如下：
(1)制备铁皮石斛发酵原液：
称量铁皮石斛粉末100g，加入蒸馏水3000g进行混合，搅拌均匀后置于恒温水浴锅中，90℃提取2h，离心得到上清液，即为铁皮石斛发酵原液；
(2)发酵铁皮石斛原液：
分别称量植物乳杆菌P-8、枯草芽孢杆菌BS-15的菌粉0.2g于200g的生理盐水中活化30min，取铁皮石斛发酵原液2000g，接入活化菌液60g后(以铁皮石斛发酵原液的质量计，接入植物乳杆菌的活菌数为1010cfu/g，接入枯草芽孢杆菌的活菌数为1010cfu/g)，置于30℃恒温培养箱中发酵72h，浓缩冻干，即得铁皮石斛发酵多糖；
(3)制备鸡胆酶转化物-海藻酸钠溶液：
称量海藻酸钠10g、β-环糊精4g、铁皮石斛发酵多糖3g，加入蒸馏水400g混合均匀，放入50℃水浴锅中水浴加热30min后，向其中加入鸡胆酶转化物10g，搅拌至完全溶解，即得鸡胆酶转化物-海藻酸钠溶液；
(4)制备海藻酸钠凝胶微球：
称量氯化钙22.2g，加入蒸馏水2000g搅拌溶解，得到氯化钙溶液，将鸡胆酶转化物-海藻酸钠溶液滴入氯化钙溶液中，以500rpm的转速磁力搅拌30min进行固化，得到鸡胆酶转化物-海藻酸钠凝胶微球；
(5)制备果汁：
百香果对半切开后，取出果肉，即得百香果原浆，取新鲜的芒果，去皮去核后，将果肉打浆即为芒果原浆，称量百香果原浆22g、芒果原浆44g，加入果胶酶和纤维素酶进行酶解(以百香果原浆和芒果原浆的总质量计，果胶酶添加量为0.6g/kg，纤维素酶添加量为0.8g/kg)，酶解温度32℃，酶解时间2.5h，对酶解后的原浆进行过滤，得到果汁；
(6)制备复裹溶液：
称量海藻酸钠8g、麦芽糊精4g和阿拉伯糖48g，加蒸馏水800g，混合均匀，放入50℃水浴锅中水浴加热30min后，向其中加入果汁64g，搅拌均匀，即得复裹溶液；
(7)制备复裹的海藻酸钠凝胶微球：
将固化好的鸡胆酶转化物-海藻酸钠凝胶微球从氯化钙溶液中滤出，分散地倒入复裹溶液中，以300rpm的转速磁力搅拌20min后，过滤，即得到复裹的鸡胆酶转化物-海藻酸钠凝胶微球。
实施例2
本实施例提供一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，具体步骤参照实施例1，不同之处仅在于，步骤(2)铁皮石斛原液发酵中，发酵时间由72h调整为24h。
实施例3
本实施例提供一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，具体步骤参照实施例1，不同之处仅在于，步骤(2)铁皮石斛原液发酵中，发酵时间由72h调整为48h。
实施例4
本实施例提供一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，具体步骤参照实施例1，不同之处仅在于，步骤(2)铁皮石斛原液发酵中，发酵时间由72h调整为96h。
实施例5
本实施例提供一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，具体步骤参照实施例1，不同之处仅在于，步骤(3)中铁皮石斛发酵多糖的添加量由3g调整为1g。
实施例6
本实施例提供一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，具体步骤参照实施例1，不同之处仅在于，步骤(3)中铁皮石斛发酵多糖的添加量由3g调整为2g。
实施例7
本实施例提供一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，具体步骤参照实施例1，不同之处仅在于，步骤(3)中铁皮石斛发酵多糖的添加量由3g调整为4g。
实施例8
本实施例提供一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，具体步骤参照实施例1，不同之处仅在于，步骤(5)中水果原浆的添加量由百香果原浆22g、芒果原浆44g调整为百香果原浆33g、芒果原浆33g。
实施例9
本实施例提供一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，具体步骤参照实施例1，不同之处仅在于，步骤(5)中水果原浆的添加量由百香果原浆22g、芒果原浆44g调整为百香果原浆44g、芒果原浆22g。
实施例10
本实施例提供一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，具体步骤参照实施例1，不同之处仅在于，步骤(5)中水果原浆的添加量由百香果原浆22g、芒果原浆44g调整为芒果原浆66g。
实施例11
本实施例提供一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，具体步骤参照实施例1，不同之处仅在于，步骤(5)中水果原浆的添加量由百香果原浆22g、芒果原浆44g调整为百香果原浆66g。
实施例12
本实施例提供一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，具体步骤参照实施例1，不同之处仅在于，步骤(6)中海藻酸钠的添加量由8g调整为4g。
实施例13
本实施例提供一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，具体步骤参照实施例1，不同之处仅在于，步骤(6)中海藻酸钠的添加量由8g调整为6g。
实施例14
本实施例提供一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，具体步骤参照实施例1，不同之处仅在于，步骤(6)中海藻酸钠的添加量由8g调整为10g。
对比例1
本对比例提供一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，具体步骤参照实施例1，不同之处仅在于，省略步骤(2)，将步骤(1)制得的铁皮石斛发酵原液浓缩冻干后获得铁皮石斛多糖，步骤(3)中采用等量的铁皮石斛多糖替代铁皮石斛发酵多糖，记为铁皮石斛原液发酵0h。
对比例2
本对比例提供一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，具体步骤参照实施例1，不同之处仅在于，步骤(3)中铁皮石斛发酵多糖的添加量由3g调整为0g。
对比例3
本对比例提供一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，具体步骤参照实施例1，不同之处仅在于，省略步骤(5)～(7)，记为复裹溶液中海藻酸钠添加量为0g。
实验例1铁皮石斛多糖发酵时间对凝胶微球稳定性的影响
本实验例旨在探究铁皮石斛多糖发酵时间对凝胶微球热稳定性和储藏稳定性的影响。实验样品为实施例1～4和对比例1制备得到的包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球。
凝胶微球热稳定的测定方法如下：将装有50mL生理盐水的烧杯，分别加热到37℃、45℃、50℃和55℃，然后分别加入10g的实验样品，保持5min，随后将烧杯置于冰水浴中冷却10min，测量生理盐水中胆汁酸的浓度。
凝胶微球储藏稳定性的测定方法如下：将重量为10g的实验样品放在含有50mL无菌生理盐水的烧杯中，4℃下储藏6d。分别在储藏0d、2d、4d和6d的时间取出，测量生理盐水中胆汁酸的浓度。
胆汁酸浓度的测定方法：将浸出的胆汁酸溶液浓缩、冷冻干燥后，称取一定量的样本加入质谱水中，涡旋混匀，为稀释样本；取样本100μL，加入混合内标溶液的300μL沉淀剂(乙腈：甲醇＝8:2)，涡旋混匀，冰上静置30min，12000rpm 4℃离心10min，取全部上清LC-MS分析。
色谱条件：色谱柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18(2.1×100mm，1.7μm)；流动相：A相：0.1％甲酸水溶液B相：乙腈；柱温：50℃；进样量：2μL；流速：0.3mL/min。
质谱条件：电喷雾电离源(ESI)，负离子电离模式。离子源温度550℃，离子源电压-4500V，气帘气35psi，雾化气和辅助气均为60psi。采用多反应监测(MRM)进行扫描。
结果如图2～3所示。
如图2所示，凝胶微球的热稳定性随温度升高而降低。实施例1～4制备的凝胶微球热稳定性均优于对比例1，当铁皮石斛多糖的发酵时间为72h时，其热稳定性最优，在各个加热温度下，其胆汁酸溶出量均为最低。
如图3所示，凝胶微球的储藏稳定性随储藏天数增加而降低。未经发酵的铁皮石斛多糖在放置6d后，胆汁酸的浸出浓度最高，为0.1949g/L，发酵时间为72h时，凝胶微球的储藏稳定性最好，在放置过程中，其胆汁酸溶出量均为最低。
铁皮石斛多糖经过发酵处理，其分子量降低，结构及组成均有所改变，通过发酵处理得到分子量适中的铁皮石斛多糖可以更高效地与海藻酸钠进行相互作用，以增强凝胶的致密程度，此外，亦有研究表明小分子生物多糖活性优于大分子多糖，酸性多糖活性强于中性多糖，可见，铁皮石斛多糖通过发酵处理不仅可以提高包埋的强度，还可以提供更高的生物活性。
实验例2铁皮石斛发酵多糖添加量对凝胶微球稳定性和硬度的影响
本实验例旨在探究铁皮石斛发酵多糖添加量对凝胶微球热稳定性、储藏稳定性、硬度的影响。实验样品为实施例1、5～7和对比例2制备得到的包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球。
凝胶微球热稳定和储藏稳定性的测定方法参照实验例1。
凝胶微球硬度的测定方法如下：使用XT Plus分析仪，配备圆筒测量探头(SMS P/36R)测量凝胶微球的硬度，以40mm/min的速度将凝胶微球压缩至其原始高度的25％。
结果如图4～6所示。
如图4和5所示，随着铁皮石斛发酵多糖的添加量增加，胆汁酸的溶出量逐渐减少，说明凝胶微球的热稳定性和储藏稳定性逐渐增强，铁皮石斛发酵多糖可有效地改善鸡胆酶转化物的浸出问题。其中，铁皮石斛发酵多糖的添加量为3g和4g时，稳定性结果近乎一致，考虑到经济效益等因素，铁皮石斛发酵多糖3g为最适添加量。
硬度反映了水凝胶珠在加工或储存过程中抵抗破裂的能力，过高的凝胶硬度导致凝胶微球容易破损，而过低的硬度则容易导致凝胶微球容易变形。如图6所示，当铁皮石斛发酵多糖的添加量为3g时，凝胶微球的硬度为40.3g，凝胶微球随着铁皮石斛发酵多糖添加量的增加，其硬度的变化不大。
实验例3百香果原浆和芒果原浆比例对凝胶微球感官品质的影响
本实验例旨在探究百香果原浆和芒果原浆比例对凝胶微球热感官品质(气味、颜色、形态、粘连性、软硬度、味道)的影响。实验样品为实施例1、8～11制备得到的包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球。
寻找15名人员组成感官评定小组，鸡胆酶转化物-凝胶微球分别从气味、颜色、形态、粘连性、软硬度、味道这六个方面进行评分，满分为100分，对于凝胶微球感官评价的评分标准如表1所示。结果取15名小组成员打分的平均分，作为最终得分。
表1凝胶微球感官评分标准
感官评价结果如表2所示。
表2凝胶微球的感官评价结果
如表2所示，百香果原浆和芒果原浆的酶解添加比例对凝胶微球的气味及味道影响较大，对颜色及粘连性的感官评价无明显影响。其中，百香果原浆和芒果原浆复配添加时的感官评分高于单一组分，百香果原浆和芒果原浆的酶解添加比例为1:2时，感官评价得分最高，为88分，制得的凝胶微球具有香甜的水果气味，色泽美观、无明显的粘连现象，软硬度适中，整体风味口感优良。
实验例4复裹溶液中海藻酸钠添加量对凝胶微球硬度、复裹厚度、稳定性的影响
本实验例旨在探究复裹溶液中海藻酸钠添加量对凝胶微球硬度、复裹厚度、热稳定性、储藏稳定性的影响。实验样品为实施例1、12～14、对比例3制备得到的包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球。
凝胶微球热稳定和储藏稳定性的测定方法参照实验例1。凝胶微球硬度的测定方法参照实验例2。
凝胶微球复裹厚度的测定方法如下：
使用游标卡尺测定凝胶微球的直径，去除微球的复裹外层，使用游标卡尺测定海藻酸钠凝胶微球的内层直径，微球外层复裹厚度用以下公式计算：
T＝(d1-d0)/2
式中，d0为海藻酸钠凝胶微球的内层直径，d1为海藻酸钠凝胶微球直径，T为微球外层复裹厚度。
结果如图7～9所示。
凝胶微球在氯化钙溶液中经过30min的固化处理后，表面粘附的钙离子可以与复裹溶液中的海藻酸钠再次结合，形成凝胶薄膜。
如图7所示，随着复裹溶液中海藻酸钠的添加量升高，复裹厚度逐渐增大，当海藻酸钠添加量超过8g时，复裹厚度的增加趋于平缓。复裹的厚度越大，对鸡胆酶转化物的包埋保护作用越好，但考虑到凝胶微球的总直径要符合生产应用及食用品质的需求，包裹的厚度不宜过大，实施例1制得的凝胶微球复裹厚度为0.52mm，为最优厚度。凝胶微球的硬度随着海藻酸钠添加量的增加而减少，硬度过小的凝胶微球容易软塌变形，其中，海藻酸钠添加量为10g时的凝胶微球硬度为38.93N，相比不添加海藻酸钠的微球硬度减少了10.35N。
如图8和9所示，随着放置时间的增加，胆汁酸的浸出浓度逐渐增加，其中，对比例3未添加海藻酸钠进行复裹，在放置过程中，胆汁酸的浸出浓度最高，包埋效果最差；当海藻酸钠的添加量超过8g(实施例1)时，凝胶微球在复裹的过程中出现黏结情况，导致二次包裹不均匀，使得其储藏稳定性有所下降，胆汁酸浸出浓度增加，因此实施例1中复裹溶液中海藻酸钠添加量为最优添加量。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取铁皮石斛粉末加水提取，离心，取上清液接入植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌进行发酵，发酵完成后取发酵液浓缩冻干，得到铁皮石斛发酵多糖；
(2)将海藻酸钠、β-环糊精、所述铁皮石斛发酵多糖加水混匀，加热，向其中加入鸡胆酶转化物，溶解，得到鸡胆酶转化物-海藻酸钠溶液；
(3)将所述鸡胆酶转化物-海藻酸钠溶液滴入氯化钙溶液中，固化，得到海藻酸钠凝胶微球；
(4)将海藻酸钠加水混匀，加热，得到复裹溶液；
(5)将所述海藻酸钠凝胶微球从所述氯化钙溶液中滤出，放入所述复裹溶液中，搅拌，过滤，得到所述包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球。
2.根据权利要求1所述的包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，
所述铁皮石斛粉末和水的质量之比为1:25～40；
提取温度为90～92℃；提取时间为2～3h；
发酵温度为25～30℃；发酵时间为24～96h；
以所述上清液的质量计，接入的所述植物乳杆菌的活菌数为108～1010cfu/g，接入的所述枯草芽孢杆菌的活菌数为108～1010cfu/g，
优选的，所述铁皮石斛粉末和水的质量之比为1:30；提取温度为90℃；提取时间为2h；发酵温度为30℃；发酵时间为72h；
以所述上清液的质量计，接入的所述植物乳杆菌的活菌数为1010cfu/g，接入的所述枯草芽孢杆菌的活菌数为1010cfu/g。
3.根据权利要求1所述的包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，
所述海藻酸钠、β-环糊精、铁皮石斛发酵多糖、水和鸡胆酶转化物的质量比为10:4:1～4:400:10，优选为10:4:3:400:10；
加热温度为50～53℃；加热时间为30～35min。
4.根据权利要求1所述的包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，
所述氯化钙溶液的质量浓度为1.11％；
所述固化在磁力搅拌下进行，转速为350～500rpm，时间为30min。
5.根据权利要求1所述的包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，
所述复裹溶液中海藻酸钠的质量浓度为0.5％～1.25％；
加热温度为50～53℃，加热时间为30～35min。
6.根据权利要求1所述的包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，
所述复裹溶液的原料还包括麦芽糊精、阿拉伯糖和果汁中的至少一种。
7.根据权利要求1所述的包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，
所述复裹溶液的原料还包括麦芽糊精、阿拉伯糖和果汁，所述海藻酸钠、麦芽糊精、阿拉伯糖、水和果汁的质量之比为4～12:4:48:800:64，优选为8:4:48:800:64。
8.根据权利要求6或7所述的包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，其特征在于，所述果汁的制备方法包括：取水果原浆添加果胶酶和纤维素酶进行酶解，对酶解后的原浆进行过滤，得到所述果汁，所述水果原浆包括百香果原浆和/或芒果原浆。
9.根据权利要求8所述的包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，其特征在于，
所述果汁的原料包括百香果原浆和芒果原浆，所述百香果原浆和芒果原浆的质量之比为1～2：1～2；
以所述水果原浆的质量计，所述果胶酶添加量为0.6～0.85g/kg，所述纤维素酶的添加量为0.6～0.8g/kg。
10.由权利要求1～9任一项所述的制备方法得到的包埋鸡胆酶转化物的海藻酸钠凝胶微球。
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