CN117129668B - 一种用于化学发光免疫分析的清洗液及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于化学发光免疫分析的清洗液及其制备方法和应用，属于生化试剂领域。其中，所述清洗液的工作液为包括500~800mM无机盐、0.01~0.03%表面活性剂以及0.1~0.3%的防腐剂的缓冲液，其中所述缓冲液的浓度为15~30mM，所述防腐剂为Krovin 500。本发明首次揭示清洗液工作液中的防腐剂类型和浓度会影响化学发光免疫分析的本底测值，从而影响最终的检测结果。本发明通过选择Krovin 500作为防腐剂，本底测值低至284.11±60.35，甚至优于雅培清洗液，丰富了本领域技术人员的选择。同时，利用本发明的清洗液基于吖啶酯标记进行化学发光免疫分析，准确度和灵敏度均得到极大提高，具有非常重要的应用价值。
Description
技术领域
本发明属于生化试剂技术领域，具体地，涉及一种用于化学发光免疫分析的清洗液及其制备方法和应用。
背景技术
化学发光免疫分析法是近三十年来迅速发展起来的非放射性免疫分析方法，属于一种超高灵敏度的微量测定技术。它通过化学发光系统与免疫反应相结合，用化学发光相关的物质标记抗体或抗原，与待测的抗原或抗体反应后，经过分离游离态的化学发光标记物，加入化学发光系统的其它相关物产生化学发光，从而进行抗原或抗体的定量或定性检测。化学发光免疫分析法具有灵敏度高、检测时间短、检测范围宽、敏感度高的优点。
清洗液组成大致包括缓冲体系、盐离子、表面活性剂以及防腐剂。理想的防腐剂应该是稳定的，与配方中其它成分是兼容的、低浓度有效，并且无毒或低毒的、符合试剂盒法规要求、成本低。
专利公开号CN111896731A公开了一种化学发光免疫分析用清洗液，由以下成分组成：磷酸盐缓冲液：20-30mmol/L，酪蛋白酸钠：0.5-0.75wt%，乙二胺四乙酸二钠：0.05-0.1wt%，脱氧胆酸钠：0.03-0.05wt%，吐温20：0.05-0.1wt%，防腐剂：0.02-0.08wt%；所述防腐剂为叠氮钠、ProClin 300及抗生素中的一种或多种。所述化学发光免疫分析用清洗液能够提高磁性微球的回收效率。
专利公开号CN113671169A公开了一种用于化学发光免疫检测AEP的非特异性吸附清洗液，每升包括10-100mMol/L缓冲液、0.01-1wt％表面活性剂、100-300mMol/L无机盐、0.5-0.1g/L防腐剂，余量为水。所述的防腐剂为Proclin 300、Proclin 950或叠氮钠。本发明的清洗液能够去除蛋白粘附，并使样品中内源脂溶性物质增溶分散，降低了分析结果的偏差，提高了检测的准确度。
专利公开号CN113484306A公开了一种磁微粒化学发光清洗液，包括缓冲液、盐离子、稳定剂、表面活性剂、防腐剂和消泡剂；所述防腐剂为叠氮钠，浓度为0.05％-0.15％。虽然该专利声称解决背景高的技术问题，但主要是提升其清洗效果，而非降低清洗液本身的背景值。并且其清洗后，背景值依然较高。
专利公开号CN115078711A公开了一种流式荧光检测用清洗液，所述清洗液包括基础洗液、蛋白质类和醇类，所述基础洗液包括缓冲盐和表面活性剂和防腐剂，所述防腐剂为KroVin系列防腐剂或ProClin系列防腐剂。所述KroVin系列防腐剂例如为KroVin1 00、KroVin 400、KroVin 500或KroVin 750；所述ProClin系列防腐剂例如为ProClin 50、ProClin 150、ProClin 200、ProClin 300、ProClin 950或ProClin 5000。可见，其公开的清洗液中防腐剂可有多种选择，但没有公开防腐剂的选择对检测结果的影响。
综上所述，现有技术均没有针对防腐剂进行优化，更加没有关注到防腐剂对化学发光免疫分析本底测值的影响。
发明内容
发明人在长期的研究过程中，意外地发现防腐剂的种类和浓度会影响检测的本底测值。经过进一步探索，发现使用Krovin 500作为防腐剂，在合适的工作浓度下，既能提高防腐效果，又能极大地降低对本底测值的影响。基于此，本发明的目的是提供一种防腐效果好并且不会影响本底测值的清洗液，为了达到该目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明第一方面提供一种用于化学发光免疫分析的清洗液工作液，所述清洗液工作液为包括500~800mM无机盐、0.01~0.03%表面活性剂以及0.1~0.3%的防腐剂的缓冲液，所述缓冲液的浓度为15~30mM，所述防腐剂为Krovin 500。
在本发明中，所述工作液是指相对于贮备液而言，是指在化学发光免疫分析过程中，无需进一步稀释能够直接使用的溶液。
在本发明的一些实施方案中，所述无机盐为氯化钠、氯化钾、氯化镁和/或氯化锌。事实上，本发明证实，无机盐的具体种类对本发明技术效果的影响不大，本领域技术人员可以使用其他任意适用的缓冲液。
在本发明的一些实施方案中，所述缓冲液选自PBS缓冲液、MOPS缓冲液、MES缓冲液、HEPES缓冲液和Tris-HCl缓冲液中的一种。事实上，本发明证实，缓冲液的具体种类对本发明技术效果的影响不大，本领域技术人员可以使用其他任意适用的缓冲液。
在本发明的一些实施方案中，所述表面活性剂选自SDS、Triton X-100、Tween 80和Tween 20中的至少一种。同样地，本发明证实，表面活性剂的具体种类对本发明技术效果的影响也不大，本领域技术人员可以使用其他任意适用的表面活性剂。
本发明第二方面提供本发明第一方面所述的清洗液工作液的制备方法，首先制备N×浓缩液，使用时稀释N倍得到工作液，其中，N=5~100。
相对于工作液，本领域通常会配制浓缩液作为贮备液，在使用时稀释相应倍数即可。在本发明中，N×浓缩液意味着配制成工作液时需要稀释N倍。通常情况下，稀释倍数为5~100。在本发明的一些实施方案中，N为20，即在使用时，需要稀释20倍，具体地，浓缩液为包括10~16M无机盐、0.2~0.6%表面活性剂以及2~6%的防腐剂的缓冲液，缓冲液的浓度为300~600mM，稀释20倍后即得到包括500~800mM钠离子或钾离子、0.01~0.03%表面活性剂以及0.1~0.3%的防腐剂的缓冲液，所述缓冲液的浓度为15~30mM。
本发明的第三方面提供一种用于化学发光免疫检测的清洗液浓缩液，所述清洗液浓缩液的组分与本发明第一方面所述的清洗液工作液的组分相同，且各组分的浓度为其在所述清洗液工作液中的浓度的N倍，其中，N=5~100。
本发明第四方面提供本发明第一方面所述的清洗液工作液或本发明第三方面所述的清洗液浓缩液在制备适用于基于吖啶酯进行化学发光免疫分析的试剂盒中的应用。
在本发明的一些实施方案中，所述清洗液工作液或清洗液浓缩液特别适用于制备基于吖啶酯进行化学发光免疫分析以检测低浓度目标物质的试剂盒。由于化学发光免疫分析基于发光值，换算为浓度。因此，本底测值对检测的灵敏度影响较大。本发明的清洗液工作液能够极大地降低本底测值，从而提高检测的灵敏度，因此能够适用于检测低浓度的目标物质。
在本发明的一些实施方案中，所述目标物质选自包括IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α、IFN-γ、IL-1β的组中的至少一种。
在本发明的一些具体实施方案中，所述目标物质为IL-6，利用本发明的清洗液工作液，灵敏度能够达到0.17pg/mL，从而能够检测IL-6浓度较低的样本。
本发明第五方面提供一种基于吖啶酯进行化学发光免疫分析的方法，利用吖啶酯标记的抗体及磁珠标记的抗体对待测样本进行孵育后，进一步包括利用本发明第一方面所述的清洗液工作液进行清洗的步骤。
在本发明的一些实施方案中，利用吖啶酯标记的抗体及磁珠标记的抗体对待测样本进行孵育后，与待测样本中的抗原形成“抗体吖啶酯-抗原-抗体磁珠”三明治结构。其中，所述“抗体吖啶酯”即为吖啶酯标记的抗体，所述“抗体磁珠”即为磁珠标记的抗体。在进行孵育时，往往会使用过量的抗体吖啶酯，因此需要使用清洗液洗去未结合的抗体吖啶酯等物质，避免对检测结果产生影响。
本发明第六方面提供Krovin 500在制备适用于基于吖啶酯进行化学发光免疫分析的清洗液中的应用。
在本发明的一些实施方案中，所述清洗液中Krovin 500的浓度为0.1~0.3%。在这种情况下，所述清洗液为工作液，能够直接进行使用。
在本发明的一些实施方案中，所述清洗液中Krovin 500的浓度为0.1~0.3%的N倍，其中，N=5~100。在这种情况下，所述清洗液为浓缩液，即贮备液，需要稀释N倍后使用。
本发明的有益效果
相对于现有技术，本发明的有益效果如下：
本发明首次揭示清洗液工作液中的防腐剂类型和浓度会影响化学发光免疫分析的本底测值，从而影响最终的检测结果。本发明通过选择Krovin 500，本底测值低至284.11±60.35，甚至优于雅培清洗液，丰富了本领域技术人员的选择。
本发明的清洗液的本底测值低，可以使得化学发光免疫分析的检测结果不受本底测值的影响，从而提高检测灵敏度，能够用于检测低浓度目标物质。
本发明利用Krovin 500作为清洗液的防腐剂，使得无论是工作液还是浓缩液，保存时间均更长，优于其他防腐剂如Krovin 100、Krovin 300和Proclin 300，也优于雅培清洗液。
本发明的清洗液仅包括无机盐、表面活性剂以及防腐剂，成本低并且制备方法简单。并且本发明除防腐剂外，其他组分可以有多种选择，使得清洗液的配制更加方便。
利用本发明的清洗液基于吖啶酯标记进行化学发光免疫分析，准确度和灵敏度均得到极大提高，具有非常重要的应用价值。
附图说明
图1示出了本发明实施例4中利用雅培清洗液对校准品进行检测得到的校准曲线。
图2示出了本发明实施例4中利用清洗液工作液#3对校准品进行检测得到的校准曲线。
图3示出了本发明实施例4中利用清洗液工作液#4对校准品进行检测得到的校准曲线。
图4示出了本发明实施例4中利用雅培清洗液对临床样本进行检测的结果与西门子测值一致性曲线。
图5示出了本发明实施例4中利用清洗液工作液#3对临床样本进行检测的结果与西门子测值一致性曲线。
图6示出了本发明实施例4中利用清洗液工作液#4对临床样本进行检测的结果与西门子测值一致性曲线。
具体实施方式
除非另有说明、从上下文暗示或属于现有技术的惯例，否则本申请中所有的份数和百分比都基于重量，且所用的测试和表征方法都是与本申请的提交日期同步的。在适用的情况下，本申请中涉及的任何专利、专利申请或公开的内容全部结合于此作为参考，且其等价的同族专利也引入作为参考，特别这些文献所披露的关于本领域中的相关术语的定义。如果现有技术中披露的具体术语的定义与本申请中提供的任何定义不一致，则以本申请中提供的术语定义为准。
本申请中的数字范围是近似值，因此除非另有说明，否则其可包括范围以外的数值。数值范围包括以1个单位增加的从下限值到上限值的所有数值，条件是在任意较低值与任意较高值之间存在至少2个单位的间隔。对于包含小于1的数值或者包含大于1的分数（例如1.1，1.5等）的范围，则适当地将1个单位看作0.0001，0.001，0.01或者0.1。对于包含小于10（例如1到5）的个位数的范围，通常将1个单位看作0.1。这些仅仅是想要表达的内容的具体示例，并且所列举的最低值与最高值之间的数值的所有可能的组合都被认为清楚记载在本申请中。
术语“包含”，“包括”，“具有”以及它们的派生词不排除任何其它的组分、步骤或过程的存在，且与这些其它的组分、步骤或过程是否在本申请中披露无关。为消除任何疑问，除非明确说明，否则本申请中所有使用术语“包含”，“包括”，或“具有”的组合物可以包含任何附加的添加剂、辅料或化合物。相反，除了对操作性能所必要的那些，术语“基本上由……组成”将任何其他组分、步骤或过程排除在任何该术语下文叙述的范围之外。术语“由……组成”不包括未具体描述或列出的任何组分、步骤或过程。除非明确说明，否则术语“或”指列出的单独成员或其任何组合。
为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。
以下例子在此用于示范本发明的优选实施方案。本领域内的技术人员会明白，下述例子中披露的技术代表发明人发现的可以用于实施本发明的技术，因此可以视为实施本发明的优选方案。但是本领域内的技术人员根据本说明书应该明白，这里所公开的特定实施例可以做很多修改，仍然能得到相同的或者类似的结果，而非背离本发明的精神或范围。
除非另有定义，所有在此使用的技术和科学的术语，和本发明所属领域内的技术人员所通常理解的意思相同，在此公开引用及他们引用的材料都将以引用的方式被并入。
那些本领域内的技术人员将意识到或者通过常规试验就能了解许多这里所描述的发明的特定实施方案的许多等同技术。这些等同将被包含在权利要求书中。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的仪器设备，如无特殊说明，均为实验室常规仪器设备；下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。
实施例1 清洗液工作液配制
本发明中，化学发光免疫分析的系统采用的是Shine i2910全自动化学发光免疫分析系统（深圳迎凯生物科技有限公司），该产品基于吖啶酯发光剂或酶类化学发光免疫原理，在临床上用于人体样本中的被分析物进行定量检测，包括肿瘤标志物、甲状腺标志物、传染病标志物、激素标志物、心脏标志物、自身免疫标志物等临床相关标志物项目。
清洗液是化学发光免疫分析中的必备试剂，针对Shine i2910全自动化学发光免疫分析系统，选用的清洗液工作液包括20mM Tris-HCl、750mM NaCl、0.025% Tween 20和0.01% Proclin 300，pH 8.0（记为清洗液工作液#1）。
清洗液工作液在使用过程中，需置于专用的缓冲瓶中，与Shine i2910全自动化学发光免疫分析系统连接使用。然而，清洗液工作液往往需要放置一段时间，经过一段时间（如7天）的放置后，发明人发现检测时本底测值升高，极大地影响检测结果；而雅培清洗液（货号：B3231、规格：4×975mL）不存在这种问题，如表1所示。
表1 清洗液工作液#1本底测值的结果（RLU）
由表1可知，清洗液工作液#1放置1天后，相对于新鲜配制（放置0天）时，本底测值变化不大。然而，当放置7天后，本底测值显著升高，达到8966.35±47.23，无法正常使用，否则将导致检测结果不准确。
发明人发现，当清洗液工作液#1放置1天后，依然保持澄清透明的状态，然而，当放置7天后，出现长菌现象，变得浑浊；而雅培清洗液放置7天依然保持澄清透明状态。发明人猜测，可能是由于防腐剂用量不够，导致清洗液长菌，表面出现絮状物，从而升高了本底测值。
实施例2 防腐剂浓度对清洗液工作液本底测值的影响
由于雅培清洗液价格昂贵，并且有效期仅一年，因此发明人需要对实施例1中的清洗液工作液#1进行优化，使得防腐效果与雅培清洗液相当甚至更优，从而为本领域提供更多选择。
针对实施例1的测试结果，发明人调整清洗液工作液#1中防腐剂（Proclin 300）浓度为0.1%，其他组分浓度不变，记为清洗液工作液#2，测试结果如表2所示：
表2 清洗液工作液#2本底测值的结果（RLU）
从外观上来看，当将防腐剂浓度从0.01%提高至0.1%后，清洗液工作液#2即使放置7天后，也没有出现长菌现象，表明防腐效果较好。然而，清洗液工作液#2即使是新鲜配制的（放置0天），本底测值也非常高，达到3920.3±37.81，放置7天后，本底测值更是达到3988.4±37.81，无法正常使用。
实施例3 清洗液中影响本底测值的成分探究
由于上述清洗液工作液中主要成分为缓冲液、盐离子、表面活性剂和防腐剂，因此，发明人对实施例2中的清洗液工作液#2中的缓冲液、盐离子、表面活性剂和表面活性剂均进行调整优化。为了消除Shine i2910全自动化学发光免疫分析系统中残留的物质对本底测值的影响，发明人进一步利用相应的清洗液工作液#2对系统进行冲洗。优化调整内容及对本底测值的影响结果如表3所示：
表3 清洗液工作液#2组分优化对本底测值的影响（RLU）
由表3可知，将清洗液工作液#2中缓冲液、盐离子和表面活性剂进行不同替换，均无法改变其本底测值较高的事实；利用清洗液工作液#2对系统进行冲洗后同样无法降低本底测值。将防腐剂替换为Krovin 100时，本底测值略有下降，但十分不明显；将防腐剂替换为Krovin 300时，本底测值更高，更加无法使用；然而，当将防腐剂替换为Krovin 500，本底测值仅有284.11±60.35，比雅培清洗液本底测值更低。
为了进一步验证防腐剂对本底测值的影响，发明人分别选择Krovin 100、Krovin300和Krovin 500，同样对其他组分进行调整，结果如表4所示。
表4 清洗液工作液中防腐剂对本底测值的影响（RLU）
由表4可知，针对Krovin 100、Krovin 300，类似于Proclin 300，无论对缓冲液、盐离子和表面活性剂如何调整，本底测值都没有明显变化，即使对全自动仪器进行清洗，也无法降低本底测值。另一方面，从Krovin 500的调整结果来看，无论对缓冲液、盐离子和表面活性剂如何调整，本底测值都比较低，均能够满足检测的需求。
以上结果表明，清洗液中防腐剂会严重影响本底测值，而选择Krovin 500作为防腐剂不会影响本底测值。
实施例4 不同防腐剂对检测结果的影响
结合实施例1和实施例2情况，发明人获得或制备以下三种清洗液工作液：
清洗液工作液#3：20mM Tris-HCl、750mM NaCl、0.025% Tween 20和0.1% Proclin300，pH 8.0；
清洗液工作液#4：20mM Tris-HCl、750mM NaCl、0.025% Tween 20和0.1% Krovin500，pH 8.0；
对照组清洗液：雅培清洗液。
利用上述3种清洗液工作液，分别用于IL-6的检测。利用IL-6制备校准品，校准品包括5个梯度，分别为8.0pg/mL、40pg/mL、200pg/mL、1000pg/mL和5000pg/mL，利用无菌水作为空白对照（0pg/mL）。
检测过程如下：在反应杯中添加校准品、抗体磁珠以及抗体吖啶酯组分，37℃孵育一段时间后，使用清洗液进行多次清洗，剩余抗体吖啶酯-抗原-抗体磁珠三明治结构，添加底物液，然后读取发光值。首先进行各校准品浓度及检测到的发光值绘制校准曲线，然后通过对待测样本的发光值进行转换，得到待测样本的浓度值。
校准品的发光值如表5所示：
表5 IL-6校准品利用不同清洗液的检测发光值（RLU）
利用各校准品的浓度及通过雅培清洗液、清洗液工作液#3和清洗液工作液#4的检测信号值分别制作校准曲线，如图1、图2和图3所示。
发明人接着利用雅培清洗液、清洗液工作液#3和清洗液工作液#4对临床样本进行检测。临床样本为血浆样本，共40例，利用3种不同的清洗液工作液进行检测，并利用上述校准曲线进行拟合，得到IL-6含量，同时以西门子测值作为对照，具体地，利用IL-6测定试剂盒（化学发光法）（英国西门子医学诊断产品有限公司）在IMMULITE1000化学发光免疫分析仪进行检测。
结果如表6所示，14pg/mL以下的浓度拟合值的一致性曲线如图4、图5和图6所示。
表6 临床样本检测结果
对表6中不同清洗液对临床样本的检测结果与西门子测值的相对偏差进行统计，结果如表7所示：
表7 不同清洗液对临床样本检测结果与西门子测值检测结果的偏差情况
IL-6项目参考区间（阳性判断值）为6.0pg/mL，线性区间为1.5～5000pg/mL。利用不同清洗液对临床样本的检测结果与西门子检测结果的一致性如表8~表10所示：
表8 雅培清洗液对临床样本检测结果与西门子测值检测结果一致性
表9 清洗液工作液#3对临床样本检测结果与西门子测值检测结果一致性
表10 清洗液工作液#4对临床样本检测结果与西门子测值检测结果一致性
进一步进行Kappa分析，结果如表11所示：
表11 Kappa分析结果
由表6~表11可知：清洗液工作液#3会导致本底发光值高，进而影响拟合值，导致拟合值与西门子测值呈现较大的正偏差（表6、表7），从而造成假阳性率增加，与西门子测值的一致性相对较低（表9、表11）；使用清洗液工作液#4，临床样本测值与西门子测值偏差基本都在±5%以内（表6、表7），同时与西门子测值的一致性较高（表10、表11）；使用雅培清洗液，尽管与西门子测值结果的一致性较高（表8、表11），但临床样本测值与西门子测值偏差有30%比例（12/40）在±5%以外（表6、表7）。因此，结合与西门子测值的相对偏差结果，使用清洗液工作液#4效果比使用雅培清洗液好。
由图4～图6可知：由于IL-6项目参考值比较低，为6.0pg/mL，清洗液工作液#3会导致本底发光值高，进而影响拟合值，临床样本低值部分相关性较差。因此，发明人进行灵敏度检测：
用零浓度校准品（A点）作为样品进行检测，重复检测20次，得出20次检测结果的发光值（RLU值），计算其平均值（M）和标准差（SD），得出M+2SD；将零浓度校准品（A点）和相邻校准品（B点）各检测两次，分别得出两次检测发光值的平均值（RLU值），将其浓度（用y表示）与RLU值（用x表示）进行两点回归拟合得出一次方程y=ax+b，将M+2SD的RLU值代入上述方程中，求出对应的浓度值，即为灵敏度，结果如表12所示。
表12 灵敏度测试结果
由表12可知：清洗液工作液#4灵敏度为0.17pg/mL，清洗液工作液#3灵敏度为0.51pg/mL、雅培工作液灵敏度为0.25pg/mL。由此可见，利用清洗液工作液#4进行检测的灵敏度要优于雅培清洗液，能够用于检测低浓度的样本。
实施例5 防腐剂Krovin 500含量对清洗液工作液稳定性的影响
为了验证防腐剂Krovin 500含量对清洗液工作液本底测值的影响，发明人制备了以下清洗液工作液：
清洗液工作液#5：20mM Tris-HCl、750mM NaCl、0.025% Tween 20和0.01% Krovin500，pH 8.0。
清洗液工作液#6：20mM Tris-HCl、750mM NaCl、0.025% Tween 20和0.3% Krovin500，pH 8.0。
为了验证防腐剂Krovin 500含量对清洗液工作液的保存效果，发明人跟踪监测清洗液工作液#4~清洗液工作液#6常温放置长达24个月本底测值的变化，以雅培清洗液为对照，结果如表13所示。
表13 不同保存时间的本底测值（RLU）
由表13可知，清洗液工作液#4~清洗液工作液#6、雅培清洗液保存12个月后，本底测值出现不同程度的变化；而从保存15月开始，雅培清洗液本底测值出现升高的现象，而从保存20月开始，清洗液工作液#5出现，出现长菌现象，变得浑浊，本底测值异常升高。而清洗液工作液#4和清洗液工作液#6本底测值依然保持较低水平，表明Krovin 500作为防腐剂，在清洗液工作液的浓度也需达到0.1%以上。
实施例6 浓缩液的保存
在本领域中，一般将清洗液配置至浓缩液进行保存，使用时稀释成工作液浓度使用。
在本实施例中，发明人配置20×浓缩液（浓缩液#1），具体如下：400mM Tris-HCl、15M NaCl、0.5% Tween 20、2% Krovin 500。使用时稀释20倍，即得到工作液（即清洗液工作液#4）。
浓缩液#2使用相同浓度不同的防腐剂，具体如下：
浓缩液#2：400mM Tris-HCl、15M NaCl、0.5% Tween 20、6% Krovin 500，pH 8.0。
对比浓缩液：雅培浓缩清洗液。
将各浓缩液在室温条件下进行保存，每隔一个月取出部分稀释至清洗液工作液，同样对IL-6进行检测，本底测值结果如表14，准确度测试结果如表15所示。
表14 不同浓缩液在室温条件下不同放置时间的本底测值（RLU）
表15 不同浓缩液在室温条件下放置15个月后的检测结果
由表14和表15可知，保存15个月后，雅培浓缩清洗液配制的工作液本底有较大的升幅，而浓缩液#1和浓缩液#2配制的工作液本底仍保持降低的水平。并且，利用浓缩液#1和浓缩液#2配制的工作液进行检测，准确度依然较高，而雅培浓缩液准确度略有下降，由于本底测值的波动，导致低浓度临床样本测值相对偏差增大。
综上所述，本发明选择Krovin 500作为清洗液的防腐剂，一方面可以提高浓度保证防腐效果，使得清洗液工作液即使放置15天以上，也不会染菌变质；另一方面也不会因为防腐剂浓度的提高影响本底测值，防腐剂的含量即使达到0.3%，本底测值也没有明显变化，从而能够保证检测结果的准确性。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (3)
1. Krovin 500在制备用于降低基于吖啶酯进行化学发光免疫分析的本底测值的清洗液工作液中的应用，其特征在于，所述清洗液工作液由500~800mM无机盐、0.01~0.03%表面活性剂、0.1~0.3%的防腐剂和15~30mM的缓冲液组成，
所述缓冲液选自PBS缓冲液、MOPS缓冲液、MES缓冲液、HEPES缓冲液和Tris-HCl缓冲液中的一种，
所述表面活性剂选自SDS、Triton X-100、Tween 80和Tween 20中的一种。
2.权利要求1所述的应用，其特征在于，所述清洗液工作液的制备方法为：首先制备N×浓缩液，使用时稀释N倍得到工作液，其中，N=5~100。
3.权利要求1所述的应用，其特征在于，所述基于吖啶酯进行化学发光免疫分析的步骤包括：利用吖啶酯标记的抗体及磁珠标记的抗体对待测样本进行孵育后，进一步利用所述清洗液工作液进行清洗。
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