CN117157323A - 新型多特异性抗体 - Google Patents
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Abstract
本公开涉及一种多特异性抗体，其包含结合LAG‑3的结合结构域和结合PD‑L1的结合结构域。这种多特异性抗体比LAG‑3和PD‑L1参考抗体的组合具有相当、或相等或更高的效价。还提供了一种用于治疗疾病、特别是与被抑制的免疫系统相关的疾病、诸如癌症的方法，其使用本公开的多特异性抗体。本公开还涉及一种载体和细胞，其包含编码LAG‑3和PD‑L1结合结构域的重链可变区的核酸。
Description
技术领域
本公开涉及抗体领域。具体而言，其涉及用于治疗与异常细胞相关的疾病的治疗性抗体的领域。更具体而言，其涉及结合LAG-3和B7家族蛋白质、特别是PD-L1的新型多特异性抗体及其变体。
背景技术
尽管在该疾病的治疗方面取得了许多进展，并且在导致癌症的分子事件方面的知识有所增加，但癌症仍然是世界上主要的死亡原因。传统上，大多数癌症药物的发现聚焦于阻断必要细胞功能和杀灭分裂细胞的药物。然而，在晚期癌症的情况下，无论施用多么积极，甚至于患者因治疗而遭受危及生命的副作用的程度，化学疗法都很少能完全治愈。在大多数情况下，患者的肿瘤停止生长或暂时缩小(称为缓解)不久后再次开始增生，有时速度更快(称为复发)，且变得越来越难以治疗。在过去的数年里，癌症药物开发的重点已从广泛的细胞毒性化学疗法转移至毒性较小的靶向细胞抑制疗法(targeted cytostatictherapy)。用靶向疗法治疗晚期癌症已在白血病及一些其他癌症中得到临床验证。然而，在大多数癌症中，靶向方法仍被证明不足以完全消除大多数患者的癌症。
已使用各种不同方法达成癌症的靶向，包括例如针对癌症赖以生存和/或生长的信号传导蛋白质的小分子；具有肿瘤特异性蛋白质的疫苗；用主动杀灭肿瘤细胞和将细胞毒性分子靶向肿瘤的抗体的细胞疗法；干扰信号传导和/或将宿主的免疫系统(再)导向肿瘤细胞。
一类开发中的治疗性抗体是双特异性抗体，其包含两种不同结合位点，该位点结合不同抗原或相同抗原上的不同表位。双特异性抗体可针对多种应用进行设计。首先，双特异性抗体可提供比单特异性抗体更高的组织特异性。多种肿瘤相关抗原不仅由肿瘤细胞(过度)表达，亦在正常、健康的细胞上表达。针对涉及特定癌症类型的两种不同肿瘤相关抗原的双特异性抗体可将抗体特异性靶向抗体诱导肿瘤细胞杀灭的肿瘤部位，从而防止与仅表达其中一种抗原的非肿瘤细胞结合并因此减少离位(off-site)毒性。其他作用机制包括例如免疫细胞与肿瘤细胞的接合和肿瘤生长所需的两个信号传导路径的破坏。
免疫检查点蛋白例如PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG-3和TIM-3是抗体疗法的受关注目标。至今，已描述许多靶向LAG-3或PD-L1的单特异性抗体以及某些结合LAG-3和PD-L1的双特异性抗体。然而，这些双特异性抗体中的每个在生产有效治疗药物中有其自身挑战。因此，仍然需要开发新颖、有效的LAG-3x PD-L1双特异性抗体。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种用于治疗人类疾病(特别是用于治疗癌症)的新型药物。此目的通过提供包含抗人类LAG-3结合结构域及抗人类PD-L1结合结构域的多特异性抗体来满足。
在某些实施方式中，本公开提供了一种多特异性抗体，其包含结合LAG-3的结合结构域和结合PD-L1的结合结构域；或其保持所述抗体的结合特异性的变体，其中所述抗体或变体具有相比于参考抗体的组合至少相当、或相等或更高的效价(potency)。在某些实施方式中，参考抗体的组合包含：包含具有如SEQ ID NO:27中所示的氨基酸序列的两个重链可变区和具有如SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列的两个轻链可变区的参考抗体(瑞拉利单抗(relatlimab)类似物抗体)、以及包含具有如SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列的两个重链可变区和具有如SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列的两个轻链可变区的参考抗体(阿特珠单抗(atezolizumab)类似物抗体)。
在某些实施方式中，本公开还提供了一种多特异性抗体、或其保持所述抗体的结合特异性的变体，其中所述抗体或其变体包含特异性结合LAG-3的胞外结构域的结合结构域和特异性结合B7家族蛋白质的胞外结构域的结合结构域，其中LAG-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含具有如SEQ ID NO:1至17或SEQ ID NO:52至59中任一者所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在某些实施方式中，本公开还提供了一种药物组合物，其包含有效量的如本文所述的多特异性抗体或其变体。
在某些实施方式中，本公开还提供了如本文所述的多特异性抗体或其变体、或药物组合物，其用作药物。
在某些实施方式中，本公开还提供了如本文所述的多特异性抗体或其变体、或药物组合物，其用于治疗与被抑制的免疫系统相关的疾病。在某些实施方式中，本公开提供如本文所述的多特异性抗体或其变体、或药物组合物，其用于治疗癌症。
在某些实施方式中，本公开还提供了一种用于治疗(a)疾病、或(b)与被抑制的免疫系统相关的疾病、或c)癌症的方法，其包含向有需要的个体施用有效量的如本文所述的多特异性抗体或其变体、或药物组合物。
在某些实施方式中，本公开还提供了一种载体，其包含编码如本文所述的LAG-3结合结构域的重链可变区的核酸序列和编码如本文所述的PD-L1结合结构域的重链可变区的核酸序列。
在某些实施方式中，本公开还提供了一种细胞，其包含编码如本文所述的LAG-3结合结构域的重链可变区的核酸序列和编码如本文所述的PD-L1结合结构域的重链可变区的核酸序列。
在某些实施方式中，本公开还提供了一种细胞，其生产如本文所述的多特异性抗体或其变体。
在某些实施方式中，本公开提供了一种用于生产如本文所述的多特异性抗体的变体的方法、以及由此方法获得的变体。
具体实施方式
在某些实施方式中，本公开提供了一种多特异性抗体，其包含结合LAG-3的结合结构域和结合PD-L1的结合结构域；或其保持所述抗体的结合特异性的变体，其中所述抗体或变体具有相比于参考抗体的组合至少相当、或相等或更高的效价，其中参考抗体的组合包含：包含具有如SEQ ID NO:27中所示的氨基酸序列的两个重链可变区和具有如SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列的两个轻链可变区的参考抗体，以及包含具有如SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列的两个重链可变区和具有如SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列的两个轻链可变区的参考抗体。
LAG-3是以许多不同名称而为已知的，诸如淋巴球活化3；淋巴球活化基因3；CD223抗原；蛋白质FDC；CD223；LAG-3；或FDC。LAG3的外部Id是：HGNC:6476；Entrez Gene:3902；Ensembl:ENSG00000089692；OMIM:153337；及UniProtKB:P18627。LAG-3与CD4密切相关。LAG-3位于与CD4基因相邻的人类12号染色体(12p13.32)上，并且其序列与CD4大约20％相同。LAG-3蛋白以与CD4相比更大的亲和力结合主要组织兼容性复合体2(MHC II类)的非全角(nonholomorphic)区。LAG-3是在调节T细胞(Treg)和无反应性(anergic)T细胞两者上协调地上调的各种免疫检查点受体中的一者。LAG-3可负调控T细胞增生、活化和恒定。
PD-L1是1型跨膜蛋白，其在诸如妊娠、组织同种异体移植物、自体免疫疾病和其他疾病状态(诸如肝炎)的特定事件期间，在抑制免疫反应中发挥作用。PD-L1在各种类型的癌症中表达，尤其是NSCLC(Boland等人，2013；Velcheti等人，2014)、黑色素瘤、肾细胞癌、胃癌、肝细胞癌、以及各种白血病及多发性骨髓瘤(Bernstein等人，2014；Thompson等人，2005)。PD-L1存在于癌细胞的细胞质及质膜中，但并非所有癌症或所有肿瘤内的细胞都表达PD-L1(Dong等人，2002)。多种肿瘤微环境细胞通过上调PD-L1表达来促成免疫抑制。此效应被称为“适应性免疫抗性(adaptive immune resistance)”，因为肿瘤通过回应于由活化T细胞生产的IFN-γ而诱导PD-L1来保护自己(Sharma等人，2017)。PD-L1亦可通过致癌基因调控，此机制称为固有免疫抗性(Akbay等人，2013)。在肿瘤微环境中，PD-L1亦表达于骨髓细胞及活化T细胞上(Tumeh等人，2014)。PD-L1的表达由多种促炎分子诱导，包括I和II型IFN-γ、TNF-α、LPS、GM-CSF和VEGF、以及细胞介素IL-10和IL-4，其中IFN-γ是最有效的诱导物(Sznol和Chen,2013)。
根据本公开的多特异性抗体是呈任何抗体形式的抗体，其包含至少两个对于至少两种不同目标或表位具有特异性的结合结构域。在某些实施方式中，本公开的多特异性抗体是双特异性抗体。在某些实施方式中，本公开的多特异性抗体包含Fc区或其部分。在某些实施方式中，本公开的多特异性抗体是IgG1抗体。
如本文所述的多特异性抗体的“变体(variant)”包含该多特异性抗体的功能部分、衍生物、和/或类似物。变体可以是结构变体，包括但不限于抗体的片段，诸如例如Fab片段或单链可变片段(scFv)。变体可以是序列变体。变体可以是结构及序列变体。变体保持抗体的结合特异性，但不一定保持结合亲和力。
在某些实施方式中，LAG-3和/或PD-L1结合结构域至少包含重链可变区和轻链可变区。轻链可变区可以是如本文进一步描述的任何合适的轻链可变区。在某些实施方式中，轻链可变区优选地是能够与具有不同表位特异性的多个重链配对的轻链的轻链可变区。该轻链在本领域中也称为“共同轻链(common light chain)”。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体包含结合LAG-3的单一结合结构域和/或结合PD-L1的单一结合结构域。换言之，在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体对于结合LAG-3是单价的和/或对于结合PD-L1是单价的。在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体对于结合LAG-3和PD-L1两者是单价的。
确定多特异性抗体或变体是否具有相比于参考抗体的组合相当、或相等或更高的效价，可通过使用相同研究条件在相同类型的研究中测量多特异性抗体及抗体的组合两者的效价来完成。因此，在某些实施方式中，使用相同研究条件在相同类型的研究中测量多特异性抗体或其变体的效价。
在某些实施方式中，至少相当的效价是在参考抗体的组合的效价的5倍范围内的效价，且包括与参考抗体的组合的效价的5、4、3或2倍、优选地3或2倍偏差。
在本公开的上下文中，“效价(potency)”是指多特异性抗体或其变体的功能活性，其可在体外或体内研究中确定。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的效价是在体内研究中确定，优选地是在体内小鼠模型中，诸如例如带有人类MDA-231肿瘤的HuNSGTM小鼠模型。在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的效价通过在此类体内小鼠研究中测量肿瘤体积减少来确定。如本文所提供的多特异性抗体所诱导的肿瘤体积减少是用如实施例4中所述的方法确定。
在某些实施方式中，相当的效价是在参考抗体的组合的肿瘤体积减少的5倍范围内的肿瘤体积减少，且包括与参考抗体的组合的肿瘤体积减少的5、4、3或2倍、优选地3或2倍偏差。
在某些实施方式中，效价是在体外研究中确定，诸如例如阻断测定，包括但不限于PD-1/LAG-3或PD-L1/LAG-3报导子测定，优选地是PD-1/LAG-3报导子测定，诸如例如实施例2中所述；或T细胞活化测定，包括但不限于SEB测定，优选地是SEB测定，诸如例如实施例2中所述；抗原回忆测定(antigen recall assay)；或MLR测定。在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体和参考抗体的组合的效价通过测量它们在阻断配体或受体结合LAG-3和/或PD-L1、优选地配体或受体结合LAG-3和PD-L1的效价确定。用如实施例2中所述的方法测量本文所提供的多特异性抗体阻断配体或受体结合LAG-3和/或PD-L1的效价。简言之，PD-1/LAG-3报导子测定是使用表达PD-1和LAG-3的Jurkat T细胞作为效应细胞及表达PD-L1的Raji细胞作为目标细胞来执行。制备PD-1和LAG-3效应细胞并将其以每孔100000个细胞接种。以6步骤半对数滴定以等摩尔量添加测试及对照IgG，接着添加Raji细胞(每孔25000个)。通过添加部分纯化的葡萄球菌肠毒素D(ppSED，使用用阳性测定对照达到最高反应的浓度，诸如实施例2中的16.6ng/mL或实施例5中的150ng/mL)活化T细胞。在37℃下培养6小时后，确定荧光素酶报导子基因活性。
在某些实施方式中，相当的效价是阻断配体或受体结合LAG-3和/或PD-L1、优选LAG-3和PD-L1的效价，其在参考抗体的组合阻断配体或受体结合LAG-3和/或PD-L1、优选地LAG-3和PD-L1的效价的5倍范围内，且包括与参考抗体的组合阻断配体或受体结合LAG-3和/或PD-L1、优选LAG-3和PD-L1的效价的5、4、3或2倍、优选地3或2倍偏差。在某些实施方式中，参考抗体的组合包含抗LAG-3抗体瑞拉利单抗的类似物及抗PD-L1抗体阿特珠单抗的类似物。瑞拉利单抗类似物具有与瑞拉利单抗相同的重链可变区序列(SEQ ID NO:27)。瑞拉利单抗类似物抗体具有与瑞拉利单抗相同的轻链可变区序列(SEQ ID NO:28)。阿特珠单抗类似物具有与阿特珠单抗相同的重链可变区序列(SEQ ID NO:25)。阿特珠单抗类似物抗体具有与阿特珠单抗相同的轻链可变区序列(SEQ ID NO:26)。参考抗体优选地是使用与多特异性抗体或其变体相同的生产方法生产。优选地，本公开的多特异性抗体或其变体和参考抗体的组合的LAG-3和PD-L1结合结构域是以等摩尔浓度使用，亦即当多特异性抗体或其变体是以100μg/mL使用时，参考抗体的组合包含50μg/mL的LAG-3结合参考抗体和50μg/mL的PD-L1结合参考抗体。
在某些实施方式中，本公开提供了一种多特异性抗体、或其保持所述抗体的结合特异性的变体，其中所述抗体或其变体包含特异性结合LAG-3的胞外结构域的结合结构域和特异性结合B7家族蛋白质的胞外结构域的结合结构域。
在某些实施方式中，本公开的多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含重链可变区，其中该重链可变区包含具有如SEQ ID NO:1至17或SEQ ID NO:52至59中所示的氨基酸序列的重链可变区中的一者的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。在本文所提供的序列表中，根据Kabat的HCDR是以粗体标示并加下划线。可使用不同方法定义CDR序列，包括但不限于根据Kabat编号方案(Kabat等人，J.Biol.Chem.252:6609-6616(1977)；和/或Kabat等人，美国卫生及公共服务部(U.S.Dept.of Health andHuman Services)，“Sequences of proteins of immunological interest”(1991))、Chothia编号方案(Chothia等人，J.Mol.Biol.196:901-917(1987)；Chothia等人，Nature342:877-883,1989；和/或Al-Lazikani B.等人，J.Mol.Biol.,273:927-948(1997))、Honegger和Plukthun的编号系统(Honegger和Plückthun,J.Mol.Biol.,309:657-670(2001))、MacCallum的编号系统(MacCallum等人，J.Mol.Biol.262:732-745(1996)；和/或Abhinandan和Martin,Mol.Immunol.,45:3832-3839(2008))、Lefranc的编号系统(LefrancM.P.等人，Dev.Comp.Immunol.,27:55-77(2003)；和/或Honegger和Plückthun,J.Mol.Biol.,309:657-670(2001))、或根据IMGT(论述于Giudicelli等人，Nucleic AcidsRes.25:206-211(1997))。
这些编号方案中的每个基于在重链或轻链可变区中的氨基酸残基对抗原结合的预测贡献来定义CDR。因此，鉴定CDR的各方法可用于鉴定本公开的结合结构域的CDR。在某些实施方式中，本公开的结合结构域的重链CDR是根据Kabat、Chothia或IMGT。在某些实施方式中，本公开的结合结构域的重链CDR是根据Kabat。在某些实施方式中，本公开的结合结构域的重链CDR是根据Chothia。在某些实施方式中，本公开的结合结构域的重链CDR是根据IMGT。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:9中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
-具有如SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:54中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:55中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；或
-具有如SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:60、SEQ ID NO:61和SEQ ID NO:62中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:60、SEQ ID NO:63和SEQ ID NO:62中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:67、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:76、SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:78中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:79、SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:82、SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:85、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其分别如SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:76、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:92中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:76、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:93中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:94、SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:97、SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:97、SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列，
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:119中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:120中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:121中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:122中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:123中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列；或
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列；
其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:54中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:55中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；或
-具有如SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:60、SEQ ID NO:61和SEQ ID NO:62中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:97、SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:97、SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:119中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:120中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:121中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:122中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:123中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列；或
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列；
其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-具有如SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:54中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:55中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；或
-具有如SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:119中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:120中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:121中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:122中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:123中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列；或
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列；
其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含具有如SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含具有如SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含具有分别如SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含具有分别如SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:9中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:54中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:55中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；或
-具有如SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:60、SEQ ID NO:61和SEQ ID NO:62中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:60、SEQ ID NO:63和SEQ ID NO:62中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:67、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:76、SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:78中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:79、SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:82、SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:85、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:88、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:76、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:92中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:76、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:93中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:94、SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:97、SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:97、SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:119中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:120中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:121中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:122中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:123中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列；或
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:54中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:55中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；或
-具有如SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:60、SEQ ID NO:61和SEQ ID NO:62中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:97、SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:97、SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:119中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:120中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:121中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:122中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:123中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列；或
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-具有如SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:54中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:55中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；或
-具有如SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:119中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:120中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:121中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:122中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:123中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列；或
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含具有如SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含具有分别如SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含具有如SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含具有分别如SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含具有如SEQID NO:1至17或SEQ ID NO:52至59中任一者所示的氨基酸序列、或与其具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包括LAG-3结合结构域变体，其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。预期此类变体保留LAG-3结合特异性。
例如，引入氨基酸突变的合适位置包括但不限于HCDR1的第二和/或第三氨基酸；HCDR2的第三、第七、第十、第十三和/或第十六氨基酸；和/或HCDR3的第一氨基酸。在本文所提供的序列表中，根据Kabat的CDR序列是以粗体标示并加下划线。
在某些实施方式中，抗人类LAG-3结合结构域包含：
-具有氨基酸序列SX1X2WS的HCDR1，其中
X1可以是Y或F；
X2可以是Y或S；和/或
-具有氨基酸序列YIX1YSGX2TNX3NPX4LKX5的HCDR2，其中
X1可以是Y或D；
X2可以是S或T；
X3可以是Y或F；
X4可以是S或F；
X5可以是S或I；和/或
-具有氨基酸序列X1LLYKWNYVEGFDI的HCDR3，其中
X1可以是D或H。
例如，引入氨基酸突变的合适位置包括但不限于HCDR1的第一、第三、和/或第四氨基酸；HCDR2的第七、第十、和/或第十二氨基酸；和/或HCDR3的第三氨基酸。在本文所提供的序列表中，根据Kabat的CDR序列是以粗体标示并加下划线。
在某些实施方式中，抗人类LAG-3结合结构域包含：
-具有氨基酸序列X1YX2X3H的HCDR1，其中
X1可以是S、N、或R；
X2可以是G或D；
X3可以是M、T、或I；和/或
-具有氨基酸序列VISYDGX1NKX2YX3DSVKG的HCDR2，其中
X1可以是S或N；
X2可以是Y、F、或H；
X3可以是A、E、或V；和/或
-具有氨基酸序列ERX1WDVFDI的HCDR3，其中
X1可以是G或D。
例如，引入氨基酸突变的合适位置包括但不限于HCDR1的第一和/或第三氨基酸；HCDR2的第五和/或第八氨基酸；和/或HCDR3的第三氨基酸。在本文所提供的序列表中，根据Kabat的CDR序列是以粗体标示并加下划线。
在某些实施方式中，抗人类LAG-3结合结构域包含：
-具有氨基酸序列X1YX2MH的HCDR1，其中
X1可以是S或N；
X2可以是G或A；和/或
-具有氨基酸序列VISYX1GSX2KYYADSVKG的HCDR2，其中
X1可以是D或H；
X2可以是N或D；和/或
-具有氨基酸序列DGDNWDX1FDI的HCDR3，其中
X1可以是V或A。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域也包括LAG-3结合结构域变体，其除了在HCDR中的突变外，也包含框架区中的一个或多个突变。在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域在CDR区中不包含突变，但在框架区中包含一个或多个突变。此类变体与本文所公开的序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性，且预期其保留LAG-3结合特异性。因此，在某些实施方式中，本公开的LAG-3结合结构域包含：
-与如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:9中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:9中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:54中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:54中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:55中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:55中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或
-与如SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
在某些实施方式中，本公开的LAG-3结合结构域包含：
-与如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:60、SEQ IDNO:61和SEQ ID NO:62中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:60、SEQ IDNO:63和SEQ ID NO:62中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:64、SEQ IDNO:65和SEQ ID NO:66中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:67、SEQ IDNO:68和SEQ ID NO:69中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:70、SEQ IDNO:71和SEQ ID NO:72中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:73、SEQ IDNO:74和SEQ ID NO:75中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:76、SEQ IDNO:77和SEQ ID NO:78中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:79、SEQ IDNO:80和SEQ ID NO:81中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:9中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:82、SEQ IDNO:83和SEQ ID NO:84中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:85、SEQID NO:86和SEQ ID NO:87中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:88、SEQID NO:89和SEQ ID NO:90中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:76、SEQID NO:91和SEQ ID NO:92中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:76、SEQID NO:91和SEQ ID NO:93中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:94、SEQID NO:95和SEQ ID NO:96中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:97、SEQID NO:98和SEQ ID NO:99中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:97、SEQID NO:98和SEQ ID NO:100中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:64、SEQID NO:65和SEQ ID NO:66中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:70、SEQID NO:71和SEQ ID NO:118中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:64、SEQID NO:65和SEQ ID NO:119中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:54中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:64、SEQID NO:65和SEQ ID NO:120中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:55中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:64、SEQID NO:65和SEQ ID NO:121中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:64、SEQID NO:65和SEQ ID NO:122中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:64、SEQID NO:65和SEQ ID NO:123中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:64、SEQID NO:65和SEQ ID NO:124中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；或
-与如SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:64、SEQID NO:65和SEQ ID NO:125中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域进一步包含轻链可变区。在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域包含共同轻链可变区。合适的轻链可变区的示例是包含轻链CDR1(LCDR1)、轻链CDR2(LCDR2)和轻链CDR3(LCDR3)的轻链可变区，其具有分别如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列，其中每个LCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。在某些实施方式中，合适的轻链可变区是包含轻链CDR1(LCDR1)、轻链CDR2(LCDR2)和轻链CDR3(LCDR3)的轻链可变区，其具有分别如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，此轻链可变区可包含具有如SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列、或与其具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的轻链可变区。包含这些LCDR和/或轻链可变区的轻链或轻链可变区是本领域中称为VK1-39/JK1的轻链。这是共同轻链。
在某些实施方式中，本公开的LAG-3结合结构域包含与如SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的轻链可变区，其中轻链可变区包含如SEQ ID NO:31中所示的LCDR1氨基酸序列；如SEQ ID NO:32中所示的LCDR2氨基酸序列；及如SEQ ID NO:33中所示的LCDR3氨基酸序列。
根据本发明，术语“共同轻链”是指能够与多个不同重链(亦即具有不同抗原或表位结合特异性的重链)配对的轻链。共同轻链在产生例如双特异性抗体中特别有用，其中当两个结合结构域包含相同轻链时，抗体生产更有效率。术语“共同轻链”涵盖相同或具有一些氨基酸序列差异而全长抗体的结合特异性不受影响的轻链。例如在如本文中所使用的共同轻链定义的范围内，有可能制备出或找到不相同但功能上仍等效的轻链，例如通过引入及测试保守性氨基酸变化(即当与重链配对时在不会促成或仅部分促成结合特异性的区域中的氨基酸变化)等。
除了包含上述LCDR和/或轻链可变区的共同轻链外，可使用本领域中已知之其他共同轻链。此类共同轻链的示例包括但不限于：VK1-39/JK5，其包含轻链可变区，该轻链可变区包含具有如SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列的轻链可变区的轻链CDR1(LCDR1)、轻链CDR2(LCDR2)和轻链CDR3(LCDR3)。根据IMGT的LCDR是以粗体标示并加下划线。在某些实施方式中，轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含具有如SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列的轻链可变区的轻链CDR1(LCDR1)、轻链CDR2(LCDR2)和轻链CDR3(LCDR3)，其中每个LCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。在某些实施方式中，轻链包含具有如SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列、或与其具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的轻链可变区；VK3-15/JK1，其包含轻链可变区，该轻链可变区包含具有如SEQ IDNO:35所示的氨基酸序列的轻链可变区的轻链CDR1(LCDR1)、轻链CDR2(LCDR2)和轻链CDR3(LCDR3)。根据IMGT的LCDR是以粗体标示并加下划线。在某些实施方式中，轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含具有如SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列的轻链可变区的轻链CDR1(LCDR1)、轻链CDR2(LCDR2)和轻链CDR3(LCDR3)，其中每个LCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。在某些实施方式中，轻链包含具有如SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列、或与其具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的轻链可变区；VK3-20/JK1，其包含轻链可变区，该轻链可变区包含具有如SEQ ID NO:36中所示的氨基酸序列的轻链可变区的轻链CDR1(LCDR1)、轻链CDR2(LCDR2)和轻链CDR3(LCDR3)。根据IMGT的LCDR是以粗体标示并加下划线。在某些实施方式中，轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含具有如SEQ ID NO:36中所示的氨基酸序列的轻链可变区的轻链CDR1(LCDR1)、轻链CDR2(LCDR2)和轻链CDR3(LCDR3)，其中每个LCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。在某些实施方式中，轻链包含具有如SEQ ID NO:36中所示的氨基酸序列、或与其具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的轻链可变区；及VL3-21/JL3，其包含轻链可变区，该轻链可变区包含具有如SEQ ID NO:37中所示的氨基酸序列的轻链可变区的轻链CDR1(LCDR1)、轻链CDR2(LCDR2)和轻链CDR3(LCDR3)。根据IMGT的LCDR是以粗体标示并加下划线。在某些实施方式中，轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含具有如SEQ ID NO:37中所示的氨基酸序列的轻链可变区的轻链CDR1(LCDR1)、轻链CDR2(LCDR2)和轻链CDR3(LCDR3)，其中每个LCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。在某些实施方式中，轻链包含具有如SEQ ID NO:37中所示的氨基酸序列、或与其具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的轻链可变区。
VK1-39是免疫球蛋白可变κ1-39基因(Immunoglobulin Variable Kappa 1-39Gene)的缩写。该基因也被称为免疫球蛋白κ可变1-39；IGKV139；IGKV1-39；IgVκ1-39。该基因的外部Id为HGNC:5740；Entrez Gene:28930；Ensembl:ENSG00000242371。VK1-39的优选氨基酸序列是以SEQ ID NO:38给出。这是V区的序列。V区可与五个J区中的一者组合。两个优选的连接序列表示为VK1-39/JK1和VK1-39/JK5；替代名称是IgVκ1-39_01/IGJκ1_01或IgVκ1-39_01/IGJκ5_01(根据imgt.org上的IMGT数据库全球信息网的命名法)。这些名称是例示性的且涵盖基因区段的等位基因变体。
VK3-15是免疫球蛋白可变κ3-15基因的缩写。该基因也称为免疫球蛋白κ可变3-15；IGKV315；IGKV3-15；IgVκ3-15。该基因的外部Id是HGNC:5816；Entrez Gene:28913；Ensembl:ENSG00000244437。VK3-15的优选氨基酸序列是以SEQ ID NO:39给出。这是V区的序列。V区可与五个J区中的一者组合。优选的连接序列表示为VK3-15/JK1；替代名称是Vκ3-15_01/IGJκ1_01(根据imgt.org上的IMGT数据库全球信息网的命名法)。此名称是例示性的且涵盖基因区段的等位基因变体。
VK3-20是免疫球蛋白可变κ3-20基因的缩写。该基因也称为免疫球蛋白κ可变3-20；IGKV320；IGKV3-20；IgVκ3-20。该基因的外部Id是HGNC:5817；Entrez Gene:28912；Ensembl:ENSG00000239951。VK3-20的优选氨基酸序列如SEQ ID NO:40。这是V区的序列。V区可与五个J区中的一者组合。优选的连接序列表示为VK3-20/JK1；替代名称是IgVκ3-20_01/IGJκ1_01(根据imgt.org上的IMGT数据库全球信息网的命名法)。此名称是例示性的且涵盖基因区段的等位基因变体。
VL3-21是免疫球蛋白可变λ3-21基因的缩写。该基因也称为免疫球蛋白λ可变3-21；IGLV321；IGLV3-21；IgVλ3-21。该基因的外部Id是HGNC:5905；Entrez Gene:28796；Ensembl:ENSG00000211662.2。VL3-21的优选氨基酸序列是以SEQ ID NO:41给出。这是V区的序列。V区可与五个J区中的一者组合。优选的连接序列表示为VL3-21/JL3；替代名称是IgVλ3-21/IGJλ3(根据imgt.org上的IMGT数据库全球信息网的命名法)。此名称是例示性的且涵盖基因区段的等位基因变体。
此外，可使用本领域中可得的LAG-3抗体的任何轻链可变区，或可容易地获得的任何其他轻链可变区，诸如从例如通过与本发明的LAG-3结合结构域配对时显示抗原结合活性的抗体展示库。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域可进一步包含CH1和CL区。可使用任何CH1结构域，特别是人类CH1结构域。合适的CH1结构域的示例是由以SEQID NO:42提供的氨基酸序列提供。可使用任何CL结构域，特别是人类CL。合适的CL结构域的示例是由以SEQ ID NO:43提供的氨基酸序列提供。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体包含特异性结合LAG-3的胞外结构域的结合结构域和特异性结合B7家族蛋白质的胞外结构域的结合结构域。
B7家族包含多种结构上相关的细胞表面蛋白质，其结合调控免疫反应之淋巴球上的受体。淋巴球之活化通过细胞表面抗原特异性T细胞受体或B细胞受体的接合而起始。通过B7配体同时递送的额外信号进一步确定这些细胞的免疫反应。这些所谓的“共刺激(costimulatory)”或“共抑制(coinhibitory)”信号通过B7家族成员透过淋巴球上的CD28受体家族递送。B7家族成员与共刺激受体的结合提升免疫反应，且与共抑制受体的结合减弱免疫反应。目前，下列成员被认为是此家族的一部分：B7.1(CD80)、B7.2(CD86)、诱导型共刺激配体(ICOS-L)、程序性死亡-1配体(PD-L1)、程序性死亡-2配体(PD-L2)、B7-H3(CD276)、B7-H4、B7-H5、B7-H6和B7-H7。B7家族成员是在淋巴及非淋巴组织中表达。成员对调控免疫反应的效应显示在具有B7家族基因突变的小鼠的免疫缺陷及自体免疫疾病的发展中。通过B7配体递送的信号的操纵在自体免疫、发炎性疾病和癌症的治疗中已显示出潜力。
在某些实施方式中，B7家族蛋白质选自由PD-L1、PD-L2、CD80、CD86、B7-H4、TNFRSF14和B7-H7组成的组。在某些实施方式中，B7家族蛋白质是PD-L1。
在某些实施方式中，特异性结合B7家族蛋白质的胞外结构域的可变结构域阻断PD-L1与其受体的结合。在某些实施方式中，受体是PD-1和/或CD80。
在某些实施方式中，本公开的多特异性抗体或其变体的PD-L1结合结构域包含重链可变区，其中该重链可变区包含具有如SEQ ID NO:20至24中所示的氨基酸序列的重链可变区中的一者的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。在本文所提供的序列表中，根据Kabat的HCDR是以粗体标示并加下划线。
在某些实施方式中，结合PD-L1的结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-具有如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；或
-具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。
在某些实施方式中，结合PD-L1的结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:107、SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:110、SEQ ID NO:111和SEQ ID NO:112中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:113、SEQ ID NO:114和SEQ ID NO:115中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:107、SEQ ID NO:116和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列；或
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:107、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列，
其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。
在某些实施方式中，结合PD-L1的结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-具有如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；或
-具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。
在某些实施方式中，结合PD-L1的结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:107、SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列；或
-具有分别如SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。
在某些实施方式中，结合PD-L1的结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-具有如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。
在某些实施方式中，结合PD-L1的结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:107、SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列，
其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。
在某些实施方式中，结合PD-L1的结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-具有如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
-具有如SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
具有如SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；或
-具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在某些实施方式中，结合PD-L1的结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:107、SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:110、SEQ ID NO:111和SEQ ID NO:112中所示的氨基酸序列；
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:113、SEQ ID NO:114和SEQ ID NO:115中所示的氨基酸序列；
重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:107、SEQ ID NO:116和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列；或
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:107、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，结合PD-L1的结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-具有如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；或
-具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在某些实施方式中，结合PD-L1的结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:107、SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列；或
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:107、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，结合PD-L1的结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-具有如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在某些实施方式中，结合PD-L1的结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
-重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其具有分别如SEQ IDNO:107、SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的PD-L1结合结构域包含具有如SEQID NO:20至24中任一者所示的氨基酸序列、或与其具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的PD-L1结合结构域包括PD-L1结合结构域变体，其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。预期此类变体保留PD-L1结合特异性。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的PD-L1结合结构域也包括PD-L1结合结构域变体，其除了在HCDR中的突变外，也包含框架区中的一个或多个突变。在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的PD-L1结合结构域在CDR区中不包含突变，但在框架区中包含一个或多个突变。此类变体与本文所公开的序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性，且预期其保留PD-L1结合特异性。因此，在某些实施方式中，本公开的PD-L1结合结构域包含：
-与如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
-与如SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或
-与如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
在某些实施方式中，本公开的PD-L1结合结构域包含：
-与如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:107、SEQID NO:108和SEQ ID NO:109中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:110、SEQID NO:111和SEQ ID NO:112中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:113、SEQID NO:114和SEQ ID NO:115中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；
-与如SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:107、SEQID NO:116和SEQ ID NO:109中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；或
-与如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区，其中重链可变区包含分别如SEQ ID NO:107、SEQID NO:117和SEQ ID NO:109中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的PD-L1结合结构域进一步包含轻链可变区。合适的轻链可变区的示例是如本文所述的轻链可变区。可使用本领域中可得的PD-L1抗体的轻链可变区，或可容易地获得的任何其他轻链可变区，诸如从例如通过与本公开的PD-L1结合结构域配对时显示抗原结合活性的抗体展示库。优选地，本公开的PD-L1结合结构域包含VK1-39/JK1、VK1-39/JK5、VK3-15/JK1、VK3-20/JK1或VL3-21/JL3轻链可变区。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的PD-L1结合结构域可进一步包含CH1和CL区。可使用任何CH1结构域，特别是人类CH1结构域。合适的CH1结构域的示例是由以SEQID NO:42提供的氨基酸序列提供。可使用任何CL结构域，特别是人类CL。合适的CL结构域的示例是由以SEQ ID NO:43提供的氨基酸序列提供。
在某些实施方式中，本文所公开的LAG-3结合结构域可与本文所公开的任何PD-L1结合结构域组合，以生产本公开的多特异性抗体或其变体。在某些实施方式中，本公开提供如表1中所呈现的多特异性抗体PB1至PB125、或其变体。
表1.包含对LAG-3具有特异性的重链可变区和对PD-L1具有特异性的重链可变区的组合的结合部分。PB1至PB125中的每个可与本文所公开的轻链组合。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20、23或24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20、23或24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20、23或24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20、23或24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20、23或24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20、23或24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20、23或24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20、23或24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20、23或24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20、23或24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20、23或24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20、23或24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20、23或24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20、23或24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20、23或24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:119中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:120中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:121中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:122中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:123中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)、具有如SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)和具有如SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)、具有如SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)和具有如SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)、具有如SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)和具有如SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:119中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)、具有如SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)和具有如SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)、具有如SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)和具有如SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:120中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)、具有如SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)和具有如SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)、具有如SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)和具有如SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:121中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)、具有如SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)和具有如SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)、具有如SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)和具有如SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:122中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)、具有如SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)和具有如SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)、具有如SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)和具有如SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:123中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)、具有如SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)和具有如SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)、具有如SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)和具有如SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)、具有如SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)和具有如SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)、具有如SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)和具有如SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)、具有如SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)和具有如SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)、具有如SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)和具有如SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)、具有如SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)和具有如SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)、具有如SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)和具有如SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有分别如SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)、具有如SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)和具有如SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的重链可变区；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列的重链可变区；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:54中所示的氨基酸序列的重链可变区；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:55中所示的氨基酸序列的重链可变区；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列的重链可变区；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列的重链可变区；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列的重链可变区；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的重链可变区；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的重链可变区；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的重链可变区。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列的重链可变区；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的重链可变区。在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的重链可变区；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列的重链可变区；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:54中所示的氨基酸序列的重链可变区；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:55中所示的氨基酸序列的重链可变区；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列的重链可变区；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列的重链可变区；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列的重链可变区；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的重链可变区；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的重链可变区；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的重链可变区，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，多特异性抗体或其变体包含：
-本公开的LAG-3结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列的重链可变区；及
-本公开的PD-L1结合结构域，其包含具有如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的重链可变区，
其中LAG-3结合结构域和PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
本公开的LAG-3xPD-L1多特异性抗体或其变体以反式靶向两种免疫检查点：其结合在肿瘤细胞或抗原呈现细胞上表达的PD-L1并同时结合在T细胞上表达的LAG-3。这也可通过在肿瘤微环境中结合在耗竭T效应细胞上上调的PD-L1而以顺式作用。以此方式，本公开的LAG-3xPD-L1多特异性抗体或其变体防止T细胞抑制性信号传导且增强肿瘤免疫性。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体对人类LAG-3具有在约1至2nM的范围内、特别是在约1.45至1.93nM的范围内的结合亲和力，如通过如本文所述的SPR所测量。术语“约”允许与所述值的10％偏差。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体对人类LAG-3具有在1至2nM的范围内、特别是在1.45至1.93nM的范围内的结合亲和力，如通过如本文所述的SPR所测量。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体对人类PD-L1具有在0.1至0.5nM的范围内、特别是在0.17至0.41nM的范围内的结合亲和力，如通过如本文所述的SPR所测量。
在某些实施方式中，本公开提供一种多特异性抗体，其包含结合LAG-3的结合结构域和结合PD-L1的结合结构域；或其保持所述抗体的结合特异性的变体，其中抗体或变体对食蟹猕猴LAG-3具有比包含具有如SEQ ID NO:27中所示的氨基酸序列的两个重链可变区和具有如SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列的两个轻链可变区的参考抗体更高的亲和力，且对食蟹猕猴PD-L1具有比包含具有如SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列的两个重链可变区和具有如SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列的两个轻链可变区的参考抗体更高的亲和力。
确定多特异性抗体或其变体是否具有相比于参考抗体更高的结合亲和力，可通过使用相同测定条件在相同类型的测定中测量多特异性抗体或其变体和参考抗体两者的结合亲和力来完成。因此，在某些实施方式中，使用相同测定条件在相同类型的测定中测量多特异性抗体或其变体的结合亲和力和参考抗体的结合亲和力。在某些实施方式中，测定是使用表面电浆共振(surface plasmon resonance,SPR)的测定。SPR是使用表面电浆共振(SPR)测量结合亲和力的测定，诸如的生物传感器系统或溶液平衡滴定(Solution Equilibrium Titration,SET)(参见Friguet B等人(1985)J.ImmunolMethods；77(2):305-319、和Hanel C等人(2005)Anal Biochem；339(1):182-184)。
如本文所提供的LAG-3和PD-L1结合结构域的结合亲和力值是用实施例3中所述的方法获得。简言之，抗huIgG Fcγ是使用游离胺化学共价偶合至CM5传感器芯片的表面。在流动槽中以30μL/min注射至多20nM的浓度的多特异性抗体达2分钟。随后，使抗原(0.6至20nM)以30μL/min流过CM5传感器芯片的表面2分钟。获得不同抗原的缔合及解离阶段的感测图(sensorgram)。使用BIA评估软件及采用1:1交互作用模型(用于单价交互作用)的曲线拟合，确定个别Fab组的亲和力。
在某些实施方式中，结合亲和力是用呈二价双特异性形式的本公开的LAG-3xPD-L1多特异性抗体和呈二价单特异性IgG形式的参考抗人类LAG-3抗体测量。多特异性抗体对人类LAG-3的结合亲和力因此表示单价结合亲和力。
在某些实施方式中，结合亲和力是用呈二价双特异性形式的本公开的LAG-3xPD-L1多特异性抗体和呈二价单特异性IgG形式的参考抗人类PD-L1抗体测量。多特异性抗体对人类PD-L1的结合亲和力因此表示单价结合亲和力。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域对食蟹猕猴LAG-3具有比如本文所述的参考抗人类LAG-3结合结构域高至少十倍、优选地十至二十倍的结合亲和力，如通过如本文所述的SPR所测量。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体的LAG-3结合结构域对食蟹猕猴LAG-3具有比如本文所述的参考抗人类LAG-3结合结构域高十倍的结合亲和力，如通过如本文所述的SPR所测量。
在某些实施方式中，多特异性抗体或变体的PD-L1结合结构域对食蟹猕猴PD-L1具有比如本文所述的参考抗人类PD-L1结合结构域高至少十倍、优选地十至五十倍、特别是十至四十倍、十至三十倍、十至二十倍的结合亲和力，如通过如本文所述的SPR所测量。
在某些实施方式中，多特异性抗体或变体的LAG-3结合结构域对食蟹猕猴LAG-3具有在约0.1至2nM的范围内的结合亲和力，特别是在约0.3至1.5nM的范围内；约0.35至1.5nM或约0.4至1.2nM，更特别是在约0.41至1.15nM的范围内，如通过如本文所述的SPR所测量。术语“约”允许与所述值的10％偏差。
在某些实施方式中，多特异性抗体或变体的LAG-3结合结构域对食蟹猕猴LAG-3具有在0.1至2nM的范围内的结合亲和力，特别是在0.3至1.5nM的范围内；0.35至1.5nM或0.4至1.2nM，更特别是在0.41至1.15nM的范围内，如通过如本文所述的SPR所测量。
在某些实施方式中，多特异性抗体或变体的PD-L1结合结构域对食蟹猕猴PD-L1具有在约0.05至1nM的范围内的结合亲和力，特别是在约0.05至0.5nM的范围内；约0.1至0.4nM或约0.1至0.35nM，更特别是在约0.15至0.34nM的范围内，如通过如本文所述的SPR所测量。术语“约”允许与所述值的10％偏差。
在某些实施方式中，多特异性抗体或变体的PD-L1结合结构域对食蟹猕猴PD-L1具有在0.05至1nM的范围内的结合亲和力，特别是在0.05至0.5nM的范围内；0.1至0.4nM或0.1至0.35nM，更特别是在0.15至0.34nM的范围内，如通过如本文所述的SPR所测量。
在某些实施方式中，对食蟹猕猴LAG-3的结合亲和力是用呈二价双特异性IgG形式的多特异性抗体的LAG-3结合结构域和参考抗LAG-3结合结构域两者测量。二价双特异性IgG形式可例如包含本公开或参考抗体的LAG-3结合结构域和结合PD-L1或另一不相关目标的结合结构域。因此，正在测量的是与食蟹猕猴LAG-3的单价交互作用。
在某些实施方式中，对食蟹猕猴PD-L1的结合亲和力是用呈二价双特异性IgG形式的多特异性抗体的PD-L1结合结构域和参考PD-L1结合结构域两者来测量。二价双特异性IgG形式可例如包含本公开或参考抗体的PD-L1结合结构域和结合LAG-3或另一不相关目标的结合结构域。因此，正在测量的是与食蟹猕猴PD-L1的单价交互作用。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体能够增强CD4+和/或CD8+肿瘤浸润T细胞的增生。在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体能够在肿瘤微环境中增加CD4+和/或CD8+T细胞的数目，特别是增生的CD4+和/或CD8+T细胞。此可例如通过测量肿瘤活体组织切片中的CD4+和/或CD8+T细胞、特别是增生的CD4+和/或CD8+T细胞的数目确定，如例如实施例4中所述。
在某些实施方式中，相较于响应于如本文所述的参考抗体的组合的调节T细胞的数目，多特异性抗体或其变体导致肿瘤微环境中调节T细胞的数目减少。
在某些实施方式中，多特异性抗体或其变体是全长抗体、特别是全长双特异性抗体、更特别是全长双特异性IgG1抗体。
在某些实施方式中，本公开提供一种载体，其包含编码如本文所述的LAG-3结合结构域的重链可变区的核酸序列和编码如本文所述的PD-L1结合结构域的重链可变区的核酸序列。在某些实施方式中，载体进一步包含编码CH1区以及优选地铰链、CH2和CH3区的核酸序列。在某些实施方式中，载体进一步包含编码轻链可变区和优选地CL区的至少一种多核苷酸。在某些实施方式中，轻链可变区是能够与具有不同表位特异性的多个重链配对的轻链的轻链可变区。
本公开还提供了一种细胞，其包含编码如本文所述的LAG-3结合结构域的重链可变区的核酸序列和编码如本文所述的PD-L1结合结构域的重链可变区的核酸序列。在某些实施方式中，细胞可进一步包含编码CH1区以及优选地铰链、CH2和CH3区的核酸序列。在某些实施方式中，细胞可进一步包含编码轻链可变区和优选地CL区的至少一种多核苷酸序列。在某些实施方式中，轻链可变区是能够与具有不同表位特异性的多个重链配对的轻链的轻链可变区。
本公开还提供一种细胞，其生产如本文所述的多特异性抗体或其变体。在某些实施方式中，细胞是重组细胞，其已使用如本文所述的载体转化。
本文还提供了一种用于生产本公开的多特异性抗体或其变体的方法，其中该方法包括培养如本文所述的细胞以及从细胞或上清液回收多特异性抗体或其变体。
本文还提供了一种用于生产本公开的LAG-3结合结构域和/或PD-L1结合结构域的变体的方法，其中该方法包括：
-产生如本文所述的重链可变区的序列变体；以及
-在细胞中表达如本文所述的一种或多种序列变体和轻链可变区。
用于产生序列变体的方法是本领域中熟知的。可采用随机方法产生序列变体或靶向方法，其中可例如旨在引入可能增加或降低结合亲和力的突变。用于使抗体结合结构域亲和力成熟的例行方法在本领域广泛已知，参见例如Tabasinezhad M.等人ImmunolLett.2019；212:106-113。也可旨在引入减轻可开发性风险的突变，以大规模生产结合结构域、或包含此结合结构域的多特异性抗体。可引入可能不会造成结合特异性损失和/或影响结合亲和力的突变。允许的取代包括但不限于导致变体的相似生物物理性质的取代，例如异亮氨酸至亮胺酸或缬氨酸、苏氨酸至丝氨酸、精氨酸至赖胺酸、天门冬氨酸至谷胺酸以及色氨酸至酪氨酸。也可基于生殖系或天然贮库(repertoire)中的频率在某些位置引入突变。
CDR和/或框架区内的氨基酸残基是否可被取代(例如用保守性氨基酸残基取代，且没有或实质上没有结合特异性和/或亲和力损失)可通过本领域中熟知的方法确定。实验的实例包括但不限于例如丙胺酸扫描(Cunningham BC,Wells JA.Science.1989；244(4908):1081-5)和深度突变扫描(Araya CL,Fowler DM.Trends Biotechnol.2011；29(9):435-42)。也已开发可预测氨基酸突变的效应的计算方法，诸如例如描述于Sruthi CK,Prakash M.PLoS One.2020；15(1):e0227621；Choi Y.等人PLoS One.2012；7(10):e46688和Munro D,Singh M.Bioinformatics.2020；36(22-23):5322-9。
本文还提供了包含由上述方法生产的任何变体LAG-3和/或PD-L1结合结构域的多特异性抗体；包含多特异性抗体的药物组合物，该多特异性抗体包含该变体LAG-3和/或PD-L1结合结构域中的任一者；编码该变体结合结构域中的任一者的核酸；包含该核酸的载体及细胞；以及包含该变体LAG-3和/或PD-L1结合结构域中的任一者的多特异性抗体或该药物组合物用于治疗癌症的用途。
药物组合物和方法
在某些实施方式中，本公开提供一种药物组合物，其包含：如本文所述的多特异性抗体或其变体；及药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂。
在某些实施方式中，本公开提供如本文所述的多特异性抗体或其变体、或药物组合物，其用作药物。
在某些实施方式中，本公开提供如本文所述的多特异性抗体或其变体、或如本文所述的药物组合物，其用于治疗与被抑制的免疫系统相关的疾病、特别是癌症。
在某些实施方式中，本公开提供一种用于治疗疾病的方法，其包含向有需要的个体施用有效量的如本文所述的多特异性抗体或其变体、或药物组合物。
在某些实施方式中，本公开提供一种用于治疗与被抑制的免疫系统相关的疾病、特别是癌症的方法，其包括向有需要的个体施用有效量的如本文所述的多特异性抗体或其变体、或药物组合物。
如本文所使用，术语“个体”、“受试者”和“患者”可互换使用，且是指哺乳动物，诸如人类、小鼠、大鼠、仓鼠、天竺鼠、兔、猫、狗、猴、牛、马、猪和类似者(例如患有癌症的患者，诸如人类患者)。
如本文中所使用，术语“治疗(treat/treating/treatment)”是指对对象进行的任何类型的介入或程序、或向对象施用活性剂或活性剂的组合，其中目的为治愈或改善其疾病或症状。此包括逆转、减轻、改善、抑制或减慢症状、并发症、病况或与疾病相关的生物化学指针，以及预防症状、并发症、病况或与疾病相关的生物化学指针的发作、进展、发展、严重性或再发。
如本文中所使用，“有效治疗(effective treatment)”或“积极治疗反应(positive therapeutic response)”是指产生有益效果的治疗，有益效果例如改善疾病或病症(例如癌症)的至少一种症状。有益效果的形式可为相对于基线的改善，包括相对于在起始根据该方法的疗法前所做测量或观察的改善。例如，有益效果的形式可为减慢、稳定、停止或逆转对象之处于任何临床阶段的癌症的进展，如由疾病的临床或诊断症状或癌症标记的减少或消除所证明。有效治疗可例如减小肿瘤大小、减少循环肿瘤细胞的存在、减少或预防肿瘤转移、减慢或停止肿瘤生长、和/或预防或延迟肿瘤再发或复发。
术语“治疗量”或“有效量”是指药物或药物组合提供期望的生物、治疗和/或疾病预防结果的量。该结果可以是疾病的一种或多种征象、症状或起因的减少、改善、缓和、降低、推迟和/或减轻，或者生物系统的任何其他所欲改变。在一些实施方式中，治疗量是足以推迟肿瘤发展的量。在一些实施方式中，治疗量是足以预防或延迟肿瘤再发的量。
药物或组成物的有效量可以：(i)减少癌细胞的数目；(ii)减少肿瘤大小；(iii)抑制、推迟、减慢至一定程度，并可停止癌细胞浸润至周边器官中；(iv)抑制肿瘤转移；(v)抑制肿瘤生长；(vi)预防或延迟肿瘤的发生和/或再发；和/或(vii)将与癌症相关的症状中的一者或多者缓解至一定程度。
有效量可根据诸如疾病状态、待治疗的个体的年龄、性别和体重和药物或药物的组合在个体中诱发所欲反应的能力等因素而有所变化。
有效量可以一次或多次施用来施用。
治疗量也包括平衡药物或药物的组合的任何毒性或有害效应与治疗上有益效应的量。
术语“试剂(agent)”是指治疗活性物质，在本发明的情况下是指本公开的多特异性抗体或其变体、或本公开的药物组合物。
一般术语
如本文中所使用，“包含”及其变形是以其非限制性的意义使用，意味着包括该词之后的项目，但未具体提及的项目并不排除在外。
冠词“一个”和“一种”在本文中是用于指一个或多个该冠词的文法对象。举例而言，“一个组件”意指一个或多个组件。
本文中对专利文件或其他事项的参照不应被视为承认该文件或事项是已知的，或其含有的信息在申请专利范围中任一项的优先权日是通常知识的一部分。
本说明书中所引用的所有专利和参考文献全文特此以引用方式并入本文中。
应注意的是，在本说明书中，除非另有说明，指派给抗体或抗体片段的可变区中的CDR及框架的氨基酸位置是根据Kabat编号指定(请参见Sequences of Proteins ofImmunological Interest(National Institute of Health,Bethesda,Md.,1987and1991))。恒定区中的氨基酸是根据EU编号系统表示。
给予登录号主要是为了提供进一步鉴定目标的方法，所结合的蛋白质的实际序列可有所变化，例如因为编码基因中的突变，诸如发生于一些癌症等中的突变。抗原结合部位结合抗原及其各种变体，诸如由一些抗原阳性免疫或肿瘤细胞所表达的那些。
当在本文中引用基因、蛋白质时，该引用优选地是指该基因或蛋白质的人类形式。当在本文中引用基因或蛋白质时，该引用是指天然基因或蛋白质和该基因或蛋白质如可在肿瘤、癌症和类似者中侦测到(优选地如可在人类肿瘤和癌症等中侦测到)的变体形式。
HGNC代表HUGO基因命名委员会(HUGO Gene nomenclature committee)。接在缩写后的号码是登录号，利用此登录号可从HGNC数据库中检索到关于基因和由该基因编码的蛋白质的信息。Entrez Gene提供登录号或基因ID，利用此登录号或基因ID可以从NCBI(美国国家生物技术信息中心，National Center for Biotechnology Information)数据库中检索到关于基因或由该基因编码的蛋白质的信息。Ensemble提供登录号，利用此登录号可从Ensemble数据库中获得关于基因或由该基因编码的蛋白质的信息。Ensembl是EMBL-EBI与Wellcome Trust Sanger Institute之间开发软件系统的联合项目，该软件系统产生并维护所选真核基因体上的自动标注。
图式简单说明
在图中，二价单特异性抗体是以格式SEQ ID NO:A表示，其中SEQ ID NO:A是指两个结合结构域的重链可变序列。单特异性抗体的各结合结构域包含轻链。在用以说明本公开但不旨在以任何方式限制本公开的实施例中，单特异性抗体的各结合结构域包含具有如SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列的轻链可变区和具有如SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的轻链恒定区。单特异性抗体优选地是包含CH1、铰链、CH2和CH3的IgG1抗体。在用以说明本公开但不旨在以任何方式限制本公开的实施例中，以IgG1形式筛选单特异性抗体，其中LAG-3和PD-L1结合重链包含具有如SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列的CH1、具有如SEQID NO:45中所示的氨基酸序列的CH2和具有如SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列的CH3。
双特异性抗体是以格式SEQ ID NO:A x SEQ ID NO:B表示，其中SEQ ID NO:A和B两者是指重链可变序列。双特异性抗体的各结合结构域包含轻链。在用以说明本公开但不旨在以任何方式限制本公开的实施例中，双特异性抗体的各结合结构域包含具有如SEQ IDNO:30中所示的氨基酸序列的轻链可变区和具有如SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的轻链恒定区。双特异性抗体是IgG1抗体，其包含CH1、铰链、CH2和CH3。
在用以说明本公开但不旨在以任何方式限制本公开的实施例1中，以IgG1形式筛选双特异性抗体，其中PD-L1结合重链包含具有如SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列的CH1、可具有如SEQ ID NO:45中所示的氨基酸序列的CH2和可具有如SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列的CH3；且LAG-3结合重链包含具有如SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列的CH1、具有如SEQ ID NO:45中所示的氨基酸序列的CH2和具有如SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列的CH3。
在用以说明本公开但不旨在以任何方式限制本公开的实施例2中，以IgG1形式筛选双特异性抗体，其中PD-L1结合重链包含具有如SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列的CH1、具有如SEQ ID NO:45中所示的氨基酸序列的CH2和具有如SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列的CH3；且LAG-3结合重链包含具有如SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列的CH1、具有如SEQ ID NO:45中所示的氨基酸序列的CH2和具有如SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列的CH3。
在用以说明本公开但不旨在以任何方式限制本公开的实施例3和4中，以IgG1形式筛选双特异性抗体。
对于SEQ ID NO:17x SEQ ID NO:24，PD-L1结合重链包含具有如SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列的CH1、具有如SEQ ID NO:45中所示的氨基酸序列的CH2和具有如SEQ IDNO:50中所示的氨基酸序列的CH3；且LAG-3结合重链包含具有如SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列的CH1、具有如SEQ ID NO:45中所示的氨基酸序列的CH2和具有如SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列的CH3。
对于SEQ ID NO:5x SEQ ID NO:20，PD-L1结合重链可包含具有如SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列的CH1、具有如SEQ ID NO:45中所示的氨基酸序列的CH2和具有如SEQ IDNO:51中所示的氨基酸序列的CH3；且LAG-3结合重链包含具有如SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列的CH1、具有如SEQ ID NO:45中所示的氨基酸序列的CH2和具有如SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列的CH3。
在用以说明本公开但不旨在以任何方式限制本公开的实施例5中，以IgG形式筛选双特异性抗体，其中PD-L1结合重链包含具有如SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列的CH1、具有如SEQ ID NO:45中所示的氨基酸序列的CH2和具有如SEQ ID NO:50或51中所示的氨基酸序列的CH3；且LAG-3结合重链包含具有如SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列的CH1、具有如SEQ ID NO:45中所示的氨基酸序列的CH2和具有如SEQ ID NO:50或51中所示的氨基酸序列的CH3，如(表10)中所示。二价单特异性瑞拉利单抗类似物抗体及二价单特异性阿特珠单抗类似物抗体是以格式SEQ ID NO:A/SEQ ID NO:B表示，其中SEQ ID NO:A是指分别的重链序列，且SEQ ID NO:B是指分别的轻链序列。二价单特异性瑞拉利单抗类似物抗体包含两个LAG-3结合结构域。二价单特异性阿特珠单抗类似物抗体包含两个PD-L1结合结构域。类似物抗体的各结合结构域包含轻链。瑞拉利单抗和阿特珠单抗类似物的组合是以格式SEQ IDNO:A/SEQ ID NO:B+SEQ ID NO:C/SEQ ID NO:D表示，其中SEQ ID NO:A是指瑞拉利单抗或阿特珠单抗类似物的重链序列且SEQ ID NO:B是指轻链序列，且SEQ ID NO:C是指另一者的重链序列且SEQ ID NO:D是指轻链序列。
图1A显示使用FACS的LAG-3结合的结果。将包含具有如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:23(a)、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:23(b)、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:23(c)、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:23(d)、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:23(e)和SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:23(f)中所示的氨基酸序列的重链可变区的双特异性抗体与包含各别LAG-3结合结构域的二价单特异性抗体、阳性对照瑞拉利单抗类似物(SEQ ID NO:27/SEQ ID NO:28)和阴性对照抗体(SEQ ID NO:29/SEQ ID NO:30)进行比较。各图显示与人类和恒河猴LAG-3结合的结果。
X轴以μg/mL显示抗体浓度。Y轴显示以平均荧光强度(MFI)表达的结合水平。
图1B显示使用FACS的PD-L1结合的结果。将包含具有如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:6和SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的重链可变区的双特异性抗体与包含具有如SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的PD-L1结合结构域的二价单特异性抗体、阳性对照阿特珠单抗类似物(SEQ ID NO:25/SEQ ID NO:26)和阴性对照抗体(SEQ ID NO:29/SEQ ID NO:30)进行比较。上图显示与人类PD-L1结合的结果；下图显示与恒河猴PD-L1结合的结果。
X轴以μg/mL显示抗体浓度。Y轴显示以平均荧光强度(MFI)表达的结合水平。
图2显示来自PD-1/LAG-3报导子测定的结果。将包含具有如SEQ ID NO:1和SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:6和SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的重链可变区的双特异性抗体与阳性对照阿特珠单抗类似物(SEQ ID NO:25/SEQ IDNO:26)、阳性对照瑞拉利单抗类似物(SEQ ID NO:27/SEQ ID NO:28)、阿特珠单抗和瑞拉利单抗类似物的组合(SEQ ID NO:25/SEQ ID NO:26+SEQ ID NO:27/SEQ ID NO:28)和阴性对照抗体(SEQ ID NO:29/SEQ ID NO:30)进行比较。
X轴以μg/mL显示抗体浓度。Y轴显示诱导倍数。
图3显示来自供体1(图3A)和供体2(图3B)的SEB测定的结果。
图3A1及图3B1显示包含具有如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:3和SEQID NO:23、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的重链可变区的双特异性抗体与阳性对照阿特珠单抗类似物(SEQ ID NO:25/SEQ ID NO:26)、阿特珠单抗和瑞拉利单抗类似物的组合(SEQ ID NO:25/SEQ ID NO:26+SEQ ID NO:27/SEQ ID NO:28)和阴性对照抗体(SEQ ID NO:29/SEQ ID NO:30)的IL-2的诱导倍数的比较。
图3A2和3B2显示相同抗体的TNFa的诱导倍数的比较。
X轴以μg/mL显示抗体浓度。Y轴显示IL-2或TNFa的诱导倍数。相对于不含IgG的对照孔计算各抗体的诱导倍数。
图4显示两种双特异性抗体的结合亲和力数据。
图5显示在FACS结合、PD-1/LAG-3报导子和SEB测定中两种双特异性抗体的结果。
图5A将包含具有如SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的重链可变区的双特异性抗体与阳性对照瑞拉利单抗类似物(SEQ IDNO:27/SEQ ID NO:28)及阴性对照抗体的与人类LAG-3的结合进行比较。
图5B将相同抗体的与恒河猴LAG-3的结合进行比较。
图5C将包含具有如SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的重链可变区的双特异性抗体与阳性对照阿特珠单抗类似物(SEQ IDNO:25/SEQ ID NO:26)及阴性对照抗体的与人类PD-L1的结合进行比较。
图5D将相同抗体的与恒河猴PD-L1的结合进行比较。
X轴以μg/mL显示抗体浓度。Y轴显示以平均荧光强度(MFI)表达的结合水平。
图5E显示PD-1/LAG-3报导子测定的结果，其中将包含具有如SEQ ID NO:17和SEQID NO:24和SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的重链可变区的双特异性抗体与阳性对照阿特珠单抗类似物(SEQ ID NO:25/SEQ ID NO:26)和瑞拉利单抗类似物(SEQID NO:27/SEQ ID NO:28)、瑞拉利单抗和阿特珠单抗类似物的组合(SEQ ID NO:27/SEQ IDNO:28+SEQ ID NO:25/SEQ ID NO:26)和阴性对照抗体进行比较。
图5F显示SEB测定的结果，其将包含具有如SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:24和SEQID NO:5和SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的重链可变区的双特异性抗体与阳性对照阿特珠单抗类似物(SEQ ID NO:25/SEQ ID NO:26)和瑞拉利单抗类似物(SEQ ID NO:27/SEQID NO:28)、瑞拉利单抗和阿特珠单抗类似物的组合(SEQ ID NO:27/SEQ ID NO:28+SEQ IDNO:25/SEQ ID NO:26)和阴性对照抗体在四个不同供体中的IL-2的诱导倍数进行比较。四个图表示四个不同供体的结果。X轴以μg/mL显示抗体浓度。Y轴以pg/mL显示IL-2的浓度。
图6显示来自体内研究的数据。评估包含具有如SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的重链可变区的双特异性抗体对具有MDA-MB-231肿瘤的Hu-CD34 NSGTM小鼠的肿瘤体积的效应，并与阿特珠单抗类似物(阿特珠单抗*)、瑞拉利单抗类似物(瑞拉利单抗*)和瑞拉利单抗和阿特珠单抗类似物的组合(瑞拉利单抗*+阿特珠单抗*)进行比较。
图6A1显示用来自供体1的CD34+HSC免疫的小鼠、图6A2显示用来自供体2的CD34+HSC免疫的小鼠、且图6A3显示用自供体3的CD34+HSC免疫的小鼠的数据。图6A4显示组合所有供体的数据。
图6B显示来自MDA-MB-231肿瘤样本中CD4+及CD8+T细胞及调节T细胞(Treg)群体的分析的结果。评估包含具有如SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的重链可变区的双特异性抗体对CD3+T细胞(图6B1)、CD8+T细胞(图6B2)、FOXP3+调节T细胞(图6B3)、增生的CD8+T细胞(图6B4)和增生的CD4+T细胞(图6B5)百分比的效应，并与阿特珠类似物、瑞拉利单抗类似物和瑞拉利单抗和阿特珠单抗类似物的组合进行比较。
图7显示使用FACS的结合测定的结果。将包含具有如表10中所示的氨基酸序列的重链可变区的双特异性抗体连同RSV对照抗体(SEQ ID NO:29/SEQ ID NO:30)一起测试。X轴以μg/mL显示抗体浓度。Y轴显示通过将平均MFI值相对于没有抗体的孔标准化而获得的诱导倍数。
图7A显示与人类LAG-3结合的结果。
图7B显示与恒河猴LAG-3结合的结果。
图7C显示与人类PD-L1结合的结果。
图8显示来自PD-1/LAG-3报导子测定的结果。将包含具有如表10中所示的氨基酸序列的重链可变区的双特异性抗体与阿特珠单抗和瑞拉利单抗类似物的组合(SEQ ID NO:25/SEQ ID NO:26+SEQ ID NO:27/SEQ ID NO:28)和RSV对照抗体(SEQ ID NO:29/SEQ IDNO:30)进行比较。
X轴以μg/mL显示抗体浓度。Y轴显示诱导倍数。
下列实施例说明本公开但不旨在以任何方式限制本公开。
实施例
实施例1-LAG-3xPD-L1双特异性抗体的生产及和鉴定
抗人类LAG-3结合结构域可通过本领域中已知的方法获得，诸如例如如WO2019/009728中所述。通过将包含共同IGKV1-39轻链的基因转殖小鼠(小鼠)用人类LAG-3抗原部分免疫来获得一大组重链可变区，包括使用不同形式的DNA、蛋白质和基于细胞的抗原递送。
抗人类PD-L1结合结构域可通过本领域中已知的方法获得，诸如例如如WO2018/056821及WO 2019/009726中所述。通过将包含共同IGKV1-39轻链的基因转殖小鼠(小鼠)用人类PD-L1抗原部分免疫来获得一大组重链可变区，包括使用不同形式的DNA、蛋白质和基于细胞的抗原递送。
选择多种抗人类LAG-3Fab，其重链可变区是用于生产双特异性抗LAG-3x抗PD-L1抗体。这些重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1至16中所示。包含这些重链可变区的Fab结合人类LAG-3的结构域1或结构域2并在LAG-3报导子测定中显示功能活性(数据未显示)。选择两种额外Fab，其重链可变区包含如SEQ ID No:18及19中所示的氨基酸序列。包含这些重链可变区的Fab结合人类LAG-3的结构域3和结构域4。此两种Fab并未在LAG-3报导子中显示功能活性，并被选择用于生产阴性对照双特异性抗体。
选择多种抗人类PD-L1 Fab，其重链可变区是用于生产双特异性抗体。这些重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:21至23中所示。包含这些重链可变区的Fab阻断PD-L1与PD-1的结合(数据未显示)。如使用SPR所测量，重链可变结构域展现出不同的亲和力，如以包含一个PD-L1结合Fab及一个其他Fab(结合破伤风类毒素(TT)或抗PD-1)的双特异性IgG形式所确定。因此，已测量与PD-L1的单价交互作用的结合亲和力。
使用表面电浆共振(SPR)确定抗PD-L1 Fab组对PD-L1的亲和力。亲和力是以双特异性IgG形式测量，该形式仅具有一个对PD-L1具特异性的组。为了确定抗PD-L1 Fab组与抗原的结合的动力学，使用用BIAcore T100的表面电浆共振(SPR)。将重组、经纯化、经Fc标记的人类PD-L1(R&D Systems，登录号156-B7-100)偶合至CM5传感器芯片的流动槽(FC)2(FC1用作空白以减去并经活化，接着使用乙醇胺直接去活化)，其使用NHS/EDC化学在pH5.0(NaAc缓冲液)、2μg/mL抗原浓度和10μL/min流速下至大约200个共振单位(RU)的水平。接着，将由抗PD-L1Fab组及不相关的Fab组构成的双特异性IgG以不同浓度(100nM及于HBS中的连续2倍稀释液，6次稀释)以30μL/min的动力学运行在FC1和2的表面上运行。使用50mMHCl于水中的脉冲执行再生(15μL，流速为10μL/min)。使用BIAevaluation软件评估获得的感测图，并确定动力学缔合及解离速率常数。在数天内对不同尺寸的不同表面执行数次测量。不同测量给出非常类似的结果，强调它们的有效性。所有测量是在25℃下进行。
结合亲和力呈现于表2中。
表2
| IgG包含： | 结合亲和力(nM) |
| SEQ ID NO:21 | 2.5 |
| SEQ ID NO:22 | 5.5 |
| SEQ ID NO:23 | 0.6 |
双特异性IgG抗体由两种质体载体的瞬时共转染产生：一者编码具有LAG-3结合VH区的IgG重链，且另一者编码具有PD-L1结合VH区的IgG重链。采用如WO 2013/157954及WO2013/157953中所述的CH3工程改造技术，以确保有效的异二聚化及双特异性抗体的形成。两种载体进一步编码包含IGKV1-39/Jk1轻链可变区的共同轻链。通过本领域中已知的方法执行细胞转染、细胞培养和抗体的采集及纯化。
实施例2-LAG-3x PD-L1双特异性抗体的筛选
参考和对照抗体
将双特异性抗体与抗LAG-3抗体瑞拉利单抗的类似物和抗PD-L1抗体阿特珠单抗的类似物、或其组合进行比较，所述瑞拉利单抗的类似物包含具有如SEQ ID NO:27中所示的氨基酸序列的两个重链可变区和具有如SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列的两个轻链可变区(瑞拉利单抗类似物)，所述阿特珠单抗的类似物包含具有如SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列的两个重链可变区和具有如SEQ:26中所示的氨基酸序列的两个轻链可变区(瑞拉利单抗类似物)。
包含具有如SEQ ID NO:29中所示的氨基酸序列的两个重链可变区和具有如SEQID NO:30中所示的氨基酸序列的两个轻链可变区的Fc沉默抗RSV抗体是用作阴性对照抗体(RSV对照抗体)。
选择多种双特异性抗体以用于进一步筛选，包括双特异性抗体，其包含下列重链可变区的组合：
| LAG-3VH | PD-L1 VH |
| SEQ ID NO:1 | SEQ ID NO:23 |
| SEQ ID NO:3 | SEQ ID NO:23 |
| SEQ ID NO:5 | SEQ ID NO:23 |
| SEQ ID NO:6 | SEQ ID NO:23 |
| SEQ ID NO:15 | SEQ ID NO:23 |
| SEQ ID NO:16 | SEQ ID NO:23 |
双特异性抗体是以Fc沉默IgG1形式生产，并通过蛋白质A及凝胶过滤纯化。通过CIEX移除潜在同源二聚体杂质。通过使用CH3工程改造技术减轻LAG-3同源二聚体形成，以减少功能测定中的潜在影响。在筛选测定中包括单特异性亲本抗体，以比较双特异性抗体与其亲本IgG的活性，并确定PD-L1和LAG-3单一靶向剂的功能测定的灵敏度。以与双特异性抗体类似的方式生产和表征单特异性亲本抗体。
抗原结合
使用用人类和恒河猴LAG-3稳定转染的293FF细胞系以及用人类和恒河猴PD-L1稳定转染的CHO-K1细胞系，通过FACS分析双特异性抗体与LAG-3和PD-L1的结合。
从50μg/mL开始以8步骤5倍滴定分析双特异性抗体和亲本抗体。山羊抗人类PE抗体(Invitrogen,H10104)是以3μg/mL的浓度用作二级抗体。在含有表达LAG-3的细胞的所有板中，瑞拉利单抗类似物是用作阳性对照，而阿特珠单抗类似物是用作含有PD-L1表达性细胞的板的阳性对照。在所有板上包括从50μg/mL的RSV对照抗体开始的6步骤5倍滴定作为阴性对照。两个孔仅用于二次抗体和未染色细胞作为额外对照。作为阴性对照，包括不表达目标的细胞(293FF和CHO-K1细胞)，其中仅在两个最高浓度(50μg/mL和10μg/mL)下测试IgG。
LAG-3结合的结果显示于图1A中。使用GraphPad Prism软件版本7.02(非线性回归，3参数剂量-反应曲线)计算EC50值。将每个双特异性抗体与阳性对照抗体、阴性对照抗体和其亲本LAG-3结合抗体一起作图。
阳性对照抗体瑞拉利单抗类似物在此测定中使用的三个板中显示出与人类LAG-3的结合不一致：具有包含SEQ ID NO:16的LAG-3组的板上的结合程度远低于在其他板上所观察到的那些。双特异性抗体(对于LAG-3为单价)的EC50值高于单特异性亲本抗体(对于LAG-3为二价)。包含SEQ ID NO:3和5的LAG-3组显示出最高的与人类LAG-3的结合程度。EC50值的概述显示于表3中。
表3.EC50值。
PD-L1结合的结果显示于图1B中。使用GraphPad Prism软件版本7.02(非线性回归，3参数剂量-反应曲线)计算EC50值。将双特异性抗体与阳性对照抗体、阴性对照抗体和亲本PD-L1结合抗体一起作图。
所有双特异性抗体均显示出与表达huPD-L1的CHO细胞的结合。包含SEQ ID NO:23的双特异性抗体(对于PD-L1为单价)在最高药物浓度下的最大效应(Emax)高于二价单特异性亲本抗体。多种包含具有SEQ ID NO:23的PD-L1组的双特异性抗体显示出比阿特珠单抗类似物更好、或相当的结合。EC50值的概述显示于表4中。
表4.EC50值。
PD-1/LAG-3报导子测定
PD-1/LAG-3报导子测定是使用表达PD-1和LAG-3的Jurkat T细胞作为效应细胞以及表达PD-L1的Raji细胞作为目标细胞来执行。制备PD-1和LAG-3效应细胞并将其以每孔100000个细胞接种。添加抗体溶液，接着添加Raji细胞(每孔25000个)。通过添加部分纯化的葡萄球菌肠毒素D(ppSED，最终浓度为16.6ng/mL)活化T细胞。在37℃下培养6小时后，通过添加Bio-Glo试剂和在EnVision板读取仪上测量发光来确定荧光素酶报导子基因活性。
从100μg/mL(最终浓度)开始以6步骤半对数滴定测试双特异性IgG。在测定培养基中以3x最终浓度制备IgG稀释液。作为阳性对照，各板上包括6步骤半对数滴定的阿特珠单抗类似物和瑞拉利单抗类似物的组合，最高浓度为50μg/mL+50μg/mL。阿特珠单抗类似物和瑞拉利单抗类似物也作为单一药物在100μg/mL起始浓度下测试。作为各板上的阴性对照，使用从100μg/mL开始的4步骤半对数滴定的RSV对照抗体。留下两个没有IgG的孔作为基础活性水平的对照。
结果显示于图2中。将双特异性抗体彼此进行比较，并且与阿特珠单抗类似物、瑞拉利单抗类似物、以及瑞拉利单抗和阿特珠单抗类似物的组合进行比较。使用GraphPadPrism软件版本7.02确定抗体反应的曲线下面积(area under the curve,AUC)。AUC相对于阳性对照的AUC表示。
AUC的概述显示于表5中。
表5.AUC值。
| LAG-3 | PD-L1 | 相较于对照的AUC |
| SEQ ID NO:5 | SEQ ID NO:23 | 83.9 |
| SEQ ID NO:3 | SEQ ID NO:23 | 76.6 |
| SEQ ID NO:6 | SEQ ID NO:23 | 71.5 |
| SEQ ID NO:15 | SEQ ID NO:23 | 71.0 |
| SEQ ID NO:16 | SEQ ID NO:23 | 58.3 |
| SEQ ID NO:1 | SEQ ID NO:23 | 54.8 |
SEB测定
使用来自两个供体：PBMC供体1和PBMC供体2的细胞于SEB测定中分析双特异性抗体和亲本抗体。首先，来自这些供体的PBMC显示对抗LAG-3参考抗体瑞拉利单抗类似物和抗PD-L1抗体阿特珠单抗类似物有反应(数据未显示)。简言之，将IgG的稀释系列添加至2x105个PBMC细胞，接着添加2μg/mL SEB(最终浓度)。从50μg/mL(最终浓度)开始以6步骤7倍稀释系列分析IgG。作为阳性对照，各板上包括5倍滴定的阿特珠单抗类似物和瑞拉利单抗类似物的组合，从25μg/mL+25μg/mL开始。作为各板上的阴性对照，使用从50μg/mL开始的4步骤半对数滴定的RSV对照抗体。留下两个没有IgG的孔作为基础活性水平的对照。将PBMC培养三天，之后通过Luminex测量上清液中的IL-2及TNFα水平。
结果显示于图3中。使用GraphPad Prism软件版本7.02确定抗体反应的AUC。
通过Luminex测量的细胞介素的标准曲线如预期，且所有样本的MFI值是在IL-2及TNFα的标准曲线的范围内(数据未显示)。来自SEB测定的IL-2数据显示于图3A1(供体1)和图3B1(供体2)中。TNFα的数据提供于图3A2(供体1)和图3B2(供体2)中。
在第一测定(PBMC供体1)中，对于IL-2及TNFα读出(read-outs)两者，阳性及阴性对照均如预期。对于IL-2读出，阿特珠单抗和瑞拉利单抗类似物的组合的活性高于单独阿特珠单抗类似物的活性。对于IL-2及TNFα读出两者，LAG-3xPD-L1双特异性抗体至少与阿特珠单抗和瑞拉利单抗类似物的组合一样有效。
在第二测定(PBMC供体2)中，对于IL-2，阳性和阴性对照如预期。然而，阳性对照的TNFα诱导程度相当低。同样地，对于IL-2读出，阿特珠单抗和瑞拉利单抗类似物的组合的活性高于单独阿特珠单抗类似物的活性。对于两个读出，LAG-3xPD-L1双特异性抗体至少与阿特珠单抗和瑞拉利单抗类似物的组合一样有效。LAG-3xPD-L1双特异性抗体的活性在两个供体的间有良好相关性。有具有如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列的LAG-3组的双特异性抗体显示出彼此类似的活性，且至少与阿特珠单抗和瑞拉利单抗类似物的组合一样有效。
实施例3-包含另外的LAG-3和PD-L1重链可变区的双特异性抗体的结合亲和力
包含有具有如SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的重链可变区的LAG-3结合结构域和有具有如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的重链可变区的PD-L1结合结构域的双特异性抗体，以及包含有具有如SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的重链可变区的LAG-3结合结构域和有具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区的PD-L1结合结构域的双特异性抗体的结合亲和力，是使用BIAcore T200通过SPR技术确定。
结合源自Sino Biological的四种重组蛋白抗原的双特异性抗体(人类LAG-3-His，登录号16498-H08H；食蟹猕猴LAG-3-His，登录号90841-C08H；人类PD-L1-His，登录号10084-H08H；食蟹猕猴PD-L1-His，登录号90251-C08H)是在单独的实验中确定。在这些测定中，抗huIgG Fcγ(JIR；登录号109-005-098)是使用游离胺化学共价偶合至CM5传感器芯片的表面：将捕捉抗体在kAc缓冲液中稀释至40μg/mL，并偶合至用NHS/EDC活化的表面(根据制造商的建议)。接下来，在流动槽中以30μL/min注射至多20nM的浓度的双特异性抗体达2分钟。随后，使于0.01M HEPES、0.5M NaCl、0.003M EDTA和0.05％v/v界面活性剂P20缓冲液中的抗原(0.6至20nM)以30μL/min流过CM5传感器芯片的表面2分钟。因此获得不同抗原的缔合及解离阶段的感测图。使用BIA评估软件及采用1:1交互作用模型(用于单价交互作用)的曲线拟合，确定个别Fab组的亲和力。
结果显示于图4中。包含有具有如SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的重链可变区的LAG-3结合结构域和有具有如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的重链可变区的PD-L1结合结构域的双特异性抗体，以及包含有具有如SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的重链可变区的LAG-3结合结构域和有具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区的PD-L1结合结构域的双特异性抗体，相较于瑞拉利单抗类似物对人类LAG-3具有较低的结合亲和力且对食蟹猕猴LAG-3具有较高的结合亲和力。相较于阿特珠单抗类似物，双特异性抗体对人类PD-L1具有类似的结合亲和力且对食蟹猕猴PD-L1具有较高的结合亲和力。
两种双特异性抗体同时结合人类LAG-3及人类PD-L1(数据未显示)。
如实施例2中所述，在结合测定、PD-1/LAG-3报导子测定和SEB测定中筛选这些抗体以确认它们的性质。结果显示于图5中。两种双特异性抗体均结合人类和恒河猴LAG-3(图5A和B)以及人类和恒河猴PD-L1(图5C和D)。两种双特异性抗体在报导子测定(图5E)和SEB测定(图5F)中均显示与瑞拉利单抗和阿特珠单抗类似物的组合相当的活性。EC50值提供于表6和表7中。
表6.来自PD-1/LAG-3报导子测定的EC50值。
| LAG-3 | PD-L1 | EC50(nM) |
| SEQ ID NO:17 | SEQ ID NO:24 | 14.80 |
| SEQ ID NO:5 | SEQ ID:NO 20 | 10.43 |
表7.来自SEB测定的EC50值。
| LAG-3 | PD-L1 | EC50±SD(nM) |
| SEQ ID NO:17 | SEQ ID NO:24 | 0.34±0.29 |
| SEQ ID NO:5 | SEQ ID:NO 20 | 0.27±0.19 |
实施例4-体内研究
在带有原位(orthotopic)MDA-MB-231肿瘤的人类干细胞人源化NSG小鼠模型中评估双特异性抗体相较于瑞拉利单抗和阿特珠单抗类似物的抗肿瘤功效。
使用已植入人类CD34+细胞且在植入后14周但不迟于24周的周边血液中具有>25％人类CD45+细胞的雌性hu-CD34 NSGTM小鼠(JAX库存编号705557)。使用植入来自三个独立供体的CD34+细胞的hu-CD34 NSGTM小鼠群组。
将120只HSC-NSG小鼠(72+超龄)植入5x106 MDA-MB-231人类乳腺癌细胞，以1:1比率再悬浮于具有matrigel的PBS中，植入乳腺脂肪垫中。HSC-NSG小鼠是免疫缺陷的NOD.Cg-Prkdcscid 1l2rgtm1Wjl/SzJ(NSGTM)小鼠，其植入来自脐带血的人类CD34+造血干细胞(HSC)，这些细胞经历多向(multilineage)分化成所有主要的免疫细胞类型。
在肿瘤接种后15天入组72只小鼠，此时肿瘤体积(TV)在50至150mm3之间。入组的肿瘤体积是在前一天(第-1天)测量。在入组当天起始给药，指定为治疗的第0天。各治疗组(表1)具有来自3个HSC供体的小鼠，每供体4只小鼠(N＝12)。每周两次测量肿瘤大小及体重。
表8.研究设计。*类似物抗体
在最终剂量后24小时单离终期肿瘤，以用于流动式细胞测量术分析在终止当天采集的MDA-MB-231肿瘤样本中的CD4+和CD8+T细胞和调节T细胞(Treg)群体。
结果显示于图6中。参考抗LAG-3抗体瑞拉利单抗类似物和抗PD-L1抗体阿特珠单抗类似物的单一和组合治疗不是有效的。当组合来自所有供体的数据(图6A)时，用包含具有如SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的重链可变区、具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区和具有如SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列的两个轻链可变区的双特异性抗体治疗的小鼠的肿瘤大小减小是显著的。
肿瘤生长概况呈现于表9中。
表9.肿瘤生长概况。*类似物抗体
图6B4显示PD-L1和LAG-3xPD-L1治疗增加增生的CD8+的百分比。LAG-3、PD-L1和LAG-3xPD-L1治疗增加增生的CD4+T细胞的百分比(图6B5)。图6B3显示用双特异性抗体治疗导致比用瑞拉利单抗和阿特珠单抗类似物的组合治疗更低的Treg的百分比。
实施例5：另外的LAG-3xPD-L1双特异性抗体的筛选
基本上如实施例2中所述筛选表10中所述的双特异性抗体。
表10.另外的LAG-3xPD-L1双特异性抗体的概述。
抗原结合
使用用人类和恒河猴LAG-3稳定转染的293FF细胞系以及用人类和恒河猴PD-L1稳定转染的CHO-K1细胞系，通过FACS分析双特异性抗体与LAG-3和PD-L1的结合，如实施例2。
在293FF-huLAG-3和293FF-reLAG-3细胞上从100μg/mL开始以及在CHO-K1-huPD-L1细胞上从25μg/mL开始以8步骤、4倍滴定分析双特异性抗体。山羊抗人类PE抗体(Invitrogen,H10104)是以3μg/mL的浓度用作二级抗体。将RSV对照抗体包括在所有板上作为阴性对照，在293FF-huLAG-3和293FF-reLAG-3细胞上从100μg/mL开始以及在CHO-K1-huPD-L1细胞上从25μg/mL开始以8步骤、4倍稀释。两个孔仅用于二次抗体及未染色细胞作为额外对照。作为阴性对照，包括不表达目标的细胞(293FF及CHO-K1细胞)，其中在三个最高浓度下测试IgG：在293FF细胞上为100、25和6.3μg/mL且在CHO-K1细胞上为25、6.3和1.6μg/mL。
人类和恒河猴LAG-3结合的结果显示于图7A和图7B中。PD-L1结合的结果显示于图7C中。通过将平均MFI值相对于没有抗体的孔标准化而获得诱导倍数，并将其作图为抗体浓度的对数的函数。使用GraphPad Prism软件版本7.02(非线性回归，3参数剂量-反应曲线)计算EC50值。将每个双特异性抗体与阴性对照抗体一起作图。
所有双特异性抗体均显示出与人类和恒河猴LAG-3的结合。所有双特异性抗体均显示出与表达huPD-L1的CHO细胞的结合。EC50值提供于表11中。
表11.双特异性抗体与人类和恒河猴LAG-3及人类PD-L1的结合的EC50及AUC值。
PD-1/LAG-3报导子测定
基本上如实施例2中所述执行PD-1/LAG-3报导子测定。葡萄球菌肠毒素D(ppSED)经验证可在150ng/mL之最终浓度下使用。
从100μg/mL(最终浓度)开始以6步骤半对数滴定测试双特异性IgG。在测定培养基中以3x最终浓度制备IgG稀释液。作为阳性对照，各板上包括6步骤半对数滴定的阿特珠单抗类似物和瑞拉利单抗类似物的组合，最高浓度为50μg/mL+50μg/mL。作为各板上的阴性对照，使用从100μg/mL开始的4步骤半对数滴定的RSV对照抗体。留下两个没有IgG的孔作为基础活性水平的对照。
结果显示于图8中。相较于瑞拉利单抗和阿特珠单抗类似物的组合，所有LAG-3xPD-L1双特异性抗体均显示出活性。使用GraphPad Prism软件版本7.02确定抗体反应之EC50及曲线下面积(AUC)。AUC相对于瑞拉利单抗和阿特珠单抗类似物的组合的AUC表示。
表12.如于PD-1/LAG-3报导子测定中所确定的双特异性抗体的EC50和AUC值。
| LAG-3 | PD-L1 | EC50μg/mL) | AUC(对照的％) |
| SEQ ID NO:52 | SEQ ID NO:20 | 1.154 | 96.93 |
| SEQ ID NO:5 | SEQ ID NO:20 | 1.132 | 86.25 |
| SEQ ID NO:59 | SEQ ID NO:24 | 0.5736 | 77.11 |
| SEQ ID NO:58 | SEQ ID NO:24 | 0.6303 | 85.47 |
| SEQ ID NO:57 | SEQ ID NO:24 | 0.481 | 75.11 |
| SEQ ID NO:56 | SEQ ID NO:24 | 0.9666 | 79.11 |
| SEQ ID NO:55 | SEQ ID NO:24 | 0.6529 | 86.97 |
| SEQ ID NO:54 | SEQ ID NO:24 | 0.5695 | 73.64 |
| SEQ ID NO:53 | SEQ ID NO:24 | 0.6613 | 77.11 |
| SEQ ID NO:17 | SEQ ID NO:24 | 0.815 | 76.53 |
Claims (53)
1.一种多特异性抗体，其包含结合LAG-3的结合结构域和结合PD-L1的结合结构域；或其保持所述抗体的结合特异性的变体，其中所述抗体或变体具有相比于参考抗体的组合相当、或相等或更高的效价，其中所述参考抗体的组合包含：包含具有如SEQ ID NO:27中所示的氨基酸序列的两个重链可变区和具有如SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列的两个轻链可变区的参考抗体，以及包含具有如SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列的两个重链可变区和具有如SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列的两个轻链可变区的参考抗体。
2.根据权利要求1所述的多特异性抗体或其变体，其中所述抗体或变体包含结合LAG-3的单一结合结构域和/或结合PD-L1的单一结合结构域。
3.根据权利要求1或2所述的多特异性抗体或其变体，其中所述效价通过在体内小鼠研究中测量肿瘤体积减少来确定。
4.根据权利要求3所述的多特异性抗体或其变体，其中相当的效价是在所述参考抗体的组合的肿瘤体积减少的5倍范围内的肿瘤体积减少，且包括与所述参考抗体的组合的肿瘤体积减少的5至2倍、优选地3至2倍偏差。
5.根据权利要求1或2所述的多特异性抗体或其变体，其中所述效价通过阻断配体或受体结合LAG-3和/或PD-L1的效价来确定。
6.根据权利要求5所述的多特异性抗体或其变体，其中所述阻断配体结合LAG-3和/或PD-L1的效价是在PD-1/LAG-3报导子测定中测量的。
7.根据权利要求5或6所述的多特异性抗体或其变体，其中相当的效价是阻断配体或受体结合LAG-3和/或PD-L1的效价，其在所述参考抗体的组合的阻断配体或受体结合LAG-3和/或PD-L1的效价的5倍范围内，且包括与所述参考抗体的组合的LAG-3和/或PD-L1阻断活性的5至2倍、优选地3至2倍偏差。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述结合LAG-3的结合结构域包含重链可变区，所述重链可变区包含：
a)具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
b)具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
c)具有如SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
d)具有如SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
e)具有如SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
f)具有如SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
g)具有如SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
h)具有如SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
i)具有如SEQ ID NO:9中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
j)具有如SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
k)具有如SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
l)具有如SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
m)具有如SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
n)具有如SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
o)具有如SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
p)具有如SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
q)具有如SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
r)具有如SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
s)具有如SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
t)具有如SEQ ID NO:54中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
u)具有如SEQ ID NO:55中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
v)具有如SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
w)具有如SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
x)具有如SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，或
y)具有如SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述LAG-3结合结构域包含具有如SEQ ID NO:1-17或SEQ ID NO:52-59中任一者所示的氨基酸序列、或与其具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述LAG-3结合结构域进一步包含轻链可变区。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述LAG-3结合结构域进一步包含CH1和CL区。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述结合PD-L1的结合结构域包含重链可变区，所述重链可变区包含：
a)具有如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
b)具有如SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
c)具有如SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
d)具有如SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；或
e)具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:20-24中任一者所示的氨基酸序列、或与其具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述PD-L1结合结构域进一步包含轻链可变区。
15.根据权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述PD-L1结合结构域进一步包含CH1和CL区。
16.一种多特异性抗体、或其保持所述抗体的结合特异性的变体，其中所述抗体或其变体包含特异性结合LAG-3的胞外结构域的结合结构域和特异性结合B7家族蛋白质的胞外结构域的结合结构域，
其中所述LAG-3结合结构域包含重链可变区，所述重链可变区包含：
a)具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
b)具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
c)具有如SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
d)具有如SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
e)具有如SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
f)具有如SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
g)具有如SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
h)具有如SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
i)具有如SEQ ID NO:9中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
j)具有如SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
k)具有如SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
l)具有如SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
m)具有如SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
n)具有如SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
o)具有如SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
p)具有如SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
q)具有如SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
r)具有如SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
s)具有如SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
t)具有如SEQ ID NO:54中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
u)具有如SEQ ID NO:55中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
v)具有如SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
w)具有如SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
x)具有如SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，或
y)具有如SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。
17.根据权利要求16所述的多特异性抗体或其变体，其中所述LAG-3结合结构域包含具有如SEQ ID NO:1-17或SEQ ID NO:52-59中任一者所示的氨基酸序列、或与其具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区。
18.根据权利要求16或17所述的多特异性抗体或其变体，其中所述LAG-3结合结构域进一步包含轻链可变区。
19.根据权利要求16-18中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述LAG-3结合结构域进一步包含CH1和CL区。
20.根据权利要求16-19中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述抗体或变体对于结合LAG-3是单价的。
21.根据权利要求16-20中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述B7家族蛋白质选自由PD-L1、PD-L2、CD80、CD86、B7-H4、TNFRSF14和B7-H7组成的组。
22.根据权利要求16-21中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述B7家族蛋白质是PD-L1。
23.根据权利要求16-22中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述特异性结合B7家族蛋白质的胞外结构域的可变结构域阻断PD-L1与其受体的结合。
24.根据权利要求23所述的抗体或其变体，其中所述受体是PD-1和/或CD80。
25.根据权利要求16-24中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述结合PD-L1的结合结构域包含重链可变区，所述重链可变区包含：
a)具有如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
b)具有如SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
c)具有如SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；
d)具有如SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)；或
e)具有如SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链可变区的重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，
其中每个HCDR可包含至多三、二或一个氨基酸取代。
26.根据权利要求16-25中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述PD-L1结合结构域包含具有如SEQ ID NO:20-24中任一者所示的氨基酸序列、或与其具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区。
27.根据权利要求16-26中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述PD-L1结合结构域进一步包含轻链可变区。
28.根据权利要求16-27中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述PD-L1结合结构域进一步包含CH1和CL区。
29.根据权利要求16-28中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述抗体或变体对于结合PD-L1是单价的。
30.根据权利要求16-29中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述抗体或变体具有相比于参考抗体的组合相当、或相等或更高的效价，其中所述参考抗体的组合包含：包含具有如SEQ ID NO:27中所示的氨基酸序列的两个重链可变区和具有如SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列的两个轻链可变区的参考抗体，以及包含具有如SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列的两个重链可变区和具有如SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列的两个轻链可变区的参考抗体。
31.根据权利要求30所述的多特异性抗体或其变体，其中所述效价通过在体内小鼠研究中测量肿瘤体积减少来确定。
32.根据权利要求30或31所述的多特异性抗体或其变体，其中相当的效价包括与所述参考抗体的组合的肿瘤体积减少的5至2倍、优选地3至2倍偏差。
33.根据权利要求30所述的多特异性抗体或其变体，其中所述效价通过阻断配体或受体结合LAG-3和/或PD-L1的效价来确定。
34.根据权利要求33所述的多特异性抗体或其变体，其中所述阻断配体结合LAG-3和/或PD-L1的效价是在PD-1/LAG-3报导子测定中测量的。
35.根据权利要求33或34所述的多特异性抗体或其变体，其中相当的效价是阻断配体或受体结合LAG-3和/或PD-L1的效价，其在所述参考抗体的组合的阻断配体或受体结合LAG-3和/或PD-L1的效价的5倍范围内，且包括与所述参考抗体的组合的LAG-3和PD-L1阻断活性的5至2倍、优选地3至2倍偏差。
36.根据权利要求1-35中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述抗体或变体是全长抗体，特别是全长双特异性抗体。
37.一种药物组合物，其包含：根据权利要求1-36中任一项所述的多特异性抗体或其变体；以及药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂。
38.根据权利要求1-36中任一项所述的多特异性抗体或其变体、或根据权利要求37所述的药物组合物，其用作药物。
39.根据权利要求1-36中任一项所述的多特异性抗体或其变体、或根据权利要求37所述的药物组合物，其用于治疗与被抑制的免疫系统相关的疾病。
40.根据权利要求1-36中任一项所述的多特异性抗体或其变体、或根据权利要求37所述的药物组合物，其用于治疗癌症。
41.一种用于治疗疾病的方法，其包括向有需要的个体施用有效量的根据权利要求1-36中任一项所述的多特异性抗体或其变体、或根据权利要求37所述的药物组合物。
42.一种用于治疗与被抑制的免疫系统相关的疾病的方法，其包括向有需要的个体施用有效量的根据权利要求1-36中任一项所述的多特异性抗体或其变体、或根据权利要求37所述的药物组合物。
43.一种用于治疗癌症的方法，其包括向有需要的个体施用有效量的根据权利要求1-36中任一项所述的多特异性抗体或其变体、或根据权利要求37所述的药物组合物。
44.一种载体，其包含编码根据权利要求16-20中任一项所定义的LAG-3结合结构域的重链可变区的核酸序列和编码根据权利要求25-28中任一项所定义的PD-L1结合结构域的重链可变区的核酸序列。
45.根据权利要求44所述的载体，其中所述载体进一步包含编码CH1区以及优选地铰链、CH2和CH3区的核酸序列。
46.根据权利要求44或45所述的载体，其进一步包含编码轻链可变区和优选地CL区的至少一个核酸序列。
47.根据权利要求46所述的载体，其中所述轻链可变区是能够与具有不同表位特异性的多个重链配对的轻链的轻链可变区。
48.一种细胞，其包含编码根据权利要求16-20中任一项所定义的LAG-3结合结构域的重链可变区的核酸序列和编码根据权利要求25-28中任一项所定义的PD-L1结合结构域的重链可变区的核酸序列。
49.根据权利要求48所述的细胞，其中所述细胞进一步包含编码CH1区以及优选地铰链、CH2和CH3区的核酸序列。
50.根据权利要求48或49所述的细胞，其进一步包含编码轻链可变区和优选地CL区的至少一个核酸序列。
51.根据权利要求50所述的细胞，其中所述轻链可变区是能够与具有不同表位特异性的多个重链配对的轻链的轻链可变区。
52.一种细胞，其生产根据权利要求1-36中任一项所述的多特异性抗体或其变体。
53.根据权利要求52的细胞，其中所述细胞是重组细胞，其已使用根据权利要求44-47中任一项所述的载体转化。
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