CN117016486B - 一种IgA肾病合并膜性肾病的动物模型构建方法 - Google Patents
一种IgA肾病合并膜性肾病的动物模型构建方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117016486B CN117016486B CN202310892388.XA CN202310892388A CN117016486B CN 117016486 B CN117016486 B CN 117016486B CN 202310892388 A CN202310892388 A CN 202310892388A CN 117016486 B CN117016486 B CN 117016486B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- week
- dose
- mice
- cbsa
- nephropathy
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000010171 animal model Methods 0.000 title claims abstract description 40
- 206010018372 Glomerulonephritis membranous Diseases 0.000 title claims abstract description 22
- 201000008350 membranous glomerulonephritis Diseases 0.000 title claims abstract description 22
- 231100000855 membranous nephropathy Toxicity 0.000 title claims abstract description 22
- 208000010159 IgA glomerulonephritis Diseases 0.000 title claims abstract description 18
- 238000010276 construction Methods 0.000 title claims description 8
- 206010021263 IgA nephropathy Diseases 0.000 title description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims abstract description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 36
- 238000000465 moulding Methods 0.000 claims description 17
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 claims description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 4
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 claims description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 claims description 3
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 abstract description 15
- 229940099472 immunoglobulin a Drugs 0.000 abstract description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 7
- 230000001434 glomerular Effects 0.000 abstract description 5
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 abstract description 5
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 abstract description 4
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 3
- 208000014674 injury Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000008085 renal dysfunction Effects 0.000 abstract description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 23
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 21
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 18
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 18
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 18
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 18
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 16
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 13
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 10
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000009535 clinical urine test Methods 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 4
- 210000000585 glomerular basement membrane Anatomy 0.000 description 4
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 4
- 208000013901 Nephropathies and tubular disease Diseases 0.000 description 3
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 3
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000008721 basement membrane thickening Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 210000005086 glomerual capillary Anatomy 0.000 description 1
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 201000001474 proteinuria Diseases 0.000 description 1
- 230000002784 sclerotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/0004—Screening or testing of compounds for diagnosis of disorders, assessment of conditions, e.g. renal clearance, gastric emptying, testing for diabetes, allergy, rheuma, pancreas functions
- A61K49/0008—Screening agents using (non-human) animal models or transgenic animal models or chimeric hosts, e.g. Alzheimer disease animal model, transgenic model for heart failure
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/0393—Animal model comprising a reporter system for screening tests
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及一种免疫球蛋白A肾病合并膜性肾病的动物模型构建方法，该动物模型构建方法包括以下步骤：在造模实验不同时期先后多次口服给予实验动物BSA、多次皮下注射给予实验动物cBSA、多次腹腔注射给予实验动物CCL4、多次尾静脉注射给予实验动物cBSA以及多次皮下注射给予实验动物LPS。本发明构建的动物模型表现出肾小球系膜损伤、基底膜增生以及肾功能障碍等特点，其接近于临床免疫球蛋白A肾病合并膜性肾病患者的相关疾病表现。
Description
技术领域
本发明涉及动物模型领域，具体涉及一种IgA肾病合并膜性肾病的动物模型构建方法。
背景技术
免疫球蛋白A肾病(IgA nephropathy，IgAN)和膜性肾病(membranousnephropathy，MN)均是临床常见的肾小球肾炎(glomerulonephritis，GN)。免疫球蛋白A肾病是一种以IgA免疫复合物在肾小球系膜(glomerular mesangial)沉积为主要特征的GN。膜性肾病是一种以IgG和补体免疫复合物在肾小球基底膜(glomerular basementmembrane，GBM)沉积为主要特征的GN。临床上免疫球蛋白A肾病合并膜性肾病的患者较为罕见，但是随着检测手段的发展和进步，越来越多的相关病例被发现。
临床前GN相关的疾病动物模型主要分别是独立的免疫球蛋白A肾病或膜性肾病。免疫球蛋白A肾病的动物模型包括自发的ddY小鼠、转基因小鼠(hCD89)和利用BSA等诱导的IgAN小鼠。膜性肾病的动物模型以利用阳离子化牛血清白蛋白(cationic BSA，cBSA)诱导的膜性肾病为主。
目前现有技术中暂无免疫球蛋白A肾病合并膜性肾病的动物模型可供相关疾病的研究或药效评价。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提利用牛血清白蛋白(BSA)和阳离子化牛血清白蛋白(cBSA)经不同途径进行免疫，并通过四氯化碳(CCl4)和脂多糖(LPS)等进行激发处理而诱导出的免疫球蛋白A肾病合并膜性肾病动物模型。
具体而言，本发明包括以下几个方面：
本发明的第一方面提供一种免疫球蛋白A肾病合并膜性肾病的动物模型构建方法，包括以下步骤：
(1)在造模实验第1周至第7周，多次口服给予实验动物BSA；
(2)在造模实验第1周至第2周，多次皮下注射给予实验动物cBSA；
(3)在造模实验第1周至第2周，多次腹腔注射给予实验动物CCL4；
(4)在造模实验第3周至第7周，多次尾静脉注射给予实验动物cBSA；和
(5)在造模实验第5周和第7周，多次皮下注射给予实验动物LPS。
优选的，所述实验动物为小鼠；更优选的，所述小鼠为BALB/c小鼠。
优选的，所述步骤(1)中，口服给予BSA的剂量为400-800mpk，给药频率为每1-3天口服1次。
更优选的，所述步骤(1)中，口服给予BSA的剂量为600mpk，给药频率为每2天口服1次。
优选的，所述步骤(2)中，皮下注射cBSA的剂量为2-10mpk，给药频率为每周1-2次。
优选的，所述步骤(2)中，皮下注射cBSA的剂量为6mpk，给药频率为每周1次。
优选的，所述步骤(3)中，腹腔注射CCL4的剂量为0.01-0.05mL，给药频率为每周1-2次。
优选的，所述步骤(3)中，腹腔注射CCL4的剂量为0.02mL，给药频率为每周1次。
优选的，所述步骤(4)中，静脉注射cBSA的剂量为1-10mpk，给药频率为每周1-2次。
优选的，所述步骤(4)中，静脉注射cBSA的剂量为2mpk，给药频率为每周1次。
优选的，所述步骤(5)中，皮下注射LPS的剂量为10-50μg，给药频率为每周1-2次。
优选的，所述步骤(5)中，皮下注射LPS的剂量为25μg，给药频率为每周1次。
优选的，所述构建方法包括以下步骤：
(1)在造模实验第1周至第7周，口服给予小鼠BSA，给药剂量为600mpk，给药频率为每2天口服1次；
(2)在造模实验第1周至第2周，皮下注射给予小鼠cBSA，给药剂量为6mpk，给药频率为每周1次；
(3)在造模实验第1周至第2周，腹腔注射给予小鼠CCL4，给药剂量为0.02mL，给药频率为每周1次；
(4)在造模实验第3周至第7周，尾静脉注射给予小鼠cBSA，给药剂量为2mpk，给药频率为每周1次；和
(5)在造模实验第5周和第7周，皮下注射给予小鼠LPS，给药剂量为25μg，给药频率为每周1次。
优选的，所述构建方法包括以下步骤：
(1)在造模实验第1周至第7周，口服给予BALB/c小鼠BSA，给药剂量为600mpk，给药频率为每2天口服1次；
(2)在造模实验第1周至第2周，皮下注射给予BALB/c小鼠cBSA，给药剂量为6mpk，给药频率为每周1次；
(3)在造模实验第1周至第2周，腹腔注射给予BALB/c小鼠CCL4，给药剂量为0.02mL，给药频率为每周1次；
(4)在造模实验第3周至第7周，尾静脉注射给予BALB/c小鼠cBSA，给药剂量为2mpk，给药频率为每周1次；和
(5)在造模实验第5周和第7周，皮下注射给予BALB/c小鼠LPS，给药剂量为25μg，给药频率为每周1次。
本发明的第二方面提供上述构建方法得到的动物模型在筛选用于治疗免疫球蛋白A肾病合并膜性肾病的药物中的用途。
优选的，所述动物模型为小鼠模型；更优选的，所述动物模型为BALB/c小鼠模型。
本发明产生的技术效果：
针对目前缺乏准确反应临床免疫球蛋白A肾病合并膜性肾病的肾小球肾炎患者疾病主要特征动物模型的现状，本发明利用BSA和cBSA经不同途径进行免疫，并通过CCl4和LPS等进行激发处理而诱导出的IgAN合并MN的动物模型。本发明通过优化BSA和cBSA免疫的剂量和频率，以及CCl4和LPS等激发处理的剂量和频率，构建得到了与临床病人发病机制相近的小鼠模型。该模型动物表现出的肾小球系膜损伤、基底膜增生以及肾功能障碍等特点，接近于临床免疫球蛋白A肾病合并膜性肾病患者的相关疾病表现。
附图说明
图1是本发明模型动物肾小球基底膜上的IgG的表达结果，其中图1A为G1正常组，图1B为G2模型组，图1C为图1B局部放大图；
图2是本发明模型动物肾小球系膜上的IgA的表达结果，其中图2A为G1正常组，图2B为G2模型组，图2C为图2A局部放大图，图2D为图2B局部放大图；
图3是本发明模型动物肾脏组织石蜡切片的HE染色图，其中图3A为G1正常组，图3B为G2模型组。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
试验例1、本发明免疫球蛋白A肾病合并膜性肾病小鼠模型构建条件筛选
1、试验方法
1.1、试验动物及造模方案
本试验例实验动物采用BALB/c小鼠，雌性，SPF级，体重20-22g，购自上海吉辉实验动物饲养有限公司。BALB/c小鼠在下述环境饲养：温度：20～26℃；湿度：40％～70％；光照：自动照明，12小时照明(08:00-20:00)，12小时无照明。
选择BALB/c小鼠35只，随机分成5组，分别正常组(G1)和本发明模型组(G2-G5)。除正常组3只小鼠外，其余四组均为8只小鼠。
各试验组小鼠按照以下步骤构建模型：
G2组：①第1周至第7周，口服BSA，600mpk，每2天1次；②第1周至第2周，皮下注射cBSA，6mpk，每周1次；③第1周至第2周，腹腔注射CCL4，0.02mL，每周1次；④第3周至第7周，尾静脉注射cBSA，1mpk，每周1次；⑤第5周和第7周，皮下注射LPS，25μg，每周1次。
G3组：步骤④为第3周至第7周，尾静脉注射cBSA，10mpk，每周1次，其余步骤①-③和⑤与G2组相同。
G4组：步骤④为第3周至第7周，尾静脉注射cBSA，2mpk，每周1次；其余步骤①-③和⑤与G2组相同。
G5组：步骤⑤为第5周和第7周，皮下注射LPS，100μg，每周1次，其余步骤①-④与G4组相同。
G1组：仅给予无菌PBS溶液，给药方式、给药剂量和给药频率与G2组相同。
1.2、小鼠模型肾脏功能表征
7周造模结束后，分别对各试验组小鼠测定尿蛋白浓度和尿红细胞数量，具体方法如下：
蛋白尿浓度检测方法(试纸检测法)：取西门子尿液检测试纸，滴上新鲜尿液之后，使用西门子尿液检测仪器读值(尿蛋白浓度读值为0、0.3、1、3、20g/L)。
尿红细胞数量检测方法：取西门子尿液检测试纸，滴上新鲜尿液之后，使用西门子尿液检测仪器读值(尿红细胞数量读值为0、10、25、80、200个细胞/μL)。
2、试验结果
本发明各试验组在不同造模时间点的尿蛋白浓度和尿红细胞数量如下表1所示。
表1本发明各试验组的尿蛋白浓度(g/L)和尿红细胞数量(个细胞/μL)
由上表1可知，G1组正常小鼠的尿蛋白浓度和尿红细胞数量较低，说明未表现出免疫球蛋白A肾病合并膜性肾病的症状。与正常组相比，G4模型组(尾静脉注射cBSA，2mpk)未出现死亡小鼠，且小鼠平均尿蛋白浓度和尿红细胞数量均处于较高水平，证实G4组的造模方式可以高成功率的构建免疫球蛋白A肾病合并膜性肾病小鼠模型。令人意外的是，G2模型组(尾静脉注射cBSA，1mpk)和G3模型组(尾静脉注射cBSA，10mpk)小鼠在造模过程中均出现不同数量的死亡，两个模型组剩余存活的小鼠在造模7周后整体的尿蛋白浓度和尿红细胞数量仍处于较低水平，与G1正常组无显著差异。上述试验结果表明尾静脉注射cBSA的剂量在整个造模过程中起到了关键作用，cBSA的剂量过低或过高均无法高成功率的构建症状显著的免疫球蛋白A肾病合并膜性肾病小鼠模型。此外，相对于G4模型组(皮下注射LPS，25μg)，G5模型组(皮下注射LPS，100μg)小鼠在造模实验开始3周后出现大面积的死亡，说明皮下注射LPS的剂量同样在造模过程中起到了关键作用，LPS的剂量过高无法高成功率的构建免疫球蛋白A肾病合并膜性肾病小鼠模型，且研究表明LPS的剂量过低(例如小于10μg)同样无法有效的构建免疫球蛋白A肾病合并膜性肾病症状明显的小鼠模型。
试验例2、本发明免疫球蛋白A肾病合并膜性肾病小鼠模型效果验证
1、试验方法
1.1、试验材料和造模方案
本试验例采用的BALB/c小鼠同试验例1。小鼠模型构建使用的cBSA为市售阳离子化牛血清白蛋白冻干粉(购自Pierce公司)，使用时用PBS溶解配制；BSA为市售牛血清白蛋白冻干粉(购自上海生工公司)，使用时用PBS溶解配制；小鼠总IgA和IgG抗体的含量的测定使用小鼠IgA和IgG的ELISA检测试剂盒(购自美国ADI(Alpha Diagnostic International)公司)。
实验第1天，小鼠按体重随机分组为G1对照组(5只)和G2模型组(10只)。其中G2模型组小鼠按照以下步骤构建模型：①第1周至第7周，口服BSA，600mpk，每2天1次；②第1周至第2周，皮下注射cBSA，6mpk，每周1次；③第1周至第2周，腹腔注射CCL4，0.02mL，每周1次；④第3周至第7周，尾静脉注射cBSA，2mpk，每周1次；⑤第5周和第7周，皮下注射LPS，25μg，每周1次。G1组小鼠仅给予无菌PBS溶液，给药方式、给药剂量和给药频率与G2组相同。
1.2、小鼠模型肾脏功能表征
实验第49天，将各试验组实验动物分别放入代谢笼中，收集动物16小时的尿液，记录尿液体积，并使用日立生化仪检测尿总蛋白浓度和微量白蛋白的浓度。
所有实验动物经麻醉后，分别经眼眶静脉丛收集外周血，分离血清后使用商品化的检测试剂盒检测小鼠总IgA和IgG抗体的含量；收集小鼠肾脏组织，匀浆之后分离含有蛋白的上清液，使用商品化的ELISA检测试剂盒，测定肾脏组织中IgA和IgG含量。试验小鼠经心脏灌流生理盐水，之后左侧肾脏直接摘除后冻存，右侧肾脏取下放入装有4％中性甲醛的容器中，充分固定后利用石蜡进行包埋、切片并利用PAS染色，评估实验小鼠肾脏组织病理学变化(评估标准详见表2和表3)，再使用切片进行小鼠的IgA免疫荧光和IgG免疫荧光染色。
表2肾小球损伤病理评分标准(Lee分级)
表3膜性肾病分期标准
2、试验结果
各试验组小鼠16小时代谢笼收集尿液中尿总蛋白浓度和微量白蛋白浓度检测结果如表4所示，各试验组小鼠血清和肾脏组织中IgA和IgG含量分别如表5和表6所示。
表4造模结束后各试验组小鼠16小时代谢笼收集的尿液检测结果
表5造模结束后各试验组小鼠血清和肾脏组织中IgA含量
| 试验组 | 血清(μg/mL) | 肾脏(μg/mg) |
| G1平均值 | 113.49 | 0.16 |
| SEM | 5.46 | 0.02 |
| G2平均值 | 271.01 | 0.59 |
| SEM | 64.86 | 0.09 |
表6造模结束后各试验组小鼠血清和肾脏组织中IgG含量
图1-3显示了正常组和模型组肾脏组织IgG和IgA表达以及病理学检测结果对比。其中图1A(G1正常组)显示正常动物肾脏组织上没有IgG抗体存在的，而图1B(G2模型组)显示模型动物肾小球基底膜上广泛表达IgG抗体。图2A(G1正常组)显示正常动物肾脏组织上几乎没有IgA抗体存在的；而图2B(G2模型组)显示模型动物肾小球系膜上广泛表达IgA抗体。图3A(G1正常组)显示正常的肾脏组织细胞形态结构，而图3B(G2模型组)显示模型动物肾脏肾小球广泛出现系膜增生样改变，并且合并基底膜增厚等病理学变化。
上述实验结果表明，本发明中G1对照组动物均未出现肾脏的功能和组织病理性改变；模型组G2成功诱导了BALB/c小鼠肾脏肾小球的系膜增生和膜性病变样改变。这种改变主要发生在肾小球的系膜区和基底膜与足细胞接触区。疾病以系膜细胞外周的基质增厚为普遍性表现，并伴随肾小球毛细血管襻上皮侧的基底膜增厚，甚至进一步的钉突形成、以致于可能形成进展性硬化病变。根据表2肾小球损伤病理评分标准、表3膜性肾病常用分期标准和表4的尿生化检测结果，判断G2模型组动物的肾小球肾炎发病率为100％。由表5和6数据可见，G2模型组动物外周血和局部组织中有显著性的IgA和IgG抗体存在，提示本发明条件下的造模方法成功地诱导了模型动物的过度生成的免疫球蛋白，同时结合局部组织上的免疫复合物的沉积情况，证明了免疫复合物的存在与疾病的发生之间的关系。
与现有的IgA或MN肾病动物模型相比，本发明通过在BALB/c小鼠上多次重复给予BSA、cBSA、LPS和CCl4，成功建立了一种具有系膜增生和基底膜多级损伤的广泛性的免疫复合物导致的肾小球损伤型肾炎动物模型，并实现了高成功率的建模预期。
虽然已经对本发明的具体实施方案进行了描述，但是本领域技术人员应认识到，在不偏离本发明的范围或精神的前提下可以对本发明进行多种改变与修饰。因而，本发明意欲涵盖落在附属权利要求书及其同等物范围内的所有这些改变与修饰。
Claims (3)
1.一种免疫球蛋白A肾病合并膜性肾病的动物模型构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）在造模实验第1周至第7周，多次口服给予实验动物BSA，口服给予BSA的剂量为400-800mpk，给药频率为每1-3天口服1次；
（2）在造模实验第1周至第2周，多次皮下注射给予实验动物cBSA，皮下注射cBSA的剂量为2-10mpk，给药频率为每周1-2次；
（3）在造模实验第1周至第2周，多次腹腔注射给予实验动物CCL4，腹腔注射CCL4的剂量为0.01-0.05mL，给药频率为每周1-2次；
（4）在造模实验第3周至第7周，多次尾静脉注射给予实验动物cBSA，静脉注射cBSA的剂量为2mpk，给药频率为每周1次；和
（5）在造模实验第5周和第7周，多次皮下注射给予实验动物LPS，皮下注射LPS的剂量为25μg，给药频率为每周1次；
所述实验动物为小鼠。
2.根据权利要求1所述的动物模型构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）在造模实验第1周至第7周，口服给予小鼠BSA，给药剂量为600mpk，给药频率为每2天口服1次；
（2）在造模实验第1周至第2周，皮下注射给予小鼠cBSA，给药剂量为6mpk，给药频率为每周1次；
（3）在造模实验第1周至第2周，腹腔注射给予小鼠CCL4，给药剂量为0.02mL，给药频率为每周1次；
（4）在造模实验第3周至第7周，尾静脉注射给予小鼠cBSA，给药剂量为1mpk，给药频率为每周1次；和
（5）在造模实验第5周和第7周，皮下注射给予小鼠LPS，给药剂量为25μg，给药频率为每周1次。
3.权利要求1或2所述动物模型构建方法得到的动物模型在筛选用于治疗免疫球蛋白A肾病合并膜性肾病的药物的用途。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310892388.XA CN117016486B (zh) | 2023-07-20 | 2023-07-20 | 一种IgA肾病合并膜性肾病的动物模型构建方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310892388.XA CN117016486B (zh) | 2023-07-20 | 2023-07-20 | 一种IgA肾病合并膜性肾病的动物模型构建方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117016486A CN117016486A (zh) | 2023-11-10 |
| CN117016486B true CN117016486B (zh) | 2024-05-14 |
Family
ID=88636358
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310892388.XA Active CN117016486B (zh) | 2023-07-20 | 2023-07-20 | 一种IgA肾病合并膜性肾病的动物模型构建方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117016486B (zh) |
Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000232884A (ja) * | 1997-12-25 | 2000-08-29 | Japan Tobacco Inc | 結合組織増殖因子に対するモノクローナル抗体及びその医薬用途 |
| WO2000073791A1 (en) * | 1999-05-27 | 2000-12-07 | Tanabe Seiyaku Co., Ltd. | Remedies for kidney diseases and method for screening the same |
| CN105434447A (zh) * | 2014-08-28 | 2016-03-30 | 复旦大学 | 一种慢性肾脏病血管钙化实验模型的建立方法 |
| CN105566498A (zh) * | 2009-08-31 | 2016-05-11 | Ibc药品公司 | 双特异性免疫细胞因子停靠-和-加锁(dnl)复合物及其治疗性用途 |
| WO2018071701A1 (en) * | 2016-10-13 | 2018-04-19 | University Of Leicester | Methods for reducing proteinuria in a human subject suffering from immunoglobulin a nephropathy |
| CN108935316A (zh) * | 2018-07-27 | 2018-12-07 | 上海中医药大学附属曙光医院 | 一种IgA肾病小鼠肾功能不全模型的建立方法 |
| CN110970131A (zh) * | 2019-10-24 | 2020-04-07 | 中国医科大学附属盛京医院 | 一种基于免疫球蛋白定量检测的肾小球疾病分类分型模型及其应用 |
| CA3154164A1 (en) * | 2019-09-19 | 2021-03-25 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Methods and materials for identifying and treating membranous nephropathy |
| CN112568188A (zh) * | 2021-02-24 | 2021-03-30 | 澎立生物医药技术（上海）有限公司 | 一种制作Brown Norway大鼠肺纤维化模型的方法 |
| WO2022226352A1 (en) * | 2021-04-23 | 2022-10-27 | Pandion Operations, Inc. | Kidney-glomerular targeted immunotherapy |
| WO2022236335A1 (en) * | 2021-05-07 | 2022-11-10 | Alpine Immune Sciences, Inc. | Methods of dosing and treatment with a taci-fc fusion immunomodulatory protein |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20230137242A1 (en) * | 2020-01-31 | 2023-05-04 | Warszawski Uniwersytet Medyczny | Method of screening for a chronic kidney disease or glomerulopathy method of monitoring a response to treatment of a chronic kidney disease or glomerulopathy in a subject and a method of treatment of a chronic kidney disease or glomerulopathy |
-
2023
- 2023-07-20 CN CN202310892388.XA patent/CN117016486B/zh active Active
Patent Citations (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000232884A (ja) * | 1997-12-25 | 2000-08-29 | Japan Tobacco Inc | 結合組織増殖因子に対するモノクローナル抗体及びその医薬用途 |
| WO2000073791A1 (en) * | 1999-05-27 | 2000-12-07 | Tanabe Seiyaku Co., Ltd. | Remedies for kidney diseases and method for screening the same |
| CN105566498A (zh) * | 2009-08-31 | 2016-05-11 | Ibc药品公司 | 双特异性免疫细胞因子停靠-和-加锁(dnl)复合物及其治疗性用途 |
| CN105434447A (zh) * | 2014-08-28 | 2016-03-30 | 复旦大学 | 一种慢性肾脏病血管钙化实验模型的建立方法 |
| WO2018071701A1 (en) * | 2016-10-13 | 2018-04-19 | University Of Leicester | Methods for reducing proteinuria in a human subject suffering from immunoglobulin a nephropathy |
| CN110177557A (zh) * | 2016-10-13 | 2019-08-27 | 莱斯特大学 | 用于减少患有免疫球蛋白a肾病的人受试者中的蛋白尿的方法 |
| CN108935316A (zh) * | 2018-07-27 | 2018-12-07 | 上海中医药大学附属曙光医院 | 一种IgA肾病小鼠肾功能不全模型的建立方法 |
| CA3154164A1 (en) * | 2019-09-19 | 2021-03-25 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Methods and materials for identifying and treating membranous nephropathy |
| CN110970131A (zh) * | 2019-10-24 | 2020-04-07 | 中国医科大学附属盛京医院 | 一种基于免疫球蛋白定量检测的肾小球疾病分类分型模型及其应用 |
| CN112568188A (zh) * | 2021-02-24 | 2021-03-30 | 澎立生物医药技术（上海）有限公司 | 一种制作Brown Norway大鼠肺纤维化模型的方法 |
| WO2022226352A1 (en) * | 2021-04-23 | 2022-10-27 | Pandion Operations, Inc. | Kidney-glomerular targeted immunotherapy |
| WO2022236335A1 (en) * | 2021-05-07 | 2022-11-10 | Alpine Immune Sciences, Inc. | Methods of dosing and treatment with a taci-fc fusion immunomodulatory protein |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| characteristics of patients with coexisting IgA nephropathy and membranous nephropathy;Pei Chen等;renal failure;20180405;第40卷(第1期);第213-218页 * |
| IgA肾病与膜性肾病患者肠道微生物菌群结构分析;赵娟;微生物学通报;20230228;第50卷(第2期);第632-643页 * |
| 合并慢性前列腺炎的慢性肾脏病患者临床病理特点;邱晓剑;庄永泽;杨家辉;;中国中西医结合肾病杂志;20100720(第07期);第603-605页 * |
| 壮肾固精方治疗血尿为主IgA肾病临床疗效观察;刘新;路金华;黄彩兰;;中国优生与遗传杂志;20170625(第06期);第121-122页 * |
| 大鼠慢性牙周炎与IgA肾病复合模型血清中MMP-3的表达及意义;王丽娜;李静;刘健;桑晓红;张静;;口腔医学研究;20131128(第11期);第995-998页 * |
| 银屑病相关性IgA肾病的临床病理分析;张苏华;唐政;陈惠萍;曾彩虹;刘志红;黎磊石;;肾脏病与透析肾移植杂志;20070630(第03期);第233-237+282页 * |
| 非人灵长类动物慢性肾病模型研究进展;陈波;谭睿陟;王丽;樊均明;;动物医学进展;20170520(第05期);第103-107页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN117016486A (zh) | 2023-11-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bellomo et al. | Interleukin-6 and interleukin-8 extraction during continuous venovenous hemodiafiltration in septic acute renal failure | |
| Fairbanks et al. | Homozygous hemoglobin E mimics β‐thalassemia minor without anemia or hemolysis: Hematologic, functional, and biosynthetic studies of first north American cases | |
| CN112237168A (zh) | 用马兜铃酸i或其联合四氯化碳构建小鼠肝癌模型的方法 | |
| CN115152700B (zh) | 胶体锰佐剂在制备原发性干燥综合征动物模型中的应用 | |
| CN117016486B (zh) | 一种IgA肾病合并膜性肾病的动物模型构建方法 | |
| CN106573056A (zh) | 用于诊断和治疗炎症性肠病的方法和组合物 | |
| CN113424795B (zh) | 一种急性胰腺炎动物模型的构建方法和用途 | |
| KR20150065931A (ko) | 병용 요법 및 치료에 대한 내성 평가 방법 | |
| CN103705567A (zh) | 一种当归补血颗粒及其制备方法 | |
| Wilkes et al. | Postnatal maturation of mast cell subpopulations in the rat respiratory tract. | |
| Eyre et al. | Acute systemic anaphylaxis in the horse | |
| Ikoma et al. | Mechanism of the unique susceptibility of deep cortical glomeruli of maturing kidneys to severe focal glomerular sclerosis | |
| Polito et al. | Urinary sodium and potassium excretion in idiopathic hypercalciuria of children | |
| CN113303285B (zh) | 一种血小板特异抗原诱导猴itp模型的构建方法 | |
| Gimson et al. | Fulminant hepatic failure and artificial liver support | |
| Cooke et al. | Acute folic acid deficiency of unknown aetiology: temperate sprue | |
| Arnott et al. | Experimental Glomerulo-Nephritis Produced by the Use of Specific Sera | |
| Hopkin et al. | Variation in response to cytotoxicity of cigarette smoke. | |
| Tagoe et al. | Amyloidogenesis is neither accelerated nor enhanced by injections of preformed fibrils in mice transgenic for wild-type human transthyretin: the question of infectivity | |
| CN114766430B (zh) | 胎源性自闭症动物模型的构建方法及其应用 | |
| CN114698592B (zh) | 一种干燥综合征肾损害小鼠模型的构建方法及其应用 | |
| Ramirez et al. | Perinatal intermittent hypoxia increases early susceptibility to ANG II-induced hypertension in adult male but not in female Sprague–Dawley rats | |
| MACKAY et al. | Lipoid nephrosis: report of a case of unusual duration | |
| KR20230108417A (ko) | 염증성 장질환 환자 면역 시스템 모사 아바타 모델과 약물 스크리닝 플랫폼 | |
| US5602302A (en) | Models for asthma guinea pig |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20240425 Address after: 200120 second floor, building 14, No. 121 Longgui Road, Pudong New Area, Shanghai Applicant after: Shanghai Pengli Biotechnology Pharmaceutical Research Co.,Ltd. Country or region after: China Address before: Building 7, Lane 388, Galileo Road, China (Shanghai) pilot Free Trade Zone, Pudong New Area, Shanghai, 201203 Applicant before: Pengli biomedical technology (Shanghai) Co.,Ltd. Country or region before: China |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |