CN117050173A - 一种红细胞膜单抗生产工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种红细胞膜单抗生产工艺，1）响应于用户对配液需求，进行加水、搅拌、电导率以及pH调节；2）响应于用户对配液程序启动，按照用户设定的配液需求进行配液；3）配液完成后，进行液体纯化；4）按照确定好的料液流向、出料量及加压大小，进行料液出料。本发明解决人工配液量小批次多，批间差异大等问题，可配合自动化设备进行超滤换液，大大缩短换液时间，提高效率。
Description
技术领域
本发明涉及一种红细胞膜单抗生产工艺。
背景技术
抗红细胞膜抗体（RBC抗体）于1904年由Donatht和Landsteiner首次报道，是人体内第一个被阐明的自身抗体，现称为Donath—Landsteiner（DL）抗体。RBC抗体，能够有效吸附人全血样本中红细胞，阻拦红细胞向前涌动，从而使全血样本中血清成分及其中的某种潜在目的抗原或抗体待检测物很好的与检测系统中对应的抗体或抗原进行免疫学反应，从而检测待测样本中某种特定标志物的存在与否；广泛应用于胶体金全血检测试剂或免疫荧光全血检测试剂等体外诊断产品的研制开发和生产。现在红细胞膜单抗的生产模式多采用人工的方式进行，其中关键步骤：配液、纯化、超滤换液浓缩、分装均为人工，效率低，批量小，可重复性差，各个关键环节受人为因素影响较大，风险较大。
发明内容
本发明是为了解决上述现有技术存在的问题而提供一种红细胞膜单抗生产工艺。
本发明所采用的技术方案有：
一种红细胞膜单抗生产工艺，其特征在于：包括：
响应于用户对配液需求，进行加水、搅拌、电导率以及pH调节；
响应于用户对配液程序启动，按照用户设定的配液需求进行配液；
配液完成后，进行液体纯化；
按照确定好的料液流向、出料量及加压大小，进行料液出料。
进一步地，冷冻的腹水在前一日2-8℃过夜融化，记录批次计量后用浸湿纯化水的脱脂棉过滤去除油脂，过滤后的腹水倒入腹水接收罐经过深层过滤用囊式滤器0.5μm滤膜过滤进入腹水储存罐，通过PLC控制，实现配液容器的自动控制加水、搅拌、电导率、调节pH，当检测配液容器的pH达到设定值且持续一段时间，电导率符合要求时，自动将配液容器内的溶液进行出料至储液罐中。
进一步地，液体纯化过程为：
柱准备：填装Protein A填料，用纯化水洗涤5-10倍柱体积，去除乙醇；
平衡：Protein A柱用平衡缓冲液10mM Tris-NaCl，pH 8.3，平衡5倍柱体积，柱平衡好后开启蛋白紫外检测灯；
稀释：将上样样品进行稀释，稀释完后进行上样；
平衡：上样完成后，再清洗5-7个柱体积，且UV值显示0时解离；
解离：收样罐中加入收样体积10%中和液，当蛋白紫外检测灯显示值大于70时开始收集蛋白，当蛋白紫外检测灯显示值小于70时，停止收集蛋白；
平衡：解离完成后继续用0.1M甘氨酸，pH 2.7，冲洗1-2个柱，以及洗涤柱至紫外蛋白灯数值稳定平缓，然后用平衡缓冲液10mM Tris-NaCl，pH 8.3，平衡柱7倍柱体积；
超滤：将抗体转移至超滤罐，并按照7倍抗体体积进行洗滤，完成洗滤后对样品进行浓缩，浓缩到所需浓度；
抗体处理：将抗体经0.02μm-0.2μm膜包和0.65/0.2μm滤芯过滤后转移至成品罐，添加0.1%Proclin300保存蛋白，将处理完成的抗体出料至灌装设备，进行灌装。
本发明具有如下有益效果：
本发明解决人工配液量小批次多，批间差异大等问题，可配合自动化设备进行超滤换液，大大缩短换液时间，提高效率。
附图说明
图1为本发明流程图。
实施方式
下面结合附图对本发明作进一步的说明。
如图1，本发明一种红细胞膜单抗生产工艺，包括如下步骤：
1）响应于用户对配液需求，进行加水、搅拌、电导率以及pH调节；
冷冻的腹水在前一日2-8℃过夜融化，记录批次计量后用浸湿纯化水的脱脂棉过滤去除油脂，过滤后的腹水倒入腹水接收罐经过深层过滤用囊式滤器0.5μm滤膜过滤进入腹水储存罐，通过PLC控制，实现配液容器的自动控制加水、搅拌、电导率、调节pH，当检测配液容器的pH达到设定值且持续一段时间，电导率符合要求时，自动将配液容器内的溶液进行出料至储液罐中。
2）响应于用户对配液程序启动，按照用户设定的配液需求进行配液；
3）配液完成后，进行液体纯化，液体纯化包括：
柱准备：填装Protein A填料，用纯化水洗涤5-10倍柱体积，去除乙醇；
平衡：Protein A柱用平衡缓冲液10mM Tris-NaCl，pH 8.3，平衡5倍柱体积，柱平衡好后开启蛋白紫外检测灯；
稀释：将上样样品进行稀释，稀释完后进行上样；
平衡：上样完成后，再清洗5-7个柱体积，且UV值显示0时解离；
解离：收样罐中加入收样体积10%中和液，当蛋白紫外检测灯显示值大于70时开始收集蛋白，当蛋白紫外检测灯显示值小于70时，停止收集蛋白；
平衡：解离完成后继续用0.1M甘氨酸，pH 2.7，冲洗1-2个柱，以及洗涤柱至紫外蛋白灯数值稳定平缓，然后用平衡缓冲液10mM Tris-NaCl，pH 8.3，平衡柱7倍柱体积；
超滤：将抗体转移至超滤罐，并按照7倍抗体体积进行洗滤，完成洗滤后对样品进行浓缩，浓缩到所需浓度；
抗体处理：将抗体经0.02μm-0.2μm膜包和0.65/0.2μm滤芯过滤后转移至成品罐，添加0.1%Proclin300保存蛋白，将处理完成的抗体出料至灌装设备，进行灌装。
4）按照确定好的料液流向、出料量及加压大小，进行料液出料。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下还可以作出若干改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。
Claims (3)
1.一种红细胞膜单抗生产工艺，其特征在于：包括：
响应于用户对配液需求，进行加水、搅拌、电导率以及pH调节；
响应于用户对配液程序启动，按照用户设定的配液需求进行配液；
配液完成后，进行液体纯化；
按照确定好的料液流向、出料量及加压大小，进行料液出料。
2.如权利要求1所述的红细胞膜单抗生产工艺，其特征在于：冷冻的腹水在前一日2-8℃过夜融化，记录批次计量后用浸湿纯化水的脱脂棉过滤去除油脂，过滤后的腹水倒入腹水接收罐经过深层过滤用囊式滤器0.5μm滤膜过滤进入腹水储存罐，通过PLC控制，实现配液容器的自动控制加水、搅拌、电导率、调节pH，当检测配液容器的pH达到设定值且持续一段时间，电导率符合要求时，自动将配液容器内的溶液进行出料至储液罐中。
3.如权利要求1所述的红细胞膜单抗生产工艺，其特征在于：液体纯化过程为：
柱准备：填装Protein A填料，用纯化水洗涤5-10倍柱体积，去除乙醇；
平衡：Protein A柱用平衡缓冲液10mM Tris-NaCl，pH 8.3，平衡5倍柱体积，柱平衡好后开启蛋白紫外检测灯；
稀释：将上样样品进行稀释，稀释完后进行上样；
平衡：上样完成后，再清洗5-7个柱体积，且UV值显示0时解离；
解离：收样罐中加入收样体积10%中和液，当蛋白紫外检测灯显示值大于70时开始收集蛋白，当蛋白紫外检测灯显示值小于70时，停止收集蛋白；
平衡：解离完成后继续用0.1M甘氨酸，pH 2.7，冲洗1-2个柱，以及洗涤柱至紫外蛋白灯数值稳定平缓，然后用平衡缓冲液10mM Tris-NaCl，pH 8.3，平衡柱7倍柱体积；
超滤：将抗体转移至超滤罐，并按照7倍抗体体积进行洗滤，完成洗滤后对样品进行浓缩，浓缩到所需浓度；
抗体处理：将抗体经0.02μm-0.2μm膜包和0.65/0.2μm滤芯过滤后转移至成品罐，添加0.1%Proclin300保存蛋白，将处理完成的抗体出料至灌装设备，进行灌装。
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