CN117126272B - 一种抗毒素血清及其制备方法 - Google Patents
一种抗毒素血清及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117126272B CN117126272B CN202311057177.0A CN202311057177A CN117126272B CN 117126272 B CN117126272 B CN 117126272B CN 202311057177 A CN202311057177 A CN 202311057177A CN 117126272 B CN117126272 B CN 117126272B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- serum
- antitoxin
- supernatant
- preparation
- treatment
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title claims abstract description 66
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 title claims abstract description 56
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 37
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 39
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims abstract description 19
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 10
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims abstract description 9
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 51
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 34
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 24
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 22
- OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N alpha-ethylcaproic acid Natural products CCCCC(CC)C(O)=O OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 14
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 11
- 229940037003 alum Drugs 0.000 claims description 10
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 9
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 claims description 8
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 claims description 8
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 7
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 claims description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 4
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 claims description 4
- 239000012716 precipitator Substances 0.000 claims description 3
- 201000000628 Gas Gangrene Diseases 0.000 claims description 2
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 claims description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 2
- 229940049154 botulinum antitoxin Drugs 0.000 claims description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 2
- 229960001188 diphtheria antitoxin Drugs 0.000 claims description 2
- 229960005367 tetanus antitoxin Drugs 0.000 claims description 2
- 230000002303 anti-venom Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 14
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 abstract description 9
- 238000003860 storage Methods 0.000 abstract description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract 1
- 229960002446 octanoic acid Drugs 0.000 description 19
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 12
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 10
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 8
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 8
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 8
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 7
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 6
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 6
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 6
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 230000002096 anti-tetanic effect Effects 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 4
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 4
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 229940049155 rabies serum Drugs 0.000 description 3
- 239000003998 snake venom Substances 0.000 description 3
- BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M sodium octanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCC([O-])=O BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 3
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 2
- 239000005635 Caprylic acid (CAS 124-07-2) Substances 0.000 description 2
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 231100000215 acute (single dose) toxicity testing Toxicity 0.000 description 2
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 2
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 2
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 2
- 229960005480 sodium caprylate Drugs 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000623895 Bos taurus Mucin-15 Proteins 0.000 description 1
- 238000011047 acute toxicity test Methods 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229930003836 cresol Natural products 0.000 description 1
- 125000000853 cresyl group Chemical group C1(=CC=C(C=C1)C)* 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- 229940124645 emergency medicine Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 231100000386 immunotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007688 immunotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000007096 poisonous effect Effects 0.000 description 1
- 238000011112 process operation Methods 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- 238000011046 pyrogen test Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 238000013190 sterility testing Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000002821 viper venom Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1267—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria
- C07K16/1282—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria from Clostridium (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1267—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria
- C07K16/1285—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria from Corynebacterium (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明属于生物技术领域，具体公开了一种抗毒素血清及其制备方法，该制备方法包括酶处理、沉淀处理、吸附处理以及对吸附后的上清进行超滤、浓缩和原液配制，该制备方法更加简便，原料易得，价格低廉，通过该制备方法制备得到的抗毒素血清安全性能高，4℃、25℃和37℃下储存6个月，其F(ab’)2含量和比活高且稳定，在6个月存储过程中，效价稳定性高。
Description
要求优先权：本发明要求2023年07月11日提交的中国专利申请2023108432286的优先权，其全部内容通过引用方式并入本文。
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗毒素血清及其制备方法。
背景技术
抗毒素血清，又称为抗毒素，也称为抗血清，是由相应毒素或类毒素、细菌、病毒免疫动物(主要为马属动物)所得的免疫血浆(血清)，经胃蛋白酶消化、硫酸铵盐析制得的免疫球蛋白制剂。抗毒素血清是治疗有毒动物咬伤或蜇伤的有效急救药物，患者如果可以在第一时间及时注射抗毒血清，其生存的可能性将大大增加，同时为后续抢救和治疗赢得了宝贵的时间。
动物来源的抗毒素血清对人体有两重性：一方面，通过对病人提供了特异性抗毒素抗体，可中和体内相应的外毒素，起到防治的作用；而另一方面，因为本品是具有抗原性的异种蛋白，能刺激人体产生抗马血清蛋白的抗体，以后再次接受马的免疫血清时，可能会发生超敏反应，即过敏。所以寻找一种能够明显减轻过敏反应的抗毒素血清至关重要。
目前对于抗毒素血清的制备方法主要包括：1、胃蛋白酶消化，用纯化水或注射用水将各种免疫血浆(血清)稀释，并用胃蛋白酶进行消化处理得到消化液；2、第一次沉淀及加温变性处理，消化液中加入硫酸铵，并调节pH值，然后将消化液加温并保持，再降温，过滤收集上清液，废弃沉淀物；3、第二次沉淀处理，即在上述上清液中加入硫酸铵，静置后过滤取沉淀物，废弃上清液；4、明矾沉淀处理，将上述沉淀物稀释，加入明矾溶液，静置后过滤取上清液，废弃沉淀物；5、超滤浓缩处理，将上述上清液进行超滤脱盐并浓缩；6、原液配制，在超滤浓缩液中添加氯化钠、防腐剂，调节pH，除菌过滤，即制得抗毒素血清原液。中国专利CN104447987A提供了一种利用辛酸(辛酸钠)的血浆免疫球蛋白的分离工艺，该分离工艺以低温乙醇法为基础，在组分II沉淀分离纯化过程中使用辛酸(辛酸钠)，分离后的超滤中，提高蛋白质溶液的温度，达到病毒灭活的效果，结合现有的低pH孵放灭活，实现了不增加新的工艺操作步骤的低温乙醇法血浆免疫球蛋白的双灭活制备。该专利公开了辛酸钠对病毒灭活的影响。中国专利CN102526728A公开了一种辛酸纯化处理的抗毒素血清制备方法，在常规抗毒素血清制备方法中添加辛酸纯化的步骤，使抗毒素血清产品质量指标更高，使用更安全，与原有制备工艺相比，抗毒素血清产品的主要质量指标中，F(ab’)2的含量从50-60％提高到80％以上，产品的比活纯度(单位/克蛋白)从35000-45000提高到78000以上，使抗毒素血清制品临床应用时的过敏反应发生率和血清病的发生率减少30％-40％。但是上述抗毒素血清的制备方法繁琐，需要两次层析，且制备得到的抗毒素血清在低温或者高温中的稳定性不能满足实际生产需求。
发明内容
除非上下文另有明确指示，否则如本文所用的单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括单数和复数指示物。通过端点表述的数值范围包括在对应范围内的所有数值和分数，以及所表述的端点。
本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种抗毒素血清及其制备方法。本发明通过特定的制备方法制得的抗毒素血清其安全性符合《中国药典》(2020年版)的规定，在6个月储存条件下稳定性高。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明提供了一种抗毒素血清的制备方法，包括以下步骤：
S1、酶处理：血清稀释后加入酶进行消化处理，得到酶消化液；
S2、沉淀处理：向酶消化液中加入硫酸铵，第一次调节pH后过滤得到上清液，向上清液中加入沉淀剂，第二次调节pH后加入硅藻土过滤，得过滤液；
S3、吸附处理：向过滤液中加入明矾，调节pH，搅拌后收集吸附后的上清液；
S4、吸附后的上清进行超滤、浓缩以及原液配制后，得到所述的抗毒素血清。
优选地，步骤S1所述的酶为胃蛋白酶；所述消化处理的条件为：时间1h-1.5h；温度25℃-35℃。
优选地，步骤S2所述第一次调节pH为4.0-4.5，第二次调节pH为7.2-8.0。
优选地，步骤S2所述沉淀剂为辛酸和乙酸。
优选地，所述辛酸和乙酸的体积比为2-8:1。
优选地，步骤S2所述沉淀剂的加入体积为上清液的10％-12％。
优选地，步骤S2所述硅藻土的添加量为0.5-0.8g/100ml上清液。
优选地，步骤S3所述pH为7.70-7.90。
优选地，步骤S4所述原液配制的方法包括加入氯化钠和防腐剂、调节pH和过滤。
优选地，所述防腐剂为甲酚；所述防腐剂的添加量为2.0-2.5g/L。
优选地，所述氯化钠的添加量为8.0-8.5g/L。
优选地，所述pH为6.0-7.0。
优选地，所述的血清包括破伤风抗毒素、白喉抗毒素、气性坏疽抗毒素、肉毒抗毒素、抗狂犬病血清或抗蛇毒血清。
本发明还提供了一种抗毒素血清，由上述的制备方法制备得到。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明在抗毒素血清的制备方法中创新性的加入辛酸与乙酸的混合液作为沉淀剂，对纯化抗毒素血清具有显著性效果，在制备过程中相比传统方法能够减少一次盐析步骤，制备方法更加简便；
(2)本发明中添加的辛酸和乙酸，可以通过超滤浓缩工艺去除，对最终纯化的抗毒素血清无残留影响，其残留标准符合《中国药典》的规定，能够减轻过敏反应；
(3)本发明通过特定的纯化方法制备得到的抗毒素血清，其安全性符合《中国药典》规定，在6个月储存条件下稳定性高。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行说明，以使本发明技术方案更易于理解、掌握，但本发明并不局限于此，描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都应当属于本发明保护的范围。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1一种抗毒素血清的制备方法
1、酶处理：将检定合格的抗破伤风免疫马血浆，按血浆量的2倍加入纯化水稀释，调pH至2.90，根据稀释液总量按每ml稀释液加入3个活力单位的胃蛋白酶，控制消化液温度于30℃，消化1小时；
2、沉淀处理：消化结束后，按每100ml消化液加入10g的硫酸铵，调节pH至4.0，将消化液泵入板框式压滤机进行过滤分离。过滤收集上清液，废弃沉淀物，再向上清液中加入沉淀剂，即辛酸和乙酸混合液(辛酸与乙酸的体积比为2:1)，辛酸和乙酸混合液的添加量为上清液体积的10％，调节pH至7.2，搅拌时间0.5小时，处理完毕，按100ml溶液加入0.5g硅藻土，搅拌均匀后，将消化液泵入板框式压滤机进行过滤分离，过滤收集上清液，废弃沉淀物；
3、吸附处理：将注射用水注入已灭菌的消化配液罐中，冷却至30℃以下，然后将上述沉淀加入注射用水中溶解稀释至蛋白含量不超过2％(g/ml)，按不低于0.8％(g/ml)的浓度加入明矾溶液，调节pH至7.70，搅拌吸附0.5h后，泵入板框式压滤机进行过滤分离，过滤收集上清液，废弃沉淀物；
4、超滤浓缩，将上述明矾吸附后过滤得到的上清液经预滤后泵入超滤罐，再经超滤器进行超滤浓缩，直至使超滤浓缩液中的硫酸铵含量在1.0g/L以下；5、原液配制，将上述硫酸铵含量达标的超滤浓缩液泵入配制罐，根据所需原液效价补加注射用水，按8.0g/L加入氯化钠，然后按2.0g/L加入间甲酚作为防腐剂，调pH至6.0，除菌过滤得抗毒素血清原液。
实施例2一种抗毒素血清的制备方法
1、酶处理：将检定合格的抗狂犬病免疫马血浆，按血浆量的4倍加入纯化水稀释，调pH至3.50，根据稀释液总量按每ml稀释液加入10个活力单位的胃蛋白酶，控制消化液温度于35℃，消化1.5小时；
2、沉淀处理：消化结束后，按每100ml消化液加入20g的硫酸铵，调节pH至4.5，将消化液泵入板框式压滤机进行过滤分离。过滤收集上清液，废弃沉淀物，再向上清液中加入沉淀剂，即辛酸和乙酸混合液(辛酸与乙酸的体积比为8:1)，辛酸和乙酸混合液的添加量为上清液体积的12％，调节pH至8.0，搅拌时间4.0小时，处理完毕，按100ml溶液加入0.8g硅藻土，搅拌均匀后，将消化液泵入板框式压滤机进行过滤分离，过滤收集上清液，废弃沉淀物；
3、吸附处理：将注射用水注入已灭菌的消化配液罐中，冷却至30℃以下，然后将上述沉淀加入注射用水中溶解稀释至蛋白含量不超过2％(g/ml)，按不低于1.5％(g/ml)的浓度加入明矾溶液，调节pH至7.90，搅拌吸附1h后，泵入板框式压滤机进行过滤分离，过滤收集上清液，废弃沉淀物；
4、超滤浓缩，将上述明矾吸附后过滤得到的上清液经预滤后泵入超滤罐，再经超滤器进行超滤浓缩，直至使超滤浓缩液中的硫酸铵含量在1.0g/L以下；5、原液配制，将上述硫酸铵含量达标的超滤浓缩液泵入配制罐，根据所需原液效价补加注射用水，按8.5g/L加入氯化钠，然后按2.5g/L加入间甲酚作为防腐剂，调pH至7.0，除菌过滤得抗毒素血清原液。
实施例3一种抗毒素血清的制备方法
1、酶处理：将检定合格的抗蝮蛇蛇毒免疫马血浆，按血浆量的3倍加入纯化水稀释，调pH至3.0，根据稀释液总量按每ml稀释液加入5个活力单位的胃蛋白酶，控制消化液温度于25℃，消化1.2小时；
2、沉淀处理：消化结束后，按每100ml消化液加入15g的硫酸铵，调节pH至4.3，将消化液泵入板框式压滤机进行过滤分离。过滤收集上清液，废弃沉淀物，再向上清液中加入沉淀剂，即辛酸和乙酸混合液(辛酸与乙酸的体积比为5:1)，辛酸和乙酸混合液的添加量为上清液体积的11％，调节pH至7.6，搅拌时间2.0小时，处理完毕，按100ml溶液加入0.6g硅藻土，搅拌均匀后，将消化液泵入板框式压滤机进行过滤分离，过滤收集上清液，废弃沉淀物；
3、吸附处理：将注射用水注入已灭菌的消化配液罐中，冷却至30℃以下，然后将上述沉淀加入注射用水中溶解稀释至蛋白含量不超过2％(g/ml)，按不低于1.0％(g/ml)的浓度加入明矾溶液，调节pH至7.80，搅拌吸附0.8h后，泵入板框式压滤机进行过滤分离，过滤收集上清液，废弃沉淀物；
4、超滤浓缩，将上述明矾吸附后过滤得到的上清液经预滤后泵入超滤罐，再经超滤器进行超滤浓缩，直至使超滤浓缩液中的硫酸铵含量在1.0g/L以下；5、原液配制，将上述硫酸铵含量达标的超滤浓缩液泵入配制罐，根据所需原液效价补加注射用水，按8.2g/L加入氯化钠，然后按2.3g/L加入间甲酚作为防腐剂，调pH至6.5，除菌过滤得抗毒素血清原液。
对比例1一种抗毒素血清的制备方法
与实施例1相比，步骤2中的沉淀剂为辛酸，其他步骤均与实施例1相同。对比例2一种抗毒素血清的制备方法
与实施例1相比，步骤2中的沉淀剂为乙酸，其他步骤均与实施例1相同。对比例3一种抗毒素血清的制备方法
与实施例1相比，步骤2中的辛酸和乙酸的体积比为10:1，其他步骤均与实施例1相同。
对比例4
使用专利CN102526728A中的抗毒素血清原液。
效果例
按照《中国药典》(2020版第三部)要求，对实施例1-3的抗毒素血清进行无菌试验、热原检查、异常毒性试验、一般药理试验、急性毒性试验、免疫毒性试验、溶血和血管刺激性试验。检测结果显示，无菌试验、热原检查、异常毒性试验、一般药理试验、急性毒性试验、免疫毒性试验、溶血和血管刺激性试验结果均符合《中国药典》(2020版第三部)要求。
1、质量指标检测:包括F(ab’)2和比活
抗毒素原液置于2-8℃避光处，保存1个月稳定期后，分别取未纯化的抗破伤风马血浆(对照组)、实施例1-3和对比例的1-4抗毒素血清原液，按《中国药典》(2020版第三部)标准方法，测定六个月分别在4℃、25℃和37℃的F(ab’)2含量和比活，每个实验组重复3次。其中，《中国药典》规定，预防用抗破伤风血清、抗狂犬病血清和抗蝮蛇毒血清F(ab’)2含量均不低于60％，抗破伤风血清比活不低于45000IU/gp。具体结果如下表所示。
表1各组的质量指标检测结果
根据上表数据可知，相比未纯化的对照组和对比例1-4，本发明实施例的F(ab’)2含量在6个月储存条件下，稳定性高，均符合《中国药典》规定；4℃下储存6个月，F(ab’)2含量在85％以上，比活纯度显著提升，且在4℃、25℃和37℃下存放6个月，本发明的抗毒素血清相比对比例稳定性更高。
2、效价测定
分别取未纯化的抗破伤风马血浆(对照组)、实施例1-3和对比例1-4的抗毒素血清原液，按《中国药典》(2020年版第三部)标准方法检测样品的血清效价，其中《中国药典》规定，预防用抗破伤风血清效价不低于2000IU/ml、抗狂犬病血清效价不低于200IU/ml、抗蝮蛇毒血清效价不低于500U/ml。结果如下表所示。
表2各组效价检测结果
根据上表结果可知，本发明实施例的抗毒素血清效价均符合《中国药典》规定，且明显比对比例和对照组高，说明本发明制备方法得到的抗毒素血清纯度高，且在存放6个月后，本发明实施例的抗毒素血清效价几乎没有减少，稳定性高。
最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (6)
1.一种抗毒素血清的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1、酶处理：血清稀释后加入酶进行消化处理，得到酶消化液；
S2、沉淀处理：向酶消化液中加入硫酸铵，第一次调节pH后过滤得到上清液，向上清液中加入沉淀剂，第二次调节pH后加入硅藻土过滤，得过滤液；
S3、吸附处理：向过滤液中加入明矾，调节pH，搅拌后收集吸附后的上清液；
S4、吸附后的上清进行超滤、浓缩以及原液配制后，得到所述的抗毒素血清；
步骤S2所述沉淀剂为辛酸和乙酸；所述辛酸和乙酸的体积比为2-8:1；
步骤S2所述第一次调节pH为4.0-4.5，第二次调节pH为7.2-8.0；步骤S2所述沉淀剂的加入体积为上清液的10%-12%。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤S1所述的酶为胃蛋白酶；所述消化处理的条件为：时间1h-1.5h；温度25℃-35℃。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤S2所述硅藻土的添加量为0.5-0.8g/100ml上清液。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤S3所述pH为7.70-7.90。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤S4所述原液配制的方法包括加入氯化钠和防腐剂、调节pH和过滤。
6.根据权利要求1-5任一项所述的制备方法，其特征在于：所述的血清包括破伤风抗毒素、白喉抗毒素、气性坏疽抗毒素、肉毒抗毒素、抗狂犬病血清或抗蛇毒血清。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310843228 | 2023-07-11 | ||
| CN2023108432286 | 2023-07-11 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117126272A CN117126272A (zh) | 2023-11-28 |
| CN117126272B true CN117126272B (zh) | 2024-05-28 |
Family
ID=88857702
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311057177.0A Active CN117126272B (zh) | 2023-07-11 | 2023-08-22 | 一种抗毒素血清及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117126272B (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102526729A (zh) * | 2012-03-30 | 2012-07-04 | 江西生物制品研究所 | 病毒灭活处理的抗毒素血清制备工艺 |
| CN102526728A (zh) * | 2012-03-30 | 2012-07-04 | 江西生物制品研究所 | 辛酸纯化处理的抗毒素血清制备方法 |
| CN114456258A (zh) * | 2021-12-29 | 2022-05-10 | 江西生物制品研究所股份有限公司 | 一种抗毒素抗血清产品纯化方法 |
-
2023
- 2023-08-22 CN CN202311057177.0A patent/CN117126272B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102526729A (zh) * | 2012-03-30 | 2012-07-04 | 江西生物制品研究所 | 病毒灭活处理的抗毒素血清制备工艺 |
| CN102526728A (zh) * | 2012-03-30 | 2012-07-04 | 江西生物制品研究所 | 辛酸纯化处理的抗毒素血清制备方法 |
| CN114456258A (zh) * | 2021-12-29 | 2022-05-10 | 江西生物制品研究所股份有限公司 | 一种抗毒素抗血清产品纯化方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Seddik SS等.Development of an improved method for production of antiscorpion F(ab')2 fragment of IgG with high yield and potency.《Journal of natural Toxins》.2002,第11卷(第2期),123-132. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN117126272A (zh) | 2023-11-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101872747B1 (ko) | 면역글로불린 조성물의 제조 방법 | |
| EP0447585B2 (de) | Verfahren zur Herstellung eines intravenös verträglichen Immunglobulin-G-Präparates | |
| DE3927111C3 (de) | Verfahren zur Herstellung nicht modifizierter intravenös verabreichbarer IgM- und/oderIgA-haltiger Immunglobulinpräparate | |
| IE46304B1 (en) | Process of preparing a serum protein composition for intravenous application | |
| EP0122909A1 (de) | Immunglobulin-G-hältige Fraktion | |
| US10183984B2 (en) | Method for extracting recombinant human serum albumin from transgenic rice grain | |
| EP0413187B1 (de) | Verfahren zur Herstellung nicht modifizierter intravenös verabreichbarer IgM- und/oder IgA-haltige Immunglobulinpräparate | |
| CN117126272B (zh) | 一种抗毒素血清及其制备方法 | |
| EP0825998B1 (en) | Preparation of immunoglobulin | |
| CN110256556A (zh) | 一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌人免疫球蛋白及制备方法 | |
| EP0123029B1 (de) | Verfahren zur Herstellung einer nebenwirkungsfreien IgG-Immunglobulinlösung für die intravenöse Applikation | |
| CN112500477B (zh) | 一种快速从血浆提取人免疫球蛋白的方法 | |
| CN116731162A (zh) | 人免疫球蛋白生产工艺 | |
| CN106519029B (zh) | 一种Aβ寡聚体抗体的制备工艺 | |
| CN116120434A (zh) | 一种静注covid-19人免疫球蛋白的生产方法 | |
| CN102526729A (zh) | 病毒灭活处理的抗毒素血清制备工艺 | |
| CN111166877A (zh) | 一种狂犬病人免疫球蛋白的制备方法 | |
| CN101352571B (zh) | 一种治疗乙型脑炎的药物及其制备方法 | |
| CN114456258A (zh) | 一种抗毒素抗血清产品纯化方法 | |
| US6338849B1 (en) | Process of preparing immunoglobulin for intravenous injection by viruses double-sterilized without adding any protectant | |
| CN102526728A (zh) | 辛酸纯化处理的抗毒素血清制备方法 | |
| CN116832153A (zh) | 一种高浓度皮下注射人免疫球蛋白的制备方法 | |
| CN117756935A (zh) | 一种破伤风人免疫球蛋白及其制备方法 | |
| RU2062617C1 (ru) | Способ получения антитоксической сыворотки | |
| CN116333101A (zh) | 一种动物免疫球蛋白及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |