CN117017806A - 一种琥珀酸衍生物在化妆品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种琥珀酸衍生物在化妆品中的应用,特别是琥珀酸衍生物在制备具有抗氧化、舒缓和/或美白功效的化妆品中的应用。本发明所制得的化妆品具有良好的抗氧化、舒缓和美白功效。
Description
技术领域
本发明涉及化妆品领域,特别是一种琥珀酸衍生物在化妆品中的应用。
背景技术
琥珀酸又称丁二酸,是一种典型的对称型二元酸,由于分子种双羧基官能团,使得2个亚甲基活化,具有卤化、脱水、酯化、磺化、酰化、氧化、还原等众多反应特性,因此琥珀酸常被用作化工原料及中间体,制备一系列具有活性的琥珀酸衍生物,广泛应用于化工、食品、医药等行业;琥珀酸可以用于制备表面活性剂、清洁剂、添加剂和起泡剂;由于多羧酸结构也可作为离子鳌合剂,用于防锈蚀如电镀行业中的溶蚀和点蚀等领域。在食品行业中作为酸化剂、pH改良剂、抗菌剂、强化剂和乳化剂;此外,琥珀酸也广泛应用于医疗行业,包括医药、抗生素、氨基酸和维生素的生产。
琥珀酸衍生物由于结构较为独特,具有较常规表面活性剂更加优异的性能,其中磺基琥珀酸盐应用最为广泛。大多数磺基琥珀酸单酯盐,由于结构单一,性能逐渐无法满足要求;现有技术中的磺基琥珀酸双酯盐表面活性剂为对称型磺基琥珀酸双酯盐,虽然其表面活性性能有所提升,但其结构仍然相对单一,无法满足对其表面活性能力的要求,并且其水溶性、润湿性、分散性和泡沫稳定性也较为不足,限制了其应用范围。并且现有技术中的磺基琥珀酸酯盐中所接的结构为单一的长链烃类,其耐酸碱性和稳定性不足,导致其生物利用率较差。
目前,关于琥珀酸衍生物(即结构特点同时具有琥珀酸酯以及琥珀酰胺结构)的研究较少,在日化行业的研究仅仅是作为乳化剂使用,且具有生物利用率低的局限性。
因此,亟需研究一种具有良好的耐酸碱性和稳定性,且具有独特的生物活性的琥珀酸衍生物,即具有良好的抗氧化,舒缓或者美白能力的化合物,且该化合物具有能够作为功效化妆品原料在日化行业应用的潜力。
发明内容
本发明的目的在于,提供一种琥珀酸衍生物在化妆品中的应用。本发明琥珀酸衍生物应用在化妆品中时,不仅具有良好生物利用率,还具有良好的抗氧化、抗炎以及美白功效。
本发明的技术方案:一种琥珀酸衍生物在化妆品中的应用,琥珀酸衍生物在制备具有抗氧化、舒缓和/或美白功效的化妆品中的应用;所述琥珀酸衍生物的结构式为:
前述一种琥珀酸衍生物在化妆品中的应用中,所述琥珀酸衍生物的CAS号为1449076-27-0,分子式为C15H27NO3,分子量为269.385。
前述琥珀酸衍生物在化妆品中的应用中,所述琥珀酸衍生物在抗氧化功效的化妆品中的添加量为质量百分比0.0001%-2%。
前述琥珀酸衍生物在化妆品中的应用中,所述琥珀酸衍生物在舒缓功效的化妆品中的添加量为质量百分比0.0001%-2%。
前述琥珀酸衍生物在化妆品中的应用中,所述琥珀酸衍生物在美白功效的化妆品中的添加量为质量百分比0.0001%-2%。
与现有技术相比,本发明将结构式为的琥珀酸衍生物应用于化妆品中,不仅制备具有良好的抗氧化、舒缓和美白功效,还具有良好生物利用率。经实验表明,
1)实验样品在62.5μM和125μM浓度下有黑素抑制效果,支持该实验样品在化妆品配方应用时的美白功效宣称。
2)基于成纤维细胞,实验样品在0.0063%(v/v)浓度下处理后的活性氧(ROS)含量显著下降,说明样品在该浓度下通过降低活性氧(ROS)含量,达到抗氧化作用,支持该实验样品在化妆品配方应用时的抗氧化功效宣称。
3)基于巨噬细胞,实验样品在0.0016%(v/v)浓度下处理后,炎性介质(NO)含量显著下降,说明样品在该浓度下,达到抑制炎性介质(NO)生成的作用。实验样品在0.1%、0.05%和0.025%配方添加浓度下能显著抑制斑马鱼胚胎中性粒细胞聚集,具有舒缓效果。支持该实验样品在化妆品配方应用时的舒缓功效宣称。
附图说明
图1是美白功效测试中实验样品对B16F10细胞毒性影响统计图;
图2是美白功效测试中各组别显微镜下黑素生成图(100×);
图3是美白功效测试中实验对细胞黑素释放影响统计图;
图4是斑马鱼胚胎中性粒细胞聚集抑制测试中的模型对照组的结果图;
图5是斑马鱼胚胎中性粒细胞聚集抑制测试中的阳性对照组的结果图;
图6是斑马鱼胚胎中性粒细胞聚集抑制测试中的实验样品组(0.1%配方添加浓度)的结果图;
图7是斑马鱼胚胎中性粒细胞聚集抑制测试中的实验样品组(0.05%配方添加浓度)的结果图;
图8是斑马鱼胚胎中性粒细胞聚集抑制测试中的受试样品组的结果图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明,但并不作为对本发明限制的依据。
实施例。一种琥珀酸衍生物在化妆品中的应用,琥珀酸衍生物在制备具有抗氧化、舒缓和/或美白功效的化妆品中的应用。
琥珀酸衍生物的结构式为:
所述琥珀酸衍生物的CAS号为1449076-27-0,分子式为C15H27NO3,分子量为269.385。
所述琥珀酸衍生物在抗氧化功效的化妆品中的添加量为质量百分比0.0001%-2%。进一步优选的,质量百分比为0.005%-0.007%。
所述琥珀酸衍生物在舒缓功效的化妆品中的添加量为质量百分比0.0001%-2%。进一步优选的,质量百分比0.02%-0.01%。
所述琥珀酸衍生物在美白功效的化妆品中的添加量为质量百分比0.0001%-2%。进一步优选的,添加浓度为50-125μM。
对琥珀酸衍生物分别进行美白、舒缓和抗氧化实验,具体实验如下。
A、美白功效测试
实验1:
实验方法:实验样品对B16F10细胞释放黑色素影响
1.1、CCK-8检测样品产品对B16F10细胞毒性影响(筛选美白实验使用浓度)
用1640完全培养基配制样品,设置实验样品浓度为1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125μM,同时设置空白对照组(即正常培养的细胞不做样本干预处理),此实验中空白对照组标记为NC。
取对数生长期B16细胞接种于96孔板,置于CO2培养箱中孵育,待细胞汇合率达80%时,每孔分别加入上述配制好的样本和对照溶液,置于CO2培养箱中孵育24h;
CCK-8检测样品的细胞增殖活力:孵育24h后,每孔加入100μl的CCK-8工作液,置于CO2培养箱中孵育1h后,450nm测定吸光度。
细胞存活率计算公式:存活率=(OD样本组/OD空白对照组)%
1.2、碱裂解法检测实验样品对B16F10细胞释放黑色素影响
按照如下方法进行实验组别设置
注:除BC组外,其余所有组别均添加IBMX(100uM)干预细胞。
1)取对数生长期B16细胞以接种于24孔板,置于培养箱中孵育;
2)孵育24h后,用DMEM培养基配制上述实验样本后加入到对应孔中,置于CO2培养箱中干预24h;
3)24h后,重复上述2)中操作;
4)干预结束后,分别收集每组细胞,加入10%DMSO-NaOH溶解煮沸裂解细胞,收集黑色素,并于405nm波长下检测吸光度;
5)黑素释放率计算公式:(OD样本组-OD空白对照组)/(OD模型对照组-OD空白对照组)×100%
实验结果
CCK-8结果显示,125μM浓度及以下实验样品对B16F10细胞无毒性作用,在此浓度范围的细胞存活率均高于90%,因此本次美白功效检测所选择的浓度为125、62.5及31.25μM(详见图1,表1)。
表1实验样品对B16F10细胞毒性影响数据表
黑色素抑制实验结果中,IBMX诱导组(即模型对照组NC)与空白对照组相比,黑色素释放量显著增加,同时熊果苷组(即阳性对照组PC)与NC组相比,黑素释放率显著降低,表明本次实验结果有效。
本实验结果表明,实验样品在一定浓度(62.5μM和125μM)下有黑素抑制效果,且其抑制效果与NC组相比具有显著性(详见图2,图3,表2)。
表2实验样品对细胞黑素释放影响数据表
注:显著性以*表示,图中***表示与NC组相比P≤0.005,**表示与NC组相比P≤0.01。
二、总结
实验样品在62.5μM和125μM浓度下有黑素抑制效果,且其抑制效果与NC组相比具有显著性。
B、抗氧化功效测试
实验1:基于UVA辐照成纤维细胞后活性氧(ROS)含量检测
实验方法:基于成纤维细胞的测试方法
(1)接种:按1.6×105个/孔的接种密度接种细胞至6孔板,培养箱(37℃、5%CO2)中孵育过夜。
(2)配液:根据测试分组(表3)配制实验样品工作液。
(3)给药:根据测试分组,待6孔板中细胞铺板率达到30%~50%时,进行分组给药,每组设3个复孔。样品组每孔加入2mL含有相应浓度实验样品的培养液;阴性对照组每孔加入2mL培养液;阳性对照组每孔加入2mL阳性对照培养液;空白对照组每孔加入2mL培养液。上样完成后将6孔板放置在培养箱(37℃、5%CO2)中培养24h。
(4)ROS含量测试:孵育24h后,PBS清洗细胞,加入1mL/孔的探针工作液(无血清培养基按照1:1000稀释探针),37℃孵箱孵育20min,吸弃探针工作液,PBS清洗细胞3次,阳性对照组加入用PBS配制的阳性标准品工作液,其他孔加1mLPBS;除空白对照外的其余组别均进行UVA辐照,辐照剂量为30J/cm2,辐照结束后,直接更换培养基,2mL/孔,于孵箱孵育30min;孵育结束后,用胰酶(0.25%)消化细胞,PBS清洗细胞,上机检测。
(5)结果统计分析:应用GraphPadPrism作图,结果表示为Mean±SD。各组间比较采用t-test统计分析。P<0.05认为具有显著差异,P<0.01认为具有极显著差异。
表3
实验结果:
表4.ROS含量结果汇总表
备注:MFI代表平均荧光强度,用t-test方法进行统计分析时,与BC组相比,显著性以#表示,P-value<0.05表示为#,P-value<0.01表示为##;与NC组相比,显著性以*表示,P-value<0.05表示为*,P-value<0.01表示为**。
抑制率=(NC-样品)/NC×100%。
与BC组相比,NC组ROS含量显著上升,说明本次测试刺激条件有效。
与NC组相比,PC组ROS含量显著下降,说明本次测试阳性对照有效。
与NC组相比,实验样品在0.0063%浓度下的ROS含量显著下降,抑制率为10.06%。
结论:
基于成纤维细胞,与对照组相比,实验样品在0.0063%(v/v)浓度下的活性氧(ROS)含量显著下降,抑制率为10.06%,说明样品在该浓度下通过降低活性氧(ROS)含量,达到抗氧化作用。
C、舒缓功效测试
实验1:基于UVA辐照成纤维细胞后活性氧(ROS)含量检测实验方法:基于LPS刺激巨噬细胞的炎性介质(NO)含量检测按照以下表5设计实验方案,
表5
阳性对照组(地塞米松)工作液配制:吸取2μL10%母液溶于2mL培养液中,配制成0.01%地塞米松
(1)细胞接种:以2.2×105个/孔的接种密度将细胞接种到6孔板中,每孔加2mL细胞悬液,将接种好的细胞培养板放入培养箱中继续培养24h(37℃、5%CO2)。
(2)吸弃孔中旧的细胞培养液。样品组每孔加入1.8mL含有相应浓度实验样品的培养液;阴性对照组每孔加入1.8mL的溶剂对照培养液;阳性对照组每孔加入1.8mL的阳性对照培养液;空白对照组每孔加入1.8mL正常培养液。
(3)给药完成后,将6孔板放置于CO2培养箱(37℃、5%CO2)培养2h。
(4)LPS刺激:给药2h后,空白对照组补加200μL正常培养液,其余各组每孔加入200μL配制的含LPS的工作液,置于CO2培养箱(37℃、5%CO2)继续培养22h。
(5)NO检测:收集细胞培养上清液,按照NO试剂盒说明书进行NO检测。
实验结果
据具体测试方案,进行NO含量检测,检测结果如以下图表6所示
表6.NO含量结果汇总表
备注:用t-test方法进行统计分析时,与BC组相比,显著性以#表示,P-value<0.05表示为#,P-value<0.01表示为##;与NC组相比,显著性以*表示,P-value<0.05表示为*,P-value<0.01表示为**。
抑制率=(NC-样品)/NC×100%。
与BC组相比,NC组的NO含量显著上升,说明本次测试刺激条件有效。
与NC组相比,PC组的NO含量显著下降,说明本次测试阳性对照有效。
与NC组相比,实验样品组W335在0.0016%浓度下的NO含量显著下降,抑制率为49.64%。
四、结论
基于巨噬细胞,与对照组相比,实验样品在0.0016%(v/v)浓度下,炎性介质(NO)含量显著下降,抑制率为49.64%,说明样品在该浓度下,通过抑制炎性介质(NO)的分泌达到舒缓功效。
实验2:斑马鱼胚胎中性粒细胞聚集抑制测试
实验方法:
(1)挑选健康的受精后3天大的斑马鱼胚胎。测试需设定模型对照组(硫酸铜工作液)、阳性对照组(硫酸铜工作液+吲哚美辛工作液)和实验样品组(硫酸铜工作液+实验样品)。
(2)模型对照组设置
随机挑选24尾鱼胚胎至3cm培养皿中,加入5mL含0.16mg/L五水硫酸铜的鱼胚胎培养液。
(3)阳性对照组设置
随机挑选24尾鱼胚胎至3cm培养皿中,加入5mL含0.16mg/L五水硫酸铜和0.0036mg/L吲哚美辛的鱼胚胎培养液。
(4)实验样品处理
随机挑选24尾鱼胚胎至3cm培养皿中,加入5mL含0.16mg/L五水硫酸铜和实验样品的鱼胚胎培养液。放置于28℃±1℃恒温箱中培养40min-45min。
(5)鱼胚胎固定染色
将每测试组鱼胚胎于多聚甲醛中固定至少1h后,用PBST处理鱼胚胎3次,每次5min,然后用50%乙醇处理3min。用苏丹黑染色溶液对鱼胚胎进行室温染色1h后,用70%乙醇浸洗4次,每次5min,然后用PBST处理2次,每次5min。
用漂白溶液处理鱼胚胎10min,如在试管里处理,则需保持盖子打开。然后用70%乙醇溶液
处理5min,PBST处理1min,用清透液1处理15min,清透液2处理10min,再用PBST处理3min。
(6)样本的显微分析
将鱼胚胎侧身摆放。然后放到体式显微镜下对鱼胚胎尾部进行拍照。
(7)数据和结果计算
计数每尾鱼胚胎从肛门起四分之三尾部侧线区域的中性粒细胞数目。
(8)计算中性粒细胞聚集抑制率:
抑制率=(C-S)/C×100%;式中:
S—受试物处理组鱼胚胎中性粒细胞数目的平均值;
C—模型对照组鱼胚胎中性粒细胞数目的平均值;
实验结果
表7
舒缓功效测试结果代表性图(*深色点即为染色的中性粒细胞)。
模型对照组:舒缓效果不显著(0%中性粒细胞聚集抑制率)如图4所示。
阳性对照组示例:0.0036mg/L吲哚美辛;舒缓效果显著(30%中性粒细胞聚集抑制率),如图5所示。
实验样品组:0.1%配方添加浓度(36%中性粒细胞聚集抑制率);舒缓效果显著,如图6所示。
实验样品组:
舒缓效果显著:0.05%配方添加浓度(37%中性粒细胞聚集抑制率),如图7所示。
受试样品组:
舒缓效果显著:0.025%配方添加浓度(30%中性粒细胞聚集抑制率),如图8所示。
四、结论
样品在0.1%、0.05%和0.025%配方添加浓度下对斑马鱼胚胎中性粒细胞聚集抑制率分别为36%(p=0.0021)、37%(p=0.00080)和30%(p=0.012)。
实验样品能显著抑制斑马鱼胚胎中性粒细胞聚集,具有舒缓效果,支持舒缓功效宣称。
Claims (5)
1.一种琥珀酸衍生物在化妆品中的应用,其特征在于:琥珀酸衍生物在制备具有抗氧化、舒缓和/或美白功效的化妆品中的应用;所述琥珀酸衍生物的结构式为:
2.根据权利要求1所述一种琥珀酸衍生物在化妆品中的应用,其特征在于,所述琥珀酸衍生物的CAS号为1449076-27-0,分子式为C15H27NO3,分子量为269.385。
3.根据权利要求1所述琥珀酸衍生物在化妆品中的应用,其特征在于:所述琥珀酸衍生物在抗氧化功效的化妆品中的添加量为质量百分比0.0001%-2%。
4.根据权利要求1所述琥珀酸衍生物在化妆品中的应用,其特征在于:所述琥珀酸衍生物在舒缓功效的化妆品中的添加量为质量百分比0.0001%-2%。
5.根据权利要求1所述琥珀酸衍生物在化妆品中的应用,其特征在于:所述琥珀酸衍生物在美白功效的化妆品中的添加量为质量百分比0.0001%-2%。
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