CN117143227B - 结合冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白的特异性抗体及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种结合冠状病毒SARS‑CoV‑2和SARS‑CoV核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein)的特异性抗体及其应用。本发明中抗体的CDRs的序列如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.6所示。本发明提供的抗体，其包含特定的序列的CDRs，能够特异性地与SARS‑CoV‑2和SARS‑CoV核衣壳蛋白结合，同时与另一种高致病性冠状病毒MERS‑CoV的核衣壳蛋白有微弱结合反应。本发明提供的抗体，靶向性强，结合活性高，本发明提供的制备方法制备抗体，纯度高，可大量制备。整体上，本发明的抗体可以用于SARS‑CoV和SARS‑CoV‑2感染检测方法的开发与优化。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种结合冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein)的特异性抗体及其制备方法和应用。
背景技术
SARS-CoV和SARS-CoV-2属于沙贝病毒属病毒(Sarbecovirus)，均是可感染人类的高致病性冠状病毒，主要编码四种结构蛋白，刺突蛋白(Spike protein)、膜蛋白(Membraneprotein)、包膜蛋白(Envelope protein)和核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein)。核衣壳蛋白可与病毒基因组RNA结合，形成核糖核衣壳复合物，同时也可参与病毒的基因组保护、病毒RNA的复制以及组装。核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein)保守性高，也是SARS-CoV和SARS-CoV-2上表达丰度最高的结构蛋白。因此核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein)常被用于检测试剂盒的开发，通过核衣壳蛋白基因或者蛋白的表达水平来评估患者的感染情况。针对核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein)抗体的研发将有助于SARS-CoV和SARS-CoV-2感染检测方法的开发。
SARS-CoV和SARS-CoV-2是目前已报道的可以感染人沙贝病毒属病毒(Sarbecovirus)。核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein)是冠状病毒的结构蛋白之一，参与病毒复制以及核糖核衣壳的形成，同时保守性较高，其基因和病毒表达水平可用作病毒感染和复制能力的检测指标。靶向核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein)的抗体可以用于检测病毒核衣壳蛋白的表达水平，并可用于针对病毒核衣壳蛋白水平的检测方法的优化。
发明内容
基于此，本发明的目的包括提供一种结合冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein)的特异性抗体，该抗体够特异性地结合SARS-CoV-2和SARS-CoV的核衣壳蛋白，用于SARS-CoV和SARS-CoV-2感染检测方法的开发。
上述发明目的可以通过如下的技术方案实现：
本发明的第一个目的是提供一种结合冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein)的特异性抗体，所述抗体的重链CDR1包含如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列、重链CDR2包含如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列、重链CDR3包含如SEQ IDNO.3所示的氨基酸序列；
所述抗体的轻链CDR1包含如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列、轻链CDR2包含氨基酸序列GAS、轻链CDR3包含如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列。
优选地，所述抗体的重链可变区如SEQ ID NO.7所示。
优选地，所述抗体的轻链可变区如SEQ ID NO.8所示。
优选地，所述抗体的轻链恒定区如SEQ ID NO.9所示。
优选地，所述抗体的重链恒定区如SEQ ID NO.10所示。
优选地，所述抗体的恒定区的序列为IgG1恒定区的序列。
优选地，所述抗体的恒定区的种属来源为人。
上述SEQ ID NO.7所示的重链可变区和SEQ ID NO.8所示的轻链可变区中，还包含了框架区域(FR)，4个FR的氨基酸序列不直接参与结合反应。
本发明提供的抗体，其能够特异性地与SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein)结合，该结合表位在SARS-CoV-2和SARS-CoV中高度保守。
本发明的第二个目的，提供上述结合冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白的特异性抗体在SARS-CoV或SARS-CoV-2检测或制备抗SARS-CoV或SARS-CoV-2药物中的应用。
本发明的第三个目的，提供一种检测试剂、检测试剂盒或者药物，包括上述的结合冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein)的特异性抗体。
本发明的第四个目的，提供一种核酸，含有用于编码上述结合冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein)的特异性抗体的核酸序列。
本发明的第五个目的，提供一种重组表达载体，包含上述的核酸。
优选地，所述重组表达载体为抗体表达载体。
优选地，所述重组表达载体为AbVec2.0-IGHG1或AbVec1.1-IGKC。
本发明的第六个目的，提供一种宿主细胞，包含上述的特异性抗体，或上述的核酸，或上述的重组表达载体。
优选地，所述宿主细胞为293T细胞或Expi293F细胞。
本发明的第七个目的，提供上述的结合冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein)的特异性抗体的制备方法，包括构建上述的宿主细胞，培养，收集结合冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein)的特异性抗体。
优选地，所述宿主细胞为293T细胞或者Expi293F细胞。
相对于传统技术，本发明提供的上述技术方案至少具有如下的有益效果：
本发明提供的抗体，其包含特定的序列的CDRs，能够特异性地与冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白结合，用于SARS-CoV和SARS-CoV-2感染检测方法的开发。本发明提供的抗体，靶向性强，结合活性高，能够特异性地结合SARS-CoV-2和SARS-CoV的核衣壳蛋白，同时与另一种高致病性冠状病毒MERS-CoV的核衣壳蛋白有微弱结合反应。整体上，本发明的抗体可以用于SARS-CoV和SARS-CoV-2感染检测方法的开发。采用本发明提供的制备方法制备抗体，纯度高，可大量制备。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案、更完整地理解本申请及其有益效果，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对本领域技术人员来说，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例2中抗体对SARS-CoV-2核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein)的结合活性检测结果图。
图2为本发明实施例2中抗体对SARS-CoV核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein)的结合活性检测结果图。
图3为本发明实施例2中抗体对MERS-CoV核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein)的结合活性检测结果图。
具体实施方式
下面结合附图、实施方式和实施例，对本发明作进一步详细的说明。应理解，这些实施方式和实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，提供这些实施方式和实施例的目的是使对本发明公开内容理解更加透彻全面。还应理解，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式和实施例，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下作各种改动或修改，得到的等价形式同样落于本发明的保护范围。此外，在下文的描述中，给出了大量具体的细节以便提供对本发明更为充分地理解，应理解，本发明可以无需一个或多个这些细节而得以实施。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述实施方式和实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
术语
除非另外说明或存在矛盾之处，本文中使用的术语或短语具有以下含义：
本文所使用的术语“和/或”、“或/和”、“及/或”的选择范围包括两个或两个以上相关所列项目中任一个项目，也包括相关所列项目的任意的和所有的组合，所述任意的和所有的组合包括任意的两个相关所列项目、任意的更多个相关所列项目、或者全部相关所列项目的组合。需要说明的是，当用至少两个选自“和/或”、“或/和”、“及/或”的连词组合连接至少三个项目时，应当理解，在本申请中，该技术方案毫无疑问地包括均用“逻辑与”连接的技术方案，还毫无疑问地包括均用“逻辑或”连接的技术方案。比如，“A及/或B”包括A、B和A+B三种并列方案。又比如，“A，及/或，B，及/或，C，及/或，D”的技术方案，包括A、B、C、D中任一项(也即均用“逻辑或”连接的技术方案)，也包括A、B、C、D的任意的和所有的组合，也即包括A、B、C、D中任两项或任三项的组合，还包括A、B、C、D的四项组合(也即均用“逻辑与”连接的技术方案)。
本发明中涉及“多个”、“多种”、“多次”等，如无特别限定，指在数量上大于2或等于2。例如，“一种或多种”表示一种或大于等于两种。
本文中所使用的“其组合”、“其任意组合”、“其任意组合方式”等中包括所列项目中任两个或任两个以上项目的所有合适的组合方式。
本文中，“合适的组合方式”、“合适的方式”、“任意合适的方式”等中所述“合适”，以能够实施本发明的技术方案、解决本发明的技术问题、实现本发明预期的技术效果为准。
本文中，“优选”、“更好”、“更佳”、“为宜”仅为描述效果更好的实施方式或实施例，应当理解，并不构成对本发明保护范围的限制。如果一个技术方案中出现多处“优选”，如无特别说明，且无矛盾之处或相互制约关系，则每项“优选”各自独立。
本发明中，“进一步”、“更进一步”、“特别”等用于描述目的，表示内容上的差异，但并不应理解为对本发明保护范围的限制。
本发明中，“可选地”、“可选的”、“可选”，指可有可无，也即指选自“有”或“无”两种并列方案中的任一种。如果一个技术方案中出现多处“可选”，如无特别说明，且无矛盾之处或相互制约关系，则每项“可选”各自独立。
本发明中，“第一方面”、“第二方面”、“第三方面”、“第四方面”等中，术语“第一”、“第二”、“第三”、“第四”等仅用于描述目的，不能理解为指示或暗示相对重要性或数量，也不能理解为隐含指明所指示的技术特征的重要性或数量。而且“第一”、“第二”、“第三”、“第四”等仅起到非穷举式的列举描述目的，应当理解并不构成对数量的封闭式限定。
本发明中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。除非和本申请的发明目的和/或技术方案相冲突，否则，本发明涉及的引用文献以全部内容、全部目的被引用。本发明中涉及引用文献时，相关技术特征、术语、名词、短语等在引用文献中的定义也一并被引用。本发明中涉及引用文献时，被引用的相关技术特征的举例、优选方式也可作为参考纳入本申请中，但以能够实施本发明为限。应当理解，当引用内容与本申请中的描述相冲突时，以本申请为准或者适应性地根据本申请的描述进行修正。
如本文所用，术语“抗体”或者“免疫球蛋白”是有相同结构特征的约150000道尔顿的异四聚糖蛋白，其由两个相同的轻链(L)和两个相同的重链(H)组成。每条轻链通过一个共价二硫键与重链相连，而不同免疫球蛋白同种型的重链间的二硫键数目不同。每条重链和轻链也有规则间隔的链内二硫键。每条重链的一端有可变区(VH)，其后是多个恒定区。每条轻链的一端有可变区(VL)，另一端有恒定区；轻链的恒定区与重链的第一个恒定区相对，轻链的可变区与重链的可变区相对。特殊的氨基酸残基在轻链和重链的可变区之间形成界面。
如本文所用，术语“可变”表示抗体中可变区的某些部分在序列上有所不同，它形成了各种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。然而，可变性并不均匀地分布在整个抗体可变区中。它集中于轻链和重链可变区中称为互补决定区(CDR)或超变区中的三个片段中。可变区中较保守的部分称为构架区(FR)。天然重链和轻链的可变区中各自包含四个FR区，它们大致上呈β-折叠构型，由形成连接环的三个CDR相连，在某些情况下可形成部分β折叠结构。每条链中的CDR通过FR区紧密地靠在一起并与另一链的CDR一起形成了抗体的抗原结合部位[参见Kabat等,NIH Publ.No.91-3242,卷I，647-669页(1991)]。恒定区不直接参与抗体与抗原的结合，但是它们表现出不同的效应功能，例如参与抗体的依赖于抗体的细胞毒性。
脊椎动物抗体(免疫球蛋白)的“轻链”可根据其恒定区的氨基酸序列归为明显不同的两类(称为κ和λ)中的一类。根据其重链恒定区的氨基酸序列，免疫球蛋白可以分为不同的种类，主要有5类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中一些还可进一步分成亚类(同种型)，如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgA2。对应于不同类免疫球蛋白的重链恒定区分别称为α、δ、ε、γ、和μ。不同类免疫球蛋白的亚单位结构和三维构型是本领域人员所熟知的。
一般，抗体的抗原结合特性可由位于重链和轻链可变区的3个特定的区域来描述，称为可变区域(CDR)，将该段间隔成4个框架区域(FR)，4个FR的氨基酸序列相对比较保守，不直接参与结合反应。这些CDR形成环状结构，通过其间的FR形成的β折叠在空间结构上相互靠近，重链上的CDR和相应轻链上的CDR构成了抗体的抗原结合位点。可以通过比较同类型的抗体的氨基酸序列来确定是哪些氨基酸构成了FR或CDR区域。
本发明不仅包括完整的抗体，还包括具有免疫活性的抗体的片段或抗体与其他序列形成的融合蛋白。因此，本发明还包括所述抗体的片段、衍生物和类似物。
在本发明中，抗体包括用本领域技术人员熟知技术所制备的鼠的、嵌合的、人源化的或者全人的抗体。重组抗体，例如嵌合的和人源化的单克隆抗体，包括人的和非人的部分，可以通过标准的DNA重组技术获得，它们都是有用的抗体。嵌合抗体是一个分子，其中不同的部分来自不同的动物种，例如具有来自鼠的单克隆抗体的可变区，和来自人免疫球蛋白的恒定区的嵌合抗体(见例如美国专利4816567和美国专利4816397在此通过引用方式整体引入本文)。人源化的抗体是指来源于非人物种的抗体分子，具有一个或多个来源于非人物种的互补决定区(CDRs)和来源于人免疫球蛋白分子的框架区域(见美国专利5585089，在此通过引用方式整体引入本文)。这些嵌合和人源化的单克隆抗体可以采用本领域熟知的DNA重组技术制备。
在本发明中，抗体可以是单特异性、双特异性、三特异性、或者更多的多重特异性。
在本发明中，本发明的抗体还包括其保守性变异体，指与本发明抗体的氨基酸序列相比，有至多10个，较佳地至多8个，更佳地至多5个，最佳地至多3个氨基酸被性质相似或相近的氨基酸所替换而形成多肽。这些保守性变异多肽最好根据表A进行氨基酸替换而产生。
以下为一些具体实施例。
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，优先参考本发明中给出的指引，还可以按照本领域的实验手册或常规条件，还可以按照制造厂商所建议的条件，或者参考本领域已知的实验方法。
下述的具体实施例中，涉及原料组分的量度参数，如无特别说明，可能存在称量精度范围内的细微偏差。涉及温度和时间参数，允许仪器测试精度或操作精度导致的可接受的偏差。
在本发明的一些实施例方式中，所述宿主细胞为293T细胞或者Expi293F细胞。
实施例1：单克隆抗体的表达载体的构建、表达与纯化
本实施例制备的单克隆抗体，其重链可变区包含如SEQ ID NO.1所示的重链CDR1、如SEQ ID NO.2所示的重链CDR2和如SEQ ID NO.3所示的重链CDR3，其轻链可变区包含如SEQ ID NO.4所示的轻链CDR1、含氨基酸序列GAS轻链CDR2和如SEQ ID NO.6所示的轻链CDR3。具体地，其重链可变区如SEQ ID NO.7所示，轻链可变区如SEQ ID NO.8所示，轻链恒定区如SEQ ID NO.9所示，重链恒定区如SEQ ID NO.10所示。
本实施例单克隆抗体的制备方法包括如下步骤：
一、参考本发明人已发表的发明专利，《一种高滴度EB病毒的制备方法、EB病毒永生化记忆性B细胞的方法与应用》，专利号：20190975849.3中的方法，筛选结合冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白的阳性细胞克隆，对阳性细胞克隆进行RNA提取，使用的参考文献Efficient generation ofmonoclonal antibodies from single human Bcells by single cell RT-PCR and expression vector cloning.Tiller T,Meffre E,Yurasov S,Tsuiji M,Nussenzweig MC,Wardemann H.J Immunol Methods.2008Jan 1；329(1-2):112-24.Epub 2007Oct 31.10.1016/j.jim.2007.09.017PubMed 17996249中的方法对抗体的重链和轻链分别进行PCR扩增，获取到抗体重链和轻链的可变区序列。
二、将编码含有抗体重链(SEQ ID NO.7)和轻链可变区(SEQ ID NO.8)的核苷酸序列分别整合入含人IgG1抗体重、轻链恒定区序列的AbVec2.0-IGHG1和AbVec1.1-IGKC(载体购买于addgene官网，货号分别为：#80795和#80796)，其中AbVec2.0-IGHG1所用的酶切克隆位点为AgeI和SalI，AbVec1.1-IGKC所用的酶切克隆位点为AgeI和BsiWI，经酶切链接得到能分别表达目标抗体的重链和轻链的重组表达载体。
三、细胞的转染、单克隆抗体表达和纯化
1、转染
采用Gibco公司Expi293F表达系统(货号为A14635)，并按照说明书进行转染操作，步骤简述为：
将分别表达抗体的重链和轻链的两个重组表达载体DNA共30μg(重链和轻链各15μg)与80μL配套的转染试剂ExpiFectamineTM混合，室温放置20分钟，使其形成稳定的复合物；
随后加入至25.5mL已经调整浓度为2.9×106cells/mL的Expi293F细胞培养液中；
于37℃、8％(v/v)CO2、125rpm摇床中培养20小时；
加入Expi293F表达系统所带的转染增强剂1(150μL)和转染增强剂2(1.5mL)；
继续置于37℃、8％(v/v)CO2、125rpm摇床中培养4天。
2、纯化
3000rpm离心15分钟收集上清，用Genscript公司的ProteinA磁珠进行抗体纯化。
纯化步骤简述为：
将500μLProteinA磁珠与30mL细胞上清混合，室温摇床孵育4小时，转速为210RPM；
磁力架吸附磁珠，弃去细胞上清，用10mLpH7.00.1％(v/v)Tween 20的1×PBS清洗磁珠5次；
用2.5mLpH2.00.1M glycine的Elutionbuffer洗脱；
用pH8.51M Tris缓冲液平衡至PH7.0；
取平衡后的单克隆抗体采用PD-10Desalting Column(Cytiva公司，货号为17085101)进行脱盐处理以及进行DPBS溶剂置换，用25mL的DPBS清洗脱盐柱后，过2.5mL平衡后的抗体溶液，再用3.5mL的DPBS洗脱，得到溶剂置换为DPBS的单克隆抗体溶液。
纯化后的抗体置于-80℃冰箱中保存。
由此获得单克隆抗体，其重链可变区如SEQ ID NO.7所示，轻链可变区如SEQ IDNO.8所示，轻链恒定区如SEQ ID NO.9所示，重链恒定区如SEQ ID NO.10所示。
实施例2：单克隆抗体的功能分析
1、与SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein)结合的特异性抗体与抗原的结合活性检测
采用ELISA法测定实施例1获得的单克隆抗体与SARS-CoV-2、SARS-CoV和MERS-CoV核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein)的结合能力。
步骤简述为：
(1)分别用SARS-CoV-2核衣壳蛋白(Genscript，T80101)、SARS-CoV核衣壳蛋白(氨基酸序列如SEQ ID NO.11)和MERS-CoV核衣壳蛋白(氨基酸序列如SEQ ID NO.5)每孔25ng，包被于ELISA酶标板上，以DPBS(杜氏磷酸盐缓冲液)为包被液，4℃过夜；
(2)10％(v/v)小牛血清的DPBS作为封闭液，37℃封闭2小时；加入系列梯度稀释后(10-4、10-2、100、102)的实施例1制备的待检单克隆抗体，37℃孵育2小时；
(3)加入1:40000稀释的HRP-conjugated Goat anti-human IgG(H+L)antibody(Jackson ImmunoResearch)作为二抗，37℃孵育1小时；
(4)用TMB单组分显色液显色后，用2M硫酸终止反应，用酶标仪检测吸光度A450数值。
结果：
单克隆抗体与抗原的结合活性检测结果见图1，由图1可知单克隆抗体针对SARS-CoV-2核衣壳蛋白的结合活性为EC50＝0.0062μg/mL；针对SARS-CoV核衣壳蛋白的结合活性为EC50＝0.0095μg/mL(图2)；针对MERS-CoV核衣壳蛋白的结合活性为EC50＝1.458μg/mL(图3)。
以上所述实施方式和实施例的各技术特征可以进行任意合适方式的组合，为使描述简洁，未对上述实施方式和实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为在本说明书记载的范围中。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，得到的等价形式同样落于本申请的保护范围。还应当理解，本领域技术人员在本发明提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本发明所附权利要求的保护范围内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。
SEQ ID NO.1
GFTFSNAW
SEQ ID NO.2
IKSKTDGGTT
SEQ ID NO.3
TTEGSGIVVIVYAFDY
SEQ ID NO.4
QSVSSSY
SEQ ID NO.5
MASPAAPRAVSFADNNDITNTNLSRGRGRNPKPRAAPNNTVSWYTGLTQHGKVPLTFPPGQGVPLNANSTPAQNAGYWRRQDRKINTGNGIKQLAPRWYFYYTGTGPEAALPFRAVKDGIVWVHEDGATDAPSTFGTRNPNNDSAIVTQFAPGTKLPKNFHIEGTGGNSQSSSRASSLSRNSSRSSSQGSRSGNSTRGTSPGPSGIGAVGGDLLYLDLLNRLQALESGKVKQSQPKVITKKDAAAAKNKMRHKRTSTKSFNMVQAFGLRGPGDLQGNFGDLQLNKLGTEDPRWPQIAELAPTASAFMGMSQFKLTHQNNDDHGNPVYFLRYSGAIKLDPKNPNYNKWLELLEQNIDAYKTFPKKEKKQKAPKEESTDQMSEPPKEQRVQGSITQRTRTRPSVQPGPMIDVNTDSEQ ID NO.6
QQYGSSPPTSEQ ID NO.7
QVQLVQSGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTEGSGIVVIVYAFDYWGQGTLVTVSSSEQ ID NO.8
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASRRATGIPERFSGSGSGTDFTLTINRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPTFGGGTKVEIKSEQ ID NO.9
TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECSEQ ID NO.10
STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSEQ ID NO.11
MSDNGPQSNQRSAPRITFGGPTDSTDNNQNGGRNGARPKQRRPQGLPNNTASWFTALTQHGKEELRFPRGQGVPINTNSGPDDQIGYYRRATRRVRGGDGKMKELSPRWYFYYLGTGPEASLPYGANKEGIVWVATEGALNTPKDHIGTRNPNNNAATVLQLPQGTTLPKGFYAEGSRGGSQASSRSSSRSRGNSRNSTPGSSRGNSPARMASGGGETALALLLLDRLNQLESKVSGKGQQQQGQTVTKKSAAEASKKPRQKRTATKQYNVTQAFGRRGPEQTQGNFGDQDLIRQGTDYKHWPQIAQFAPSASAFFGMSRIGMEVTPSGTWLTYHGAIKLDDKDPQFKDNVILLNKHIDAYKTFPPTEPKKDKKKKTDEAQPLPQRQKKQPTVTLLPAADMDDFSRQLQNSMSGASADSTQA
Claims (10)
1.一种结合冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白的特异性抗体，其特征在于，包括重链和轻链；
所述抗体的重链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示、重链CDR2的氨基酸序列如SEQID NO.2所示、重链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；
所述抗体的轻链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示、轻链CDR2的氨基酸序列为GAS、轻链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。
2.根据权利要求1所述的结合冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白的特异性抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区如SEQ ID NO.7所示；和/或，所述抗体的轻链可变区如SEQ ID NO.8所示。
3.根据权利要求1所述的结合冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白的特异性抗体，其特征在于，所述抗体的恒定区的序列为IgG1恒定区的序列；或/和，所述抗体的恒定区的种属来源为人。
4.根据权利要求1所述的结合冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白的特异性抗体，其特征在于，所述抗体的轻链恒定区如SEQ ID NO.9所示；或/和，所述抗体的重链恒定区如SEQ ID NO.10所示。
5.权利要求1至4任一项所述的结合冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白的特异性抗体在制备SARS-CoV或SARS-CoV-2检测产品或制备抗SARS-CoV或SARS-CoV-2药物中的应用。
6.一种检测试剂、检测试剂盒或者药物，其特征在于，包含权利要求1至4任一项所述的结合冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白的特异性抗体。
7.一种核酸，其特征在于，包括编码权利要求1至4中任一项所述的结合冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白的特异性抗体的核酸序列。
8.一种重组表达载体，其特征在于，包含权利要求7所述的核酸。
9.一种宿主细胞，其特征在于，包含权利要求1至4任一项所述的特异性抗体，或权利要求7所述的核酸，或者权利要求8所述的重组表达载体。
10.一种权利要求1至4任一项所述的结合冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白的特异性抗体的制备方法，其特征在于，包括构建权利要求9所述的宿主细胞，培养，收集结合冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV核衣壳蛋白的特异性抗体。
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| GR01 | Patent grant | ||
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