CN117202935A - 用于治疗血管炎症、动脉粥样硬化和相关病症的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及使用凝集素样氧化低密度脂蛋白受体‑1(LOX‑1)结合蛋白诸如抗LOX‑1抗体或其LOX‑1结合片段来治疗受试者的血管炎症、动脉粥样硬化和相关病症的方法。还披露了在治疗LOX‑1相关病症中使用的剂量方案。

Description

用于治疗血管炎症、动脉粥样硬化和相关病症的方法

技术领域

本发明涉及使用凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)结合蛋白诸如抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段来治疗受试者的血管炎症、动脉粥样硬化和相关病症的方法。还披露了在治疗LOX-1相关病症中使用的剂量方案。

背景技术

LOX-1是一种与许多化合物(包括但不限于氧化LDL(ox-LDL)、活化血小板、细胞因子和晚期糖基化终末产物(AGE))结合的多配体受体。LOX-1是一种50千道尔顿的凝集素样跨膜糖蛋白受体，属于E类清道夫受体。它含有短N-末端胞质结构域、连接颈部、跨膜结构域和位于细胞外C-末端的凝集素样结合结构域。LOX-1通过形成定位在质膜的脂筏中的多聚体而与配体结合并内化配体。LOX-1可以在颈部结构域中被蛋白水解裂解，从而释放出可溶性LOX-1(sLOX1)。

LOX-1是内皮动脉壁中氧化LDL(ox-LDL)的关键清道夫受体。ox-LDL是一种促进炎症的修饰的LDL颗粒，并因此被认为有助于动脉粥样硬化形成(在动脉的内膜层中形成斑块)。ox-LDL活化LOX-1会触发一系列细胞内信号传导，导致泡沫细胞形成(含有LDL的载脂巨噬细胞，有助于斑块形成)、内皮功能失调、细胞凋亡、血管SMC增殖、胶原蛋白降解、活性氧物质生成、血管炎症和血小板活化(Lu J等人,Circ Res.[循环研究]2009；104(5):619-27；Li L等人,Circ Res.[循环研究]2004；94(7):892-901；Eto H等人,Biochem BiophysRes Commun.[生物化学与生物物理研究通讯]2006；341(2):591-8)。例如，对人LOX-1受体信号传导的体外研究表明，与LOX-1结合的配体会增加ROS的产量并活化精氨酸酶(Ryoo S等人,Atherosclerosis.[动脉粥样硬化]2011；214(2):279-87)。这继而抑制内皮NO的产生，从而使内皮变得僵硬和功能失调(Pandey D等人,Circ Res.[循环研究]2014；115(4):450-9)。LOX-1通常在包括平滑肌细胞(SMC)、成纤维细胞和血小板在内的许多细胞类型中低水平表达，但其表达在包括糖尿病、高血压和血脂异常在内的病理状态下增加(Pothineni NVK等人,J Am Coll Cardiol.[美国心脏病学会杂志]2017；69(22):2759-68)。在动脉粥样硬化斑块中，LOX1在内皮细胞、平滑肌细胞和巨噬细胞上表达。其表达被认为是由促炎刺激诱导的。

动脉粥样硬化是一种复杂的疾病，其是由脂质、巨噬细胞和纤维成分在动脉壁上积聚成病变而引起的。这些病变发展成复杂的斑块，使动脉管腔变窄，并且成为慢性炎症的焦点。这些斑块容易破裂，从而触发血栓形成，导致不良心血管事件，包括卒中和心肌梗塞。动脉粥样硬化是冠状动脉疾病(也称为“冠心病”)、卒中和外周动脉疾病的主要原因。由于高血压、糖尿病、血脂异常和生活方式特征(诸如吸烟和肥胖)(这些都是冠状动脉炎症和动脉粥样硬化的危险因素)的患病率增加，动脉粥样硬化和冠状动脉炎症相关死亡率持续上升。包括以下方面的标准护理干预治疗已经具有显著的临床益处：血小板抑制剂、抗高血压药、HMG CoA还原酶抑制剂(他汀类药物)、血栓溶解剂、经皮动脉扩张、支架植入或冠状动脉旁路手术。然而，尽管使用了预防策略和治疗，但仍有大量患者遭受重大不良心血管事件(MACE)。因此，需要可以单独使用或与标准护理联合使用的新疗法和治疗方案。

先前已经描述了LOX-1结合蛋白。在WO 2016/050889中，申请人使用噬菌体展示技术来分离结合人LOX-1的人mAb片段(LOX514)。通过对人LOX-1进行选择从天然人消减单链抗体(scFv)噬菌体展示文库中分离出LOX514。随后通过对scFv可变结构域进行靶向诱变以产生先导scFv LOX5140110来优化LOX514的亲和力(描述于WO 2016/050889中，其全部披露内容通过援引并入本文)。该蛋白被证明可以抑制oxLDL结合和通过LOX-1进行的信号传导。

发明内容

尽管先前已经描述了LOX-1结合蛋白(诸如scFv LOX5140110，描述于WO 2016/050889中)，但一些临床前证据表明LOX1可促进血管功能失调、斑块进展、破裂和血栓形成、动脉粥样硬化和炎性病况。参见例如Ulrich-Merzenich等人,Expert Opin Ther Targets.[治疗靶点专家意见]17(8):905-19(2013)。例如，LOX1敲除的LDLR-/-动脉粥样硬化倾向(atherosclerosis prone)的小鼠的主动脉粥样硬化减轻并且血管壁胶原沉积减少(Mehta等人,Circ.Res.[循环研究]100:1634-1642(2007))。另一方面，在动脉粥样硬化的鼠模型中，LOX1过表达增加了动脉粥样硬化斑块的形成(Akhmedov A等人,Eur Heart J.[欧洲心脏杂志]2014；35(40):2839-48)。据报道，在患有急性冠状动脉综合征(Kume N等人.CircJ.[循环杂志]2010；74(7):1399-404；Misaka T等人,Biomed Res Int.[国际生物医学研究]2014；2014:649185)、收缩性心力衰竭(Besli F等人.Acta Cardiol.[心脏病学学报]2016；71(2):185-90)、缺血性卒中(Skarpengland T等人,J Am Heart Assoc.[美国心脏协会杂志]2018；7(2))、系统性红斑狼疮(Sagar D等人.PLoS One.[公共科学图书馆：综合]2020；15(3):e0229184)和银屑病(Dey AK等人,JAMA Dermatol.[皮肤病学纪要]2019)的人类患者中，裂解的可溶性LOX-1(sLOX-1)水平升高。然而，没有研究LOX-1抑制对动脉粥样硬化患者的影响以及适用于治疗此类患者的治疗方案。

在这项工作中，本发明人已经将scFv LOX5140110(如WO 2016/050889中所述)重新格式化为完整的IgG1λTM分子，被称为MEDI6570。MEDI6570的Fc结构域含有3个氨基酸突变(L234F、L235E、P331S)，称为TM，这些突变导致效应子功能降低。本发明人进一步在体外测试了MEDI6570对血管/冠状动脉炎症和动脉粥样硬化中涉及到的几个过程的影响，证明了MEDI6570可减少血管/冠状动脉炎症、恢复内皮功能、降低斑块不稳定性和减少动脉粥样硬化。本发明人通过临床工作进一步发现，向人类受试者施用抗LOX1结合蛋白(MEDI6570)导致富含脂质的非钙化冠状动脉斑块体积的数值减小，特别是在基线时具有可检测斑块的受试者中。

在本工作之前，对动脉粥样硬化治疗的研究主要集中在作用于与动脉粥样硬化相关的脂质水平升高。然而，本发明人惊奇地发现，动脉粥样硬化可以通过作用于血管/冠状动脉炎症(通过对促炎途径和ROS产量的抑制作用以及巨噬细胞炎症消退功能的恢复)、非钙化斑块积累(通过对泡沫细胞形成和炎症的抑制作用)和斑块稳定(通过巨噬细胞功能的恢复、MMP-9产量的抑制和由细胞凋亡引起的斑块重塑的减少)来治疗，从而也降低与这些现象相关的急性冠状动脉综合征的风险。

本发明人进一步发现，与MEDI6570抑制LOX-1相关的有益效果可以通过约每4周一次施用LOX-1以及介于50mg与500mg之间的剂量获得。

因此，在一个方面，本发明提供了一种在治疗受试者的与血管炎症、冠状动脉炎症和/或动脉粥样硬化相关的疾病的方法中使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法包括向该受试者施用LOX-1结合蛋白，并且其中该方法减小受试者的非钙化冠状动脉斑块体积和/或低衰减斑块体积。在相关方面，本发明提供了一种治疗有需要的受试者的与血管炎症、冠状动脉炎症和/或动脉粥样硬化相关的疾病的方法，其中该方法包括向该受试者施用治疗有效量的LOX-1结合蛋白的步骤，并且其中该方法减小该受试者的非钙化冠状动脉斑块体积和/或低衰减斑块体积。在相关方面，本发明提供了LOX-1结合蛋白在制备用于治疗受试者的与血管炎症、冠状动脉炎症和/或动脉粥样硬化相关的疾病的药物中的用途，其中治疗与冠状动脉炎症和/或动脉粥样硬化相关的疾病的方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白，并且其中该方法减小受试者的非钙化冠状动脉斑块体积和/或低衰减斑块体积。在相关方面，本发明提供了一种治疗有需要的受试者的心血管疾病的方法，其中该方法包括向受试者施用治疗有效量的LOX-1结合蛋白的步骤，并且其中该方法减小受试者的非钙化冠状动脉斑块体积和/或低衰减斑块体积。在相关方面，本发明提供了LOX-1结合蛋白在制备用于治疗受试者的心血管疾病的药物中的用途，其中治疗心血管疾病的方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白，并且其中该方法减小受试者的非钙化冠状动脉斑块体积和/或低衰减斑块体积。

在另一方面，本发明提供了一种在减小有需要的受试者的冠状动脉斑块体积的方法中使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法包括向受试者施用治疗有效量的LOX-1结合蛋白。在相关方面，本发明提供了一种减小有需要的受试者的冠状动脉斑块体积的方法，其中该方法包括向受试者施用治疗有效量的LOX-1结合蛋白的步骤。在相关方面，本发明提供了LOX-1结合蛋白在制备用于减小受试者的冠状动脉斑块体积的药物中的用途，其中减小冠状动脉斑块的方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白。

在另一方面，本发明提供了一种在预防有需要的受试者的心力衰竭的方法中使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法包括向受试者施用治疗有效量的LOX-1结合蛋白。在相关方面，本发明提供了一种预防有需要的受试者的心力衰竭的方法，其中该方法包括向受试者施用治疗有效量的LOX-1结合蛋白的步骤。在相关方面，本发明提供了LOX-1结合蛋白在制备用于预防受试者的心力衰竭的药物中的用途，其中预防心力衰竭的方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白。

在另一方面，本发明提供了一种在预防有需要的受试者的心肌梗塞的方法中使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法包括向受试者施用治疗有效量的LOX-1结合蛋白。在相关方面，本发明提供了一种预防有需要的受试者的心肌梗塞的方法，其中该方法包括向受试者施用治疗有效量的LOX-1结合蛋白的步骤。在相关方面，本发明提供了LOX-1结合蛋白在制备用于预防受试者的心肌梗塞的药物中的用途，其中预防心肌梗塞的方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白。

在另一方面，本发明提供了一种在减少有需要的受试者的血管和/或冠状动脉炎症的方法中使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法包括向受试者施用治疗有效量的LOX-1结合蛋白。在相关方面，本发明提供了一种减少有需要的受试者的血管和/或冠状动脉炎症的方法，其中该方法包括向受试者施用治疗有效量的LOX-1结合蛋白的步骤。在相关方面，本发明提供了LOX-1结合蛋白在制备用于减少受试者的血管和/或冠状动脉炎症的药物中的用途，其中减少血管和/或冠状动脉炎症的方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白。

在另一方面，本发明提供了一种在治疗有需要的受试者的动脉粥样硬化的方法中使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法包括向受试者施用治疗有效量的LOX-1结合蛋白，并且其中该方法减小受试者的非钙化冠状动脉斑块体积。在相关方面，本发明提供了一种治疗有需要的受试者的动脉粥样硬化的方法，其中该方法包括向受试者施用治疗有效量的LOX-1结合蛋白的步骤。在相关方面，本发明提供了LOX-1结合蛋白在制备用于治疗受试者的动脉粥样硬化的药物中的用途，其中治疗动脉粥样硬化的方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白。

在另一方面，本发明提供了一种在治疗或预防有需要的受试者的疾病的方法中使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白，其中向受试者施用LOX-1结合蛋白的步骤包括施用约30mg、约50mg、约90mg、约150mg、约250mg、约400mg或约500mg的剂量，其中该方法包括向受试者施用多个剂量的LOX-1结合蛋白，并且其中每个剂量在紧接的前一剂量后约4周向受试者施用。在相关方面，本发明提供了一种治疗或预防有需要的受试者的疾病或病况的方法，其中该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白的步骤，其中向受试者施用LOX-1结合蛋白的步骤包括施用约30mg、约50mg、约90mg、约150mg、约250mg、约400mg或约500mg的剂量，其中该方法包括向受试者施用多个剂量的LOX-1结合蛋白，并且其中每个剂量在紧接的前一剂量后约4周向受试者施用。在相关方面，本发明提供了LOX-1结合蛋白在制备用于治疗有需要的受试者的疾病或病况的药物中的用途，其中该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白，其中向受试者施用LOX-1结合蛋白的步骤包括施用约30mg、约50mg、约90mg、约150mg、约250mg、约400mg或约500mg的剂量，其中该方法包括向受试者施用多个剂量的LOX-1结合蛋白，并且其中每个剂量在紧接的前一剂量后约4周向受试者施用。疾病或病况可以是与血清LOX-1升高相关的疾病或病况。因此，疾病或病况也可与膜结合LOX-1升高相关。该方法可减小受试者的非钙化冠状动脉斑块体积和/或低衰减斑块体积。疾病可以是与血管炎症、冠状动脉炎症和/或动脉粥样硬化相关的疾病。疾病可以是心力衰竭。治疗或预防疾病的方法可以是减小有需要的受试者的冠状动脉斑块体积的方法。治疗或预防疾病的方法可以是减少有需要的受试者的血管和/或冠状动脉炎症的方法。治疗或预防疾病的方法可以是治疗有需要的受试者的动脉粥样硬化的方法。

在另一方面，本发明提供了一种治疗有需要的受试者的LOX-1介导的疾病或病症的方法，该方法包括以下步骤：如果受试者具有可通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影检测到的非钙化冠状动脉斑块，则向受试者施用治疗有效量的LOX-1结合蛋白。该方法可进一步包括对受试者进行冠状动脉计算机断层摄影血管造影，并且如果受试者具有可检测到的非钙化冠状动脉斑块，则选择受试者用LOX-1结合蛋白进行治疗。

本发明的任何方面的任何实施例可具有以下特征中的任何一个或多个。

LOX-1结合蛋白可以是抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段。抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段可包含：包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链互补决定区1(HCDR1)；包含SEQ IDNO:2的氨基酸序列的重链互补决定区2(HCDR2)；包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链互补决定区3(HCDR3)；包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链互补决定区1(LCDR1)；包含SEQID NO:5的氨基酸序列的轻链互补决定区2(LCDR2)；和/或包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的轻链互补决定区3(LCDR3)。抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段可包含与SEQ ID NO:8的重链可变区序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段可包含与SEQ IDNO:10的轻链可变区序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段可包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或SEQ ID NO:10的氨基酸序列。抗LOX-1抗体可包含轻链免疫球蛋白恒定结构域，该恒定结构域是人Igλ恒定结构域。抗LOX-1抗体可包含人IgG1重链恒定结构域。IgG1恒定Fc区结构域可在位置234、235和331处含有突变，其中位置编号根据Kabat中的EU索引。IgG1 Fc结构域可含有突变L234F、L235E和P331S，其中位置编号根据Kabat中的EU索引。抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段可包含与SEQ ID NO:11的重链恒定结构域序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段可包含与SEQ ID NO:12的轻链恒定结构域序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段可包含SEQ IDNO:11的氨基酸序列和/或SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在具体的实施例中，抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段可包含与SEQ ID NO:13的全长重链序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段可包含与SEQ ID NO:14的全长轻链序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段可包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或SEQ ID NO:14的氨基酸序列。

该方法可包括向受试者施用多个剂量的LOX-1结合蛋白，其中每个剂量在紧接的前一剂量后约4周向受试者施用。向受试者施用LOX-1结合蛋白的步骤可包括施用：约30mg、约50mg、约90mg、约150mg、约250mg、约400mg或约500mg的剂量。向受试者施用LOX-1结合蛋白的步骤可包括施用：约30至约500mg LOX-1结合蛋白、约50至约500mg LOX-1结合蛋白、约90至约500mg LOX-1结合蛋白、约50mg至约400mg、约150至约400mg或约250至约400mg LOX-1结合蛋白的剂量。向受试者施用LOX-1结合蛋白的步骤可包括施用约30mg、约50mg、约90mg、约250mg、约400mg或约500mg的剂量。每个剂量可以是约90mg、约150mg、约250mg或约400mg的剂量。每个剂量可以是约150mg或至少150mg的剂量。每个剂量可以是约400mg的剂量。每个剂量可以是约250mg的剂量。该方法可包括以下步骤：向受试者施用多个剂量的LOX-1结合蛋白，其中每个剂量在紧接的前一剂量后约4周向受试者施用，其中每个剂量为约50mg、约90mg、约150mg、约250mg或约400mg的剂量，任选地约150mg、约250mg或约400mg的剂量。每个剂量可皮下施用。

该方法可减小受试者的非钙化冠状动脉斑块体积、低衰减冠状动脉斑块体积和/或％动脉粥样化。该方法可减小受试者病变最严重的冠状动脉节段中的非钙化冠状动脉斑块体积、低衰减冠状动脉斑块体积和/或％动脉粥样化。该方法可减小受试者的整体非钙化冠状动脉斑块体积、整体低衰减冠状动脉斑块体积和/或整体％动脉粥样化。该方法可使受试者病变最严重的冠状动脉节段中的非钙化冠状动脉斑块体积或受试者的整体非钙化冠状动脉斑块体积减小至少1mm³、至少2mm³、至少3mm³、至少4mm³、至少5mm³、至少6mm³、至少7mm³、至少8mm³、至少9mm³或至少10mm³。该方法可使受试者病变最严重的冠状动脉节段中的非钙化冠状动脉斑块体积或受试者的整体非钙化冠状动脉斑块体积减小至少10mm³。非钙化冠状动脉斑块体积和/或低衰减斑块体积和/或％动脉粥样化的减小可通过比较基线时和治疗约12周后、治疗约16周后、治疗约17周后、开始治疗后约121天、治疗约32周后、治疗约36周后或开始治疗后约252天的非钙化冠状动脉斑块体积和/或低衰减斑块体积和/或％动脉粥样化来评估。非钙化冠状动脉斑块体积、低衰减斑块体积和/或％动脉粥样化的减小可相对于基线时病变最严重的冠状动脉节段来评估。该方法可减小受试者的血管周围脂肪衰减指数，如通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影所评估。该方法可增加受试者的冠状动脉管腔体积和/或动脉血流储备，如通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影所评估。该方法可引起左心室射血分数(LVEF)、受试者的整体纵向应变(GLS)、舒张末期容积指数、收缩期末容积指数、受试者的左心房容积指数和/或E/e’比(二尖瓣充盈早期速度/二尖瓣环舒张早期速度)中的一者或多者的变化，如通过超声心动图所评估。LVEF的变化可以是增加。E/e'比的变化可以是减小。GLS的变化可以是增加。左心房指数的变化可能是减小。舒张末期容积指数和/或收缩末期容积指数的变化可以是减小。

在施用LOX-1结合蛋白之前，受试者可能具有可通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影检测到的非钙化斑块。该方法可包括通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影测量受试者的非钙化冠状动脉斑块体积，并且如果受试者具有可检测到的非钙化冠状动脉斑块，则选择受试者用LOX-1结合蛋白进行治疗。在施用LOX-1结合蛋白之前，受试者可能已经经历心肌梗塞。与健康受试者相比，受试者可能具有与血清可溶性LOX-1水平升高相关的病况。受试者可能患有糖尿病。受试者可能患有2型糖尿病。受试者可能患有心血管疾病或有发生心血管疾病的风险。心血管疾病可与血管炎症、冠状动脉炎症和/或动脉粥样硬化相关。受试者可能患有选自以下项的疾病或有发生这些疾病的风险：急性冠状动脉综合征(ACS)、心肌梗塞(MI)、卒中、冠状动脉疾病(CAD)、颈动脉疾病、外周动脉疾病、动脉粥样硬化相关的动脉瘤、血管功能失调、再狭窄、再灌注损伤、缺血、微血管疾病和心肌缺血。受试者可能患有心力衰竭或有发生心力衰竭的风险。

附图说明

图1.人全血上清液中的游离(A)和总(B)sLOX-1。oxLDL＝氧化低密度脂蛋白；sLOX-1＝可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1。将人全血用MEDI6570、同种型抗体或媒介物对照预处理30分钟，然后用oxLDL刺激24小时。条表示平均值+/-SEM。每组N＝5。

图2.食蟹猴全血上清液中的游离(A)和总(B)sLOX-1。ANOVA＝方差分析；oxLDL＝氧化低密度脂蛋白；sLOX-1＝可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1。将食蟹猴全血用MEDI6570、同种型对照抗体或媒介物对照预处理30分钟，然后用oxLDL刺激24小时。条表示平均值+/-SEM。每组N＝5。

图3.MEDI6570抑制配体结合。AGE-BSA＝晚期糖基化终末产物-牛血清白蛋白；CRP＝c反应蛋白；IgG＝免疫球蛋白G；oxLDL＝氧化低密度脂蛋白。在384孔稀释板中将抗体在测定缓冲液(PBS/0.1％BSA/0.01％吐温20)中滴定超过24个点，一式两份。

图4.MEDI6570抑制人PBMC中的细胞因子释放。ELISA＝酶联免疫吸附测定；IL＝白介素；oxLDL/ox-LDL＝氧化低密度脂蛋白；PBMC＝外周血单核细胞；TNFa＝肿瘤坏死因子α。在存在和不存在50μg/mL MEDI6570的情况下，将来自5名健康参与者的PBMC与30μg/mLoxLDL在37℃下孵育1小时。24小时后收集上清液，并使用ELISA Meso Scale Discovery平台进行促炎细胞因子测量。图示的符号表示平均值+/-SEM，每组N＝6。

图5.人M1巨噬细胞中摄取的oxLDL(A)和oxVLDL(B)。Ab＝抗体；ANOVA＝方差分析；hr＝小时；oxLDL＝氧化低密度脂蛋白；PBMC＝外周血单核细胞；RCU＝总红色对象积分强度。图示的符号表示平均值+/-SEM。每组N＝3。MEDI6570抑制单核细胞衍生的人巨噬细胞摄取的oxLDL(A)和oxVLDL(B)。分离原代PBMC衍生的CD14+单核细胞，并使其分化成巨噬细胞，然后极化成M1表型。标记的oxLDL(A)和oxVLDL(B)的摄取被量化为15hr内细胞层内红色荧光强度的增加。MEDI6570预处理导致oxLDL和oxVLDL的摄取减少。点和条表示平均值±SEM；N＝6个独立供体；**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001(双向ANOVA)。

图6.通过油红O染液在人M1巨噬细胞中测量的泡沫细胞百分比。单向ANOVA Tukey多重比较检验。***p<0.0001，**p<0.005。ANOVA＝方差分析；oxLDL＝氧化低密度脂蛋白。条表示平均值+/-SEM，n＝5。

图7.评估M1巨噬细胞的胞葬作用的总积分强度。单向ANOVA Tukey多重比较检验；****p<0.0001，p<0.05，n＝3。ANOVA＝方差分析；oxLDL＝氧化低密度脂蛋白；RCU＝总红色对象积分强度。条表示平均值+/-SEM。每组N＝3。

图8.响应于oxLDL(A)或LDL(B)暴露的MMP-9产生。ACS＝急性冠状动脉综合征；ANOVA＝方差分析；LDL＝低密度脂蛋白；MMP-9/MMP9＝基质金属蛋白酶9；NS＝无统计学显著性；oxLDL＝氧化低密度脂蛋白；RDU＝总红色对象积分强度。用MEDI6570、同种型对照抗体或媒介物对照预处理巨噬细胞30分钟，然后在无血清培养基中暴露于从患有ACS的参与者的血清分离的oxLDL(A)或LDL(B)4小时。通过酶谱分析条件培养基的MMP-9活性。(A)：条表示平均值+/-SEM。每组N＝3。(B)点表示各个值，用相应的平均值+/-SEM示出。N＝16个ACS供体。

图9.响应于来自健康/ACS供体的HDL的人巨噬细胞中的ATF3核定位。ATF3＝活化转录因子3；HDL＝ATF3核信号的高密度脂蛋白定量。条表示平均值+/-SEM，N＝5个健康供体；N＝9个ACS供体。

图10.原代人巨噬细胞中的活性氧物质(ROS)。AGE＝晚期糖基化终末产物；ISO＝同种型对照；ox-HDL＝氧化高密度脂蛋白胆固醇；ox-LDL＝氧化低密度脂蛋白；oxVLDL＝氧化极低密度脂蛋白。用MEDI6570或同种型抗体预处理巨噬细胞30分钟，然后暴露于ox-LDL、ox-VLDL、ox-HDL或AGE 5小时。在ThermoFisher CX7上用荧光ROS感测染料CellROX green测量和量化活性氧物质。绘制的符号表示平均值+/-SEM。N＝3-5个供体。

图11.原代人巨噬细胞中的半胱天冬酶3/7活性(A)和组织蛋白酶L表达(B)。ox-LDL＝氧化低密度脂蛋白。用MEDI6570或同种型抗体预处理巨噬细胞30分钟，然后暴露于ox-LDL 16小时。在发光测定中通过半胱天冬酶3/7活性测量细胞凋亡。绘制的符号表示各个值，用相应的平均值+/-SEM示出。N＝5个供体。*p<0.05；单向ANOVA Sidak事后分析。(B)原代人单核细胞衍生的巨噬细胞中的组织蛋白酶L表达。在暴露于oxLDL 4h后测量组织蛋白酶L。N＝8个供体。单向ANOVA Dunnett事后检验*p<0.05；**p<0.01，单向ANOVA Sidak事后分析。

图12.1期SAD/MAD研究设计。X＝90，Y＝150，Z＝250。A部分-安慰剂-6:2随机化。B部分-安慰剂-10:3和10:4随机化。

图13.随时间的sLOX-1-1期SAD研究48名T2D受试者，6个队列，5个剂量水平，6:2随机化。LLQ＝定量水平。上图：随时间的游离sLOX-1。下图：随时间的sLOX-1相对于基线百分比变化。

图14.随时间的sLOX-1-1期MAD研究40名T2D受试者，3个队列，3个剂量水平，1:1:1:1随机化，第1天、第29天和第57天给药。LLQ＝定量水平。上图：随时间的游离sLOX-1。下图：随时间的sLOX-1相对于基线百分比变化。

图15.MAD队列中非钙化斑块体积(NCPV)的变化(A：所有受试者，B：在基线时具有可量化斑块的受试者，C：根据患者数据，D：病变最严重的节段)。A.所有受试者-仅包括进行了基线和随访CTA的受试者：安慰剂(n＝10)平均变化值＝3.30，90mg(n＝9)平均变化值＝-13.75，150mg(n＝9)平均变化值＝-11.69，250mg(n＝9)平均变化值＝-1.12，所有治疗组(n＝27)平均变化值＝-8.85。B.具有斑块的受试者-安慰剂(n＝5)平均变化值＝6.60，90mg(n＝4)平均变化值＝-30.9，150mg(n＝6)平均变化值＝-17.53，250mg(n＝5)平均变化值＝-2.02，所有治疗组(n＝15)平均变化值＝-15.93。C.根据患者变化。D.每名患者的病变最严重的冠状动脉节段的NCPV变化。所有治疗组中相对于基线的绝对平均变化为-13.42％，90mg队列中为-27.68％，150mg队列中为-17.32％，250mg队列中增加2.66％。这可能与该队列中的低基线斑块水平有关-参见C(几乎没有消退空间)。

图16.MAD队列中低衰减非钙化斑块体积的变化(A：所有受试者，B：在基线时具有可量化斑块的受试者)。A.所有受试者-仅包括进行了基线和随访CTA的受试者：安慰剂(n＝10)平均变化值＝1.03，90mg(n＝9)平均变化值＝-3.30，150mg(n＝9)平均变化值＝-3.73，250mg(n＝9)平均变化值＝-3.19，所有治疗组(n＝27)平均变化值＝-3.41。B.具有斑块的受试者-安慰剂(n＝5)平均变化值＝2.06，90mg(n＝4)平均变化值＝-7.42，150mg(n＝6)平均变化值＝-5.60，250mg(n＝5)平均变化值＝-5.74，所有治疗组(n＝15)平均变化值＝-6.13。

图17.MAD队列中百分比动脉粥样化体积的变化(A：所有受试者，B：在基线时具有可量化斑块的受试者)。A.所有受试者-仅包括进行了基线和随访CTA的受试者：安慰剂(n＝10)平均变化值＝1.40，90mg(n＝9)平均变化值＝-1.59，150mg(n＝9)平均变化值＝-2.17，250mg(n＝9)平均变化值＝1.03，所有治疗组(n＝27)平均变化值＝-0.91。B.具有斑块的受试者-安慰剂(n＝5)平均变化值＝2.79，90mg(n＝4)平均变化值＝-3.59，150mg(n＝6)平均变化值＝-3.26，250mg(n＝5)平均变化值＝1.86，所有治疗组(n＝15)平均变化值＝-1.64。

图18.MAD队列中总斑块体积的变化(A：所有受试者，B：在基线时具有可量化斑块的受试者)。A.所有受试者-仅包括进行了基线和随访CTA的受试者：安慰剂(n＝10)平均变化值＝3.60，90mg(n＝9)平均变化值＝-14.00，150mg(n＝9)平均变化值＝-16.50，250mg(n＝9)平均变化值＝-1.37，所有治疗组(n＝27)平均变化值＝-10.62。B.具有斑块的受试者-安慰剂(n＝5)平均变化值＝7.20，90mg(n＝4)平均变化值＝-31.50，150mg(n＝6)平均变化值＝-24.75，250mg(n＝5)平均变化值＝-2.46，所有治疗组(n＝15)平均变化值＝-19.12。

图19.IIb期研究设计。将开展随机(1:1:1:1)、双盲、安慰剂对照、平行组研究以评价MEDI6570在具有既往心肌梗塞、持续性炎症和N-末端激素原脑钠肽升高的参与者中的功效和安全性。在随机化前不超过42天进行筛选。基线成像发生在筛选访视后且在随机化前不超过21天。BNP＝脑钠肽，CTA＝计算机断层摄影血管造影，echo＝超声心动图，EOS＝研究结束，hs-CRP＝高敏C反应蛋白，NT-proBNP＝N-末端激素原脑钠肽，Q4W＝每4周，SC＝皮下。

图20.将CD68+M1巨噬细胞暴露于oxLDL 24h，并通过流式细胞术测量Tyro3、MerTK和Axl酪氨酸激酶受体的表面表达。在有和没有oxLDL刺激的情况下Lox-1+细胞上TAM的平均荧光强度(MFI)(n＝3个供体)(A)。在有和没有oxLDL刺激的情况下，检查CD68+/Lox-1+和CD68+/Lox-1细胞上的AXL表面表达(n＝3个供体)。在细胞培养物上清液中测量可溶性AXL(sAXL)(C)。数据显示为平均值±s.e.m。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。

具体实施方式

本发明涉及使用LOX-1结合蛋白(例如，抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段)来治疗受试者的LOX-1相关疾病诸如血管炎症(包括但不限于冠状动脉炎症)和动脉粥样硬化的方法。

定义

在本说明书和所附权利要求中，除非上下文另外明确说明，否则单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指示物。术语“一个”(或“一种”)以及术语“一个或多个”和“至少一个”在本文可以互换使用。

此外，“和/或”在本文使用时被认为是两个所指定的特征或组分中每一者与或不与另一者一起的具体披露。因此，如在本文中的短语如“A和/或B”中所用的术语“和/或”旨在包括“A和B”、“A或B”、“A”(单独)和“B”(单独)。同样，术语“和/或”如在词组如“A、B和/或C”中使用时是旨在涵盖以下方面中的每一者：A、B、和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。

在本文中用语言“包含”描述各方面的任何地方，还提供了关于“由……组成”和/或“基本上由……组成”描述的其他类似方面。

在说明书和随附权利要求书通篇中与数值结合使用的术语“约”表示本领域技术人员熟知并可接受的精确度的区间。一般，这种精确度的区间是±15％。

除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有如本披露所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。例如，Concise Dictionary of Biomedicine andMolecular Biology[简明生物医学和分子生物学词典],Juo,Pei-Show,第2版,2002,CRC出版社(CRC Press)；Dictionary of Cell and Molecular Biology[细胞和分子生物学词典],第3版,1999,学术出版社(Academic Press)；以及Oxford Dictionary OfBiochemistry And Molecular Biology[生物化学和分子生物学牛津词典],修订版,2000,牛津大学出版社(Oxford University Press)为技术人员提供了在本披露中使用的许多术语的通用词典注释。

单位、前缀和符号以它们的国际单位系统(SI)接受形式表示。数值范围包括限定该范围的数字。除非另外说明，否则氨基酸序列是以氨基至羧基取向从左向右书写。氨基酸在本文中通过其通常已知的三字母符号或通过IUPAC-IUB生物化学命名委员会推荐的单字母符号来指代。核苷酸通过其普遍公认的单字母代码来表示。本文提供的小标题不是本披露的不同方面或各方面的限制，可以通过作为一个整体参考本说明书来获得这些方面。因此，通过以其全文参考说明书，更充分地定义了紧接着在下文中定义的术语。

本说明书描述了LOX-1结合蛋白及其用途。LOX-1结合蛋白是特异性结合并中和人LOX-1的蛋白。LOX-1结合蛋白可以是抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段。因此，还描述了与LOX-1结合的抗LOX-1抗体、其抗体片段、变体或衍生物的用途。

抗体或其片段、变体或衍生物被认为竞争性地抑制参考抗体或抗原结合片段与给定表位的结合，如果它优先结合至该表位至它在某种程度上阻断参考抗体或抗原结合片段与该表位的结合的程度的话。竞争性地抑制可以通过在本领域中已知的任何方法、例如竞争ELISA测定来确定。结合分子可被认为是竞争性地抑制参考抗体或抗原结合片段与给定表位的结合达至少90％、至少80％、至少70％、至少60％、或至少50％。例如，LOX-1结合蛋白可以是竞争性抑制如本文所述的抗LOX-1抗体或抗体片段与LOX-1结合的抗体、其片段、变体或衍生物。

本文披露的抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物可以根据抗原的表位或部分(例如，它们识别或特异性结合的靶多糖)来描述或指定。例如，人LOX-1的与抗LOX-1抗体的抗原结合结构域特异性相互作用的部分是“表位”。具体地，本文所用的术语“表位”是指能够与本披露的LOX l结合蛋白(例如，抗体)结合的LOX l(例如，人LOX l(hLOX l)或猴LOX l(例如，食蟹猴(M.cynomolgus/M.fascicularis)))蛋白决定簇。

“结合亲和力”通常是指分子(例如，抗体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另有说明，否则如本文所用，“结合亲和力”是指反映结合对的成员(例如，抗体与抗原)之间的1:1相互作用的固有结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以用解离常数(Kd)表示。亲和力可以通过本领域已知的通常方法测量，包括本文所述的那些方法。测量结合亲和力的多种方法是本领域已知的，其中任何一种都可以用于本披露的目的。

除非另有说明，否则“效力”通常表示为IC50值，单位为nM或pM。IC50是抗体分子的半数抑制浓度。在功能测定中，IC50是将生物响应降低其最大值的50％的浓度。在配体结合研究中，IC50是减少受体结合达最大特异性结合水平的50％的浓度。IC50可以通过本领域已知的手段来计算。

抗体的“可变区”指单独的抗体轻链的可变区或抗体重链的可变区或它们的组合。重链和轻链的这些可变区各自由通过三个互补决定区(CDR)(又称为高变区)连接的四个构架区(FW)组成。每条链中的CDR由FW区紧密靠近地保持在一起，并且与来自另一条链的CDR促成了抗体的抗原结合位点的形成。当提及可变结构域中的残基(大约轻链的残基1-107和重链的残基1-113)时，通常使用Kabat编号系统(例如，Kabat等人,SequencesofImmunological Interest[免疫学感兴趣的序列],第5版,Public Health Service[美国公共卫生服务部],National Institutes of Health[美国国立卫生研究院],贝塞斯达,马里兰州(1991)，其通过援引并入本文)。Kabat中的氨基酸位置编号是指在Kabat等人,Sequences of Immunological Interest[免疫学感兴趣的蛋白序列],第5版PublicHealth Service[美国公共卫生服务部],National Institutes of Health[美国国立卫生研究院],贝塞斯达,马里兰州(1991)中用于汇编抗体的重链可变结构域或轻链可变结构域的编号系统。使用这个编号系统，实际的线性氨基酸序列可以含有更少或另外的氨基酸，其对应于可变结构域的FW或CDR的截短或插入。例如，重链可变结构域可以包括在H2的残基52之后的单个氨基酸插入(根据Kabat的残基52a)以及在重链FW残基82之后的插入的残基(例如，根据Kabat的残基82a、82b和82c等)。可以通过在抗体序列与“标准”Kabat编号序列的同源性区域进行比对来确定给定抗体的残基的Kabat编号。如本说明书通篇所用，所描述的VHCDR序列对应于经典的Kabat编号位置，即Kabat VH-CDR l在位置31-35处，VH-CDR2在位置50-65处，并且VH-CDR3在位置95-102处。VL-CDR l、VL-CDR2和VL-CDR3也对应于经典的Kabat编号位置，即分别对应于位置24-34、50-56和89-97。

术语“TM”或“TM突变体”是指IgG1恒定区中的突变，该突变导致具有该突变的抗体的效应子功能(例如，ADCC)下降。TM突变体包含三种突变L234F/L235E/P331S的组合，其导致效应子无效的人IgG 1(EU编号，Kabat等人.(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest[免疫学上感兴趣的蛋白序列],U.S.Public Health Service[公共卫生服务],National Institutes of Health[美国国立卫生研究院],华盛顿特区)引入IgG1的重链中。

如本文所用的“治疗有效”量是向患有LOX-1相关疾病的受试者提供一些改善或益处的治疗剂的量。因此，“治疗有效”量是提供LOX-1相关疾病的至少一种临床症状的一些减轻、缓解和/或减少的量。此外，本领域技术人员将理解治疗效果不需要是完全的或治愈性的，只要向受试者提供一些益处即可。在一些方面，术语“治疗有效”是指能够降低有需要的患者的LOX-1活性和/或表达的治疗剂的量。

如本文所用，“足够量”或“足以”在患有LOX-1介导的疾病或病症的患者中获得具体结果的量是指有效产生希望的效果的治疗剂(例如，抗体，诸如MEDI6570)的量，该希望的效果任选地为治疗效果(即，通过施用治疗有效量)。在一些方面，这种具体结果是降低有需要的患者的LOX-1活性和/或表达。

如本文所用，术语“计算机断层摄影”或“CT”是指使用扫描的器官、组织或对象的特定区域的断层摄影图像(虚拟“切片”)的成像方法。使用数字几何处理由围绕单个转动轴拍摄的一系列二维(2D)放射摄影图像生成对象或器官内部的三维(3D)图像。如本文所用，术语“计算机断层摄影扫描”或“CT扫描”是指使用包括但不限于x射线的任何合适方法获得的断层摄影图像的产生。合适地，CT是计算机断层摄影血管造影(CTA)。

术语“LOX1”、“LOX-1”和“凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1”在本文可互换使用，是指LOX-1和/或其生物活性片段。人LOX-1的三种已知同种型的蛋白序列可分别以Uniprot标识符P78380-1、P78380-2和P78380-3以及RefSeq标识符NP_002534.1、NP_001166103.1和NP_001166104.1获得。对应的mRNA序列可以RefSeq标识符NM_002543.3、NM_001172632.1和NM_001172633.1获得。这些序列中的每一个通过援引整体并入本文。

在两个或更多个核酸或蛋白的语境中，术语“相同”或序列百分比“一致性”是指两个或更多个在比较和比对(如有必要，引入缺口)以获得最大对应性(不考虑任何保守氨基酸取代作为序列一致性的一部分)时相同或具有指定百分比的相同核苷酸或氨基酸残基的序列或子序列。百分比同一性可以使用序列比较软件或算法或者通过目测测量。本领域中已知有各种可以用于获得氨基酸或核苷酸序列的比对的算法和软件。

术语“抑制”、“阻断”、“降低”和“压制”在本文可互换使用，是指生物活性的任何统计学显著降低，包括活性的完全阻断。例如，“抑制”可以指LOX l生物活性降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。

本文中关于治疗疾病、病症或病况的方法的任何披露内容应解释为还指在这种方法中使用的LOX-1结合蛋白，以及LOX-1结合蛋白在制备用于治疗疾病、病症或病况的药物中的用途。

LOX-1相关疾病

LOX-1相关疾病是与LOX-1蛋白的水平和/或活性升高相关的疾病。因此，本披露涉及治疗受试者的与LOX-1上调相关的疾病的方法。这些疾病包括血管炎症、冠状动脉炎症、动脉粥样硬化和相关病症，诸如心力衰竭(HF)、急性冠状动脉综合征(ACS)、心肌梗塞(MI)、卒中、再灌注损伤、再狭窄、冠状动脉疾病(CAD)、颈动脉疾病、外周动脉疾病、动脉粥样硬化相关的动脉瘤、血管功能失调、微血管疾病、缺血(例如，心肌缺血)和微血管疾病(也称为“微血管冠状动脉疾病”(MCD)或“冠状动脉微血管疾病”(MVD)、“小动脉疾病”或“小血管疾病”)-一起称为“心血管疾病”(CVD)。因此，本文还描述了一种治疗受试者的心血管疾病的方法，其中该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白。心血管疾病合适地是与血管炎症、冠状动脉炎症和/或动脉粥样硬化相关的疾病。

动脉粥样硬化是动脉壁发生病变的病况，由于动脉粥样化斑块(本文也称为“斑块”)的积聚，这些病变可能导致动脉变窄。动脉粥样化斑块是巨噬细胞、碎片脂质、钙(就钙化斑块而言)和纤维结缔组织在动脉壁内层的异常累积。本发明人已经证明，如本文所述的LOX-1结合蛋白对LOX-1的抑制可以使得非钙化斑块体积和动脉粥样化百分比减小，以及血管腔体积和动脉中的血流储备(包括例如血流储备分数和冠状动脉血流储备)增加。因此，本文提供了治疗、预防和/或改善动脉粥样硬化或与动脉粥样硬化相关的病况的方法，该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白。在实施例中，受试者患有动脉粥样硬化或有发生动脉粥样硬化的风险。

血管炎症是一种在一个或多个血管中发生异常水平的炎症的病况。冠状动脉炎症是一种在围绕和供应心脏的动脉中发生异常水平的炎症的病况。本发明人已经证明，如本文所述的LOX-1结合蛋白对LOX-1的抑制可以使得表达LOX-1的血细胞(诸如巨噬细胞)中炎性途径(例如，细胞因子的分泌、NFkB途径的活化等)受到抑制，以及促进巨噬细胞对炎症的消退的功能得到恢复(例如，泡沫细胞转化受到抑制、胞葬作用得到恢复)。因此，本文还提供了治疗、预防和/或改善血管炎症、特别是冠状动脉炎症或与冠状动脉炎症相关的病况的方法，该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白。在实施例中，受试者患有血管炎症或有发生血管炎症的风险。在实施例中，受试者患有冠状动脉炎症或有发生冠状动脉炎症的风险。

缺血是一种组织供血受限从而导致组织供氧不足的病况。心肌缺血是指影响心肌的缺血。动脉粥样硬化是缺血的主要原因，其通过限制血管中的流动和发生血栓形成而发生，血栓形成可发生在动脉粥样硬化斑块周围或斑块破裂时。本发明人已经证明，如本文所述的LOX-1结合蛋白对LOX-1的抑制可以使得非钙化斑块体积和动脉粥样化百分比减小，血管腔体积和动脉中的血流储备(包括例如血流储备分数和冠状动脉血流储备)增加，以及斑块稳定(即，通过抑制泡沫细胞转化、恢复胞葬作用、减少重塑和/或抑制MMP-9表达来降低斑块破裂的风险)。因此，本文提供了治疗、预防和/或改善缺血或与缺血相关的病况的方法，该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白。在实施例中，受试者患有心肌缺血或有发生心肌缺血的风险。

梗塞是指一种与一种或多种组织中由于供血不足(即长期缺血)引起的坏死病变相关的病况。动脉粥样硬化是梗塞的主要原因，其通过限制血管中的流动和发生血栓形成而发生，血栓形成可发生在动脉粥样硬化斑块周围或斑块破裂时。本发明人已经证明，如本文所述的LOX-1结合蛋白对LOX-1的抑制可以使得非钙化斑块体积和动脉粥样化百分比减小，血管腔体积和动脉中的血流储备(包括例如血流储备分数和冠状动脉血流储备)增加，以及斑块稳定(即，通过抑制泡沫细胞转化、恢复胞葬作用、减少重塑和/或抑制MMP-9表达来降低斑块破裂的风险)。因此，本文提供了治疗、预防和/或改善梗塞或与梗塞相关的病况的方法，该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白。在实施例中，受试者患有心肌梗塞或有发生心肌梗塞的风险。除非另有说明，否则术语“心肌梗塞”包括非ST段抬高型心肌梗塞(NSTEMI)和ST段抬高型心肌梗塞(STEMI)。ST段抬高是在12导联心电图(ECG)上检测到的异常，被认为与冠状动脉血流完全和持续阻塞相关。因此，STEMI通常通过结合胸痛和特定ECG追踪来诊断。NSTEMI是指没有ST段抬高ECG迹线的心肌梗塞。NSTEMI可能与心脏供血的部分(而不是完全)阻塞相关。

急性冠状动脉综合征(ACS)是指与流向心脏的血流量突然减少相关的一系列病况。该术语包括诸如不稳定型心绞痛和伴有或不伴有ST段抬高的心肌梗塞等病况。心绞痛是一种与流向心脏的血流量减少引起的胸痛相关的病况。不稳定型心绞痛的特征是在没有心肌损伤的生化证据的情况下流向心脏的血流量减少，其与以下临床表现相关：包括休息时心绞痛延长(>20分钟)、新发作严重心绞痛、心绞痛频率增加、持续时间更长或阈值更低，或者心绞痛在心肌梗塞的近期发作后发生。冠状动脉疾病是不稳定型心绞痛的最常见原因，其本身通常由动脉粥样硬化引起。因此，本文提供了治疗、预防和/或改善ACS或与ACS相关的病况的方法，该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白。在实施例中，受试者患有ACS或有发生ACS的风险。

卒中是一种流向大脑的血流受损导致坏死病变的病况。缺血性卒中是指与血流减少相关的卒中。缺血性卒中是最常见的卒中类型，发生在通过供应大脑的动脉的血流减少或阻塞时。缺血性卒中最常由血栓形成引起，血栓形成通常与动脉粥样硬化相关。因此，本文提供了治疗、预防和/或改善卒中或与卒中相关的病况的方法，该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白。在实施例中，受试者患有卒中或有发生卒中的风险。在实施例中，卒中是缺血性卒中。

再灌注损伤(或“缺血-再灌注损伤”)是指在缺血一段时间后供血恢复到组织时引起的组织损伤(加剧细胞功能失调和死亡)。如上所述，本发明人已经证明，如本文所述的LOX-1结合蛋白对LOX-1的抑制可以使得缺血的风险和/或严重程度降低，从而也降低了再灌注损伤的风险和/或严重程度。因此，本文提供了治疗、预防和/或改善再灌注损伤或与再灌注损伤相关的病况的方法，该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白。在实施例中，受试者患有再灌注损伤或有发生再灌注损伤的风险。

再狭窄是指在先前治疗以解决变窄之后狭窄的复发、血管诸如动脉的变窄。本发明人已经证明，如本文所述的LOX-1结合蛋白对LOX-1的抑制可以预防和/或减少斑块的累积和/或其破裂，从而改善血流。因此，本文提供了治疗、预防和/或改善再狭窄或与再狭窄相关的病况的方法，该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白。

冠状动脉疾病(CAD)是冠状动脉阻塞的变窄。CAD最常由动脉粥样硬化引起。因此，本文提供了治疗、预防和/或改善CAD或与CAD相关的病况的方法，该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白。

微血管冠状动脉疾病(MCD)是冠状动脉分支的小血管(例如，太小而不能用常规冠状动脉血管造影看到的动脉)的变窄。变窄减少了进入心肌的血液量，导致胸痛(心绞痛)。因此，本文提供了治疗、预防和/或改善MCD或与MCD相关的病况的方法，该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白。

冠心病(CHD)是一种供应心脏的血管变窄或阻塞的病况。CHD最常由动脉粥样硬化引起。因此，本文提供了治疗、预防和/或改善CHD或与CHD相关的病况的方法，该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白。

颈动脉疾病是一种与颈动脉(向大脑和头部供应血液的动脉)中的动脉粥样硬化相关的病况。因此，本文提供了治疗、预防和/或改善颈动脉疾病或与颈动脉疾病相关的病况的方法，该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白。

外周动脉疾病(PAD)是一种外周动脉变窄或阻塞的病况。PAD最常由动脉粥样硬化引起。因此，本文提供了治疗、预防和/或改善外周动脉疾病或与外周动脉疾病相关的病况的方法，该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白。如本文所用，PAD包括影响任何外周动脉的PAD，包括但不限于下肢PAD。

心力衰竭是一种心脏泵血能力受损的病况。心力衰竭可能与CHD/CAD和/或高血压相关。此外，心力衰竭可能与心肌中的异常炎症相关，并且与微血管功能的降低相关。本发明人已经证明，如本文所述的LOX-1结合蛋白对LOX-1的抑制可以预防和/或减少动脉粥样硬化和炎症。因此，本文提供了治疗、预防和/或改善心力衰竭或与心力衰竭相关的病况的方法，该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白。如本文所用，术语“心力衰竭”可指射血分数降低型心力衰竭或射血分数保留型心力衰竭。

本文还提供了治疗、预防和/或改善与冠状动脉斑块破裂相关的病况的方法，该方法包括施用LOX-1结合蛋白。在实施例中，与冠状动脉斑块破裂相关的病况是血栓形成或缺血。本文还提供了稳定受试者的动脉粥样硬化斑块的方法，该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白。

血管炎症、动脉粥样硬化和相关病症的治疗

本文所述的方法治疗与LOX-1升高相关的病症，诸如血管炎症、冠状动脉炎症、动脉粥样硬化和相关病症。

通常，术语“治疗”等意指在临时或永久基础上减轻(减少、最小化或消除)症状，或者减少、最小化或消除症状的起因。

LOX-1相关参数

与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线(即治疗前)可溶性LOX-1水平显著降低相关。术语“可溶性LOX-1水平”(在本文中可互换地称为“血清LOX-1水平”、“血清sLOX-1水平”或简称为“sLOX-1水平”)可指受试者血清中LOX-1(sLOX-1)的裂解的可溶性结构域的浓度，如使用任何合适的测定(包括如本文所述的测定)所确定(参见例如实例15)。术语“可溶性LOX-1水平”可指血清样品中可溶性LOX-1蛋白的总浓度，或指游离LOX-1蛋白(即未与本文所述的LOX-1结合蛋白结合的LOX-1蛋白)的浓度。所提供的浓度和减少可指已经接受相同治疗的受试者群体中的平均或中值浓度或者浓度减少。所提供的浓度和减少可指受试者中的测量浓度或浓度减少。在实施例中，可溶性LOX-1水平的显著降低可指相较于施用LOX-1结合蛋白之前的水平降低至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％或至少90％。合适地，血清LOX-1水平的显著降低可指相较于施用LOX-1结合蛋白之前的水平降低至少约70％。合适地，可溶性LOX-1水平的显著降低可指相较于施用LOX-1结合蛋白之前的水平血清中游离可溶性LOX-1水平显著降低。在实施例中，血清sLOX-1水平的显著降低可指从高于LOX-1的检测下限的LOX-1水平降低至低于LOX-1的检测下限的水平。降低可在施用LOX-1结合蛋白后至少约1天(即在第0天施用LOX-1结合蛋白)、在施用LOX-1结合蛋白后至少约2天或者在施用LOX-1结合蛋白后至少约7天、约14天、约21天或约28天测量。因此，本文所述的任何方法可与受试者中游离sLOX-1的血清水平的降低相关。游离sLOX-1的血清水平的降低可以是当在施用后至少一个时间点测量时(诸如当在施用后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29天测量时)和/或当在施用后一段时间内的任何时间点测量时(例如，施用后1至14天之间、2至14天之间、3至14天之间、2至10天之间、3至10天之间或1至29天的任何组合的任何时间点)降低至少最小百分比(如上所述)。例如，可溶性LOX-1水平的显著降低可指当在施用后1、2、3、4、5、6或7天或者在施用后1至7天之间的至少一个时间点测量时降低至少约75％。降低可在稳态下测量。稳态可指治疗方案中每次施用后可溶性LOX-1的水平遵循与前一次施用后相似(诸如基本上相同)的时间模式的状态。在实施例中，降低可在多次重复(例如，Q4W)施用后(诸如在2、3、4、5、6、7、8、9或10次施用后)测量。例如，降低可在从开始治疗起的预定时间之后在施用后的至少一个时间点测量。因此，本文所述的任何方法可包括在开始治疗之前和在从开始治疗起的预定时间之后(诸如治疗32周后、治疗约36周后(诸如开始治疗后252天)或治疗约17周后(诸如开始治疗后121天))测量来自受试者的样品中游离sLOX-1的血清水平。血清中可溶性LOX-1的水平可用作受试者中膜结合LOX-1(mLOX-1)水平的替代物。

动脉粥样硬化相关参数

各种参数可用于测量动脉粥样硬化的严重程度和药物对动脉粥样硬化的影响。这些可包括通过计算机断层摄影血管造影(CTA)获得的度量(包括例如斑块体积、％动脉粥样化、管腔体积、流量和炎症)和临床参数(包括例如高风险斑块特征)。通过CTA进行的冠状动脉评估通常被分成18个节段(动脉的区段)，其中可以在每个节段中分别评估一个或多个CTA度量。如本文所用，CTA度量通常涉及在冠状动脉的一个或多个节段中评估的相应度量。CTA度量可涉及整个冠状动脉(在这种情况下，它们可被称为“总体”或“整体”，并且可等于各个节段特定度量的总和)，或者涉及特定节段(诸如“病变最严重的节段”)。如本文所用的术语“病变最严重的节段”是指在治疗之前(本文也称为“基线”水平或“在基线时”评估的度量)发现相应CTA度量最高/最低(取决于高值还是低值指示疾病严重程度)的评估节段。例如，受试者的病变最严重的节段可指在治疗之前在针对受试者评估的所有冠状动脉节段中被评估为具有最高体积的非钙化斑块的冠状动脉节段。

非钙化斑块体积(NCPV)是量化动脉的一个或多个节段中非钙化斑块的体积的度量。NCPV可被表征为衰减值低于130亨斯菲尔德(Hounsfield)单位的斑块。钙化斑块体积(CPV)是量化动脉的一个或多个节段中钙化斑块的体积的度量。CPV可被表征为衰减值为至少130亨斯菲尔德单位的斑块。总斑块体积(TPV)是量化动脉的一个或多个节段中斑块(特别包括钙化和非钙化斑块)的总体积的度量。TPV可被表征为NCPV和CPV的总和。低衰减斑块体积(LAPV，本文也称为“低密度斑块体积”)是量化富含脂质的非钙化斑块的体积的度量。LAPV可被表征为衰减值低于30亨斯菲尔德单位的斑块。斑块体积(无论是NCPV、CPV、LAPV还是TPV)通常以mm³表示。斑块体积可被测量为满足以亨斯菲尔德单位为单位的衰减值方面的标准的体素数量。例如，NCPV可基于衰减值低于阈值(例如130亨斯菲尔德单位)的体素数量来量化。又如，CPV可基于衰减值等于或高于阈值(例如130亨斯菲尔德单位)的体素数量来量化。再如，LAPV可基于衰减值低于阈值(例如30亨斯菲尔德单位)的体素数量来量化。可根据具体设置使用不同的阈值和标准。在实施例中，代替上述或除了上述之外，可使用其他斑块描述符，诸如纤维斑块或纤维-脂肪斑块。例如，非钙化斑块可在纤维斑块与纤维-脂肪斑块之间分离。每个这种类别可与以亨斯菲尔德单位为单位的相应衰减值阈值相关。因此，提及非钙化斑块体积的减小也可包括对应于非钙化斑块体积的斑块体积的减小，诸如纤维斑块体积和/或纤维-脂肪斑块体积的减小。

动脉粥样化百分比(也称为“百分比动脉粥样化”或“％动脉粥样化”)是指动脉的一个或多个节段中斑块体积与管腔体积的比率，表示为百分比。术语“管腔体积”是指动脉的一个或多个节段中管腔的体积，通常以mm³表示。术语“冠状动脉或心肌血流储备”是指动脉或心肌中液体的流量。血流储备通常被测量为两个流量之间的比率，因此通常是无单位的。血流储备可指血流储备分数(FFR)，其是冠状动脉内压力远端和近端与狭窄动脉中的狭窄的比率。血流储备可指冠状动脉血流储备(CFR)，其是休息时的流量与冠状动脉中可实现的最大流量的比率。CFR可用作冠状动脉或微脉管系统扩张以向心脏供应高于基线的血流的能力的指示。如技术人员所理解的，％动脉粥样化或斑块体积的减小可与管腔体积、FFR和/或CFR的增加有关。因此，本文所述的任何方法可增加受试者的冠状动脉管腔体积，如通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影所评估。类似地，本文所述的任何方法可增加受试者的动脉血流储备(特别包括血流储备分数(FFR)和/或冠状动脉血流储备(CFR))，如通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影所评估。因此，本文所述的任何方法可包括在开始治疗之前和在从开始治疗起的预定时间之后通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影测量动脉管腔体积和/或动脉血流储备的步骤。

与LOX-1升高相关的病症的治疗可与NCPV、LAPV、％动脉粥样化、管腔体积、FFR和/或CFR相较于基线(即治疗前)显著减小相关。减小可在治疗开始后至少约100天、在治疗开始后至少约122天(例如，在治疗约17周后)、在治疗开始后至少约160天(在治疗约22周后)、在治疗开始后至少220天(例如，在治疗约32周后)或至少约250天(例如，在治疗约36周后)评估。减小可在病变最严重的节段和/或在所有评估的节段中评估。

因此，本文还描述了治疗受试者的疾病或病况的方法，该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白，其中该方法减小受试者的非钙化斑块体积、低衰减冠状动脉斑块体积和/或％动脉粥样化。非钙化冠状动脉斑块体积和/或低衰减冠状动脉斑块体积和/或总冠状动脉斑块体积和/或％动脉粥样化的减小可通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影来评估。

合适地，与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线至少NCPV显著减小相关。因此，本文还描述了治疗受试者的疾病或病况的方法，该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白，其中该方法减小受试者的非钙化斑块体积。合适地，与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线在病变最严重的节段中至少NCPV显著减小相关。NCPV的显著减小可指相较于施用LOX-1结合蛋白之前的水平减小至少约1mm³、至少约2mm³、至少约3mm³、至少约4mm³、至少约5mm³、至少约6mm³、至少约7mm³、至少约8mm³、至少约9mm³、至少约10mm³或至少约11mm³。合适地，NCPV的显著减小可指相较于施用LOX-1结合蛋白之前的水平减小至少约5mm³。合适地，NCPV的显著减小可指相较于施用LOX-1结合蛋白之前的水平减小至少约10mm³或11mm³。合适地，NCPV的显著减小可指相较于施用LOX-1结合蛋白之前的水平在病变最严重的节段中NCPV显著减小。在实施例中，NCPV的显著减小可指从高于NCPV的检测下限的NCPV减小至低于NCPV的检测下限的水平。在实施例中，NCPV的显著减小可指从第一NCPV减小至第二NCPV，其中减小的量高于检测下限。检测下限可基于图像的分辨率来定义。例如，在一些实施例中，检测下限可被定义为每体素4mm³。

在实施例中，需要如本文所述的治疗的受试者(或可受益于此类治疗的受试者)可以是具有高于NCPV的检测下限的NCPV的受试者。例如，受试者可具有至少1mm³的NCPV。又如，受试者可具有至少4mm³的NCPV。在实施例中，受试者具有高于预定阈值的NCPV，其中预定阈值高于NCPV的检测下限。在实施例中，受试者具有高于100mm³的NCPV。在实施例中，受试者具有高于200mm³的NCPV。在实施例中，受试者具有高于50mm³、高于100mm³、高于150mm³或高于200mm³的NCPV。

与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线LAPV显著减小相关。合适地，与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线在病变最严重的节段中至少LAPV显著减小相关。LAPV的显著减小可指相较于施用LOX-1结合蛋白之前的水平减小至少约1mm³、至少约2mm³、至少约3mm³、至少约4mm³、至少约5mm³、至少约6mm³、至少约7mm³、至少约8mm³、至少约9mm³、至少约10mm³或至少约11mm³。合适地，LAPV的显著减小可指相较于施用LOX-1结合蛋白之前的水平减小至少约5mm³。合适地，LAPV的显著减小可指相较于施用LOX-1结合蛋白之前的水平减小至少约10mm³或11mm³。合适地，LAPV的显著减小可指相较于施用LOX-1结合蛋白之前的水平在病变最严重的节段中LAPV显著减小。在实施例中，LAPV的显著减小可指从高于LAPV的检测下限的LAPV减小至低于LAPV的检测下限的水平。在实施例中，LAPV的显著减小可指从第一LAPV减小至第二LAPV，其中减小的量高于检测下限。检测下限可基于图像的分辨率来定义。例如，在一些实施例中，检测下限可被定义为每体素4mm³。

与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线％动脉粥样化(即％动脉粥样化体积，即总斑块体积占血管体积的百分比)显著减小相关。合适地，与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线在病变最严重的节段中至少％动脉粥样化显著减小相关。％动脉粥样化的显著减小可指相较于施用LOX-1结合蛋白之前的水平减小至少约0.5％、至少约1％、至少约2％、至少约3％、至少约4％或至少约5％。合适地，％动脉粥样化的显著减小可指相较于施用LOX-1结合蛋白之前的水平减小至少约0.5％。合适地，％动脉粥样化的显著减小可指相较于施用LOX-1结合蛋白之前的水平减小至少约1％。合适地，％动脉粥样化的显著减小可指相较于施用LOX-1结合蛋白之前的水平在病变最严重的节段中％动脉粥样化显著减小。在实施例中，％动脉粥样化的显著减小可指从第一％动脉粥样化减小至第二％动脉粥样化，其中减小的量高于预定阈值，诸如检测下限。检测下限可基于图像的分辨率来定义。例如，在一些实施例中，对于总斑块体积和血管体积，检测下限可被定义为每体素4mm³。检测下限可被定义为％变化，诸如0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％或介于0.5％和1％之间的变化。因此，％动脉粥样化的显著减小可指％动脉粥样化的减小为至少x％，其中x是可在0.5％和1％之间选择的预定阈值。

与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线(即治疗前)高风险斑块特征的数量和/或程度的显著减少相关。高风险斑块特征可包括正性重塑、餐巾环征、点状钙化和低衰减斑块中的一种或多种。正性重塑可被定义为斑块部位处血管的最大外径除以近端和远端的血管的正常外径的平均值的比率高于预定阈值。例如，预定阈值可以是1.1。餐巾环征可被定义为具有中心较低CT衰减区域的环状外围较高衰减区域。点状钙化可被定义为混合斑块内的钙化斑块，沿着血管的一侧测量小于第一预定长度阈值，长度小于通过参考血管直径定义的第二预定长度阈值，并且宽度小于通过参考血管直径定义的预定宽度阈值。例如，第一长度阈值可以是3mm，第二长度阈值可以是血管直径的1.5倍，并且/或者宽度阈值可以是血管直径的2/3。可使用尺寸标准和预定阈值的其他组合。作为高风险斑块特征的低衰减斑块的存在可被定义为存在大小为至少x(其中x可以是例如1mm²)且CT衰减值低于预定阈值的至少n(其中n可以是例如3)个感兴趣区域。预定阈值可以是例如30亨斯菲尔德单位。减小可在治疗开始后至少约100天、在治疗开始后至少约122天(例如，在治疗约17周后)、在治疗开始后至少约160天(在治疗约22周后)、在治疗开始后至少220天(例如，在治疗约32周后)或至少约250天(例如，在治疗约36周后)评估。减小可在病变最严重的节段和/或在所有评估的节段中评估。

与LOX-1升高相关的病症的治疗可与受试者中一种或多种高风险斑块特征的存在和/或程度的显著减少相关。高风险斑块特征是已知与急性冠状动脉综合征的风险增加相关的特征或冠状动脉斑块。高风险斑块特征可包括选自以下项的一种或多种特征的存在：正性重塑、餐巾环征、点状钙化和低衰减斑块。高风险斑块特征的存在和/或程度可通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影来评估。受试者中一种或多种高风险斑块特征的存在和/或程度的减少可通过比较基线时和预定时间后一种或多种高风险斑块特征的存在和/或程度来评估。例如，一种或多种高风险斑块特征的存在和/或程度的减少通过比较基线时和治疗32周后、治疗约36周后(诸如开始治疗后252天)或治疗约17周后(诸如开始治疗后121天)一种或多种高风险斑块特征的存在和/或程度来评估。

血管炎症相关参数

各种参数可用于测量血管炎症(诸如冠状动脉炎症)的严重程度和药物对血管/冠状动脉炎症的影响。这些参数可包括通过计算机断层摄影血管造影(CTA)获得的度量(包括例如脂肪衰减指数(FAI))以及血清参数(包括例如hsCRP水平、IL-6水平等)。

脂肪衰减指数(FAI)也称为血管周围脂肪衰减指数(pFAI)，被认为指示血管炎症。高FAI值被认为指示炎症增加。FAI通常以亨斯菲尔德单位表示。与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线(即治疗前)FAI减小相关。合适地，与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线在病变最严重的节段中至少FAI减小相关。因此，本文所述的任何方法可减小受试者的血管周围脂肪衰减指数，如通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影所评估。血管周围脂肪衰减指数的减小可通过比较基线时和治疗17周后(诸如开始治疗后121天)、治疗32周后或治疗36周后(诸如开始治疗后252天)的血管周围脂肪衰减指数来评估。因此，血管周围脂肪衰减指数的减小可在治疗开始后至少约100天、在治疗开始后至少约122天(例如，在治疗约17周后)、在治疗开始后至少约160天(在治疗约22周后)、在治疗开始后至少220天(例如，在治疗约32周后)或至少约250天(例如，在治疗约36周后)评估。因此，本文所述的任何方法可包括在开始治疗之前和从开始治疗起的预定时间之后通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影测量受试者的血管周围脂肪衰减指数。

受试者的IL-6血清水平升高可指示炎症。因此，与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线(即治疗前)IL-6血清和/或血浆水平降低相关，如通过任何合适的测定所评估。IL-6血清水平的降低可通过比较基线时和预定时间后(诸如治疗32周后、治疗约36周后(诸如开始治疗后252天)或治疗约17周后(诸如开始治疗后121天))受试者样品中IL-6的血清浓度来评估。因此，本文所述的任何方法可包括测量基线时和预定时间后受试者样品中IL-6的血清浓度的步骤。

受试者的hsCRP清水平升高可指示炎症。因此，与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线(即治疗前)hsCRP血清水平降低相关，如通过任何合适的测定所评估。因此，本文所述的任何方法可包括测量基线时和预定时间后(诸如治疗32周后、治疗约36周后(诸如开始治疗后252天)或治疗约17周后(诸如开始治疗后121天))受试者样品中hsCRP的血清浓度的步骤。

心血管疾病(CVD)相关参数

各种CVD相关参数可用于测量CVD的严重程度和药物对CVD的影响。这些参数包括可通过超声心动图测量的参数(包括左心室射血分数(LVEF)、整体纵向应变(GLS)、舒张末期容积指数、收缩末期容积指数、左心房容积指数和/或E/e'比(二尖瓣充盈早期速度/二尖瓣环舒张早期速度))、血清参数(诸如NT-proBNP的血清水平、MMP-9的血清水平、MPO的血清水平)、临床参数(诸如发生重大不良心血管事件的时间(MACE))以及可通过CTA测量的参数(包括脂肪放射组学谱(FRP))。LVEF可被定义为使用改良Simpson计算并使用心尖4室舒张末期、心尖4室收缩末期、心尖2室舒张末期和心尖2室收缩末期描记计算的射血分数。与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线(即治疗前)LVEF增加相关。例如，与LOX-1升高相关的病症的治疗可与LVEF相对于基线水平增加至少4％或至少5％和/或增加至50或更大相关。E/e'比可指二尖瓣流入的E波的最大速度除以E的最大速度。E/e’比可从获自心尖视图的舒张多普勒测量结果获得。二尖瓣脉冲波速度信号可在频谱波形的前沿提供在舒张早期(ECG T波之后)测量的峰值E波。组织多普勒二尖瓣E'波可从侧壁频谱和中隔壁频谱测量。两个E'测量结果都可在频谱波形的前沿的峰值模态舒张早期执行。E/e'比可指侧壁和/或中隔壁的E/e'比(也分别称为侧E/e'比和中隔E/e'比)。与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线(即治疗前)E/e'比降低相关。例如，与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相对于基线水平降低至少1％相关。整体纵向应变(GLS)也称为“左心室整体纵向应变(LVGLS)”，是左心室收缩功能的量度。它测量收缩期心肌纵向长度相较于舒张期静息长度的最大缩短。GLS减小可反映在射血分数损失变得明显之前的异常收缩功能。可通过描绘LV心内膜和心外膜边界的轮廓，根据收缩末期和舒张末期的心尖4腔、2腔和3腔图像评估(LV)GLS。例如，可将锚点放置在图像上的外侧和频谱二尖瓣环和左心室心尖上，然后可定义LV心内膜和心外膜边界(例如通过软件自动，任选地手动调整)，并且一旦分析了4腔、2腔和3腔视图中的每一个，就可计算GLS。GLS可被定义为收缩末期和舒张末期之间长度的百分比变化。与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线(即治疗前)GLS增加相关。例如，与LOX-1升高相关的病症的治疗可与GLS相对于基线水平增加至少1％相关。舒张末期容积指数可被定义为紧接在收缩期开始前的舒张充盈期结束时左心室或右心室中的血液容积，针对体表面积校正。收缩末期容积指数可被定义为收缩期结束时和舒张期开始时心室中的血液容积。收缩末期容积指数和舒张末期容积指数可用于计算每搏输出量。左心房容积指数可被定义为左心房容积除以体表面积。与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线(即治疗前)左心房指数减小相关。与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线(即治疗前)舒张末期指数减小相关。

这些参数中的每一个可在治疗开始后至少约100天、在治疗开始后至少约122天(例如，在治疗约17周后)、在治疗开始后至少约160天(在治疗约22周后)、在治疗开始后至少220天(例如，在治疗约32周后)或至少约250天(例如，在治疗约36周后)评估。

受试者的N-末端B型利钠肽原(NT-proBNP)血清水平升高可能指示心力衰竭的风险升高。因此，与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线(即治疗前)NT-proBNP血清水平降低相关，如通过任何合适的测定所评估。此外，需要如本文所述的治疗的受试者(或可受益于此类治疗的受试者)可以是具有高于预定阈值的NT-proBNP的受试者。预定阈值可对应于健康受试者中NT-proBNP的预期水平。预定阈值可被选择为至少约125pg/L。NT-proBNP血清水平的降低可通过比较基线时和预定时间后(诸如治疗32周后、治疗约36周后(诸如开始治疗后252天)或治疗约17周后(诸如开始治疗后121天))受试者样品中NT-proBNP的血清浓度来评估。因此，本文所述的任何方法可包括测量基线时和预定时间后受试者样品中NT-proBNP的血清浓度的步骤。

受试者的基质金属蛋白酶9(MMP-9)血清和/或血浆水平升高可指示斑块破裂的风险升高。因此，与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线(即治疗前)MMP-9血清水平降低相关，如通过任何合适的测定所评估。MMP-9血清水平的降低可通过比较基线时和预定时间后(诸如治疗32周后、治疗约36周后(诸如开始治疗后252天)或治疗约17周后(诸如开始治疗后121天))受试者样品中MMP-9的血清浓度来评估。因此，本文所述的任何方法可包括测量基线时和预定时间后受试者样品中MMP-9的血清浓度的步骤。

受试者的髓过氧化物酶(MPO)血清和/或血浆水平升高可指示冠状动脉疾病。因此，与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线(即治疗前)MPO血清水平降低相关，如通过任何合适的测定所评估。MPO血清水平的降低可通过比较基线时和预定时间后(诸如治疗32周后、治疗约36周后(诸如开始治疗后252天)或治疗约17周后(诸如开始治疗后121天))受试者样品中MPO的血清浓度来评估。因此，本文所述的任何方法可包括测量基线时和预定时间后受试者样品中MPO的血清浓度的步骤。

脂肪放射组学谱(FRP)是CTA衍生的度量，其已被证明可以预测心脏风险(特别是经历MACE的风险)。FRP可如Oikonomou等人所述测定(“A novel machine learning-derived radiotranscriptomic signature of perivascular fat improves cardiacrisk prediction using coronary CT angiography[一种新型机器学习衍生的血管周围脂肪的放射转录组学特征改善了使用冠状动脉CT血管造影的心脏风险预测]”,EuropeanHeart Journal[欧洲心脏杂志],2019,doi.org/10.1093/eurheartj/ehz592)，其全部内容通过援引并入本文。因此，与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线(即治疗前)受试者的FRP的变化相关。因此，本文所述的任何方法可引起受试者的脂肪放射组学谱的变化。合适地，放射组学谱的变化可以是脂肪放射组学谱得分(FRP)的降低。因此，本文所述的任何方法可包括在开始治疗之前和从开始治疗起的预定时间之后通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影测量用于计算受试者的FRP的特征。

各种超声心动图参数指示正常与受损心脏功能。这些参数包括左心室射血分数(LVEF)、整体纵向应变(GLS)、舒张末期容积指数、收缩末期容积指数、左心房容积指数和E/e'比。因此，与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于基线(即治疗前)这些参数中的任何一个或多个的改善相关(其中改善可以是减小或增加，取决于参数，并且如技术人员所熟悉的)，如通过超声心动图所评估。因此，本文所述的任何方法可包括在开始治疗之前和从开始治疗起的预定时间之后通过超声心动图测量受试者的LVEF、GLS、舒张末期容积指数、收缩末期容积指数、左心房容积指数和/或E/e'比的步骤。

重大不良心血管事件(MACE)可包括心血管死亡、心力衰竭住院、心肌梗塞、卒中和冠状动脉血运重建中的一种或多种。在实施例中，与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于尚未接受治疗的受试者(或受试者群体)在预定时间范围内发生MACE的风险降低相关。在实施例中，与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于尚未接受治疗的受试者(或受试者群体)发生MACE的预期时间(诸如基线与发生MACE之间的平均时间)增加相关。在实施例中，与LOX-1升高相关的病症的治疗可与相较于尚未接受治疗的受试者(或受试者群体)至少在治疗后的预定时间段内发生MACE的可能性降低相关。例如，在已经接受与LOX-1升高相关的病症的治疗的组中在预定时间段内经历MACE的受试者的百分比可低于在尚未接受治疗的组中在相同的预定时间段内经历MACE的受试者的百分比。例如，在尚未接受治疗的组中可观察到约5％的MACE率，而在已经接受治疗的组中可观察到低于5％的MACE率。已经或尚未接受治疗的受试者的预期MACE率可取决于受试者的具体特征。例如，患有更严重的LOX-1相关疾病的受试者可能比患有不太严重的LOX-1相关疾病的受试者具有更高的MACE率。然而，当比较具有相似临床特征的受试者时，治疗的受试者组中的MACE率可能低于尚未接受治疗的受试者组中的MACE率。

生理参数

各种生理参数可用于测量LOX-1结合蛋白对动脉粥样硬化、血管/冠状动脉炎症和相关疾病的机制的影响。

具体地，用如本文所述的LOX-1结合蛋白治疗受试者可具有选自以下项的一种或多种效果：(i)通过oxLDL-LOX-1结合(或通过与受体相关的其他触发因子的结合)防止LOX-1表达的上调；(ii)抑制受试者的PBMC产生促炎细胞因子；(iii)抑制受试者中巨噬细胞转化为泡沫细胞；(iv)恢复受试者中巨噬细胞的胞葬作用；(v)减少受试者中巨噬细胞产生MMP-9；(vi)减少受试者中巨噬细胞产生ROS；和/或(vii)抑制受试者中的巨噬细胞凋亡。

此外，用如本文所述的LOX-1结合蛋白治疗受试者可稳定动脉粥样硬化斑块，抑制或减少血管/冠状动脉炎症，逆转或减少动脉粥样硬化斑块形成和/或抑制或减少内皮功能失调。

受试者

如本文所用，术语“受试者”包括人和非人动物，特别是哺乳动物。通常，受试者是人，如以下实例所示。

在实施例中，受试者患有心血管疾病或有发生心血管疾病的风险。例如，受试者可能患有选自以下项的疾病或有发生这些疾病的风险：心力衰竭(HF)、急性冠状动脉综合征(ACS)、心肌梗塞(MI)、卒中、冠状动脉疾病(CAD)、颈动脉疾病、外周动脉疾病、动脉粥样硬化相关的动脉瘤、血管功能失调、缺血、微血管疾病和/或心肌缺血。

在实施例中，受试者患有与血管/冠状动脉炎症和/或动脉粥样硬化相关的疾病或有发生该疾病的风险。在实施例中，受试者具有致动脉粥样硬化病况。在实施例中，致动脉粥样硬化病况是系统性红斑狼疮(SLE)、银屑病、糖尿病、高血压、高血糖、心力衰竭、血管损伤、器官移植、血脂异常(例如，高脂血症)和/或炎症(例如，慢性炎症)。在实施例中，受试者患有2型糖尿病。因此，本文还描述了一种预防有发生与血管/冠状动脉炎症和/或动脉粥样硬化相关的疾病或病况的风险的受试者(诸如已被诊断患有糖尿病(诸如2型糖尿病)的受试者)发生该疾病或病况的方法(以及在这种方法中使用的LOX-1结合蛋白)，其中该方法包括向受试者施用治疗有效量的LOX-1结合蛋白。

在实施例中，在施用LOX-1结合蛋白之前，受试者已经经历心肌梗塞。例如，受试者可能已经经历ST段抬高型急性心肌梗塞(STEMI)和/或非ST段抬高型急性心肌梗塞(NSTEMI)。在实施例中，在开始用LOX-1结合蛋白治疗之前30至365天，受试者已经经历心肌梗塞。心肌梗塞后的炎性响应被认为在事件后4周左右稳定。因此，在心肌梗塞后超过30天具有持续升高的炎症的受试者可能更可能具有MACE。此类受试者可特别受益于如本文所述的治疗。

因此，本文还描述了一种预防已经经历既往心肌梗塞的受试者的心肌梗塞的方法(以及在这种方法中使用的LOX-1结合蛋白)，其中该方法包括向受试者施用治疗有效量的LOX-1结合蛋白。

在实施例中，在开始用LOX-1结合蛋白治疗之前，与健康受试者相比，受试者具有升高的血清可溶性LOX-1水平。例如，受试者的血清可溶性LOX-1浓度可以是至少200pg/ml、至少300pg/ml、至少400pg/ml、至少500pg/ml、至少600pg/ml、至少700pg/ml、至少800pg/ml、至少900pg/ml或至少1000pg/ml。

在实施例中，在开始用LOX-1结合蛋白治疗之前，与健康受试者相比，受试者具有升高的C反应蛋白血清水平。C反应蛋白的血清水平可通过高灵敏度CRP测试(hsCRP)测定。例如，受试者可具有至少2mg/L或至少1mg/L的hsCRP水平。

在实施例中，在开始用LOX-1结合蛋白治疗之前，与健康受试者相比，受试者具有升高的N-末端B型利钠肽原(NT-proBNP)血清水平。例如，受试者可具有至少125pg/L的NT-proBNP血清水平。因此，在本文所述的任何治疗方法的实施例中，该方法可包括测量受试者样品中NT-proBNP的血清水平，并且如果与健康受试者相比，受试者具有升高的NT-proBNP水平，则选择受试者用LOX-1结合蛋白进行治疗。如果受试者的NT-proBNP血清水平为至少125pg/L，则可认为受试者具有升高的NT-proBNP血清水平。美国食品和药物管理局(FDA)和欧洲心脏病学会(ESC)已将这一NT-proBNP水平提议为具有临床意义的阈值。该阈值可包括具有大范围心力衰竭程度的群体。

在实施例中，受试者在治疗前3个月内没有经历心肌梗塞后心包炎。在实施例中，受试者没有接受和/或不打算接受外科介入(例如，冠状动脉旁路手术或经皮冠状动脉介入)以恢复冠状动脉中的血流。在实施例中，受试者没有心房颤动。在实施例中，受试者没有持续的异常血压。在实施例中，受试者没有低于90mmHg或高于180mmHg的收缩血压和/或高于100mmHg的舒张血压。

在实施例中，在施用LOX-1结合蛋白之前，受试者具有可通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影检测到的非钙化冠状动脉斑块。因此，本文还描述了一种治疗受试者的LOX-1相关疾病(诸如心血管疾病)的方法以及在这种方法中使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法包括向受试者施用LOX-1结合蛋白，并且其中在施用LOX-1结合蛋白之前，受试者具有可通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影检测到的非钙化冠状动脉斑块。这种方法可包括通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影测量受试者的非钙化冠状动脉斑块体积，并且如果受试者具有可检测到的非钙化冠状动脉斑块，则选择受试者用LOX-1结合蛋白进行治疗。如果受试者具有至少1mm³的非钙化冠状动脉斑块体积，如通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影所量化，则他们可具有“可检测到的非钙化冠状动脉斑块”。因此，本文还描述了一种治疗有需要的受试者的LOX-1介导的疾病或病症的方法，该方法包括以下步骤：如果受试者具有可通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影检测到的非钙化冠状动脉斑块，则向受试者施用治疗有效量的LOX-1结合蛋白。该方法可进一步包括对受试者进行冠状动脉计算机断层摄影血管造影，并且如果受试者具有可检测到的非钙化冠状动脉斑块，则选择受试者用LOX-1结合蛋白进行治疗。本文还描述了一种将受试者鉴定为用LOX-1结合蛋白治疗的候选者的方法，该方法包括通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影测量受试者冠状动脉中非钙化冠状动脉斑块的体积，其中非钙化冠状动脉斑块的体积高于预定阈值体积将患者鉴定为用LOX-1结合蛋白治疗的候选者。预定阈值体积可选自：50mm³、75mm³、100mm³、125mm³、150mm³、175mm³和200mm³。预定阈值体积可以是200mm³。预定阈值可以是100mm³。

LOX-1结合蛋白

LOX-1结合蛋白是特异性结合并中和人LOX-1的蛋白。LOX-1结合蛋白可以是抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段。

本文中，术语“特异性结合”意指蛋白(诸如抗体或其抗原结合片段)与在生理条件下相对稳定的靶(诸如抗原)形成复合物。当结合蛋白是抗体或其抗原结合片段时，术语“特异性结合”通常意指抗体或抗原结合片段经由其抗原结合结构域与表位结合，并且该结合需要抗原结合结构域与表位之间有某种互补性。因此，当与抗体或抗原结合片段与随机、不相关的表位结合相比，其更容易经由其抗原结合结构域与某一表位结合时，该抗体或抗原结合片段被认为是与该表位“特异性结合”。用于确定蛋白是否与靶特异性结合的方法是本领域熟知的，并且包括例如平衡透析、表面等离振子共振(例如，使用BIAcore200Biosensor(BIAcore AB))等。例如，“特异性结合”LOX-1的LOX-1结合蛋白(例如，抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段)可以小于约1μM、小于约100nM、小于约10nM、小于约1nM、小于约0.5nM、小于约0.1nM、小于约10pM、小于约1pM或小于约0.1pM的K_D结合LOX-1，如所测量。抗体MEDI6570的Fab即MEDI6570Fab以56pM至173pM的结合亲和力(K_D)结合人LOX-1，如通过Biacore所测量。因此，在实施例中，抗LOX-1抗体具有小于约600pM、小于400pM、小于约200pM或介于约50pM与约600pM之间、介于约50pM与约200pM之间的K_D，如通过Biacore所测量。替代性LOX-1结合分子LOX5140110(通过将scFv重新格式化为完整的IgG1λTM分子而从其衍生MEDI6570的scFv)以378pM至587pM(如通过KinExA所测量)和401pM(如通过Biacore所测量)的K_D结合人LOX-1(有关详细方法，参见WO 2016/050889)。因此，在实施例中，抗LOX-1抗体具有小于约600pM、介于约150pM与约600pM之间或约400pM的K_D，如通过Biacore或KinExA所测量。尽管LOX-1结合蛋白特异性结合人LOX-1，但它可与其他抗原(诸如来自其他(非人)物种(例如，食蟹猴)的LOX-1)具有交叉反应性。抗体MEDI6570的Fab即MEDI6570Fab以116pM的结合亲和力(K_D)结合食蟹猴LOX-1，如通过Biacore所测量。

抗LOX-1抗体及其LOX-1结合片段

通常，LOX-1结合蛋白是抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段。

如本文所用的术语“抗体”包括免疫球蛋白分子以及其多聚体(例如，IgM)，这些免疫球蛋白分子包含通过二硫键相互连接的四条多肽链、两条重链(H)和两条轻链(L)。在典型的抗体中，每条重链包含重链可变区(本文缩写为HCVR或V_H)和重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域C_H1、C_H2和C_H3。每条轻链包含轻链可变区(本文缩写为LCVR或V_L)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域(C_L1)。V_H和V_L区可以被进一步细分为称为互补决定区(CDR)的高变区，其间插有称为框架区(FR)的更保守的区域。每个VH和VL由三个CDR和四个FR构成，从氨基末端到羧基末端按照以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在一些情况下，抗LOX-1抗体(或LOX-1结合片段或其衍生物)的FR可与人种系序列相同，或者可被天然或人工修饰。

抗体的重链恒定区可来自任何类型的恒定区，诸如IgG、IgM、IgD、IgA和IgE。通常，抗体是IgG(例如，同种型IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)。在实施例中，抗体是IgG1，如本文所例示。在实施例中，抗体是IgG1λ，如本文所例示。

抗体可以是小鼠、人、灵长类、人源化或嵌合抗体。抗体可以是多克隆的或单克隆的。对于治疗应用，单克隆和人(或人源化)抗体是优选的。在实施例中，LOX-1结合蛋白是单克隆抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段。在实施例中，LOX-1结合蛋白是人抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段。在特别优选的实施例中，抗体是人或人源化的和单克隆的。

抗体可以是多特异性(例如，双特异性)抗体。多特异性抗体或抗体的抗原结合片段通常将包含至少两个不同的可变结构域，其中每个可变结构域能够与不同抗原或同一抗原上的不同表位特异性结合。可使用本领域可用的常规技术将任何多特异性抗体形式调整用于如本文所述的抗体或抗体的抗原结合片段的上下文中。例如，使用双特异性抗体的方法，其中免疫球蛋白的一个臂对LOX-1是特异性的，而免疫球蛋白的另一个臂对第二治疗靶是特异性的或与治疗部分缀合。

抗LOX-1抗体的LOX-1结合片段可以是任何天然存在的、酶可获得的、合成的或基因工程改造的多肽。可使用任何合适的标准技术(诸如涉及编码抗体可变结构域和任选地恒定结构域的DNA的操作和表达的蛋白水解消化或重组基因工程技术)例如从全抗体分子衍生出此类片段。此类DNA是已知的并且/或者可容易地从例如商业来源、DNA文库(包括例如噬菌体-抗体文库)获得，或者可以合成此类DNA。可以化学方式或通过使用分子生物学技术对DNA进行测序和操作，例如以将一个或多个可变结构域和/或恒定结构域排列成合适的构型，或以引入密码子，产生半胱氨酸残基，修饰、添加或缺失氨基酸等。

LOX-1结合片段的非限制性实例包括：Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、单链Fv(scFv)、二硫键连接的Fvs、dAb片段和其他工程改造分子，诸如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失抗体、嵌合抗体、CDR移植抗体。因此，在实施例中，LOX-1结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、单链Fv(scFv)或二硫键连接的Fvs(sdFv)。

抗LOX-1结合抗体的LOX-1结合片段通常将包含至少一个可变结构域。抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段可包含：包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链互补决定区1(HCDR1)；包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链互补决定区2(HCDR2)；包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链互补决定区3(HCDR3)；包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链互补决定区1(LCDR1)；包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链互补决定区2(LCDR2)；以及包含SEQ IDNO:6的氨基酸序列的轻链互补决定区3(LCDR3)。抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段可包含重链可变区(HCVR)和轻链可变区(LCVR)，其中：(i)重链可变区包含：包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链互补决定区1(HCDR1)；包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链互补决定区2(HCDR2)；以及包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链互补决定区3(HCDR3)；并且(ii)轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链互补决定区1(LCDR1)；包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链互补决定区2(LCDR2)；以及包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的轻链互补决定区3(LCDR3)。另外，抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段可进一步包含：(i)与SEQ IDNO:8的重链可变区序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列；和/或(ii)与SEQ ID NO:10的轻链可变区序列具有80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段可包含SEQ ID NO:8的重链可变区序列和SEQ ID NO:10的轻链可变区序列。

抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段可包含：(i)与SEQ ID NO:11的重链恒定结构域序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列；和/或(ii)与SEQ ID NO:12的轻链恒定结构域序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。在一些情况下，抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段或LOX-1结合衍生物包含SEQID NO:11的重链恒定结构域和SEQ ID NO:12的轻链恒定结构域序列。

抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段可包含：(i)与SEQ ID NO:13的全长重链序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列；和/或(ii)与SEQ ID NO:14的全长轻链序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。在一些情况下，抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或SEQ IDNO:14的氨基酸序列。

可以用于本文所述的方法中的一种此类抗体是抗LOX-1抗体MEDI6570(如WO2016/050889中所述，其中它被称为“LX5140110-IgG1-TM”)。MEDI6570是一种全人IgG1-λ抗体，其特异性结合和拮抗人LOX-1。

表1.产生MEDI6570时使用的序列

用于鉴定、分离和测试(例如，结合和中和)抗体及其片段的方法是本领域公知的。参见WO 2016/050889，其传授了各种抗LOX-1抗体和片段的鉴定和表征，并提供了用于这样做的合适方法。

在实施例中，LOX-1结合蛋白是如WO 2016/050889(其通过援引并入本文)的任何实施例中所述的抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段。在实施例中，LOX-1结合蛋白结合与包含根据SEQ ID NO:8的重链可变区和根据SEQ ID NO:10的轻链可变区的LOX-1结合蛋白相同的表位。在实施例中，LOX-1结合蛋白是与包含根据SEQ ID NO:8的重链可变区和根据SEQID NO:10的轻链可变区的LOX-1结合蛋白竞争结合LOX-1的蛋白。

在实施例中，LOX-1结合蛋白具有选自由以下项组成的组的至少一种特性：(a)减少或抑制oxLDL、C反应蛋白(CRP)和/或晚期糖基化终末产物(AGE)与LOX-1的结合，如通过包括本文披露的测定在内的任何合适的测定所测定(参见例如实例11)；(b)降低或抑制LOX-1表达细胞(例如，巨噬细胞)中的半胱天冬酶-3和/或半胱天冬酶7活性，如通过包括本文披露的测定在内的任何合适的测定所测定(参见例如实例9)；(c)减少或抑制oxLDL内化，如通过包括本文披露的测定在内的任何合适的测定所测定(参见例如实例11)；(d)以约50pM至约200pM的解离常数(KD)与LOX-1结合，如通过Biacore所测定；(e)降低或抑制表达细胞表面LOX-1的血细胞中的NFkB信号传导，如通过包括本文披露的测定在内的任何合适的测定所测定(参见例如实例2)；(f)降低或抑制表达细胞表面LOX-1的血细胞中LOX-1的LOX-1活化介导的表达，如通过包括本文披露的测定在内的任何合适的测定所测定(参见例如实例2)；(g)减少或抑制由表达细胞表面LOX-1的血细胞对一种或多种细胞因子(诸如肿瘤坏死因子α(TNFα)、白介素(IL-6、IL-1b和IL-12p70)中的一种或多种)进行ox-LDL介导的表达，如通过包括本文披露的测定在内的任何合适的测定所测定(参见例如实例3)；(h)降低或抑制巨噬细胞向泡沫细胞的转化，如通过包括本文披露的测定在内的任何合适的测定所测定(参见例如实例4)；(i)增加或恢复巨噬细胞在oxLDL存在下进行胞葬作用的能力，如通过包括本文披露的测定在内的任何合适的测定所测定(参见例如实例5)；(j)减少或抑制LOX-1表达细胞(例如，巨噬细胞)对MMP-9进行ox-LDL介导的表达，如通过包括本文披露的测定在内的任何合适的测定所测定(参见例如实例6)；(k)减少或抑制LOX-1表达细胞(例如，巨噬细胞)中活化转录因子(ATF3)的ox-HDL介导的核定位，如通过包括本文披露的测定在内的任何合适的测定所测定(参见例如实例7)；(l)减少或抑制LOX-1表达细胞(例如，巨噬细胞)中的活性氧物质(ROS)产生，如通过包括本文披露的测定在内的任何合适的测定所测定(参见例如实例8)。

在实施例中，LOX-1结合蛋白以至多5nM、至多4nM、至多3nM、至多2nM、至多1nM或至多0.5nM的IC50抑制oxLDL与LOX-1的结合，如通过包括本文披露的测定在内的任何合适的测定所测定(参见例如实例11)。在实施例中，LOX-1结合蛋白以至多5nM、至多4nM、至多3nM、至多2nM、至多1nM或约0.5nM的IC50抑制AGE-BSA(牛血清白蛋白衍生的AGE)与LOX-1的结合，如通过包括本文披露的测定在内的任何合适的测定所测定(参见例如实例11)。在实施例中，LOX-1结合蛋白以至多10nM、至多9nM、至多8nM、至多7nM、至多6nM或约5nM的IC50抑制CRP与LOX-1的结合，如通过包括本文披露的测定在内的任何合适的测定所测定(参见例如实例11)。

剂量和给药方案

本发明提供了在本文所述的任何治疗方法中使用的如上所述的LOX-1结合蛋白(例如，抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段)，其中该方法包括向受试者施用多个剂量的LOX-1结合蛋白的步骤。每个剂量可在紧接的前一剂量后约4周(诸如约25至31天或约28天±3天)向受试者施用。例如，可每4周施用一个剂量。

术语“剂量”是指在特定治疗日向受试者施用的LOX-1结合蛋白的量(质量)。例如，150mg LOX-1结合蛋白的剂量意指在治疗当天向受试者给予总共150mg LOX-1结合蛋白。通常，在单个施用步骤(例如，一次注射)中施用一个剂量。然而，在一些实施例中，可使用一个、两个、三个或更多个施用步骤(例如，一次、两次、三次或更多次注射)来向受试者提供期望的剂量。短语“紧接的前一剂量”意指在多个剂量的序列中，在施用序列中的下一个剂量之前向患者施用的LOX-1结合蛋白的剂量，没有LOX-1结合蛋白的中间剂量。

“给药频率”是施用LOX-1结合蛋白的剂量的频率。因此，给药频率降低意味着剂量之间的时间间隔增加。与给药频率相关使用的常用术语是QW(每周一次)、Q2W(每2周一次)、Q3W(每3周一次)或Q4W(每4周一次)。因此，多个剂量的施用(其中每个剂量在紧接的前一剂量后4周施用)也可以表示为Q4W的给药频率。

在本文所述的方法中，该方法可进行直到它提供如本文所述的一个或多个动脉粥样硬化、血管炎症、冠状动脉炎症或心血管相关参数的改善。在一些情况下，该方法可在约12周、约17周、约32周或约39周内提供一个或多个此类参数的改善。在优选的实施例中，在约12周、约17周或约32周内提供非钙化冠状动脉斑块体积的改善(例如，如实例13和14中)。在实施例中，至少在17周后、至少在约36周后、至少在约39周后、至少在约48周后、至少在约122天后、至少在约253天后或至少在约334天后提供CTA和回波描记标志(诸如射血分数和/或整体纵向应变)的改善。因此，本文所述的任何治疗方法可持续至少12周、至少16周、至少20周、至少24周、至少28周、至少32周或至少39周。合适地，该方法持续至少16周、至少20周、至少24周、至少28周、至少32周或至少39周。在实施例中，这些方法可进行至少12周、至少17周、至少32周、至少39周、至少52周、至少78周、至少104周、至少130周、至少156周、至少182周、至少208周、至少12个月(例如，1年)、至少18个月、至少24个月(例如，2年)、至少30个月、至少36个月(例如，3年)、至少42个月、至少48个月(例如，4年)或任何年数。

本文所述的任何方法可减小受试者的非钙化冠状动脉斑块体积和/或受试者的低衰减斑块体积和/或受试者的％动脉粥样化，合适地至少非钙化冠状动脉斑块体积。非钙化冠状动脉斑块体积和/或低衰减斑块体积和/或％动脉粥样化的减小可通过比较基线时和治疗约12周后、治疗约16周后、治疗约17周后、开始治疗后约121天、治疗约32周后、治疗约36周后或开始治疗后约252天的非钙化冠状动脉斑块体积和/或低衰减斑块体积和/或％动脉粥样化来评估。非钙化冠状动脉斑块体积、低衰减斑块体积和/或％动脉粥样化的减小任选地至少相对于基线时病变最严重的冠状动脉节段来评估。在实施例中，非钙化冠状动脉斑块体积、低衰减斑块体积和/或％动脉粥样化的减小相对于基线时所有评估的冠状动脉节段来评估。因此，本文所述的任何方法可包括在开始治疗之前和从开始治疗起的预定时间之后通过测量受试者的非钙化冠状动脉斑块体积和/或低衰减斑块体积和/或％动脉粥样化来评估非钙化冠状动脉斑块体积和/或低衰减斑块体积和/或％动脉粥样化的减小的步骤。

在实施例中，每个剂量可以是约30mg、约50mg、约90mg、约150mg、约250mg、约400mg或约500mg LOX-1结合蛋白的剂量。在实施例中，每个剂量为约50mg、约90mg、约150mg、约250mg或约400mg的剂量。在实施例中，每个剂量为约150mg或至少150mg。在实施例中，每个剂量可以是约30至约500mg LOX-1结合蛋白、约50至约500mg LOX-1结合蛋白、约90至约500mg LOX-1结合蛋白、约150至约500mg LOX-1结合蛋白或约150至约400mg LOX-1结合蛋白的剂量。

在实施例中，每个剂量为约150mg、约90mg、约250mg、约400mg或约500mg LOX-1结合蛋白的剂量。在实施例中，每个剂量为约50mg、约90mg、约150mg、约250mg或约400mg LOX-1结合蛋白的剂量。在实施例中，每个剂量为约50mg、约150mg、约250mg或约400mg LOX-1结合蛋白的剂量。在实施例中，每个剂量为约150mg或至少150mg LOX-1结合蛋白。在实施例中，每个剂量为约250mg LOX-1结合蛋白。

在实施例中，每个剂量在紧接的前一剂量后约4周向受试者施用，并且每个剂量为约50mg、约90mg、约150mg、约250mg或约400mg的剂量。在实施例中，每个剂量在紧接的前一剂量后约4周向受试者施用，并且每个剂量为约150mg、约250mg或约400mg的剂量。合适地，每个剂量皮下施用。可使用本领域已知的建模和模拟方法来定义使用其他施用模式(诸如静脉内施用)的等效剂量。

施用

在本文所述的方法中，LOX-1结合蛋白(例如，抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段)可通过任何合适的方法施用。通常，施用是肠胃外的，例如皮内、肌内、静脉内和皮下。皮下施用是特别优选的(例如，如实例中所示)。因此，LOX-1结合蛋白的每个剂量皮下施用。替代性地，LOX-1结合蛋白的每个剂量可静脉内施用。

施用合适地以“治疗有效量”进行，这足以显示如本文所述的一个或多个动脉粥样硬化、LOX-1-、心血管或血管/冠状动脉炎症相关参数的改善或维持改善。

皮下或静脉内递送可用标准针头和注射器(例如，包括用预填充注射器)进行，或用任何其他注射装置诸如自动注射器进行。因此，本文还描述了一种在如本文所述的方法中使用的递送装置，该递送装置包括包含如本文所述的LOX-1结合蛋白的组合物。

LOX-1结合蛋白的每个剂量不一定在单个施用步骤(例如，一次注射或一个片剂等)中施用。实际上，取决于LOX-1结合蛋白的浓度(例如，在药物组合物中)，可能需要一个、两个、三个或更多个施用步骤(例如，一次、两次、三次或更多次注射)来向受试者提供所需量的LOX-1结合蛋白(例如，150mg剂量)。因此，在一些实施例中，LOX-1结合蛋白的每个剂量以一次、两次或三次注射(例如，皮下)施用。通常，皮下注射具有约2mL或更小的体积，诸如0.2至2mL的体积，例如约0.5ml、约1mL、约1.5ml或约2mL。

单一疗法和联合疗法

在实施例中，LOX-1结合蛋白作为单一疗法施用。

在实施例中，在LOX-1结合蛋白之前、之后或与之同时向受试者施用第二治疗剂。在实施例中，第二治疗剂是他汀类药物。

药物组合物和制剂

本发明设想了其中LOX-1结合蛋白(例如，抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段)的每个剂量作为药物组合物施用的方法。

药物组合物可与合适的载剂、赋形剂和提供合适的转移、递送、耐受性等的其他药剂一起配制。许多制剂可以在所有药物化学家已知的处方集中找到：Remington'sPharmaceutical Sciences[雷明顿药物科学],Mack Publishing Company,Easton,PA[宾夕法尼亚州伊斯顿的马克出版公司]。

根据本文所述的方法向患者施用的剂量可根据患者的年龄和体型、症状、病况、施用途径等而变化。剂量可以根据体重或体表面积计算。

因此，除了活性成分(即LOX-1结合蛋白)之外，药物组合物还可包含药学上可接受的赋形剂、载剂、缓冲剂、稳定剂或本领域技术人员熟知的其他材料。这些材料应无毒并且不应干扰活性成分的功效。载剂或其他材料的确切性质将取决于施用途径，该施用途径可以是口服或通过注射，例如静脉内或皮下。用于口服施用的药物组合物可以是片剂、胶囊、粉末或液体形式。片剂可包含固体载剂，诸如明胶或佐剂。液体药物组合物通常包含液体载剂，诸如水、石油、动物油或植物油、矿物油或合成油。可包括生理盐水溶液、右旋糖或其他糖类溶液或二醇，诸如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。

对于静脉内注射或皮下注射，药物组合物可以是肠胃外可接受的水性溶液，该水性溶液是无热原的并且具有合适的pH、等渗性和稳定性。本领域技术人员完全能够使用例如等渗媒介物(诸如氯化钠注射液、林格氏注射液、乳酸盐林格氏注射液)来制备合适的溶液。根据需要，可包括防腐剂、稳定剂、缓冲液、抗氧化剂和/或其他添加剂。

药物组合物可以是液体制剂或在使用前重构的冻干制剂。作为冻干制剂的赋形剂，可使用例如糖醇或糖类(例如，甘露醇或葡萄糖)。就液体制剂而言，药物组合物通常以具有限定体积的容器(包括密封和灭菌的塑料或玻璃小瓶、安瓿和注射器)的形式提供，以及以大体积容器(诸如瓶)的形式提供。合适地，在本文所述的方法中，药物组合物是液体制剂。

因此，本文还描述了试剂盒，这些试剂盒包括包含如本文所述的LOX-1结合蛋白的组合物以及用于根据本文所述的任何方法施用该组合物的说明书。

本文提及的所有出版物通过援引以其全文并入。

实例

通过以下实例进一步说明本发明。应当理解，这些实例仅用于说明的目的，并不旨在限制如上所述的本发明。在不脱离本发明的范围的情况下，可以对细节进行修改。

通过这些实例中描述的工作，本发明人已经证实MEDI6570阻断oxLDL与LOX-1(或其他替代性结合剂诸如AGE、CRP)的结合，将oxLDL刺激的样品中的游离可溶性LOX-1(sLOX-1)和总可溶性LOX-1水平降低至未刺激的对照的水平，抑制oxLDL介导的炎性细胞因子在人外周血单核细胞(PBMC)中的释放，抑制巨噬细胞向泡沫细胞的转化，拯救oxLDL处理的人巨噬细胞中受损的胞葬作用，抑制巨噬细胞在用oxLDL或与急性心血管综合征(ACS)相关的LDL刺激时的MMP-9分泌，拯救用与ACS相关的HDL处理的人巨噬细胞中抗炎激活转录因子3(ATF3)的核定位，减少oxLDL处理的人巨噬细胞中的活性氧物质(ROS)生成，以及降低oxLDL处理的人巨噬细胞中的凋亡。总之，这些发现表明MEDI6570可以减轻血管(特别是冠状动脉)炎症、恢复内皮功能和减轻动脉粥样硬化。

特别地，本发明人的证明MEDI6570拯救抗炎激活转录因子3(ATF3)的减少的核定位(以下实例7)并抑制oxLDL介导的炎性细胞因子的释放(以下实例3)的工作提供了MEDI6570对LOX-1的抑制起到减轻血管(诸如冠状动脉)炎症的作用的证据。

本发明人的证明MEDI6570抑制LOX-1配体oxLDL、AGE和CRP的结合的工作(以下实例11)表明该药物与其靶具有出色的结合亲和力，并且可以有效地与LOX-1的所有测试的已知配体竞争。本发明人的证明在用MEDI6570处理时游离可溶性LOX-1和总可溶性LOX-1均减少的工作(实例11)表明该药物除了对靶的直接抑制外，还意外地通过依赖于炎症途径的前馈机制抑制LOX-1的表达。这进一步支持对减轻血管/冠状动脉炎症的作用。

本发明人的证明MEDI6570在oxLDL暴露时抑制巨噬细胞向泡沫细胞的转化的工作(以下实例4)支持MEDI6570抑制LOX-1对非钙化斑块体积消退的作用，因为已知泡沫细胞形成(巨噬细胞摄取氧化脂质)导致非钙化斑块的累积。这进一步支持MEDI6570抑制LOX-1对恢复胞葬作用(因为泡沫细胞被认为在该过程中效率较低)并因而增加斑块稳定性/减少易破裂斑块的形成的作用。

实际上，本发明人的证明MEDI6570恢复巨噬细胞功能(胞葬作用)的工作(以下实例5)支持MEDI6570抑制LOX-1对促进血管(特别是冠状动脉)炎症消退并因而减少易破裂斑块的形成的作用。据信胞葬作用形成炎症消退过程的重要部分，继而减少易破裂斑块的形成。实际上，据信胞葬作用在稳定的斑块中是活跃的，而在易破裂斑块中则不那么活跃。所证明的MEDI6570抑制LOX-1对ROS产量的作用(实例9)也支持对改善巨噬细胞功能继而促进斑块稳定性的作用。

MEDI6570抑制LOX-1对斑块破裂的作用进一步得到以下工作的支持，该工作显示MEDI6570减少离体巨噬细胞响应于ACS患者来源的LDL的MMP-9分泌(以下实例6)。实际上，MMP9在临床上与斑块破裂相关，并且被认为具有因果效应(由此斑块内酶的作用至少有助于引起斑块破裂)。

MEDI6570抑制LOX-1对斑块破裂的作用进一步得到显示MEDI6570减少由oxLDL触发的细胞凋亡的工作的支持(以下实例10)。实际上，据信斑块区域中增加的重塑(通过细胞凋亡)会造成斑块不稳定性。

本发明人通过临床工作进一步显示，MEDI6570可能有效治疗动脉粥样硬化，如通过MEDI6570治疗后非钙化冠状动脉斑块体积的减小来评估。最后，本发明人已经确定了多个剂量方案，可以预期这些剂量方案与血清LOX-1水平的显著降低和相关的临床益处(包括非钙化冠状动脉斑块体积的减小)相关。

总之，以下实例中的工作证明MEDI6570抑制LOX-1可减轻血管炎症(实例3、7、11)诸如冠状动脉炎症，控制或消退非钙化斑块体积的累积(实例4、13)，并降低斑块不稳定性(实例5、6、10)，从而降低心肌梗塞(MI)的风险。实际上，动脉粥样硬化患者中的斑块破裂被认为是MI的最常见原因。

实例1：LOX-1在动脉粥样硬化的单核炎性细胞中表达

研究了患有早期和晚期动脉粥样硬化的参与者以及健康参与者的冠状动脉区段中LOX-1的存在。使用标准免疫组织化学技术(特别是苏木精和伊红染色以及LOX-1染色)检查含有早期和晚期动脉粥样硬化斑块的冠状动脉的组织内LOX-1蛋白定位。在患有轻度动脉粥样硬化的人冠状动脉中，可见纤维脂肪斑块引起的血管内膜的轻度周向扩张。斑块主要由泡沫细胞和少量单核炎性细胞组成；单核炎性细胞很少显示对LOX-1的细胞质反应性。在患有严重动脉粥样硬化的人冠状动脉中，可见纤维脂肪斑块引起的血管内膜的显著周向扩张，通常伴有大的坏死和/或矿化病灶。斑块由泡沫细胞与大量单核炎性细胞混合组成；单核炎性细胞通常显示对LOX-1的细胞质反应性。

因此，与健康参与者中非常低的LOX-1免疫组织化学信号相比，在动脉粥样硬化的所有阶段均发现阳性LOX-1免疫组织化学信号。在早期动脉粥样硬化中，阳性LOX-1信号定位于在早期病变中很少出现的单核炎性细胞中。在晚期动脉粥样硬化斑块中，呈LOX-1信号阳性的单核炎性细胞明显比早期动脉粥样硬化病变中更普遍。

结论：该数据表明靶向LOX-1可通过减少动脉粥样硬化斑块中单核炎性细胞的存在或产生来减少或减缓动脉粥样硬化的进展。

实例2：MEDI6570通过oxLDL-LOX-1结合防止LOX-1表达的上调

与没有ACS的参与者相比，有ACS的参与者中LOX-1升高(实例10)。当被包括oxLDL的配体活化时，LOX-1通过转录因子NFkB促进LOX-1的下游表达。用oxLDL处理人全血24小时与sLOX-1的显著上调相关(图1)。用MEDI6570阻断LOX-1使游离sLOX-1(不与MEDI6570结合的sLOX-1)降低至未刺激的oxLDL对照的水平。同种型对照抗体未抑制由oxLDL诱导的游离sLOX-1的增加。用MEDI6570阻断LOX-1还将总sLOX-1(与和不与MEDI6570结合的sLOX-1)降低至接近非刺激的oxLDL对照的水平。同种型对照抗体未抑制由oxLDL诱导的总sLOX-1的增加。

来自暴露于oxLDL的5只食蟹猴的全血在24小时后具有增加的游离和总sLOX-1(图2)。MEDI6570阻断了oxLDL与LOX-1的结合，并将游离sLOX-1降低至未暴露于oxLDL的对照的水平。MEDI6570阻断了oxLDL与LOX-1的结合并降低了总sLOX-1水平。同种型对照抗体未抑制由oxLDL诱导的游离或总sLOX-1的增加。

结论：MEDI6570防止oxLDL配体结合和LOX-1的活化，从而防止更多LOX-1的上调。食蟹猴中的LOX-1信号传导与人类类似。

实例3：MEDI6570减少LOX-1介导的炎症(用oxLDL处理的人PBMC中的细胞因子分泌)

LOX-1在炎性条件下在单核细胞上上调，从而导致下游产生促炎细胞因子。在不存在和存在MEDI6570的情况下用oxLDL处理新鲜PBMC 24小时(图4)。MEDI6570抑制了人PBMC中肿瘤坏死因子α(TNFα)、白介素(IL)-6、IL-1b和IL-12p70的oxLDL介导的释放。

结论：MEDI6570减少LOX-1介导的炎症。

实例4：在oxLDL暴露时，MEDI6570抑制巨噬细胞转化为泡沫细胞

血液中的单核细胞粘附于活化的内皮，并在内皮下空间中成熟为巨噬细胞。巨噬细胞参与导致动脉粥样硬化病变的血管炎症。在动脉粥样化的最初阶段，SR诸如LOX-1帮助巨噬细胞摄入经修饰的脂蛋白颗粒诸如oxLDL。通过LOX-1的oxLDL摄取诱导泡沫细胞形成并抑制巨噬细胞功能。富含脂质的巨噬细胞被捕获在动脉内膜空间中，导致病变扩张和炎症。

从人供体分离单核细胞，并分化为原代人巨噬细胞(M1)。通过用MEDI6570阻断LOX-1，红色荧光DiI标记的oxLDL随时间的摄取在统计学上显著降低(图5A)。MEDI6570还抑制了单核细胞衍生的人巨噬细胞对oxVLDL的摄取(图5B)。

暴露于oxLDL 24小时的巨噬细胞表现出明显的泡沫细胞形态、细胞内脂质染色的细胞百分比增加(图6)，并且与对照巨噬细胞相比具有增加的脂质评分(数据未显示；在用同种型对照抗体或MEDI6570以10μg/mL预处理1小时，然后用30μg/mL oxLDL处理过夜、收获并在FFPE块中处理的人M1巨噬细胞中通过油红O染料测量的脂质评分)。在用MEDI6570处理的巨噬细胞中，脂质的阳性染色极少，而且脂质评分很低。

结论：该数据表明MEDI6570抑制巨噬细胞转化为泡沫细胞。

实例5：用MEDI6570阻断LOX-1恢复巨噬细胞功能(胞葬作用)

巨噬细胞在通过胞葬作用过程从受损组织中去除凋亡细胞和碎片中起关键作用。巨噬细胞通过oxLDL摄取而形成泡沫细胞会损害巨噬细胞功能，导致凋亡细胞碎片在斑块内累积，最终导致坏死核心的发展和在正在发展的动脉粥样化内的持续炎症。

评估了M1巨噬细胞在oxLDL存在下进行胞葬作用的能力(图7)。将原代人M1巨噬细胞用同种型对照抗体或MEDI6570以10μg/mL预处理1小时。添加30μg/mL oxLDL共24小时。使凋亡的Jurkat细胞负载荧光pH敏感染料(pHrodo)，第二天添加到细胞培养物中。同种型对照处理的M1巨噬细胞有效地吞噬凋亡的Jurkat细胞，导致巨噬细胞层的荧光增加。在通过用30μg/mL的oxLDL加同种型对照抗体预处理24小时诱导的泡沫细胞巨噬细胞中，巨噬细胞层的荧光显著降低，表明胞葬作用的效率降低。通过在oxLDL暴露前用MEDI6570处理巨噬细胞来拯救胞葬作用效率。

另外，将CD68⁺M1巨噬细胞暴露于oxLDL 24h，并通过流式细胞术测量Tyro3、MerTK和Axl酪氨酸激酶受体的表面表达(图20A)。这证实AXL(一种胞葬作用受体)细胞表面表达在oxLDL暴露时显著降低。在有和没有oxLDL刺激的情况下，检查CD68+/Lox-1+和CD68+/Lox-1细胞上的AXL表面表达(n＝3个供体，参见图20B)。在存在oxLDL和同种型或MEDI6570的情况下在细胞培养物上清液中测量可溶性AXL(sAXL)(参见图20C)。这揭示了oxLDL增加培养基中的sAXL，表明其在oxLDL暴露时被越来越多地裂解(表明在细胞表面上较少可用于参与胞葬)，并且该作用被MEDI6570阻断。这表明用MEDI6570处理增加了细胞表面上可用于参与胞葬作用的AXL的量。这与在oxLDL存在下观测到的MEDI6570增加胞葬作用一致。

结论：用MEDI6570阻断LOX-1恢复巨噬细胞功能。

实例6：MEDI6570减少离体巨噬细胞响应于ACS患者来源的LDL的MMP-9分泌

升高的MMP-9水平在临床上与易破裂的动脉粥样硬化斑块相关。评估了MEDI6570对原代人巨噬细胞分泌MMP-9的影响，这些巨噬细胞已知响应于oxLDL暴露会增加MMP-9产量。在暴露于从患有ACS的参与者分离的oxLDL或LDL之前，用MEDI6570阻断原代人巨噬细胞(图8)。在暴露于来自患有ACS的参与者的oxLDL或LDL之前用MEDI6570预处理巨噬细胞与MMP-9产量的显著降低相关。

组织蛋白酶L是参与斑块进展/重塑的酶。其在原代人单核细胞衍生的巨噬细胞中的表达经证实在同种型抗体存在下暴露于oxLDL时增加。用MEDI6570预处理显著降低了暴露于oxLDL时的组织蛋白酶L信号(图11B)。

结论：MEDI6570可潜在地稳定斑块并防止斑块破裂。

实例7：LOX-1的MEDI6570失活拯救ATF3的核定位，而ACS衍生的HDL则可阻止ATF3的核定位

LOX-1除了与oxLDL结合外，还与oxHDL结合。在人原代巨噬细胞中，功能失调的HDL由活化转录因子3(ATF3)的核定位通过LOX-1发出信号。ATF3核共定位抑制炎症。评估了MEDI6570在人巨噬细胞中阻断oxHDL与LOX-1结合并诱导ATF3核共定位的能力(图9)。用MEDI6570或同种型对照抗体预处理巨噬细胞30分钟，然后在无血清培养基中暴露于来自健康参与者或来自患有ACS的参与者的HDL 30分钟。固定后，对细胞进行ATF3免疫标记，用Hoechst33342复染，并在共聚焦显微镜上成像。从健康参与者分离的HDL诱导了ATF3的核定位，而从患有ACS的参与者分离的HDL显示出降低的核定位。患有ACS的患者具有修饰的HDL(即，这些患者中的HDL倾向于通过例如氧化而修饰)，其被LOX-1吸收，从而通过ATF3的活化来驱动炎症。在暴露于HDL之前用MEDI6570阻断的巨噬细胞中，患有ACS的参与者的核ATF3与健康参与者相比类似地增加，表明患有ACS的参与者拯救了核定位。

结论：MEDI6570使LOX-1失活可诱导抗炎ATF3的核定位，以抑制巨噬细胞中由经修饰的HDL诱导的炎症。

实例8：MEDI6570降低由oxLDL、ox-VLDL、ox-HDL和AGE触发的ROS产生

巨噬细胞氧化应激在心血管疾病的进展中起关键作用。oxLDL与LOX-1结合，随后其在巨噬细胞中内化导致活性氧物质(ROS)的产生。在存在oxLDL以及其他已知的致动脉粥样硬化配体oxVLDL、oxHDL和晚期糖基化终末产物(AGE)的情况下，评估了用MEDI6570阻断LOX-1对原代人单核细胞衍生的巨噬细胞中ROS水平的影响。与暴露于LOX-1配体ox-LDL、ox-VLDL、ox-HDL和AGE 5小时的同种型对照处理的巨噬细胞相比，用MEDI6570预处理原代人巨噬细胞导致了CellROX绿色荧光信号显著降低(图10)。

结论：MEDI6570可潜在地降低LOX-1配体驱动的ROS和随后的心血管疾病的进展。

实例9：MEDI6570降低原代人巨噬细胞中oxLDL触发的凋亡

晚期动脉粥样化中巨噬细胞的凋亡与易破裂斑块特征的发展有关。oxLDL诱导巨噬细胞凋亡。评估了MEDI6570降低原代人巨噬细胞中关键凋亡酶半胱天冬酶3和半胱天冬酶7活性的能力(图11A)。在同种型对照抗体的存在下，oxLDL增加了巨噬细胞中的半胱天冬酶3/7活性。用MEDI6570预处理显著降低了暴露于oxLDL时的半胱天冬酶3/7信号(图11A)。

结论：该数据表明MEDI6570降低了由oxLDL诱导的原代人巨噬细胞的凋亡。因此，MEDI6570可潜在地防止斑块破裂。

实例10：sLOX-1在T2DM患者和患有ACS的患者中升高

LOX-1是在包括T2DM和ACS(UAP&NSTEMI)的慢性炎症条件下上调的清道夫受体。健康参与者和患有T2DM的参与者的平均血清sLOX-1分别为261pg/mL和360pg/mL(表2)，其中患有T2DM的参与者的血清sLOX-1是健康参与者的1.5倍。

在MI的5至10天内患有ACS的受试者(N＝500；60％、34％和31％的参与者分别患有非STEMI、不稳定心绞痛或T2DM共病)的平均血清sLOX-1为984pg/mL(中值＝689pg/mL，四分位数间距＝373-1221pg/mL)，是健康参与者的约4倍(表2)。患有STEMI的受试者的平均血清sLOX-1为770pg/mL，而无MI的参与者为131pg/mL。

表2.在人类受试者中测量的血清sLOX-1。

ACS＝急性冠状动脉综合征；MI＝心肌梗塞；sLOX-1＝可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1；STEMI＝ST段抬高型急性心肌梗塞；T2DM＝2型糖尿病。a与健康受试者相比。b与无MI的参与者相比。

在T2DM群体和ACS群体(包括UAP(不稳定型心绞痛)和NSTEMI(非ST段抬高型心肌梗塞))中sLox-1水平的分布存在良好的重叠(>90％具有高sLOX)。

结论：这些观测结果表明LOX-1在患有T2DM的参与者和患有ACS的受试者中活化。

实例11：MEDI6570的相互作用特性

MEDI6570对LOX-1的结合亲和力

使用BIAcore计算MEDI6570 Fab对LOX-1或sLOX-1的结合亲和力。MEDI6570 Fab对LOX-1的结合亲和力为56pM，MEDI6570 Fab对食蟹猴LOX-1的结合亲和力为116pM。在患有T2DM的参与者的血清中，sLOX-1对MEDI6570(全mAb)的结合亲和力为约173pM。

MEDI6570对LOX-1与配体oxLDL、AGE和CRP之间的相互作用的影响

使用体外测定法测定MEDI6570抑制LOX-1配体oxLDL、AGE(晚期糖基化终末产物，在这种情况下为糖化牛血清白蛋白BSA)和CRP结合的能力。AGE是LOX-1的已知配体。它们通常发生在血糖水平调节不良的患者中，血糖水平调节不良是心血管疾病的危险因素。CRP是在许多类型的炎症中升高的蛋白，包括心血管疾病(以及感染等)。图3中的代表性结果证明MEDI6570抑制oxLDL、AGE-BSA和CRP与LOX-1结合的能力(与对照人IgG(黑色正方形)相比，MEDI6570抑制配体oxLDL(圆形)、CRP(三角形)和AGE-BSA(浅灰色正方形)与人LOX-1的结合)。每种配体的MEDI6570 IC50值为：oxLDL，0.34nM；AGE-BSA，0.54nM；CRP，4.8nM。

人体组织交叉反应性

用MEDI6570(研究20133507)根据现行指南使用正常人体组织的标准小组进行GLP组织交叉反应性研究，这些现行指南包括1997FDA PTC in the Manufacture and Testingof Monoclonal Antibody Products for Human Use[1997年FDA人用单克隆抗体产品生产和测试PTC]和Development,Production,Characterisation and Specifications forMonoclonal Antibodies and Related Products[单克隆抗体及相关产品的开发、生产、表征和规范](附录EMA/CHMP/BWP/532517/2008)。将MEDI6570以2种浓度(0.5和5μg/mL)施加到正常人体组织(至少3个供体/组织类型)的冷冻切片以检测结合。R347 TM人IgG1 mAb具有与MEDI6570不同的抗原特异性，并用作阴性对照。省略MEDI6570或R347 TM mAb作为测定对照。表达人LOX-1的中国仓鼠卵巢细胞或亲本中国仓鼠卵巢细胞分别作为阳性或阴性组织对照。人体组织小组中MEDI6570的阳性免疫组织化学染色限于骨髓中造血细胞的细胞膜和细胞质。有文献报道，MEDI6570的靶蛋白LOX-1在小鼠骨髓中表达(Zhang等人,Exp CellRes.[实验细胞研究]2013；319(7):1054-9)。类似地，在人类中，已经报道了巨噬细胞和血小板(Mehta等人,Cardiovasc Res.[心血管研究]2006；69(1):36-45)或多形核髓源性抑制细胞(Condamine等人,Science immunology[科学免疫学].2016；1(2))表达LOX-1。最后，对人LOX-1基因转录物OLR1的表达模式的研究证明了在骨髓中高水平的基因表达(Yamanaka等人,Genomics[基因组学].1998；54(2):191-9)。

实例12：非临床药代动力学和毒性

在食蟹猴中在施用重复IV和/或SC剂量的MEDI6570后进行PK/PD和毒理学研究。选择食蟹猴作为药理学相关物种用于非临床安全性评估，这是基于该物种与人相比具有高LOX-1蛋白序列同一性(95％)并且MEDI6570与食蟹猴和人LOX-1具有相似的特异性结合亲和力。相反，与人相比，大鼠和小鼠中的LOX-1具有低蛋白序列同一性(69％和61％)，并且MEDI6570不与小鼠或大鼠LOX-1蛋白结合。因此，啮齿类动物不被认为是药理学相关物种。食蟹猴代表了唯一适合研究MEDI6570的药理学毒性的物种。

在GLP人体组织交叉反应性研究(实例11)的后续研究中，使用来自3只不同的原初食蟹猴的针对LOX-1染色的福尔马林固定、石蜡包埋骨髓的3个样品进行非GLP研究，其中使用先前仅针对临床前探索性研究开发的免疫组织化学测定法。在所有3个食蟹猴骨髓样品和胎盘阳性对照样品的造血细胞中观察到LOX-1的阳性染色。染色是细胞质染色，强度中等至强，并且存在于具有与髓系一致的形态的细胞中，但不存在于红系型细胞中。目前的结果表明食蟹猴骨髓细胞正常表达LOX-1，因此，食蟹猴代表评价MEDI6570对骨髓的潜在作用的相关动物模型。

在2项非GLP和3项GLP研究中评价了MEDI6570的非临床安全性，包括毒代动力学(TK)和PD参数。2项非GLP研究如下：静脉内PK/PD单剂量研究；四周剂量范围发现重复剂量毒性研究。3项GLP研究如下：13周重复给药毒性研究，13周无治疗期；26周重复剂量毒性研究，13周无治疗期；人体组织交叉反应性研究。

单剂量药代动力学和毒性

将十二只原初雌性食蟹猴(3只猴/组)分配到单剂量非GLP PK/PD研究，并施用0、0.1、0.3或0.6mg/kg MEDI6570的单次IV剂量。采集血清样品以评估21天内MEDI6570的暴露量和总sLOX-1(游离的和结合到MEDI6570的)的浓度。基于血清浓度-时间曲线下面积的估计值，充分表征雌性食蟹猴中MEDI6570的IV PK曲线(表3)。结果证明Cmax与剂量成比例地增加，并且暴露量呈超比例增加，如通过AUC0-inf和AUC0-t所测量。

表3.MEDI6570的单剂量IV PK

AUC_0-inf＝从零至无穷大的浓度-时间曲线下面积；AUC_0-t＝从零到最后一次观测的浓度-时间曲线下面积；CL＝表观清除率；C_max＝最大浓度；IV＝静脉内；PK＝药代动力学；t_1/2＝半衰期；V_D＝分布容积。

尽管本研究的主要目的是评估PK和PD效应，但也观察了猴的MEDI6570相关临床体征。在第1天，给予原初雌性猴(n＝3只/剂量组)单次IV推注0(媒介物对照：25mM组氨酸，7％蔗糖，0.02％聚山梨醇酯80，pH 6.0)、0.1、0.3或0.6mg/kg MEDI6570。剂量体积为1.07mL/kg。在为期21天的研究中采集血样用于PK(即，MEDI6570的浓度)和PD(即，总sLOX-1，作为游离的和结合的sLOX-1的浓度而测量)分析。所有研究用猴都活到了预定的第22天转移到储备种群中。这些猴子耐受治疗，无MEDI6570相关临床体征。NOAEL为0.6mg/kg，即测试的最高剂量，其中平均Cmax为19.2μg/mL，从0至21天的浓度-时间曲线下面积(AUC0-21d)平均值为93.7μg×天/mL。

多剂量药代动力学-4周剂量范围毒性

在第1、8、15和22天向十二只原初雄性食蟹猴(3只猴/组)施用0(媒介物对照；25mM组氨酸，7％蔗糖，0.02％聚山梨醇酯80，pH 6.0)、10或100mg/kg IV每周一次(QW；2mL/kg)或50mg/kg SC QW(1mL/kg)的MEDI6570。剂量体积为2mL/kg IV或1mL/kg SC。

通过IV途径以10和100mg/kg以及通过SC途径以50mg/kg施用4个QW剂量的MEDI6570中的第一个后的PK特征示于表4中。在食蟹猴中，所有PK参数与人IgG1抗体预期的一致(表4)。重复给药后的浓度分布和累积与第一剂后观测到的一致，表明不存在显著水平的研究产品清除性ADA。另外，IV和SC AUC0-t的比较表明SC施用后的暴露指示MEDI6570完全或接近完全吸收到体循环中。

表4.在第一剂后QW持续4周施用的MEDI6570的PK

考虑到猴QW给药，从0至7天的浓度曲线下面积(AUC0-7d)的百分比外推值较高。这并未影响对关键PK参数(包括AUC0-t和Cmax)的估计；Admin＝施用；AUC0-t＝从零到最后一次观测的浓度-时间曲线下面积；Cmax＝最大浓度；IV＝静脉内；PK＝药代动力学；QW＝每周一次；SC＝皮下；t1/2＝半衰期。^a从给药后1-7天计算。

在第25天(最后一剂后3天)处死所有猴子并进行尸检。根据临床体征(包括注射部位的真皮Draize评分)、体重、临床病理学(即，血液学、凝血和临床化学)、器官重量以及宏观和微观病理学来评估毒性。采集血样用于PK、PD、免疫原性和细胞因子水平(即，IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、干扰素γ和TNFα)分析。所有研究用猴均存活至其计划的尸检，耐受治疗而没有任何毒性终点的MEDI6570相关变化，包括细胞因子水平的变化。

所有剂量组的临床体征、组织病理学和TK曲线均未表现出任何表明存在ADA的特征。NOAEL为100mg/kg IV，其中平均C_max为3,282μg/mL，平均AUC_0-7d为6,929μg×天/mL；以及50mg/kg SC，其中平均C_max为1,460μg/mL，平均AUC0_-7d为3,574μg×天/mL；IV和SC NOAEL都是测试的最高剂量水平。

多剂量药代动力学-13周重复剂量毒性

在本研究中，给予原初食蟹猴(n＝3或5只/性别/剂量组)14个QW的MEDI6570 IV推注或SC注射，剂量为0(IV和SC媒介物对照；20mM组氨酸/组氨酸HCl，240mM蔗糖，0.04％w/v聚山梨醇酯80，pH 6.0)、10(IV)、50(SC)或100(IV)mg/kg/剂。剂量体积为1mL/kg IV和/或0.5mL/kg SC。在第95天(最终剂量后3天)对三只猴子/性别/剂量组进行尸检，在另外观察13周后在第183天对其余猴子(对照和100mg/kg剂量组中2只/性别)进行尸检。在整个研究中采集血样用于PK、PD(总sLOX-1)、ADA和细胞因子分析。

在QW IV施用后，以AUC0-t测量的对MEDI6570的总暴露量在10至100mg/kg/剂量之间通常以与剂量成比例的方式增加，其中t1/2为约13天。血浆MEDI6570浓度-时间曲线支持使用每周一次IV施用。在50mg/kg/剂量组中，在QW SC施用后，对MEDI6570的暴露增加长达48小时，表明剂量后吸收阶段。48小时后的浓度缓慢降低或保持在相对稳定的水平直至取样期结束(168小时)。血浆MEDI6570浓度-时间曲线支持使用每周一次SC施用。

在IV或SC施用后，没有观察到与性别有关的MEDI6570暴露的明显差异。在第1天和第85天之间，AUC0-t、C0(IV)和Cmax(SC)在IV给药后增加1.6-3.0倍，在SC给药后增加2.7-3.4倍。与SC施用相比，IV施用后基于剂量标准化AUC的MEDI6570总暴露相似或更高。

毒性评估基于：(i)临床体征(包括注射部位皮肤评分和定性食物消耗)；(ii)体重、血压、呼吸速率、临床病理学(即，血液学、凝血[凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间、纤维蛋白原和D-二聚体]、血小板计数、临床化学和尿分析)的变化；以及(iii)神经学、眼科、心电图描记、骨髓涂片、宏观及微观病理学检查和器官重量。

猴子耐受治疗，任何毒性终点都没有与MEDI6570相关的变化。所有组的临床体征、组织病理学、PK和PD曲线均未表现出任何表明存在ADA的特征。NOAEL为100mg/kg IV，其中第十三个(倒数第二个)剂量后计算的平均TK参数Cmax为5,350μg/mL，AUC0-168hr为547,000μg×h/mL；以及50mg/kg SC，其中第十三个(倒数第二个)剂量后计算的平均PK参数Cmax为1,470μg/mL，AUC0-168hr为224,000μg×h/mL；IV和SC NOAEL都是测试的最高剂量水平。

多剂量药代动力学-26周重复剂量毒性

给予原初和性成熟的食蟹猴(n＝4或6只/性别/剂量组)27个QW的MEDI6570 SC注射，剂量为0(媒介物对照；20mM组氨酸/组氨酸HCl，240mM蔗糖，0.04％w/v聚山梨醇酯80，pH6.0)、10或50mg/kg/剂。剂量体积为0.5mL/kg。在第186天(最终剂量后3天)对四只猴子/性别/剂量组进行尸检，在另外观察13周后在第275天对其余猴子(对照和50mg/kg剂量组中2只/性别)进行尸检。在整个研究中采集血样用于TK、PD(总sLOX-1浓度：游离的和与MEDI6570结合的sLOX-1的总和)和ADA分析。

在QW SC施用于性成熟的食蟹猴之后，通过Cmax和AUC0-t评估的对MEDI6570的总暴露在10与50mg/kg之间以与剂量成比例的方式增加。没有观察到与性别有关的MEDI6570暴露的明显差异。在每周给药一次的情况下，AUC0-t和Cmax在第1天和第176天之间增加了约三倍。血浆MEDI6570浓度-时间曲线支持使用每周一次SC施用。

毒性评估基于：(i)临床体征(包括注射部位皮肤评分和月经出血观察)；(ii)体重、食物消耗、体温、血压、呼吸速率、临床病理学(血液学、凝血、临床化学和尿分析)的变化；(iii)腹部触诊、神经学、眼科、心电图描记、骨髓涂片、宏观及微观病理学检查和器官重量。

猴存活至其计划的尸检，任何研究安全性终点都没有与MEDI6570相关的变化，包括骨髓细胞学以及对雄性或雌性生殖器官的评估。

存在MEDI6570暴露和PD活性的证据，其中检测到极少的ADA。在给药前第1天，对照和MEDI6570给药组之间血浆总sLOX-1浓度相当，而从第一剂后72小时起，MEDI6570给药组的总sLOX-1浓度高于对照，表明在整个研究给药阶段，sLOX-1被MEDI6570接合并暴露于MEDI6570。对血清样品的分析证明在最后一次给药前从以50mg/kg给药的终末处死雌性采集的一个样品中存在ADA。然而，观测到的MEDI6570暴露和总sLOX-1浓度在该雌性中是持续的，表明对PK曲线或sLOX-1接合没有影响。此外，两组的PK和PD曲线、临床体征和组织病理学没有表现出任何指示免疫原性的特征。

NOAEL为50mg/kg/周，即测试的最高剂量，其在第二十六个(倒数第二个)剂量后产生2080μg/mL的平均C_max和276,000μg×h/mL的AUC0-168hr。

实例13：2型糖尿病(T2DM)患者的1期研究

进行了1期随机、盲法、安慰剂对照研究以评价MEDI6570的单次(A部分)和多次(B部分)递增剂量(SAD/MAD)在患有T2DM的参与者中的安全性和药代动力学。选择T2DM患者是因为它们与健康志愿者相比具有升高的sLOX-1水平，并因此可显示出在健康志愿者中难以测量的药效动力学响应。如实例10所示，在T2DM群体和UAP&NSTEMI中sLOX-1水平的分布存在良好的重叠(>90％具有高sLOX)。

在研究的A部分中，将单剂量的MEDI6570(10、30、90、250或500mg SC，n＝36，除了500mg组外每个剂量组n＝6，在500mg组中，n＝12，分成n＝6的2个队列)或安慰剂(n＝12)施用于48名参与者(每个队列中6名为活性药物，2名为安慰剂)。皮下施用10、30、90、250或500mg的单剂量。在研究的B部分中，将MEDI6570(90、150或250mg SC Q4W；n＝30，每组n＝10)或安慰剂(n＝10)分3次(每月一次)施用给总样本量为40名的参与者(每个队列中10名为活性药物，10名为安慰剂)。研究设计如图12所示。

主要目的是评估MEDI6570的单次和多次递增剂量的安全性。在治疗和随访期期间，该目标的终点包括：TEAE和TESAE、12导联ECG的临床重要变化、生命信号、安全性实验室分析。

次要目标包括：评价MEDI6570的单次和多次递增剂量的药代动力学，并评价MEDI6570的单次和多次递增剂量的免疫原性。前者(PK)的终点包括治疗和随访期期间的MEDI6570。后者(免疫原性)的终点包括治疗和随访期期间的ADA和ADA滴度。

探索性目标包括：表征MEDI6570在血液中的靶接合(终点：游离sLOX)，表征MEDI6570对生物标志物的影响(终点：炎性生物标志物(即，hsCRP)的血清浓度)，以及通过CTA表征MEDI6570对高风险冠状动脉斑块和冠状动脉炎症的影响(终点：冠状动脉中低衰减斑块体积(mm3)和血管周围脂肪衰减指数(FAI)从基线冠状动脉CTA到随访CTA的变化)。

采用本发明的设计，假设一个队列的6名MEDI6570受试者中有5名将在sLOX抑制方面有响应，而10名安慰剂受试者中有一名将有响应，则单侧显著性水平为0.05的费希尔精确检验将具有87％的功效来检测每个队列的MEDI6570组与合并的安慰剂组之间的差异。如果真实响应率为80％，则从MEDI6570观察到6名响应者中的5名或6名的概率为66％；如果真实响应率为90％，则从MEDI6570观察到6名响应者中的5名或6名的概率为88％。

参与者的基线特征如表5所示。SAD和MAD队列的平均年龄均在50多岁。在MAD队列中，超过一半的参与者是女性，约一半是西班牙裔。除日裔美国人队列外，所有队列的平均BMI都属于肥胖范围。所有参与者都是糖尿病患者，并且大多数具有血脂异常和高血压的既往病史。然而，很少有既往CAD史，只有一名参与者有既往心肌梗塞史。

表5.1期研究的参与者的基线特征-SAD队列

表5(续).1期研究的参与者的基线特征-MAD队列

不良事件

在本研究的A部分(单次给药队列)中，未报告死亡或危及生命的不良事件(AE)。没有不良事件导致受试者退出研究。没有MEDI6570相关的严重不良事件(SAE)，但观察到两例严重不良事件。250mg队列中的一名受试者对头孢曲松(因尿路感染而开的处方)的过敏反应严重度为3级，导致住院治疗(治疗后65-67天)。500mg队列中的第二名受试者患有严重度为3级的骨髓炎，需要住院治疗(第1剂后170天)。总体而言，在MEDI6570总组和安慰剂组中观察到的AE的频率相似。

在本研究的B部分(多次给药队列)中，类似于A部分，没有报告死亡或危及生命的AE，并且没有不良事件导致受试者退出研究。没有MEDI6570相关的SAE，但是，在MEDI6570治疗的参与者中观察到两例严重不良事件。在150mg队列中，一名受试者患有导致住院治疗的肾结石(第132天-第133天)，而在250mg队列中的第二名受试者患有缺血性结肠炎(第44天-第55天)。总体而言，在MEDI6570总组和安慰剂组中观察到的AE的频率相似。

SAD队列中最常见的治疗出现的不良事件(TEAE)是感染(治疗组中11/36，安慰剂组中1/12)。上呼吸道感染是SAD中最常见的TEAE。然而，11例MEDI6570感染中有7例发生在给药后88天或更长的时间，4例上呼吸道感染中有3例发生在给药后超过88天。与SAD队列相似，感染是MAD队列中报告的最常见的不良事件。然而，与SAD队列不同，MEDI6570总组与安慰剂组的感染频率相似(26.7％对比20.0％-2/10对比8/30)。大多数感染与上呼吸道相关，上呼吸道感染最为常见。

在SAD队列中，总共5名受试者(n＝36)对于治疗出现的ADA呈阳性的，没有受试者具有治疗升高的ADA(ADA滴度增加4倍或更高)。在MAD队列中，总共5名受试者(n＝30)对于治疗出现的ADA呈阳性，并且与SAD相似，没有受试者具有治疗升高的ADA。没有不良事件与具有ADA的受试者相关。

功效-MEDI6570在SAD和MAD研究中以剂量依赖性方式降低游离sLOX-1水平

图13显示了SAD队列中随时间的游离sLOX-1测量值和随时间的sLOX-1相对于基线的百分比变化。数据显示游离sLOX-1水平的剂量依赖性降低。在A部分(SAD数据)中，在90与500mg之间单次给药MEDI6570后，直到给药后第29天，平均血清sLOX-1相对于基线降低大于66％或低于定量限(LLQ＝32.7pg/ml)，表明MEDI6570接合了靶。在250mg队列和两个500mg队列中在第2天观测到的sLOX-1水平低于LLQ(定量水平)。在第2天，在以30mg或更大剂量给药的组中观测到相对于基线的大于70％的变化。在第29天，在以90mg或更大剂量给药的组中观测到相对于基线的大于65％的变化。如在图13A中可见，500mg日裔队列(163)和250mg(134)队列中的slOX-1平均基线值较低。较低的基线值和LLOQ(定量下限)影响图13B所示的平均％变化。

图14显示了MAD队列中随时间的游离sLOX-1测量值和随时间的sLOX-1相对于基线的百分比变化。数据显示游离sLOX-1水平的剂量依赖性降低。如在图14A中可见，在MAD队列中，安慰剂(177)和150mg(166)队列中sLOX的平均基线值较低。在第160天，150mg和250mg队列中的平均sLOX值高于基线。对250mg队列随访至第250天，并且在第250天，平均sLOX值已回到基线(250mg队列是随访至第250天的唯一队列)。如在图14B中可见，在MAD队列中，在第2天，在所有活性药物队列中观测到相对于基线的大于75％的变化。在第29天，在所有活性药物队列中观察到相对于基线的大于50％的变化，并且在250mg队列中观测到相对于基线的大于75％的变化。在两剂后，在第43天，在所有活性药物队列中观测到相对于基线的大于73％的变化。在第57天，在所有活性药物队列中观测到相对于基线的大于50％的变化，在150mg和250mg队列中观测到相对于基线的大于60％的变化，并且在250mg队列中观测到相对于基线的大于75％的变化。在3剂后，在第70天，在所有活性药物队列中观测到相对于基线的大于73％的变化。在MAD研究中，在多剂90mg后，平均血清sLOX-1在第57天相对于基线降低大于50％或低于定量下限，而多剂150mg或250mg MEDI6570后的相应值降低大于70％或低于定量限。

MEDI6570对hsCRP的影响-与安慰剂相比，MEDI6570不会显著改变hsCRP值

hsCRP的血清浓度有时用作炎性生物标志物。本研究没有将hsCRP作为入选标准。SAD队列中安慰剂和MEDI6570治疗的参与者随时间的hsCRP值和相对于基线hsCRP值的％变化相似(数据未显示)。

与SAD队列相似，在MAD队列中，安慰剂和MEDI6570治疗的参与者随时间的hsCRP值相似(数据未显示)。

MEDI6570对脂肪衰减指数的影响-与安慰剂相比，MEDI6570不会显著改变FAI值

FAI是冠状动脉炎症的标志，由冠状动脉计算机断层摄影血管造影测量。治疗组与安慰剂组相比，总体上以及在最严重节段、右冠状动脉(RCA)、左前降支(LAD)和左回旋支(LCX)中，FAI与基线相比没有临床上有意义的变化。所有基线值均在正常范围内(-70HU以下)。较高的值与较大的心血管事件风险相关。

该队列中FAI缺乏可观察到的变化可能是大多数受试者的基线值在正常范围内的结果。基于可用的临床前数据，预期MEDI6570在FAI值异常的受试者中与安慰剂相比显著改变FAI值。预期用于2b期试验的队列(以下实例13)将富含此类个体。

MEDI6570对斑块体积的影响-在MAD队列中MEDI6570证明了与安慰剂相比非钙化斑块体积的数值消退

如图15A所示，当包括进行了基线和随访CTA的所有受试者时(对于所有MEDI6570，n＝27；并且对于安慰剂，n＝10)，与安慰剂相比，在所有MEDI6570组中都注意到了非钙化斑块体积(NCPV)的数值变化(降低)。如图15B所示，当观察存在可修饰的斑块的受试者时，与安慰剂相比，在所有MEDI6570治疗的队列中均存在斑块体积的数值减小。这在仅观察病变最严重的冠状动脉节段时得到证实(图15D)。如在图15C中可见，安慰剂和250mg队列的基线斑块均低于90mg和150mg队列。在具有较高基线斑块值的受试者中观测到NCPV的最强的响应。在250mg队列中的响应可能是由于该组具有相对低的基线，几乎没有空间让斑块消退。

在低衰减NCPV(参见图16)和动脉粥样化体积(图17)以及总斑块体积(图18)方面，还观察到所有MEDI6570治疗组与安慰剂相比的平均降低。未观察到钙化斑块体积方面的显著变化(安慰剂(n＝10)平均变化值＝0.32，90mg(n＝9)平均变化值＝-0.28，150mg(n＝9)平均变化值＝-4.81，250mg(n＝9)平均变化值＝-0.21，所有治疗组(n＝27)平均变化值＝-1.77)。

药代动力学

MEDI6570在T2DM受试者中SC施用后表现出与靶介导的药物处置一致的非线性PK。浓度-时间曲线的特征在于给药后约7天具有峰值的缓慢吸收和非线性消除期。在A部分(SAD)中，在10mg至250mg的单次SC剂量后，C_max和AUC比与剂量成比例的方式更多地增加，而在250-500mg之间，增加似乎更成比例。随着剂量的递增，终末半衰期(t_1/2λz)趋于变长，从30mg的4.6天增加到500mg的11.2天。C_max、AUC和t_1/2λz的受试者间变异性似乎随着剂量增加而降低。在日裔队列(500mg)中，C_max和AUC的几何平均值分别是其他500mg队列的1.4倍和1.8倍(6)。然而，日裔参与者的个体暴露在西方人参与者的变异性范围内。

表6.在T2DM中单剂量后观测到的NCA PK参数。

在B部分中，在第3剂后，第14天的平均浓度是第1剂后第14天的1.5至1.6倍，是第二剂后第14天的1.0至1.3倍。

结论：数据证明MEDI6570以剂量依赖性方式降低了sLOX-1。在A部分(SAD数据)中，在90与500mg之间单次给药MEDI6570后，直到给药后第29天，平均血清sLOX-1相对于基线降低大于66％或低于定量限(LLQ＝32.7pg/ml)，表明MEDI6570接合了靶。在B部分(MAD数据)中，在多剂90mg后，平均血清sLOX-1在第57天相对于基线降低大于50％或低于LLQ，而多剂150mg或250mg MEDI6570后的相应值降低大于70％或低于定量限。这些数据表明，可能需要高于250mg的剂量以在大多数受试者中实现超过90％的sLOX-1降低。MAD数据证明了每月递送一次的适合性：在第2天，在所有队列中观测到相对于基线sLOX-1的大于75％的变化，并且在第43天，在所有队列中观测到相对于基线sLOX-1的大于73％的变化。

1期MAD证明了与安慰剂相比，存在与MEDI6570治疗相关的非钙化斑块体积的数值消退。在基线时具有可检测斑块的受试者中，效果更强。注意，动脉粥样化体积百分比减小1％与复合心血管死亡、MI、卒中和缺血驱动的血运重建的减少有关。因此，通过阻断LOX-1，MEDI6570可降低具有ACS史的患者的CV相关死亡、心肌梗塞(MI)、卒中、缺血驱动的血运重建和心力衰竭住院治疗的风险。

实例14：在具有既往心肌梗塞、持续性炎症和N-末端激素原脑钠肽升高的受试者中的IIb期研究

将开展IIB期、随机(1:1:1:1)、双盲、安慰剂对照、平行组研究以评价MEDI6570在具有既往心肌梗塞、持续性炎症和N-末端激素原脑钠肽升高(n＝约790)的参与者中的功效和安全性。

与安慰剂相比，用MEDI6570阻断LOX-1受体预期将降低冠状动脉疾病的进展(如通过冠状动脉CTA上的非钙化斑块体积评估)。因此，主要终点是从基线到第253天病变最严重的冠状动脉节段中的非钙化斑块体积(NCPVMD)的变化，如通过CTA成像所测量。

研究设计如图19所示。每个组中的150名参与者提供82％的功效来检测NCPV_MD与安慰剂相比相对于基线的11mm³变化，标准偏差(SD)为33mm³，双侧a＝0.05。

剂量方案

治疗组将包括：50mg Q4W、150mg Q4W、250mg Q4W和400mg Q4W。根据I期临床研究中T2DM参与者单次和多次递增剂量的MEDI6570后的PK/PD结果，采用建模和模拟方法选择本研究的剂量。

靶介导的药物处置模型描述了以下五个种类：LOX-1抗体血清浓度、可溶性LOX-1血清浓度和膜结合的LOX-1的量，以及LOX-1单克隆抗体分别与可溶性LOX-1和与膜结合的LOX-1的复合物。通过具有一级吸收以及非特异性线性清除和通过抗体与膜LOX-1结合的非线性靶介导的清除的两室模型描述了SC施用后LOX-1抗体的PK。使用零级生产速率、一级内化和降解速率以及产生可溶性LOX-1的一级酶裂解速率来模拟膜结合的LOX-1的量。随后假定以一级线性消除速率从血清中清除可溶性LOX-1。该模型包括LOX-1抗体与可溶性和膜结合的LOX-1两者的结合，假设结合亲和力相同。

使用非线性混合效应模型和来自1期研究的PKPD数据估计模型参数。在该模型中，将治疗开始前的可溶性LOX-1设定为在1期研究中观察到的各患者的基线可溶性LOX-1水平。在基于文献数据和内部临床前数据进行估计之前，以下参数是固定的：膜LOX-1的内化和降解速率以及可溶性LOX-1在血清中的半衰期。日本裔的影响作为非特异性清除的协变量包括在内。

在MI后的参与者中，基于可用的数据，可溶性LOX水平是在T2DM的1期研究中观测到的水平的3-4倍。假设较高水平的基线可溶性LOX反映更多的膜结合LOX，继而通过靶介导的清除转化为MEDI6570的更高清除。因此，预期在MI后患者中需要较高的剂量以实现与在T2DM患者中相同的药物暴露和sLOX-1抑制。使用包括个体间变异性的模型来模拟10,000名虚拟患者。基线可溶性LOX-1从来自先前研究的MI后患者中的观测值重新取样，以考虑MI后患者中基线可溶性LOX-1与T2DM患者中观测到的基线可溶性LOX-1值相比的预期差异。针对每4周SC施用一次的30mg至500mg的剂量范围进行模拟。

基于该研究的结果，预计最高的400mg Q4W剂量将在大多数参与者中阻断LOX-1并抑制游离sLOX-1。特别地，对于接受400mg Q4W剂量的大多数患者，预期在剂量之间的整个时间内达到至少90％的抑制。例如，sLOX1基线水平与MI后患者的sLOX1基线水平相似的患者的基线sLOX1的中值％可以在剂量之间的整个时间内保持低于10％。预计250mg Q4W的剂量对于大多数患者将实现50％的抑制水平。预期150mg Q4W剂量克服靶介导的药物处置，从而提供LOX-1受体抑制，其转化为对具有既往MI的参与者中预计的平均游离sLOX-1水平的>90％的抑制，特别是对于至少大部分给药间隔而言。对于平均参与者，预期50mg Q4W剂量将在部分给药间隔内但不持续整个给药间隔抑制LOX-1。预期50mg Q4W剂量可以合理地估计出具有既往MI的参与者的起效时间。

入选和排除标准

入选标准为：

-≥40岁

-必须满足所有以下3个标准：

〇筛选当天在MI后30-365天(STEMI或NSTEMI)

〇筛选当天hs-CRP水平≥1mg/L

-体重指数为18至40kg/m²

-不能怀孕或哺乳，必须是不具备生育能力的人(绝经后并且LH/FSH在绝经后的范围内，或有不可逆转手术绝育的证明文件)-必须具有可评价的、随机化前的冠状动脉CTA，有可量化的、非钙化的斑块

应根据MI后患者长期管理的现有指南考虑参与者使用高强度他汀类药物。参与者应理想地在研究的整个治疗期内使用稳定剂量的降脂治疗；因此，应努力在随机化前最大化他汀类药物的强度。

心血管排除标准包括：

-计划的PCI

-CABG史或计划的CABG

-过去3个月内发生过MI后心包炎

-持续的NYHA IV HF

-心房颤动

-持续性异常BP(SBP<90或>180，DBP>100mmHg)

次要终点

次要终点包括：

-NT-proBNP浓度的变化

-以下方面的变化：通过超声心动图测量的LVEF(左心室射血分数)和GLS(整体纵向应变)(在所有患者中进行评估，包括基线时LVEF>50％的患者，其中由于该值已经在“正常范围”内，效应可能不可见；以及基线LVEF<50％的亚组中的患者)

-以下方面的变化：通过CTA成像测量的整体非钙化斑块体积、低衰减斑块体积和脂肪衰减指数(炎症)

-干预和随访期期间在血清中测量的MEDI6570的免疫原性(抗药物抗体和滴度)

-干预和随访期期间在血清中测量的MEDI6570的PK，包括C_max(最大浓度)和t_1/2(半衰期)。

探索性终点

探索性终点包括：

-以下方面的变化：hs-CRP、IL-6、MPO(髓过氧化物酶)、MMP-9(基质金属肽酶9)和游离sLOX-1

-以下方面的变化：通过超声心动图测量的舒张末期容积指数、收缩末期容积指数、左心房容积指数、E/e’比率[二尖瓣充盈早期速度/二尖瓣环舒张早期速度(比率)]

-以下方面的变化：通过CTA成像测量的％动脉粥样化体积和高风险斑块特征(正性重塑、餐巾环征(napkin ring sign)、点状钙化和低衰减斑块)。脂肪放射组学谱的变化(血管周隙中的炎症)。

-至MACE(CV死亡、MI、卒中或冠状动脉血运重建的复合事件)的时间

-至CV死亡或心力衰竭住院治疗的时间。

实例15：sLOX-1测定方案

试剂制备：捕获试剂：临用前，将捕获试剂在1x DPBS中稀释至5.0μg/mL。检测试剂：临用前，将检测试剂在测定稀释剂中稀释至1.0μg/mL。Tris洗涤缓冲液：1xTris洗涤缓冲液由10x储备液通过用实验室级水稀释而制备。读数缓冲液T：2x读数缓冲液T由4x储备液通过用实验室级水稀释而制备，并在制备当天使用。3％和1％封闭剂A：在1x DPBS中以3％(用作封闭缓冲液)和1％(用作测定稀释剂)制备封闭剂A。在制备后24小时内使用3％和1％的封闭剂A。

测定程序：

1)制备捕获抗体并以25μL/孔添加到96孔高结合板中。将板密封并在冰箱中孵育最少一夜至最多三夜。

2)第二天，将板用300μL/孔的洗涤缓冲液洗涤4次并吸干。向板中添加150μL/孔的封闭缓冲液。将板密封并在设定为25℃(标称)和700rpm的板振荡器中孵育60±10分钟。

3)将板用300μL/孔的洗涤缓冲液洗涤4次并吸干。向板中添加25μL/孔的稀释剂2。将板密封并在设定为25℃(标称)和700rpm的板振荡器中孵育30±5分钟。

4)不洗涤板，将25μL标准品/VC/样品添加到板的适当孔中(来自步骤3的保留在孔中的25μL稀释剂2构成MRD)。将板密封并在设定为25℃(标称)和700rpm的板振荡器中孵育120±10分钟。

5)将板用300μL/孔的洗涤缓冲液洗涤4次并吸干。向板的适当孔中添加25μL/孔的检测试剂。将板密封并在设定为25℃(标称)和700rpm的板振荡器中孵育60±5分钟。

6)将板用300μL/孔的洗涤缓冲液洗涤4次并吸干。向板中添加150μL/孔的2x读数缓冲液T。在10分钟内在仪器上读取板。

数据分析：在工作台(v4.0.12)软件中使用四参数逻辑曲线拟合进行分析，响应加权因子为1/y2。

序列表

<110> 英商梅迪缪思有限公司（MedImmune Limited）

<120> 用于治疗血管炎症、动脉粥样硬化和相关病症的方法

<130> LOX1-500-WO-PCT

<160> 14

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 1

Glu Leu Ser Met His

1 5

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 2

Gly Phe Asp Pro Glu Asp Phe Lys Tyr His Thr His Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 3

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 3

Val Trp Gly Thr Gln Gly Lys Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr Tyr Tyr

1 5 10 15

Gly Met Asp Val

20

<210> 4

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 4

Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His

1 5 10

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 5

Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser

1 5

<210> 6

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 6

Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Gly Trp Val

1 5 10

<210> 7

<211> 387

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 7

caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcgcctc cgtgaaggtg 60

tcctgcaagg tgtccggcta caccctgacc gagctgtcca tgcactgggt ccgacaggcc 120

cctggcaagg gcctggaatg gatgggcggc ttcgaccccg aggacttcaa gtaccacacc 180

caccagaaat tccagggcag agtgaccatg accgaggaca cctccaccga caccgcctac 240

atggaactga gcagcctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgtgc cctggtctgg 300

ggcacacagg gaaagggcgt gcggggctgg gactactact acggcatgga cgtgtggggg 360

caggggacca cggtcaccgt ctcctca 387

<210> 8

<211> 129

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 8

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Phe Lys Tyr His Thr His Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Leu Val Trp Gly Thr Gln Gly Lys Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr

100 105 110

Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser

<210> 9

<211> 333

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 9

cagtctgtcg tgacgcagcc tccttctgtg tctggtgctc ctggccagag agtgaccatc 60

tcttgtaccg gctcctcctc taacatcggc gctggctacg atgtgcactg gtatcagcag 120

ctgcctggca cagctcccaa gctgctgatc tacggcaact ccaacagacc ttctggcgtg 180

cccgacagat tctccggctc taagtctggc acctccgctt ctctggctat cactggactg 240

caggccgagg acgaggccga ctactactgc cagtcttacg actcctctct gtccggatgg 300

gtgttcggcg gagggaccaa gctgaccgtc cta 333

<210> 10

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 10

Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser

85 90 95

Leu Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 11

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 11

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 12

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 12

Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser

1 5 10 15

Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp

20 25 30

Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro

35 40 45

Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn

50 55 60

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys

65 70 75 80

Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val

85 90 95

Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

100 105

<210> 13

<211> 459

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 13

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Phe Lys Tyr His Thr His Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Leu Val Trp Gly Thr Gln Gly Lys Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr

100 105 110

Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser

130 135 140

Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

145 150 155 160

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr

165 170 175

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

180 185 190

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln

195 200 205

Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

210 215 220

Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro

225 230 235 240

Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro

245 250 255

Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr

260 265 270

Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn

275 280 285

Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg

290 295 300

Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

305 310 315 320

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

325 330 335

Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

340 345 350

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu

355 360 365

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

370 375 380

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

385 390 395 400

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

405 410 415

Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly

420 425 430

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

435 440 445

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450 455

<210> 14

<211> 217

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 14

Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser

85 90 95

Leu Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu

115 120 125

Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe

130 135 140

Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val

145 150 155 160

Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys

165 170 175

Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser

180 185 190

His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu

195 200 205

Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215

Claims (32)

1.一种在治疗受试者的与血管炎症、冠状动脉炎症和/或动脉粥样硬化相关的疾病的方法中使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法包括向该受试者施用该LOX-1结合蛋白，并且其中该方法减小该受试者的非钙化冠状动脉斑块体积和/或低衰减斑块体积。

2.一种在减小有需要的受试者的冠状动脉斑块体积的方法中使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法包括向该受试者施用治疗有效量的该LOX-1结合蛋白。

3.一种在预防有需要的受试者的心力衰竭的方法中使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法包括向该受试者施用治疗有效量的该LOX-1结合蛋白。

4.一种在减少有需要的受试者的血管和/或冠状动脉炎症的方法中使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法包括向该受试者施用治疗有效量的该LOX-1结合蛋白。

5.一种在治疗有需要的受试者的动脉粥样硬化的方法中使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法包括向该受试者施用治疗有效量的该LOX-1结合蛋白，并且其中该方法减小该受试者的非钙化冠状动脉斑块体积。

6.根据任一前述权利要求所述使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法包括向该受试者施用多个剂量的该LOX-1结合蛋白，其中每个剂量在紧接的前一剂量后约4周向该受试者施用。

7.根据前述权利要求中任一项所述使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法减小该受试者的非钙化冠状动脉斑块体积、低衰减冠状动脉斑块体积和/或％动脉粥样化。

8.根据任一前述权利要求所述使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法减小该受试者病变最严重的冠状动脉节段中的非钙化冠状动脉斑块体积、低衰减冠状动脉斑块体积和/或％动脉粥样化。

9.根据任一前述权利要求所述使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法减小该受试者的整体非钙化冠状动脉斑块体积、整体低衰减冠状动脉斑块体积和/或整体％动脉粥样化。

10.根据任一前述权利要求所述使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法使该受试者病变最严重的冠状动脉节段中的非钙化冠状动脉斑块体积或该受试者的整体非钙化冠状动脉斑块体积减小至少1mm³、至少2mm³、至少3mm³、至少4mm³、至少5mm³、至少6mm³、至少7mm³、至少8mm³、至少9mm³或至少10mm³，合适地其中该方法使该受试者病变最严重的冠状动脉节段中的非钙化冠状动脉斑块体积或该受试者的整体非钙化冠状动脉斑块体积减小至少10mm³。

11.根据任一前述权利要求所述使用的LOX-1结合蛋白，其中在施用该LOX-1结合蛋白之前，该受试者具有可通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影检测到的非钙化斑块，任选地其中该方法包括通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影测量该受试者的非钙化冠状动脉斑块体积，并且如果该受试者具有可检测到的非钙化冠状动脉斑块，则选择该受试者用该LOX-1结合蛋白进行治疗。

12.根据任一前述权利要求所述使用的LOX-1结合蛋白，其中在施用该LOX-1结合蛋白之前，该受试者已经经历心肌梗塞。

13.根据任一前述权利要求所述使用的LOX-1结合蛋白，其中与健康受试者相比，该受试者具有与升高的血清可溶性LOX-1水平相关的病况。

14.根据权利要求13所述使用的LOX-1结合蛋白，其中该受试者患有糖尿病，诸如2型糖尿病。

15.根据任一前述权利要求所述使用的LOX-1结合蛋白，其中该受试者患有心血管疾病或有发生心血管疾病的风险，任选地其中该心血管疾病与血管炎症、冠状动脉炎症和/或动脉粥样硬化相关。

16.根据任一前述权利要求所述使用的LOX-1结合蛋白，其中该受试者患有选自以下项的疾病或有发生这些疾病的风险：急性冠状动脉综合征(ACS)、心肌梗塞(MI)、卒中、冠状动脉疾病(CAD)、颈动脉疾病、外周动脉疾病、动脉粥样硬化相关的动脉瘤、血管功能失调、再狭窄、再灌注损伤、缺血、微血管疾病和心肌缺血。

17.根据任一前述权利要求所述使用的LOX-1结合蛋白，其中该受试者患有心力衰竭或有发生心力衰竭的风险。

18.根据任一前述权利要求所述使用的LOX-1结合蛋白，其中向该受试者施用该LOX-1结合蛋白的步骤包括施用：

约30mg、约50mg、约90mg、约150mg、约250mg、约400mg或约500mg的剂量；或者

约30至约500mg LOX-1结合蛋白、约50至约500mg LOX-1结合蛋白、约90至约500mgLOX-1结合蛋白、约50mg至约400mg、约150至约400mg或约250至约400mg LOX-1结合蛋白的剂量。

19.根据任一前述权利要求所述使用的LOX-1结合蛋白，其中向该受试者施用该LOX-1结合蛋白的步骤包括施用约30mg、约50mg、约90mg、约250mg、约400mg或约500mg的剂量，任选地其中每个剂量为约90mg、约150mg、约250mg或约400mg的剂量。

20.根据权利要求19所述使用的LOX-1结合蛋白，其中每个剂量为约150mg或至少150mg，其中每个剂量为约400mg，或者其中每个剂量为约250mg。

21.根据任一前述权利要求所述使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法包括以下步骤：向该受试者施用多个剂量的该LOX-1结合蛋白，其中每个剂量在紧接的前一剂量后约4周向该受试者施用，其中每个剂量为约50mg、约90mg、约150mg、约250mg或约400mg的剂量，任选地约150mg、约250mg或约400mg的剂量，并且其中每个剂量皮下施用。

22.根据任一前述权利要求所述使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法减小该受试者的非钙化冠状动脉斑块体积和/或该受试者的低衰减斑块体积和/或该受试者的％动脉粥样化，其中非钙化冠状动脉斑块体积和/或低衰减斑块体积和/或％动脉粥样化的该减小通过对基线时和治疗约12周后、治疗约16周后、治疗约17周后、开始治疗后约121天、治疗约32周后、治疗约36周后或开始治疗后约252天的非钙化冠状动脉斑块体积和/或低衰减斑块体积和/或％动脉粥样化进行比较来评估，任选地其中非钙化冠状动脉斑块体积、低衰减斑块体积和/或％动脉粥样化的该减小相对于基线时病变最严重的冠状动脉节段来评估。

23.根据任一前述权利要求所述使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法减小该受试者的血管周围脂肪衰减指数，如通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影所评估。

24.根据任一前述权利要求所述使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法增加该受试者的冠状动脉管腔体积和/或动脉血流储备，如通过冠状动脉计算机断层摄影血管造影所评估。

25.根据任一前述权利要求所述使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法引起：左心室射血分数(LVEF)增加、该受试者的整体纵向应变(GLS)增加和/或该受试者的E/e’比(二尖瓣充盈早期速度/二尖瓣环舒张早期速度)降低，如通过超声心动图所评估。

26.一种在治疗或预防有需要的受试者的疾病的方法中使用的LOX-1结合蛋白，其中该方法包括向该受试者施用该LOX-1结合蛋白，其中向该受试者施用该LOX-1结合蛋白的步骤包括施用约30mg、约50mg、约90mg、约150mg、约250mg、约400mg或约500mg的剂量，其中该方法包括向该受试者施用多个剂量的该LOX-1结合蛋白，并且其中每个剂量在紧接的前一剂量后约4周向该受试者施用。

27.根据权利要求26所述的方法，其中该方法减小该受试者的非钙化冠状动脉斑块体积和/或低衰减斑块体积，其中该疾病是受试者的与血管炎症、冠状动脉炎症和/或动脉粥样硬化相关的疾病，其中该疾病是心力衰竭，其中该LOX-1结合蛋白在减小有需要的受试者的冠状动脉斑块体积的方法中使用，其中该LOX-1结合蛋白在减少有需要的受试者的血管和/或冠状动脉炎症的方法中使用，并且/或者其中该LOX-1结合蛋白在治疗有需要的受试者的动脉粥样硬化的方法中使用。

28.根据前述权利要求中任一项所述使用的LOX-1结合蛋白，其中该LOX-1结合蛋白是抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段，任选地其中该抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段包括：

包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链互补决定区1(HCDR1)；

包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链互补决定区2(HCDR2)；

包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链互补决定区3(HCDR3)；

包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链互补决定区1(LCDR1)；

包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链互补决定区2(LCDR2)；以及

包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的轻链互补决定区3(LCDR3)。

29.根据权利要求28所述使用的LOX-1结合蛋白，其中该抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段包含：

(i)与SEQ ID NO:8的重链可变区序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列；和/或

(ii)与SEQ ID NO:10的轻链可变区序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。

30.根据权利要求29所述使用的LOX-1结合蛋白，其中该抗LOX-1抗体或其LOX-1结合片段包含：SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或SEQ ID NO:10的氨基酸序列。

31.根据权利要求28-30中任一项所述使用的LOX-1结合蛋白，其中该抗LOX-1抗体包含轻链免疫球蛋白恒定结构域，该恒定结构域是人Igλ恒定结构域，任选地其中该抗LOX-1抗体包含人IgG1重链恒定结构域。

32.根据权利要求31所述使用的LOX-1结合蛋白，其中IgG1恒定Fc区结构域在位置234、235和331处含有突变，其中位置编号根据Kabat中的EU索引，任选地其中该IgG1 Fc结构域含有突变L234F、L235E和P331S，其中位置编号根据Kabat中的EU索引。