CN117147857A - 尿液白介素18及其多肽片段在过敏性疾病中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种尿液白介素18（Interleukin‑18）及其多肽片段的应用，具体为尿液白介素18及其多肽片段在制备用于过敏性疾病诊断、鉴别诊断、病情程度判断、治疗效果评价、监测、预后评估及机理研究等制剂的应用。过敏性疾病又称变态反应性疾病。本发明通过研究证实，与健康人（正常对照组）相比，尿液白介素18及其多肽片段在过敏性疾病患者中表达升高。可用于过敏性疾病患者的各种目的应用检测。本发明发挥尿液标本获取无创、可大规模重复取样、保存方便的优势，利用尿液标本检测尿液白介素18及其多肽片段。

Description

尿液白介素18及其多肽片段在过敏性疾病中的应用
技术领域
本发明涉及尿液白介素18及其多肽片段的新用途，具体涉及尿液白介素18及其多肽片段在过敏性疾病诊断、鉴别诊断、病情程度判断、治疗效果评价、监测、预后评估及机理研究等制剂的应用。
背景技术
过敏性疾病又称变态反应性疾病，据世界卫生组织统计，在全球范围内，过敏性疾病患者人群数量庞大，全球约有三分之一的人曾遭受过敏性疾病的侵害。近年来由于工业化程度显著提高，环境污染明显加重以及人们生活方式急剧变化，过敏性疾病的发病率逐年上升，严重的过敏性疾病甚至危及生命，已成为全球公共卫生焦点问题。
目前临床上对于过敏性疾病的辅助检查主要包括皮肤点刺试验（skin pricktest, SPT）及血清sIgE检测等，但SPT试验患者较痛苦依从性差，易受药物影响，并且还可增加全身过敏症状发生的风险，不适于严重过敏体质及儿童与老年群体。sIgE检测也并非无创检测，常需患者反复抽血。为提高过敏性疾病患者的生活质量和依从性，减轻多次采血及点刺试验的痛苦，期望通过尿液蛋白或多肽研究，实现用无痛、方便、快捷、易重复的尿液检测辅助过敏性疾病的诊断，也为进一步尿液多肽检测试剂盒的研究奠定基础。
白介素18（Interleukin-18，IL18）白介素家族中的一员，其在结构上与白介素1具有同源性，而在功能上与白介素12相似，被半胱氨酸蛋白酶-l（Caspase-1）催化成熟，是一种重要的炎性细胞因子，是外周炎症反应和机体免疫反应的重要调节因子。在本研究中过敏性疾病患者尿液IL18含量较健康人组出现表达上调，在尿液中含量升高。
与常用的临床血液样本相比，尿液可以完全无创、连续、大量收集；没有稳态调节，可累积更多种类、更大幅度的变化，机体的很多病理生理变化可能体现在尿液中。一些激素和细胞因子等分子量相对较小的蛋白多肽入血后，会很快被排泄进入尿液，这些蛋白和多肽在尿液中被检测到的概率比在血中大很多；尿液收集之前，尿中可能的蛋白降解过程已经完成，所以尿蛋白可在较长时间内保持稳定。为减轻过敏性疾病患者多次采血的痛苦，本实验在前期方法学摸索的基础上，期望通过尿液蛋白或多肽研究，实现用无痛、方便、快捷、易重复的尿液检测辅助过敏性疾病患者的诊断及病情监测，也为进一步尿液多肽检测试剂盒的研究奠定基础。
发明内容
本发明的目的在于提供一种尿液白介素18及其多肽片段在制备用于过敏性疾病诊断、鉴别诊断、病情程度判断、治疗效果评价、监测、预后评估及机理研究等制剂的应用。
优选地，所述尿液白介素18的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1所示(MAAEPVEDNCINFVAMKFID NTLYFIAEDD ENLESDYFGK LESKLSVIRN LNDQVLFIDQ GNRPLFEDMT DSDCRDNAPRTIFIISMYKD SQPRGMAVTI SVKCEKISTL SCENKIISFK EMNPPDNIKD TKSDIIFFQR SVPGHDNKMQFESSSYEGYF LACEKERDLF KLILKKEDEL GDRSIMFTVQ NED)、SEQ ID NO.2所示 ( MAAEPVEDNCINFVAMKFID NTLYFIENLE SDYFGKLESK LSVIRNLNDQ VLFIDQGNRP LFEDMTDSDC RDNAPRTIFIISMYKDSQPR GMAVTISVKC EKISTLSCEN KIISFKEMNP PDNIKDTKSD IIFFQRSVPG HDNKMQFESSSYEGYFLACE KERDLFKLIL KKEDELGDRS IMFTVQNED)；或由SEQ ID NO:1~2所示的氨基酸序列衍生的，且与SEQ ID NO:1~2所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列。
优选地，所述制剂为过敏性疾病患者尿液白介素18及其多肽片段检测试剂盒。
优选地，所述试剂盒包括抗原抗体反应的免疫方法及其试剂盒如能够特异性结合白介素18及其多肽片段的适配体抗体或抗体片段中的一种或多种。
优选地，所述检测方法包括直接检测白介素18及其多肽片段的质谱等方法及其相关试剂盒。
优选地，所述检测方法包括直接检测白介素18及其多肽片段的相关核酸检测等方法及其相关试剂盒。
优选地，所述试剂盒还包括选自下组的成分：固相载体，稀释液，对照品，标准品，质控品，检测抗体，第二抗体、第二抗体稀释液，发光试剂，洗涤液、显色液、终止液中的任意一种或几种的组合。
优选地，所述标准品包括白介素18标准品、人源化标签抗体标准品；较佳地，所述质控品包括：白介素18质控品、人源化标签抗体质控品；较佳地，所述固相载体包括：微粒、微球、玻片、试纸条、塑料珠、液相芯片、微孔板或亲和膜等以及同等功能的其他载体。
优选地，所述固相载体的材质为聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺、纤维素中的任意一种及具有类似功能的载体。
发明人首先收集了健康人、过敏性疾病患者的尿液标本，2000g离心10min后，吸取上清，采用Bradford法测定提取的蛋白浓度，酶解后使用C18脱盐柱对样本进行脱盐。调整DDA建库样本质谱色谱条件，质谱分析及建库采用skyline软件处理，调整PRM采集质谱参数设置并完成PRM肽段积分定量，通过定量值校正/计算绝对定量值、差异分析及目标蛋白全局聚类分析对数据进行处理。将过敏性疾病组和正常对照组在质谱中得到的数据进行定量计算，最终获得差异蛋白白介素18。
本发明通过研究证实与健康人相比，白介素18及其多肽片段在过敏性疾病患者的尿液中呈高表达，与临床诊断有较好的一致性。从而提出检测尿液白介素18及其多肽片段可用于过敏性疾病的诊断、鉴别诊断、病情程度判断、治疗效果评价、监测、预后评估及机理研究等制剂的应用。
本发明发挥尿液标本获取无创、可大规模重复取样、保存方便的优势，利用尿液标本检测尿液白介素18及其多肽片段。
为让本发明的上述和其它目的、特征和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，并配合附图，作详细说明如下。
附图说明
图1是尿液白介素18及其多肽片段在过敏性疾病组及健康对照组中含量图。
具体实施方式
实施例1 尿液标本的收集与处理
选取过敏性疾病患者作为过敏性疾病组，选取同期健康体检者作为正常对照组。收集各组研究对象入院后的新鲜晨尿样本30ml，不能正常排尿者收集其早晨导尿管中尿液，置于干燥、洁净的容器内。将收集的尿液标本2000g离心5min后，吸取上清，每管2ml分装，留取10ul采用Bradford法进行蛋白定量，对其酶解除盐与分馏分后冻干待上机。
实施例2 质谱分析和搜库流程
调整DDA建库样本质谱色谱条件，采用skyline软件建库，针对每个目标蛋白挑选独有肽段，导出独有肽段离子对列表，PRM靶向采集独有肽段，调整PRM采集质谱参数设置，对PRM肽段积分定量。
实施例3 差异多肽数据分析
对数据进行定量校正，计算绝对定量值，针对不同比较组，分析计算每种比较方式的FC值和P值，按照FC＞1.2或FC＜1/1.2，P＜0.05的筛选规则，筛选差异蛋白，对目标蛋白进行全局聚类分析。
与健康人相比，白介素18在过敏性疾病患者的尿液中高表达，其在健康对照组和过敏性疾病组尿液中的含量如图1所示，白介素18在正常对照组和过敏性疾病组尿液中的表达具有显著性差异。
虽然本发明已以较佳实施例披露如上，然其并非用以限定本发明，任何所属技术领域的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，当可作些许的更动与改进，因此本发明的保护范围当视权利要求所界定者为准。
序列表
<110> 张 曼
<120> 尿液白介素18及其多肽片段在过敏性疾病中的应用
<130> 22PIL18-CN
<140> 22PIL18-CN
<141> 2022-01-20
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 193
<212> PRT
<213> Human Urine
<400> 1
Met Ala Ala Glu Pro Val Glu Asp Asn Cys Ile Asn Phe Val Ala Met
1 5 10 15
Lys Phe Ile Asp Asn Thr Leu Tyr Phe Ile Ala Glu Asp Asp Glu Asn
20 25 30
Leu Glu Ser Asp Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile
35 40 45
Arg Asn Leu Asn Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro
50 55 60
Leu Phe Glu Asp Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg
65 70 75 80
Thr Ile Phe Ile Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met
85 90 95
Ala Val Thr Ile Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys
100 105 110
Glu Asn Lys Ile Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile
115 120 125
Lys Asp Thr Lys Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly
130 135 140
His Asp Asn Lys Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe
145 150 155 160
Leu Ala Cys Glu Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys
165 170 175
Glu Asp Glu Leu Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu
180 185 190
Asp
<210> 2
<211> 189
<212> PRT
<213> Human Urine
<400> 2
Met Ala Ala Glu Pro Val Glu Asp Asn Cys Ile Asn Phe Val Ala Met
1 5 10 15
Lys Phe Ile Asp Asn Thr Leu Tyr Phe Ile Glu Asn Leu Glu Ser Asp
20 25 30
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
35 40 45
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
50 55 60
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
65 70 75 80
Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met Ala Val Thr Ile
85 90 95
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
100 105 110
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
115 120 125
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly His Asp Asn Lys
130 135 140
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
145 150 155 160
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
165 170 175
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
180 185

Claims (9)

1.尿液白介素18及其多肽片段在制备用于过敏性疾病诊断、鉴别诊断、病情程度判断、治疗效果评价、监测、预后评估及机理研究等制剂的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述尿液白介素18的氨基酸序列如SEQ IDNO:1~2所示；或由SEQ ID NO:1~2所示的氨基酸序列衍生的，且与SEQ ID NO:1~2所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述制剂为过敏性疾病患者尿液白介素18及其多肽片段检测试剂盒。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括抗原抗体反应的免疫方法及其试剂盒如能够特异性结合白介素18及其多肽片段的适配体抗体或抗体片段中的一种或多种。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测方法包括直接检测白介素18及其多肽片段的质谱等方法及其相关试剂盒。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测方法包括直接检测白介素18及其多肽片段或其相关核酸检测等方法及其相关试剂盒。
7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括选自下组的成分：固相载体，稀释液，对照品，标准品，质控品，检测抗体，第二抗体、第二抗体稀释液，发光试剂，洗涤液、显色液、终止液中的任意一种或几种的组合。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述标准品包括白介素18标准品、人源化标签抗体标准品；较佳地，所述质控品包括：白介素18控品、人源化标签抗体质控品；较佳地，所述固相载体包括：微粒、微球、玻片、试纸条、塑料珠、液相芯片、微孔板或亲和膜等以及同等功能的其他载体。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述固相载体的材质为聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺、纤维素中的任意一种及具有类似功能的载体。
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